Controlul asupra calitii

metodelor analitice
Controlul asupra calitii metodelor
analitice
Introducere
Controlul erorilor n cadrul unei analize
Acuratee i precizie
Validarea procedurilor analitice
Procedura analitic
Precizia
Repetabilitatea
Precizia intermediar
Reproductibilitatea
Acurateea
Procedura standard de operare (SOP) n cadrul analizei
asupra tabletelor de paracetamol

Controlul asupra calitii metodelor
analitice
Prezentarea erorilor ntmpltoare
Prezentarea rezultatelor
Ali termeni utilizai n controlul procedurilor analitice
Sistem de adecvare
Blanc analitic
Calibrarea
Limita de detecie
Limita de cuantificare
Liniaritate
Domeniu
Robustee


Controlul asupra calitii metodelor
analitice
Selectivitate
Sensibilitate
Cntrirea prin diferen
Calcule de baz n analizele farmaceutice
Procentul volum/volum (% v/v)
Procentul mas/volum(% m/v)
Diluarea
Prepararea soluiilor standard
Procentul mas/mas (% m/m)
Calcule pri pe milion (ppm)
Modul de lucru cu greuti i molaritate
Probleme adiionale
Controlul asupra calitii metodelor
analitice
Box 1.1 ntrebri cu privire la metodele analitice farmaceutice
Este corect formulat identitatea excipienilor n produsul farmaceutic?
Care este procentul din excipientul chimic stabilit pentru compoziia unui medicament?
Aceast compoziie conine numai ingrediente active sau unele impuriti cu rol de
nlocuitor?
Care este stabilitatea componentului chimic din cadrul medicamentului?
Dup ct timp medicamentul dup administrare, poate fi absorbit de corp?
Identitatea i puritatea excipienilor utilizai n preparare sunt bine specificate?
Care sunt concentraiile impuritilor specificate n cadrul compoziiei pure?
Care este concentraia medicamentului n cadrul unei monstre de esut sau fluid biologic?
Care sunt valorile pK, partiia coeficienilor, solubilitile i stabilitatea substanei
medicamentoase n cadrul procesului de preparare?
Introducere
Procedurile farmaceutice pot fi utilizate n gsirea
rspunsurilor pentru ntrebrile de mai sus. Calitatea unui
produs poate devia de la standardul stabilit ns demararea
unei analize asupra produsului trebuie totui s respecte
standardul stabilit. Controlul asupra calitii este esenial n
cadrul tuturor proceselor moderne industriale i de asemenea
industria farmaceutic nu este o excepie. Testarea unui
produs farmaceutic implic analize chimice, fizice i cteodat
microbiologice. S-a estimat c 10 miliarde de lire sterline se
cheltuie n fiecare an n analize n Marea Britanie i astfel de
procese analitice pot fi gsite n industrii diverse, ca: industria
alimentar, de buturi alcoolice, cosmetic, de detergeni,
metale, vopsele, ap, ngrminte chimice, produse
biotehnologice i farmaceutice.
Introducere
Investindu-se att de muli bani n astfel de analize,
trebuie totodat pus o mare importan n ceea ce
privete desfurarea unor analize precise i exacte. De
aceea este de la sine neles s se nceap scrierea
unei cri cu subiectul referitor la analiza farmaceutic.
Termenii utilizai n definirea unui model al calitii
analitice specifici i altor modele din alte domenii, ar
trebui descrii de autor ntr-o manier precis i
inteligibil pentru ca diferii cititori s le poat asimila
sau chiar reproduce. n urmtoarele seciuni este
prezentat o introducere n ceea ce privete controlul
asupra calitii analitice. Mai multe referiri se gsesc la
finalul capitolului.
Box 1.2
Cerinele unui control al calitii metodelor analitice au fost enunate n cadrul Conferinei
Internaionale asupra Armonizrii Cerinelor Tehnice n privina nregistrrii Medicamentelor
pentru Uzul Uman. S-a inut prima dat n Bruxelles n 1990, adunnd reprezentani din cadrul
unor agenii i asociaii industriale din Europa, Japonia i S.U.A. Scopul organizrii acestei
conferine a fost de a standardiza regulile medicale din lumea ntreag. Standardizarea n ceea ce
privete validarea procedurilor analitice, este unul din domeniile despre care s-a discutat n cadrul
conferinei. S-au enunat anumite proceduri analitice, cum ar fi:
testele de identificare;
teste cantitative pentru impuriti;
teste limite pentru controlul impuritilor;
teste cantitative cu referire la jumtatea activ din monstrele unor substane farmaceutice sau
din produsul final.

