METODE DE CHIMIE ANALITICA APLICATE IN CERCETAREA CRIMINALISTICA

C10.
8 Prepararea probelor pentru analize ........................................................................................... 2
8.1 Pregtirea probei pentru analiz................................................................................................. 2
8.2 Metode de extracie, separare i preconcentrare a analiilor n urme/microurme ....................... 4
8.3 Extracia n faz lichid ............................................................................................................... 6
8.4 Extracia n faz solid................................................................................................................ 9

Conf. Dr. Cecilia ARSENE

Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU

Notie curs 10
1

METODE DE CHIMIE ANALITICA APLICATE IN CERCETAREA CRIMINALISTICA

8 Prepararea probelor pentru analize

8.1 Pregtirea probei pentru analiz
Procedeul de prelevare a unei probe supuse analizei este un pas crucial n orice procedur
analitic i va cuprinde de cele mai multe ori:
-

stabilirea locaiei de recoltare a probei;

metodele de recoltare;

curarea vaselor/dispozitivelor;

omogenizarea;

uscarea probei dac este cazul (filtrele cu materia suspendat total rezultat la filtrarea
precipitaiilor);

conservarea probei;

transportul probei;

stocarea probei.
De multe ori ncrederea ntr-un rezultat analitic este condiionat de calitatea probei obinut n

urma sampling-ului. De obicei se iau toate msurile de precauie n vederea prevenirii alterrii
probei prelevate. Cu ct este mai mic concentraia analitului cu att va crete riscul ca n matricea
probei, n reactivii de lucru sau n compoziia vasului de stocare s fie prezent un component care
va interfera puternic n procesul de cuantificare, n mod direct sau indirect. Este foarte important ca
blank-urile, materialele de referin i standardele s fie tratate exact n aceeai manier de
separare i la aceleai intervale de timp ca i probele originale.
Planul de efectuare a sampling-ului vizeaz aspecte precum pregtirea containerelor
corespunztoare de efectuare a sampling-ului (curarea acestora) i chiar pregtirea reactivilor
care vor fi adugai n vederea prevenirii alterrii probei n timpul stocrii i a transportului pn la
laboratorul de analiz.
Funcie de tipul analizei, mrimea i tipul probei ce vor fi colectate, se va alege i tipul de
container necesar (de sticl, de plastic). Pentru probele lichide este necesar s se asigure un
echilibru ntre pereii vasului de stocare i prob (proces numit echilibrare) prin cltiri repetate i
energice ale vasului de stocare cu proba lichid prelevat. Vasele utilizate pentru stocare i
transport trebuie s fie foarte curate, ca i instrumentele utilizate n timpul sampling-ului, pentru a
nu contamina proba. Dup recoltare i stocare probele se eticheteaz de obicei cu informaii
referitoare la sursa de prelevare a probelor, data i timpul la care s-a efectuat sampling-ul.
Modul de efectuare a sampling-ului este deosebit de important mai ales cnd se are n vedere
prevenirea contaminrii probelor prelevate prin intermediul instrumentului folosit la realizarea
sampling-ului i a containerelor de stocare. De obicei, probele prelevate se eticheteaz n mod
corespunztor cu informaii referitoare la sursa de prelevare a lor, data i timpul la care s-a
efectuat sampling-ul, eventualii componeni de analizat.
Dup prelevare, probele vor fi transportate la centrul de analiz n cel mai scurt timp posibil,
deoarece exist riscul pierderii componenilor n urme, datorit absorbiei pe pereii containerului
Conf. Dr. Cecilia ARSENE
Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU

Notie curs 10
2

METODE DE CHIMIE ANALITICA APLICATE IN CERCETAREA CRIMINALISTICA

de stocare sau a contaminrii probei, datorit componenilor din care este confecionat containerul.
Dac proba necesit o stocare pe o perioad mai mare de timp, este indicat ca aceasta s fie
ngheat. Dup sampling urmeaz tratamentul fizico-chimic, analiza probei, calcularea i
exprimarea rezultatelor. Calculul i exprimarea rezultatelor se face incluznd erorile ce survin n
toate etapele analizei. Toate datele sunt convertite n concentraii cu ajutorul funciei de etalonare
sau calibrare a sistemului analitic folosit.
n timpul transportului compoziia probei poate fi modificat mai ales datorit unor reacii induse
de perturbarea mecanic a vaselor de stocare. n cazul transportului ctre centrele de analiz a
probelor gazoase cu ajutorul unor tuburi speciale exist riscul apariiei fenomenului de difuzie al
gazelor prin materialul din care este confecionat tubul fapt care poate duce la distrugerea sau
contaminarea probei. Timpul necesar transportului probei de la locul prelevrii acesteia pn la
centrul de analiz prezint importan deosebit de asemeni. De multe ori exist riscul pierderii
componenilor aflai n urme datorit absorbiei acestora pe pereii containerului de stocare sau a
contaminrii probei datorit componenilor din materialul din care este confecionat containerul.
Pentru probele solide cerinele majore cer ca probele s fie reprezentative dar, din motive
economice, s nu fie mai mari dect strictul necesar (dei uneori probe de ordinul kg sau al sutelor
de kg trebuie s fie luate pentru a se ndeplini condiia de reprezentativitate). n cazul probelor
solide mrimea probei depinde de precizia cerut, omogenitatea materialului i de mrimea
granulelor. La prelucrarea acestor probe este necesar parcurgerea unor etape precum
mrunirea, cernerea i omogenizarea materialului. Fiecare din aceste operaii pot conduce la o
serie de artefacte. De exemplu la mrunire se degaj cldur ceea ce poate duce la pierderea
unor componeni volatili iar la cernere are loc expunerea granulelor nou rezultate la aciunea
aerului care poate conduce la apariia procesului de oxidare care va afecta de exemplu starea de
valen a unor elemente importante, Fe(II) i Fe(III).
Pentru probele lichide importante sunt omogenitatea probelor i echilibrarea. Omogenitatea
este uor de realizat n cazul unor probe mai mici iar echilibrarea, asigurarea unui echilibru ntre
pereii vaselor de stocare i prob, se poate realiza prin cltiri repetate i energice ale vasului de
stocare cu proba lichid sau gazoas care se preleveaz. Procesul de echilibrare este deosebit de
important mai ales n cazul vaselor de stocare mici la care raportul suprafa volum este foarte
mare i la care pierderea componenilor datorit procesului de adsorbie poate fi destul de mare.
Metodele folosite n analize fac parte din categoria celor clasice sau a celor instrumentale.
Selectarea procedeului adecvat de analiz depinde de urmtoarele criterii:
- concentraia analitului din prob;
- numrul probelor de analizat;
- timpul care poate fi afectat pentru o analiz;
- costul unei analize.
Metodele analitice care se folosesc n analizele de mediu sunt prezentate n Tabelul 6.1.
Metodele de analiz pot fi privite ca metode specifice, selective sau universale. Metodele specifice

Conf. Dr. Cecilia ARSENE

Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU

Notie curs 10
3

METODE DE CHIMIE ANALITICA APLICATE IN CERCETAREA CRIMINALISTICA

dau rspuns numai pentru un analit i rezultatul obinut prin aplicarea acestor metode nu este
afectat de prezena interferenilor.
Tabelul 6.1: Metode analitice, principiile lor i aplicaii tipice pentru analizele de mediu.
Metoda
Titrimetrie

Gravimetrie
Spectroscopie

Principiu
Adugarea unei soluii
standard la o prob pn cnd
reacia este complet aa cum
indic modificarea de culoare a
indicatorului adugat.
Permite determinri de
concentraii >1 mg L-1.
Precipitarea analitului dintr-o
soluie i cntrirea reziduului
dup calcinare
Interacia radiaiei
electromagnetice cu proba

Cromatografia

Separarea compuilor dintr-un

amestec odat cu trecerea lor
printr-o coloan

Electrochimice

Msurarea unor proprieti

electrice

Sub-domenii
Neutralizare
Precipitare
Complexare
Reducere/oxidare

Aplicaii
Alcalinitate/aciditate
Cloruri
Duritate
Oxigen dizolvat

Sulfat, Cloruri
UV/visible
Infrarou (IR)
Absorbia atomic sau
emisia atomic
Cromatografia de gaze
(GC)
Cromatografie ionic
(IC)
Electrozi ion selectivi
Voltametrie

