COMPOZIIA BIOCHIMIC A MEMBRANELOR BIOLOGICE Pentru a nelege funciile membranelor biologice este necesar a le cunoate structura molecular.

Componentele moleculare ale oricrei membrane biologice sunt proteinele, lipidele polare i glucidele n alctuirea glicoproteinelor i glicolipidelor. Proporiile n care sunt reprezentate diferitele componente biochimice variaz cu funcia i localizarea biomembranelor respective. De exemplu, muli neuroni au extensiile nvelite de o teac de mielin. Teaca de mielin care este multistratificat este compus n mare parte din lipide care induc rolul de izolator electric. La nivelul membranelor mitocondriilor sau cloroplastelor (echivalentul mitocondriilor la celulele vegetale), acolo unde au loc numeroase reacii catalizate enzimatic, proteinele sunt majoritare. Fiecare specie, fiecare tip de esut sau de celul precum i diferitele tipuri de organite posed un set caracteristic de lipide membranare. De exemplu, plasmalema hepatocitelor este bogat n colesterol i nu conine nivele detectabile de cardiolipin. n acelai timp, membrana mitocondrial intern a hepatocitelor prezint o distribuie inversat. Este evident c n celul exist mecanisme de control a cantitii de lipide sintetizate i a modului de distribuie. Compoziia proteic a membranelor variaz mai mult dect compoziia lipidic, reflectnd specializarea funcional (1 funcie 1 specie proteic). De exemplu, la nivelul celulelor cu bastona din retin, o poriune a celulei este specializat pentru recepia luminii. La acest nivel, peste 90% din compoziia plasmalemei este reprezentat de o glicoprotein fotoabsorbant rodopsina. Plasmalema eritrocitului, care are o specializare mai redus fa de celulele cu bastona, prezint circa 20 de tipuri de proteine eseniale i alte cteva sute de importan mai mic. Multe din aceste proteine sunt transportori pentru solvii prin membran. Unele proteine membranare sunt legate covalent de reele complexe de carbohidrai. De exemplu, glicoforina, o glicoprotein din membrana eritrocitului este compus n proporie de 60% din uniti oligozaharidice complexe ataate covalent la reziduuri specifice de aminoacizi (cele mai utilizate puncte de legtur le reprezint reziduurile Ser, Thr i Asn). Ca i exemplu antinomic prezentm rodopsina, glicoproteina majoritar din membrana celulelor cu bastona din retin care prezint un singur hexazaharid. Componentele glucidice de la suprafaa glicoproteinelor influeneaz plierea lanurilor de aminoacizi precum i stabilitatea i destinaia intracelular; joac de asemenea un rol esenial n cuplarea specific a liganzilor la nivelul receptorilor glicoproteici de suprafa. Membranele intracelulare (de exemplu, membranele mitocondriale, conin rareori componente carbohidrate cuplate. Unele proteine sunt cuplate covalent la unul sau mai multe lipide care joac rolul de ancore hidrofobe.

ARHITECTURA SUPRAMOLECULAR A MEMBRANELOR BIOLOGICE Membranele biologice: sunt impermeabile pentru solviii polari i permeabile pentru soluiile non-polare; au o grosime care variaz ntre 5-8 nm (50-80 angstromi); au un aspect trilamelar (trilaminar) pe seciune, prin vizualizare la microscopul electronic; Studiile combinate de microscopie electronic i de compoziie chimic, de studiu a permeabilitii i mobilitii lipidelor i proteinelor a determinat dezvoltarea modelului de mozaic fluid.

