Curs S9 Biochimie

Capitolul 3. SUBSTANE ORGANICE CU ROL FUNCIONAL

3.1. ENZIMELE

Generaliti

Enzimele sunt compui macromoleculari de natur proteic cu rol de biocatalizatori ai

reaciilor chimice care au loc n organismele vii. n absena enzimelor, majoritatea reaciilor
din celula vie s-ar petrece cu viteze foarte mici. Acestea reprezint instrumentul prin
intermediul cruia se realizeaz totalitatea transformrilor chimice din organismul viu,
transformri ce alctuiesc metabolismul substanelor i energiei.

Prima enzim a fost descris n 1833- diastaza (n prezent -amilaza)- cu aciune

asupra amidonului. Ulterior au fost descrise i alte enzime de ctre Loius Pasteur, care le-a
numit fermeni.

Locul de formare a enzimelor n celul l constituie citoplasma i organitele celulare.

Unele enzime rmn dizolvate n citoplasm, altele rmn n mitocondrii i lizozomi unde au
loc intense procese metabolice (endoenzime), iar alte enzime prsesc mediul celular i trec
extracelular, n lichidele biologice pentru a-i exercita activitatea (exoenzime).
Exemple: -pepsina se formeaz n celulele mucoasei gastrice; ea prsete celula i intr n
compoziia sucului gastric
-tripsina i chimotripsina sunt produse de celulele pancreasului exocrin; ele ajung
n sucul pancreatic, iar acesta ajunge n duoden unde va aciona asupra proteinelor.

Substana asupra creia acioneaz enzima se numete substrat, iar compusul chimic
rezultat n urma aciunii enzimei se numete produs de reacie.

Nomenclatura i clasificarea enzimelor

Denumirea enzimelor se poate face n dou moduri:

a) denumirea substratului + sufixul -az; ex. lipaz, proteaz, amilaz
b) denumirea tipului de reacie + sufixul az; ex. hidrolaz, dehidrogenaz

1
 O clasificare a enzimelor se poate face n funcie de natura reaciei catalizate; dup
acest criteriu enzimele se grupeaz n 6 clase:

1. Oxidoreductaze cuprinde enzime care catalizeaz reaciile de oxido-reducere,

respectiv transferul de H i electroni ntre substana care se oxideaz i cea care se reduce.
Ex: oxidaze, dehidrogenaze, peroxidaze

2. Transferaze enzime care catalizeaz transferul de grupri ce conin azot, carbon

sau fosfor de pe un substrat (donor) pe alt substrat (acceptor).
Ex: aminotransferaze (TGO, TGP), kinaze

3. Hidrolaze cuprind clasa enzimelor care catalizeaz reaciile de scindare a

legturilor covalente cu ajutorul apei.
Ex: proteaze, fosfataze

4. Liaze catalizeaz ruperi ale legturilor C-C, C-S i C-N; reacii de eliminare a
unei grupri funcionale din substrat.
Ex: decarboxilaze

5. Izomeraze catalizeaz reaciile de interconversiune a izomerilor optici, geometrici

i de caten.
Ex: mutaze, racemaze

6. Ligaze sau sintetaze enzime care catalizeaz unirea a doi compui utiliznd
energia eliberat prin hidroliza unei molecule de ATP.
Ex: aminoacil- sintetaza, ADN-ligaza

Structura enzimelor

Din punct de vedere biochimic, toate enzimele sunt proteine; structura proteic este
avantajoas din mai multe considerente, cum ar fi:
- resturile de AA din proteine dispun de o mare varietate de grupri funcionale care particip
la legarea substratului, ct i la desfurarea catalizei;
- enzimele sunt proteine globulare, ele au deci structur secundar, teriar i deseori structur
cuaternar; structurile secundare i teriare asigur posibiliti multiple de constituire a
centrelor active ale enzimelor (locul unde se desfoar reaciile).
Curs S9 Biochimie

n funcie de structura lor chimic pot fi :

enzime monocomponente sunt proteine simple (holoproteine) cu moleculele

alctuite numai din radicali de aminoacizi legai ntre ei prin legturi peptidice; ex.
chimotripsina, ribonucleaza, lizozimul.
Aciunea lor biocatalitic se datoreaz anumitor fragmente din catena polipeptidic, ce
includ grupe funcionale (componente ale catenelor laterale ale aminoacizilor): -OH, -NH2,
-SH, -COOH, care vor constitui centrul activ sau situsul catalitic. Prin acest centru activ,
enzima fixeaz substratul (l recunoate) sub forma unui complex enzim-substrat, simbolizat
E-S, i catalizeaz transformarea substratului n produsul/produii de reacie.

