Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
nucleici
Obiectivele:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
Acizi nucleici
1.
2.
ADN
a.
b.
Localizarea:
97-99% - concentrat n nucleu
1-3% - situat n MC.
Rolul: deine, pstreaz i transmite
informaia genetic.
ARN
1.
2.
3.
Localizarea:
11% - n nucleu
15% -n mitocondrii
50% - n ribosomi
24% - n hialoplasm
Deosebim:
ARN mesager
ARN ribozomal
ARN de transport
ARN nuclear heterogen
ARN nuclear cu molecul mic
Structura chimic a AN
La
hidroliz AN degradeaz n
mononucleotide (MN),
MN la hidroliza complet degradeaz n
BA, pentoze i acid fosforic.
ADN----A;
G; C; T + dR+ H2PO3
ARN---- A; G; C; U+ R+ H2PO3
Bazele azotate
BA se clasific n:
1. majore:
a. purinice: A, G
b. pirimidinice: C,T,U
2. minore:
a. purinice (2metil A; 1 metilG)
b. pirimidinice (5 metil C;5 hidroximetil C)
Structura BA
Purine:
pirimi
dine:
Structura BA minore
Proprietile BA:
1.
2.
3.
4.
5.
NH2
NH2
NH
NH
forma amino
forma imino
Citozina
C
HN
forma lactam
OH
forma lactim
Formele
mai stabile:
Forma lactam este mai
stabil dect forma lactim
Forma amino este mai stabil
dect forma imino
Pentoze
Riboza
HO
CH2
OH
1
Dezoxiriboza
HO CH2
OH OH
OH
OH
lipsete
2-OH
Structura R i dR
Nucleozide
Alctuite dintr-o BA
(purinic sau pirimidinic)
+
o pentoz (R sau dR)
BA purinice +R(dR)
ozin
---
Nucleozide
Nucleozide
Structura nucleozidelor
Nucleozidele
Proprietile:
Mai
solubile n H2O
dect BA
Mai stabile n soluii
alcaline
Uor se hidrolizeaz la
nclzire cu acid
Rest al
acidului
Nucleozid
NUCLEOTIDE
NUCLEOTIDE
NUCLEOTIDE
Nucleotide - Rolul
1.
2.
3.
4.
5.
Element structural al AN
Intermediari energetici (ATPpurttorul energiei chimice n
organism)
Intr n componena Co
Servesc ca activatori ai unor
molecule (UDP-Gl; CDPcolina)
Servesc ca mesageri
secunzi intracelulari ai
hormonilor (AMPc; GMPc)
AMPc
NH2
N
N
O
CH2
O P
AMPc
A d e n in e
N
N
R ib o s e
OH
3,5adenozin
monofosfatul ciclic
(AMPc) este
mesager secund
imlicat n
transmiterea
mesajului hormonal
din mediul
extracelular n
interiorul celulei.
NUCLEOTIDE
Structura primar a AN
Reprezint
secvena mononucleotidelor n
lanul polinucleotidic liniar, legate ntre ele
prin legturile 3' - 5' fosfodiesterice
Catenele au dou capete:
5 nucleozid tri fosfatul;
3 gr. OH liber
Watson i Crick
(1953) au postulat
modelul structural al
moleculei de DNA dublul helix (spiral
dubl)
Caracteristicile dublei
spirale:
1. 2
lanuri polidezoxiribonucleotidice se
rsucesc helicoidal n jurul unui ax comun,
formnd dublul helix cu orientare spre
dreapta;
2. Cilindrul ce ncadreaz dublul helix are
d=2nm
6.
10. nu este
simetric, avnd
adncituri mici i
mari
Asimetria
demonstreaz
orientarea steric
a ADN n replicare
i transcriere
3.
4.
forma A:
- conine 11 resturi la o spir,
- este rsucit spre dreapta.
- Pasul spirei este de 32 A
forma clasic B:
- conine 10,4 perechi de baze per spir.
