2

Cromozomii umani
reprezint structuri dinamice ca form, aspect, grad de
compactizare, activitate genetic:
crs mono sau bicromatidian;
cromatin sau cromozom;
activ pentru transcripie sau inactiv.

reprezint substratul morfologic al E i V;
nivelul supramolecular de organizare a materialului genetic
(ADN + proteine histone + proteine nonhistone + ARN)
3
crs se autoreproduc prin replicarea ADN ce i constituie numai
n perioada S a interfazei.
crs reprezint grupuri de nlnuire a genelor:
- fiecare crs conine un numr anumit de gene;
- fiecare gen are o poziie fix pe cromozom locus;
- genele unui cromozom formeaz grupuri lincage, ce de
regul, se transmit n bloc, nlnuit
setul diploid de crs a unui individ formez cariotipul:
23 perechi: 22 perechi autozomi +
1 pereche gonozomi (XX sau XY).
Cromozomii pereche = cromozomi omologi
4
Originea gonosomilor
r
e
p
e
r
e

d
e

i
d
e
n
t
i
f
i
c
a
r
e

a

c
a
r
i
o
t
i
p
u
l
u
i

lungimea relativ i
absolut a crs
poziia centromerului =
constricia primar - c
prezena constriciilor
secundare h
prezena sateliilor - s
6
Studiul cromozomilor se poate realiza n:
Metafaz prin colorare omogen sau n benzi
Prometafaz prin colorare n benzi
Interfaz prin hibridare cu sonde moleculare
marcare fluorescent
7
Cromozomii au o structur neomogen:
- Secvene codificatoare i necodificatoare;
- Segmente de eucromatin i heterocromatin,
- secvene unice i repetitive;
- Secvene bogate n GC i AT;
- Secvene transcrise i netranscrise;
- segmente bogate n proteine acide i bazice.
!!! Acestea explic originea benzilor cromozomiale
Anomaliile de numr sau de structur a crs se manifest prin
anomalii multiple de dezvoltare sindroame crs
plurimalformative
8
Forma cromozomului metafazic depinde de POZIIA
CENTROMERULUI
Structura cromozomului metafazic.
Repere cromozomiale
9
100 x
q p
p
Ic

10
Cariotipul uman
11
CLASIFICAREA CROMOZOMILOR
Dup lungime:
-Mari
-Medii
-Mici
Dup form:
-Metacentrici
-Submetacentrici
-Acrocentrici
Dup tip:
-Autozomi
-Gonozomi
Dup prezena altor
repere:
-Cu h pe braul p
-Cu h pe braul q
-Cu satelii
Grupe:
A 1-3
B 4,5
C X, 6-12
D 13-15

E 16-18
F 19,20
G 21, 22, Y

12
Cariotipul uman i formula
cromozomial
46,XX
46,XY
47,XXY
45,X
47,XY,+21
45,XY,-21
46,XX,5p-

13
Cariotipul uman i formula
cromozomial
46,XX,13ps++
46,XY,13ph-
46,XX,16ph+
46,XX,16qh++
46,XY,16p+
46,XY,16q-

Cnd putem presupune o anomalie crs de NR
sau de structur ?
Anomalii de dezvoltare mutiple sindrom
plurimalformativ
Anomalii de sexualizare
Anomalii de reproducere
Nou nscut mort plurimalformat
Avorturi spontane repetate
Sterilitate primar
1. Colectarea sngelui pentru a obine celule nucleate
(!!! leucocitele sngelui periferic au nuclee n interfaz)
ETAPELE CARIOTIPRII
2. Obinerea culturii de celule n diferite perioade ale mitozei
37 C
72 ore
Cel
sgelui
+ mediu
de
cretere
Cel n
diferite
faze ale
mitozei
Peste 72 ore
3.Pregtirea cromozomilor pentru microscopie
Celule n
diferite
faze ale
mitozei
Sol hipotonic
Citostatic -
colhicin
Stoparea
metafazei
Sedimentarea
celulelor
Dispersarea
cromozomilor
Lam cu cel fixate
Lam cu plci metafazice
Colorare
4. Colorarea i microscopia preparatului cromozomic
5. Analiza cariotipului
Fotografierea
plcii metafazice
Decuparea
cromozomilor
Realizarea
cariogramei =
cariotipului
45,X
47,XX,+18
69,XXX
47,XXY