enzime bicomponente fac parte din clasa proteinelor complexe (heteroproteine) i

au molecula alctuit din:
componenta proteic= apoenzim
o grupare de natur neproteic= cofactor sau coenzim
Cofactorii sunt molecule anorganice, de regul ioni metalici (Mg 2+, Mn2+) implicate
direct n actul catalitic (stabilizeaz enzima sau substratul).
Coenzimele sunt molecule organice (conin atomul de C) care au rol de carrier
(transportori); ele transport electroni i protoni, diferite grupri funcionale, etc.
Aciunea catalitic a enzimelor este condiionat de existena n moleculele lor a unor
regiuni distincte, denumite situsuri (centre) active sau catalitice
Apoenzima este macromolecula proteic a enzimei, sensibil la temperaturi ridicate
(termolabil), cu activitate catalitic; determin specificitatea de aciune a enzimelor.
Apoenzima poate prezenta n structura sa:
situsul catalitic (centrul activ)- este zona distinct la care se leag specific substratul
asupra cruia acioneaz enzima; aminoacizii participani la formarea centrului activ
sunt grupai ntr-o geometrie spaial, la nivelul creia se afl grupele funcionale
implicate n legarea direct a substratului i n transformarea catalitic a acestuia.
Situsurile active ale enzimelor bicomponente cuprind pe lng aminoacizii respectivi,
de asemenea coenzima sau cofactorul , care interacioneaz cu substratul i faciliteaz
desfurarea reaciei enzimatice.
situsul allosteric Enzimele care exercit pe lng funcia catalitic i rol reglator se
numesc enzime allosterice. Acestea conin pe lng situsul catalitic un al doilea situs
numit allosteric, la care se pot lega efectori allosterici (inhibitori sau activatori) care

3
 moduleaz tranziiile enzimei ntre dou conformaii posibile (activ i inactiv) prin
care se permite sau nu accesul substratului la situsul catalitic.
Coenzimaeste partea neproteic, care particip efectiv la reacia catalitic (se
modific temporar n timpul reaciei i determin viteza reaciei enzimatice); se caracterizeaz
prin mas molecular mic i termostabilitate.
n funcie de natura lor chimic, coenzimele se mpart n patru grupe:
- coenzime cu structur alifatic
coenzime cu structur aromatic
coenzime cu structur heterociclic
coenzime cu structur nucleozidic i nucleotidic
1. Coenzime cu structur alifatic: acidul lipoic, glutationul

Datorit capacitii sale de a trece uor i reversibil din forma disulfidic (oxidat) n
forma ditiolic (redus), acidul lipoic este implicat n diferite procese metabolice legate de
oxidarea biologic.
Glutationul este o tripeptid implicat n procese de oxidoreducere datorit punilor
disulfidice:

2. Coenzime cu structur aromatic: ubichinonele sau coenzimele Q (apar n esuturile

animalelor i plantelor superioare, n special n mitocondrii unde sunt componente ale catenei
respiratorii).
Curs S9 Biochimie

3. Coenzime de natur heterociclic: vitamina B1 i derivai ai vitaminei H (biotina) i

ai vitaminei B6.

4. Coenzime cu structur nucleozidic i nucleotidic: ATP, FAD, NAD, NADP, CoA

Fig. 1. Adenozin-trifosfat (ATP)