- este rsucit spre dreapta.
- 10 nucleotide ocup 34 A (3,4 nm).
- o nucleotid cuprinde 3,4A (0,34 nm).
Conformaia Z
este rsucit spre stnga.
conine 12 baze per spir
pasul spirei este de 45 A
-
Caracteristicile conformaiilor
elicei ADN
Caracteristici Conformai Conformaie Conformaie
eB
A
Z
Sens de
rsucire
Perechi de baze
per spir
Pasul (nlinea
pe ax)/pe plan
de baze
Diametru
Fosa: mare
mic
drept
drept
stng
10,4
11
12
3,4nm
0,34 nm
3,2 nm
0,29 nm
4,5 nm
G-C -0,35 nm
C-G 0,41 nm
2 nm
2,5 nm
1,8 nm
Mare i
profund
ngust i
profund
ngust i
profund
Mare i
profund
ngust i
profund
Structura ADN B
Imaginea se bazeaz pe
studiile cu raze X realizate
pe dodecamerul
d(CGCGAATTCGCG)
Structura ADN A
Structura ADN Z
ADN circular
La
De la ADN la cromozomi
In
Organizarea materialului
cromosomial la eucariote
n
Nucleosomul
este un octamer histonic (2H2A; 2H2B;
2H3; 2H4) nfurat de aproximativ de 2
ori de ADN (dublul helix, cu lungimea de
146 perechi de nucleotide).
ntre 2 nucleosomi se gsete ADN de
legtur (linker) asociat cu H1
Nucleosomul
Nivelele de
compactare a ADN
fiecare
unitate de
n
nucleu
ADN spiralat
-Primul
nivel- de
Histonele sunt
proteine bazice
bogate n aa bazici
(Arg pt.H2A, H2B i,
Lys pt H3, H4).
Nivelele de
compactare a ADN n
nucleu
-Primul nivel Polinulceozomul
seamn cu nite
mrgele pe a
(=fibrile de cromatin
de 10nm ).
Mrgele de ametist
Nivelele de
compactare a ADN
n nucleu
-al doilea nivel Polinucleozomul se
superspiraleaz pentru a
forma structura de solenoid.
Compactizarea
cromatinei
DNA
Firul de
cromatin?
~ 1,000
30 nm Solenoid ~40 / 50
Nucleosoma
= ctamer de
histone
H2a, H2b, H3, H4
146 / 200 bp DNA
Compactizare
~10 ori
Cromosoma metafazic/
cromatina interfazic
~ 10,000
Nivelele de compactare
a ADN n nucleu
-nivelele 3,4 i 5-
-Fibrele de cromatin se
compacteaz i mai mult
formnd domenii n form de
bucl.
- Aceste domenii n bucl sunt
superspiralizate i organizate
n structuri distincte numite
cromozomi.
- ADN -ul uman nuclear
( genomul) const n 23
perechi de cromozomi.
STRUCTURA ADNului
Denaturarea i
renaturarea
Denaturarea
Denaturarea
ADN
Renaturarea
La
Renaturarea
ADN
Hibridizarea AN
Hibridizarea AN
1. AN se denatureaz separat;
2. se incubeaz mpreun ambele tipuri
de DNA (ori DNA i RNA).
3. n condiiile unui grad relativ crescut
de complementaritate a acestora se
formeaz moleculele hibride (DNADNA sau DNA-RNA). Aceste
molecule constau din sectoare
spiralate i nespiralate. Cu ct gradul
de nrudire este mai nalt, cu att
hibridizarea este mai complect.
Hibridizarea AN
Hibridizarea AN
Hibridizarea AN
Aceast
REPLICAREA
TRANSCRIPIA
Dogma central a
geneticei moleculare
RNA
Protein
Replicarea
transmiterea informaiei genetice de la ADN
parental la ADN fiic.
