Ministerul Sntii al Republicii Moldova Universitatea de Stat de Medicin i Farmacie Nicolae Testemianu Facultatea Farmacie CATEDRA CHIMIE FARMACEUTIC

I TOXICOLOGIC

Analiza medicamentelor, derivai ai ciclopentanperhidrofenantrenei: calciferoli, cardenolide

Indicaii metodice pentru studenii anului III

CHIINU, 2011

INTRODUCERE Elaborarea metodic este destinat pentru pregtirea de sine stttoare a studenilor ctre lucrarea de laborator i pentru lucrul practic al studenilor sub conducerea profesorului. Importana profesional a temei Aceast tem include medicamente din grupul ciclopentanperhidrofenantrenei: calciferoli, cardenolide. ncepnd studierea temei, studenii se familiarizeaz cu unele particulariti de analiz a medicamentelor studiate (determinarea a diferitor indici fizico-chimici, analiza grupelor funcionale specifice, metode fizico-chimice de analiz i altele). Importana studierii acestei teme se determin prin aceea, c le d posibilitatea: - de a elucida relaia structur chimic - aciune farmacologic n grupul compuilor studiai; - de a aprecia calitatea substanelor medicamentoase dup constante fizico-chimice (puterea rotatorie specific, coeficientul de absorbie etc.) - de a determina impuritile medicamentelor prin aplicarea cromatografiei pe strat subire; - de a studia stereoizomeria substanelor studiate; - de a pronostica posibilitatea schimbrii calitii medicamentoase sub influena diverilor factori al mediului ambiant i de a propune condiii optime de conservare n condiiile farmaceutice; Astfel, studierea legitilor generale i particularitile specifice a medicamentelor din grupul ciclopentanperhidrofenantrenei permite ridicarea nivelului profesional al viitorilor farmaciti n vederea aprecierii calitii medicamentelor. Scopul studierii temei: 1. De a nsui caracteristica comparativ a proprietilor fizice i fizico-chimice a substanelor medicamentoase din grupa compuilor studiai. 2. De a acumula deprinderi n efectuarea reaciilor generale i particulare de identificare a substanelor medicamentoase studiate. 3. Reieind din proprietile fizice i chimice ale preparatelor medicamentoase din grupul ciclopentanperhidrofenantrenei a putea determina impuritile i argumenta prezena lor. 4. A putea efectua dozarea preparatelor medicamentoase n corespundere cu cerinele DAN. 5. A putea stabili condiiile de conservare a preparatelor medicamentoase n dependen de structura lor chimic i proprieti. PLANUL LUCRRII DE LABORATOR 1. Controlul i corecia nsuirii materialului dup ntrebrile pentru pregtirea de sine stttoare. 2. Lucrul practic al studenilor. 3. Controlul total.

Material informativ La baza moleculei steroizilor st scheletul ciclopentanperhidrofenantrenului, care const din 3 inele ciclohexan condensate ABC i inelul ciclopentanic D. C D A B

n clasa de produi naturali-steroizi intr un numr mare de substane din cteva grupe. Calciferoli Prin origine, structura si modul de aciune calciferolii nu satisfac deplin criteriile pentru
statutul de vitamina, fiind astzi privii ca veritabili pro-hormoni sterolici D.

Exista surse alimentare ce ofer vitamina D sub forma de provitamine sau gata elaborata si sursa endogena reprezentata de sinteza proprie. Vitamina D, aceasta importanta vitamina se gsete in germenul griului, in uleiurile vegetale, in numeroase vegetale proaspete. De asemenea, in laptele integral, in unt, in glbenuul de ou, in ficatul petilor (ulei de ficat de morun), in pe ti grai (heringi, sardele s.a.), in polen. Necesarul n raia alimentara este de 150 UI la adult, ntre
300-500 UI la copil, cu condiia unui aport adecvat de calciu si fosfai. Necesitile de aport exogen crescut sunt reclamate numai n sarcina, alptare, la sugari si la persoanele private constant de lumina solara.

Clasificarea Calciferolilor Vitamina D este o denumire generic a Calciferolilor reprezentat printr-un sistem de condesare n care sunt prezente 4 cicluri ( A, B, C, i D) care in totalitate formeaz structura ciclopentanperhidrophenantrenic aparinnd clasei holestanului.

Provitaminele D sunt compui sterolici cu 19 atomi de carbon n structura tetraciclic de baza, avnd o grupare hidroxil n poziia 3, doua duble legturi conjugate n poziiile 5 si 7, si difer prin natura radicalului din poziia 17. Datorit c ciclul B n poziia 9,10 este deschis, Calciferolii sunt numii seco-steroizi, aceast nomenclatur este introdus oficial i in denumirea oficial internaional. Ruptura din poziia 9-10 permite Calciferolilor o mobilitate mai mare dect in cazul altor steroizi. Entitatea seco la fel condiioneaz afinitate mare fa de proteina transport. Denumirea chimica internaionala a vitaminei D 3 (colecalciferol ) conform IUPAC este 9,10seco(5Z,7E)-5,7,10(19)cholestatriene-3b-ol, i a vitaminei D 2 este 9,10-seco(5Z,7E)-5,7,10(19), 22-ergostatetraene-3b-ol.
CH3 CH3 CH3

CH3 H 3C CH3 H 3C

CH3 CH3

3
HO HO

Sintezeza in vivo a Calciferolilor

Substana iniial de sintez a steroizilor n organismul uman este colesterolul care ptrunde n organism cu alimentele sau este sintetizat pe peretele celular din acetil coenzima A i mevalonat.

