Biotehnologii enzimatice

I. UTILIZAREA PRACTIC A ENZIMELOR

Studiul activitii catalitice a enzimelor, a mecanismului de aciune, cineticii reaciilor enzimatice etc. prezint o importan teoretic de necontestat pentru studiul metabolismului substanelor i energiei n organismele vii, reglarea i controlul acestora, nelegerea anomaliilor metabolice etc. Pe de alt parte, importana studierii acestor catalizatori sub toate aspectele nu se limiteaz doar la domeniul strict fundamental. Cel mai nou domeniu tiinific, care prezint totodat i cele mai largi perspective pentru viitorul imediat i cel ndeprtat, l reprezint biotehnologia. n ultimul timp, tot mai muli oameni de tiin mprtesc ideea c aa cum secolul XX a aparinut electronicii, n acelai mod secolul XX va aparine biote!nologiei. "cest domeniu nou de mare anvergur teoretic, dar mai ales practic, reprezint cel mai comple# domeniu interdisciplinar cunoscut p$n n prezent. %ocmai datorit acestei comple#iti nu s&a reuit p$n n prezent s se dea o definiie complet i unanim acceptat acestui domeniu considerat de muli autori c!iar ca o tiin de sine stttoare. n esen, biote!nologia se ocup cu studiul biomoleculelor, organitelor subcelulare, celulelor, metaboliilor biologic activi etc. ce pot fi utilizai n diferite domenii ale activitii umane i pot fi puse n slu'ba sntii i bunstrii omului. (ezvoltarea biote!nologiei se bazeaz pe realizrile teoretice i practice cele mai importante ale bioc!imiei )mai cu seam ale enzimologiei i ale bioc!imiei vitaminelor i !ormonilor*, biologiei moleculare i celulare, geneticii, microbiologiei generale i industriale, fiziologiei, biofizicii, c!imiei organice, electronicii etc. n ceea ce privete importana enzimologiei pentru cercetarea i producia biote!nologic, actualmente se disting dou posibiliti de valorificare a cunotinelor n acest domeniu+ & aplicarea cunotinelor teoretice i practice de enzimologie n vederea realizrii unor procese de biotransformare n industria de sintez i semisintez precum i n optimizarea unor procese te!nologice din industria de medicamente, panificaie, industria vinului, berii i buturilor spirtoase, industria de prelucrare a laptelui, conservarea legumelor i fructelor, industria de cofetrie etc. & imobilizarea enzimelor, structurilor subcelulare i a celulelor ntregi i utilizarea preparatelor obinute n medicin, c!imia analitic, industria uoar, industria c!imico& farmaceutic etc. ,tilizarea practic a realizrilor enzimologiei nu se rezum numai la aspectele biote!nologice. "stfel, determinarea activitii unor enzime n plasma i serul sanguin, urin, lic!idul cerebrospinal etc. este e#trem de important n diagnosticul unor boli, at$t la om c$t i la animale, dat fiind interdependena dintre activitatea enzimatic i procesul normal i patologic al diferitelor secvene metabolice.

7 -ai mult de at$t, n unele anomalii congenitale apar perturbri metabolice cauzate de activitatea sczut sau c!iar absena unor enzime. "plicarea unui tratament adecvat nu poate fi fcut fr un studiu c$t mai complet al disfunciilor respective. n funcie de domeniile n care este implicat enzimologia, precum i de modul n care sunt e#ploatate cunotinele teoretice i practice de enzimologie, putem considera c e#ist urmtoarele domenii ma'ore ale activitii umane n care enzimele 'oac un rol esenial+ & medicin uman i veterinar. & industria c!imico&farmaceutic. & industria uoar )alimentar, te#til, de pielrie i nclminte etc.*. & epurarea apelor reziduale. & c!imia analitic.

