Metabolism proteic II

- Enzime proteice -

Proteinele cu rol enzimatic

1. Enzime plasmatice funcionale (proteine intrinseci) enzime sintetizate (n majoritate) de ctre ficat, cu rol activ n plasm.

Exemple: - colinesteraza seric; - lipoproteinlipaza; - lecitincolesterolaciltransferaza; - factorii de coagulare; - factorii fibrinolizei; - ceruloplasmina. ntr-o afectare hepatic (insuficien hepatic) activitatea plasmatic a acestor enzime este sczut. Exemplu: activitatea plasmatic a pseudocolinesterazei scade paralel cu gradul insuficienei hepatice.

Proteinele cu rol enzimatic

Colinesteraza seric
Tipuri: acetil colinesteraza - n terminaiile nervoase colinergice i n celulele Kupffer; alfa colinesteraza - n hematii; Pseudocolinesteraza - n hepatocite(celulele ficatului). Dozare: metoda rapid - virajul de culoare produs de acidul acetic eliberat de enzim prin hidroliza acetilcolinei; metoda Michel sau macrometoda - utilizeaz acetilcolina ca substrat elibernd acidul acetic titrabil cu soluie NaOH N/100; metoda colorimetric sau micrometoda - n hidroliza butiril-tiocolinei; Pseudocolinesteraza exist 5 tipuri de izoenzime, fiecare din ele putnd fi evidentiat prin electroforeza n gel de agar sau amidon sau prin metoda inhibiiei chimice difereniate cu NaFdiizo-propilfluorofosfat.

Proteinele cu rol enzimatic

Colinesteraza seric
Valorile normale serice ale colinesterazei sunt: pentru metoda rapid 1900-3800 mU/ml. pentru metoda Michel 3-6 ml NaOH N/100 Normal: n condiii de sarcin pseudocolinesteraz scade.

Creteri patologice
obezitate grad III; sindrom nefrotic; icterele colestatice din neoplasm de cap de pancreas; miastenia gravis; hipertiroidie.

Proteinele cu rol enzimatic

Colinesteraza seric
Scderi patologice hepatite acute; ciroze hepatice decompensate; metastazele hepatice; strile caectice (din neoplasme); leucemia mieloblastic acut; distrofia muscular; subnutriie; intoxicaia cu pesticide; infarct miocardic acut.
Scderea progresiv a pseudocolinesterazei i a albuminei sugereaz afectare hepatic ireversibil. Studiile statistice au artat c valoarea seric a pseudocolinesterazei se coreleaz cu nivelul proteinemiei mai ales al albuminemiei i cu cel al protrombinei.

Proteinele cu rol enzimatic

2. Enzime plasmatice nefuncionale (proteine extrinseci) a) enzime excreto-secretorii; b) enzime celulare.

Proteinele cu rol enzimatic

a)Enzime excreto - secretorii
Enzimele excreto-secretorii sunt sintetizate la nivelul unui organ (ex. pancreas) i i desfoar activitatea la distan (ex. n lumenul tubului digestiv).

Exemple: - amilaza pancreatic; - lipaza pancreatic; - tripsina; - pepsinogenul; - bilirubina.

Proteinele cu rol enzimatic

a) Enzime excreto secretorii
Afeciuni pancreatice cu creterea activitii plasmatice enzimatice: Afeciuni de tip inflamator - creterea activitii plasmatice enzimatice prin creterea permeabilitii membranelor celulare;

afeciuni de tip necrotic (pancreatit necrotic, fibroz pancreatic, pancreatit cronic, neoplasm de pancreas) - creterea activitii plasmatice enzimatice prin liza celular.
afeciuni de tip obstructiv (obstrucia canalelor pancreatice prin litiaz, neoplazie, parazitoz, compresiuni diverse etc.) - creterea presiunii n canalele respective, cu deversarea enzimelor la polul vascular, cu creterea nivelului lor plasmatic.

