NOIUNEA DE GEN

Gena n concepia geneticii clasice

G. Mendel arat c n celulele exist factori ereditari care determin caracterele ereditare
perechi, n celulele somatice i sub form simpl, n celulele sexuale.
Termenul de gen (gr. genos = urma) a fost introdus de W. Johannsen, n anul 1903, ns nu
l consider ca pe o unitate fizic, ci pe un corespondent al factorilor ereditari imaginai de G. Mendel.
n concepia clasic gena prezint trei caracteristici de baz: unitate funcional, unitate
mutaional i unitate de recombinare.
Ca unitate funcional, gena este cel mai scurt fragment dintr-un cromozom, n interiorul
creia orice modificare afecteaz acelai caracter, deci gena este cea mai mic unitate care produce un
anumit efect fenotipic.
Ca unitate mutaional, gena este cea mai mic parte dintr-un genom, care prin mutaie d
natere la alela sau alelele sale, cu caracter modificat.
Ca unitate de recombinare, gena este cel mai mic segment dintr-un cromozom, care se poate
transfera prin crossing-over pe cromozomul omolog i n interiorul cruia nu are loc crossing-over
(unitate indivizibil de crossing-over).
Acest mod de a defini gena s-a dovedit a fi simplificat, deoarece chiar la nceputul secolului
XX s-a demonstrat c gena este o unitate genetic mult mai complex, format din sublocusuri sau
subgene.
Existena subunitilor de gen a fost dovedit de E. B. Lewis n anul 1951 la locusul
lozenge (lz) de la Drosophila melanogaster. Locusul lz se gsete pe cromozomul X n poziia 27,7
uniti de recombinare i determin modificri n pigmentaia ochilor, structura faetelor i fertilitatea
femelelor.
Heterozigoii obinui n urma ncrucirilor dintre mutante ale locusului lz, au avut fenotip
mutant cu caractere intermediare. n urma analizei a peste 100.000 de indivizi, Lewis a gsit i 0,02%
indivizi de tip normal (slbatic), nemutani, desprinznd concluzia c ntre subgenele locusului
lozenge a avut loc un crossing-over. Locusul lozenge cuprinde cel puin trei uniti ntre care apare un
mic procent de recombinare.
Pe baza efectului cis-trans s-a ajuns s se stabileasc dac dou mutaii foarte asemntoare
aparin unei serii alelice ale aceluiai locus sau sunt nealele i aparin la doi loci diferii.
Dou gene sunt alele, cnd aparin aceluiai locus i dac heterozigotul n poziie trans are un
fenotip normal, nseamn c genele respective sunt nealele.
Apogeul n concepia clasic despre gen, l-a constituit ipoteza "o gen - o enzim"
elaborat de G. W. Beadle i E. L. Tatum (1941). Conform acestei ipoteze, sinteza fiecrei enzime este
determinat de informaia unei gene, deci ntre gene i enzime ar exista raportul de 1:1. Mutaia unei
gene determin blocarea sintezei unei enzime, care la rndul ei, determin oprirea ntregului lan
metabolic.
Dac se analizeaz schema de mai jos, a unei ci metabolice, ipoteza "o gen - o enzim"
demonstreaz c fiecare enzim care intervine ntr-un proces metabolic este controlat de o gen:

Gena A Gena B Gena C


Enzima A Enzima B Enzima C


Substrat Produsul A Produsul B Produsul C

Studiul mutantelor de Neurospora, a bacteriilor i algelor a dovedit c blocarea unei etape
dintr-un lan metabolic este legat de mutaia unei gene care inactiveaz o enzim.
Dei ipoteza "o gen - o enzim" nu poate fi neleas n sensul strict c o gen determin
sinteza unei singure enzime, a constituit un pas important n evoluia conceptului de gen i pentru
elucidarea funciilor acesteia.