I.1 IMPORTANA MEDICAL

ENZIMELOR

PENTRU

PRACTICA

/ealizrile teoretice i practice ale enzimologiei sunt utilizate n practica medical n dou moduri distincte+ & determinarea activitii enzimelor tisulare i din lic!idele biologice n scop de diagnostic. & utilizarea enzimelor native i0sau imobilizate n tratamentul unor enzimopatii.

I.1.1 Determinarea activitii enzimelor n diagnostic i tratament

"pariia i evoluia diferitelor afeciuni patologice este ntotdeauna nsoit de modificri mai mult sau mai puin profunde ale valorilor anumitor parametri bioc!imici care atest perturbri ale unor secvene metabolice. (eterminarea activitii enzimelor participante la aceste secvene constituie principala metod de evaluare a perturbrilor metabolice respective i implicit un element important de care se ine seama n stabilirea diagnosticului i urmrirea evoluiei bolii n perioada tratamentului medical. Pe de alt parte, se cunoate un mare numr de maladii ce reprezint consecina unor defecte enzimatice. n asemenea situaii, activitatea sczut sau c!iar absena unor enzime reprezent ca!za maladiilor respective spre deosebire de situaia descris mai sus c$nd bolile respective au o alt etiologie, iar modificarea activitii unor enzime reprezint e"ect!l acestora. n ambele situaii, determinarea activitii enzimelor respective este deosebit de important pentru diagnosticul paraclinic. n consecin e#ist dou situaii+ & #olile congenitale de metabolism ce corespund unui deficit enzimatic. & #loca$!l acti%it&'ii catalitice a enzimelor sub aciunea unor in!ibitori specifici ce apar n organism din diferite motive. "bsena sau diminuarea activitii unei enzime este descris deseori n medicin ca o blocare a reaciei catalizate de enzima n cauz. n realitate, e#presia 1bloca' metabolic2 nu este corect deoarece n asemenea situaii este in!ibat o anumit secven metabolic, iar organismul viu dispune, deseori, de ci metabolice 1ocolitoare2. Care pot fi repercusiunile unui bloca' metabolic 3 S presupunem secvena metabolic de tipul+

"4C(56
n care este blocat etapa C (. n aceste condiii va avea loc o diminuare, sau c!iar anularea formrii metabolitului intermediar (+

"4C(
,n e#emplu concret l reprezint de e#emplu diminuarea formrii glucozei n glicogenoza de tip I )van Gierke* n absena glucozo&8&fosfatazei. 4oala poate fi cauzat fie de un bloca' complet fie de unul parial. %abloul clinic poate fi mai complicat deoarece deficitul de glucoz poate fi insignifiant sau nu poate fi detectat n asemenea situaii fiind decelat doar activitatea sczut a enzimei. Consecinele unor astfel de situaii careniale pot fi parado#ale deoarece diminuarea formrii unui anumit metabolit intermediar determin perturbarea mecanismului de reglare prin retroin!ibiie. (e e#emplu, n boal !iperuricemic )cu eliminare masiv de acid uric prin urin* are loc o intensificare a biosintezei bazelor azotate purinice. "lte anomalii metabolice prin deficit enzimatic se nt$lnesc n cazul cilor metabolice ramificate+