Proteinele cu rol enzimatic

a) Enzime excreto secretorii
Amilaza:
- valori normale: 25-125 UI/l; - crete la 3-6 ore de la debutul clinic al bolii (apariia durerii), putnd crete pn la 30-40 de ori peste valoarea normal; - ajunge la un maxum la 24 de ore, pn la de 10 ori valoarea normal - dozarea izoenzimelor (la pers. sntoase 60% din amilazele serice sunt de tip salivar;

Lipaza:
- valori normale: 20-160 UI/l - crete la 3-6 ore cu maxim la 24 ore, putnd persista 2 sptmni - este mai util pentru diagnosticul pancreatitei acute, avnd specificitate mai mare pentru pancreas dect amilaza. Creterile amilazemiei i lipazemiei sunt paralele i se asociaz cu cretere a nivelului urinar al enzimelor. Nivelurile crescute persistente peste 3 sptmni reflect prezena de complicaii (pseudochist) sau neoplasm pancreatic.

Proteinele cu rol enzimatic

Alte afeciuni cu cretere a nivelului de enzime pancreatice:
-

ulcer gastric penetrant n pancreas;

infarct mezenteric; ocluzie intestinal; sarcin extrauterin rupt; administrare de substane care determin spasm al sfincterului Oddi (ex: opiacee, steroizi, fenilbutazon); dup efectuarea de manevre instrumentale (ex: gastroscopie, ERCP); tulburrile eliminrii renale a amilazei pancreatice: macroamilazemia afeciuni renale diverse, cu scderea filtrrii glomerulare;

Proteinele cu rol enzimatic

Bilirubina
1. 2. 3.

rezult din

degradarea hemoglobinei eritrocitare Fe i biliverdin bilirubin indirect sub aciunea biliverdin reductazei

4.
5. 6. 7. 8.

legat de albumin pn la nivel hepatic (e liposolubil)

preluat de ctre hepatocit prin ligandin sau proteina Y glucuronoconjugare (mono sau bi) excretat activ (ATP necesitant) prin polul biliar al hepatocitului degradat la urobilinogen n intestin se absoarbe i se elimin renal ca urobilin nu se absoarbe i se degradeaz pn la stercobilin.

Proteinele cu rol enzimatic

Valorile peste 1,2 mg/dl n plasm sunt considerate patologice sdr icteric Icter prehepatic : Bi - crescut; BT> 6 mg/dl (103 mmol/ L); raportul Bd/ BT < 0,33 la o valoare a BT > 3 mg/dl; urobilin crescut (N = 0-5 mg/24h); stercobilin crescut (N = 50-300 mg/24h); BLB urinar absent (BLB urinar este Bc; Bi este legat de albumin i nu se ultrafiltreaz).

Proteinele cu rol enzimatic

Icter hepatic :
Bc, Bi, BT, i BD (delta) crescute > 50%; BD (bilirubina delta) sau biliportina - complex ireversibil intre Bd si albumina - nu este excretata de rinichi. - are t1/2 similar cu albumina ramane detectabila in ser si la 2-3 spt dupa indepartarea cauzei. 10% < BD < 50% din BT sugereaz o cauz hepatic (citomegalovirus, atrezie biliar, infectare cu virus hepatic; stercobilin sczut (prin reducerea funciei excretorii hepatice); BLB urinar absent/prezent n funcie de care fraciune de BLB predomin cea indirect respectiv cea direct.

Proteinele cu rol enzimatic

Icter posthepatic : creteri ale BT, Bc i BD; stercobilin sczut; BLB urinar prezent; urobilin sczut.

Proteinele cu rol enzimatic

Valori crescute ale Bi:
- hemoliz, transfuzii; - mioliz; - siclemie; - hematom n resorbie; - ciroz, insuficien hepatic; - sepsis, cancer; - icter Gilbert; - icter Crigler - Najjar.

