Universitatea Tehnica a Moldova

Facultatea Tehnologie i Management n Industria Alimentar

Lucrare de laborator Nr.1

Tema: Determinarea coninutului de amoniac
dup metoda Conway-Bairn

Chiinu 2018

Obiectivele lucrrii de laborator

1. De nsuit metodica de determinare cantitativ a azotului amoniacal n vin.
2. De studiat metabolismul amoniacului n plante.
3. De caracterizat succint substanele azotoase care se conin n plante.
Azotul joac un rol important n viaa plantelor. Azotul intr n componena proteinelor,
acizilor nucleici, clorofilei, enzimelor, majoritii vitaminelor i a altor compui organici.
Plantele i microorganismele folosesc azot neorganic pentru biosinteza substanelor azotoase, iar
animalele i omul doar azot organic.
Plantele, ciupercile, animalele i omul nu pot asimila azot atmosferic. Capacitatea de a
fixa azot atmosferic o au unele microrganisme procariote: bacterii anaerobe din genul
Clostridium, bacterii aerobe din genul Azotobacter, cianobacterii (alge albastre-verzi) i
bacteriile azotfixatoare simbiotice din genurile Rhizobium i Bacillus, care triesc pe nodozitile
rdcinilor plantelor din familia Fabaceae. Transformarea azotului atmosferic n azot amoniacal
folosit ulterior pentru sinteza substanelor azotoase reprezint un proces de reducere
fermentativ.
Srurile acidului azotic (nitrai, nitrii) i amoniacului reprezint sursa principal de azot a
plantelor. n condiii naturale nutriia plantelor cu azot se realizeaz cu anionii N3- i cationii
NH4+.
Azotul amoniacal din sol provine sau din ngrmintele organice, sau din resturile de
substane organice n curs de descompunere, proces la care particip bacteriile de putrefacie din
genurile Bacillus i Clostridium. Acest proces se numete amonificare.
Nitraii sunt introdui n sol cu ngrmintele organice, minerale sau se formeaz la
oxidarea amoniacului i a nitriilor de bacteriile nitrificatoare Nitrosomonas i Nitrobacter. Acest
proces se numete nitrificare. Bacteriile Nitrosomonas oxideaz amoniacul: NH3 + 1 O2 =
(NO2-) + 2H+ + H2O; iar bacteriile Nitrobacter oxideaz nitriii: (NO2-) + O2 = NO3-. Formele
minerale de azot ptrund n plante i sunt supuse unui ciclu complex de transformare i n cele
din urm se includ n componena substanelor organice azotoase aminoacizi, amide, proteine.
Veriga principal n metabolismul substanelor organice azotoase este amoniacul. Din amoniac
se sintetizeaz substane azotoase, care la rndul su se descompun pn la amoniac.
Azotul din nitrai nu poate fi folosit nemijlocit de plante pentru sinteza aminoacizilor.
Nitraii sunt supui unui proces de reducere fermentativ pn la amoniac: HNO3HNO2
(HNO)2NH2OHHN3.
Reducerea nitrailor n plante se realizeaz n funcie de utilizarea amoniacului format la
sinteza substanelor organice azotoase.n plante amoniacul se formeaz, de asemenea, n urma
descompunerii aminoacizilor: n cadrul proceselor de dezaminare, decarboxilare, transaminare.
Amoniacul n stare liber nu se acumuleaz n plante deoarece este toxic. Plantele bogate
n acizi organici liberi, numite plante acide (mcri, revent, begonia etc.) au capacitatea de a fixa
amoniacul sub form de sruri de amoniu (oxalat de amoniu, malat de amoniu, citrat de amoniu,
fumarat de amoniu etc.). Cea mai important cale de depozitare a amoniacului este fixarea
acestuia, n special, sub form de amide ale acidului aspartic i glutamic asparagina i
glutamina. Amidele sunt derivai funcionali ai acizilor carboxilici n care grupa -OH din
carboxilul acidului este nlocuit cu gruparea aminic -NH2. Amoniacul fixat sub form de
amide (asparagin i glutamin) nu este toxic. Formarea asparaginei i glutaminei este un proces
care decurge cu consum de ATP (fig. 8):

Fig. 8. Formarea glutaminei

 Amoniacul fixat sub form de amide poate fi eliberat prin hidroliz enzimatic pentru a fi
utilizat n biosinteza compuilor cu azot sau n meninerea echilibrului acido-bazic din plant
(fig. 9):