Localizarea: n nucleol
Proces semiconservativ
Biderecional
Semidiscontinuu
Semiconservativ
bidirecional
Bidirectional DNA
replication in E. coli
Caracteristicile:
Caracteristicile:
Este
bazat pe mpachetarea
complementar a BA
Catena-fiic este antiparalel cu
catena parental dar nu identic
dup secvena nucleotidic
Fora motrice a procesului este
hidroliza pirofosfatului
Sistemul multienzimatic
complex
1. Helicaza (Proteina DnaB) - desfacerea
dublului helix, treptat, pe poriuni mici
(necesit energie; consum 2 molecule
de ATP per 2 legturi de hidrogen
desfcute).
2. Single stranded proteins (SSBs) - se
leag de cele dou catene ADN i le
menine separate
Sistemul multienzimatic
complex
3. Topoisomerazele - I i II nltur
supertorsiunile ADN, rezolv problemele
topologice aprute n cursul desfacerii
lui.
Clase de topoizomeraze:
topoizomeraza I
acioneaz ca o endonucleaz reversibil, printr-un
ADN
Enzima
coasere
tiere
relaxare
topoizomeraza II
ADN-giraza
Introduce n molecula de ADN supertorsiuni (-), spre
stnga, n sens contrar celor create de naintarea bifurcaiei
de replicare; astfel compeseaz n avans constrngerile
impuse de desrsucirea duplexului de ADN
Necesit energie (consum de ATP)
Sistemul multienzimatic
complex
4. . Primaz
- sintetizeaz primerul
P
n direcia 5'- 3 .
Sistemul multienzimatic
complex
5. ADN polimeraza ( ADNp I, II, III)sinteza catenei fiice n direcia 5'3' .
- ADN p III:
aciune polimerazic (5'- 3)
- aciune exonucleazic (3'- 5)
- ADN p II - este implicat n reparea
leziunilor ADN (are activitate 3' -> 5
exonucleazic.
- ADN p I - posed activitate 5'- 3
exonucleazic, nltur primerul i-l
nlocuiete cu fragmente de ADN
P
CH2
Base
Cap 5'
CH2
Base
P
CH2
Base
CH2
Base
H20
+
3'
OH
P
CH2
P
5' CH2
3'
OH
P
Base
Pirofosfat
Base
OH
Cap 3 (n cretere)
ADN polimerazele la
procariote (continuare)
ADN pol IV
- Pol IV este o ADN polimeraz predispus la erori de
mperechere (nu are activitate de proof-reading ca la pol III,
pol II i pol I)
- Pol IV este responsibil de 50% din mutaiile adaptative.
ADN pol V
- Pol V aparine unei ci speciale de reparare (un fel de
ultima barier) denumit calea SOS de reparare a ADN.
- Pol V este sintetizat cnd celula este expus la doze mari
de radiaii sau de mutageni, cnd pot s apar lez. majore
ADN.
Sistemul multienzimatic
complex
6. ADN ligaza- unete fragmentele
Okazaki de pe catena ntrziat.
Catalizeaz formarea unei legturi fosfat
diesterice ntre 3'-OH a unui fragment de
ADN i extremitatea 5' monofosfat al altuia.
Helicase desface
dublu helix
SSB stabilizeaz
ADNmc
ADN polimeraza I
(exonucleaza)
nlocuiete ARN primer
cu ADN
Primaza sintetizeaz
un ARN primer pe
matri de ADN
Ligaza leag
Fragmentele
Okazaki).
Mecanismul replicrii
3 etape:
iniierea,
elongarea,
Terminarea
Iniierea replicrii
Origineareplicrii
Identificarea originii de
replicare
Dezrsucirea mediat de
ctre helicaz
(denaturarea) duplexului
ADN cu fomarea ADNmc
i a bifurcaiilor de
replicare
5
3
3
5
5
3
3
5
5
3
3
5
Formarea primozomului
(conine i primaza)
5
3
5
5
3
5
Originea replicrii
Originea replicrii
(oriC) este o regiune
de 245 perechi baze
bogat n AT
OriC este recunoscut
de ctre proteina dnaA
care se leag la oriC,
i care mpreun cu
proteina dnaB
(helicaza) desface
ADNdc (folosind ATP).