5
 Fig. 2. Flavin-adenin-dinucleotid

Fig.3. Nicotinamid-adenin-dinucletid/ Nicotinamid-adenin-dinucleotidfosfatul

Fig. 4-Co A
Curs S9 Biochimie

Proprietile enzimelor

Datorit naturii lor proteice, enzimele posed toate proprietile fizic-chimice

specifice acestor macromolecule (solubilitate, proprieti osmotice, sarcin electric net,
denaturare termic, reacii chimice etc.).
Enzimele sunt catalizatori i respect legile catalizei chimice:
catalizeaz reacii posibile din punct de vedere termodinamic,
scad energia liber a sistemului accelernd reacia,
sunt necesare n cantiti mult mai mici comparativ cu substratul,
se regsesc nemodificate din punct de vedere cantitativ i calitativ la sfritul reaciei.
Cataliza enzimatic prezint o serie de particulariti care o deosebesc net de cataliza
chimic:
vitez de reacie mult mai mare dect n cazul reaciilor chimice,
acioneaz n condiii blnde de reacie care sunt condiiile fiziologic normale de pH,
temperatur, presiune osmotic
prezint o nalt specificitate de aciune concretizat n capacitatea enzimelor de a
cataliza transformarea unui substrat sau a unui grup restrns de substrate, nrudite
structural.
n funcie de modul de manifestare, exist mai multe tipuri de specificitate:
specificitatea de reacie, specificitatea de substrat i specificitatea stereochimic.
a) Specificitatea de reacie= fiecare enzim catalizeaz un anumit tip de reacie (ex. o
hidrolaz va cataliza o hidroliz)
b) Specificitatea de substrat=const n aria mai restrns sau mai larg de aciune a
fiecrei enzime; poate fi absolut sau relativ.
Unele enzime acioneaz asupra unui singur substrat, cataliznd o singur reacie
(specificitate absolut-ex. ureaza), iar alte enzime acioneaz asupra unui grup mic de
substrate foarte nrudite structural (specificitate absolut de grup-ex: alcool-DH):
ureaza catalizeaz descompunerea ureei
H2NCONH2 +H2O2 NH3 +CO2
alcool-dehidrogenaza catalizeaz transformarea prin dehidrogenare a alcoolilor
monohidroxilici inferiori n aldehidele corespunztoare:
RCH2OH +NAD+ RCHO + NADH +H+

7
 Multe enzime sunt specifice numai pentru anumite tipuri de legturi chimice indiferent
de structura moleculelor respective (specificitate relativ-ex. endopeptidazele, esterazele):
endopeptidazele digestive acioneaz asupra legturilor peptidice din interiorul
proteinelor (chimotripsina scindeaz legatura peptidic format de gruparea-COOH
a Phe, Tyr, Trp; tripsina legtura peptidic format de gruparea- COOH a Lyz i
Arg).
esterazele fac posibil scindarea mono-, di- i trigliceridelor
c) Specificitatea stereochimic sau opticse refer la faptul c enzimele catalizeaz
transformarea fie numai a substratului cu configuraie L, fie numai a substratului cu
configuraie D; specificitatea optic este de obicei absolut, cellalt antipod optic rmnnd
neschimbat.
Exemplu: lactat-dehidrogenaza din muchiul striat catalizeaz oxidarea acidului L-
lactic cu formare de acid piruvic, n timp ce aceeai enzim, dar izolat din microorganisme
catalizeaz oxidarea acidului D-lactic.

Centrul activ (catalitic) i mecanismul de aciune al enzimelor

Reaciile enzimatice se desfoar cu o anumit vitez, n 2 etape:

1. Substratul se unete cu enzima (la nivelul centrului activ), rezultnd un produs
intermediar (complexul enzim-substrat=ES):
Enzim + Substrat ES
2. Se formeaz produsul de reacie (P) i se recupereaz enzima, care va participa la un
nou ciclu catalitic:
ES P + E
Structura binar a enzimelor este indispensabil aciunii catalitice. Luate separat, att
coenzima ct i apoenzima nu au activitate catalitic.
Din numrul foarte mare de resturi de aminoacizi, numai un numr limitat particip la
interaciunea cu substratul-cei care posed anumite grupri funcionale capabile s atrg i s
fixeze molecula substratului ntr-un loc (situs) bine determinat. Ansamblul acestor grupri
chimice funcionale alctuiesc centrul catalitic al enzimei.
n legtur cu organizarea spaial a centrului activ al enzimelor (raportat la structura
substratului) s-au elaborat 2 modele:
Curs S9 Biochimie

1. Modelul clasic Fischer- centrul activ al enzimelor a fost conceput mult vreme ca un
tipar rigid, preformat, substratul potrivindu-se n enzim ca i cheia n lact (lock and key).
Dei n acest model centrul activ este rigid, el se mai folosete nc pentru explicarea unor
proprieti enzimatice, cum ar fi legarea ntr-o anumit ordine a substratelor.