Conversia provitaminelor este un proces fotochimic, prin iradiere n ultraviolet, ce are loc n mai multe etape, n final deschizndu-se inelul B.

Prin aciunea razelor ultraviolete 7-dehidrocolesterolui format n mucoasa intestinala si depozitat n piele (epiderm), sufer un proces de fotoliza ne-enzimatic, trecnd n precolecalciferol, care se izomerizeaza spontan la colecalciferol. Transformarea este direct

proporionala cu intensitatea expunerii si invers proporionala cu gradul de pigmentare a epidermei. Procesul de conversie diminua cu vrsta putnd justifica bilanul negativ de calciu. Ergocalciferolul se va forma din ergosterol( constituient al peretelui celular fungic) care ptrunde n organism prin aportul de alimente de natura organic: uleiuri, legume, ciuperci.
Biogeneza vitaminei D2 i D3

Etapele de metabolizare corespund etapelor de activarea vitaminei D n intestin Calciferolii se absorb din intestinul subire proximal, pentru vitamina D 3 disponibilitatea de
absorbie fiind superioara. Din piele sunt transportai de o globulina plasmtica specifica. Bio-transformarea prin procese de hidroxilare duce la metaboliti vehiculai de aceeai proteina.

n ficat
In microzomii hepatici o hidroxilaz specifica introduce gruparea hidroxil n poziia 25. Calciferolii si derivaii activi 25-hidroxilati (calcifediolii) sunt formele circulante si de depozit. O fraciune semnificativa din derivaii 25-hidroxilati urmeaz un circuit enterohepatic, perturbarea sa putnd cauza stri de deficienta D. Formarea calcifediolului este controlata prin mecanism feedback de propriul sau nivel, fiind o etapa obligatorie pentru formarea hormonului D. Metabolitul 25-hidroxilat este un agonist slab, la fel cu derivatul 24,25-

dihidroxilat rezultat prin aciunea unei hidroxilaze din mitocondriile renale.

n rinichi

Sub aciunea unui complex de trei enzime are loc hidroxilarea n poziia 1-a. Reacia se petrece n mitocondriile din rinichi si mai puin semnificativ n placenta si esut osos, ducnd la 1-a,25dioxicalciferol, respectiv calcitriol, metabolitul cel mai activ, considerat ca hormonul D. Molecula sterolica poate fi hidroxilata si n alte poziii rezultnd derivai inactivi de ex. 1,25,26-trioxicalciferolul. Rolul biologic In strnsa relaie cu hormonul paratiroidian (PTH) calcitriolul ndeplinete un rol major n reglarea metabolismului calciului si fosfatilor. Reacia de 1-a-hidroxilare de la nivelul rinichiului este stimulata de scderea concentraiei fosfatului seric si indirect de hipocalcemie, care determinna eliberarea PTH cu efect pozitiv asupra sistemului enzimatic. Calcitriolul nsui si inhiba propria formare.

Mecanismul de aciune a formelor active ale vitaminei D indica de asemenea similitudini cu al hormonilor steroizi. Studii cu calcitriol radioactiv au artat localizarea sa n nucleii celulelor intestinale, osoase, ai celulelor din tubii renali, considerate drept principalele esuturi inta, dar si n altele ca pielea, esutul cerebral. Ergocalciferolul (vitamina D2) se produce n industria farmaceutic sub form de: Drajeuri de ergocalciferol 500UI. Soluie uleioas de ergocalciferol n capsule 500 sau 1000UI. Soluie uleioas de ergocalciferol 0,0625%, 0,125% sau 0,5%. Soluie alcoolic de ergocalciferol 0,5%. Vitamina D este indicat n prevenirea i vindecarea rahitismului infantil, a spasmofiliei i a osteomalaciei. Se conserveaz n recipiente bine nchise, de culoare oranj, la loc uscat, ferit de lumin, la o temperatur de cel mult 100C. 1) 2) 3) 4) INTERACIUNI MEDICAMENTOASE ALE VIT. D Retinoizii pot provoca hipercalciemie prin creterea activitii osteoblastice; Diureticele tiazidice pot provoca o hipercalciemie; Antiestrogenii - osteoliz neoplazic; Teofilina crete calciemia Medicamentele, care au un efect hipocalcemiant sunt antagoniti ai vitaminei D. Furosemid crete calcituria; betablocante efect hipocalcemiant; corticosteroizii reduc absorbia intestinal a calciului; Analiza calciferolilor Identificarea Reacia cu soluia cloroformica de SbCl3. Ergocalciferolul formeaz culoare oranj-roz. Dozarea Cantitativ ergocalciferolul se determin prin metoda fotoelectrocolorimetric, n urma reaciei cu soluia cloroformic de SbCl3. GLICOZIDE CARDIOTONICI. MEDICAMENTE INOTROP POZITIVE Glicozidele cardiotonice snt substane biologic active de provenien vegetal, a cror principal aciune este de a restabili fora de contracie a miocardului, care duce la ncetinirea ritmului i creterea debitului cardiac, reducerea volumului diastolic al inimii, scderea presiunii arteriale ridicate. Glicozizii cardiotonici sunt de natur vegetal, fiind obinui din speciile: Digitalis (purpurea i lanata). Strophantus (kombe, gratus, hispidus). Acocan thera ouabaio, Convallaria majalis. Heleborus niger. Izvoarele principale de obinere a glicozidelor cardiotonice snt i speciile de plante din familiile: Scrofulariacee, Apocinacee, Lamiacee, Ranunculacee, Brassicacee. Proprieti fizico-chimice Reprezentanii: - digitoxina, acetildigitoxina (Digitalis purpurea); - digoxina, = desacetillanatozid C (Digitalis lanata); metildigo-xina (semisintetic); - strofantina K (Strophantus gratus i kombe).

