Metode cromatografice Privire de ansamblu Analiza chimic cromatografic este un domeniu al analizei instrumentale care include mai multe

e metode de separare i totodat de analiz a componenilor amestecului din prob. n toate variantele, separarea precede analiza i se realizeaz prin repetarea, de un numr mare de ori, a echilibrului de distribuie ntre dou faze. Una dintre faze este imobil i poart denumirea de faz staionar (aflat de regul ntr un tub numit coloan! iar cealalt faza mobil - aflat n micare, se deplaseaz prin golurile primei faze. "epararea se petrece n coloana cromatografic, #piesa# cheie a ntregii metode. $aza mobil, denumit i eluent scurg%ndu se continuu (deci cu vitez constant! prin interstiiile fazei staionare, adeseori poroase, poate provoca migrarea, cu viteze diferite, a celor n componeni ai amestecului de separat de a lungul coloanei. Amestecul supus separrii se introduce sub form de soluie la nceputul coloanei, folosindu se un dispozitiv de introducere a probei (de e&emplu o sering micrometric!, i se afl iniial 'fi&at( ntr o zon ngust de la nceputul coloanei. "plai de eluent, o parte din componenii probei migreaz apoi prin coloan cu viteze diferite. Acest lucru se datoreaz interaciunilor fizice specifice, dintre moleculele probei i faza staionar. ()esigur, nu orice molecul poate migra pe orice faz staionar.! *fectul, este numit retenie, i provoac o aa numit migrare difereniat. Adic moleculele migreaz n 'grupuri(, n fiecare grup e&ist%nd doar molecule de acelai fel. Aceasta face posibil sesizarea, de ctre un instrument, a componenilor, pe r%nd, la prsirea coloanei, n grupurile respective denumite uneori zone. +nstrumentul amintit este un analizor fizico chimic, sensibil la mai muli (n mod ideal la oricare! dintre componeni ce ies din coloan i care este plasat n eluent, imediat dup ieirea din coloan. Acest analizor, denumit detector, este capabil s dea un semnal proporional cu masa sau cu concentraia soluiei de component n faza mobil. )ispozitivul, #marcheaz# trecerea fiecreia din substanele ce formeaz proba, similar cu o fotocelul care nregistreaz trecerea concurenilor la sosire n atletism. ,eprezentarea grafic a semnalului detectorului n funcie de timp poart numele de cromatogram. Clasificarea tehnicilor cromatografice " au imaginat i realizat numeroase variante ale metodei cromatografice, diferind unele de altele n primul r%nd prin natura fazei mobile, dar i a celei staionare. Astfel se distinge cromatografia de lichide (LC) c%nd faza mobil este un lichid, cromatografia de gaze (GC) c%nd aceasta este un gaz sau cromatografia cu fluide supracritice la care faza mobil este un lichid aflat peste temperatura critic. n cadrul cromatografiei de lichide se mai face distincie ntre cromatografia pe coloan deschis i cea pe coloan nchis. -e de alt parte, n cadrul fiecreia dintre acestea, distingem mai multe variante. n cadrul ./ se disting, n funcie de mecanismele de separare0 Cromatografia de adsorbie, una dintre primele tehnici utilizate, veche de mai bine un secol (1vet, 2345!, utilizat pentru separarea substanelor organice cu molecule de dimensiuni mici i medii pe adsorbeni, ca silicagel i alumin, folosindu se, ca faze mobile, diferite amestecuri de solveni organici. Cromatografia ionic (de schimb ionic!, care se petrece pe o faz staionar solid, poroas, format din materiale specifice 6 schimbtorii de ioni 6 substane cu o reea solid af%nat, de natur organic sau anorganic, pe care se gsesc grefate, prin procesul de obinere, nite 7centre de schimb ionic(. /ele mai rsp%ndite sunt rinile schimbtoare de ioni 6 organice 6 la care scheletul suport este unul organic 6 un polimer poros. -e aceste centre are loc o reacie ionic sau o interaciune ntre substana din soluie (electrolit sau neelectrolit! i funciunea legat chimic de suportul solid, numit reacie de schimb ionic. Cromatografia de excluziune steric se desfoar pe faze staionare poroase dar cu porozitatea selecionat astfel nc%t s corespund dimensiunilor moleculelor supuse separrii. 8 parte dintre molecule intr prin pori, reuind s interacioneze cu suportul solid, prin fore de adsorbie foarte slabe, iar altele sunt ' excluse deplas%ndu se practic nereinute odat cu faza mobil. "e obine astfel un soi de 'sit( la scar molecular separarea moleculelor fc%ndu se n funcie de dimensiune. 9ehnica se mai nt%lnete i sub denumirea de filtrare prin geluri sau permeaie prin geluri n funcie de natura apoas sau organic a fazei mobile.
2