Fe n ap, SO2 n aer,

O3 n aer
Oxidani din aer
Metale n urme (Pb,
Cu, Cd, Zn)
Pesticide
Hidrocarburi n aer
Ioni n soluie (Cl-,
SO42-, NO3-)
pH, fluoruri
Metale n urme (Pb,
Cd, Cu)

8.2 Metode de extracie, separare i preconcentrare a analiilor n urme/microurme

Dei multe din probele prelevate pot fi analizate direct, de multe ori se prefer ca acestea s fie
preparate n mod adecvat pentru analiz. Metodele de tratament pentru probe depind de tipul de
prob, analitul de determinat i metoda analitic de folosit. Scopurile pregtirii probelor includ:
-

Trecerea probei i a analitului ntr-o form potrivit pentru metoda aleas.

Eliminarea substanelor interferente.

Concentrarea probei.

Metodele tipice de prelucrare a probelor includ:

Dizolvare/Solubilizare/Mineralizare: metoda prin care o prob solid este adus n soluie nainte
de a putea fi analizat de ctre cele mai multe metode. Ca si metode se cunosc: solubilizare n
acizi pe baie de nisip, refluxarea, solubilizarea ultrasonic sau cu microunde.
Filtrarea: procesul de filtrare a probelor pentru separarea fazei lichide (n care se poate face
determinare pentru compuii solubili) de faza particulat aflat n suspensie.
Extracia cu solvent: Analiii organici de obicei sunt extrai ntr-un solvent organic. Metoda poate fi
folosit i pentru concentrarea probei.
Alte metode de prelucrare pot include: uscarea, calcinarea, fierberea, precipitarea,
complexarea, reducerea, oxidarea. Probele solide de obicei se usuc n cuptoare pentru
ndeprtarea apei nainte de aplicarea oricror altor tratamente.
Obinerea informaiilor analitice pentru orice sistem presupune detectarea, identificarea i
analiza cantitativ a tuturor componenilor dintr-un amestec. Analiza unei probe complexe (produi
Conf. Dr. Cecilia ARSENE
Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU

Notie curs 10
4

METODE DE CHIMIE ANALITICA APLICATE IN CERCETAREA CRIMINALISTICA

naturali, biologici, industriali), aa cum se impune astzi chimiei analitice, nu se poate efectua prin
analiza direct a componenilor n condiii de coprezen deoarece, practic, nu exist nici un
reactiv al crui grad de selectivitate sa-l fac insensibil la interferene, i nici un aparat de msur,
orict de perfecionat, care s nu conduc la erori la determinare.
La analiza unor probe complexe, aa cum se ntlnesc foarte frecvent n practica analitic, nu
se poate efectua prin urmare determinarea direct a componenilor nici chimic i nici instrumental
n primul rnd din cauza interferenelor. Analiza corect a unei probe ce conine mai muli
componeni impune ca naintea operaiei de msurare propriu-zis (clasic sau instrumental), s
se realizeze separarea componenilor.
Pentru sistemele cu grad de complexitate moderat se pot face determinri i n prezena unor
interferene daca analitul de interes este transformat n forme care s nu denatureze rezultatul
analizei. Pentru a se putea efectua analiza componenilor se introduc ageni selectivi de
complexare pentru mascarea unor componeni sau se introduc reactivi, care s modifice starea de
oxidare a unor ioni care interfer. Obiectivul poate fi atins dac, n mod auxiliar, n sistemul de
interes se introduc de exemplu a) ageni specifici de complexare (pentru mascare analitic), b)
reactivi care modific starea de oxidare a elementelor interferente (Ni2+, DMG, mediu NH3). Dac
sunt prezeni n sistem i ioni de Fe2+ (are potenial de a complexa), se face trecerea Fe2+ la Fe3+ i
apoi la [FeF6]3- de exemplu. Dac n sistem exist ionii de Fe3+ i Cr3+ pentru dozarea gravimetric
a Fe3+ n mediu amoniacal, Cr3+ este oxidat la CrO42-.
oxidare
complexaresauprecipitarecuNH 3
det er min areindirecta
(Ni2+, Fe2+)