"4C( 56
Pentru sc!ema general de mai sus, blocarea reaciei C ( determin funcionarea, la nivel ma#im, a secvenei C 5 6 care, n condiii normale, ndeplinete un rol secundar. "a se nt$mpl de e#emplu n oligofrenia fenilpiruvic unde se observ nu numai o acumulare de fenilalanin )C* ci i formarea e#cesiv de corpi cetonici. n cile metabolice ramificate se poate nt$lni i situaia c$nd este blocat secvena metabolic secundar care determin accelerarea secvenei principale. "cest fenomen st probabil la baza creterii vitezei de biosintez a colesterolului n !iperlipemii. (eficienele enzimatice se manifest n toate celulele, indiferent dac ele sunt de natur genetic sau nu. "ceasta nu nseamn ns c simptomatologia caracteristic apare la nivelul tuturor organelor deoarece doar unele organe ndeplinesc rol specific din punctul de vedere al secvenei metabolice vizate. Pe de alt parte, deficienele enzimatice provoac de obicei manifestri patologice la nivelul mai multor sisteme, acestea put$nd prezenta la r$ndul lor interes clinic i0sau diagnostic. (e e#emplu galactozemia este o boal cauzat de o deficien enzimatic cu repercusiuni asupra mai multor organe. 9a aceti bolnavi este absent galactozo-1-fosfat-uridil-transferaza i astfel are loc o acumulare de galactoz i galactozo&:&fosfat. (in punct de vedere clinic, aceast anomalie se manifest prin !epatosplenomegalie ce evolueaz spre ciroz cu retardare psi!ic. Pot s apar i leziuni renale care determin !iperalbuminurie i, respectiv, !iperaminoacidurie. %abloul clinic este agravat dac acestei anomalii i se suprapune avitaminoza. Ca multe alte anomalii congenitale, galactozemia este frecvent familial, dar nu se nt$lnete la dou generaii succesive. "ceasta nseamn c ea se transmite recesiv, bolnavii av$nd o perec!e de gene anormale. ;in$nd cont de ipoteza 1 o gen - o enzim2 multe cercetri au ncercat s determine dac metabolismul galactozei este sau nu perfect normal la prinii bolnavilor respectivi. S&a gsit, n toate cazurile, o activitate net inferioar a galactozo&:&fosfat&uridil&transferazei n !ematii, iar capacitatea acestora de a o#ida galactoza era diminuat cu apro#imativ <= >. %ratamentul logic al deficienelor enzimatice ar trebui s fie unul de substituie. %ratamentele clasice constau, n general, n administrarea acelor substane care ar trebui s se formeze n mod normal n aval de etapa blocat, aceast terapie d$nd rezultate relativ satisfctoare. %ratamentul respectiv este nsoit i de o diet adecvat+ regim fr galactoz n

