Introducere

Biocompatibilitatea este preocupată de dispozitivele medicale dintr-un mediu specific și

locația gazdei, capacitatea lor de a reacționa unul cu celălalt atunci când este direct sau
indirect în contact cu gazda, proprietățile biologice ale dispozitivelor medicale atunci când
sunt statice, procesul dinamic de schimbare in vivo și capacitatea de a tolera toate sistemele
gazdă, menținând în același timp o stabilitate relativă, fără excludere și distrugere (1-3).
Dispozitivele medicale trebuie să fie supuse unor teste riguroase pentru a le determina
biocompatibilitatea atunci când au contact cu organismul, indiferent de proprietățile
mecanice, fizice și chimice sau cât de bune sunt până când sunt utilizate în corpul uman,
conform Organizației Internaționale pentru Standardizare (ISO ) și standardele naționale
(4,5). Odată cu dezvoltarea continuă a științei și tehnologiei, un nou dispozitiv medical
trebuie să fie supus unor teste de biocompatibilitate de citotoxicitate, sensibilizare, iritare
intradermică, toxicitate sistemică acută și o serie de teste înainte de a intra într-un mediu
clinic pentru a asigura o utilizare sigură și eficientă pentru om.
IMAGINE
Se știe că implantarea biomaterialelor provoacă o cascadă de reacții în mediul biologic.
Țesutul gazdă, împreună cu proprietățile fizice ale biomaterialelor, determină
biocompatibilitatea și longevitatea implanturilor. Prin urmare, înțelegerea fenomenelor
interacțiunii biologice a unui biomaterial servește ca un aspect important în evaluarea
stabilității unui implant. Diverse probleme, cum ar fi alegerea necorespunzătoare a unui test
de determinare analitică și lipsa de cunoștințe în alegerea unei cantități adecvate de
substanță de testare limitează evaluarea completă a implanturilor medicale.25 Deși va
exista un nivel mic de leziuni tisulare în timpul implantării pentru implanturi biocompatibile,
de obicei se ajunge la o stare de echilibru în timpul procesului de restaurare, ajutând la
performanța continuă a implantului. Cu toate acestea, datorită scurgerii prelungite de
substanțe toxice din implanturi în lichide biologice, va induce inflamații persistente. Acest
lucru va interfera cu fuziunea și performanța implantului.20 Pentru a evita astfel de
anomalii, toxicitatea potențială a unui biomaterial trebuie evaluată înainte de utilizarea
clinică in vitro și in vivo.32 Procesul în lanț lung de traducere a biomaterialului dezvoltat din
studiile de laborator la un produs constant reproductibil și stabil pentru un studiu clinic încă
se confruntă cu multe obstacole și dificultăți. Pentru ca un biomaterial nou proiectat să se
deplaseze de la laborator la clinică, acesta trebuie să treacă prin faze riguroase ale testelor,
care sunt menționate pe scurt în Fig. 1. După ce biomaterialul este ecranizat printr-o serie
de teste de biocompatibilitate in vitro și găsit că să nu fie toxic, se recomandă ca un astfel de
material să fie supus unor teste de osseointegrare in vivo relevante din punct de vedere
clinic. Testele in vivo implică în esență implantarea materialului într-un model animal și
evaluarea histocompatibilității acestuia. Aceasta este urmată de studii clinice la pacienții
umani. Atât încercările pe animale cât și pe cele umane necesită în mod obligatoriu
aprobarea comitetului instituțional de etică.
Dispozitivele medicale au fost utilizate pe scară largă în diverse discipline clinice (6).
Deoarece aceste dispozitive au contact direct cu țesuturile și celulele corpului, ele nu numai
că necesită proprietăți fizice și chimice bune, dar trebuie să aibă și o bună biocompatibilitate
(7). Securitatea dispozitivelor medicale a crescut în valoare de către guverne. O serie de
standarde internaționale pentru dispozitive medicale (ISO 10993) au fost publicate de ISO în