Controlul erorilor n procesul de
analiz
O analiz cantitativ nu este o soluie ntocmai
bun, ns poate fi numai dac se estimeaz
succesul evident al unei astfel de analize.
Acceptarea pur i simpl a rezultatului analizei
poate duce la respingerea sau acceptarea
produsului pe baza percepiei c rezultatul a
fost unul negativ sau nu. Din acest motiv este
recomandabil desfurarea n mod repetat a
mai multor analize asupra probei studiate
pentru a ndeprta orice temere.
Controlul erorilor n procesul de
analiz
Exist trei erori care pot aprea n cadrul procesului de analiz:
erorile mai grave- sunt uor de recunoscut pentru c presupun o scdere a
procesului analitic, cum ar fi: probe vrsate, prepararea unor diluri
greite, utilizarea n mod greit a instrumentelor. Dac apar astfel de erori,
procesul este reluat de la inceput.
greelile fcute la ntmplare i cele sistemice pot fi observate n
exemplele urmtoare:o tablet de paracetamol ar trebui s conin o
concentraie de 500 mg i se presupune c se respect aceast
concentraie 100% pentru fiecare tablet. 4 studeni au realizat o analiz
spectrofotometric pe baza unei probe preluat din tablete i au obinut
urmtoarele procente n urma analizei repetate asupra concentraie de
paracetamol din tablete:
Studentul 1: 99.5%, 99.9%, 100.2%, 99.4%, 100.5%
Studentul 2: 95.6%, 96.1%, 95.2%, 95.1%, 96.1%
Studentul 3: 93.5%, 98.3%, 92.5%, 102.5%, 97.6%
Studentul 4: 94.4%, 100.2%, 104.5%, 97.4%, 102.1%
Controlul erorilor n procesul de
analiz
Aceste rezultate pot fi calculate prin intermediul formulei:
x- media aritmetic
xi- valoarea individual
n- numrul analizelor
Rezultatele pot fi vzute n figura 1.1 .
Studentul 1 a obinut rezultate apropiate de 100% n toate cele cinci
analize. n acest caz msurtorile au fost realizate ntr-un mod precis i n
mod evident paii parcuri au fost controlai ndeaproape.
Studentul 2 a obinut un set de rezultate destul de apropiate de coninutul
de substan stabilit, ns nu sunt destul de precise. Astfel de rezultate
indic faptul c acesta nu a fcut o greeal la ntmplare, care ar fi avut
un impact puternic asupra rezultatului final, ci a fcut o greeal sistemic.
Aceast greeal se refer fie la o msurare imprecis a volumului de
substan sau la o utilizare incorect a spectrofotometrului n citirea
rezultatelor. De obicei un astfel de pas greit duce la eroare sistemic,
afectnd i rezultatul final.
Controlul erorilor n procesul de
analiz
Controlul erorilor n procesul de
analiz
Studentul 3 a obinut un set de rezultate imprecise i mai mai puin
apropiate de coninutul de substan stabilit. n analiza sa a fcut o serie
de greeli la ntmplare, cum ar fi:analiza a fost destul de puin controlat
spre deosebire de analiza mult mai precis a studentului 2, sau acest
student a folosit un volum mai mic sau mai mare de substan n pofida
coninutului anterior stabilit.
Studentul 4 a obinut un set de rezultate puin mai mari de 100%, ns
putem spune c se apropie de coninutul de substan stabilit. Singura
diferen ntre acesta i studentul 3 este c rezultatele studentului 4 sunt
mai apropiate de 100% dect cele ale studentului3.
n concluzie, ncercrile studentului 1i 2 au fost cele mai reuite, ns pot
fi mbuntite printr-o munc mai asidu.
n practic este greu s spui care dintre cei doi studeni s-au apropiat de
rezultatul corect, ns pentru a afla acest lucru ar trebui ca ali analiti s
obin acelai set de rezultate. Factorii care determin imprecizia
rezultatelor n urma unei analize sunt subliniai n cutia 1.3.
Box 1.3
cntrire incorect a substanei;
extracie ineficient a substanei supuse analizei din tablet;
utilizarea incorect a pipetelor, a eprubetelor;
utilizarea improprie a instrumentelor calibrate;
alegerea unui spaiu impropriu de realizare a analizei, ceea ce determin
degradarea probei de substan supus analizei;
erori n ceea ce privete mutarea probei de substan dintr-un excipient n
altul.
Test 1.1
Sugerai cum ar putea urmtoarele aciuni s duc la apariia unor greeli ntr-o procedur
analitic:
(I)Analiza unei substane zaharoase utiliznd o pipet pentru a msura o parte din substan.
Rspunsul. Vscozitatea duce la o scurgere incomplet a substanei din pipet.
(II)Cntrirea a 2 mg de substan pe o balan care cntrete minimum 0,1 mg.
Rspunsul: n orice proces de cntrire exist o eroare de 0,05 mg, care n relaie cu 2 mg
rezult 2,5 %.
(III)Utilizarea unui standard analitic, n ceea ce privete msurarea gradului de umezeal din
atmosfer.
Rspunsul: gradul de umezeal din atmosfer este incert(nu se poate msura cu exactitate)
(IV)Pudrarea incomplet a nveliuluitabletelor nainte de extragere.
Rspunsul: recuperare incomplet a substanei ce va fi supus analizei.
(V) Extragerea unei alifii, amestecat cu un solvent n care este puin solubil.
Rspunsul: Recuperare incomplet a substanei ce va fi supus analizei.
(VI)Utilizarea unui burete de pe care nu au fost ndeprtate n totalitate urmele de grsime.
Rspunsul: Imposibilitatea de a vedea rezultatele prin intermediul lentilei concav-convexe,
datorit utilizrii acelui burete.
Precizie i acuratee
Cerina cea mai important n cadrul desfurrii unei analize se
refer la precizia i acurateea cu care trebuie realizat. Se crede c
o serie de msurtori notate cu y asupra aceleai probe vor fi
distribuite dup un anumit mod de msurare, notat cu n cadrul
unui model gaussian reprezentat n figura 1.2. Distana
reprezentat n figura 1.2 are o valoare de 0,5 de la baza distribuiei,
ns reprezentare curbei tinde spre 0 i nu ntlnete axa x pn la
infinit, unde ar putea exista o infinitate de probabiliti de a gsi o
valoare pentru x. Aproximativ 68% dintr-o serie de msurtori s-ar
putea situa nu departe de distana , iar 95% din msurtori s-ar
putea situa cu 2 pe scala de msurare, notat cu . Scopul unei
analize este de a rezulta un procent ct mai mic al pe scala de
msurare pe ct posibil.
Precizie i acuratee
Valoarea lui poate fi estimat utiliznd ecuaia 2:



s= deviaia standard
n= numrul de probe
xi= valorile obinute pentru fiecare msurare
x= rezultatele msurtorilor
Cteodat n n comparaie cu n-1 este utilizat n ecuaie, dar numai pentru
probe mai mici, pentru c poate afecta n mod negativ valoarea lui .
Pentru un numr mic de valori este simplu s calculezi valoarea lui s,
utiliznd un calculator i ecuaia de mai sus. Majoritatea calculatoarelor au
o funcie care permite calcularea lui s n mod direct i de obicei estimarea
valorii lui utiliznd ecuaia de mai sus este reprezentat ca n-1.
Precizie i acuratee
De exemplu se va aplica formula de mai sus asupra valorilor
obinute de studentul 1 unde x are valoarea de 99,9%:

Din figura devierii standard (SD), putem vedea c 68% din
rezultatele analizei se vor afla nu departe de nivelul de 99,9
0,46 % () sau de 99,44-100,36%. Dac am reexamina
figura reprezentativ pentru studentul 1, se poate vedea c
60% din rezultate se situeaz nu departe de ax, cu 2
rezultate n afara acesteia i cu unul aproape de ax. Nivelul
bazat pe definete o limit de ncredere de 68%, pentru
95% ncredere, 2 ar trebui utilizat.
95% din rezultatele studentului 1 se aeaz nu departe de
99,9% 0,92% sau 98,98-100,82%. Se observ c la acest
nivel sunt incluse toate rezultatele obinute de primul
student. Precizia unei analize este adesea exprimat ca o
deviere standard relativ RSD.

Tabelul 1.1 Rezultatele obinute de 4 analiti n urma analizei tabletelor de
paracetamol.