D galactozemie, fr fenilalanin n oligofrenia fenilpiruvic i substituirea niazinei n boala Hartnup. ,neori, aceste diete sunt ns greu de realizat )de e#emplu e#cluderea fenilalaninei din proteinele alimentare*. (ac blocarea unei secvene metabolice se realizeaz la nivelul metabolismului intermediar, precursorii ce se acumuleaz sunt at$t de numeroi nc$t un regim dietetic adecvat este practic imposibil de asigurat. @ posibilitate terapeutic n asemenea situaii ar reprezenta&o utilizarea antimetaboliilor. "stzi este posibil, de e#emplu, in!ibarea xantin-oxidazei cu alopurinol care determin o scdere considerabil a nivelului acidului uric n s$nge, n timp ce concentraia #antinei i !ipo#antinei crete. Se reuete n felul acesta nlocuirea efectelor patologice ale unui bloca' la un nivel defavorabil cu efecte ale unui bloca' la un nivel mai puin periculos. 6enomene asemntoare au loc n alte dou cazuri. n carena de antipirin se observ apariia precoce a bronitelor cronice, probabil din cauza imposibilitii inactivrii tripsinei leucocitare. "ceast afeciune are un efect invers deficienelor enzimatice. Prin tratamentul cu dicumarin se induce o scdere a activitii enzimatice prin intervenia antivitaminei n prima etap a formrii produsului. @ metod de diagnostic eficient trebuie s fie fiabil, sensibil, specific i inofensiv pentru pacient. (ia#ilitatea unei metode depinde n primul r$nd de e#actitatea sa. (at fiind marea susceptibilitate a activitii enzimelor fa de aciunea diferiilor factori fizico&c!imici )pA, temperatur, prezena sau absena efectorilor etc.* dozrile enzimatice n scop de diagnostic trebuie e#ecutate cu o acuratee desv$rit. 5#actitatea rezultatelor nu poate fi apreciat dec$t pentru analizele efectuate n condiii identice din toate punctele de vedere+ timpul, puritatea i concentraia reactivilor, pA&ul, temperatura, aparatura electronic de laborator etc. (e cele mai multe ori este subestimat rolul temperaturii. Pentru eliminarea erorilor determinate de eventualele diferene de temperatur, este absolut necesar utilizarea unor te)mo*tate +e ma)e e,actitate )ultratermostate* care s menin temperatura corespunztoare protocolului de lucru cu o deviere de cel mult =,7oC. (ac la aceasta se adaug folosirea Bit&urilor de reactivi i e#ecutarea analizelor de aceeai persoan, se poate conta pe un grad de e#actitate pe deplin mulumitor. -en*i#ilitatea metodelor enzimatice de analiz este n str$ns interdependen cu sensibilitatea e#trem de crescut a fenomenelor fiziopatologice. (e e#emplu activitatea transaminazelor serice se dubleaz atunci c$nd unul din :=== de !epatocite i devars, dintr& un motiv sau altul, ntreaga sa cantitate de %CP i %C@ n spaiul e#tracelular. "a se e#plic de ce acest tip de diagnostic este mult mai sensibil dec$t dozarea altor parametri bioc!imici. -.eci"icitatea marii ma'oriti a dozrilor enzimatice este net superioar celorlalte metode de analiz utilizate n clinic. Specificitatea de diagnostic depinde n mare msur de alegerea pattern&ului enzimatic. 5#perimental s&a demonstrat c erorile de determinare pot fi datorate tratamentului )interferene*, manipulrii i conservrii incorecte a probelor. n general, e#ist tendina de a supraestima influena !emolizei asupra activitii enzimelor luate n studiu. 5ste bine s se nlture acest factor perturbant, dar absena total a !emolizei nu este necesar ntotdeauna. n ultimul timp a nceput s prezinte interes tromboliza deoarece efectele ei sunt uneori destul de puternice. "stfel, Friedel et al. demonstreaz c serul obinut prin centrifugarea c!eagului timp de patru ore are o activitate lactat&de!idrogenazic cu :<&7= > mai mare dec$t n serul obinut prin respectarea timpilor clasici de centrifugare. Prin utilizarea plasmei sanguine n dozarea activitii enzimelor se elimin efectele coagulrii dar anticoagulanii nu in!ib n aceeai msur diferite enzime. %e!nica ce d rezultatele cele mai bune const n obinerea imediat a serului )n decurs de cel mult o or de la recoltare* i pstrarea lui la frigider p$n n momentul efecturii analizei.

< n prezent e#ist dou domenii importante n care evaluarea activitii enzimelor orienteaz diagnosticul n direcia util. Primul domeniu l reprezint diagnosticul diferenial al durerilor toracice i abdominale acute. Cellalt domeniu cuprinde manifestrile preponderent epigastrice nsoite de dureri, scderea capacitii de efort i diferite dereglri funcionale. (ozarea activitii enzimelor serice d informaii precise asupra organelor lezate, n asemenea situaii fiind mai greu de stabilit diagnosticul.