Cromatografia lichid-lichid (../!, n care faza staionar este o faz lichid, nemiscibil cu cea mobil i imobilizat pe un suport solid, ntr o coloan. Aici suportul solid este, cel puin principial, inert fa de componentele din prob. ntruc%t simpla impregnare a unui suport poros cu un lichid permitea splarea acestuia n timp, s a recurs la legarea pe cale chimic a acestora de suport, obin%ndu se nite faze cu totul specifice 6 faze staionare legate chimic! :olecule organice de dimensiuni mici sunt, prin sintez, legate de suportul poros, fenomenul de pierdere prin splare de ctre faza mobil, fiind practic anulat. Acest tehnic este cea mai rsp%ndit devenind aproape sinonim cu cromatografia de lichide. Cromatografia pe coloan deschis sau cromatografia planar (-/!, se refer la un grup de tehnici nrudite cu cele din ./, care au toate n comun faptul c faza mobil circul printr un material poros dispus ntr-un plan i form%nd un strat relativ subire, dar de compoziie asemntoare cu cele menionate la cromatografia pe coloan. "e disting0 Cromatogafia pe h"rtie, tehnic n care faza staionar este o h%rtie poroas din celuloz (iniial o h%rtie de filtru! care este irigat de solvent prin fore capilare 6 o tehnic, azi, de importn istoric. Cromatografia pe strat subire (#LC)$ n care faza staionar pulverulent este fi&at de suportul plan (sticl, aluminiu, material plastic! cu un liant, form%nd un strat subire (4,2 4,; mm! de asemenea irigat prin capilaritate. Cromatografia pe strat subire de nalt performan(%&#LC) , n care faza staionar are granulaie e&trem de fin ridic%ndu se astfel eficiena separrilor dar i viteza acestora. 9oate acestea se caracterizeaz prin simplitate, accesibilitate i pre de cost cobor%t, dar totodat prin performane ceva mai slabe dec%t cromatografia de lichide pe coloan sub presiune ridicat (<-./! varianta modern a ./. n mod analog, n cazul cromatografiei de gaze (sau mai pretenios cromatografiei n faz gazoas!, denumit prescurtat =/ se disting urmtoarele tehnici0 Cromatografia gaz-lichid n care faza staionar este un lichid nevolatil imobilizat pe un suport solid. Aici suportul poate fi unul granular, poros, situat ntr o coloan n aa numita cromatografie de gaze 'convenional( sau chiar pe pereii coloanei, confecionat de dimensiuni capilare, n 'cromatografia pe coloan capilar(. Cromatografia gaz-solid este analog cu cele discutate la cromatografia de adsorbie i la cea de e&cluziune steric cu deosebirea c schimbarea gazului nu modific selectivitatea. $aza staionar o constituie tot silicagelul sau alumina, respectiv 'sitele moleculare( (nite silicai naturali sau sintetici! respectiv granulele de carbon poros. :etoda este e&trem de important pentru separarea gazelor permanente (/8, /8>, 8>, ?>, gaze nobile etc.! )in punct de vedere istoric, evoluia cromatografiei a cunoscut o suit de progrese, care au adus o din situaia iniial de metod de separare i purificare de laborator la o tehnic de separare i analiz chimic cu o arie de aplicare aproape universal. +niial rusul 1vet, a introdus n 2345 cromatografia de lichide pe coloan (./!. Aceast metod a fost uitat mult vreme i abia dup 2354, anul descoperirii cromatografiei n strat subire pe alumin, s a perfecionat metoda utiliz%nd coloana, o dat cu nevoile de separare i purificare a compuilor organici naturali sau sintetici implicai n biochimie. n 23@2 enlezii :artin i "Ange descoper cromatografia de repartiie pe h%rtie, reuind s separe cu aButorul unui amestec de solveni care irig o band de h%rtie de filtru (conin%nd o pictur de prob! aproape toi aminoacizii, descoperire e&trem de important pentru dezvoltarea ulterior a biochimiei. )oar n 23;> aceiai A. C. -. :artin and ,. .. :. "Ange2 au nlocuit faza mobil lichid cu un gaz, realiz%nd pentru prima oar cromatografia de repartiie gaz lichid. n aceast variant, detecia a fost realizat fizico chimic, n efluentul gazos, dup ieirea din coloan, reuind astfel s mbunteasc marcant separrile. )in acest moment asistm la demaraBul e&traordinar al acestor tehnici, devenite azi c%teva din principalele miBloace de analiz n chimia organic i biochimie, dar i n criminalistic, igien, controlul alimentelor, industria metalurgic etc. )in 23DE <alazs, (profesor la $rancFfurtG:ain!, a pus la punct ./ folosind un solvent sub presiune n calitate de faz mobil i detecie fizico chimic n efluentul lichid, acesta fiind nceputul dezvoltrii cromatografiei de lichide sub
>