Student
Cantitatea
substanei
analizate din %
din coninutul
stabilit
S-devierea
standard din %
din coninutul
stabilit
RSD(68%
ncredere)
1 99,9 0,5 0,5%
2 95,6 0,5 0.5%
3 96,9 4,0 4,4%
4 99,7 4,0 4,0%
Rezultatele obinute din analiza tabletelor de paracetamol sunt
prezentate n Tabelul 1.1.

Test 1.2
4 analiti au obinut urmtoarele rezultate n urma unei analize spectrofotometrice asupra unei injecii
ce conine un anestezic local bupivacain. Proba conine o cantitate de substan de 0,25%.
Analistul 1 : 0,245% w/v, 0,234% w/v, 0,263% w/v, 0,261% w/v, 0,233% w/v.
Analistul 2 : 0,236% w/v, 0,268% w/v, 0,247% w/v, 0,275% w/v, 0,295% w/v.
Analistul 3: 0,248% w/v, 0,247% w/v, 0,248% w/v, 0,249% w/v, 0,253% w/v.
Analistul 4 : 0,230% w/v, 0,233% w/v, 0,227% w/v, 0,230% w/v, 0,229% w/v.

Calculai RSD pentru fiecare set de rezultate la un nivel de ncredere de 95%.
Rspunsurile:
Analistul 1: 98,9% 5,8%: corect dar imprecis; iar la nivelul de ncredere de 95%,
RSD= 11,6%.
Analistul 2: 104,9 7,7%: incorect i imprecis; iar la nivelul de ncredere de 95%,
RSD=15,4%.
Analistul 3 : 99,6% 0,9%: corect i precis; iar la nivelul de ncredere e 95%,
RSD=1,8%.
Analistul 4 : 91,9% 0,9%: incorect i precis; iar la nivelul de ncredre de 95%,
RSD=1,8%.
Validarea procedurilor analitice.
n cadrul conferinei internaionale s-au adoptat o serie de termeni
care s defineasc n ce mod calitatea unei analize este controlat.

Procedura analitic.
Ar trebui s descrie n detaliu paii necesari pentru a realiza fiecare
test analitic, i anume:
calitatea i sursa referinei standard din care s-a prelevat compoziia
supus analizei;
procedurile utilizate pentru prepararea soluiilor din sursa referinei
standard;
calitatea solvenilor utilizai i metoda de preparare;
pregtirea echipamentului ce va fi utilizat n cadrul analizei;
metodologia utilizat pentru msurarea i pregtirea probei nainte
de analiz.

Precizia.
Aceasta este definit n cadrul aceleai conferine, astfel: precizia
unei proceduri analitice exprim obinerea acelorai serii de
rezultate n urma repetrii analizei asupra probei, prin respectarea
condiiilor prescrise...Precizia se exprim, fie ca o variaie, deviere
standard sau ca un coeficient de variaie al msurtorilor. Nivelul
de precizie obinut n urma unei analize ar trebuie s fie 1,0%.
Precizia depinde i de natura probei analizate.
Nivelul RSD n cadrul unei analize asupra urmelor de impuriti din
anumite medicamente din fluidele biologice, poate fi considerat
mai mare de 1,0%; din cauza unor pierderi importante de
substan n timpul procesului de prelevare. Precizia unei analize
asupra unei probe se obine prin repetarea analizei de minimum 5
ori pentru cele 5 uniti de prob, rezultnd n total 25 de
mrurtori.

Precizia.
Apare totui o problem n ceea ce privete stabilirea
cror pai din cadrul procesului ar trebui examinai.
Pentru nceput o analiz ar trebui s fie descris n
detaliu, dar dup aceea n redeterminarea preciziei(n
scopul stabilirii repetabilitii care ofer un grad mai
mare de precizie) anumite elemente ar fi inutile. De
exemplu: dup stabilirea unor reguli de depozitare s-ar
observa c n urma prelevrii de monstre din substana
depozitat, rezultatele nu ar varia att de mult. Potrivit
conferinei internaionale, precizia ar trebui s conin
3 elemente: repetabilitate, o precizie intermediar i
capacitatea de a reproduce rezultatele anterioare.
Analiza medicamentului
Repetabilitatea
Repetabilitatea se refer la precizia obinut n aceleai condiii de
lucru ntr-un interval scurt de timp. Repetabilitatea poate fi definit
ca fiind precizia analizei. Este posibil ca anliza s fie repetat de
aceiai persoan folosind un singur intrument.

Precizia intermediar
Precizia intermediar reprezint variaiile preciziei n laborator cnd
analiza este efectuat de analiti diferii, n zile diferite i cu
instrumente diferite. Evident se dorete reducerea acestor variaii i
n consecin se standardizeaz intrumentele, metodele de analiz
i intruirea analitilor se va face la acelai standard.

Analiza medicamentului
Reproductibilitatea
Reproductibilitatea exprim concordana
dintre valorile preciziei obinute de
laboratoare diferite. Un astfel de proces va fi
efectuat cnd metoda este trimis dintr-o
parte n alta a companiei. Datele obinute nu
fac parte din dosarul de marketing propus
pentru obinerea licenei.

Analiza medicamentului
Acurateea
Aa cum se meniona mai sus, metodele pot fi precise fr a fi
exacte. Determinarea acurateei prin analiza unei substane noi este
relativ simpl. Cea mai uoar metod este compararea substanei
de analizat cu un standard de referin n aceleai condiii de lucru.
Substana de referin este bine cunoscut i a fost supus unei
analize amnunite. Metodele de determinare a acurateei unei
metode, unui medicament, nu sunt att de uoare. Procedura
analitic poate fi aplicat pentru: formularea unui medicament
preparat la scar mic astfel nct cantitatea de medicament este
bine controlat; formulare placebo sau o formulare a
medicamentului la care se adaug o anumit cantitate de substan.
Acurateea metodei poate fi deasemenea evaluat prin compararea
metodei cu o metod de referin stabilit anterior cum sunt
metodele farmacopeei.
Analiza medicamentului
Exactitatea este procentul recuperat din
cantitatea cunoscut de analit adugat probei
sau diferena dintre cantitatea cunoscut i
cea determinat prin analiz. n general, cel
puin 5 determinari, pn la 80, 100 i 120%
din ce se pretinde pe etichet, ar trebui
efectuate pentru determinarea exactitii.
Procedeul standard de operare (SOP) pentru analiza
comprimatelor de paracetamol

Termenii definii mai sus, sunt explicai
folosind exemplul analizei simple menionat
anterior. Analiza din tabelul 1.4 este aezat
pe pagin ca i n cazul SOP. Aceast parte a
procedurilor de operare descrie analiza dar
vor fi i alte pri n cadrul procedurii care vor
trata problemele de siguran, preparare i
conservare a soluiilor folosite la extracie i
diluii, sticlria necesar i intruciunile
intrumentarului folosit.