In terapeutic se utilizeaz n mod obinuit glicozizii din speciile de Digitalis (purpurea i lanata), de aceea glicozizii cardiotonici sunt denumii curent cardiotonice digitalice. Strofantinele sunt actualmente, mai puin utilizate. Structura chimic a glicozizilor cardiotonici cuprinde: - aglicon (= genin sau genol) cu nucleu sterolic, legat la C de un ciclu lactonic nesaturat pentagonal, - parte glucidic (din 1-4 oze diferite: glucoza, digitoxozfi, cimaroz, ramnoz), legat de nucleul sterolic, n
17

poziia C 3 .

Relaii structur chimic - profil farmacologic: a) Agliconul n totalitate (nucleul sterolic + ciclul lactonic) imprim aciunea de tip cardiotonic. Pe nucleul sterolic sunt grefate grupri oxidril, ce reduc liposolubilitatea agliconului i funcioneaz ca grupri distribuitoare, influennd evoluia farmacocinetic. Numrul gruprilor -OH influeneaz semnificativ profilul farmacocinetic, cu repercursiuni importante asupra
profilelor farmacodinamic i farmacotoxicologic. De exemplu: digitoxina are un singur -OH (n poziia C 1 4 ). iar digoxina are doi -OH (la C 1 4 i C 1 2 ). Aceast mic diferen structural face ca aceste dou substane s fie clasificate n dou grupe diferite de cardiotonice (cu laten i durat lung i respectiv cu laten i durat scurt).

b) Partea glucidic crete hidrosolubilitatea i fixarea pe fibrelor miocardice, crescnd potena. Farmacocinetica Profilul farmacocinetic este determinat de gradul de polarizare lipofilia moleculei, care depind de rezultanta influenelor reciproce dintre nucleul lipofil (sterolic) i gruprile hidrofile (ciclul lactonic, ozele. numrul de oxidrili). Polaritatea i hidrofilia cresc n ordinea: digitoxin. digoxin, strofantin. Clasificarea n funcie de profilul farmacocinetic: -Grupa digitoxinei (digitoxin, acetildigitoxina);

Grupa digoxinei (digoxin, deslanozid, lanatozid C); -Grupa strofantinei (strofantinele). a) Digitoxiiia (R12=H] Digoxina [R12=-OH]

Grupa digitoxinei are urmtoarele caracteristici: absorbie digestiv (prin difuziune simpl) nalt; att p.o. ct i intrarectal; legare de proteinele plasmatice i tisulare, n procent mare (> laten i durat lung); eliminare lent cu posibil acumulare; epurare predominant prin biotransformare hepatic (atenie la insuficiena hepatic.); latena i durata de aciune lung. b) Grupa digoxinei se caracterizeaz prin: absorbie digestiv medie; legare de proteinele plasmatice i tisulare mijlocie ; epurare predominant prin eliminare renal (atenie la insuficiena renal!); eliminare mai rapid, ca grupul digitoxinei latena i durata de aciune intermediar. c) Grupa strofantinei este caracterizat prin: absorbie digestiv foarte mic (practic, nesemnificativ); legare de proteine, n procent foarte mic (> laten i durat scurte); eliminare rapid, renal; latena i durata de aciune scurt. Cile de administrare, n conformitate cu aceste profile farmacocinetice. sunt: -p.o., grupa digitoxinei;

