Codul genetic

Translaia
Reglarea sintezei
proteinei
Obiectivele:
Codul genetic. Proprietile.
Ribozomii - sediul sintezei proteinelor, structura lor.
Procesul de translare (sinteza proteinelor). Modificrile
posttranslaionare ale proteinelor.
Reglarea biosintezei proteinelor. Inducia i represia
enzimelor.
Inhibitorii sintezei proteice.
Polimorfismul proteinelor (variantele hemoglobinei,
enzimelor, grupelor sanguine).
Bolile ereditare i diagnosticul lor biochimic.
Codul genetic
Informaia genetic referitor la biosinteza proteinelor
se transmite cu ajutorul codului genetic - dicionar
ce traduce secvena nucleotidelor din ADN n
succesiunea AA din lanul polipeptidic.
Proprietile codului genetic
Este triplet -64 codoni: 3 nonsens:UAG; UGA; UAA; 61
codific AA corespunztori
- este degenerat - unui AA poate s-i corespunda mai muli
codoni (Ex. Arg, Leu, Ser - codificate de 6 codoni; Met- i
Trp - un codon). Codonii unui aminoacid sint sinonime.
Specificitatea codonului e determinat de primele dou
litere. Degenerarea se refer la nivelul nucleotidului 3 din
codon sau 1 din anticodon care oscileaza.
- nu este ambiguu-acelai triplet nu semnific 2 AA diferii
- Are o structur liniar (colinear) o concordan liniar
ntre gen i proteina codifictoare
- Nu se suprapune (excepie- viruii)
- Este universal toate veuitoarele utilizeaz acelai
mecanism de traducere (abatere prezint codul genetic al
mitocondriilor);
- nu are virgule, semne de punctuatie - ce ar indica
nceputul i sfritul fiecarui codon.
1. AUG - este codonul de initiere
2. UAG, UAA,UGA - codoni stop (non sens)
3. Toi codonii cu U (n pozitia 2) codifica AA hidrofobi
4. codonii cu A n pozitia -2 codific AA polari
5. Uracilul n poziia 1 prezint codonul nonsens
6. dac n anticodon n directia (5'->3') prima baz
nucleotidic e:
a) Citozina sau Adenina, el va citi un singur codon;
b) Uracilul sau Guanina el va citi 2 codoni;
c) inozina - respectiv va citi 3 codoni

Ribozomii
Reprezint sediul de traducere a ARNm i sinteza
proteinelor.
Structura- complexe ribonucleoproteice i sunt formai
din dou subuniti de mrime inegal (mare i mic)
Structura ribozomilor procariotici:
subunitatea 30 S conine ARNr 16S i 21 proteine.
subunitatea 50S ARN r 5S, 23S i 31 proteine.
Sinteza ARNr i formarea subunitilor are loc n
citoplasm.
Structura ribosomilor eucariotici:
subunitatea 40S ARNr 18S i 33 proteine.
subunitatea 60S ARN r 5S, 5,8S, 28S i 49 proteine.
ARNr se formeaz n nucleol.
Ribozomul va avea constanta de sedimentare 70S la
procariote si 80S la eucariote.
S este coeficientul de sedimentare Svedberg, care
depinde de forma, densitatea i dimensiunea
particulelor.

Centrele catalitice ale ribosomilor
Situsul A - aminoacil responsabil de unirea
complexului aminoacil- ARNt
Situsul P peptidil gzduiete ARNt legat de
un lan polipeptidic deja sintetizat
Situsul E e responsabil de eliminarea ARNt
Procesul de sintez proteic poate fi schiat
sumar prin interaciunea celor 3 tipuri de ARN -
informaia din ARNm este citit in ribozom si
transpus n proteine, AA necesari fiind adui de
ARNt.
n starea complet nedisociat ribozomii sunt
activi.
Deplasarea lber a ribozomilor n diferite sectoare
ale celulei, sau combinarea lor n diferite locuri cu
membranele reticulului endoplasmatic ofer
posibilitatea de asamblare a proteinei n celul.

