Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
REZUMAT Ateroscleroza, o formă majoră de boli cardiovasculare, a fost acum recunoscută ca inflamator
cronic boală. Mijloacele nefarmacologice de tratare a bolilor cronice au atras atenția recent. Am
raportat anterior acest lucru ulei de susan are proprietăți anti-aterosclerotice. În acest studiu, am
determinat mecanismele prin care ar putea fi ulei de susan modularea aterosclerozei prin identificarea
genelor și a markerilor inflamatorii. Lipsă de densitate a receptorilor de lipoproteine cu densitate
scăzută (LDLR- / -) au fost hrăniți fie cu o dietă aterogenă, fie cu o dietă aterogenă reformulată cu ulei de
susan (susan ulei dieta). Plasmele lipidice și leziunile aterosclerotice au fost cuantificate după 3 luni de la
hrănire. Probele de plasmă au fost utilizate pentru analiza citokinelor. ARN-ul a fost extras din țesutul
hepatic și utilizat pentru rețele globale de gene. Dieta cu ulei de susan semnificativ au redus leziunile
aterosclerotice, colesterolul din plasmă, trigliceridele și nivelurile de colesterol LDL la șoarecii LDLR- / -.
Plasma citokinele inflamatorii, cum ar fi MCP-1, RANTES, IL-1a, IL-6 și CXCL-16, au fost semnificativ
reduse, demonstrând o proprietatea anti-inflamatorie a uleiului de susan. Analiza grilei genetice a arătat
că uleiul de susan a indus multe gene, inclusiv ABCA1,ABCA2, APOE, LCAT și CYP7A1, care sunt implicați
în metabolismul colesterolului și în transportul colesterolului invers. În studiile noastre sugerează că o
dietă îmbogățită cu ulei de susan ar putea fi un tratament eficient non-farmacologic pentru
aterosclerozei prin controlul inflamației și reglarea metabolismului lipidic.
INTRODUCERE
Ateroscleroza este o boală inflamatorie cronică caracterizată prin acumularea de lipide și infiltrarea
de leucocite în peretele arterei.1,2 Stres oxidativ și inflamația joacă un rol esențial în fiecare etapă a
procesului boala3-6 și ambele condiții reprezintă obiective pentru intervenție.
Inflamația a fost postulată pentru a juca un rol major în dezvoltarea aterosclerozei.20 În ultimele două
decenii,cercetarea sa axat pe rolul lipoproteinelor modificate,în principal, LDL oxidat (Ox-LDL). Dovezi
susțin conceptul că Ox-LDL poate fi un antigen cheie în ateroscleroza. 21 Hrănirea de sânge este asociată
cu o reducere de nivelul lipidelor serice la rozătoare, concomitent cu o creștere crescută oxidarea
acizilor grași22-25 poate fi atribuită activării de receptor de activare a proliferării peroxizomilor (PPAR)
cai. Activarea PPARa a fost demonstrată la modulează multe aspecte ale metabolismului lipoproteinelor
și inflamarea in vitro, precum și la animale și la om studiile.26-29 Efectele mediate de PPAR includ o
scădere în acumularea de lipide în macrofage prin reglarea în jos a Receptorul SR-A1 și care promovează
efluxul de colesterol prin creștere hepatic LDL și receptorii SR-B1.
În mod similar, activarea a căii receptorului X al ficatului (LXR) stimulează transportul colesterolului
invers (RCT) și catabolismul.raportat anterior că uleiul de susan are anti-ateroscleroză proprietăți.32 În
acest studiu, am evaluat efectul de susan ulei pe inflamație, RCT și metabolismul lipidic dincolo de
acesta capacitatea de a reduce formarea leziunilor în lipoproteine cu densitate scăzut receptor (LDLR)
șoareci knock-out.
METODE
Șaizeci și șase șoareci de LDLR- / - șoareci de 4 săptămâni care cântăresc 18-20 g au fost obținute de la
Jackson Laboratory (Bar Harbor,ME, SUA) și utilizate pentru studiu.
Dietă
O dietă aterogenă (TD.04287) și o dietă aterogenă reformulate cu ulei de susan (TD.04288) de la Harlan
Teklad (Madison, WI, SUA). Compozitia din dieta a fost identică cu cea descrisă anterior.32 compoziția
de acizi grași din uleiurile de susan a fost analizată ca metil esteri de cromatografie de gaz Varian CP-
3380 (Varian,Inc, Palo Alto, CA, SUA). 33,34 Acidul gras șiCompoziția lignan35 a uleiului de susan utilizat
este reprezentată în tabelul suplimentar S1. Colectarea plasmei și a organelor
După 15 săptămâni, șoarecii au fost urcați peste noapte și sânge,plasma și probele de țesut au fost
colectate așa cum s-a descris anterior32 și depozitat la -80 ° C.