presiune nalt (>44 atm!. )in 23E4 s a reuit i obinerea unor separri analitice performante bazate pe schimb ionic prin introducerea eluenilor diluai i a supresorului ionic datorate americanilor <amisch i "chmall, tehnic care de atunci a primit denumirea de cromatografie ionic (+/!. Azi se lucreaz nu numai cu cromatografe de laborator, analitice, ci i cromatografe de proces, dedicate analizelor automate ale proceselor industriale sau cromatografe preparative, destinate obinerii de substane pure n industria farmaceutic sau n biotehnologii. Cromatograma. Elementele acesteia i mrimi fundamentale n orice tip de cromatografie detectorul d un semnal proporional, uneori cu concentraia, alteori cu masa componentului aflat n celula de msur, semnal ce poate fi nregistrat n funcie de timp. )iagrama semnal, funcie de timp sau de volumul de eluent se numete cromatogram. -e cromatogram distingem o serie de ma&ime, numite picuri (peaF H v%rf n l. englez!, care se produc deasupra liniei de baz sau a poriunii orizontale a curbei, paralel cu a&a timpului. Aceasta apare ori de c%te ori n detector nu apare nici un component, n afara eluentului evident.

$ig. 2. *lementele unei cromatograme 8ricare pic are, n cazul ideal, forma distribuiei normale =auss. " considerm cea mai simpl cromatogram posibil0 cazul introducerii unui singur component, ntr un gaz, /, care conine urme de aer aerul fiind un component inert. Aspectul acestei cromatograme este cel prezentat n fig. 2. -e a&a absciselor s a considerat timpul (sau volumul! de eluent scurs, cu debit cunoscut, de la introducerea (inBectarea! probei, iar pe cea a ordonatelor, #semnalul# instrumentului n uniti arbitrare. )istingem urmtoarele #elemente# de baz0 &icurile cromatografice. n cazul prezentat n fig 2, cele dou semnale sau v%rfuri sunt denumite picuri. Acestea sunt semnalele valorificabile n analiza calitativ i cantitativ n toate metodele cromatografice. -rimul pic, mai mic, corespunde unui component inert (aerul de e&emplu n /=! care nu este reinut de loc iar cel de al doilea, notat cu /, corespunde componentului (unic n cazul de fa! al probei considerate i este datorat moleculelor care se distribuie pe parcursul migrrii prin coloan ntre faza mobil i cea staionar i care, n consecin, ies mai t%rziu din coloan. #impul mort, t: este timpul n care un component, complet nereinut de ctre faza staionar, parcurge coloana i tuburile de legtur p%n la detector. Acesta nu poate fi zero. n cazul /= timpul mort, de e&mplu, este egal cu timpul de retenie al aerului0 t: H t,(retenie!. )eci, cu alte cuvinte, reprezint timpul scurs de la inBectarea (introducerea! probei n coloan i apariia ma&imului de concentraie n detector, pentru componentul nereinut. #impul de