Proteinele cu rol enzimatic

Valori crescute ale Bd

- obstrucie biliar (calculi veziculari, calculi coledocieni, stricturi, cancer, metastaze, hepatom, neoplasm pancreatic, ampulom, colangiocarcinom, pancreatit); - hepatit (viral, toxic, medicamentoas); - sepsis; - nutriie parenteral total; - ciroz (biliar primitiv, alcoolic); - sdr. Dubin Johnson; - sdr. Rotor; - boala Wilson.

Proteinele cu rol enzimatic

Valori crescute ale BT
- boli hepatice - ci biliare (hepatit, obstrucie biliar, calculi coledocieni, calculi veziculari, stricturi, atrezie, cancer (primar sau metastaze); - intervenii chirurgicale; - pancreatit; - colestaz; - ciroz; - ficat de staz; - sepsis; - nutriie total parenteral; - medicamente (Halotan, contraceptive orale, Alopurinol, antibiotice, steroizi, INH, Indometacin, Metildopa, sulfonamide, Tolbutamida, Cloramfenicol, Clorpromazin); - mononucleoza infecioas; - insuficien hepatic; - ictere ereditare (Gilbert).

Proteinele cu rol enzimatic

b)

Enzime celulare
sunt sintetizate n celule, unde ndeplinesc un rol activ. ajung n plasm prin distrucie celular (citoliz) i prin modificarea permeabilitii membranei celulare. unele au specificitate pentru un anumit tip de esut, ne poate orienta asupra sediului de organ al unei leziuni.

Exemple: - oxidoreductaze; - lacticdehidrogenaza (LDH); - glutamatdehidrogenaza (GLDH); - transferaze (transaminaze AST, ALT); - creatinkinaza (CK); - ornitincarbamiltransferaza (OCT); - gammaglutamiltranspeptidaza ( -GT); - leucinaminopeptidaza (LAP); - fosfataze (acid, alcalin).

Proteinele cu rol enzimatic

Lactatdehidrogenaza (LDH)
enzim a glicolizei, care catalizeaz reacia reversibil piruvat-lactat; stabilete gradul de activitate a bolii n alveolita fibrozant criptogenic i n alveolita alergic extrinsec; marker al hemolizei; rol de indicator retroactiv al IMA.

Structura activ a moleculei LDH este un tetramer format din dou tipuri de lanuri polipeptidice: - tip H (heart - sintetizat predominant n miocard); - tip M (muscle sintetizat predominant n muchiul scheletic i ficat).

Din combinaia celor dou tipuri de lanuri sub forma unui tetramer, pot rezulta cinci tipuri de izoenzime: 4 lanuri de tip H, izoenzima notat LDH1; 3 lanuri de tip H i 1 lan de tip M, izoenzima notat LDH2; 2 lanuri de tip H i 2 lanuri de tip M, izoenzima notat LDH3; 1 lan de tip H i 3 lanuri de tipM, izoenzima notat LDH4; 4 lanuri de tip M, izoenzima notat LDH5.

Proteinele cu rol enzimatic

Creterea LDH poate apare n:
Afeciuni cardiace - LDH total, LDH1 i LDH2 crescute, predominant prin LDH1; Afeciuni hematologice - LDH total, LDH1 i LDH2 crescute (LDH1 cu valoare mai mic dect n afectrile cardiace);

Afeciuni hepatice - LDH total, LDH4 i LDH5 crescute, cu un raport ALT/LDH 1,5 n hepatita acut;
afeciuni ale musculaturii scheletice (miopatii) - LDH total, LDH5 crescute;

neoplazii, leucemii;
stri de oc creteri att ale LDH total ct i a tuturor formelor izomere.