Gena n concepia geneticii moleculare

Studiile de genetic molecular, metodele moderne de cercetare, folosirea intens a
virusurilor i bacteriilor, au permis o analiz genetic foarte fin a genei, n urma creia s-a constatat
c gena este o unitate foarte complex, alctuit din subuniti ntre care pot avea loc recombinri
intragenice i pot fi modificate prin mutaii.
Cercetrile mai noi au demonstrat c unitatea mutaional este perechea de nucleotide, care,
n acelai timp este i cea mai mic unitate de recombinare genetic.
Prin numeroase cercetri s-a ajuns la concluzia c secvena nucleotidelor dintr-o gen
determin secvena aminoacizilor din catena polipeptidic, fenomen denumit colinearitate.
Gena, n concepia geneticii moleculare, este definit drept un segment din macromolecula
de ADN (sau ARN n cazul unor virusuri), format dintr-o secven anumit de nucleotide, care
acioneaz ca o unitate funcional i care conine informaia genetic ce determin secvena
nucleotidelor dintr-o molecul de ARN (transcripie genetic) i, respectiv, a aminoacizilor ntr-o
caten polipeptidic (translaie genetic).
S. Benzer (1958-1961) a denumit muton, cea mai mic unitate a genei n care poate avea loc
o mutaie, independent de alta, recon cea mai mic unitate n care are loc recombinarea genetic i
cistron cel mai mic segment de ADN (sau gen) care poate funciona unitar i ale crui limite pot fi
stabilite prin testul cis-trans (testul de complementaritate).
Se poate afirma c gena este identic cu cistronul.
n concepia geneticii moleculare, gena poate fi definit succint astfel: o gen sau cistron - o
caten polipeptidic.
Din punct de vedere funcional, genele pot fi clasificate dup Paigen i Ganschow (1965)
(citai de P. Raicu, 1980) n patru tipuri: gene structurale, ce determin secvena aminoacizilor ntr-o
caten polipeptidic; gene reglatoare, ce controleaz sinteza proteinelor prin intermediul unui
represor; gene arhitecturale, care determin integrarea proteinelor sintetizate n structuri celulare i
gene temporare, care activeaz cele trei tipuri de gene, n timp, pe baza unui program genetic, pentru
realizarea fenomenului de citodifereniere.
Genetica molecular a adus noi elemente de detaliu i asupra structurii genei. La eucariote
gena este constituit dintr-o secven linear de nucleotide, continu, ce codific o secven de
nucleotide informaionale denumite exoni, separate prin segmente noninformaionale (ADN silenios)
denumite introni. De exemplu, gena ovalbuminei la gin este format din opt exoni i apte introni
(figura 3.12).













Fig. 3.12. - Structura genei ovalbuminei, format din exoni i introni

Pentru a se realiza fenomenul de transcripie a ARN
m
, se formeaz mai nti un ARN
precursor care determin eliminarea segmentelor noninformaionale (introni), sintetizndu-se apoi un
ARN
m
care copie informaia genetic numai a exonilor (R. J. Roberts i A. Ph. Sharp 1993).
Se pare c secvenele noninformaionale au un rol important n evoluia materialului genetic.
n genomul eucariotelor numrul de gene este relativ mic, comparativ cu cantitatea de ADN.
La om, n funcie de mrimea genelor i de cantitatea de ADN, ar trebui s existe un numr de 3 x 10
6

gene. n realitate numrul de gene este mult mai mic, 5 x 10
4
, ceea ce nseamn c o mic parte din
ADN este informaional, iar restul este noninformaional, ndeplinind alte roluri n genom.
Genele au dou funcii eseniale: funcia autocatalitic i hetorocatalitic.
Funcia autocatalitic const n capacitatea genelor, deci i a macromoleculei de ADN, de a
se replica cu mare fidelitate, dup modelul semiconservativ, aa nct celulele fiice vor moteni
aceleai gene ca celulele mam.
Funcia heterocatalitic a genelor, const n capacitatea acestora de a determina, prin
secvena de nucleotide ce o posed, sinteze specifice de proteine, enzime, biomolecule, informaia
genetic fiind deci decodificat i transformat ntr-o secven de aminoacizi, n catene polipeptidice.
Cele dou funcii ale materialului genetic au dus la formularea dogmei centrale a geneticii,
care poate fi redat sintetic prin urmtoarea relaie:

ADN ARN proteine

n cazul unor ribovirusuri s-a descoperit c poate fi un transfer de informaie de la ARN la
ADN. Fenomenul a fost descoperit de Howard Temin (1972) la virusul ce provoac sarcomul Rous la
psri, care este un virus ARN-ADN, n sensul c ARN
v
se replic prin intermediul ADN.
Descoperirea fcut de Temin constituie o excepie de la dogma central a geneticii, prin
care s-a dovedit c ARN poate determina sinteza ADN.