(Ni2+, Fe3+)
(Ni2+, FeF63-)
Ni

Analiza corect a unei probe multicomponente impune ca naintea operaiei de msurare s se

procedeze la separarea constituenilor probei pentru aducerea lor n gama analitic de
determinare, la concentrarea acestora. Separarea i concentrarea au un rol foarte important n
special n cazul analizei microcomponenilor, n majoritatea cazurilor de corectitudinea acestora
depinznd corectitudinea determinrilor. Separarea are drept scop clasificarea unui sistem n
prile sale individuale, cu obiectivul major de a realiza o fracionare pn la nivelul eliminrii
interferenelor.
c1
S (sistem multicomponent)

c1, c2, c3, ...., cn

c2
cn

Din punct de vedere analitic separarea se definete ca un proces ipotetic de izolare a n

fraciuni distincte macroscopic, fiecare fraciune cuprinznd unul din cei n componeni care
constituie amestecul de analizat.

Conf. Dr. Cecilia ARSENE

Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU

Notie curs 10
5

METODE DE CHIMIE ANALITICA APLICATE IN CERCETAREA CRIMINALISTICA

Atunci cnd o metod prezint un grad de selectivitate mrit pentruun analit, scopul efecturii
unei analize cantitative, calitative sau de caracterizare este mult simplificat.
De exemplu, analiza cantitativ a glucozei din mierea de albine se poate realiza uor dacetoda
este selectiventru glucoz, chiar i n prezena altor zaharuri reductoare, cum ar fi fructoza. Din
pcate foarte puine metode sunt selective n raport cu o singur specie.
n absena interferenilor, relaia de legtur ntre semnalul probei, Sprob i concentraia
analitului, CA este
Sprob = kACA

(Eq. 1)

unde kA reprezint sensibilitatea pentru analit. n prezena unui interferent, ecuaia devine
Sprob = kACA + kICI

(Eq. 2)

unde kI i CI reprezint sensibilitatea i, respectiv, concentraia interferentului. Selectivitatea unei

metode este determinat de diferena relativ ntfre sensibilitatea sa pentru analit i interferent. n
cazul n care kA este mai mare dect kI, atunci metoda este mai selectiv pentru analit. Metoda va
fi mai selectiv pentru interferent dac relaia invers este adevarat.
Chiar dac o metod este mai selectiv pentru un interferent, aceasta poate fi folosit la
determinarea concentraiei analitului n cazul n care contribuia interferentului la Sproba este
nesemnificativ. Coeficientul de selectivitate KA,I reprezint o metod de caracterizare a selectivitii
metodei.

K A,I =

kI
kA

(Eq. 3)

Din ecuaia anterioar se afl kI care se nlocuiete n Eq. 2, obinndu-se n final

Sproba = kA(CA + KA,ICI)

(Eq. 4)

Din relaie se observ c un interferent nu va reprezenta o problem atta timp ct produsul

dintre concentraia sa i coeficientul de selectivitate vor fi semnificativ mai mici dect concentraia
analitului.
KA,ICI <<CA

(Eq. 5)

Atunci cnd un interferent nu poate fi ignorat, o analiz acurat trebuie s nceap cu separarea
analitului de interferent.
8.3 Extracia n faz lichid
Este o tehnic potrivit la analiza unui numr redus de probe, prezint probleme cu formarea
emulsiilor i necesit consum mare de solveni organici. Se realizeaz n plnii de separare
(Figura 8.1a) prin punerea n contact a celor dou faze. Se aplic speciilor chimice cu coeficieni
de distribuie (D) mari i apropiai. Cele dou lichide sunt plasate n plnia de separare i, ulterior,
se intervine cu agitare pentru a crete suprafaa zonei de contact dintre cele dou faze. Atunci
cnd extracia este complet, lichidele sunt lsate pentru a se separa, cu faza mai dens localizat
la partea inferioar a plniei. Extraciile lichid-lichid pot fi efectuate chiar i n containerul probei
prin adugarea solvenilor de extracie atunci cnd probele sunt colectate. Sistemul, dup agitare,
Conf. Dr. Cecilia ARSENE
Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU

Notie curs 10
6

METODE DE CHIMIE ANALITICA APLICATE IN CERCETAREA CRIMINALISTICA

se las o perioad, cele dou faze se separ (analitul este partiionat n faza organic). Solventul
este pstrat iar matricea probei este supus unor cicluri repetate de extracii. Extractele de solvent
se combin n final pentru ali pai. Pesticidele n ap de exemplu, pot fi pstrate pentru perioade
mai mari prin extragere ntr-un volum mic de hexan care se adaug la prob direct n cmp.