retenie, t, o mrime caracteristic pentru fiecare component al amestecului separat de coloan reprezint timpul scurs de la inBectarea probei i apariia ma&imului de concentraie n detector>. )e e&emplu, n cazul prezentat anterior n fig. 2, acesta este distana de la a&a ordonatelor (nceputul cromatogramei! p%n la verticala prin v%rful picului /. Acest timp, pentru un component i o coloan (plus condiii e&perimentale! date este constant, indiferent dac componentul respectiv este singur sau n amestec. 'olumul de retenie, I, este volumul de eluent corespunztor timpului de retenie0 I, H t,.$e (2! Acesta este legat de timpul t, prin intermediul debitului eluentului, $e0
5

#impul de retenie a(ustat, t,J introdus n cromatografie pentru a se putea compara timpii msurai pe coloane diferite, n cazul aceluiai component este dat de diferena0 tJ, H t, t: (>! /orespunztor e&ist i un )olum de retenie a(ustat, I,J H I, I: unde I: este )olumul mort. Acest volum mort este legat de debitul eluentului coloanei, $e, prin produsul0 I: Ht:.$e i reprezint volumul golurilor din coloan plus volumul tuburilor de legtur de la coloan la detector. Cromatograme ideale i reale Aspectul unui pic dintr o cromatogram ideal este acelai cu curba obinut prin reprezentarea grafic a funciei de distribuie a erorilor (=auss!, a crei e&presie, scris n coordonate carteziene &,A este0 (x!> 2 (5! *= e > > unde K o constant simbolizeaz 'media distribuiei(L n cazul cromatografiei aceasta corespunde chiar timpului de retenie, iar M abaterea standard a mediei tot o constant, reprezint distana pe a&a absciselor de la ma&im la punctul de infle&iune al curbei de eluie (fig. 2! i reflect chiar lrgirea picului la trecerea acestuia prin coloan. 8 e&presie i mai simpl a acestei funcii consider c a&a ordonatelor trece chiar prin ma&imul picului (K H 4! iar M H 2. n consecin0 x> 2 *= e > (@! > Ultima ecuaie este o curb simetric cu un ma&im pentru &ma& H 4 i Ama& H 2G > H 4,533 care mai are i dou puncte de infle&iune, pentru & H K i A H 4,>@> adic cam D4,DN din valoarea Ama&. .imea picului la punctul de infle&iune este >M pentru ecuaia (5! i evident MH2 pentru reprezentarea funciei (@!. -rin convenie, n cromatografie O2G> simbolizeaz limea picului la Bumtate din nimea sa i O2G> H >,5;M iar aici M> poart numele de dispersia picului! .imea picului la baz notat O se msoar de fapt la 25,;N din nlime unde n mod riguros O H @M. &icurile reale nu respect ntotdeauna forma gaussian din mai multe motive. -e de o parte, coeficientul de distribuie P nu este constant la orice concentraie iar pe alt parte, mai e&ist i diferene ntre viteza eluentului transversal prin coloan i anume n vecintatea pereilor aceasta este practic zero pe c%nd la miBloc este ma&im.