Conform acestui model, fosfolipidele i sterolii formeaz un bistrat lipidic n care regiunile nepolare ale moleculelor lipidice sunt dispuse n apoziie (fa n fa) la nivelul miezului bistratului n timp ce capetele polare privesc spre exterior. n acest bistrat, lipidele sunt inclavate la intervale neregulate i meninute prin interaciuni hidrofobe dintre lipidele membranare i domeniile hidrofobe ale proteinelor. Unele proteine protruzioneaz numai pe o singur parte a bistratului lipidic, altele avnd domenii de ambele pri ale acestuia. Orientarea proteinelor n bistrat este asimetric dnd aspectul regionalizat al membranei. Domeniile proteice expuse de o parte i de alta a bistratului difer, ceea ce reflect asimetria funcional. Modelul de mozaic fluid reprezentat de lipidele i proteinele membranare are particularitatea esenial a libertii de micare lateral n planul membranei. LIPIDELE MEMBRANARE Lipidele reprezint substane cu semnificaie biologic particular care sunt insolubile n ap i solubile n solveni organici cum ar fi: acetona (propanona), etanol, cloroform (triclorometan), dietileter (etoxietan) i petrol uor (cu punct de fierbere la 40-60C). Din punct de vedere biochimic, lipidele se pot clasifica n: lipide de stocare neutre lipide membranare polare o fosfolipide glicero-fosfolipide sfingo-fosfolipide o glicolipide sfingo-glicolipide o colesterol

Clasificarea lipidelor (schem) dup Lehninger

LIPIDE DE STOCARE (NEUTRE) LIPIDE MEMBRANARE (POLARE)

FOSFOLIPIDE

GLICOLIPIDE

TRIGLICEROLI

GLICEROFOSFOLIPIDE

SFINGOFOSFOLIPIDE

SFINGOGLICOLIPIDE

AG GLICEROL GLICEROL

AG SFINGOZIN SFINGOZIN

AG

AG

AG

AG

AG

PO4

Alcool

PO4

Alcool

Mono sau oligozaharid

Lipidele sunt molecule care confer membranei funcia de barier. Hartley, n 1936, le-a descris ca i structuri amfifile sau amfipatice. Aceasta nseamn c lipidele sunt molecule asimetrice, ele posednd un cap polar, hidrofil i o poriune alungit coad hidrofob. Fosfolipidele (sau fosfogliceridele). Sunt cele mai abundente molecule lipidice. Ele sunt compuse dintr-un cap polar i o coad non-polar. Ele provin din esterificarea glicerolului (propan-1,2,3-triol) la nivelul grupelor -OH. Aceste esterificri se fac la nivelul gruprilor OH din poziiile 1 i 2 cu acizi grai iar la nivelul OH-ului din poziia 3 cu un derivat al acidului fosforic.

esterificare cu acizi grai

esterificare cu acizi grai

CH2 OH HO CH
glicerol R

CH2 OC CO CH CH2 O
O P O

CH2 OH
esterificare cu un derivat de acid fosforic

Natura substituentului X, fixat la nivelul acidului fosforic precizeaz natura fosfogliceridului. Cel mai simplu compus rezultat din esterificare (n cazul n care X este hidrogenul -H) se numete acid fosfatidic. Acesta nu este un component al membranei, el aprnd numai n cadrul sintezei altor fosfogliceride. Cele mai importante fosfogliceride membranare sunt:
X = CH2 CH2 NH3+ X = CH2 CH2 N+ 3)3 (CH X = CH2 CH2 COONH3+ Fosfatidill-etanolamin FE Fosfatidil-colin FC Fosfatidi-serin PS

CH2 OC
X= R

R O P O O CH2 CH OH

CO CH CH2 O

Difosfatidil-glicerol - cardiolipin O CH2 O P O O H2C CH COO R R

CH2 COO

Sfingolipidele sunt lipide de o mare diversitate, construite pe baza unui schelet constituit de o molecul de sfingozin care este un alcool aminat cu lan lung de atomi de carbon. Putem distinge 3 clase de sfingolipide: Sfingofosfolipide (sfingomieline) Sfingomielinele joac un rol important la nivelul membranelor mielinice. Glicosfingolipide neutre Glicosfingolipidele neutre sau glicozil-ceramidele sunt formate din ataarea la nivelul primului alcool al ceramidei, printr-o legtur glicozidic, a glucozei, galactozei sau a unui alt polizaharid (di, tri sau tetrahexoz). Putem astfel obine o mare diversitate de glicosfingolipide. Ele sunt denumite popular cerebrozide deoarece au fost descrise prima oar la nivelul creierului (-galactozilceramida); ulterior ele au fost descrise i la nivelul altor esuturi (-galactozil-ceramida, n splin, la un pacient cu maladie Gaucher). Exemplificarea implicrii glicolipidelor neutre n determinismul grupelor sangvine. Aceste glicolipide fac parte din antigenele de suprafa care determin grupele sangvine la suprafaa hematiilor. Grupa 0 posed anticorpi antiA i antiB iar antigenul specific este prezentat n figura de mai jos. Cei cu grupa 0 pot primi snge numai de la grupa 0.