Figura 8.1.a: Plnie de separare pentru

extraciile lichid-lichid.

Figura 8.1.b: Reprezentarea schematic a microextraciei

lichid-lichid (LPME) cu o pictur de 1 L ataat la vrful
acului seringii.

Microextracia n faz lichid (liquid phase microextraction, LPME) poate fi realizat prin
extracie cu o singur pictur (single drop extraction (principiu prezentat n Figura 8.1.b) i LPME
asistat de membrane. Microextraciile lichid-lichid presupun folosirea unei faze extractante care
este o pictur de 1 L suspendat de vrful unei microseringi (Figura 8.1.b). Dezavantajele la
aceste tip de microextracie sunt date de instabilitatea picturii (probleme la repetabilitatea
extraciei) i alegerea solventului (solvenii prea volatili nu sunt potrivii iar solvenii cu puncte de
fierbere mari au aplicabilitate limitat; se folosesc acetat de n-octil, alcool isoamilic, octan, nonan,
etilen glicol) (Hyotylainen, T., Critical evaluation of sample pretreatment techniques, Anal. Bionala.
Chem., 394, 743-758, 2009).
Membranele fac sistemul LPME mult mai flexibil i fiabil. Extracia poate fi realizat n regim
static sau dinamic n vasul probei care este echipat cu membrana (poate fi tip pung sau fibr).
Poate fi utilizat n regim off-line i on-line dar la regimul on-line configuraia sistemului este mai
complex. n modulul static eficiena la extracie este destul de bun dei adeseori nu este
cantitativ. Deoarece volumul final al extrasului este mic, factorul de mbogire este mare de
obicei (ceea ce nseamn c de multe ori extrasul obinut poate fi injectat direct n instrumentul
analitic). Sistemele on-line au avantajul c pot crete foarte mult sensibilitatea la determinare. Are
avantaje fa de extracia cu o singur pictur deoarece nltur dezavantajul legat de
instabilitatea picturii i reduce consumul de solveni, evit formarea emulsiilor, funcioneaz ca un
sistem de extra cleanup deoarece compuii cu mas molecular mare nu pot trece de bariera
membranei. Dezavantajul tehnicii cu membran const n faptul c poate da efecte de memorie
dac membranele nu sunt curate n mod adecvat i schimbate dup fiecare extracie.

Conf. Dr. Cecilia ARSENE

Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU

Notie curs 10
7

METODE DE CHIMIE ANALITICA APLICATE IN CERCETAREA CRIMINALISTICA

Tehnica extraciei lichidlichid n echicurent continuu este versiunea automat a tehnicii

plniilor de separare pentru un spectru destul de larg de compui organici nevolatili i semivolatili.
Se realizeaz prin punerea n contact a celor dou faze dar faza care conine agentul de extracie
se introduce n sistem n regim continuu. Principiul de construcie este prezentat n Figura 8.2.
Solventul este adugat n partea superioar a extractorului lichid-lichid, care conine proba apoas.
La trecerea prin prob solventul extrage analitul de interes. Extractul se colecteaz ntr-un balon
cu fund rotund, se fierbe i se distil, i solvent proaspt este transmis ulterior ctre partea
superioar a extractorului pentru a continua procesul. Procesul ruleaz pentru 12-24 ore i este
utilizat pentru situaii n care este necesar s se lucreze cu probe de dimensiuni mari dar
concentraii foarte mici n analit. Extrasul coninut n balonul de fierbere este utilizat pentru ali pai
analitici.

a
b
Figura 8.2: Schema pentru extracia continu lichid-lichid cu solvent mai puin dens (a) i mai dens (b)
dect proba de analizat.