I.1. . !nzimoterapia
(at fiind rolul central pe care l 'oac enzimele n procesele biologice, este indiscutabil faptul c modificarea activitii acestora determin n mod direct evoluia unor afeciuni grave. 5#istena deficienelor enzimatice congenitale i secundare ca urmare a unor leziuni i0sau anomalii la nivelul organelor unde se sintetizeaz enzimele respective a determinat declanarea unor cercetri privind posibilitatea utilizrii enzimelor n scop terapeutic, cercetri ale cror rezultate nu s&au lsat ateptate. " devenit astfel posibil distrugerea pe cale enzimatic a unor substane patologice cum se nt$mpl n tratamentul trombolitic sau a metaboliilor eseniali ai unor procese patologice pe care se bazeaz tratamentele cu asparaginaz. -ai pot fi influenate n mod favorabil afeciunile determinate de activitatea excesiv a unor enzime prin administrarea in!ibitorilor enzimatici specifici. Cu toate acestea, enzimoterapia are ns limite de aplicabilitate. -a'oritatea enzimelor utilizare n scop terapeutic prin administrare oral pot fi distruse sub aciunea proteolitic a enzimelor digestive fapt ce limiteaz foarte mult administrarea pe cale bucal. Pe de alt parte, efectele imune limiteaz administrarea parenteral deoarece preparatele de origine uman rareori sunt disponibile n cantiti suficiente. n ma'oritatea cazurilor este redus posibilitatea utilizrii enzimelor de origine microbian, vegetal sau animal care e#ercit o aciune antigenic la om. 6iind macromolecule, enzimele nu pot traversa dec$t rareori barierele membranare. (in aceast cauz, diferite afeciuni congenitale enzimatice nu sunt accesibile enzimoterapiei dec$t n msura n care substratul patologic al reaciei blocate este e#portat n fluidul interstiial. mensa ma'oritate a enzimelor 1medicament2 aparin clasei !idrolazelor i sunt utilizate n prezent n principal n afeciuni digestive" afeciuni ale sistemului de coagulare sanguin i fibrinoliz. a* #ratamentul enzimatic al afeciunilor digestive. -a'oritatea substanelor nutritive nu poate fi utilizat sub forma n care acestea se afl n alimente. "ceti nutrieni sunt supui procesului de digestie prin care sunt scindai !idrolitic, sub aciunea enzimelor tractului digestiv, n compui solubili ce pot fi absorbii la nivel intestinal. n urma aciunii acestor !idrolaze se formeaz monoza!aride, aminoacizi, acizi grai i glicerol care, dup traversarea peretelui intestinal, sunt ve!iculai pe cale sanguin n ficat. "cesta consum 7=&7< > din energia substanelor nutritive pentru realizarea cilor metabolice ce au loc n !epatocite. @ digestie eficient reprezint o condiie absolut indispensabil unei activiti !epatice normale realiz$ndu&se astfel o interdependen armonioas a proceselor mecanice refle#e care acioneaz parial pe cale nervoas i, parial, pe cale umoral. Eilnic se formeaz n organism apro#imativ := litri de sucuri digestive )saliv, suc gastric, secreii intestinale i pancreatice, bil etc.* care sunt deversate n tractul digestiv. "cestea conin apro#imativ := grame de protein&enzime utilizate zilnic pentru digestia substanelor nutritive. n general, cantitatea de enzime sintetizate zilnic este superioar necesitilor cotidiene. (e e#emplu, cele apro#imativ :,8 g amilaze sunt suficiente teoretic pentru degradarea a :F< Gg de amidon, adic o cantitate net superioar aportului alimentar zilnic.

