BIOMATERIAL COMPOZIT PE BAZ DE COLAGEN I HIDROXIAPATIT

Scopul lucrrii practice este nsuirea metodologiei de realizare a unui biomaterial compozit
cu funcie de gref osoas, pe baz de colagen i hidroxiapatit.
Consideraii teoretice
Medicina actual utilizeaz diferite metode i tehnici pentru realizarea grefelor osoase apelnd
la aa numitele "autogrefe" (grefe provenite de la acelai individ). Aceste tehnici ridic ns o serie de
probleme legate de:
- riscul transmiterii unor maladii infecioase i de natur viral (HIV, hepatit, etc);
- conservarea grefelor;
- probleme de etic privind donaiile de organe, etc.
Rezolvarea acestor neajunsuri a presupus luarea n considerare a funciei pe care o ndeplinete
grefa osoas: un suport capabil s restabileasc volumul osos, prin intermediul elementelor vasculare i
a celulelor, astfel incat s aib loc remodelarea osoas complet, dup care acesta s fie resorbit sau
ndeprtat.
Dintre diferitele soluii ce s-au propus ca materiale de substituie a osului sau care s ajute la
regenerarea acestuia se pot aminti ceramicile de hidroxiapatit, amestecate sau nu cu colagen [1, 2].
Materialele colagenice prezint avantajul unei foarte bune biocompatibilitai dar sunt puin
osteoconductoare. Din aceste motive, realizarea unui biomaterial n care hidroxiapatita s se genereze
"in situ" constituie o variant viabil de obinere a unui suport cu proprietai superioare.
Modul n care se distribuie hidroxiapatita n cadrul procesului continuu de osificare este un
subiect intens studiat, cercetarile efectuate artand c srurile minerale, organizate n structuri
cristaline (Fig.1) intr n relaie cu elementele organice. Mecanismul i natura relaiilor din elementele
anorganice i cele organice nu sunt nc bine precizate. S-a putut stabili c microcristalitele se
orienteaz preferenial n jurul fibrelor de colagen i se dispun cu axa lor lung paralel cu axa acestora.
Simularea acestui proces "in vitro" este posibil prin sinteza hidroxiapatitei pe fibra de colagen
reconstituit n timpul formrii biomaterialului compozit mineralo-proteic.

Fig.1 Microcristalele srurilor minerale osoase

A-fragment dintr-un cristal de hidroxiapatit; B- grupe de hexagoane mrite; C- dispoziia
atomilor aezai pe dou planuri de hexagon

Utilizarea acestui produs presupune evaluarea lui fizico-chimic, respectiv biologic, conform
schemei din figura 2.

Figura 2. Schema metodologic de evaluare a biomaterialului

Principiul lucrrii: generarea hidroxiapatitei pe fibra de colagen reconstituit, in timpul
formrii biomaterialului.
Materiale i aparatur
Materiale
Aparatur
- Solutie de colagen de conc. 1%
1. Hrtie de pH
- solutie de alcool polivinilic, de 2. Lamele de sticl
conc. 15%
- Hidroxiapatit
3. Hartie de filtru
- Solutie CaCl2 40%
4. Mojar
- Soluie NaH2PO4 25%
5. Plac de sticl: 20x20cm
acoperit cu folie de polipropilen
- NH4OH
6. Microscop
- Soluie apoas de fuxin, 1%
7. Etuv
- Past de lipit pe sticl
Modul de lucru
Se realizeaz o mas fibroas de colagen reconstituit, de concentraie 4%, prin modificarea pHului unei soluii de colagen, de concentraie 1% pn la valoarea pH-ului izoelectric (4,85), separarea
masei fibroase de soluie apoas prin centrifugare i diluare pn la concentraia stabilit.
Concomitent se prepar urmtoarele soluii n ap distilat:
- APV 15%; - CaCl2 40%; - NaH2PO4 25%;
ntr-un mojar se introduc 5g fibr de colagen i 1.5 ml soluie APV. Se omogenizeaz
amestecul. Se adaug 1 ml soluie apoasa CaCl2 40% i 1.2 ml solutie NaH2PO4 25% amestecnd