O alt cale o poate constitui folosirea unui regim de extracie dinamic, care este un sistem care
furnizeaz continuu solvent de extracie proaspt. Sistemul dinamic prezint o serie de avantaje
peste sistemul clasic cum ar fi: 1) proba este continuu expus la aciunea unor poriuni proaspete
de solvent de extracie astfel nct cinetica de extracie este continuu mbuntit, 2) se folosete
o unitate de filtrare instalat n sistem ceea ce va conduce la eliminarea etapelor de filtrare i
splare dup extracie, 3) volumele de solveni sunt mai mici dect n regimul static unde se
folosete exces pentru a garanta o extracie eficient, 4) timpul de extracie este mai mic n regimul
dinamic, 5) se minimizeaz pericolul de contaminare a speciilor extrase n timpul manipulrii, 6)
extracia dinamic poate fi folosit i pentru analii instabili deoarece n acest mod analiii sunt
imediat nlturai din sistemul de extracie i nu mai sunt susceptibili la temperaturi sau presiuni
mari sau alte condiii de extracie care pot conduce la degradarea lor.
O problem important n extraciile n regim dinamic const n faptul c sistemele sunt mult mai
complexe. n extraciile n regim dinamic proba este pus ntr-un vas unde este amestecat cu un
suport inert precum nisip marin splat. Suportul inert este de asemenea folosit pentru a umple
volumul mort al vasului. Unele matrici de probe se pot comporta neateptat n extraciile n regim
dinamic i pot conduce la situaii care blocheaz n totalitate sistemul. Pot fi ntlnite situaii n care
Conf. Dr. Cecilia ARSENE
Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU

Notie curs 10
8

METODE DE CHIMIE ANALITICA APLICATE IN CERCETAREA CRIMINALISTICA

probe de sedimente formeaz dopuri de argil, blocnd ntreg sistemul ntr-o manier n care chiar
i la presiuni foarte mari (>200 bari) apa nu pote fi trecut prin sistem (Hyotilainen, 2009).
8.4 Extracia n faz solid
Extracia n faz solid (solid phase extraction, SPE) este una din cele mai utilizate tehnici de
chimitii analiti pentru cleanup i concentrarea probei (Majors, R.E., New design and formats in
solid-phase extraction sample preparation, LCGC, 19, 678-687). SPE este potrivit pentru analii
nepolari i polari cu volatilitate diferit n probele lichide. Tehnica izoleaz analitul n baza aceluiai
principiu ca la cromatografie dei cu eficien mult mai mic. ntr-o extracie n faz solid proba
este trecut printr-un cartu care conine particule solide care servesc ca i sistem de adsorbie.
Pentru probele lichide adsorbentul solid este izolat ntr-un cartu disc sau coloan (Figura 8.3).

Figura 8.3.a,b: Cartue de extracie

n faz solid tip disc (a) i cartu
(b).

La cartue se folosesc frite la ambele capete ale umpluturii n timp ce la sistemul disc acesta
apare mai degrab ca un filtru membranar. O scdere a raportului discului lungime-diametru va
permite o cretere a debitului i a vitezelor de extracie comparativ cu sistemele tip cartu.
n Figura 8.4 este reprezentat schematic procesul de extracie n faz solid. Sunt prezentate
trei particule poroase pentru SPE cu diametrul dp. La captul particulelor i a cavitilor exist o
faz staionar legat cu grosimea d. Analiii reprezentai prin picturi de diferite forme se distribuie
ntre fazele staionar i mobil. n faza mobil aceti analii se deplaseaz de sus n jos cu viteza
v. n faza staionar analiii nu se deplaseaz pn cnd nu difuzeaz din nou n faza mobil.
Analitul care se reine cel mai puin (cerc plin) se deplaseaz cel mai uor prin coloan i petrece o
fracie mai mare de timp n faza mobil.
Schema prezentat n Figura 8.5 arat etapele unei extracii n faz solid. Compuii sunt
reinui i eluai dup cum faza mobil i transport prin faza staionar (sorbent) care a fost
condiionat n prealabil cu un solvent organic pentru a fi activat. n cele mai multe aplicaii faza
mobil este proba apoas care permite reinerea analiilor pe sorbent. Etapa este urmat de
folosirea unui solvent de solubilizare ca faz mobil pentru a elua analitul reinut pe sorbent i care
este colectat pentru alte analize.

Conf. Dr. Cecilia ARSENE

Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU

Notie curs 10
9

METODE DE CHIMIE ANALITICA APLICATE IN CERCETAREA CRIMINALISTICA

Figura 8.4: Prezentarea grafic a extraciei n faz

solid.