1992, iar oamenii de știință din China au început să studieze metodele de evaluare a
dispozitivelor medicale de la sfârșitul anilor '70, asigurând astfel siguranța în cercetare,
producție și utilizare clinică și promovarea dezvoltării dispozitivelor medicale (8,9). Printre
testele de biocompatibilitate, citotoxicitatea este preferată ca test de proiect pilot și ca
indicator important pentru evaluarea dispozitivelor medicale, deoarece este simplă, rapidă,
are o sensibilitate ridicată și poate salva animalele de toxicitate (10,11).
Testul de citotoxicitate, unul dintre testele biologice de evaluare și screening,
folosește celulele tisulare in vitro pentru a observa creșterea, reproducerea și efectele
morfologice ale celulelor de către dispozitivele medicale (12). Citotoxicitatea este una dintre
cele mai importante metode de evaluare biologică, deoarece are o serie de avantaje,
împreună cu elementele preferate și obligatorii (11). Partea 5 a evaluării biologice a
dispozitivelor medicale din ISO 10993-5 este următoarea: Reglementări privind
citotoxicitatea in vitro, țările trebuie să stabilească dispozițiile relevante ale testelor de
citotoxicitate corespunzătoare în funcție de situația lor reală (13)
Odată cu dezvoltarea continuă a testelor de citotoxicitate, au apărut și au fost
dezvoltate treptat, de la evaluarea calitativă la cantitativă (14-17), metode, cum ar fi
detectarea leziunii celulare prin modificări morfologice, determinarea deteriorării celulare,
măsurarea creșterii celulare și proprietățile metabolice. Cu toate acestea, corelația rămâne
de studiat în continuare, precum și evaluarea rezultatelor corelației acestor metode cu alte
evaluări biologice. Datorită diversității dispozitivelor medicale, a variabilității mediului
înconjurător și a complexității interacțiunii dintre organism și dispozitivele medicale, până în
prezent nu a fost stabilită o metodă de evaluare uniformă sau un sistem de evaluare a
testului de citotoxicitate.
În ISO 10993-5 sunt menționate trei tipuri de test de citotoxicitate: teste de
extragere, contact direct și contact indirect (inclusiv test de suprapunere de agar și difuzie
de filtru). În general, testul extract este potrivit pentru detectarea toxicității substanțelor
solubile ale dispozitivelor medicale și este de obicei consecvent cu rezultatele testelor de
toxicitate la animale. Testul de contact direct este cel mai sensibil pentru testarea
citotoxicității dispozitivelor medicale; dispozitivele medicale pot fi măsurate chiar și cu
citotoxicitate slabă (18). Testul de sucu agar este potrivit pentru dispozitivele medicale care
prezintă toxicitate mare și filtrare în vrac (19), iar metoda de filtrare moleculară este
potrivită pentru evaluarea biocompatibilității componentelor toxice ale dispozitivelor
medicale cu greutate moleculară mică (20). Gao și colab. (21) au identificat o bună corelație
între testul de contact direct și indirect și o asociere mai mică între testul extract și celelalte
două studii.
Testarea siguranței unui dispozitiv medical și stabilirea proprietăților biocompatibile
mecanice, fizice și chimice corespunzătoare ale dispozitivului sunt esențiale pentru utilizarea sigură
în practica clinică (Directiva 93/42 / CEE a Consiliului din 14 iunie 1993 privind dispozitivele
medicale). Folosirea metodei corecte de testare pentru a identifica siguranța este o preocupare
importantă pentru companiile producătoare și autoritățile de certificare. Organizația Internațională
de Standardizare (ISO) a lansat o serie de norme (standarde de reglementare ISO 1993) și
recomandări care trebuie aplicate riguros pentru certificarea siguranței unui dispozitiv medical de uz
clinic. Recomandă metode care includ, deși nu se limitează la, analizarea citotoxicității, sensibilizării,
iritării intradermice și toxicității sistemice acute.