Mai muli ribozomi
pot citi simultan
acela ARN mesager
pe care il parcurg in
acela sens. Se
constituie astfel un
poliribozom,
structur ce permite
accelerarea sintezei
proteice.
Translaia
Translaia sau biosinteza proteinelor propriu
zis.
Bazele moleculare ale translaiei:
1. m-RNA ca matri genetic, programul creia
determin succesiunea aminoacizilor n
protein;
2. aminoacil tRNA;
3. ribozomii ca maini moleculare pentru unirea
succesiv a aminoacizilor n catena polipeptidic
conform programului mRNA;
4. GTP ca surs de energie;
5. factorii proteici care vin n ajutor n diferite
etape ale asamblrii proteinei n ribozomi;
6. unii ioni ca cofactori (Mg 2+, K+).
Etapele
se realizeaza in 5 etape:
Activarea AA.
Iniierea lanului polipeptidic.
Elongarea lanului polipeptidic.
Terminarea lanului polipeptidic si
eliberarea acestuia.
Prelucrri post traducere ale
proteinei sintetizate.
Activarea AA
are loc n citozol
Sunt necesare:
1. AA (procariote Nformil-Met; la eucariote Met)
2. ARNt
3. ATP, Mg, K
4. E aminoacil ARNt sintetaza (exist nu mai puin
de 20 indentificate 32 de tipuri de ARNt):
a. Posed 4 centre: pentru AA, ATP, ARNt, H2O
b. Specificitatea E e determinat de structura ARNt
c. Fidelitatea e asigurat de capacitatea de
autocontrol
d. Conine grupri libere sulfhidrilice


Activarea AA
Parcurge n 2 etape:


Activarea AA
Activarea AA poate fi explicat in 2 etape:
I etapa - AA reactioneaza cu ATP rezultand
aminoacil-AMP. PP eliberat este hidrolizat si in acest
fel reactia ireversibila.
II etapa - complexul cedeaza AA moleculei de
ARNt, specifica acelui AA (deoarece anticodonul
ARNt corespunde codonului de pe ARN m care
codifica AA respectiv).
Activarea se face cu consum de energie, enzimele-
aminoacil-ARNt sintetaze - sunt ligazele, care au o
specificitate absoluta. AA este legat la capatul CCA,
la gruparea OH din pozitia 2 sau 3 de pe riboza
restului adenilic. Enzima poate recunoaste daca un
AA gresit s-a fixat pe ARNt, situatie in care il elimina
si il inlocuieste cu AA corespunzator deoarece
prezinta si un locus hidrolitic.
Activarea AA
Esena procesului de activare este fixarea
AA la ARNt propriu acestui AA, n zona
acceptorie la 3' -OH al ribozei.
Activarea AA consum 2 legturi
macroergice
ARNt pe calea difuziunii simple transfer
AA adiionat la el - la ribozomi, unde are
loc asamblarea proteinei din aminoacizi.


Translaia propriu zis
Citirea ARNm se face n direcia 5- 3'
iar proteina se sintetizeaz de la
captul Nterminal la C terminal
se desting trei etape:
Iniierea
Elongarea
terminarea.

Iniierea
Necesar:
1. ARNm (AUG)
2. Ribosomul cu subunitile
disociate
3. ARNt f-met (Met)
4. GTP, Mg
5. IF1, IF2, IF3
Scopul: formarea
complexului de iniiere
Etapele iniierii
Subunitatea mic leag IF3 i previne reasocierea
ribosomilor
La subunitate adiioneaz ARNm (AUG) fixarea
codonului e determinat de un fragment de pe
ARNm compus din 6-8 resturi de A-G i este
complementar cu succesiunea OH al ARNr
La complex adiioneaz IF1, mai apoi IF2 legat de
GTP i formil Met-ARNt
ndat cum are loc fixarea anticodonului fMet-
ARNt cu codonul AUG (ARNm), are loc hidroliza
GTP, eliberarea FI i unirea subunitilor
Formil Met-ARNt e fixat n centrul P
Elongarea
Necesar:
1. ARNm cu urmtorul codon
2. ARNt cu urmtorul AA
3. GTP
4. FE: Tu, Ts, G
Elongarea translaiei include trei etape:
1. Legarea aminoacil ARNt;
2. Transpeptidarea- formarea legturii peptidice,
3. Translocarea (deplasarea ARNm cu un codon).
Adaptarea (legarea)AA
are loc dup principiul
codon- anticodon n
centrul A
Aminoacil-ARNt se fixeaz
cu Tu+GTP adiioneaz
la complexul de iniiere.
AA se fixeaz n centrul A.
Simultan are loc hidroliza
GTP n GDP i P
Tu-GDP+GTP-Ts------Tu-
GTP