Figura 8.5: Etapele unei extracii n faz solid:a) condiionarea sorbentului, b) trecerea probei, c) splarea
prin care analitul este reinut pe sorbent i interferenii sunt nlturai n rezervorul de colectare, d) eluaia,
prin care analitul (analii) este/sunt nlturai cu un solvent puternic.

Alegerea adsorbentului este determinat de proprietile speciilor care se rein i matricea n

care se afl acestea.
n situaia n care produsele farmaceutice care ar ajunge n apele din mediu ar constitui analiii
de interes din matricea vizat se tie c, deoarece concentraille speciilor de interes sunt mult prea
mici, ar fi nevoie de parcurgerea unor etape de preconcentrare i cleanup nainte ca proba s fie
injectat n sistemul gaz cromatografic. O procedur potrivit o reprezint extracia acestor
produse prin intermediul sorbenilor solizi, procedura de extracie avnd la baz stabilirea unor
echilibre multiple ntre faza lichid i faza solid aflat ntr-un cartu mic (SPE) sau a unui singur
echilibru (extracia prin sorbie).
Produsele farmaceutice de o anumit hidrofobicitate pot fi uor preconcentrate pe materiale cu
faze inversate precum silice modificat cu alchil sau materiale pe baz de polimeri. Deprotonarea
compuilor acizi sau protonarea celor bazici ar trebui inhibate pe ct posibil pentru a asigura
hidrofobicitate suficient pentru analii. De aceea, produsele farmaceutice ar trebui preconcentrate
n condiii acide, n timp ce analiii bazici ar trebui preconcentrai n medii bazice. Materialele mixte
(prezint faz inversat dar i proprieti de schimb ionic datorit prezenei de exemplu a gruprilor
acidului metan sulfonic pe suprafaa hidrofob a particulelor) ar putea fi folosite. n probe acidifiate,
analiii acizi i neutri se vor extrage n baza interaciilor hidrofobe n timp ce analiii bazici vor
interaciona prin mecansimul bazat pe schimbul ionic.
Conf. Dr. Cecilia ARSENE
Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU

Notie curs 10
10

METODE DE CHIMIE ANALITICA APLICATE IN CERCETAREA CRIMINALISTICA

Unele produse farmaceutice au proprieti hidrofile ceea ce face ca extracia lor dintr-un mediu
s fie foarte dificil dac se folosesc materiale convenionale de silice modificat cu alchil.
Procedurile de extracie a compuilor polari ridic probleme chiar i n prezent (Buchberger, 2007).
S-au dezvoltat totui materiale care mbuntesc retenia analiilor polari. Aceste materiale sunt
sorbeni polimerici care mbuntesc retenia compuilor polari fie prin grupri funcionale noi n
structura polimerului (material cu bilan ntre hidrofilicitate i hidrofobicitate) sau prin creterea
considerabil a dimensiunii materialului folosit. Exist indicaii clare c Oasis-HLB (copolimerul
divinilbenzenului cu vinilpirolidon) poate fi folosit pentru extracia simultan a produselor
farmaceutice acide, neutre i bazice la un pH neutru. Exist studii conform crora rinile de
poli(stiren/divinilbenzen) ntlnite cu numele de H2Ophilic DVB sau H2Ophobic DVB dau rezultate
bune la recuperarea antidepresivelor deversate n ape reziduale sau de suprafa.
De asemenea, de exemplu, o serie de sedative precum secobarbital i fenobarbital pot fi
izolate din ser prin extracie n faz solid folosind un adsorbent solid C18. Aproximativ 500 L
prob de ser se trec prin cartu, iar sedativele se rein prin extracie lichid-solid. Cartuul este
splat ulterior cu ap pentru a ndeprta urmele reziduale din matricea serului. n final, seativele
reinute sunt eluate de pe coloan prin extracie solid-lichid folosind 500 L aceton. Pentru muli
analii extraciile n faz solid nlocuiesc extraciile lichid-lichid deoarece sunt uor de folosit, timpii
de extracie sunt mai scuri, scad volumul de solveni i au o capacitate mbuntit de a
concentra analitul (Harvey, 2000).
SPE pentru produse farmaceutice poate fi aplicat off-line (on-line sampling cu efectuarea
etapei de preconcentrare n cmp i etap de eluie n laborator) dar i on-line (conectare la o
valv de injecie n loc de a efectua injecia prin bucla sistemului).
S-au dezvoltat i microextracii n faz solid (SPME). O fibr de silice topit este localizat n
acul unei microseringi. Fibra care este acoperit cu un film organic subire (poli(dimetil siloxan))
este imersat n prob i prin aciunea asupra unui piston fibra ajunge s fie n contact cu proba
pentru o perioad de timp. Fibra este apoi retras n ac i transferat de exemplu n gaz
cromatograf. La SPME exist i posibilitate de automatizare cu injectare direct n GC dar apar o
serie de riscuri legate de nenlturarea n totalitate a apei care poate ajunge n GC. La metodele
SPME, extracia este cantitativ i deoarece volumul de eluie este mic (10 -50 L) nu este nevoie
de reconcentrare prin evaporare. SPME poate fi folosit la analiza unor compui organici volatili
din probe lichide i solide, incluznd ap, ser, plasm, urin, buturi. Probele de plasm pot crea
probleme deoarece conduc la scderea recuperrii extraciei iar compuii cu mas molecular
mare (proteine) pot fi adsorbii ireversibil n faza sorbentului, ceea ce va conduce la o modificare a
proprietilor fazei staionare care va deveni de nefolosit (Hyoitilainen, 2009).
SPME este mai simpl dect SBSE deoarece aceasta necesit o interfa cu o unitate de
desorbie termic. SBSE este mai potrivit dect SPME pentru msurtori n cmp deoarece
fibrele de la SPME sunt foarte fragile. SBSE conduce la recuperri i sensibiliti mai bune. SBSE