i.v. (exclusiv), grupa strofantinei; p.o i i.v., grupa digoxinei. Distribuia n esuturi: preferenial n miocard. Biotransformarea hepatic, n dou etape: desfacerea catenei glucidice i epimerizare; glucurono- sau sulfoconjugare. Biotransformarea este intens pentru glicozizii liposolubili (de ex. digitoxin este epurat predominant prin biotransformare) > acumulare n insuficiena hepatic. Efectul inotrop pozitiv Este efectul principal pe care se bazeaz indicaia terapeutic a glicozidelor cardiotonice indicate n insuficiena cardiac cronic cu debetul cardiac mult dimenuat. Const n stimularea contraciei (forei i vitezei de contracie) a miocardului, n special a ventricolului stng. Efectul este evident numai pe miocardul insuficient, nu i pe miocardul normal. Consecine cardiace utile: scurtarea sistolei i prelungirea diastolei ventriculare; golirea i umplerea mai bun a ventriculelor; mbuntirea travaliului ventricular, cu creterea debitului-btaie i consecutiv a debitului cardiac; reducerea tahicardiei reflexe cu reducerea consumului de oxigen al miocardului. creterea vitezei de circulaie a sngelui i reducerea timpului de circulaie creterea debitului coronarian; ameliorarea circulaiei periferice, cu irigarea i oxigenarea mai bun a esuturilor; creterea fluxului sanguin renal i a diurezei (efect diuretic) cu scderea volemiei i edemelor, n insuficiena cardiac nsoi de edeme; scderea aldosteronismului secundar insuficienei cardiace; scderea postsarcinii inimii. Identificarea glicozidelor cardiotonice. Pentru identificarea glicozidelor cardiotonice se folosesc reacii generale de coloraie, condiionate de prezena agliconului i componentei glucidice. Reaciile, ce determin caracterul agliconului se mpart n dou grupe: 1) Reacii caracteristice pentru ciclul steroic. 2) Reacii caracteristice pentru ciclul pentagonal lactonic cu dubla legtur n poziia -. Reacii la ciclul steroidic. a)Reacia Liberman-Burhardt. Este bazat pe posibilitatea steroizilor de a se deshidrata sub influena anhidridei acetice i a acidului sulfuric concentrat. Se ivete coloraie ce trece de la roz la verde sau albastru. FS, ed. XI, recomand aceast reacie pentru identificarea strofantinei K. b)Reacia Rozenheim. Ca reactiv se folosete soluia apoas de acid tricloracetic 96%. Apare o coloraie roz, ce trece n liliachie i apoi n albastr intens.

Tabelul 1

Proprietile fizice ale preparatelor medicamentoase din grupul calciferolilor i glicozidelor cardiotonice Denumirea, formula de structur Ergocalciferol CH3 CH3 Ergocalciferolum Descrierea , solubilitatea Cristale incolore, fr miros, instabile la lumin i oxigen, insolubile n ap, solubile n solveni organici, p.t. 115118C, []20D = +79,5 83,50 (sol. 1,6% acetonic).

CH3 H3C CH3

HO

Colecalciferol (Vit.D3) Holecalciferolum

CH3

CH3 H3C CH3

Pulbere cristalin alb sau aproape alb, practic insolubil n ap, uor solubil n alcool, cloroform i eter, solubil n uleiuri grase, sensibil la aer, cldur i lumin, soluiile sunt instabile. P.t. = 82 870C, []20D = +105 1120. Mr = 384,6. Substan alb microcristalin, fr miros i gust amar, practic insolubil n ap, puin solubil n alcool, greu solubil n cloroform. []20D = +105 1120 (sol. Cloroformic 1%)

Digitoxina Digitoxinum
CH3

HO
CH3 O OH O

Digoxina 3- digitoxoze Digoxinum

CH3

OH

CH3 O OH O

Substan alb, microcristalin, fr miros, cu gust amar, practic insolubil n ap, cloroform, eter, puin solubil n alcool. []20D = +13,3 13,90 (sol. piridinic). Mr = 781. 1 g substan conine 1950-2600 GED(UAH) sau 4000 KED (UAP).. Pulbere amorf galben, greu solubil n ap, uor solubil n alcool i aceton. 1 g substan conine LED(UAB) 43000 58000 sau 5800-7100 KED(UAP).

O 3- digitoxoze

Strofantina K Strophantinum K
O H C OH O OH cimoroza-2-glucoze CH3 O O

Reaciile la ciclul lactonic pentagonal cu o dubl legtur n poziia -.

a) Reacia Legal. Se pregtesc dou soluii: 1- soluia de nitroprusiat de sodiu 5 %. 2 soluia de hidroxid de sodiu de 10%. Substana se dizolv n alcool metilic i la aceast soluie n eprubet se adaug 1-2 picturi soluie 1, apoi cu precauie (fr s agitm) pe pereii epruvetei se adaug 1-2 picturi soluie 2. La zona de contact a soluiilor se ivete coloraie roie sub form de inel.
O OH HO O OH O2N O O

O OH HO
O NO2 N O
+

+ Na OH

OH NO

Reacii cu nitroderivai ai 2 compuilor aromatici: b) Reacia Baliet cu soluia alcalin de acid picric (coloraie oranj-roie); c) Reacia Raimond cu soluia alcalin de m-nitrobenzen (coloraie O roie-violet); d) Reacia Chede cu soluia alcalin de acid 3,5-dinitrobenzoic.