Fig. 9. Hidroliza fermentativ a glutaminei

Fixarea amoniacului molecular sub form de uree este caracteristic pentru ciuperci,
drojdii, plantele superioare, ns se ntlnete mai des n regnul animal i se numete ciclul
ureogenetic sau ciclul ornitinic.
Importana analizei. n toate plantele i materia prim vegetal se conin n
cantiti mari diferite substane azotoase. Din aceast categorie de substane fac parte
aminoacizi, amide, polipeptide, proteine, alcaloizi, unele vitamine, astfel de produse ale
metabolismului azotos precum asparagina, glutamina, ureea, amoniac. Amoniacul, care
se gsete sub form de sruri de amoniu, este un produs toxic i se acumuleaz n plante
n cantiti mici. Creterea coninutului de azot amoniacal reduce calitile gustative ale
vinurilor, sucurilor, compoturilor.
Principiul metodei. Cnd la soluia care conine sruri de amoniu, se adaug baz, se
elimin amoniac, care se reine cu soluie de 0,02 n H2SO4. Titrnd cu hidroxid de sodiu excesul
de acid, care n-a reacionat cu amoniacul, se poate calcula cantitatea de acid necesar pentru a
neutraliza amoniacul.
Bazele puternice, odat cu descompunerea srurilor de amoniu, parial hidrolizeaz i
amidele:
R CO NH2 + KOH R COOK + NH3

Amoniacul format n acest caz poate denatura rezultatele analizei. Iat de ce pentru a
evita hidroliza amidelor, n loc de baz la soluia analizat se dozeaz soluie saturat de K2CO3,
care n procesul de hidroliz formeaz un mediu bazic relativ slab.
Chimismul procesului este urmtorul:
K2CO3 + H2O = KHCO3 + KOH
NH4Cl + KOH = KCl + NH3 + H2O
2NH3 + H2SO4 = (NH4)2SO4
H2SO4exces+ NaOH = Na2SO4 + H2O

Reactive, vase, aparate i material biologic

1) Patru ceti Conway.

2) Dou pipete Mor de 5 cm3 i o pipet gradat de 5 cm3.
3) Patru baloane conice de 100 cm3.
4) K2CO3 (soluie saturat).
5) H2SO4 (soluie 0.02 n).
6) NaOH (soluie 0.02 n).
7) Indicator mixt (metilrot-metilen albastru): 0,2 g metilrot i 0,012 g metilen albastru se dizolv
n 60 cm3 alcool i cu ap se aduce pn la 100 cm3.

Ordinea ndeplinirii lucrrii

Se dozeaz 5 cm3 soluie de 0,02n H2SO4 n camera intern (1) a cetii Conway (fig.10).
n camera extern (2) se dozeaz 5 cm3 soluie analizat (vin, suc etc.). Ceaca Conway se
nchide n proporie de 9/10 cu o plac de sticl lefuit. Prin gaura deschis cu ajutorul pipetei
gradate n camera extern se dozeaz 3 cm3 soluie saturat K2CO3. Ceaca se nchide cu placa i
se amestec soluia analizat cu K2CO3. Apoi ceaca se pune n termostat i se ine timp de 1 or
la temperatura de 50-55 oC.

Fig. 10. Ceaca Conway

Dup ce se scoate din termostat, ceaca Conway se deschide i soluia din camera intern
se transfer ntr-un balon conic de 100 cm3 cu ap distilat ( 10 cm3). Soluia se titreaz cu
soluie 0,02n NaOH n prezena indicatorului mixt pn la schimbarea culorii din violet n verde.
Experiena se repet n 2 ceti Conway. Paralel se efectueaz proba de control, unde n
loc de soluie analizat se folosete ap distilat.
Cantitatea de azot amoniacal (mg/dm3) n soluia analizat se calculeaz dup formula:

unde:
Vcontrol volumul soluiei 0,02n NaOH, folosit la titrarea probei de control, cm3;
Vlucru volumul soluiei 0,02n NaOH, folosit la titrarea probei de lucru, cm3;
K coeficientul de corecie a bazei;
0,28 cantitatea de azot n mg, care corespunde unui cm3 de soluie 0,02n NaOH;
V volumul probei analizate, cm3.

Rezultatele experimentale :
Vc= 5.19
Vl= 4.96

(5.19 4.96) 1 0.28 1000

= = 12.88
5

Concluzie: In urma lucrarii de laborator am determinat continul de azot amoniacal in vine egal
cu 12.88.