Grupa A posed anticorpi antiB iar antigenul specific este prezentat n figura de mai jos Acest antigen este similar cu cel de la grupa 0 avnd ns n plus o grupare N-acetil-galactozamin. Cei cu grupa A pot primi snge de la grupa A i 0.

Grupa B posed anticorpi antiA iar antigenul specific este prezentat n figura de mai jos. Antigenul este similar cu cel de la grupa A dar n loc de N-acetil-galactozamin prezint galactoz. Cei cu grupa B pot primi snge de la grupa B i 0.

Grupa AB nu posed anticorpi iar la suprafaa hematiilor gsim ambele tipuri de glicolipide de la grupele A i B. Cei cu grupa AB pot primi snge de la toate grupele. Glicosfingolipide acide c. deriv din glicolipidele neutre. Cuprind 5 clase: sialo-glico-sfingolipide (gangliozide conin unul sau mai multe reziduuri de acid sialic, denumit i acid N-acetil neuraminic - NANA);

urono-glico-sfingolipide (conin unul sau mai multe reziduuri de acid uronic); sulfo-glico-sfingolipide (conin grupri esterice carbohidrat-sulfat); fosfo-glico-sfingolipide (conin grupri mono sau diester-fosfat); fosfono-glico-sfingolipide (conin grupri 2-aminoetil-hidroxifosforil) Descoperite n celulele ganglionare (de unde i denumirea de gangliozide), ele reprezint 6% din lipidele membranelor neuronale dar se gsesc i n alte celule. Glicolipidele sunt acide, deci ncrcate electric datorit acidului sialic (care are o ncrcare negativ). Rolul lor nu se cunoate precis (sunt presupui receptori) dar exist cteva exemple: epiteliile de acoperire conin o cantitate mare de gangliozide care protejeaz membrana de aciunea degradativ a factorilor diveri, cum ar fi pH-ul, enzimele litice. prezena gangliozidelor n membrane poate influena ncrcarea electric i captarea ionilor de Ca2+. toxina vibrionului holeric nu poate penetra enterocitele dect n prezena, la polul apical al acestor celule, a unui gangliozid, denumit GM1. Ptrunderea acestei toxine n interiorul enterocitelor produce creterea concentraiei de AMPc care conduce la o secreie crescut de Na i ap ctre lumenul intestinal, ceea ce produce diareea caracteristic. Proprietile lipidelor membranare Autoaranjarea spontan (autoorganizarea). Aceast proprietate se datoreaz caracterului amfifil (sau amfipatic) descris; astfel, fosfolipidele i glicolipidele introduse n ap formeaz un dublu-strat. Din diverse experimente, cunoatem 2 tipuri de organizare a bistraturilor lipidice: bistraturi lipidice plane (denumite i membrane negre); bistraturi lipidice ce formeaz vezicule - denumite liposomi. o alt form de organizare spontan este reprezentat de micelii, de asemenea sferice ca i liposomii, dar, spre deosebire de acetia, cozile lor hidrofobe exclud apa din interiorul lor. A. Bistraturile lipidice plane

Pot fi obinute prin amplasarea unei picturi lipidice dizolvate n solveni organici, la nivelul unui orificiu care separ 2 compartimente ce conin ap. B. Liposomii.

