BIOLOGIE GENERAL

- molecular i celular -

CURS X
Reglarea activitii genelor
Nu toate genele din genom sunt active
Genomul uman conine 25 35 000 de gene ce codific proteine.
8000 de gene sunt active simultan n celulele tuturor esuturilor. Numr de gene
Ce rol au celelalte gene? De ce apar diferene de la esut la esut? exprimate

Adipocit - aprox. 12 500 gene

sunt active

8000 de gene
sunt comune

Ramskld D, Wang ET, Burge CB, Sandberg R (2009) An

Hepatocit - aprox. 11 000 Abundance of Ubiquitously Expressed Genes Revealed by Tissue
Transcriptome Sequence Data. PLoS Comput Biol 5(12):
gene active e1000598. doi:10.1371/journal.pcbi.1000598
 Expresia genelor definiie i nivele de aciune
O gen este activ doar cnd informaia pe care o conine este accesat i
copiat n ARN cnd gena este exprimat.
Expresia genelor procesul prin care informaia de pe o gen este folosit pentru a sintetiza un
produs funcional o protein sau molecul ARN.
Reglarea i controlul expresiei genelor se realizez la nivele diferite:

1 reglarea transcrierii
2 reglarea modificrii post-transcriere a ARN-ului
3 reglarea traducerii mesajului genetic
Gene active

Cromozom
 Reglarea activitii genelor controlul transcrierii

Pentru ca o gen s fie transcris este necesar ca ARN-polimeraza s

se lege de promotorul specific al genei respective.
Interaciunea ARN-polimeraz / promotor este modulat prin intermediul unor proteine
reglatoare ce interacionez cu ADN-ul i care:
- blocheaz promotorul i mpiedic transcrierea - represori
- facilitieaz formarea asocierii promotor / polimeraz i activeaz transcrierea-activatori
Proteinele reglatoare au capacitatea de a interaciona cu ADN i
de a recunoate secvene specifice 10-15 nucleotide (secvene
reglatoare) fr a fi necesar despiralizarea moleculei de ADN.
Aceste proteine ''citesc'' molecula de ADN la nivelul santului mare
prin intermediul unor motive specifice numite motive de legare a
ADN-ului:
1. Motivul helix-turn-helix dou poiuni
helicale amplasate aproape perpendicular
una pe cealalt i conectate printr-un
segment scurt. Una dintre zonele helicale helix de recunoatere
intr n sanul mare unde citete ADN-ul -
helix de recunoatere
Motive proteice de legare a ADN-ului

2. Motivul ''Degetul de Zn'' atomii de Zn leag o zon -helical

de 2 zone -pliate n asa fel nct zone helical ptrunde n sanul
mare.
3. Motivul ''Fermoarul de Leucin'' 2 regiuni distincte din molecula proteic ce conin
resturi numeroase de Leu interacionoez i formeaz o structur asemntoare unui Y,
braele fiind cele dou zone ce ptrund n sanul mare i citesc ADN-ul.

helix-turn-helix Degetul de Zn Fermoarul de Leucin

 Controlul transcrierii la procariote
1. Controlul prin intermediul represorilor
- n special pentru controlul genelor implicate n procesele biosintetice (anabolism)
Operonul trp
- conine cinci gene ce codific enzimele necesare sintezei triptofanului i care sunt transcrise
simultan sub forma unei singure molecule de ARNm (alctuiesc un operon). Genele trebuie
exprimate cnd nu exist triptofan n celul i oprite cnd acesta se acumuleaz.
- n amonte de aceste gene se afl un promotor n interiorul cruia exist o secven reglatoare
numit secven operator.
- secvena operator este recunoscut de un represor proteic. Gena pentru represor este amplasat
n afara operonului, iar represorul este sintetizat inactiv nu poate recunoate i interaciona cu
ADN-ul. n prezena triptofanului, represorul se activeaz i cele 2 motive helix-turn-helix pe care le
conine pot interaciona cu ADN-ul.

Motive helix-turn-helix

Triptofan

Represor inactiv

Represor activ
 Controlul transcrierii la procariote

Funcionarea operonului trp:

1. Dac n celul nu exist triptofan represorul este inactiv, ARN-polimeraza se fixeax de
promotor i se produce ARNm i apoi enzime operonul este activ
2. Dac n celul exist triptofan acesta interacioneaz cu represorul i il activeaz represorul
se leag de secvena operator i ARN polimeraza nu se mai poate lega de promotor transcrierea
nceteaz operonul este inactiv
Represor inactiv
ARN - polimeraz
1. triptofanul lipsete

Promotor

Gene active

operator
Triptofan

2. triptofanul este prezent

Represor activ

Gene inactive
 Controlul transcrierii la procariote
2. Controlul prin intermediul activatorilor
- n special pentru controlul genelor implicate n procesele de bio-degradare (catabolism)
- n acest caz, promotorii sunt slabi i nu pot lega ARN-polimeraza.
- moleculele proteice activator se leg de secvene de control i faciliteaz interaciunea ARN-pol cu ADN
Exemplu de activatori i funcionarea lor:
proteina CAP (catabolite activator protein) iniiaz transcriere genelor ce permit celulei de E.coli s degradeze
diverse substrate cnd nu exist glucoz. CAP este produs inactiv, ns poate fi activat de AMPc. Cnd
concentraia glucozei n celul scade, ATP-ul este consumat i se produce AMPc. Acesta activeaz CAP ce se
leag i activeaz diverse gene catabolice precum genele pentru metabolismul lactozei.