8 n aceste condiii, factorul limitant al digestiei l reprezint capacitatea de resorbie la nivel intestinal. Capacitatea de digestie a lipidelor alimentare nu este ns la fel de mare ca n cazul glucidelor i proteinelor, din care cauz ea este supus cel mai adesea degradrilor i este e#trem de sensibil n insuficiena pancreatic. Se observ, de e#emplu, steatoree atunci c$nd secreia de lipaz este diminuat cu 7=&7< >. 9a persoanele crora li s&a efectuat pancreatectomie dintr&un motiv sau altul, activitatea enzimatic digestiv se situeaz la un nivel e#trem de sczut, fiind asigurat at$t de enzimele gastrice c$t i cele microbiene produse de flora intestinal. Humeroase studii efectuate pe asemenea subieci au demonstrat c enzimoterapia substitutiv d rezultate notabile. Preparatele enzimatice utilizate n acest scop conin proteinaze/ lipaze i amilaze de origine animal, vegetal i0sau microbian. n diferite afeciuni gastrice manifestate prin !ipoaciditate i insuficien peptic se utilizeaz preparate pe baz de pepsin care au o dubl funcie+ completarea necesarului enzimatic i corecteaz aciditatea gastric. (at fiind faptul c ma'oritatea afeciunilor digestive sunt localizate la nivel intestinal, deseori se folosesc preparate enzimatice sub form de pancreatin care este o pudr obinut prin des!idratarea i degresarea mena'at a pancreasului de porc. ,neori, pancreatina se administreaz n asociere cu bil des!idratat care manifest aciune coleretic. 6iind inactivate de mediul puternic acid i de pepsina gastric, aceste preparate sunt deseori ncapsulate n membrane polimerice rezistente n mediu acid dar solubile n mediu neutru i slab alcalin. b) $oagularea sanguin i fibrinoliza /ealizrile practice ale bioc!imiei moderne au determinat, printre altele, progrese importante i n domeniul cunotinelor noastre privind coagularea sanguin i fibrinoliza. "ceste progrese nu au permis doar nelegerea mecanismului coagulrii i al sistemului antagonist al fibrinolizei ci au desc!is noi perspective n enzimologie. 6actorii activi implicai n aceste procese comple#e sunt enzime ce catalizeaz reacii specifice. n!ibitorii lor, care sunt tot de natur proteic, ndeplinesc funcii de reglare, asigur$nd ec!ilibrul ntre aceste dou sisteme antagonice. n esen, coagularea sanguin const n transformarea fibrinogenului solubil n fibrin insolubil nalt polimerizat. 6ibrinoliza este procesul invers, de degradare proteolitic a fibrinei cu formare de polipeptide solubile. 6ibrina se formeaz constant n cantiti minime la nivelul peretelui vascular intact, ntr& un proces lent de coagulare i se scindeaz, de asemenea, continuu, ntr&o fibrinoliz lent. (in punct de vedere enzimatic, coagularea sanguin i fibrinoliza sunt de fapt dou etape de degradare proteolitic a fibrinogenului. "tunci c$nd ec!ilibrul fiziologic stabilit ntre coagulare i fibrinoliz se deplaseaz ntr&un sens sau n altul, apar !emoragii, respectiv tromboze. n asemenea cazuri este pe deplin 'ustificat o enzimoterapie substitutiv n sensul activrii sau al in!ibiiei dup caz. #rombina )factorul a* este o proteinaz nalt specific ce poate fi aplicat local n stoparea !emoragiilor )de e#emplu la nivelul plgilor postoperatorii*, sub forma unui preparat e#tras din s$ngele de bou. "ceast aplicaie local este posibil i n !emoragia gastric. %rombina nu poate fi ns in'ectat intravenos sau intramuscular, put$nd genera tromboze i embolie deoarece nu este neutralizat dec$t foarte lent de ctre in!ibitorii plasmatici endogeni. n asemenea situaii se folosete accele)in0con%e)tina care este un amestec ce conine factorii I a )convertina*, I )accelerina*, X )factorul Christmas* i X )factorul Stuart-Prower*, acest preparat activ$nd protrombina )factorul *. n hemofilia %, o maladie congenital sanguin destul de frecvent, este absent factorul I & globulina anti!emofilic ", o 7&globulin cu mas molecular mare. ,n tratament de substituie este posibil prin perfuzarea de plasm sanguin uman.

F "nticoagulanii utilizai n tratamentul dereglrilor de coagulare acioneaz fie direct asupra factorilor coagulrii )cum acioneaz !eparina* fie indirect, c$nd intervin n biosinteza acestor factori. (ac anticoagulanii pot fi utilizai n prevenirea trombozelor, tratamentul trombozelor de'a constituite se face e#clusiv prin enzimoterapie. (eoarece trombele sunt constituite n principal din fibrin, tromboliza poate fi provocat de enzime proteolitice specifice. Plasmina poate fi utilizat n acest scop dar sunt necesare doze mari care pot deplasa ec!ilibrul !emostatic deoarece aceast proteinaz nu degradeaz doar fibrina ci i fibrinogenul, precum i factorii I i I . (in aceste motive sunt preferai activatorii plasminogenului prin care se realizeaz distrugerea trombelor 1din interior2. ,n activator ideal este uro&inaza ce poate fi obinut din urina uman i care nu prezint proprieti antigenice. ,tilizarea clinic este ns limitat de cantitile insuficiente datorate preului foarte mare )sunt necesare cantiti uriae de urin din care uroBinaza se purific prin metode comple#e, fiind o enzim foarte labil*. @ alt enzim utilizat n acest scop este streptoBinaza produs de streptococul & !emolitic. "ceast enzim a fost administrat, printre altele i n infarctul de miocard. -ecanismul de aciune difer de cel al uroBinazei prin faptul c un 1proactivator2 care nu e#ist n s$ngele uman este transformat ntr&un activator al plasminogenului. ,nul din inconvenientele streptoBinazei este efectul su imunogen i apariia de anticorpi circulani capabili s neutralizeze preparatul la repetarea tratamentului.