Proteinele cu rol enzimatic

Infarct miocardic acut - creterea izoenzimei LDH1 (HBDH) la 824 de ore de la debutul infarctului cu maxim la 3-6 zile. ntr-o evoluie obinuit a infarctului valoarea LDH se normalizeaz n 7-12 zile.
Raportul LDH1/LDH2 peste 0,75 are specificitate i sensibilitate de peste 90% pentru necroza miocardic.

Raportul LDH total/HBDH: - sub 1,3 n infarct miocardic acut - peste 1,64 n afeciuni hepatice. Valori normale LDH total: 120-240 UI/l. Valori normale LDH1 sau hidroxibutiratdehidrogenaza (HBDH): 70-130 UI/l.

Distribuia procentual a activitii izoenzimelor n esuturi (%)

LDH-1 LDH-2 LDH-3 LDH-4 LDH-5 Cord 60 30 5 3 2 Ficat 0,2 0,8 1 4 94 Rinichi 28 34 21 11 6 Creier 28 32 19 16 5 Muchi 3 4 8 9 76 Plmn 10 18 28 23 21 Splin 5 15 31 31 18 Hematii 40 30 15 10 5 Tegument 0 0 4 17 79

Creatinkinaza seric

Proteinele cu rol enzimatic

Creatinfosfokinaza seric CK este o enzim dimer cu trei forme moleculare - izoenzime n funcie de combinaia celor 2 tipuri de lanuri M (muscle) i B (brain):
CK-MM
Muchi scheletic Miocard 99 77

CK-MB
1 22

CK-BB
0 1

Creier

96

Creterea activitii plasmatice a izoenzimei CK-MB apare n: infarct miocardic acut; miocardite; angioplastii; traumatisme musculare; nivelul seric al CK-MB crete n primele 2-3 ore de la debutul infarctului i atinge un maxim la 12-36 de ore; valoare normal CK-MB: sub 10 UI/l.

Proteinele cu rol enzimatic

Creatinkinaza seric
Creterea activitii plasmatice a izoenzimei CK-MM apare n: distrofia muscular progresiv; traumatisme musculare; injecii intramusculare; biopsii musculare; post-operator.
Creterea activitii plasmatice a izoenzimei CK-BB apare n: leziuni ale sistemului nervos central (edem cerebral, accident vascular cerebral, traumatisme cranio-cerebrale, tumori cerebrale); anestezie general; intoxicaii cu somnifere; electrooc.

Proteinele cu rol enzimatic

Tropomiozina Proteina musculara cu rol inhibitor asupra contractiei

Valori crescute: - consum de alcool, cocaina - miocardite, miozite - IMA - ischemie miocardica - traumatisme musculare

Troponina
-

Proteinele cu rol enzimatic

3 tipuri: I, T, C Mediaza interactiunea intre actina si miozina

Indicatii: - diagnosticul IMA - diagnosticul infarctelor subacute si al microinfarctelor - monitorizarea tratamentului IMA - traumatisme cardiace

Troponina I < 0,1g/l

Ramane crescuta mai mult timp decat CKMB si are specificitate mai mare pentru leziunile cardiace

Valori crescute: BCI, angina instabila IMA creste in 2-8 ore, maximum la 12-24 ore, scade dupa 5-10 zile Leziuni musculare striate Tahicardii Contuzii miocardice By-pass coronarian Angioplastie coronariana

Proteinele cu rol enzimatic

Troponina T < 0,1 g/l
Leaga troponina de tropomiozina Mai putin specifica in IMA decat troponina I

Valori crescute: - Angina instabila - IMA (creste in 2-8 ore, maximum in 12-96 ore, scade dupa 5 zile-3 luni) - Contuzii miocardice - Miocardita - Leziuni secundare by-passului coronarian sau angioplastiei percutane