8. Procedura analizei.
8.1 Folosirea unei balane calibrate.
8.2 Cntrirea a 20 comprimate.
8.3 Pulverizarea celor 20 de comprimate de paracetamol i cntrirea precis prin
diferen, o cantitate de pulbere de comprimat corespunde la 125+- 10 mg de paracetamol.
8.4 Agitai pulberea cu 150 ml acid acetic (0,05M) timp de 10 minute ntr-un balon cotat
de 500 ml i aducei volumul la 500 ml cu acid acetic (0,05 M).
8.5 Filtrai circa 100 ml de soluie ntr-un pahar Erlenmayer i apoi se mparte n 5 pri
egale de 5ml de filtrat n baloane cotate de 100 ml i aducei volumul la 100 ml cu acid acetic
(0,05M).
8.9 Efectuai 2 citiri pentru fiecare diluie folosind spectofotometrul UV dup procedura
specificat n seciunea 9.
Figura 1.4 Extractul din procedura standard de operare pentru
analiza paracetamolului

Analiza descris n figura 1.4 evalueaz unor operaii din analiz.
Dac un singur analist ar trebui s evalueze repetabilitatea analizei,
analizele vor fi repetate de 5 ori .
Dac ar trebui evaluat repetabilitatea dintre zile, analiza va fi
efectuat n 2 zile diferite. Dac ar trebui evaluat repetabilitatea
analizelor din acelai laborator se vor efectua 2 sau mai multe
analize. n efectuarea analizei conform procedurii standard de
operare pot fi exclui anumii pai. De exemplu, cntrirea este
adesea cel mai precis pas din proces i n consecin repetarea
acesteia nu este necesar n garantarea preciziei; n schimb precizia
extraciei este mai nesigur.
Fiecare seciune din analiz are alte proceduri standard de operare
asociate, de exemplu, folosirea corect a balanelor din tabelul 1.5.

Erori ntmpltoare
Erorile sistematice pot fi de obicei eliminate
dar adevratele erori ntmpltoare se
datoreaz modului de lucru i nu sunt complet
controlate. Una din cele mai obinuite tipuri
de erori apare la productorii de intrumentar
de sticl privind rezistena. Tabelul 1.2
conine valorile specificate pentru diferite
tipuri de sticl A i B.


Tabel 1.2 Rezistene intrumentarului de sticl
conform productorului

Tipuri de stic

Grad A Grad B
pipeta 1ml 0,7% 1,5%
pipeta 5ml 0,3% 0,6%
balon cotat de 100 ml 0,08% 0,15%
balon cotat de 500 ml 0,05% 0,1%
biureta de 25 ml 0,2% 0,4%
Figura 1.5 Procedura pentru utilizarea unei balane calibrate
SOP/001A/01
Aceast balan are o precizie mare. Trebuie aezat n locuri ferite
de vibraii i interferene produse de curent. Se calibreaz singur
dar pentru o dubl verificare se calibreaz cu greuti standard.
Orice deviaii ale valorilor fa de cele ateptate indic necesitatea
verificrii metrologice. Verificarea calibrrii ar trebui s se efectueze
1 pe sptmn conform intruciunilor SOP/001C/01.

Atenie: registrul (formularul SOP/001AR/01) trebuie completat.
Orice pierderi de substan pe balan trebuie curat imediat i
trecut n jurnal. Aceast balan se folosete doar pentru
msurtori analitice.

Mod de lucru:
Pentru cntrirea unor cantiti mai mici de 50mg se folosete penseta pentru manevrarea
greutilor.
Ua balanei trebuie s fie nchis. Deschidei balana i ateptai efectuarea procedurii de
calibrare intern. Cnd este pregtit, ecranul digital va indica 0,0000. Ateptai 30s pentru
stabilizarea balanei.
Introducei vasul de cntrire pe balan. nchidei ua. Ateptai 30s pentru a v asigura c
citirea este corect.
Dac este folosit tara pentru cntrire, apsai butonul tarei i ateptai pn cnd balana
va citii 0,0000. Ateptai 30 s pentru a v asigura c citirea e stabilizat. Dac oscileaz, n
condiii normale nu ar trebui, apsai din nou butonul tarei i ateptai o nou citire.
Luai greutatea de pe balan i punei proba din nou pe balan. nchidei ua i notai
valoarea.
Luai proba i ajustai valoarea la cea cerut. Adugai proba pe balan. nchidei ua i
notai valoarea.
Repetai pasul 5 pn cnd este atins greutatea dorit. Cnd greutatea dorit a fost atins
ateptai 30s pentru stabilizarea balanei. Trimitei valoarea imprimantei.
Dac citirea nu se stabilizeaz aceasta poate indica pierderea apei i c proba trebuie
cntrit ntr-un recipient nchis.
O estimare a erorilor ntmpltoare este obinut din rdcina ptrat a sumei
ptratelor RDS, abaterii standard relative, atribuite fiecrui component sau
operaiei din analiz. Dac analiza paracetamolului descris n figura 1.4 este
corect, atunci, considernd c intrumentele de sticl au fost folosite corect,
erorile implicate n diluie pot fi estimate din tolerana dat pipetelor i baloanelor
cotate. Institutul Britanic de Standardizare (BS) are urmtoarele valori pentru
intrumentarul de sticl folosit n analiz:
balon cotat de 500ml 500ml 0,05%
balon cotat 100ml 100ml 0,08%
pipet 5ml 5ml 0,3%
Deviaia standard pentru erorile intrumentarului de sticl =


(0,05 + 0,08 + 0,3) = 0,0989 = 0,31 %
Se observ c erorile datorit intrumentelor de sticl difer puin fa de erorile
mari. Desigur aceste erori pot fi eliminate prin calibrarea acestora nainte de
utilizare, dar, n general, analitii accept valorile specificate de productor. Alte
erori cum sunt eficiena extraciei sunt mai greu de controlat.