Teste de citotoxicitate

Testele de citotoxicitate se concentrază efectele biologice adverse acute ale substanţelor

extractabile din materialele dispozitivelor medicale. Testele de citotoxicitate evaluează
moartea celulară cauzată de material prin măsurarea numărului celular sau a creșterea înainte
și după expunerea la materialul respectiv. Materialele de control trebuie să fie bine definite și
vizate commercial pentru a putea fi comparate în diferite laboratoare de testare.
Testele de permeabilitate la membrană sunt utilizate pentru a măsura citotoxicitatea cu
ușurința prin care un colorant poate trece printr-o membrană celulară, deoarece
permeabilitatea membranei este asemănătoare sau aproape cu a celulelor moarte

Interacțiune necitotoxică. Vedere microscopică deschisă este reprezentată de interacțiuni necitotoxice

între un material (imagine întunecată în partea de jos a imaginii) și fibroblastele ligamentului
parodontal într-un test de cultură celulară (in vitro). Morfologia fibroblastelor indică faptul că sunt vii
și nu suferă de un răspuns toxic (a se vedea figura 6-3 pentru contrast) .

Interacțiunea citotoxică. Vedere microscopică ușoară a unei interacțiuni citotoxice între un material (imagine
întunecată în partea de jos a imaginii) și fibroblastele ligamentului parodontal într-un test de cultură celulară.
Fibroblastele sunt rotunjite și detașate (a se vedea figura 6-2 pentru contrast), ceea ce indică faptul că sunt morți
sau mor. Materialul este un tip de agent de pulpare a hidroxidului de calciu, diferit de cel prezentat în figura 6-2.

Teste pentru metabolismul celular sau funcția celulară

 Unele teste in vitro pentru biocompatibilitate folosesc activitatea biosintetică sau enzimatică a
celulelor pentru a evalua răspunsul citotoxic. Testele care măsoară sinteza acidului dezoxiribonucleic (ADN)
sau sinteza proteinelor sunt exemple comune ale acestui tip de test. Un test enzimatic utilizat frecvent pentru
citotoxicitate este testul MTT (MTT [3- (4,5-dimetilthiazol-2-il) -2,5-difenil tetrazolium], precum și NBT
(nitroblue tetrazolium), XTT [2 , 3-Bis- (2 metoxi-4-nitro-5-sulfofenil) -2H-tetrazolium-5-carboxanilida] și
WST (un tetrazoliu solubil în apă), toate fiind analize colorimetrice bazate pe diferite săruri de tetrazolium (ex.
Testele Alamar Blue măsoară cantitativ proliferarea celulelor folosind un indicator fluorescent care permite
monitorizarea continuă a celulelor în timp).

Teste care folosesc bariere (teste indirecte)

Deoarece deseori nu există contact direct între celule și materiale în timpul utilizării in vivo, au
fost dezvoltate mai multe teste in vitro de barieră pentru a imita condițiile in vivo. Aceste teste includ o metodă
de suprapunere de agar, care folosește agar pentru a forma o barieră între celule și material, și testul de filtru
Millipore, în care un monostrat de celule este cultivat pe un filtru care este întors astfel încât materialele de
testare să fie plasate pe filtrul și produsele de difuziune lizibile pot interacționa cu celulele. Difuzarea de agar și
testele de filtru Millipore pot asigura, în cel mai bun caz, o clasificare citotoxică calitativă între materiale (figura
6-4).

Câteva studii au arătat că dentina formează o barieră prin care materialele toxice trebuie difuzate
pentru a ajunge la țesutul pulpei, grosimea dentinei corelându-se direct cu protecția oferită pulpei. Aceste
analize, care încorporează discuri de dentină între proba de testare și sistemul de analiză celulară, au un plus de
difuzare direcțională între materialul de restaurare și mediul de cultură (figura 6-5).

 mediator puternic al citotoxicităţii mediate cellular

Citotoxicitatea celulară se referă la capacitatea anumitor substanțe chimice sau celule mediator de a
distruge celulele vii. Citotoxicitatea este un aspect foarte important, deoarece distrugerea celulelor
vii sănătoase din jurul plăgii va avea un impact negativ asupra procesului de vindecare.