continuu sistemul. Se modific pH-ul pn la o valoare egal cu 6, prin adaos de soluie NH4OH pentru
a genera hidroxi- apatit.
Pe o plac de sticl acoperit cu folie de polipropilen se traseaz o suprafa de 10x10 cm. Se
toarn mas fibroas din mojar pe suprafaa marcat, distribuind uniform sistemul prin nclinri
repetate a plcii de sticl pe toate direciile. Ansamblul se menine la etuv la 60oC timp de 45 minute.
Se va obine un material poros n care hidroxiapatita va fi orientat pe direcia fibrelor colagenice.
n acelai timp se realizeaz un amestec dup metodologia descris anterior, cu aceeai
compoziie n fibr de colagen, acelai coninut de polimer sintetic (APV) dar srurile de Ca i Na se
nlocuiesc cu 0.5 g hidroxiapatit preparat anterior. Condiiile de formare se pstreaz aceleai.
Distribuia hidroxiapatitei se studiaz la microscop. Se procedeaz astfel: se taie epruvete
avnd dimensiunea de 1,5x20 mm cu ajutorul unei lame, tierea realizndu-se pe direcie transversal a
materialului. Se lipete epruveta pe o lamel de sticl cu ajutorul unei paste pentru lipit. Se toarn ncet
peste epruvet cteva picturi soluie fuxin de concentraie 1%. Se observ apariia unei coloraii roii.
Se menine n stare de repaus 10 minute. Se nltur excesul de colorant cu ajutorul unei hrtii de filtru.
Se studiaz la microscop.
Biomaterialele se caracterizeaz din punctul de vedere al capacitii de interaciune cu apa.
Determinarea capacitii de interaciune cu apa
Se utilizeaz procedeul gravimetric. Se procedeaz astfel: din materialele compozite se
cntresc 2 buci avnd fiecare masa egal cu 0.5g. In dou pahare Berzelius de 50ml se introduc
cte 30ml ap distilat. Se imerseaz filmele n cele dou pahare. La intervale de timp prestabilite,
1min, 2min,3min, 4min, 5min, 7min, 10min, 20min, 30min 1h, se scot filmele din soluii i se
cntresc.
Exprimarea rezultatelor
Se determin cantitatea de soluie absorbit de 1g prob cu relaia:
m i =m i/ m 0
unde m i - masa de soluie absorbit de un gram de prob la momentul t i
m i- masa de soluie absorbit de prob de masa mp la momentul t i
m 0 - masa probei
La t=0 : m=0
t=t 1=t 1 m 1=m 1/ m 0
t=t 2=t 2+t 1 m 2=m 2/ m 0
............................................
t=t i=t n+t n-1
m i=m n/ m 0
Dac se noteaz n relaia (1) m -m i = se obtine :
-d/dt=k u*
-d/ =k u*dt

(1)
(2)

Rezolvnd ecuaia (2) rezult : -ln = k u*t - ecuaia unei drepte

Dac se reprezint grafic ln=f(t) se obine o dreapt avnd panta egal cu ku (constanta vitezei de
interaciune cu apa). Variaia lui ku pentru cele dou biomateriale evideniaz influena condiiilor de
obinere a acestora asupra procesului de acumulare a apei .

Bibliografie
1. F. Li, Q.L. Feng, F.Z. Cui, H.D. Li, H. Schubert - A simple boimimetic method for calcium
phosphate coating", Surface and Coating Technology 154 (2002), 88-93;
2. I. Kokubo - Formation of biologically active bone-like apatite on metals and polymers by a
biomimetic process", Thennochimica Acta 280/281 (1996), 479-490;
3. J.G. Morales, J.T. Burgues, T. Boix, J. Fraile, R.R. Clemente -Precipitation of stoechiometric
hydroxyapatite by a continuos method", Cryst. Res. Tech. 36 (2001). 15-26;
4.W. Suchanek, M. Yoshimura - Processing and properties of hydroxyapatite-based biomaterials for
use as hard tissue replacement implants", Joumal of Materials Research 13 (1998), pg. 94-109;
5. T. Kowakomi, A.I.Uju - Biomaterials, vol 14, nr. 8, 2012.