46,XX,5p-

47,XX,+13

47,XX,+21
29
Tehnici de citogenetic de analiz a
cariotipului:
Pentru identificarea anomaliilor de numr analiza
cromozomilor metafazici cu colorate omogen.
Pentru identificarea anomaliilor de numr i de structur
analiza cromozomilor metafazici cu colorare difereniat Q, G,
R; analiza cromozomilor prometafazici cu colorare difereniat
Q, G, R.
Pentru identificarea polimorfismului cromozomial analiza
cromozomilor metafazici cu colorare difereniat C, T.
Studiul cariotipului uman
Analiza crs
metafazici
Analiza crs
prometafazici
Analiza crs
interfazici
Colorare
uniform
Colorare
n benzi
G,Q,R,C,T
colorare n
benzi
G, R
Testul
cromatinei
sexuale
X i Y
Metode
molecular
citogenetice
FISH, mFISH
SKY
CGH
*** NR benzi pentru setul haploid: 300-400 m / 550 pm / 850p
Colorarea cromozomilor
Omogen Difereniat, n benzi
G Q
R C
T
Benzile G+ = Q+ = R
Benzile G- = Q- = R +
Nomenclatura benzilor
Cromozomul
benzi
brae
subbenzi
4p22.2
5q13.4
9p21.3
regiuni
46,XY,del(1)(p11-p34)
1p35
1p22
1q23
1q41
46,XY,del(1)(p11-p34)
46,Y,del(X)(q12.1-q24.3)
Cariotip
46,XX
46,XY
46,XX,9qh+
46,XY,16qh-
46,XX,14s++
47,XX,+21
45,XY,-12
48,XXXY
45,X
69,XXX
69,XXY
46,XX,1q-
46,XY,16p+
46,X,r(X)
46,XY,del(5p)
46,XX,t(12,22)
Normal Normal cu
polimorfisme
Aneuploid Poliploid Cu aberaii
cromosomiale
37
Cromosomul 4 Stabilirea crs. X i 18 Stabilirea crs. X, Y i 18
Stabilirea crs. 18 i 21
Stabilirea crs. 18 i 21
Utilizarea tehnicii
FISH n analiza
cromosomial
46,XX
47,XX,+21
47,XX,+21
47,XX,+21
SKY
Fenotip
normal

inv
t
rob
Anomalii de structur
echilibrate

Fenotip
patologic
Trisomii 47,XXX; 47,XXY; 47,+21;
47,+13; 47,+18; 47,+8
Monosomii 45,X
Anomalii de numr
Fenotip
normal

Crs D i G variaii ph sau s:
Crs 1,9,16,9,Y variaii qh
Polimorfisme
Fenotip
normal
46,XX
46,XY
Cariotip normal
Fenotip
patologic
del
dup
r
i
Anomalii de structur
neechilibrate

??? polimorfisme
p i q conin segmente cromozomiale
codificatoare i necodificatoare
p+ sau p- - anomalii
q+ sau q- - anomalii
c mai mare sau mai mic polimorfism
t mai mare sau mai mic polimorfism
h+ sau h- - polimorfism
s+ sau s- - polimorfism
Testul cromatinei sexule
Testul cromatinei sexule X = testul Barr - vizualizarea crs X inactiv,
heterocomatinizat pe nucleele interfazice ale celulelor somatice
Testul cromatinei sexule Y = testul F vizualizarea a 2/3 din braul
qY pe nucleele interfazice ale celulelor somatice sau ale
spermatozoizilor
Cromozomul Y ~ 300 gene:
gene reglatoare masculinizante
pseudogene
!!! Braul q conine heterocromatin
constitutiv
Cromozomul X ~2000 gene:
gene structurale somatice
gene reglatoare feminizante;
gene structurale feminizante;
gene structurale masculinizante