Transpeptidarea
este formarea legturii peptidice
ntre doi aminoacizi.
AA din centrul P sub aciunea
peptidiltransferazei trece n centrul
A.
Se formeaz dipeptida
n centrul P rmne ARNt liber
Translocarea
deplasarea ARNm cu un triplet n
direcia 5- 3' .
Dipeptida din centrul A trece n
centrul P sub aciunea factorului G
(translocazei) i GTP
ARNt din P prsete ribosomul

Terminarea
are loc cnd sunt ntlnii codonii UAA,
UGA, UAG i factorii proteici de terminare:
R1, R2, S.
Nici un tRNA nu se poate lega cu codonii
de terminare.
Factorii de terminare:
elibereaz lanul polipeptidic
Elimin ARNt din centrul P
Disocierea ribosomului n subunitile
respective

La formarea unei legturi peptidice
se consum patru legturi
macroergice: 2 n etapa de activare a
AA (ATP) i 2 n elongare: legare i
translocare - GTP.
Prelucrrile posttraducere
Modificarea captului N- i C-terminal; captul N se
acetileaz;
ndeprtarea secvenei semnalizante cu ajutorul unei
peptidaze;
modificarea unor AA:
1. hidroxilarea enzimatic a Pro, Lyz obinerea
hidroxiprolinei, hidroxilizinei .
2. Metilarea (Lyz n muchi)
3. Carboxilarea Glu - -carboxil-glutamatului (protrombin)
4. oxidarea reziduuriilor de Cis - cistinei;
5. iodurarea reziduurilor de Tir ale tireoglobulinei.
ataarea unor gr. funcionale: fosfat, glicozil, metalelor
pentru formarea fosfoproteinelor,glicoproteinelor,
metaloproteinelor .a.
Proteina se autoasambleaz formnd conformaia nativ
structura tridimensional
Inhibitori ai sintezei proteinei
Streptomicina - interfer cu legarea formil-Met-
ARNt la locul de iniiere.
Cloramfenicolul -inhib peptidil-transferaza
Tetraciclin -inhib legarea aminoacil-ARNt la
ribozomi.
Eritromicin -inhib translocarea prin legare la
subunitatea 50S.
Puromicin - blocheaz elongarea substituindu-se
unui aminoacil ARNt n situsul A (este analog
structural al extremitii 3- OH alAA ARNt
formeaz peptidilpuromicin, nu se mai
adizioneaz nici un AA).
Neomicina, Kanamicin - erori n reproducerea
codului genetic
Toxina difteric - inhib translocaza
Inhibitorii sintezei proteinei
Mitomicina replicare,mpiedica separarea catenelor de
ADN
Acid nalidixic replicare - inhiba ADN giraza
Rifampicina transcriere - inhiba ARN polimeraza
Actinomicina transcriere - se fixeaza pe ADN
Streptomicina translaie -inhiba legarea ARNt initiator la
subunitatea 30S
Cloramfenicol translatie -inhiba peptidil transferaza
Tetraciclina translatie- inhiba legarea ARNt la ribozomi
Eritromicina,Azitromicina translatie- blocheaza subunitatea
50S
Puromicina translatie - blocheaza elongarea inhibnd
competitiv ARNt
Kanamicina translatie -inhiba citirea codului genetic
Reglarea sintezei proteinelor
Sinteza proteinelor nu e constant ea trebuie
s se adapteze cerinelor vitale
Celulel dispun de 3 tipuri de enzime :
1. Constitutive - se sintetizeaz n celul cu o vitez
constant.
2. Inductible - sunt E a cror concentraie depinde
de prezena sau absena din mediu a unui
compus denumit inductor. Sunt implicate n cile
catabolice,
3. Represible - sunt E a cror concentraie depinde
de prezena sau absena din mediu a unui
compus denumit corepresor. Sunt implicate n
cile anabolice.
n mod normal cantitatea de E inductibile n
celule este foarte mic,dar ea poate crete atunci
cnd apare necesitatea utilizrii substratului E
respective ( S care se comport ca inductor).
Teoria lac-operonului
Schema reglrii biosintezei proteinei la procariote a fost descris n