Proteinele cu rol enzimatic

Alanin-amino-transaminaza (ALT) sau glutamat-piruvat-transaminaza (GPT). Enzim seric, dar poate fi prezent i n diferite esuturi (musculatura scheletic, ficat i cord). Rol : catalizeaz transferul unei grupari amino de la alanina la cetoglutarat, produii acestei reacii de transaminare reversibil fiind piruvat i glutamat: alanina + cetoglutarat = piruvat + glutamat Valoare normal: 7-50 UI/l. Creterea activitii plasmatice a ALT este ntlnit n afeciuni de tip inflamator i n cele de tip necrotic. Aceast cretere are o importan deosebit n diagnosticul hepatitei virale acute, n special n formele anicterice. Evolueaz n paralel cu AST (GOT), cu valori mai mari n obezitate i valori mai mici n ischemii (miocardice, cerebrale, renale etc)

Proteinele cu rol enzimatic

Creteri patologice moderate ale ALT pot apare n: - hepatit cronic; - ciroz hepatic; - ficat de staz; - miopatii; - mononucleoz; - ischemii renale. Creteri patologice marcate ale ALT pot apare n: - hepatita acut viral; - necroz hepatic. Raportul normal GOT/GPT = 1,3. Raport GOT/GPT crescut sugereaz afeciune cardiac. Raport GOT/GPT sczut sugereaz afeciune hepatic. Un nivel crescut sangvin al transaminazei ALT ofer o gam larg de posibile cauze, aceasta poate fi ns micorat prin corelarea cu msuratori ale altor enzime (Ex. - fosfataza alcalin n afeciuni de ci biliare, CK n miopatii)

Proteinele cu rol enzimatic

Aspartat-amino-transaminaza (AST) sau glutamat-oxalacetat-transaminaza (GOT).

Rol: conversia aspartatului i a acidului -cetoglutaric n oxaloacetat i n glutamat.

GOT-ul are doua izoenzime ce prezint similaritate crescut: - GOT1 izoenzima citozolic - n cea mai mare parte n globulele roii i inim. - GOT2 prezent n cea mai mare parte n ficat. Localizare: att n citoplasm (60%), ct i n mitocondrie (40%). Din acest motiv creterea activitii ei plasmatice poate sugera un proces de necroz.

Este utilizat n diagnosticul infarctului acut de miocard, mpreun cu CKMB i ali produi de necroz.
Valoare normal: 7- 40 UI/l.

Proteinele cu rol enzimatic

Creteri patologice moderate ale AST pot apare n: afeciuni hepatice cronice; boli ale musculaturii striate; anemii hemolitice; traumatisme i stri post-chirurgicale. Creteri patologice marcate ale AST pot apare n: infarct miocardic acut; hepatit viral acut; necroz hepatic. Valorile crescute ale GOT i GPT nu nseamn aadar automat o afectare hepatic, evaluarea trebuie facut de n contextul tuturor analizelor i manifestrilor bolii. Nivelul transaminazelor nu este legat direct de prognosticul bolii n hepatita A, transaminazele pot fi mult crescute, dar aceast boala are de obicei o evoluie bun. Pacienii cu hepatit C au nivele moderat crescute ale transaminazelor dar boala duce deseori la hepatit cronic i la ciroz hepatic.

Proteinele cu rol enzimatic

Fosfataza alcalin
Enzim derivat din membrana plasmatic, cu funcie de hidroliz a esterilor sintetici ai fosfatului la un pH egal cu 9.

Fosfatazele alcaline hepatobiliare sunt sintetizate de celulele canaliculelor biliare i de hepatocite. Se elimin prin bil. Valoare normal: 42-98 UI/l la femei 53-128 UI/l la brbai Creterea activitii plasmatice a fosfatazelor alcaline hepatobiliare este caracteristic sdr. de colestaz i tumorilor hepatice Colestaza se caracterizeaz prin imposibilitatea curgerii bilei la nivelul canalelor biliare intrahepatice sau extrahepatice. a) colestaza intrahepatic apare mai frecvent n urmtoarele situaii: - ciroza biliar; - hepatita viral acut form colestatic; - tratament cu anticoncepionale orale. b)colestaza extrahepatic poate fi de cauz: - intracanalicular (calculi biliari, tumori, parazii etc.); - extracanalicular (compresiuni prin adenopatii, aderene, tumori etc.).