Conf. Dr. Cecilia ARSENE

Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU

Notie curs 10
11

METODE DE CHIMIE ANALITICA APLICATE IN CERCETAREA CRIMINALISTICA

necesit n orice caz timpi de lucru mai mari. Ambele tehnici sunt de folos acolo unde volumul de
prob este limitat
n extraciile gaz-solid, proba este trecut printr-un container umplut cu un adsorbent solid. Un
exemplu de aplicaie pentru extraciile gaz-solid l constituie analiza compuilor organici pentru
carbon i hidrogen. Proba este trecut printr-o serie de adsorbeni n faz solid pentru
ndeprtarea CO2 i a H2O.
SPME i SBSE au la baz procese de extracie bazate pe stabilirea unui singur echilibru de
partiie ntre proba apoas i sorbentul solid (a se vedea i informaiile de la Seciunea 3.5.3). Pe
lng PDMS ca materiale de sorbie se pot folosi poliacrilai, copolimeri ai PDMS cu divinilbenzen,
copolimeri ai polietilenglicolului cu divinilbenzen, amestecuri de carboxen (adsorbent anorganic) cu
PDMS sau divinilbenzen. Eficiena extraciei pe faz de PDMS se mbuntete odat cu
creterea hidrofobicitii analitului.
Pentru a extinde aplicabilitatea extraciei ctre compui mai polari poate fi avantajos ca analitul
s fie derivatizat fie n soluie apoas nainte de extracie sau direct n faza sorbentului.
Derivatizarea n soluii apoase ridic probleme deoarece cei mai muli reactivi de derivatizare
necesit condiii neapoase.
Dac se consider echilibrul de partiie dintre analitul din faza apoas i sorbent, cantitatea de
analit n sorbent, n, poate fi calculat folosind legea conservrii maselor (Buchberger, 2007):

n=

K e Ve Vs 0
cs
K e Ve + Vs

Unde: Ve este volumul sorbentului

Vs este volumul probei, c 0s este concentraia iniial a analitului n prob i Ke este coeficientul de
partiie

Ke =

ce
cs

unde ce i cs reprezint concentraiile la echilibru ale analitului n sorbent i faza apoas. A se

observa c ecuaia pentru n neglijeaz posibilele echilibre suplimentare de partiie a analitului ntre
fazele apoas i solid sau de material organic dizolvat.

Conf. Dr. Cecilia ARSENE

Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU

Notie curs 10
12