REPRODUCEREA I RECOMBINAREA GENETIC LA PROCARIOTE

Procariotele (gr. pro = nainte, karyon = nucleu) sunt organisme primitive extrem de simple,
de obicei unicelulare, fr nucleu, cu o structur genetic simpl, o singur macromolecul de ADN ce
alctuiesc cromozomul. Principalele tipuri de procariote sunt: viroizii, virusurile, micoplasmele,
bacteriile i cianoficeele.
Virusurile sunt ageni infecioi considerai fie organisme extrem de rudimentare, fie
molecule foarte complexe, de aceea, n mod obinuit, nu sunt incluse n grupul procariotelor.
Pentru genetica molecular, bacteriile i virusurile au constituit obiectele de studiu de mare
importan, deoarece au o structur foarte simpl i se reproduc ntr-un timp foarte scurt. Descoperirile
structurii materialului genetic, a mecanismului a informaiei genetice, au fost posibile datorit folosirii
ca material de cercetare a bacteriilor i virusurilor.

Reproducerea bacteriilor i virusurilor

Celula bacterian este alctuit din citoplasm nconjurat de o membran citoplasmatic,
care la exterior are o membran rigid, iar la unele bacterii, de acest perete se ataeaz o capsul
format din polizaharide sau polipeptide. n citoplasm se gsete o regiune mai dens denumit
nucleoid, un numr mare de ribozomi (15-20.000), o formaiune denumit mezozom ce se formeaz
prin invaginarea membranei celulare, de care se ataeaz cromozomul circular bacterian.
Dup J. D. Watson (1965) n celula bacterian ar exista ntre 3.000 i 6.000 substane
chimice, de la cele mai simple la cele mai complexe, pentru sinteza crora sunt necesare numeroase
ci metabolice, ce alctuiesc metabolismul celular al bacteriei.
Bacteriile posed un singur cromozom circular, format din ADN dublu catenar, cu o lungime
de 700-900 , care formeaz un singur grup de linkage.
Bacteriile se reproduc amitotic, deci prin simpl fisiune sau prin alte forme de reproducere
asexuat, uneori i prin nmulire sexuat. Ciclul celular cuprinde trei perioade: de pregtire (cretere)
pentru iniierea procesului de replicaie a ADN, de replicaie propriu-zis, urmat de diviziunea
celulei.
Bacteriile sunt haploide numai n stadiul de spori, n rest sunt parial diploide datorit
procesului de replicaie, deoarece, uneori, naintea terminrii unui ciclu de replicaie ncepe un al
doilea ciclu de replicaie sau chiar al treilea.
Pe lng cromozomul bacterian exist i un alt material genetic reprezentat prin plasmide,
alctuite tot din ADN, dar mult mai mici dect cromozomul propriu-zis. Principalele tipuri de
plasmide sunt: factorul de fertilitate (F) ce creeaz deosebiri de sex ntre indivizi, factorul
colicinogenic (Col), care se gsete la unele bacterii (Col
+
) ce elaboreaz o substan toxic, colicina,
un grup mai mare de factori ai transferului de rezisten (RTF). Se consider c originea plasmidelor ar
fi exogen i anume virusuri, care au dobndit un nalt grad de echilibru cu celula bacterian, pe care
nu o mai pot distruge.
Virusurile sunt alctuite dintr-un nveli proteic denumit capsid, constituit dintr-un numr
variabil (dar caracteristic pentru fiecare tip de virus) de uniti mai mici denumite capsomere. n
interiorul capsidei se gsete macromolecula de ADN (dezoxiribovirusuri) sau ARN (ribovirusuri).
Virusurile pot fi definite ca macromolecule nucleoproteice, care au capacitatea de a se
autoreplica ntr-un sistem reprezentat de celula vie.
Ciclul de via al virusurilor cuprinde urmtoarele etape: adsorbia la suprafaa celulei,
infectarea celulei prin ptrunderea acizilor nucleici virali n celul, faza de eclips n care virusul este
descompus n elementele sale devenind provirus. n faza de eclips ADN al celulei gazd este
depolimerizat cu ajutorul dezoxiribonucleazei produs de virus. ncepe sinteza acizilor nucleici virali
i a proteinelor virale, are loc asamblarea lor pe baza aparatului enzimatic al celulei gazd, iar faza se
numete virus vegetativ. n faza de virus matur, particulele virale prsesc celula infectat n mod
activ, prin strbaterea porilor membranei celulare sau n mod pasiv, prin distrugerea sau liza celulei
gazd. Ciclul de via descris mai sus se numete ciclul litic.
La bacteriofagi, virusuri ce infecteaz celulele bacteriene, pe lng ciclul litic, determinat de
aa numiii bacteriofagi viruleni, exist i un ciclu lizogenic, produs de bacteriofagi temperai. n
ciclul lizogenic materialul genetic al bacteriofagilor temperai se integreaz n cromozomul bacterian,
se replic sincron cu acesta i celula bacterian nu mai este lizat. Materialul genetic al fagului integrat
n cromozomul bacteriei poarte numele de profag.
Ciclul lizogenic poate s se transforme n ciclul litic fie spontan, fie artificial prin iradieri cu
raze X, ultraviolete sau tratamente cu azot-iperit. Fenomenul de lizogenie prezint urmtorul avantaj:
celula bacterian ce posed un profag integrat n cromozomul su nu mai este distrus de o nou
infecie a fagului respectiv. Acest fenomen a dus la descoperirea unui tip de recombinare genetic la
bacterii, realizat cu ajutorul bacteriofagilor temperai, denumit transducie.