oriC
2. ETAPA DE
ELONGARE
Elongarea
DNA Polymerase
Mechanism
Elongarea
Elongarea decurge n
direcia 5' 3 i parcurge
cu aceeai vitez pe
ambele catene
Catena de baz se va
sintetiza continuu, iar cea
ntrziat - discontinuu: va fi
format din fragmente
Okazaki (dimensiuni de
1000 2000 nucleotide la
procariote i 150-200 la
eucariote).
Etapa de elongare
-Catena parental 3- 5 (care este citit n aceei direcie cu
deplasarea bifurcaiei de replicare) este copiat continuu.
-Catena nou astfel sintetizat este catena
leading.
Etapa de elongare
-Catena parental 5- 3 (care este citit n direcie opus fa
de deplasarea bifurcaiei de replicare) este copiat discontinu.
Catena nou astfel sintetizat este catena lagging i este
sintetizat n fragmente mici (1fragment per rund
sintez)-fragmentele Okazaki
Etapa de elongare
5
3
3
5
5
5
Etapa de elongare
ADN polimeraza I exclude primerii i sintetizeaz
complementar ADN.
Fragmentele snt unite cu enzima ADN ligaza
(necesit ATP la eucariote i NAD la procariote).
5
3
3
5
Primase
LagingStrand
Okazaki
fragment
5
RNA
Primers
Singlestrand
binding
proteins
DNA
Polymerase
5
3
Helicase
5
3
LeadingStrand
3. ETAPA DE TERMINARE
Terminarea replicrii
Regiunea de terminare :
- situat la 180 grade fa de ori;
conine capcane pentru
bifurcaia de replicare
- la acest nivel bifurcaiile de
replicare se ntlnesc i dezleag
catenele de ADN nc asociate.
Situsurile de terminare
- sunt pori care permit trecerea
bifurcaiei de replicare ntr-un
singur sens;
- conin 23 perechi de baze
TerD
TerA
oriC
TerC
TerB
Terminarea Replicarii
Un set de situsuri Ter opresc bifurcaia de replicare
care progreseaz n sensul acelor de ceasornic, al 2-lea
set blocheaz bifurcaia de replicare care avanseaz n
Invers acelor de ceasornic:
Situsurile Ter
foreaz cele dou
bifurcaii de
replicare s se
ntlneasc ntr-un
punct specific.
Cromozom
TerB
TerA
Replicarea
3
3
5
3
5
Replicarea
Direcia de avansare a
bifurcaiei de replicare
3
3
5
3
5
3
5
Replicarea
Direcia de avansare a
bifurcaiei de replicare
3
3
5
5
3
5
3
5
Replicarea
Direcia de avansare a
bifurcaiei de replicare
3
3
5
5
3
5
3
5
Replicarea
Direcia de avansare a
bifurcaiei de replicare
3
5
3
5
Fragment Okazaki
3
5
3 5
3
5
Replicarea
Direcia de avansare a
bifurcaiei de replicare
3
5
3
5
Okazaki fragment
3
5
3 5
3
5
Replicarea
3
5
3
5
3
5
3 5
35
3
5
Replicarea
3
5
3
5
3
5
35
35
3
5
Replicarea
3
5
3
5
3
5
35
35
3
5
Replicarea
3
3
5
3
5
35
3
5
REPLICAREA ADN
2
Topoisomerase
nicks DNA to
relieve tension
from unwinding
este bidirectional
Are mai multe origini de replicare
deoarece molecula de ADN este foarte
lung i viteza de aciune a replizomului
este mic
Histonele vechi se asociaz cu duplexul
nou care conine catena leading.