Fosfolipidele introduse n ap pot forma liposomi multilamelari, cu un diametru de aproximativ 2 m. Formarea lor poate fi accelerat de agitarea mecanic a vasului de formare. Prin tratamentul lor ultrasonic pot fi transformai n liposomi unilamelari. Liposomii sunt folosii n experiene de reconstruire a membranelor prin adiie de proteine. Astfel ei sunt utilizai n terapeutic. Ei permit vehicularea (transportarea) unor medicamente pe care le nglobeaz, n torentul sangvin de unde pot fi dirijai ctre esuturile int. C. Miceliile

Miceliile reprezint structuri sferice care conin cteva zeci pn la cteva mii de molecule lipidice dispuse cu regiunile hidrofobe agregate spre interior, excluznd moleculele de ap, i cu capetele hidrofile spre exterior, n contact cu mediul apos. Fluiditatea bistraturilor lipidice. Bistraturile lipidice sunt structuri cvasifluide, interiorul bistratului fiind fluid. Aceast cvasifluiditate este rezultatul micrilor efectuate n special de fosfolipidele membranare. Cele mai importante micri efectuate de lipide sunt rotaia n jurul propriei axe i micrile lanurilor laterale. Fluiditatea este proporional cu amplitudinea acestor micri i are ca rezultat deplasarea lipidelor i a proteinelor n planul membranei. Micrile lipidelor sunt: a. Intramoleculare - cnd se deplaseaz numai anumite poriuni ale moleculei lipidice. b. De rotaie i de translaie cnd n micare este angajat ntreaga molecul. Micrile intramoleculare sunt puin accesibile i numai metodelor de investigaie ca RMN (Rezonana Magnetic Nuclear) sau RES (Rezonana Electromagnetic de Spin). Aceste micri sunt reprezentate de micri ale grupurilor de atomi n jurul legturilor simple precum i de micri segmentare la nivelul acizilor grai i modificri de conformaie la nivelul gruprilor polare. Micrile de rotaie i de translaie sunt mai accesibile investigaiilor. Micarea de rotaie este foarte rapid (10-6-10-7 sec.). Moleculele se rsucesc n jurul propriei axe i, din cauza flexibilitii lanurilor laterale, molecula lipidic va fi flectat la maxim la nivelul miezului dublului strat lipidic i mai puin flectat la nivelul capetelor polare. Micrile de translaie sunt de dou tipuri: o micare de translaie lateral o migrare a lipidelor dintr-un strat n altul. Prin translaie lateral, lipidele i schimb locurile ntre ele de circa 107 ori pe secund, deci coeficientul de difuziune (D) este n medie de 10-8 cm2/sec. Aceasta nseamn c o molecul lipidic poate difuza ("strbate") suprafaa unei bacterii mari (aprox. 2 m) ntr-o secund. Este permis comparaia cu un ocean lipidic n care moleculele componente au libertate de micare datorit interaciunilor Van der Waals. Micrile de lateralitate afecteaz i mobilitatea proteinelor care, pentru regionalizare i pstrarea polaritii funcionale necesit sisteme specifice de ancorare prin generarea de clustere (agregate macromoleculare lipido-proteice care pstreaz poziiile relative ale proteinelor n membran) sau prin ancorarea la elementele citoscheletului cortical (cazul proteinelor transmembranare). Un exemplu util este cel al glicoforinelor i pompelor Na/bicarbonat care sunt cuplate i imobilizate de spectrin, o protein specific citoscheletului eritrocitelor. Asimetria dublului strat lipidic. Un mare numr de membrane au o componen lipidic diferit pentru cele 2 monostraturi din structur. Originea asimetriei chimice se gsete la nivelul locului lor de sintez, adic n reticulul endoplasmic neted (un organit celular specializat), unde se gsesc translocatori ai lipidelor care le inser i le repartizeaz ntr-un monostrat sau n altul (aa cum se va vedea n capitolele referitoare la organitele celulare, rennoirea membranelor celulare depinde de reticulul endoplasmatic - att rugos ct i neted - care "nmugurete" trimind vezicule spre membrana celular cu care fuzioneaz).