Izolarea aortei și cuantificarea leziunilor aortice au fost realizate așa cum s-a descris anterior.32,36
Profilurile lipidelor plasmatice s-au determinat prin utilizarea unui Cholestech Analizorul L * D * X
(Cholestech Corp, Hayaward, CA,STATELE UNITE ALE AMERICII).sinteza cADN și reacția în lanț în timp
real a polimerazei ARN-ul total din ficat și țesutul aortic a fost izolat prin folosind Trizol? reactiv. Un
microgram de ARN a fost apoi invers transcris în cADN utilizând Superscript ™ III Sistem de sinteză de
primă fază (Invitrogen, Carlsbad, CA, STATELE UNITE ALE AMERICII). s-au folosit probe cADN (50 ng)
pentru a efectua testul cantitativă reacție în lanț în timp real a polimerazei (PCR) prin
iQTM5 iCycler Multicolor Real-Time PCR Detection (Bio-Rad, Hercules, CA, SUA) cu SYBR Green
(Invitrogen). Expresia mRNA a ABCA1, ABCG1, SRB1,
CYP7al, NPC1L1, MCP-1, IL-1a, IL-1b, IL-6, IL-4, IL- IL-13, Catalază, MnSOD, SRA1, CD36, LXR, pregnan X
receptorul (PXR), receptorul farnesoid X (FXR), MPO și CD68 cu primeri specifici pentru șoarece a fost
analizat.primeri pentru gene sunt furnizate în Suplimentar Tabelul S2.
Probele de plasmă au fost analizate prin citokine globale (Ray Biotech, Inc., Norcross, GA, SUA) folosind
RayBio? Mouse G Series Array trei și patru cip de sticlă. Au fost utilizate probe de ARN de țesut hepatic
pentru gena mouse-ului array PAMM-080 (Qiagen, Valencia, CA, SUA).
Oxidarea in vitro a LDL în prezența de sesamol și sesamin Lipoproteinele din plasmă umană au fost
izolate așa cum s-a descris anterior.37 Oxidarea LDL și HDL a fost efectuată cu 5 lMcopper sau 0,2 U
MPO atât în prezență și absența diferitelor concentrații de sesamol și sesamină.
Gradul de oxidare a LDL a fost evaluat prin conjugare dienă, în timp ce conținutul de peroxid a fost
determinată prin utilizarea testului de albastru leucemietic 38 și substanțe reactive ale acidului
tiobarbituric. analize statistice
Valorile sunt prezentate ca medie - deviație standard (SD), iar analizele statistice au fost efectuate
folosind Student's t-test și testul Wilcoxon matched match using Prism Pad software, cu P <.05
considerat semnificativ.
REZULTATE
Dieta aterogenă conținea 17% grăsimi saturate furnizate prin lapte, iar în alimentația reformulată, a fost
grăsimea din lapte înlocuit cu o cantitate egală (17%) de ulei de susan. A ușoară, dar nesemnificativă,
scăderea greutății corporale și a ficatului greutate (aproximativ 15% și, respectiv, 13%) a fost
observate la animalele hrănite cu diete de ulei de susan (suplimentar Figurile S1A, B).
Niveluri reduse ale lipidelor plasmatice în susan ulei de hrană cu hrana animalelor
Se observă observația vizuală a plasmei după centrifugare o plasmă clară în cazul animalelor hrănite cu
ulei de susan comparativ cu animale de control. Aceasta a reflectat probabil o scădere în lipidele
plasmatice ale animalelor hrănite cu ulei de susan. Plasmă lipidică profilul de analiză a evidențiat o
scădere semnificativă a TRG, TC, LDL colesterol și lipoproteine cu densitate foarte scăzută (VLDL)
colesterolul în animalele hrănite cu ulei de susan. O ușoară creștere în cazul nivelurilor de colesterol
HDL. Figura 1A-C reprezintă profilul lipidic din plasmă al martorului și ulei de susan dietetic animale din
trei studii independente. Colesterolul total a fost semnificativ redusă în hrana alimentată cu ulei de
susan animale (P <0,05). La animalele hrănite cu o dietă aterogenă, nivelul colesterolului a fost de
1158,13 - 4,37mg / dl, în timp ce în animalele hrănite cu o dietă de ulei de susan, nivelul colesterolului a
fost de 763,73 - 30,7 mg / dl. Nivelurile de trigliceride au fost de 184,85 - 8,35 și 109,3 - 7,29 mg / dl în
dietele de control și de ulei de susan.
Rezultatele studiului nostru confirmă încă o dată acest lucru nu numai colesterolul din plasmă, dar și
TRG este redus de alimentarea cu ulei de susan. A existat, de asemenea, o reducere semnificativă în LDL
și VLDL colesterol.