Test 1.3
Estimai valoarea erorii ntmptoare din urmtoarea analiz respctnd
diluiile efectuate i calculai eroarea ca deviaie standard SD a procentului
injeciei m/v presupunnd c este exact 2% m/v.
O injecie 2% m/v a fost diluat folosind pipet gradat tipA de 5ml i
baloane cotate de 100ml tipA dup cum urmeaz:
Diluia 1:5 la 100 ml
Diluie 2:5 la100 ml
Intervalul de ncredere a citirii spectrofotometrice a fost de 0,2%.
Rspuns: 0,48% i 0,01%m/v.
Rezultate
Pentru calcularea rspunsului din datele obinute din analiz este
important s nu se calculeze cu o precizie superioar celei posibile n
analiz. Dup cum am menionat anterior, cnd se consider exactitatea
intrumentelor de sticl folosite se nelege cea de tip A, este evident c
exist o mic incertitudine 1%. Este posibil mbuntirea gradului de
precizie prin calibrarea instrumentelor; totui, orice mbuntire a
preciziei are implicaii legate de cost i timp, de aceea n majoritatea
analizelor i pentru efectuarea calculelor, se folosesc 4 zecimale; la calcule
cu 5 zecimale se rotunjete la 4 zecimale. ntruct, n analizele
farmaceutice, procentul de substan declarat ntr-un medicament
formulat poate fi ntre 90 i 99,9%, dac prima cifr semnificativ este 9,
atunci la sfritul calculelor o estimare mai realist a preciziei va avea 3
zecimale. Deviaia standard SD sau deviaia standard relativ RDS i
rspunsul ar trebui s arate numrul de cifre semnificative dat, deoarece
de obicei este nesiguran n cifre sub 1% din rspunsuri, RDS nu trebuie
menionat dac este sub 0,1%. Lund acestea n considerare modul
corect sau incorect de raportare a rezultatelor sunt date n tabelul1.3.

Tabelul 1.3 Cifre semnificative n raportarea
rezultatelor analitice

Rspuns incorect Rds Rspuns corect Rds
% coninut
declarat= 99,2
0,22
0,22 % coninut
declarat=99,20,2
0,2
% coninut declarat
= 101,15 0,35
0,35 % coninut
declarat=101,20,4
0,4
0,2534 0,00443 %
m/v
1,75 101,2 0,4 m/v 1,7
1,0051 0,0063 %
m/m
0,63 1,2534 0,0044
m/m
0,6
1,784 0,1242
g/ml
6,962 1,784 0,124 g/ml 7,0
Ali termeni folosii n controlul
procedurilor analitice
Sistem de adecvare
Sistemul de adecvare nu trebuie confundat cu metodele de validare. Testele sistem
de adecvare sunt cel mai adesea aplicate instrumenteleor analitice. Testele sunt
concepute pentru evaluarea componentelor sistemului analitic pentru a arta dac
performanele sistemului coincid cu standardele cerute de metod. Metoda de
validare este executat o data la sfritul dezvoltrii metodei, avnd n vedere c
testele sistemului de adecvare sunt realizate periodic pentru a stabili dac sistemul
funcioneaz sau nu cum trebuie i dac e capabil s fac analiza. Sistemul de
adecvare este raportat la performana echipamentului. n selectarea
echipamentului, pot fi aplicate 4 reguli:
Aptitudinile proiectului (potrivit scopului). Ce trebuie s fac echipamentul?
Aptitudinile instalaiei. Echipamentul funcioneaz conform preteniilor
productorului?
Aptitudinile operaionale. Echipamentul funcioneaz pentru aplicaia cerut de
analist?
Aptitudinile performanei. Intrumentul funcioneaz la standardele cerute?

De obicei se verific punctul 4, i, pentru anumite proceduri, un analist va folosi
cteva teste uzuale, pentru a monitoriza performanele instrumentului, ex. Testul
de rezoluie n cromatografie.

Blanc analitic
Const n totalitatea reactivilor sau solvenilor folosii ntr-o analiz fr
prezena analitului. Un blanc analitic adevrat ar trebui s reflecte toate
operaiile la care este supus analitul dintr-o prob adevrat. Este folosit,
de exemplu, la verificarea dac reactivii i solvenii nu contribuie la
volumul de titrant necesar pentru o titrare, inclusiv la calibrarea
spectofotometrelor sau n verificarea interferenelor cromatografice.

Calibrarea
Calibrarea unei metode implic compararea valorilor unui
parametru msurat de sistem n condiii strict definite cu valori standard
prestabilite. Exemplele includ: scara de calibrare a lungimii de und i
absorbanei a unui spectometru UV/ VIS (capitol 4), scara de calibrare a
lungimii de und a unui spectofotometru IR (capitol 5) i realizarea curbei
de calibrare cromatografice.

Limit de detecie
Acesta este cea mai mic cantitate de analit care poate fi detectat de o anumit
metod. Este definit dup cum urmeaz:
x-xb = 3sb
Unde x este semnalul probei, Xb este semnalul blancului i Sb este deviaia standard a
citirii blancului. Cu alte cuvinte, criteriile pentru o citire care arat prezena analitului
n prob este diferena dintre citirea fcut i citirea pentru blanc i este egal cu de
trei ori valoarea deviaiei standard a citirii blancului. Deviaia standard a semnalului
probei poate fi ignorat de vreme ce proba i blancul ar trebui s fie pregtite n
acelai mod astfel nct cele dou s aib o deviaie identic la citire. O adevrat
limit de detecie ar trebui s ilustreze toate procesele la care analitul din analiza
adevrat a fost supus i s nu fie doar o diluie a unui etalon de puritate pentru analit
pn nu mai poate fi detectat.
n cazul separrilor cromatografice este de obicei o citire de fond constant numit
linie de fond. n acest caz, o mai bun definire a limitei de detecie este c analitul ar
trebui s dea un semnal de 3 ori mai puternic dect linia de baz a deviaiei standard
cromatografice ntr-un interval de timp de 5minute nainte i dup pic.
Limit de cuantificare
Limita de cuantificare este definit ca cea mai
mic cantitate de analit care poate fi
cuantificat.
Limita de cuantificare este definit ca: X-Xb=
10Sb. n acest caz analitul ar trebui s dea un
pic de 10 ori mai mare dect deviaia standard
a liniei de baz cromatografice n timpul
analizei.
Test
n care din urmtoarele cazuri a fost
atins limita de detecie?
Rspuns:2.
Semnalul probei SD
probei
Semnal
ul blanc
SD
blanc
1.Abs 0,0063 0,0003 0,0045 0,0003
2.Abs 0,0075 0,0017 0,0046 0,0018
3.0,335 ng/ml 0,045
ng/ml
0,045
ng/ml
0,037
ng/ml
Liniaritatea