1961 de ctre Jacob i Monod - poart denumirea de teoria lac-
operonului .
Modelul e bazat pe studiul reglrii mtabolismului lactozei n Escheria
coli.
Exprimarea GS (conin informaia cu privire la biosinteza E impicate n
utilizarea lactozei:-galactozidaza, permeaza i transacetilaza 1,2,3)
e controlat de un fragment de ADN denumit gen reglatoare (GR) -
codific represorul (R). R se leag de un fragment de ADN denumit
operator (O).
Legarea R la O blocheaz accesul ARN polimerazei la promotor avnd
ca rezultat suprimarea transcrierii GS.
Reglarea sintezei proteinei prin inducie
n prezena lactozei:
Inductorul (n acest caz lactoza) se leag specific la R, ca
urmare are loc desprinderea acestuia de la operator. n
aceast situaie, ARN p se leag la promotor, iniiind
transcrierea GS, adc a ARNm care codific E implicate n
catabolismul lactozei.
Ce se ntmpl dac bacteria dispune
simultan de glucoz i lactoz?
Bacteria nu consum energie pentru
sinteza lac-operonului, atta timp ct
dispune de glucoz.
Bacteria crete pe seama glucozei - i
numai atunci cnd c% acesteea devine
minim ncepe s utilizeze lactoza.
Metabolizarea simultan a glucozei i
lactozei sunt excluse.
Cum se comut activitatea bacteriei pe
utilizarea lactozei cnd c% glucozei
scade?
n lipsa glucozei se mrete c% AMPc ce reprezint semnalul
foamei la bacterii.
Ca urmare, AMPc se leag de o protein receptoare specific
(proteina activatoare a genei catabolice CAP) - formeaz
complex (CAP- AMPc), apt s se lege de promotor (p-locus)
Acest proces favorizeaz ptrunderea ARNp n locusul de
reglare. Dac lactoza este prezent n mediu, operatorul este
liber i ARNp efectueaz transcrierea genelor lac.
CAP dispune de 2 centre: pentru AMPc i pentru ADN
Reglarea lac-operonului ntr-un mediu
ce conine glucoz
Cu ct c% glucozei e mai mare, c%AMPc
e mai mic. Lipsete i complexul CAP-
AMPc. n final ARNp nu se leag de P i GS
nu sunt transcrise, indiferent dac exist
sau nu lactoz, indiferent de faptul dac
operatorul este sau nu ocupat de R.
Ilustrarea mecanismului de reglare a
sintezei proteinei prin represie
Teoria operonului explic i represia
prin produs final al biosintezei E
Ex: sinteza His: la c% mari de His
(corepresor) se leag de R,
modificndu-i conformaia
activndu-l n rezultat favorizeaz
legarea R la O.
His produs final, CoR- sisteaz
transcrierea genelor ce codific E
implicate n propria sa sintez
Ilustrarea mecanismului de reglare
a sintezei proteinei prin represie
REZUMM:
GR controleaz exprimarea anumitor GS prin
intermediul unei proteine R
Ra suprim sinteza de ARNm, deci de proteine;
R inactivat permite transcrierea GS i sinteza
proteinei
E inductibile Ra nu are loc transcrierea. Cnd
n mediul apare I R se inactiveaz are loc
sinteza ARNm- proteinei
E represibile R este inactiv are loc transcripia
i translaia. Cnd n mediu se acumuleaz
produsul final al cii anabolice (CoR)- R se
activeaz, formarea complexului R-CoR i
sistarea transcripiei i translaiei.
Reglarea sintezei la eucariote
Att la nivelul transcripiei ct i la nivelul
translaiei
Reglarea hormonal (cortizol- sinteza E
gluconeogenezei; estrogenii, androgenii, vitamina
D sintez de proteine specifice)
Reglarea exspresiei genetice prin moleculele
proteice legate de ADN (histonele) sinteza ARN
pe ADN e inhibat prin adaosul de histone
Reglarea proteinei la nivelul translaiei e
posibil prin aciunea factorilor proteici, care
contribuie iniierea, elongarea, terminarea.