Bubbles
Replicarea la eucariote
Particulariti:
ADN polimerazele:
localizare
nucleu
nucleu
mitocondrie
nucleu
nucleu
funcie
nlocuire
primer
reparare
sinteza ADN
mitocondrial
Replicaza reparare
Sinteza
catena
lagging
similaritate Pol I
cu enzime
de la
procariote
Sinteza
caten
leading
Pol II
Pol II
Pol III
Pol II
Tabel comparativ:
Procariote
Eucariote
1 ori region
Viteza replicrii
1.000 perechi baze/sec
Viteza replicrii
100 perechi baze/sec
1 eoare la 1mil-10mil
Replicarea la eucariote
Bifurcaia replicii este de 3000 baze pe minut
comparativ cu 16.000 la procariote
Pe o molecul de ADN exist mai multe origini
FIDELITATEA REPLICRII
Telomer Telomeraza
Replicarea capetelor 5 ale
catenei fiice este incomplet
(teoria lui Olovnicov, 1971),
deoarece dup nlturarea
primerului ultimului fragment
Okazaki, ADN p I nu e
capabil s completeze
aceste goluri.
Astfel la fiecare replicare,
capetele ADN se scurteaz.
Telomerul
Aceasta nu afecteaz informaia genetic
deoarece catenele conin fragmente repetitive
neinformative telomere.
Telomer complex format din ADN i proteine
- sunt segmente de ADN repetitiv GGGTTA
Telomeraza
Telomerele
Mecanismul elongrii
capetelor cromozomului
la eucariote
cromozoma
Fixarea telomerei
elongarea
translocarea
GGGTTAG 3
AUCCCAAUC 5
TTAGGG
GGGTTAGGGTTAG
5
AUCCCAAUC
GGGTTAGGGTTAG
5
AUCCCAAUC
Inhibitorii telomerazei
oligonucleotidele modificate, complementare
regiunii matrice a RNA telomerazice.
specific se fixeaz de matria RNA telo a
omului, inhibnd activitatea telomerazic in vitro.
In vivo apare problema transportului inhibitorilor
prin membrana celular i micarea dirijat n
nucleul celular.
Ca inhibitori au fost testai i inhibitorii
reverstranscriptazelor azidotimidina,
didezoxiguanozina.
La
n
celulele embrionale,
n epiteliul intestinului,
spermatozoizi i
celule canceroase.
Reparaia ADN
1.
2.
3.
4.
Dezaminarea BA
Repararea defectelor de
mperechere a bazelor (prin
excizia nucleotidelor)
proteinele MUT
Reparaia prin
excizia dimerului
Repair of UV
Induced Thymine
Dimers
Mutaiile
Modificrile
genomului organismului,
care se pstreaz i se transmit prin
ereditate
se transmit apoi de la o generaie la
alta.
Modificrile pot interesa o pereche de
baze (mutatii punctiforme) sau un
grup de baze pe una sau pe ambele
catene ale unei molecule de DNA.
Mutaiile
Mutatiile punctiforme: pot decurge prin:
l. Substituie - misens mutatii, unde deosebim 2 tipuri:
a. Tranziie - o BA purinic este
nlocuit tot cu una purinc, una pirimidinic -tot cu una
pirimidinic.
b.Transversie - o pereche de baze
purinice este nlocuit cu una pirimidinic sau invers.
2. Inserie - const n ntroducerea unei perechi de baze
suplimentare n catena de DNA.
3. Deleia - const n excluderea unei perechi de baze n
aa mod ca ea nu mai poate f complementar i la
replicare apare "golul" n ambele catene.
Mutaiile
La afectarea segmentelor mari de gen apar
mutaii ntinse.
n dependen de consecinele modificrilor
deosebim mutaie:
benign,
neutr,
nociv.
Agenii mutageni pot provoca mutaiile
spontane ct i mutaiile induse.
BIOSINTEZA
ARN
Obiectivele:
TIPURI DE ARN
Structura
secundar a ARNt
1.
2.
3.
4.
Structura
teriar a ARNt
ARNr
Structura
Transcripia
ARN polimeraza
este o holoenzim
2. la procariote - este oligomer din 5 protomeri
(2, , 1 i sigma ).