Rezultatele matricei de gene ale studiilor noastre pentru semnalizarea lipoproteinelor și metabolismul
colesterolului au arătat că susanul uleiurile tratate cu ulei au prezentat mai multe modificări nu numai la
antiatherosclerotice genele, dar și în genele implicate în colesterol transport și metabolism. După cum
se arată în tabelul 1 (A și B), a existat o creștere a genelor legate de RCT și lipide metabolismul care a
inclus ABCA1, ABCA2, APOE, LCAT,CYP7a1, SR-B1 și LXR. Ar fi activat LXR au beneficiul suplimentar de a
suprima expresia factorului tisular,care joacă un rol important în formarea trombilor după ruperea
plăcii. În schimb, multe dintre proatherogenic genele au fost suprimate în animalele hrănite cu ulei de
susan.În plus față de matricea globală a genei, multe dintre pro-inflamatorii genele (fig.3A; MCP-1, IL-1a,
IL-1b, IL-6, TNF-a și MPO), gene antiinflamatoare (fig.3B; IL-4 și IL-10), gene de încărcare a lipidelor
(fig.3C, CD36 și SRA1),genele antioxidante (fig.3D, catalază și MnSOD), gene implicat în RCT și
metabolismul lipidic (Fig.3E; ABCA1,ABCG1, SRB1, NPC1L1, Cyp7A1), receptor nuclear factorii de
transcripție (fig.3F, LXR și FXR), gene asociate cu HDL (figura 3G, ApoA1 și PON1) și cu tema lor gena
metaloproteinazei (Fig.3H; MMP9) au fost analizate independent prin analiza PCR în timp real. Modelul
de reglementare a genelor pro- și anti-inflamatorii a fost consistentă cu analiza matricei de citokine. În
mod similar, exprimarea genele implicate în RCT și metabolismul lipidic au fost de asemenea
consecvente cu studii de gena. Nu există diferențe între PXR și a fost identificată expresia PPARa (datele
nu sunt prezentate).
Expresiile genei aortice au fost analizate și în timp real PCR. Rezultatele au arătat că animalele din hrana
alimentată cu ulei de susan au avut niveluri mRNA crescute ale genei RCT ABCA1, dar nivelurile reduse
de ABCG1 (figura 4A) au fost observate. Exprimarea markerilor monocitelor / macrofagelor și receptorii
de curățare CD68, SRA1 și CD36 au scăzut
(Figura 4B).
Suportul citokinelor
Dieta cu ulei de susan a cauzat schimbări minime în profil din 96 de proteine legate de inflamație,
măsurate prin metoda citokină. O analiză a peste 96 de citokine serice a prezentat o reglare în sus sau în
jos a citokinelor legate de (1) angiogeneza, (2) apoptoza, (3) remodelarea matricei, (4) inflamația și
răspunsul imun, (5) promovarea creșterii și (6) funcția de măturat în cazul animalelor hrănite cu dietă cu
ulei de susan (Figura complementară S2). Ureglementarea proteinelor implicate în îndepărtarea
celulelor moarte și promovarea creșterii a fost observate la animalele hrănite cu ulei de susan. În plus,
mulți din citokinele proinflamatorii au fost reglate în jos.
Schimbări semnificative ale nivelurilor mediatorilor inflamatorii, cum ar fi MCP-1, IL-1a, IL-6 și RANTES
animalele hrănite cu ulei de susan în comparație cu hrana alimentată aterogen animale (tabelul 2), în
timp ce gena antiinflamatoare astfel pe măsură ce IL-13 a fost reglată în sus.
Componentele de susan sunt sugerate a avea antioxidanți proprietățile și numeroasele sisteme in vitro
au fost documentate capacitatea sesamolului de a inhiba procesele oxidative. Are a fost identificat că
mulți antioxidanți au capacitatea de a inhibă ateroscleroza, deși, după cunoștințele noastre, există nici o
dovadă care să sugereze că numai antioxidanții pot modula nivelurile de lipide. Efectele antioxidante in
vitro ale sesamolului și sesaminei au fost măsurate prin capacitatea lor de a inhiba oxidarea de
lipoproteine (LDL și HDL) atât enzimatic cât și neenzimatic. După cum se arată în Figurile suplimentare S3
și S4, a fost observată o creștere a timpului de întârziere a oxidării cu concentrații / volum crescând de
sesamol și sesamină.
substanțele au fost observate în prezența de sesamol / sesamină comparativ cu Ox-LDL, așa cum se
arată în Suplimentar Figurile S5 și S6. Rezultatele sugerează, de asemenea, că sesamolul și sesamin ar
putea întârzia oxidarea lipoproteinelor, dar nu poate modifica propagarea sau oxidarea totală. In orice
caz, capacitatea de sesamol, sesamin sau alte neaponificabile asociat cu ulei de susan pentru a inhiba
lipoproteinele oxidarea in vivo și, prin urmare, necesită antiatherogenă investigații suplimentare.