Fig. 5. Modelul lact-cheie de interaciune a enzimei cu substratul

2. Un model mai perfecionat este cel imaginat de Koshland, numit centrul activ
indus (induced fit), modelul cu cel mai puternic suport experimental. Principala
caracteristic a acestui model este flexibilitatea centrului activ. n absena substratului
gruprile catalitice i de legare a substratului sunt deprtate unele de altele, separate de mai
multe resturi de aminoacizi. Apropierea substratului induce o modificare conformaional a
enzimei nct gruprile care particip la legarea substratului sau la reacia catalitic se apropie
spaial.

Fig. 6. Modelul centrul activ indus de interaciune enzim-substrat

9
 Situsul (centrul) activ dintr-o enzim poate fi pus n eviden prin tratarea cu anumite
substane ce au capacitatea de a se combina specific cu aminoacizii centrului catalitic,
inactivnd enzima.

Factori care influeneaz activitatea enzimatic

1. Concentraia enzimei dac se utilizeaz concentraii crescnde de enzim

cantitatea de substrat transformat n unitatea de timp crete proporional cu concentraia
enzimei.
2. Concentraiei substratului pentru majoritatea enzimelor, la concentraii mici de
substrat, viteza de reacie este direct proporional cu concentraia substratului.
3. Temperatura mediului Viteza reaciilor enzimatice crete cu ridicarea
temperaturii pe un interval mic de temperatur.
Valoarea maxim a vitezei de reacie corespunde la temperatura optim de aciune a
enzimei.
Dac temperatura se mrete n continuare are loc o diminuare rapid a vitezei de
reacie prin denaturarea termic a enzimei.
n general majoritatea enzimelor de origine animal prezint o eficien catalitic
maxim ntre 35 i 400 C. La temperaturi mai mari de 700 C majoritatea enzimelor se
inactiveaz. Funcia catalitic a enzimelor este anulat reversibil la temperaturi sub 00
C.
4. pH-ului mediului fiecare enzim manifest o activitate maxim ntr-un domeniu
determinat al concentraiei ionilor de hidrogen, care se numete pH optim de aciune.
Valoarea sa variaz cu natura i originea enzimei, natura chimic a substratului, sistemul
tampon etc. pH-ul optim pentru cele mai multe enzime are valori cuprinse ntre 6 i 8;
excepie fac enzimele digestive, pepsina (pH=1,5-2), arginaza (pH=9,5-10).
5. Efectorii Se numesc efectori (modulatori) substanele chimice care modific
viteza unor reacii enzimatice cnd sunt adugate n mediul de reacie. n funcie de modul
cum acioneaz efectorii pot fi activatori sau inhibitori.
a. Activatorii influeneaz pozitiv activitatea enzimelor pe care o intensific sau
stimuleaz; ntre activatorii enzimatici se numr numeroi ioni metalici ( K, Mg, Ca, Fe, Zn,
Curs S9 Biochimie

Mn, Co, Mo, Cu, etc.), unii anioni (Cl etc.), diferii compui organici cum ar fi unii tioli
(cisteina, glutationul etc.).
b. Inhibitorii enzimatici sunt compui care diminueaz sau anihileaz activitatea
enzimelor; ei au compoziie chimic i mod de aciune diferit. Exemple: ionii metalelor grele,
radiaiile UV, X, presiunea, detergenii anionici i cationici, gruparea tio (-SH).
n funcie de modul de aciune al inhibitorilor asupra enzimelor, inhibiia poate fi:
inhibiie reversibil:
competitiv: inhibitorii prezint analogie structural cu substratul i vor
interaciona cu centrul activ al enzimei
necompetitiv: inhibitorul nu prezint analogie structural cu substratul
i se leag cu enzima ntr-o alt zon a moleculei, diferit de centrul
activ.
inhibiie ireversibil - conduce la pierderea definitiv a activitii enzimei, datorit
denaturrii ei prin legarea covalent a inhibitorului cu un aminoacid esenial pentru
funcia catalitic.