HO

NO2

Identificarea componenei glucidice. Pot fi folosite reaciile specifice pentru zaharuri: 1 1) Reacia Cheler-Chiliani, caracteristic pentru 2-dezoxizaharuri. Preparatul se dizolv n acid acetic diluat cu coninut de 0,25% clorur feric (III), apoi aceast soluie se adaug cu precauie ntr-o eprubet cu acid sulfuric concentrat. Stratul superior se coloreaz n albastruverzui, iar la zona de contact apare o coloraie liliachie sau mur. 2 2) Reacia Peze ca reactiv se folosete xanthidrolul sau antrona nclzirea amestecului de antrona cu substana studiat n prezena acidului acetic glacial i adugarea a ctorva picturi de acizi sulfuric sau fosforic, se ivete coloraia roie.

HC H2SO4 O O

+
O CHO

Tabelul 2 Identificarea glicizidelor cardiotonice prin reacii specifice de culoare

Preparatul Digoxina Strofantina K Reacia calitativ Reacia Legal Reacia Raimond Reacia Cheler-Chiliani Reacia cu rezorcina Reacia cu soluie de vanilin. Reactivi Nitroprusiat de sodiu, NaOH. m-dinitrobenzen, NaOH. FeCl3, H2SO4 Rezorcin, HCl(concentrat) Vanilin n acid clorhidric Coloraia Roie ce dispare treptat. Roie-violet ce dispare treptat. Zona de contact se coloreaz n brun. Roz. Albastr.

10

Pentru identificarea glicozidelor cardiotonice actualmente se mai folosesc metodele fizicochimice: spectrofotometria n infrarou i ultraviolet, polarografia, metodele cromatografice .a. Activitatea glicozidelor cardiotonice n preparate farmaceutice se determin, prin metoda biologic n comparaie cu preparatele standarde i se exprim n uniti de activitate de broasc (UAB), uniti de activitate de pisic (UAP), sau uniti de activitate de hulubi (UAH). Preparatele standarde de obicei prezint glicozide cristaline individuale cu un coninut determinat de uniti de aciune. Dezavantajul metodei biologice de control al activitii glicozidelor cardiotonice este exactitatea mic necesitatea unei mare volum de lucru. De aceea pentru dozare snt propuse i se ntrebuineaz metodele cromatografice, spectrofotometrice n UV i IR, fotocolorimetrice, fluorimetrice, polarografice. Tabelul 3 Formele farmaceutice ale preparatelor din grupul glicozidelor cardiotonice
Preparatul Digoxina Formele farmaceutice Comprimate a cte 0,25mg N30, N50, N100; soluie injectabil 0,25mg/1ml n fiole N10, 2ml N5. Soluie injectabil 0,05% n fiole N10 Indicaiile farmacologice Insuficien cardiac congestiv, fibrilaia atrial, flutterul atrial. Condiii de pstrare Se pstreaz la temperatura camerei, ferit de lumin, tabelul A.

Strofantina K

Insuficien cardiac congestiv de gradul IIIIV, tahicardia supraventricular, fibrilaia. Insuficiena cardiovascular edemul pulmonar. acut,

Loc rcoros, ferit lumin. Tabelul A.

de

Soluie apoas 0,06%. Corglicon

Loc ferit de Tabelul B.

lumin.

RELAII STRUCTUR-ACTIVITATE PENTRU GLICOZIDE CARDIOTONICE Aciunea farmacologic se datorete agliconei, Prezena inelului lactonic nesaturat la C17, orientat n poziia fa de inelul D, este indispensibil pentru activitatea cardiotonic. Dac aceasta se pierde la prelucrare (extracie, separare, modulri structurale) aciunea scade foarte mult.

OH Saturarea dublelor legturi sau deschiderea acestor cicluri (la hidroliz) suprim aciunea farmacodinamic. Sub influena fermenilor sau a unor ageni chimici inelul lactonic poate trece n poziia 17 i acest proces(epimerizare) este nsoit de pierderea activitii fiziologice:
O CH3 C H ferment O CH3 O C O

poziia a inelului lactonic (forma activ)

poziia (forma inactiv)

11

Glicozidele care conin grupa formil la C10 au aciune mai rapid i de durat mai scurt. Celelalte, care conin la C10 un metil angular, fixndu-se ireversibil pe fibra miocardic, au o aciune mai lent i se acumuleaz. Introducerea dublei legturi la C8-C9 duce la pierderea activitii cardionice. Datorit prezenei inelului lactonic cardenolidele snt instabile n mediul alcalin. Nucleul steroidic i gruparea OH din poziia 14 sunt absolut indispinabile pentru activitatea cardiostimilant. Anelarea nucleelor trebuie s fie : A/B cis; B/C trans; C/D cis. Anelarea C/D cis este specific acestei clase i explic specificitatea fa de miocard. Catena glicozidic din poziia 3 este important pentru proprietile biofarmaceutice : solubilitate, absorbie, transport, distribuie, ptrundere n celul, precum i pentru fixarea pe miocard. Toi ceilali substitueni de pe nucleul steroidic influeneaz proprietile biofarmaceutice.