Majoritatea metodelor analitice sunt bazate pe procese
unde metoda produce un rspuns care este liniar i
care crete sau scade liniar cu concentraia analitului.
Ecuaia care definete acest dreapt:
y = a + bx
unde a este interceptul dreptei cu axa y i b este panta
dreptei. Lund un ex. simplu, o curb de calibrare
format din 3 citiri ale absorbanei n funcie de
concentraie (Tab.1.4).
Tabelul 1.4 Date folosite pentru curba de
calibrare a determinrii spectrofotometrice a
procainei

Concentraia procainei
mg/100ml
Absorbana
0,8 0,604
1,0 0,763
1,2 0,931
Cea mai corect dreapt care poate fi determinat cu ajutorul a i b
este definit de ecuaia:
b = i (xi-xm)(yi-ym)/ i(xi-xm)
unde xi este valoarea individual pentru x, xm este valoarea media
a lui xi, yi este valoarea individual pentru y i ym este valoarea
medie a lui yi.
Din datele din tabelul 1.3:
xm = 1,0
ym = 0,766
b = 0,818
a = -0,052
Deci ecuaia dreptei este:
y = 0,766-0,8181,0 = -0,052
Msurtoarea statistic a corectitudinii dreptei printre puncte este
coeficientul de corelaie r. Un coeficient de corelaie mai mare de
0,99 este considerat ca indicnd linearitatea. Coeficientul de
corelaie este determinat din urmtoarea ecuaie:
r = i {(xi-xm)(yi-ym)}/ i [(xi-xm)] i [(yi-ym]
nlocuin valorile din tabelul1.3:
r = 1,00.
Dei la 3 cifre semnificative, potrivirea dreptei printre puncte,
la valorile din tabel este perfect. Pentru o abordare mai
amnunit a determinrilor matematice semnificaiei
coeficientului de corelaie vezi referina 1. Ecuaia pentru
coeficientul de corelare poate fi aplicat la corelaia curbelor de
orice form i astfel poate fi folosit pentru comparaii spectrale
cum ar fi seria spectral a diodelor obinut n cromatografia de
lichide de nalt performan ( cap.12, p.285).
Domeniu
Termenul domeniu poate fi aplicat performanei
instrumentelor (domeniu dinamic) dar, cnd se aplic la
performana unei analize, se refer la intervalul dintre
concentraia superioar i cea inferioar a analitului pentru
care un nivel acceptabil de precizie i exactitate a fost
stabilit. Intervalele mormale: 80- 120% din valoarea
declarat de produs finit; 70- 130% din concentraia
ateptat, ex. pentru coninutul unei singure tablete
(intervalul poate fi mai larg pentru unele produse,
asemenea dozelor pulverizate de dozatorul unui inhalator)
i 0- 110% pentru testele de dizolvare unde medicamentul
este eliberat din forma farmaceutic ntr-un anumit timp.

Robusteea
Robusteea este evaluat pentru a determina ct
de rezistent este precizia i exactitatea unei
analize la variaii mici ale metodei. Tipuri de
parametrii care sunt evaluai pentru a determina
robusteea unei metode sunt: efectul variaiilor
pH a unei faze mobile HPLC; efectul unei variaii
mici n compoziia fazei mobile; efectul schimbrii
coloanelor cromatografice; efectul temperaturii i
ratei de curgere n timpul cromatografiei.

Selectivitatea
Selectivitatea unei metode este o msur a posibilitii de
msurare a unui singur analit din prob n prezena altora.
Cele mai selective metode analitice includ o separare
cromatografic. Metodele de detecie pot fi clasificate dup
selectivitate. O comparaie simpl se face ntre
spectofotometria cu fluorescen i UV. Sunt mai numeroi
compuii care prezint absorbie UV dect cei care
manifest o fluorescen puternic; spectofotometria cu
fluorescen este o metod mai selectiv. Deoarece
metodele selective se bazeaz pe principii mai complexe
dect cele nesective, ele pot fi mai puin robuste, ex.
spectofotometria cu fluorescen este mai afectat de
schimbrile metodei analitice dect spectofotometria UV.

Sensibilitatea
Sensibilitatea unei metode indic ct de receptiv este
la micile schimbri n concentraia analitului. Poate fi
vzut ca panta unei curbe i poate fi o funcie a
metodei nsi sau a modului n care a fost calibrat
instrumentaia. n figura 1.3 metoda ce are o dreapt
y= 2,5x este de 5 ori mai sensibil dect metoda cu
dreapta y= 0,5x.
Sensibilitatea i limita de detecie a unei metode sunt
adesea confundate. Limita de detecie se datoreaz
unei combinaii a domeniului cu sensibilitatea.

Cntrirea prin diferen
Cntrirea prin diferen este folosit pentru a
micora erorile procedurii analitice. Proba este
cntrit ntr-un vas potrivit i apoi transferat n
vasul n care va avea loc analiza sau dizolvarea.
Este fcut tara vasului i diferena reprezint
greutatea probei. Aceast metod de analiz
micoreaz erorile datorate, de ex., absorbiei
umezelii pe suprafaa vasului. Totodat nu este
necesar transferul complet al probei pentru
efectuarea analizei.

Punctele enumerate n figura 1.6 i 1.7 arat cum preparatele farmaceutice pot fi
ndeprtate de specificaii:
Figura 1.6 Surse de impuriti la fabricare

n timpul procesului de fabricaie a unei substane pure medicamentoase,
impuritile pot aprea din:
Prezena n materiale.
Rezultate din cantiti reziduale de intermediari chimici folosii n sintez sau din
reacii adverse nedorite.
Rezultate din reactivii, solvenii i catalizatorii folosii la fabricare.
Procesul care duce la producerea medicamentului poate introduce impuriti dup
cum urmeaz:
Particule din atmosfer, maini folosite n proces i din containere.
Impuriti din excipieni.
Contaminare ncruciat datorit altor procese desfurate cu acelai
echipament,ex. mixerele.
Contaminare microbian
Reacia medicamentului cu excipienii
Impuriti datorit ambalrii, ex. monomerii polimerici
Figura 1.7 Procesele care duc la abaterea coninutului
real fa de cel declarat dintr-un medicament
Incompleta amestecare a medicamentului cu excipienii
nainte de comprimarea tabletelor sau umplerea
capsulelor.
Instabilitatea fizic a formei farmaceutice: tablete care se
dezagreg prea repede, creme sau suspensii care se separ
i comprimarea prea puternic sau prea slab duc la
deviaii de greutate.
Degradarea chimic a medicamentului datorit reaciei cu
aerul, apa, lumina, excipieni din formulare sau din
ambalaj.
mprirea materialului n ambalaje.
Calcule elementare n analiza farmaceutic

Datele obinute dintr-o analiz pot fi efectuate cu
ajutorul metodelor computerizate. Totui, pentru a
avea nite noiuni legate de corectitudinea rspunsului,
este necesar conoaterea modului tradiional de
efectuare a calculelor. Exist numeroase uniti folosite
pentru exprimarea cantitilor i concentraiilor n
analiza farmaceutic i astfel de exemple sunt analizate
mai jos.