DISCUŢIE
În studiul de față, am observat că un ulei de susan conține dieta a redus efectiv leziunea aterosclerotica
formarea în soareci LDLR- / - femele așa cum se vede în cele anterioare studii cu șoareci masculi.
Nivelurile plasmatice ale TC, TRG,VLDLc și LDLc au fost scăzute la aceste animale comparate cu animale
hrănite cu dietă aterosclerotică. Plasma Nivelul HDL a fost crescut în cazul animalelor hrănite cu regim
alimentar cu susan. Are a fost raportat că uleiul de susan poate scădea nivelul lipidelor din ser precum și
în ficatul rozătoarelor.39 ulei de susan, cum ar fi MUFA, PUFA și liganzi PPAR, ar putea
să fie responsabili de scăderea lipidelor plasmatice.9,40 Rezultatele noastre coroborarea acestor studii
anterioare. Cu toate acestea, mecanismul implicate în efectele observate cu ulei de susan și
ateroscleroza nu este cunoscută. Studiul prezent are mai multe descoperiri. (1) Suplimente alimentare
cu ulei de susan pentru o perioadă de 15 săptămâni în mod semnificativ reduce povara plăcii
aterosclerotice, (2) reduce nivelul de placă citokinele inflamatorii și expresiile genetice și (3) crește
exprimarea genelor implicate in transportul colesterolului si lipidelor metabolism.
Există cel puțin trei mecanisme majore prin care susanul ulei ar putea inhiba ateroscleroza: (1) scăderea
plasmei colesterolul prin catabolismul accelerat prin oxidare de colesterol, mediată de 7a-hidroxilază sau
colesterol CYP7A1, (2) ameliorarea RCT mediată de SR-B1 și ABC transportatori, cum ar fi ABCA1 și
ABCG1, și (3) controlul mediatorii de inflamație. Este probabil ca toți cei trei să se joace un rol vital în
efectele observate la animalele hrănite cu ulei de susan. Mai multe gene anti-aterogene au fost crescute
în susan uleiuri hrănite cu dietă alimentară, inclusiv gene în colesterol transport și metabolism, enzime
de degradare a matricei, antiinflamatoare chemokine și citokine și substanțe de curățare receptori
(figura 3). Astfel, datele susțin afirmația noastră de bază că uleiul de susan poate avea mai multe
componente ar putea afecta procesul aterogen în mai multe moduri. În celule periferice, inclusiv
macrofage vasculare, ABCA1 reglementează transportul dependent de energie al colesterolului și al
colesterolului fosfolipidele la ApoA-I, proteina majoră în HDL. În mod similar, PPARs sunt implicate în
exprimarea mai multor inflamatorii citokine și metaloproteinaze matrice.
Nivelurile mRNA crescute ale CD36 din țesutul hepatic au fost observate la animalele hrănite cu hrană cu
ulei de susan, în timp ce nu există niciun efect a fost observată cu SR-A1. Sa constatat că CD36 este
activat de PPARs.41 Deși activarea CD36 ar putea fi interpretat ca un efect negativ, de asemenea,
această proteină implicat în metabolizarea acizilor grași, 42 și, prin urmare, creșterea acestuia ar putea
însemna o creștere generală a utilizării acizilor grași. În mod similar, expresia genelor antioxidante cum
ar fi catalaza și Mn-SOD a crescut, sugerând că acestea ar putea fi induse din cauza generării lipidelor
oxidate43 sau din cauza inducției PPAR.28,44 Niveluri mRNA reduse de CD36 și SR-A1 au fost observate
în leziunile aortice de susan ulei de hrana alimentata cu ulei, sugerand abilitatea uleiului de susan
prevenirea formării celulelor spumoase.
Se știe că PUFA cresc conversia colesterolului la acizii biliari prin intermediul CYP7A1. Studii recente au a
arătat că receptorii nucleari orfani, FXR și LXR, sunt negativi și pozitivi ai transcripției CYP7A1, respectiv.
Deoarece am observat o tendință spre activarea lui
matrice datorită secreției MMP crescută, în principal din partea locală celulele inflamatorii. Producție
excesivă de colagenaze
efecte.
greutăți ale animalelor hrănite cu diete de ulei de susan, dar ele nu sunt
organism pentru a oxidiza mai multă grăsime și pentru a reduce depozitarea grăsimilor. Inca
sistemul nervos central pentru scăderea consumului de alimente datorită energiei higienice
boala cardiovasculara.
CONFIRMARE
Grant 5R01AT004106-05.