Recombinarea genetic la bacterii

Recombinarea genetic la bacterii se realizeaz pe urmtoarele ci: transformare, conjugare,
sex-ducie i transducie.
Transformarea. Prin transformare se nelege transferul intracelular al unui segment de
ADN de la o bacterie donor, n genomul unei bacterii receptor. Frecvena cu care se realizeaz
transformarea este foarte redus, sub 1%, iar dimensiunea minim a segmentului de ADN transformant
este de 450 perechi de nucleotide.

Procesul de transformare se realizeaz atunci cnd este o cantitate mare de ADN implicat n
proces i n starea de competen a celulelor bacteriene (modificri ale membranei ce permit
ptrunderea ADN).
Dup ce ADN exogen de la tipul donator a ptruns n bacteria receptoare are loc un fenomen
de sinaps ntre cele dou molecule de ADN, n zona complementar, apoi ADN exogen se integreaz
n cromozomul bacteriei receptor, n procesul de replicaie al acestuia.
Transformarea realizeaz de obicei transferul unei singure gene, iar n cazuri mai rare, dou
sau trei gene linkage, n cel din urm caz dovedindu-se c genele respective sunt dispuse alturat pe
cromozom.
Transformarea genetic se realizeaz cu o frecven mai mare la sue diferite ale aceleiai
specii de bacterii i mai rar ntre specii diferite, dar nrudite. Transformarea genetic poate oferi
informaii privind gradul de nrudire filogenetic a unor specii. Tot cu ajutorul transformrii genetice
s-au putut localiza unele gene pe cromozomul bacterian.
Conjugarea. Fenomenul de conjugare a fost descoperit n anul 1946 de J. Lederberg i E. L.
Tatum, fiind considerat un fenomen de parasexualitate, similar oarecum cu reproducerea sexuat de la
organismele eucariote. Conjugarea se realizeaz numai ntre dou bacterii de sex opus, iar sexul este
determinat de o plasmid, denumit factor de fertilitate sau sex factor, notat cu F. Celulele care posed
acest factor sunt "mascule", notate cu F
+
iar cele ce nu posed acest factor sunt "femele", F
-
. Factorul
de fertilitate se poate gsi liber n citoplasm i n acest caz se replic independent de cromozomul
bacteriei, dar n acest caz fenomenul de conjugare se produce cu o frecven destul de redus, i anume
de 10
-5
. n unele cazuri, factorul de fertilitate poate fi integrat n cromozomul bacterian, iar aceste
celule mascule au fost notate cu Hfr (high frequency of recombination). ntre celulele Hfr i celulele F
-
, conjugarea are loc cu o frecven mult mai mare, i anume 10
-1
.
Factorul de fertilitate are o serie de caracteristici structurale i funcionale:
- are o form circular, coninnd n jur de 100.000 perechi de nucleotide, fiind deci mult
mai mic dect cromozomul bacterian;
- factorul F are capacitatea de a se replica mai repede dect cromozomul bacterian, astfel c,