$ig. >. -icuri reale a cror apariie se datorete izotermelor de adsorbie. )epirea domeniului liniar al coloanei atrage dup sine apariia asimetriilor $ormele posibile pentru picuri depind de forma funciei / " H f(/:! adic de izoterma de adsorbie (desigur mecanismul nu este ntotdeauna acesta!. /%nd izoterma este liniar (+! avem picuri simetrice. /%nd aceasta este conve& (++! sau concav (+++! avem picuri asimetrice (fig. >!. Acest asimetrie, nt%lnit relativ frecvent, se evalueaz cu un factor de asimetrie (sau de trenaB!, $t. Acest factor se calculeaz prin raportul distanelor, de la dreapta A H & ma& la cele dou ramuri, msurat la 24N din nlime, adic0
@

+t =

b a

n cazul izotermelor conve&e $Q2 iar n cazul celor concave (+++ pe fig. >! $R2, ultimele fiind e&trem de rare. Mrimi i ecuaii caracteristice unei coloane n cazul ./ eluentul, un lichid, este necompresibil i n consecin, debitul acestuia nu se va modifica la nceputul coloanei fa de sf%ritul acesteia. n cazul /=, ns, presiunile iniial, pi i cea final, pf, fiind diferite, este necesar introducerea unei corecii a volumului de retenie msurat, cu aButorul unui factor, B, numit factorul de corecie corespunztor cderii de presiune. Acesta se poate calcula din ecuaia dat n cele ce urmeaz, fr deducie0 5( p > 2! (= ( p 5 2! n care cu p s a simbolizat raportul presiunilor, iniial (pi! respectiv final (pf!, adic pHpiGpf. /u aButorul acestei mrimi semnale de retenie din diverse condiii e&perimentale se pot face comparabile n /= mai ales prin corecia volumului de retenie. 'olumul de retenie corectat, I,o definit prin produsul0 Io, H B.I, (D! unde B este factorul de corecie de mai sus iar I, 6 volumul de retenie. Acesta este utilizat doar n analiza calitativ prin /=. 'olumul de retenie net, I?, este volumul de retenie corectat pentru cderea de presiune0 I? H BI,J (S! Acesta este utilizat cu precdere n analiza calitativ c%nd nu se mai recurge la alte tehnici. 'olumul de retentie specific, Ig. -rin mrirea cantitii de faz lichid staionar, fie prin utilizarea unei cantiti (grosimi! mai mari fie prin utilizarea unei coloane mai lungi, crete volumul de retenie. -entru a se lua n considerare i acest factor se definete volumul de retenie specific (e&primat de regul n mlGg! cu ecuaia de definiie0 Ig H (>S5G9c!(I?Gm.! (E! unde 9c este temperatura absolut a coloanei, I? volumul de retenie net al componentului i m. masa fazei staionare lichide din coloan. +actorul de retenie, ,$ reprezint raportul, subunitar, dintre vitezele de deplasare prin coloan ale unui component i ale eluentului. /um vitezele amintite se pot calcula din raportul spaiului parcurs n unitatea de timp, lungimea coloanei fiind notat ./8., avem conform0 Lcol t- 'n4 t, ,f = (3! Lcol t , ',4 tCoeficientul de distribuie, P (sau P)! este o mrime identic celei din e&tracie (repartiia ntre faze! definit ntotdeauna prin raportul dintre concentraiile componentului n chestiune din fazele staionar, /", respectiv mobil, /:. /onform definiiei (dup ?ernst!0 C /= . Cn cazul cromatografiei de adsorbie acesta a fost denumit coeficient de adsorbie, n cazul cromatografiei de schimb ionic (denumit ulterior cromatografie ionic!, coeficient de distribuie ionic iar n cadrul cromatografiei de e&cluziune steric coeficient de difuziune. +actorul de capacitate, F (anterior notat FT! se definete ca raportul dintre numrul de moli distribuii ntre fazele0 staionar, /".I" respectiv cea mobil, /:.I:. *cuaia de definiie este0 C ' 0= . . (22! C- 'unde cu I" respectiv I: s au notat volumele fazelor 6 staionar respectiv mobil din coloan, volumul
;