Procentul volumul / volum (%v/v)
% v/v este frecvent ntlnit n relaia compoziiei fazei mobile
folosite n HPLC. Avnd n vedere, c la amestecarea a 70 ml de ap,
rezult un amestec30:70 v/v.
Deoarece volumul scade la amestecarea celor 12 lichide, %v/v
poate fi doar aproximat. Unii analiti prefer s prepare amestecul
de solveni prin cntrirea lor i n acest caz amestecul rezultat se
exprim n m/m.

Procentul mas/ volum(%m/v)
% mas/volum este n mod normal folosit pentru exprimarea
coninutului de substan activ n formulrile lichide cum sunt
injeciile, perfuziile i picturile. Densitatea solventului n acest caz
este irelevant; astfel o soluie de 1g/100ml este 1%m/v chiar dac
este dizolvat n etanol sau ap.

Test 1.5

Transform urmtoarele concentraii n %m/v:
0,1 g/100ml
1 mg/ml
0,1 g/ml
100 g/ml
Rspuns:
0,1% m/v
0,1% m/v
10 % m/v
0,01 % m/v
Diluii

Pentru ca o poriune, dintr-o formulare sau
soluie a unei substane pure, s fie msurat,
trebuie s fie diluat, astfel nct, s se ncadreze
n domeniu de lucru al intrumentului folosit
pentru msurare. Astfel pentru nelegerea
factorilor de diluie este fundamental folosirea
calculelor bazate pe date analitice.
Exemplu de calcul 1.1
O perfuzie care conine 0,95% m/v NaCl a fost diluat astfel nct coninutul su de
Na s fie determinat prin fotometrie cu flacra. Au fost realizate urmtoarele diluii:
10ml de prob au fost diluai la 250ml cu ap
10 ml din aceast soluie diluat a fost adus la 200 cu ap.

Proba conine 0,74 mg/100ml de Na
Mase atomice: Na= 23 Cl= 35,5.

Calculai:
Procentul m/v de NaCl din perfuzie.
Procebtul de NaCl declarat coninut.
Factorul de diluie=10 la 250, 10 la 200. Diluia total = 2520=500.
Deci, n injecia iniial, conc. De Na= 0,74 500 mg/100ml = 370
mg/ 100ml.
% de coninut declarat = (0,941/0,95) 100= 99,1%.
n prob sunt 941 mg/ 100ml.

Exemplu calcul 1.2

2ml de picturi de ochi conin proxymetacain,anestezic.
HCl este diluat la 100ml i apoi 5 ml din diluie este diluat
la 200 ml. Proba diluat este msurat cu spectofotometru
UV i conine 0,512 mg/100 ml substan medicamentoas.
Calculai procentul de substan medicamentoas din
picturile de ochi.
Factori de diluie 2 la 100, 5 la 200. Diluie total
4050=2000.
Concentraia iniial = 2000 0,512= 1,024 mg/100ml=
1,024%m/v.
Test 1.6

O prob de 5 ml dintr-o injecie de steroid a
fost diluat la 100ml. Apoi din aceast diluie
10 ml s-au diluat din nou la 100ml. Din
msurtoarea UV n prob s-au gsit 0,249mg/
100ml de steroid. Care a fost concentraia
iniial n %m/v i n mg/ml?

Prepararea soluiilor standard

La prepararea soluiilor stoc a unui standard
utiliznd o balan cu 4 zecimale,
presupunnd c nu este lips de soluie
standard, este cel mai bine s cntreti cel
puin 100mg de substan, de vreme ce o
eroare de 0,1 mg este doar 0,1% din greutatea
luat.

Exemplu de calcul 1.3

Presupunnd c doreti s evii pipetarea a unui volum mai mic de 5
ml, ncepnd de la 102,1 mg/100ml de soluie stoc, cum ai prepara
urmtorele concentraii pentru calibare?
0,2042mg/100ml, 0,4084mg/ml, 0,6126mg/100ml, 0,8168
mg/100ml, 1,021mg/ml
Cnd este necesar o diluie mare ( peste 10) este recomandat s
fie efectuat n 2 etape.
n acest caz diluia iniial de 20ml la 100ml este desfurat, i
rezult 10,21mg/100ml soluie. Apoi baloane cotate de 250ml pot fi
folosite pentru urmtoarele diluii.
5 la 250, 10 la 250, 15 la 250, 20 la 250 i 25 la 250. Odat ce
volumul pentru cea mai mic concentraie a fost determinat (5ml),
apoi poate fi multiplicat cu 2, 3, 4 i 5.

Test 1.8

O soluie stoc coninnd 125,6 ml de standard n 250ml este preparat. Spunei cum pot fi realizate
urmtoarele diluii (folosii pipete de 5ml sau mai mari).
0,1005mg/ 100ml, 0,2010 mg/100ml, 0,3015mg/100ml, 0,4020 mg/ml, 0,5025mg/100ml.
Rspuns: Numr de rspunsuri posibile, ex: diluia 1, 10ml la 250ml. Apoi diluia 1,5,10, 15,20 i 25 ml
transferai n baloane cotate.

Procent m/m ( %m/m)
% m/m este o msur uzual folosit pentru exprimarea concentraiei de substan activ din formulare
cum sunt cremele sau la exprimarea coninutului de impuriti. Avnd n vedere c o crem coninnd
10mg (0,01g) de substan pe gram are o concentraie de 1% m/m (0,01/1) 100. n acelai mod, dac un
medicament conine 0,5mg (0,0005g) pe gram de impuriti, impuritatea are o concentraie de
0,05%m/m. Este general acceptat c, pentru un medicament, toate impuritile peste 0,05% m/m ar
trebui caracterizate, structurile cunoscute i toxicitatea evaluat.
n determinrile unor impuriti din medicament, un g de substan poate fi dizolvat n 100ml de
solvent. Dac analiza a fost desfurat i s-au gsit 3mg/100ml impuriti, atunci % m/m al cantitii
iniiale de substan ar trebui s fie:

