Notiuni de baza privind activitatea in Laboratorul de Microbiologie

al SJU Targoviste

Activitatea in laboratorul de microbiologie se concretizeaza in stabilirea unui

diagnostic bacteriologic;
Diagnosticul bacteriologic consta in insamantarea, izolarea si identificarea
bacteriilor din diverse produse biologice si testarea sensibilitatii acestora la
antibiotic (efectuarea antibiogramei).
CULTURA BACTERIANA= totalitatea bacteriilor crescute in/pe suprafata unui
mediu de cultura optim, in mod controlat;
INSAMANTAREA = punerea in contact (intinderea, etalarea) a unui produs
biologic cu mediile de cultura;
Conditii:
Insamantarea se face obligatoriu dupa:
a) Stabilirea mediilor de cultura necesare tipului de cultura bacteriana
(urocultura, exsudat faringian/nazal, culturi diverse- lichide, puroi, etc.)

b) Verificarea aspectului mediului care trebuie:

-sa fie in termenul de valabilitate,
-sa nu fie deshidratat
-sa nu fie congelat
-sa nu fie suprainfectat

c) Aclimatizarea mediului de cultura (sa ia temperatura mediului ambiant)

Metode de insamantare:
- Descarcarea tamponului in bulion (dupa caz)
- Descarcarea tamponului pe placa, pe intreaga rubrica alocata pacientului
(pentru culturi diverse);
- Descarcarea tamponului pe placa pe o portiune limitata si dispersia
produsului descarcat prin epuizarea ansei (striuri paralele) pana la
completarea spatiului alocat (exsudat faringian);
- Insamantarea cu ansa (uroculturi);
 - Dispersie pe intreaga placa prin epuizarea ansei (repicare hemoculturi si
lichide pozitivate in Bactalert);
Repicare = insamantarea unui produs incubat deja, constand in disperasarea
unei colonii pe un mediu solid sau insamantarea unui lichid biologic din
flacoane care s -au pozitivat in Bactalert, cu scopul obtinerii de colonii izolate, a
unei culturi pure, pentru identificare si antibiograma corespunzatoare;

IZOLAREA = repicarea unei singure colonii pe alte medii de cultura cu scopul de

a obtine cultura pura din cultura mixta;

MEDII DE CULTURA
Definitie: suporturi materiale si nutritive care servesc la cultivarea bacteriilor, pe
care acestea isi realizeaza toate procesele vitale (alimentatie, respiratie,
multiplicare).
Conditii pe care trebuie sa le indeplineasca un mediu de cultura:
- sa contina substante nutritive, necesare metabolismului bacterian ;
- sa aiba pH care sa permita dezvoltarea bacteriei ( 7,2-7,4);
- sa corespunda particularitatilor fiziologice ale bacteriilor tinand cont de tipul lor
de respiratie (aerobe, anaerobe, facultativ anaerobe, microaerofile);
- sa fie steril;
Medii de cultura utilizate in Laboratorul de Microbiologie SJU Targoviste:
1. Bulionul simplu = mediu lichid (macerat din carne, peptona, NaCl 0,5%)-
se foloseste pentru a urmari turbiditatea, formarea valului; permite
dezvoltarea bacteriilor prezente in cantitate mai mica intr-un produs
biologic;
2. Medii semisolide – mediul Stuart, Cary Blair- sunt medii de transport non-
nutritive, inhiba dezvoltarea bacteriilor nedorite, pastreaza viabilitatea si
mobilitatea bacteriilor potential patogene ( coprocultura, exsudat faringian );
3. Medii solide:
- GELOZA SIMPLA (bulion si agar-agar); este un mediu simplu pe care se
dezvolta orice fel de bacterie nepretentioasa, si nu da indicii despre
comportamentul biochimic al bacteriilor; este utilizata in recoltarea probelor
pentru controlul infectiilor nosocomiale;
-MEDIUL MULLER HINTON este un mediu imbogatit, utilizat in
procedura standardizata de difuziune cu disc pentru determinarea
sensibilitatii bacteriilor (antibiograma);
- GELOZA SANGE- este mediu imbogatit (geloza simpla cu adaos de
sange defibrinat de oaie – 5%), pe care se dezvolta majoritatea bacteriilor
inclusiv cele mai pretentioase; este important in evidentierea producerii de
hemolizina; pe placa de geloza sange se poate observa:
 hemoliza α (incompleta, verzuie), caracteristica pneumococului si
Streptococcus viridans;
 hemoliza β (clara, totala) caracteristica stafilococului auriu si
streptococului β hemolitic de grup A;

Hemoliza β
clara, totala; hemoliza α verzuie, incompleta; colonii izolate;
descarcare prin epuizarea ansei;
- Mediul Mac Conkey- este mediu selectiv si diferential, contine lactoza,
saruri biliare, rosu neutru, cristal violet;
 selectiv pentru bacili enterici Gram negativi ( contine saruri biliare care
inhiba dezvoltarea bacteriilor Gram pozitive )
 diferential pentru bacilli Gram negativi, impartindu-i in lactozo-negativi (nu
fermenteaza lactoza- Salmonella, Proteus) si lactozo-pozitivi (fermenteaza
lactoza- E. coli, Klebsiella);
- Mediul Chapman (manitol salt agar)- este mediu selectiv si diferential,
contine exces de sare 7,5% si manitol; permite doar dezvoltarea
stafilococului (iubitor de sare) si inhiba orice altfel de bacterie;
 Selectiv pentru ca permite doar dezvoltarea stafilococului
 Diferential pentru identificarea speciilor de stafilococ pe baza fermentarii
manitei (ex: stafilococul auriu fermenteaza manita, stafilococul epidermidis
nu fermenteaza manita)
- Geloza Chocolat: mediu de imbogatire continand geloza si sange incalzit la
o temperatura de 60 ℃ .-80℃ .; mediu de cultură non-selectiv destinat izolării
şi cultivării microorganismelor pretențioase, mai ales a speciilor Neisseria și
Haemophilus;