ultimei fiind egal numeric cu volumul mort al coloanei. n ultimul timp a primit denumirea de factor de separare. Acest factor este legat de timpul de retenie, respectiv de cel mort, printr o ecuaie foarte mult utilizat0 t, H t:(2UF! (2>! )eci, cu c"t factorul de capacitate este mai mare coloana reine mai puternic un component . -e de alt parte din ecuaia anterioar se poate vedea c dac F H 4 atunci t , H t:. -entru determinarea practic a valorii F se e&prim aceast mrime din ecuaia de mai sus, i in%nd cont de cele amintite

anterior, anume0 t,T H t, 6 t: se obine relaia de calcul0 tJ 0 = , (25! t,etenia relati), V, a mai fost denumit i factorul de separare tocmai pentru c, cu c%t valoarea acestuia este mai mare cu at%t poziia picurilor pe aceiai cromatogram este mai distanat 6 deci separarea pe coloana respectiv este mai net. " a constatat c influena variabilelor e&perimentale este cu mult mai redus dac se utilizeaz pentru e&primarea reteniei aceast retenie relativ. -entru calculul acesteia trebuie efectuat msurarea, at%t pentru componentele probei c%t i pentru o substan considerat etalon (sau standard! a timpului (sau volumului! de retenie, n condiii absolut identice. )e multe ori substana etalon este parte a probei i nu este adugat intenionat. ,etenia relativ se poate e&prima astfel0 t J, / > G2 = = > (2@! (t J, ! .#1 /2 unde P> i P2 sunt coeficienii de distribuie (vezi e&presia P de mai sus! ai substanelor > respectiv 2, iar cu 2 s a notat substana etalon (standard!. "ubstanele recomandate n calitate de substane standard n =/, n vederea calculrii reteniei relative, sunt n alcanii. 2umrul de talere teoretice al coloanei$ n. /onform 'teoriei talerelor( migrarea unei substane separate prin coloan se poate descompune teoretic ntr o succesiune de deplasri prin dreptul a n mici incinte din interiorul coloanei n care au loc echilibre perfecte ntre fazele staionar, din incinte, i cea mobil. "imilar cu distilarea pe coloane prevzute cu talere, aceste mici incinte ideale au fost denumite 3talere teoretice3! .ungimea poriunii dintr o coloan, ce corespunde unei asemenea incinte, pe parcursul creia se realizeaz un echilibru termodinamic, se noteaz cu < i poart numele de nlime echi)alent a unui taler teoretic! Aceasta caracterizeaz performana coloanei i se poate calcula din raportul0 L % = col (2;! 2 unde cu ./8. s a notat lungimea coloanei iar cu ? numrul de talere teoretice. /u c%t valoarea < este mai mare separarea este mai bun. ?umrul n se poate calcula pe baza cromatogramei obinute e&perimental din limea picului la baz$ Ob, care dup cum se vede din fig. 2, este de @ ori valoarea dispersiei curbei gaussiene care modeleaz matematic picul, ceea ce permite scrierea ecuaiei0 Ob H @M (2D! Ialoarea numrului de talere teoretice, ?, constituie de asemenea o msur a eficacittii (totale! a coloanei cromatografice utilizate ntr o separare sau analiz concret. -entru un component dat acest numr reprezint patratul raportului dintre timpul de retenie i deviaia standard asociat picului corespunztor0
t, 2 =
>

2S!

.a o e&aminare mai atent acest raport reprezint patratul numrului de picuri ce ar ncpea pe o cromatogram n intervalul corespunztor timpului t,, picurile fiind separate toate doar parial (de e&emplu cele cu rezoluia ," H 4,S;, aa cum se prezint pe fig. 5. a! "e poate observa c, nlocuind M din ecuaia (2D!, avem0

 t, t @t , 2 = , = = 2D 4 4 G @ 4b b t, 2 = ;,;@ 4 2G >
>

>

>

>

(2E!

Aceeai ecuaie scris n func O ie de ltO ea picului la Bumtate O2G> este0 (23!