- fixeaz substratul;
1 se leag de ADN,
- ARN polimeraza
ARN polimeraza
la eucariote:
1. RNA p I sintetizeaza RNA ribozomal
(28S si 18S)
2. RNA p II sintetizeaza RNAm
3. RNA p III sintetizeaza RNAt, RNAr
5S i molecule mai mici
Etapele transcripiei
Sinteza
decurge n 3 etape:
iniierea, elongarea, terminarea.
Iniierea ncepe n anumite secvene de
ADN numite promotor (P 40 nucleotide)
recunoscut de ARN polimeraza.
CASETELE la procariote
Toi P bacterieni au 2 secvene consens situate pe
catena codifictoare:
Caseta -35 5 TTGACA 3 - locusul de
legare lax a ARN polimerazei.
- Caseta Pribnow (-10) 5 TATAAT 3 locusul de
recunoatere - responsabil de iniierea
denaturrii locale a ADN.
Locusul de recunoatere e situat la o distan de
25 nucleotide de locusul de legare i 10
nucleotide de la punctul de iniiere (+1)
rspunde de exactitatea iniierii transcripiei.
Fig. 5.4
Elongarea i Terminarea
Elongarea - alunecarea ARN polimerazei pe
matra de ADN sinteza transcriptului (50
nucleotide pe secund) . ARNp nu controleaz
catena sintetizat erorile sunt mai multe fa de
replicare. Pe msur naintrii ARNp are loc
desprinderea ARN de la ADN i refacerea
dublului helix
Terminarea semnal de terminare
ARNp recunoate secvenele nucleotidice
specifice de pe ADN, ce conin un numr mare
de G, C .
Terminare dependent de
factorul
Proteina
- se asociaz la E i se mic
mpreun cu ea, ns la identificarea
semnalelor de terminare coboar de pe
matri i ncetinete aciunea
E,producnd transcriptul cu folosirea
energiei ATP. ADN-se reformeaz n
dublul helix.
Transcripia la eucariote
1.
2.
a.
b.
c.
d.
Transcripia la eucariote
3. P la eucariote:
GC casete GGGCG (-90)
CAAT casete 5-GGCCAATCT -3 (-75)
Caseta Hogness TATAT/AT (-35)
Primele 2 sunt responsabile de frecvena
transcripiei (cnd ncepe), a 3 - - implicat n
iniiere semnal (unde).
4. Secvenele alctuite din 10-20 nucleotide
enhancers i silencers cresc i scad
respectiv V transcrierii.
Procesingul la eucariote
ARN-ul mesager obinut difer la procariote fa de
eucariote.
n ARN-ul procariot molecula este continu deci
intreaga informaie de aici poate fi folosit pentru
sinteza proteinelor.
n ARN-ul eucariot s-a observat prezena unor
poriuni repetitive de nucleotide numite introni care
nu dein nici o informaie pentru sinteza proteic.
ARN-ul mesager primar este mult mai lung dect
ARN-ul mesager folosit de ribozom.
Toi precursorii de ARN n nucleu trec etapa de
maturizare posttranscripional. Pe parcursul
procesingului - pre-ARN se transform n ARN
matur.
Procesingul la eucariote
Procesingul nclude:
1. Modificarea fragmentelor terminale 5 i 3
ale ARN:
a. Cap-area: la captul 5 -este adiionat
guanozina metilat (5- 5 trifosfat - protejarea
mARN de atacul 5-exonucleazelor i pentru
recunoaterea de ctre ribosomi ca semnal de
iniiere);
b. la captul 3 se adaug o secven mare de
poli A (200 A -coad). Ea servete la exportul
moleculelor de ARN din nucleu n citoplasm.
Procesingul la eucariote
Fig. 5.11
Procesingul la eucariote
2.Splisingul - excizia intronilor i sudarea exonilor.
Aa numitul splising are loc n nucleul celulei.