Lucrul practic al studenilor la lucrarea de laborator Sarcina 1. De apreciat calitatea substanelor medicamentoase dup indicii Descriere i Solubilitatea. Datele de oformat n form de tabel i de fcut concluzia despre calitate dup indici indicai mai sus. Adnotare: Solvenii se ntrebuineaz conform prevederilor DAN. Sarcina 2. De efectuat identificarea substanelor medicamentoase din grupul terpenilor i adamantanului. Sarcina 3. De efectuat determinarea cantitativ a preparatelor. 1. Soluie uleioas de ergocalciferol 0,125% 1.1. Identificare 1.1.A. Se iau 0,1 ml preparat i se dizolv n 1 ml cloroform, se adaug 6 ml soluie clorur de stibiu, care conine acetilclorur, apare o coloraie roz-oranj. 1.1.B. Cromatografia pe Strat Subire: pe linia de start a plcii cromatografice, acoperite cu oxid de aluminiu se aplic 0,02 ml soluie standard de ergocalciferol n cloroform (1 ml conine 1,25 mg ergocalciferol) i 0,04 ml soluie de preparat n cloroform (1:1 dup volum). Placa se introduce imediat n camera cromatografic cu cloroform, la care se adaug n prealabil cteva picturi de dimetilformamid (4-5 picturi la 100 ml). Cnd cmpul solventului depete 10-12 cm, placa se scoate din camera cromatografic i se reveleaz cu soluie de clorur de stibiu n cloroform, care conine sol. acetilclorur 2%. Pe cromatogram apare spotul de baz de ergocalciferol, colorat n oranj. ntre acest spot i linia de start se permite apariia nc a unui singur spot.

12

2. Soluie apoas de ergocalciferol 2.1. Identificare 2.1.A. La 5 ml soluie analizat se adaug 5 ml cloroform anhidru, apoi la soluia obinut se mai adaug 1 ml soluie cloroformic de clorur de stibiu. Se formeaz o coloraie roz-oranj. 3. Determinarea identitii substanelor medicamentoase din grupul cardenolidelor 3.1.A. Reacia Liberman-Burhard la ciclul steroic Se dizolv 0,001-0,005 g de preparat glicozidic cercetat n 10 ml acid acetic anhidru n cilindrul cu volumul de 100 ml, la agitare se adaug 1 ml amestec de acid sulfuric i anhidrid acetic (volume egale). Se observ coloraia stratului de anhidrid acetic n verde, ct i schimbarea treptat a acesteia. 3.1.B. Reacii la ciclul lactonic pentagonal Reacia Legal Se dizolv 0,001-0,005 g de preparat cercetat n 3 ml etanol n eprubeta cu volumul de 10 ml, se adaug 2,5 ml soluie nitroprusiat de sodiu 1%. Se amestec minuios i se adaug ase picturi soluie hidroxid de natriu. Se urmrete apariia unei coloraii roii, care dispare repede. Reacia Baliet ntr-o eprubet termostabil se introduc 2,5 ml soluie apoas saturat de acid picric, se adaug 0,5 ml soluie de hidroxid de sodiu 5%. La agitare se adaug 0,005 g de preparat analizat. Se urmrete apariia unei coloraii oranj-roii, care se schimb la nclzire. Reacia Chilian-Cheler pentru partea zaharoas Se dizolv 0,001 g cercetat n 10 ml soluie de acid acetic, care conine dou picturi soluie de clorur de fier (III) 5%. La soluia obinut se adaug cu atenie 10 ml acid sulfuric concentrat, care conine 2 picturi soluie de clorur de fier (III) 5%. Nu se agit. Se observ colorarea stratului de acid acetic n albastru sau albastru-verzui. La hotarul a dou straturi se observ culoarea roie sau brun. 3.1.C. Calcularea valorii extinciei specifice a digitoxinei Masa exact ( 0,02) g de digitoxin uscat la temperatura de 100-105 0 C, se dizolv n etanol n balon cotat de 50 ml. Se msoar 5 ml din soluia obinut i se trece n balon de 50 ml i se aduce volumul soluiei pn la cot cu etanol. La 5 ml din soluia obinut se adaug 5 ml soluie de picrat de sodiu, se las 20 de minute la temperatura camerei i se determin absorbana la spectrofotometru n cuva cu grosimea de 10 mm, la lungimea de und de 495 nm.
% Se determin A 1 1cm dup formula: Ax 1% A 1cm = ---------C*l unde: Ax densitatea optic C coninutul digitoxinei, % l grosimea cuvei, 1 cm 1% A 1cm trebuie s fie 215-235

Problema 3. Dozarea substanelor medicamentoase din grupul calciferolilor i cardenolidelor 3.1. Determinarea cantitativ a substanelor medicamentoase din grupul calciferolului prin metoda fotocolorimetric La masa exact (1g) de preparat se adaug 0,1 g hidrochinon, 30 ml alcool etilic 95%, 3 ml soluie de hidroxid de potasiu i se nclzete pe baia de ap cu refrigerent timp de 30 minute.