!!! Important
Cromozomul X este indespensabil celulei somatice i
:
n cel 46,XX este activ numai un X
n cel 46,XY este activ i X i Y
n cel 47,XXX - este activ numai un X
n cel 47, XXY- este activ numai un X i un Y
n cel 48, XXXY- este activ numai un X i un Y
Cromozomul Y este obligator pentru
De ce? Exist o explicaie?
Dimorfismul sexual - echilibrat
Caractere sexuale primare - diferite
Caractere sexuale secundare - diferite
Caractere somatice - asemntoare
45,X
47,XXY
Regiunile crs X i Y
I regiunea pseudoautosomal (PA) cu
gene comune i pe crs X i pe crs Y:
- Xpter
- Ypter
II regiunea crs X cu gene specifice
numai X
III regiunea crs Y cu gene
masculinizante
IV regiunea crs Y (2/3Yq) cu secvene
necodificatoare heterocromatin
constitutiv
Concluzii:
La persoanele 46,XX:
Sunt active genele celor 22 perechi autosomi;
Sunt active genele unui crs X + genele regiunii PA
Xpter a celui de-a doilea crs X
La persoanele 46,XY:
Sunt active genele celor 22 perechi autosomi;
Sunt active genele unui crs X + genele regiunii PA
crs Y (Ypter) + genele de ale crs Y (Yp i 1/3Yq
pericentromeric)
Rol: controlul dozelor genelor somatice la i
+ controlul diferenierii sexuale
!!! Dimorfism sexual echilibrat

Mecanisme moleculare implicate n
lyonizare (inactivarea crs X)
X q13 - centru de inactivare a crs X (XIC) - gena XIST (450
Kb) :
gena XIST - promotor cu trei regiuni:
regiunea activatoare;
regiunea de stabilizare a ARN XIST la nivelul crs
inactiv;
regiunea inhibitoare asupra regiunii activatoare.
regiunea codificatoare - codific ARN care rmne
asociat cu crs inactivat genetic
captul 3' al genei - regleaz numrarea cromozomilor i
determin care X (sau) rmne activ.

!!! Gena XIST este o gen atipic
a pierdut potenialul de codificare proteic
Funcia genei XIST (X inactivation specific transcript)
La nivel molecular codific sinteza ARNm-XIST;
La nivel celular inactivarea unui crs X
ARNm XIST rmne ataat la crs inactiv
Dezacetilarea H1
Heterocromatinizarea crs X
La nivel de organism controlul dozelor genelor X-
lincate materne i paterne controlul dezvoltrii
organismului feminin
Amprentarea genomic
(sau imprinting-ul parental)
Mecanism de reglare a activitaii transcripionale i
expresiei fenotipice a unei gene din perechea de alele
reprezint represarea permanent, dependent de
originea parental:
a unei gene sau
a unui cromozom sau
a genomului sau
modificri epigenetice n cursul gametogenezei i/sau
embriogenezei precoce
Ex: genele X-lincate la ; diferite gene autosomale (s.
Angelman, s. Prader-Willy)
46,XX 46,XY
Crs X activ
eucromatinizat
Crs X activ
eucromatinizat
Crs Y
Bra p - activ
Bra q - inactiv
Crs X neactiv
heterocromatinizat
Corpuscul F
= 0,25 m
Corpuscul Barr
= 1m
Testul Barr
Cromatina sexual X:
- reprezint cromozomul X inactiv, heterocromatin facultativ,
n celulele somatice 46,XX;
- se prezint sub forma unui corpuscul Barr de 1m n nucleii
interfazici ai celulelor somatice;
- testul Barr este util n identificarea nr de crs X n celulele somatice:
NR crsX = nr corpusculilor Barr + 1 (un crs X activ).
46,XX 1 corpuscul Barr
46,XY 0
47,XXX 2
47,XXY - 1
45,X 0
48,XXXX 3
!!! Explicaia originii cromatinei X ipoteza M. Lyon (1961)
Testul F
Cromatina sexual Y:
- reprezint braul q al crs Y, heterocromatin constitutiv (2/3q), n cel.
somatice 46,XY sau n spermatozoizii 23,Y;
- se prezint sub forma unui corpuscul F (fluorescent) de 0,25m n
nucleele interfazice;
- testul F este util n identificarea crs Y (determinarea prenatal a
sexului):
NR crsY = NR corpusculilor F
46,XX 0
46,XY 1
47,XYY 2
47,XXY - 1
48,XXYY 2
46,X,i(Yp) 0
46,X,i(Yq) 1 (0,5m)