(0,003/1) 100= 0,3%m/m

Test 1.9
0,0,1521g de corticosteroid a fost dizolvat n 100ml de metanol/apa (1:1v/v).
Proba a fost analizat cu ajutorul HPLC i sau gsit impuriti n concentraie de
0,345 mg/100ml. Care este procentul m/m de impuriti?
0,5321g de beta blocant este dizolvat n 50ml amestec metanol0,1%m/v acid
acetic (20:80v/v) i apoi 10ml prob sunt diluai la 50ml. Proba diluat este
analizat HPLC i conine 0,153mg/100ml impuriti. Care este %m/m de
impuriti?
Rspuns:
0,233m/m
0,0719%m/m

Calcule pri pe milion (ppm)
Pri pe milion (ppm) m/m este 1mg/g (1g/kg). Este o msur obinuit pentru
impuritile din medicamente, mai ales metale grele i solveni.
1ppm este deasemenea 0,0001%m/m

Exemplu 1.4
Coninutul de K al unei perfuzii intravenoase de NaCl. Perfuzia conine 0,9092%
m/v NaCl. n perfuzia nediluat a fost determinat coninutul de K n comparaie cu
un standard de KCl. Valoarea gsit 0,141mg/100ml. Calculai coninutul deK n
PPM.
0,9092%m/v= 0,9092g/100ml
K= 0,141mg/100ml= 141g/100ml.
n comparaie cu NaCl, sunt 141g/0,9092 g= 141/0,9092 ppm= 155 ppm.

Test 1.10

125 mg streptomicin sulfat se dizolv n 10ml ap. O analiz gazcromatografic
este realizat pentru a determina coninutul de metanol din medicament. Un pic al
metanolul este realizat i are 73,2% din aria standardului de metanol care conine
0,532 mg/100ml de metanol n ap n aceleai condiii. Care este coninutul de
metanol al sulfatului de streptomicin n ppm i % m/m?
Rspuns: 311,3ppm, 0,03113 % m/m.

Modul de lucru cu greuti i molaritate

Greutile sunt mai uor de apreciat dect greutatea molar dar uneori,
mai ales n metodele bioanalitice, se folosesc concentraiile molare.


Definiii

Molar: masa molecular n g/l (mg/ml)
mMolar: masa molecular n mg/l (g/ml)
Molar: masa molecular n g/l (ng/ml)
nMolar: masa molecular ng/l (pg/ml)


Exemplu de calcul 1.5

Metabolismul paracetamolului (MW 151,2) din microzomi
de ficat a fost studiat prin pregtirea a 100 M soluie de
paracetamol n 1 ml de amestec incubat. O soluie de
30,12 mg/ 100ml paracetamol n tampon a fost pregtit.
Ce volum de soluie de paracetamol trebuie adugat n
amestecul incubat nainte de realizarea unui volum de 1
ml.
100M = 100151,2= 15120g/l= 15,12 g/ml.
32,12mg/ml= 30120 g/ml= 301,2 g/ml= 0,3012 g/ml.
Volumul necesar de soluie paracetamol= 15,12/ 0,3012=
50,2l.

Test 1.11
Calculai concentraia n mg/ml i g/l a unei
soluii de 10M de kanamicin.
O soluie cu concentraia de 79,5 mg/100ml n
tampon a fost pregtit. Ce volum din aceast
soluie este necesar pentru a realiza incubarea
microzolmal cu o concentraie de 25M de
substan n 1ml?
Rspuns (i) 0,5090%m/v
(ii) 101,8%

Probleme

Toate rspunsurile trebuie date cu 4 zecimale.
Ex. 1% m/v cu 4 cifre semnificative este 1,000%m/v.
Transformai urmtoarele concentraii la %m/v.
10 mg/ml
100 mg/ml
0,025 g/ml
250 g/ml
20 g/l

Rspuns:
i. 1,000 % m/v
ii. 0,01000 % m/v
iii. 2,500 %m/v
iv. 0,02500 % m/v
v. 2,000 % m/v
O perfuzie care a avut la nceput o concentraie 0,5000% m/v KCl a
fost diluat astfel nct coninutul de K s fie determinat prin
fotometrie cu flacr. Au fost efectuate urmtoarele diluii:
10ml din prob a fost diluat la 200ml cu ap.
10 ml din proba diluat a fost diluat la 200ml cu ap
Proba conine 0,6670mg/100ml deK.
(Greutii atomice: K=39,1 Cl = 35)

Calculai:
% m/v DeKCl prezent n infuzie
% deKCl declarat
Rspuns:
0,5090 %m/v
101,8 %

Sruri orale de hidratare cu urmtoarea compoziie declarat:
NaCl 3,5 g
KCl 1,5 g
Citrat Na 2,9 g
Glucoz anhidr 20,0 G

8,342 g de sruri de rehidratare orale sunt 500ml de ap. 5ml de
soluie este diluat
la 100ml. Coninutul de Na din prob este determinat prin
fotometrie cu flacr.
Srurile de Na folosite:
Citrat trisodic hidratat ( C6H5O7 2H2O) MW 294,1 i (NaCl) MW
58,5.
Coninutul de Na n proba 0,3210mg/100ml.
Decterminai % de coninut declarat de Na.
Rspuns:104,5.
Un volum de 5ml, picturi de ochi, cu cyclopentolat, cu
aciune midriatic.. HCl este diluat la 100ml i apoi 20ml din
diluie este diluat la 100ml. Proba diluat este msurat
prin spectrofotometrie UV i conine20,20mg/100ml de
substan. Calculai % M/v de substan din picturi.
Rspuns: 2,020%m/v.


0,5%m/v de injecie se folosesc ca anestezic pentru un
sugar de 2sptmni care cntrete 3,4kg. Doza
recomandat de injecie in-bolus este de 0,5mg/kg. Injecia
trebuie fcut ntr-un ml. Calculai cantitatea de ap care
trebuie tras n sering.
Rspuns:0,6600ml
0,0641g de alkaloid semisintetic a fost dizolvat n 25ml 1%m/v acid
acetic i analizat HPLC. Soluia conine 0,142 mg/100ml de
impuriti. Care este cantitatea de impuriti exprimate %m/m i
ppm.
Rspuns: 0,05538% m/m, 553,8 ppm.

Nivelul de acetat de etil este determinat n colchicin prin gaz-
cromatografie. A fost preparat o soluie de colchicin n ap
4,361g/100ml. Un standard 0,5912mg/100ml de acetat de etil a
fost deasemena pregtit. Cele 2 volume din cele 2 soluii au produs
urmtoarele arii n urma gaz-cromatografiei:

Soluia de colchicin: aria picului 13457
Soluia de acetat de etil: aria picului 14689
Calculai coninutul de acetat de etil n proba de colchicin ppm.
Rspuns:124,2 ppm.