13

Coninutul balonului se rcete, apoi se adaug 50 ml ap purificat i se extrage fracia de ergocalciferol n eprubet. La extracia eteric se adaug aproximativ 8 g sulfat de sodiu anhidru i se las timp de 30 minute la loc ntunecat, agitnd periodic. Apoi se filtreaz prin filtru de hrtie n balonul de antrenare. Sulfatul de sodiu i filtrul se spal de cteva ori cu eter cte 10 ml, colectnd eterul n unul i acelai balon. Eterul se antreneaz n jetul unui gaz inert. Rezidiul se dizolv n cloroform, se trece cantitativ n balon cotat cu volumul de 25 ml, se aduce volumul cu cloroform pn la cot i se agit. Se ia 1 ml de soluie i se trece ntr-o eprubet cu dop etan, se adaug 6 ml soluie de clorur de stibiu cu coninut de acetil clorur de 2%. Peste 2 minute soluia se trece n cuva fotoelectrocolorimetrului cu grosimea pereilor de 1 cm i exact peste 3 minute din momentul adugrii soluiei de clorur de stibiu se msoar absorbana, folosind un filtru de lumin cu maxim de emisie de 500 nm. Reglarea aparatului la zero se face dup cloroform. Paralel se face proba control Coninutul ergocalciferolului n 1 ml de preparat n mg (X) se calcul dup formula: A1 * 0,05 * 25 * d X = ----------------------------A0 * a unde: A1 densitatea optic a soluiei cloroformice A0 - densitatea optic a soluiei standarde de ergocalciferol; 0,05 coninutul ergocalciferolului n 1 ml soluie standard, mg; a - masa preparatului, g; d - densitatea preparatului. 1g de ergocalciferol trebuie s corespund 40 000 000 UI de vitamina D2. 3.2. Determinarea cantitativ a substanelor medicamentoase din grupul cardenolidelor 3.3.A. Metoda spectrofotometric de analiz Se ia o cantitate exact de 0,01 g de preparat i se dizolv n 10 ml de etanol n balon cotat cu volumul de 50 ml i se aduce volumul cu etanol pn la cot. La 0,5 ml de soluie obinut se adaug 4,5 ml ap purificat, se amestec i se msoar absorbana la spectrofotometru la lungimea de und egal cu 220-222 nm n cuva cu grosimea de 1cm. Soluia de comparaie conine 4,5 ml ap i 0,5 ml etanol. Coninutul preparatului(X) se determin dup formula: X = A * V * 5 ------------------------A11%cm * m * 0,5

unde: A absorbana V volumul balonului cotat m masa, g Coninutul substan trebuie s fie cel puin de 99%.

14

Probleme de recapitulare Subiectele pentru pregtirea de sine stttoare: 1. Caracteristica general a compuilor cu structur steroidic. Design molecular: numerotarea, conformaia, configuraia,tipul de izomerie. Clasificarea i nomenclatura. Stereochimia compuilor steroizi i activitatea lor biologic 2. Dai definiia glicozidelor cardiotonice, enumerai reprezentanii principali a fiecrui grup explicai clasificarea glicozidelor cardiotonice conform structurilor chimice. 3. Enumerai sursele de obinere a glicozidelor cardiotonice. Argumentai necesitatea purificrii lor dup sintez. 4. ndicai structurile funcionale din structura chimic a glicozidelor care condiioneaz aciunea cardiotonic, cardiotoxic. Explicai apariia efectului fiziologice: inotrop, batmotrop, tonotrop pozitive i cronotrop negative asupra miocardului. 5. Scriei formulele de structur a agliconilor cardenolidelor i bufadienolidelor. Indicai, prin ce reacie calitativ se poate diferenia glicozidele cardiotonice din grupa cardenolidelor i bufadionolidelor? 6. Ce prezint 1 UAB, 1UAP, 1UAH ? enumrai preparatele farmacopeice a glicozidelor cardiotonice la hidroliza crora se formeaz digitoxigenina, digoxigenina. Dai exemplu de glicozid primar i secundar. Scriei formulele de structur i indicai gruprile funcionale. 7. Ce constante fizico-chimice se utilizeaz la confirmarea identitii glicozidelor cardiotonice? Ce informaie pot da spectrele n UV i IR? Argumentai rspunsul. 8. Scriei formulele de structur a monozaharidelor, ce intr n componena glicozidelor cardiotonice: D glucoza; D digitoxoza; D cimaroza. Care din glucidele sus men ionate vor reduce reactivul Fehling, Tolens, sau vor intercaiona cu paradimetilbenzaldehid sau xanhidrol. Explicai condiiile de petrecere a reaciilor, scriei chimismul i numii tipul reaciilor. 9. Explicai formarea furfurolului n reacia dintre glicozidul cardiotonic i acidul sulfuric. Scriei chimismul reaciei de identificare a furfurolei cu antrona, explicai tipul reaciei care st la baz. 10. Nominalizai irul de reacii chimice pentru identificarea segmentului steroidic, artai condiiile de petrecere, explicai tipul de reacii chimice ce st la apariiei efectului analitic. 11. Nominalizai irul de reacii chimice pentru identificarea segmentului -lactonic pentagonal cu o dubl legtur n poziia -, artai condiiile de petrecere, explicai tipul de reacii chimice ce st la apariiei efectului analitic. 12. Scriei chimismul reaciei de condensare oxidare a ciclului -lactonic cu acidul picric, menionai condiiile de petrecere a reaciei i efectul analitic. 13. Explicai de ce glicozidele cardiotonice nu hidrolizeaz n mediu bazic pe segmentul glicozidic dar sufer o scindare la nivelul ciclului -lactonic. Scrieti chimismul reaciilor i explicai dispariia efectului carditonic. 14. Scriei reacia de formare a alomerului digoxinei i explicai dispariia efectului cardiotonic. Indicai metode de identificare i dozare a compusului nou format dup o lactonizare asigurat de grupa OH din poziia C14. 15. Explicai incompatibilitatea dintre soluiile metalelor grele i glicozidele cardiotonice, reieind din structura chimica a GC explicai grupele funcionale ce manifest o afinitate mare fa de metale. 16. Care metod e mai veridic pentru controlul calitii glicozidelor cardiotonice: spectrofotometric fotocolorimetric biologic? Dai exemplu i apreciai fiecare metod (dup precizie, obiectivitate, simplitate de ndeplinire, reproductibilitate).