Excizarea intronilor se poate face in 2 feluri:
Cu ajutorul unor enzime speciale care recunosc
capetele fiecarui intron (exemplu: ARN U1) acestia
sunt eliminati si capetele libere ale exonilor sunt
sudate.
Prin autocataliza, fenomen remarcabil care pune
pentru prima data in discutie posibilitatea catalitica a
unui compus neproteic. Deci chiar ARN-ul ribozomal
isi autoelimina intronii printr-un proces care genereaza
o bucla (reprezentata de intron), eliminarea acestei
bucle cu ajutorul guanozinei si coaserea exonilor.
a.
Mecanismul
ARN U1 se leag la GU a intronului
ARN U2 se unete la A din interiorul intronului
ARN U4,U5, U6 se asociaz cu U1 i U2 formnd
bucla (5 al intronului cu 2 al A)
Eliberarea lui U4 din complex duce la clivarea
captului 3 al intronului. Intronul se nltur
mpreun cu U2,U5, U6
Formarea legturilor 3-5fosfodiesterice ntre
capetele exonilor
Fig. 5.13
Transcripia invers
sinteza ADN pe catena de ARN
Matria ARN
Substrat dRNTP:dATP, dGTP, dCTP, TTP
Enzima revers transcriptaza
Caracteristic viruilor oncogeni
Mecanismul:
a. Revers transcriptaza sintetizeaz pe ARN viral catena de
ADN- hibrid: ADN_ARN
b. Scindarea ARN viral de o nucleaz
c. Autoreplicarea ADN cu formarea unui duplex de ADN
1.
2.
3.
Modelul operonului
n prezena lactozei:
Inductorul (n acest caz lactoza) se leag specific la R, ca
urmare are loc desprinderea acestuia de la operator. n aceast
situaie, ARN p se leag la promotor, iniiind transcrierea GS,
adc a ARNm care codific E implicate n catabolismul lactozei.
AP catabolite activator protein
cAMP
(
)
TGTGA
ACACT
TCACA
AGTGT
Ilustrarea mecanismului de
reglare a sintezei proteinei prin
represie
Trp
Trp
Trp
REZUMM:
Codul genetic
Translaia
Reglarea sintezei
proteinei
Obiectivele:
Codul genetic
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Ribozomii
Structura ribozomilor:
procariotici:
subunitatea 30 S conine ARNr 16S i 21 proteine.
subunitatea 50S ARN r 5S, 23S i 31 proteine.
Sinteza ARNr i formarea subunitilor are loc n citoplasm.
eucariotici:
subunitatea 40S ARNr 18S i 33 proteine.
subunitatea 60S ARN r 5S, 5,8S, 28S i 49 proteine. ARNr
se formeaz n nucleol.
Ribozomul va avea constanta de sedimentare 70S la
procariote si 80S la eucariote.
S este coeficientul de sedimentare Svedberg, care depinde
de forma, densitatea i dimensiunea particulelor.
Prokaryotic Ribosome
Structure
Eukaryotic Ribosome
Structure
POLIRIBOZOMUL
Translaia
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Etapele
se realizeaza in 5 etape:
Activarea AA.
Iniierea lanului polipeptidic.
Elongarea lanului polipeptidic.
Terminarea lanului polipeptidic si eliberarea
acestuia.
Prelucrri post traducere ale proteinei sintetizate.
Activarea AA
d.
e.
1.
2.
3.
4.
a.
b.
c.
Activarea AA
1. NH2-CH-COOH
I
NH2-CH-CO O-AMP
I
Aminoacil Adenilat
Aminoiacil ARNt
sintetaza
2. NH2-CH-CO O-AMP+ARNt
I
R
Aminoacil RNAt
Aminoacyladenylate Formation
NH2
O
O
O
H
H OH
O
O
O-
P
O-
O
O
O-
ONH2
H
OH
O
N
O
C
CH
PPi
NH2
O
H
H OH
O-
O
H
OH
C
CH
NH2
NH2
N
N
N
5' tRNA
O
O
O
H
H OH
H
H
OH
O-
O
H
O
O
H
OH
H
CH H
NH2
NH3+
AMP
5' tRNA
O
H
O
H
OH
C
CH H
NH3+
N
N
Activarea AA
Iniierea
1.