Proteinele cu rol enzimatic

Fosfataza alcalin
Enzimele de colestaz sunt: - Fosfatazele alcaline hepatobiliare; - 5 Nucleotidaza (5-NT); - Gamma-glutamiltranspeptidaza (GGT); - Leucinaminopeptidaza (LAP). Tipuri de fosfataz alcalin: Fosfataza alcalin osoas - sintetizat de osteoblati; - crete n afeciuni caracterizate prin activitate osteoblastic (tumori osteoblastice, metastaze, perioada de cretere, rahitism, b. Paget); - Dg. - creteri ale FA nensoite de niveluri ridicate ale 5-NT sau GGT; Fosfataza alcalin placentar dozabil la mam n timpul sarcinii.

Proteinele cu rol enzimatic

Gamaglutamiltranspeptidaza
Este o enzim situat la nivelul membranei hepatocitare, n special la nivelul canaliculelor biliare, care intervine n transportul amino-acizilor prin membran. Creterea activitii ei plasmatice este cea mai important modificare n colestaz, cnd valorile ei ajung de 10-50 de ori valorile normale. Creterea sa izolat se observ mai ales la marii consumatori de alcool chiar nainte ca alte teste funcionale s fie modificate. Valorile serice normale sunt de 8-40 U/L la barbat si de 5-25 U/L la femeie. Valori crescute pot apare n: - leziuni toxice hepatice - solveni organici - medicamente (clorpromazin, fenobarbital) - alcool - ficat de staz - hipertrigliceridemie - neoplasme hepatice - hipertiroidism - ciroza biliar

Proteinele cu rol enzimatic

Fosfatazele acide
Fosfataza acid se formeaz n principal la nivel prostatic sub influena hormonilor androgeni. Activitatea sa fiziologic optim are loc la un pH acid (4,6) i n mod normal ea se gsete n ser. Enzima se afl la nivelul majoritii organelor, dar mai ales la nivelul prostatei, oaselor, ficatului, splinei, rinichilor, elementelor figurate sangvine i glandelor endocrine. Valori normale : 0,1-0,9 unitati Bodanski (UB) sau 2-5 unitati KingArmstrong (UKA) F.Ac.totala = 4,5 -13,5 UI F.Ac. prostatica = 0,04 - 3,6 UI

Creteri ale nivelului fosfatazei acide: - patologie prostatic - carcinom de prostat sau manopere medicale ca: palparea, cistoscopia, cateterism. - metastaze osoase ale cancerelor de colon, mamar, cortico-suprarenal i pulmonar; - embolii pulmonare; - procese trombotice extensive.

Hepatit acut viral

Obstrucie biliar complet

Ciroz hepatic

Metastaze hepatice

Enzima seric AST ALT FA

Frecven >95% >95% 60%

Amplitudine 14 17 1-2

Frecven >95% >95% >95%

Amplitudine 3 4 4-14

Frecven 75% 50% 55%

Amplitudine 2 1 1-2

Frecven 50% 25% 50%

Amplitudine 1-2 1-2 1-10 TBC 1-3 sarcoidoz

40%

80%

1-14 carcinom

Frecvent

1-20 amiloidoz

LAP IDH 5NT

80% >95% 70%

1-2 6 1-2

85% 10% >95%

3 1 6

30% 20% 50%

1 1 1-2

70% 40% 65%

2-3 2 3-4

LAP leucin aminopeptidaza, IDH izocitrat dehidrogenaza, 5NT 5 nucleotidaza Frecvena procentul mediu de pacieni la care se nregistreaz creterea nivelului seric al enzimei Amplitudine de cte ori a crescut n medie nivelul seric al enzimei comparativ cu nivelul normal.