Reglarea activitii enzimelor

Marea majoritate a reaciilor catalizate de enzime nu sunt independente unele de altele,

ci ele sunt grupate i se succed formnd ci metabolice care funcioneaz simultan i n mod
coordonat calitativ i cantitativ.
Principalele mecanisme prin care se moduleaz activitatea enzimelor dintr-o cale
metabolic sunt reprezentate de:
1. reglarea alosteric este specific enzimelor alosterice care pot fi activate sau
inhibate de ali metabolii dect substratele naturale. Aceti metabolii se numesc efectori
alosterici sau modulatori alosterici. Dac modulatorul induce creterea capacitii catalitice a
enzimei se numete activator sau modulator pozitiv, iar dac acesta provoac scderea
eficienei ei catalitice se numete inhibitor sau modulator negativ.
2. inhibiia prin produsul final sau de tip feed-back (retroinhibiie), cnd
acumularea produsului final al unei ci metabolice cauzeaz inactivarea enzimelor necesare
pentru sinteza lui.
3. reglare covalent modificarea covalent a unor enzime se poate realiza prin
inseria de grupri micromoleculare n moleculele lor. Spre exemplu, activitatea enzimelor

11
care catalizeaz sinteza i degradarea glicogenului este reglat prin fosforilarea unui anumit
radical de serin din moleculele acestor enzime.
4. conversia precursorilor inactivi n enzime active unele enzime care
funcioneaz n exteriorul celulei (n tractul digestiv sau n plasma sangvin) sunt sintetizate
sub form de precursori inactivi numii proenzime sau zimogene. Hidroliza unui numr
limitat de legturi peptidice n moleculele zimogenelor conduce la conversia lor n enzime
active.

Importana biomedical a enzimelor

Importana medical a enzimelor rezid n utilizarea acestora n diagnosticul unor boli

i instituirea unei terapii corecte, precum i folosirea unora n scop terapeutic.
Majoritatea proceselor enzimatice se petrec la nivel celular, iar determinarea enzimelor
se face n unele lichide biologice (snge total, urin, lichid cefalorahidian, plasm etc.).
Este important de cunoscut locul de producere al diverselor enzime, mecanismele prin
care ajung aceste enzime din celule n snge. Din acest punct de vedere se deosebesc:
enzime secretate activ n plasm, mai ales de ficat, care acioneaz asupra unor
substraturi din plasm ndeplinind aici un rol fiziologic. Astfel de enzime specifice
plasmei se numesc enzime plasmatice funcionale (ex. enzimele coagulrii,
colinesteraza, renina).
Lezarea organului care produce aceste enzime determin scderea activitii
enzimelor n plasm;
enzime ale secreiilor exocrine care pot difuza pasiv n snge, fr a avea rol specific
la acest nivel. Astfel de enzime sunt: amilaza, lipaza, tripsina pancreatic,
pepsinogenul gastric, precum i fosfataza alcalin biliar i fosfataza acid prostatic.
Enzimele din aceast categorie vor scdea n snge n cazul atrofiei organului
care le sintetizeaz sau vor crete cnd apar creteri ale permeabilitii membranei
celulelor ce le sintetizeaz;
enzimele celulare acioneaz exclusiv intracelular, se mai numesc i enzimele
plasmatice nefuncionale deoarece substraturile i cofactorii lor specifici nu se gsesc
n plasm (ex. TGO, TGP, lactat-dehidrogenaza). Concentraia lor n spaiul
intracelular este mult mai mare decat n plasm.
Curs S9 Biochimie

Ptrunderea enzimelor celulare n snge, n condiii patologice, are loc prin creterea
permeabilitii membranei celulare sub aciunea unor factori infecioi, toxici.
n leziunile distructive, att enzimele citoplasmatice ct i cele legate de organitele
celulare, trec n sange. O alt cale de ptrundere a enzimelor celulare n snge o constituie
blocarea cilor de eliminare normal a enzimelor (unele enzime hepatice, pancreatice) sau o
cretere a concentraiei de enzime ca urmare a unei inducii enzimatice.
Scderea activitii enzimelor n plasm poate fi datorat scderii sintezei de enzime,
consumului unor medicamente (cortizon, morfin, atropin) sau unor erori genetice.
Un deficit enzimatic poate avea urmtoarele consecine:
- oprirea formrii produsului de reacie (ex., glucozo-6-fosfataza mpiedic eliberarea de
glucoz din glicogen, avnd ca efect hipoglicemia);
- acumularea de substrat pentru enzima deficitar (ex., acumularea de galactoz-1-fosfat n
deficitul de galactoz-uridil-fosfat-transferaz produce manifestrile clinice din
galactozemie);
- deficitul de metabolizare pe cale normal face ca acea substan s urmeze alt cale
metabolic genernd un alt produs care este responsabil de efectele patologice.
Erorile nnscute de metabolism subliniaz rolul important al enzimelor n patologia
metabolismului.

13