"e mai poate observa i c, cu c%t valoarea n este mai mare, picurile sunt mai nguste (O2G> scade!. )eci, cu c%t numrul de talere este mai mare cu at%t vor #ncpea# mai multe picuri pe aceeai cromatogram. ntruc%t se pot separa mai multe componente i separarea picurilor, dou c%te dou, va fi mai net se consider coloana 7mai eficient(. Observaie! -rimile t, i 4b (respecti) 4567) se )or exprima ntotdeauna n aceleai uniti deci numrul de telere teoretice$ 2$ este adimensional! 1e regul ambele mrimi (t, i 4b)se exprim n mm$ msurai direct de pe h"rtia nregistratorului! /um n timpul mort, t: nu poate iei din coloan nici un component al amestecului inBectat, n cromatografie se mai utilizeaz o mrime0 numrul efecti) de talere teoretice$ ?ef, considerat un numr mai apropiat de realitate dec%t cellalt (?! tocmai pentru c nu se mai ia n calcul timpul mort practic timpul n care componentul nu se afl nc n coloan0
t, tt 2 ef = , = 2D 4 b
>

t, t = ;,;@ 4 2G >

>

>

(>4!

)in ecuaia (2E! se poate scoate Ob i prin nlocuire n (>4! se poate apoi e&prima ? ef funcie de numrul de talere teoretice, ?0
2 ef t , t = t 2 ,
2 ef

>

(>2!

unde, nlocuind t, din (2>! i e&prim%nd apoi ?ef din (>2!, avem0
0 = 2 2 + 0
>

(>>!

,ezoluia$ simbolizat ,", este mrimea ce e&prim gradul de separare a dou componente date de pe o cromatogram. -entru componentele oarecare A i W aceasta se e&prim prin raportul t , t ,s = = , (>5! >( 9 + 8 ! 4b unde Xt, este diferena dintre timpii de retenie ai componentelor W i A adic Xt, H t,W t, A, iar O2G> reprezint limea medie a picurilor la baz$ O2G>H (OA U OW!G>. ,ezoluia mai poate fi e&primat datorit nevoilor practice i n variantele0 t t ,s = , , 8 , , 9 (>@! 4,;( 48 + 49 !

$ig. 5. -icuri cromatografice separate ntre ele cu diverse rezoluii

-entru dou picuri alturate ," H 2 iar pentru dou picuri complet separate , " H 2,; (fig. 5!. ,ezoluia
S

egal cu unitatea reprezint o separare de 3EN ntre cele dou picuri

8 alt e&presie a rezoluiei se poate obine pe baza notaiilor0 Xt,Ht:(FW FA!L MHMWHt,,WG(?!2G>Ht:(2UFW!G(?!2G>L FWGFAHV care nlocuite n e&presia >5 duc la ecuaia0 2 2 0 8 ,s = (>5! 2 + 0 @ 8 Aceast e&primare este important pentru c reflect cei trei factori de care depinde rezoluia prin cele trei paranteze, n ordine0 prima - ficiena, a doua - selecti)itatea i a treia capacitatea de separare a coloanei. n ultima ecuaie ? se refer la ambele picuri considerate egale ca lime adic ? H (?A U ?W!G>.

