Analiza microbiologică are ca scop verificarea stării generale, sanitare a recipientului şi a
produsului supus analizei şi, dacă este cazul, stabilirea caracterelor eventualei microflore reziduale.
a) Examinarea recipientelor, în prima fază se notează în fişă toate semnele stanţate de pe
recipient sau înscrise pe eticheta acestuia. Se scoate eticheta, se examinează cu ajutorul lupei şi se notează toate defectele fizice exterioare (rugină, deformări, închideri necorespunzătoare, fisuri, scurgeri) şi interioare (după recoltarea probei).
b) Incubarea la termostat Aceasta se face, pentru microflora mezofilă, la 37°C/7-10 zile,
iar în cazuri speciale sau la cerere, pentru microflora termofilă, la 55°C/5 zile. Se examinează apoi periodic la 24-48 ore. Dacă se observă bombaj sau scurgere de conţinut, nu se mai fac alte examene.
c) Recoltarea probei, în vederea recoltării probei se va avea grijă ca:
- să se lucreze în boxe, prevăzute cu lămpi bactericide cu radiaţii ultraviolete;
- toate instrumentele utilizate se sterilizează în etuvă la 180° C/60 minute;
- se lucrează în apropierea flăcării;
- se perforează capacul neştanţat al recipientului; la produsele lichide se face un orificiu de
10-15 mm, la produsele consistente orificiul va fi mai mare;
- se recoltează, în funcţie de consistenţa produsului, cu sonde de sticlă (d = 8-10 mm), pipete
cu orificiul larg, bisturie, foarfece, pense etc.;
- produsele cu consistenţă solidă vor fi trecute în suspensie în apă sterilă.
d) Examenul microscopic direct. Scopul: aprecierea cantitativă a germenilor existenţi.
Acest examen nu se aplică produselor obţinute prin fermentaţie microbiană. Examinarea se face după schema următoare:
Întinderea picăturii în centrul lamei
Uscarea în aer
Degresarea cu xilen+alcool
Colorarea cu albastru de metilen 1%;1 minut
Spălarea, uscarea
Observare cu imersie oc. 1Qx; ob. 90x
Examenul sterilităţii. Examenul sterilităţii se face prin însămânţare în medii de cultură
adecvate, a unei părţi din conţinutul recipientului supus analizei şi care n-a prezentat vreo modificare exterioară în cursul incubării în termostat.
Mediile de cultură folosite, durata şi temperatura de termostatare sunt date în
tabelul următor:
Mediul de cultură Condiţii de incubare Condiţii de incubare
Tehnica de lucru: * se însămânţează fiecare eprubetă cu mediu, cu aproximativ 3g de
produs de analizat, se incubează la 37°C timp de 72 ore; * zilnic se urmăresc mediile de cultură însămânţate, eprubetele în care au apărut semne de dezvoltare microbiană se examinează. * dacă la sfârşitul perioadei de incubare nu au apărut semne de creştere microbiană, recipientul supus analizei se consideră steril. Examinarea culturilor, în ziua apariţiei semnelor de creştere microbiană, se execută frotiuri, care se colorează după metoda Gram şi se examinează prin imersie. Dacă se observă prezenţa cocilor sau bacililor nesporulaţi Gram-negativi, se consideră că recipientul analizat a conţinut microflora nesporulată. Dacă se observă doar bacili nesporulaţi Gram-pozitivi eprubetă se ter-mostatează încă 72 ore, după care se repetă examenul microscopic. Dacă nici la acest examen nu se găsesc spori bacterieni, se consideră că recipientul a conţinut numai microflora nesporulată. Interpretarea rezultatelor analizei microbiologice Se consideră corespunzător din punct de vedere microbiologic recipientul care nu a suferit modificări exterioare (bombaj) după incubarea în termostat şi care îndeplineşte următoarele condiţii: * conţinutul nu prezintă modificări de miros sau aspect, determinate de o activitate microbiană, la examenul microscopic se observă, în medie, cel mult 10 microorganisme pe un câmp microscopic, iar mediile de cultură însămânţate rămân sterile; * la examenul microscopic se observă, în medie, mai mult de 10, dar mai puţin de 30 microorganisme/câmp, iar mediile de cultură însămânţate rămân sterile. Se consideră necorespunzător din punct de vedere microbiologic, recipientul la care în cursul termostatării apare bombaj, iar conţinutul prezintă modificări de miros sau aspect, determinate de o activitate microbiană.