2.
3.
4.
5.
Necesar:
ARNm (AUG)
Ribosomul cu subunitile
disociate
ARNt f-met (Met)
GTP, Mg
IF1, IF2, IF3
Scopul: formarea complexului de
iniiere
Formarea complexului de
iniiere:
FI2
FI3
30S
P
FI1
50S
Elongarea
1.
2.
3.
4.
1.
2.
3.
Necesar:
ARNm cu urmtorul codon
ARNt cu urmtorul AA
GTP
FE: Tu, Ts, G
Elongarea translaiei include trei etape:
Legarea aminoacil ARNt;
Transpeptidarea- formarea legturii peptidice,
Translocarea (deplasarea ARNm cu un codon).
1. Adaptarea (legarea)AA
Legarea AA
2. Transpeptidarea
este
3. Translocarea
deplasarea
ribosomului pe ARNm cu un
triplet n direcia 5- 3' .
Dipeptida din centrul A trece n centrul P
sub aciunea factorului G (translocazei) i
GTP
ARNt din P prsete ribosomul
Elongarea
Decurge n 3 etape :1 fixarea noului
Aminoacil ARNt
complexul: aminoacil-ARNt, factorul de
elongare T (FE-T) i GTP.
se fixeaz pe situsul A, dup ce are
loc hidroliza GTP la GDP care se
elibereaz mpreun cu FE-T.
2. formarea legturii peptidice.
Enzima peptidil-transferaza catalizeaz
formarea legturii peptidice ntre doi
AA din situsul A i P.Peptida rmne
ataat de RNAt de pe situsul A.
translocaia
ribozomul se deplaseaz la
urmtorul codon de pe ARNm i
peptidilARNt trece de pe situsul A pe
P
aceast etap necesit factorul de
elongare G (FE-G) i GTP (necesar
pentru realizarea modificrilor
conformaionale care deplaseaz
ribozomul).
FE-G
30S
P
50S
A
FE-T
E-PT
FE-T
Terminarea
are loc cnd sunt ntlnii codonii UAA, UGA, UAG
i factorii proteici de terminare: R1, R2, S.
Nici un tRNA nu se poate lega cu codonii de
terminare.
Factorii de terminare:
elibereaz lanul polipeptidic
Elimin ARNt din centrul P
Disocierea ribosomului n subunitile respective
Degradarea ARNm
DECI:
La
Prelucrrile posttraducere
1.
2.
3.
4.
5.
Prelucrrile posttraducere
Particularitile biosintezei
proteice la eucariote
AA iniiator
este Met
ARNm este monocistronic (un singur
semnalde iniiere)
Ribosomul eucariot nu sare peste codonii
terminali
Viteza procesului e mai mare
FI (eIF1-eIF10); elongare i terminare.
la nivelul replicrii:
1.
2.
la nivelul transcriptiei:
la nivelul translatiei:
Polimorfismul proteinelor
Tipuri de Hb normale:
Hb A 2 2 adult major
Hb A2- 2 2 adult minor (2-3%)
HbF - 2 2 fetal (la ft i 80% la nou-nscui)
Hb E - 2 2 - embrionar
Variante genetice ale Hb umane -300hemoglobinoze
Hemoglobinoze
Hb S- nlocuirea Glu din poziia a 6 a lanurilor
cu Val deformarea i aglomerarea hematiilor
Modificri ale AA care tapeteaz buzunarul
hemului duce la modificri ale oxigenrii
formarea methemoglobinei (legarea Fe 3+):
scderea afinitii pentru oxigen, dispariia
cooperativitii)
Talazemii care nu sintetizeaz lanurile sau
.