$ig. @ . /ompromisul realizat n orice separare cromatografic ntre0 eficien 2, vitez > i volumul probei 5 -entru o coloan i un sistem supus separrii date, ncerc%nd s mrim cantitatea de prob pierdem din rezoluie pentru c depim capacitatea de sorbie (ad sau absorbie! a coloanei. n general suma dintre cantitatea de prob, eficiena coloanei (sau rezoluia! i viteza de separare este o constant. /onsider%nd valori reduse (unitare! pentru fiecare dintre acestea ne putem imagina poziia noastr, n faa unei probleme de separare, ca pe un punct din interiorul unui triunghi echilateral, cu laturile 2 (redat n fig. @!. "uma paralelelor la cele trei laturi este ntotdeauna 2. )eci ntotdeauna facem un compromis0 ca s c%tigm n vitez, renunm la rezoluie i la cantitatea de prob sau ca s separm cantiti mari de prob va trebui s sacrificm at%t rezoluia c%t i viteza. n analiza chimic este foarte important mai ales eficiena (proporional cu ptratul rezoluiei!. )e aceea, se va lucra ntotdeauna cu o cantitate minim de prob i cu viteza optim ncerc%nd prin modificarea naturii coloanei (compoziia fizico chimic, lungimea, temperatura, viteza eluentului! sau a compoziiei fazei mobile (doar n ./! s modificm parametrii separrii a dou componente P, ?, F i pentru a asigura separarea complet a amestecului de interes practic. Ecuaia lui Van Deemter Aceast ecuaie e&prim contribuia diverilor factori la lrgirea zonei unui anumit component, n timp ce acesta migreaz prin coloan cu o vitez medie v. +niial creat ca model matematic pentru =/, ecuaia poate fi generalizat pentru oricare tip de cromatografie, dup cum s a constatat ulterior. Aceasta conine e&presia analitic a valorii nlimii echivalente a talerului teoretic - < n funcie de viteza liniar medie, v, a eluentului de a lungul coloanei. /ea mai simpl i totodat mai cunoscut e&presie este cea descoperit iniial de Ian )eemter pentru cromatografia de gaze0 < H A U W v + / (>D! unde A, W i / sunt, pentru o coloan dat v nite constante. )ar aceste constante au n realitate fiecare nite dependene funcionale ce in de natura fizic a fazelor staionar i mobil, de diametrul i de natura umpluturii, dar i de condiiile de operare0 temperatur, presiuni etc. =raficul acestei ecuaii este o curb cu un minim (vezi fig. ;!, adic o ramur a unei hiperbole ce
E

trece printr un minim "e observ c nlimea talerului, <, are un optim pentru o vitez care se poate calcula. Anume, prin derivarea ecuaiei lui Ian )eemter i egalarea cu zero a rezultatului derivrii, se obine0
opt =
C 8

(>S!

-rin nlocuirea valorii v cu vopt n ecuaia iniial se obine optimul pentru < (adic minimul!0 % min = 9 + > 8C (>E! -entru vopt se realizeaz deci eficiena maxim a coloanei! Ialorile A, W i / se obin e&perimental din graficul construit n coordonate similare celei din fig. @ sau prin calcul fc%ndu se mai multe determinri de nlime a talerului teoretic < la diverse viteze medii ale eluentului. 9ermenul A, constant, legat de difuzia turbulent i implicit de geometria umpluturii, este practic constant ntr o coloan. 9ermenul W este legat puternic de difuzia longitudinal, deci mai ales de coeficientul de difuzie n gazul purttor determinant, dar constant ntr un montaB instrumental dat iar temenul / de transferul de mas, aadar de cinetica procesului de fi&are a componentului pe faza staionar, deci legat direct de natura fazei staionare, respectiv de specia molecular care migreaz prin coloan.

$ig. 2;.;. *cuaia lui Ian )eemter :rind viteza eluentului, n intenia de a grbi ieirea din coloan a componentului i a scurta analiza, de cele mai multe ori stricm separarea n ansamblu prin lrgirea e&cesiv a picurilor, deoarece echilibrul dintre /: i /" nu apuc s se realizeze, iar picul este 'splat( de eluent mai departe prin coloan. )in contr, micor%nd viteza prea mult, apare o lrgire e&cesiv din cauza celor dou difuzii, mai ales a celei n faz gazoas, care de asemenea stric separarea. n cromatografia de lichide poriunile liniare cresctoare, de dup minim, au pantele mai puin abrupte datorit difuziei n faz lichid cu mult mai lent n lichide dec%t n cazul gazelor, de circa 2444 de ori. Astfel, contribuia primilor doi termeni din ecuaia lui Ian )eemter este mult diminuat i n general lrgirea zonei n ./ are valori mai mici. n cazul cromatografiei de gaze cu coloan capilar s a demonstrat c eficiena coloanei e&primat prin nlimea talerului, <, este influenat de factorul de capacitate (sau de retenie! F precum i de raza coloanei capilare, r0
% min = r 2 + D0 + 220 > 5(2 + 0 ! >

"e poate remarca c valoarea < este cu at%t mai mic cu c%t raza, r scade.