dac ntr-o cultur de celulele F
-
se introduce o singur celul F
+
, ntreaga cultur devine ntr-un timp
scurt F
+
;
- prin conjugarea ntre celulele F
+
i F
-
se transmite de obicei numai factorul F
+
, dar frecvena
conjugrii este redus, n timp ce conjugarea ntre bacterii Hfr i F
-
are loc cu o frecven mare, iar
ntre cele dou celule poate avea loc i un transfer total sau parial al cromozomului de la bacteria
donatoare;
- n urma conjugrii, factorul de fertilitate este cel care se transfer ultimul n celula
receptoare, el orientnd direcia de transfer al cromozomului, n funcie de locul unde este integrat.
Conjugarea a fost studiat la microscopul electronic, descoperindu-se c bacteriile Hfr i F
+

posed un apendice filamentos, denumit F-pilus care este absent n celulele femele (F
-
). Aceti F-pilus
(sau sex-pili) realizeaz legtura dintre dou bacterii de sex opus, fiind un fel de tuburi prin care
materialul genetic al unei bacterii (F
+
sau Hfr) trece total sau parial n celulele F
-
.
F. Jacob i E. L. Wollman (1961) studiind conjugarea la dou sue de E. coli, au determinat
timpul necesar pentru transferul fiecrui locus n parte, ajungnd la concluzia c ntregul cromozom
bacterian este transferat n 89 minute. Pe aceast cale s-au alctuit la unele bacterii, harta genetic,
deoarece lungimea cromozomului poate fi msurat n uniti de timp, n care o unitate este egal cu 1
minut.
Fenomenul de conjugare este strns legat de sinteza ADN.
Sex-ducia, denumit i F-ducia sau transducia F-mediat, este o alt cale de recombinare
genetic la bacterii, descoperit de F. Jacob i E. L. Wollman (1960).
Cercetrile care au dus la descoperirea acestui tip de recombinare s-au fcut la E. coli, la o
su Hfr, care avea factorul de fertilitate inserat lng gena lac
+
. n procesul de conjugare dintre o
bacterie Hfr lac
+
i alta F
-
lac
-
ar fi trebuit s apar recombinani pentru gena lac
+
, foarte trziu, aproape
de sfritul transferului de material genetic. S-a constatat c au aprut civa recombinani lac
+
, foarte
devreme. Concluzia a fost urmtoarea: factorul F este eliberat din cromozomul bacterian dar printr-un
proces de crossing-over, ntre cromozom i factorul F are un schimb de material genetic, rezultnd un
factor de fertilitate recombinat, notat cu F' (figura 3.13).
Prin trecerea factorului F' ntr-o celul F
-
, el poate fi inclus n cromozomul bacterian ntr-o
regiune omoloag cu regiunea cromozomic pe care o poart, orientnd procesul de conjugare la fel ca
n cazul bacteriei Hfr iniiale.
Sex-ducia poate fi definit ca fiind procesul prin care gene ale cromozomului bacterian sunt
ncorporate n factorul de fertilitate F i pe care le transfer la celulele F
-
prin procesul de conjugare.

