I.1.' !nzimele n pediatrie

Ji n pediatrie, dozarea activitii enzimelor d indicaii preioase asupra diagnosticului i evoluiei proceselor metabolice patologice. -ulte afeciuni, unele din ele letale, pot fi astzi decelate i tratate n consecin. Cel mai adesea, se determin activitatea fosfatazei alcaline, glutamat&de!idrogenazei, & !idro#ibutirat&de!idrogenazei, aspartatamino&transferazei, alaninamino&transferazei etc. "stfel, n !epatita acut, activitatea celor dou transaminaze este crescut c!iar n faza prodromal, atinge ma#imum n faza icteric i se normalizeaz progresiv n timpul convalescenei. (ozrile enzimatice sunt la fel de importante i n cazul afeciunilor pancreasului. n pancreatitele acute de e#emplu, activitatea amilazic este de apro#imativ ? ori mai mare comparativ cu valoarea normal, dei se nt$lnesc i valori de p$n la D= de ori mai mari. Creterea activitii enzimatice este decelat de'a dup ?&8 ore de la debutul bolii i atinge valoarea ma#im dup 7=&?= ore. Se mai fac dozri enzimatice i n icterul !emolitic )glucozo&8&fosfat&de!idrogenaza i piruvat&Binaza eritrocitar*, distrofia muscular )aldolaza i creatin&Binaza*, ra!itismul florid )fosfataza alcalin*, boala Cauc!er )fosfataza acid* etc.

I.1.( !nzimele n oncologie

%erapeutica anticanceroas a cunoscut un impuls important c$nd s&a observat c serul de cobai posed activitate antitumoral. "cest fenomen const n degradarea 9&asparaginei sub aciunea asparaginazei din ser cu efecte letale asupra celulelor tumorale, n special leucemice. 5nzimoterapia leucozelor nu este realizabil actualmente dec$t cu a'utorul asparaginazei e#tras din Escherichia coli. "u fost purificate dou asparaginaze, " i 4, identice imunologic, dar distincte prin punctul lor izoelectric. "ceste dou enzime posed aceeai activitate catalitic i au aceeai mas molecular ):?= B(a* dar se deosebesc prin perioada de n'umtire. 9&asparaginaza " este principiul activ al preparatului farmaceutic cunoscut sub

K denumirea comercial de $rasnitine. "cest preparat a dat rezultate bune n leucemiile limfoblastice acute la copii. "ceast afeciune rspunde relativ bine i la c!imioterapie, tendina actual fiind de a asocia 9&asparaginaza cu c!imioterapia. (up cum au demonstrat e#perienele pe animale i observaiile clinice asupra efectelor secundare, o ntreag serie de celule normale necesit asparaginaz e#ogen ntr&o msur mai mare sau mai mic. Cercetri de mare anvergur asupra acestor aspecte au permis 'alonarea unui principiu pentru cercetrile viitoare asupra enzimelor ce catabolizeaz aminoacizii, alii dec$t asparagina. n urm cu c$iva ani s&a propus e#perimentarea preparatelor de arginaz n oncologie deoarece arginina stimuleaz creterea unor tumori. n unele laboratoare se e#perimenteaz 9&glutaminaza, rezultatele nefiind deocamdat concludente.