Operonul lac un exemplu de control dublu n care sunt implicai att un represor ct i un activator
- conine 3 gene ce codific enzimele necesare degradrii lactozei n glucoz i galactoz. Trebuie
s fie activ doar cnd exist lactoz n mediu dar nu i glucoz.

- promotorul este ncadrat de dou secvene de

control:
Gena situs de
un operator pentru represorul lac - n aval de promotor pentru legare
un situs de legare pentru CAP n amonte de promotor represorul pentru
lac CAP operator
permeaz
- represorul lac este sintetizat activ si se poate lega de
transacetilaz
molecula de ADN la nivelul operatorului su. -galactozidaz

Operonul lac
 Controlul transcrierii la procariote

Funcionarea operonului lac

1. Dac n celul exist glucoz nu exist AMPc deci CAP este inactiv i ARN-polimeraza nu poate
iniia transcrierea operonul este inactiv
2. Dac n celul nu exist glucoz (a fost consumat) se acumuleaz AMPc i deci CAP se
activeaz ARN-polimeraza se poate lega de promotor.
2A. Dac n celul nu exist lactoz, represorul lac activ este legat de secvena operatoare i ARN-
polimeraza nu poate nainta operonul este represat
2B. Dac n celul exist lactoz - represorul lac este inactivat, se desprinde de pe secvena
operatoare i ARN-polimeraza poate nainta, genele sunt transcrise i operonul este activ operonul
este indus (lactoza este inductor, poate induce expresia operonului lac)

operonul lac represat

Represor activ

Promotor Operator Lactoza n

operonul lac indus represorul inactiv

Promotor Operator
AMPc
 Controlul transcrierii la eucariote

Aceleai principii de baz de funcionare a activatorilor i represorilor sunt

valabile i la eucariote. Controlul transcrierii este de asemenea completat prin :

1. Existena unui mecanism de control de la distant prin

intermediul regiunilor amplificatoare secvene amplasate la
distan mare de gena de interes ce i pot influena expresia.
Complexul de proteine necesar activrii transcrierii unei gene
eucariote include i proteine activatoare ce interacionez cu
aceste regiuni.
2. mpachetarea ADN-ului n fibre de cromatin asocierea
histonelor cu regiunile promotor duce la imposbilitatea realizrii
complexului promotor / ARN-polimeraz.

3. Metilarea ADN-ului la nivelul citozinei cu formarea 5-metil

citozinei un mecanism de inactivare suplimentar a genelor,
prin care celulele se asigur c genele inactive rmn inactive
n orice condiii.

De c e este nevoie de aceste

mecanime suplimentare de reglaj?
Controlul activitii genelor post-transcriere la eucariote

Principalul mecanism de reglare a activitii genelor este la nivelul transcrierii.

Pentru unele gene ns, reglajul activitii se realizeaz i dup transcriere i poate implica diverse
nivele:

1. procesarea copiei primare a mesajului n cadrul procesului de maturare a ARNm splicing. n

aces mecanism sunt implicate o serie de ribonucleo-proteine nucleare de dimensiuni mici numite
snRNPs (snurps) ce conin molecule de ARN specific (snRNA) i care alctuiesc spliceosomul. Ex:
aceasi gen codific att hormonul proteic calcitonin produs de tiroida cat i CGRP produs n
hipotalamus. Produsul rezultat este stabilit n spliceosom, unde are loc ansamblarea specific a
exonilor pentru a forma hormonul dorit.
2. transportului prin porii nucleari n medie 10% din secvenele transcrise n nucleu sunt exoni n
doar 5% ajung n citoplasm trebuie s existe un mecanism de control la acest nivel dar care nu
este nc cunoscut
3. traducerea selectiv a ARNm n cazul feritinei (protein ce leag fierul) molecula de ARNm
interactioneaz cu aconitaza si formeaz la captul 5' un complex ce mpiedic legarea ribosomului i
traducerea mesajului genetic. Dac n celul crete conc. de Fe, aconitaza se desprinde i
traducerea poate ncepe crescndu-se nivelul de feritin de 100 ori.
4. degradarea selectiv a ARNm