Fig. 3.13. - Formarea factorului de fertilitate recombinat F'

n factorul F pot fi incluse diferite gene, deoarece factorul F poate fi integrat n diferite
regiuni ale cromozomului.
Celulele bacteriene ce prezint factorul F' pot fi transformate n celule Hfr, prin inseria
factorului F' n cromozomul bacterian.
Fenomenul de recombinare prin intermediul sex-duciei s-a realizat i ntre specii diferite de
bacterii. Astfel, factorul F este absent la speciile de Salmonella, Shigella, Pasteurella, dar poate fi
transferat la acestea de la E. coli.
Transducia este procesul prin care bacteriofagii temperai realizeaz transferul de
informaie genetic de la o bacterie la alta. Acest fenomen a fost descoperit de N. D. Zinder i J.
Lederberg n anul 1952, la bacteria Salmonella typhimurium, cu ajutorul bacteriofagului P
32
.
Experiena efectuat de cei doi cercettori a constat n urmtoarele: ntr-un tub Davis, separat la mijloc
printr-un filtru de sticl poroas ce permite trecerea bacteriofagilor, dar nu i a bacteriilor, a introdus n
cele dou brae dou sue bacteriene diferite (figura 3.14).










Fig. 3.14. - Evidenierea transduciei bacteriene
Sua LA
22
este auxotrof, dar cu genotipul fen
-
tri
-
met
+
hia
+
, deci prezint concomitent dou
mutaii biochimice, neputnd sintetiza aminoacizii fenilalanin i triptofan, iar sua LA
2
este tot
auxotrof, dar cu genotipul fen
+
tri
+
met
-
his
-
pentru alte dou gene, neputnd sintetiza aminoacizii
metionin i histidin. Sua LA
22
este lizogen, n sensul c, n cromozomul su era integrat profagul
P
22
. Unii bacteriofagi sunt eliberai din cromozomul bacteriei i produc liza acesteia. Bacteriofagii pot
trece prin filtrul de sticl, produc liza bacteriei LA
2
, apoi pot reveni n tubul n care se gsete bacteria
LA
22
cu care pot stabili din nou relaii lizogene n urma crora pot apare indivizi recombinai prototrofi
(de tip slbatic) pentru toate cele patru gene, fen
+
tri
+
met
+
his
+
.
Explicaia acestui fenomen este urmtoarea: bacteriofagul P
22
producnd liza bacteriei LA
2

include, cu o mic frecven, 1 la 10
5
-10
7
, segmentul de cromozom cu genele fen
+
tri
+
de la aceast
su. Stabilind relaii lizogene cu sua LA
22
, bacteriofagul P
22
transfer acest segment n cromozomul
acestuia rezultnd recombinani genetici de tip slbatic (fen
+
tri
+
met
+
his
+
).
Cercetrile privind transducia au artat c de obicei se transfer o singur gen, n cazuri
rare dou gene i niciodat trei gene. n cazul transferului a dou gene, se demonstreaz c cele dou
gene sunt foarte apropiate pe cromozomul bacteriei, servind la stabilirea precis a locilor acestora, deci
la alctuirea hrilor genetice cu ajutorul transduciei.
Transferul concomitent a dou gene prin fenomenul de transducie a fost denumit
cotransducie.
Transducia este de dou tipuri: transducie specializat, cnd un bacteriofag transfer numai
o anumit gen i generalizat cnd un bacteriofag poate transfera oricare gen dintr-un cromozom
bacterian.
Transducia specializat a fost observat la bacteriofagul ce infecteaz E. coli. Acest
bacteriofag este inclus sub form de profag n cromozomul bacteriei numai alturi de locusul gal (gena
ce determin metabolizarea galactozei). Bacteriofagul poate transfera numai gena gal
+
de o su
bacterian la alta. Dac o cultur lizogen cu bacteriofagul este tratat cu raze UV, bacteriofagul
se elibereaz din cromozomul bacterian i produce liza bacteriei, putnd infecta apoi bacterii gal
-
, care
se transform cu o anumit frecven n bacterii gal
+
.
n cazul transduciei generalizate se poate realiza transferul oricrei gene de la o bacterie
donor la o bacterie receptor, deci bacteriofagul transductant poate ncorpora oricare gen i o transfer
altei bacterii.