15

17. Dai definiia calciferolilor enumerai reprezentanii principali a fiecrui grup, explicai clasificarea calciferolilor conform structurilor chimice. Enumerai sursele de provenien. 18. Prezentai schema elimentar de sintez a Vit D3 n vivo din colesterol 19. Prezentai schema elimentar de sintez a Vit D23 n vivo din ergosterol 20. Care este rolul biologic al calciferolilor n organism, explicai activarea vitaminelor grupului D in vivo prin hidroxilare n poziia C1 i C25. Care sunt organele int unde are loc hidroxilarea. 21. Ce constante fizico-chimice se utilizeaz la confirmarea identitii calciferolilor? Ce informaie pot da spectrele n UV i IR? Argumentai rspunsul. 22. La determinarea A1%/1cm a soluiei de digoxin absorbana era de 0,4204. Calculai A1%/1cm dac concentraia soluiei cercetate este 0,0018 %. Calculai coeficientul molar de absorbie i explicai posibilitatea utilizrii acestuia pentru identificarea digoxinei. 23. Calculai valoarea absorbanei soluiei de digitoxin cu concentraia de 0,002%, dac A1%/1cm = 228. Calculai coeficientul molar de absorbie i explicai posibilitatea utilizrii acestuia pentru identificarea digitoxinei. 24. Explicai importana utilizrii A1%/1cm= 215-235 (absorbanei specifice) a digitoxinei: - Pentru identificarea preparatului - Determinarea puritii - Trasarea curbei de calibrare i determinare cantitativ - Determinarea unor constante fizice. 25. Ce mas de digitoxin i alcool etilic este necesar pentru a pregti o soluie alcoolic de preparat astfel nct la msurarea absorbanei la 217nm soluia s aib o absorban care s se cuprind n segmentul de concentraie unde absorbana depinde de concentraie n funcie liniar. 26. Explicai cauza creterii polaritii i lipofilii moleculare n ordinea: digitoxin, digoxin, strofantina K. 27. Cum influeneaz gradul de polarizare i lipofilia molecular a GC: absorbia digestiv legarea de proteine plasmatice tipul de epurare hepatic sau renal viteza de eliminare durata de aciune tipul formei farmaceutice 28. Care-i modul mai eficace de administrare a glicozidelor cardiotonice n organism? Pe ce se bazeaz efectul de cumulare? Care glicozide cardiotonice au efect cumulativ mai majorat? 29. Standardizarea glicozidelor. Cerinele fa de calitate. Metodele biologice i fizicochimice de apreciere cantitativ a activitii glicozidelor. Stabilitatea. Preparatele: digitoxina, acetildigitoxina, digoxina. Controlul final 1. Controlul cunotinelor dup ntrebrile i sarcinile pregtirii de sine stttoare. 2. Controlul drilor de seam despre ndeplinirea lucrului practic i de sine stttor. Bibliografie: Conspectul leciei. Farmacologie Aurelia Nicoleta Cristea editura Medical Bucureti 2008 abilev F.V. Chimie farmaceutic, Chiinu: Universitas, 1994.- 675p Farmacopea romn. Ediia X-a Bucur.eti: Editura medical, 1993.-1315p. http://www.people.vcu.edu/~urdesai/intro.htm 5. .. .- : , 2006 . 1. 2. 3. 3. 4.

16