Universitatea Politehnica Bucureti

Testarea biocompatibilitii

Curs 6

S.L Dr.Ing. ANTONIAC Iulian

Testarea proprietilor biologice

Conform principiilor generale enunate, se convine s se aplice urmtoarele principii metodelor de
evaluare biologic a dispozitivelor medicale:
a) testele trebuiesc efectuate pe produsul finit sau eantioane reprezentative ale produsului
finit sau ale materialelor;
b) alegerea metodelor de testare trebuie s in seama de:
natura, gradul, durata, frecvena i condiiile de expunere sau de contact cu suprafeele

corpului uman cu dispozitivele n utilizarea normal prevzut;

natura fizic i chimic a produsului finit;
potenialul toxic al componentilor chimici n formula produsului finit;
faptul c anumite teste (de exemplu cele destinate s estimeze efectele sistemice) pot s nu fie
aplicabile n absena substantelor extractibile, sau atunci cnd aceste substane extractibile au
un caracter toxic cunoscut i acceptat;
relaia dintre suprafaa dispozitivului i talia corpului celui cruia i este aplicat;
informaia existent bazat pe literatura, experiena i testrile preclinice;
protecia omului ca prim scop al acestui document; al doilea scop fiind legat de protecia
animalelor de experien, reducerea numrului i expunerii ale animalelor.

Testarea proprietilor biologice

a) Dac se pregatesc extracte din dispozitive, se convine ca solvenii i
condiiile de extracie utilizate s fie corespunztoare naturii i utilizrii
produsului finit;

b) pregatirea martorilor pozitivi i negativi atunci cnd sunt necesari.

Dat fiind c nici un rezultat nu poate asigura contrarul unui potenial de

risc biologic, se convine ca, n investigaiile biologice efectuate, s fie

observate cu atenie, reaciile adverse neateptate sau incidente,
constatate la pacientul uman, n timpul utilizrii clinice a dispozitivului.

Metode de testare a caracteristicilor de biocompatibilitate

Procedeele experimentale recomandate, avnd ca scop

evaluarea biocompatibilitii unui material, in cont de

tendina lui degradare, de interaciunea lui cu mediul
nconjurator n condiiile reale de expunere care duc la
deteriorarea celor dou componente.

Metode de testare a caracteristicilor de biocompatibilitate

Din pcate, msurtorile experimentale sunt limitate pentru c, dei

exist metode puternice pentru examinri in vitro, realizarea condiiilor

modelului de experimentare in vitro, astfel nct s fie ct mai aproape
de condiiile in vivo reale este foarte greu i uneori chiar imposibil
datorit compoziiei extrem de complexe a mediului real. Substanele
prezente n concentraii foarte mici joac un rol important n
comportarea degradrii biomaterialului metalic. Acest lucru se aplic
urmtoarelor specii :
speciilor care formeaz compleci puternici cu ionii metalici;
speciilor care influeneaz proprietile redox ale sistemului;

speciilor care modific comportarea la frecare i uzur.

Metode de testare a caracteristicilor de biocompatibilitate

Analizarea tendinei de degradare a biomaterialelor metalice

ar trebui s conin urmtoarele etape de examinare, care

sunt caracterizate de o scdere a cantitii de materiale
utilizate:
analizarea coroziunii in vitro i a uzurii ntr-un mediu anorganic;
analizarea coroziunii in vitro i a uzurii ntr-un mediu mixt organic-

anorganic;
analizarea folosind culturi de celule i de organe;
analizarea in vivo bazat pe implantare n organisme animale.

Metode de testare a caracteristicilor de biocompatibilitate

n timpul ultimilor ani multe activiti au avut ca scop combinarea

avantajelor metodelor de msurare electrochimic n timp real,

concomitent cu observaiile biologice celulare (Schade i Liefeith, 1995).
Prin urmare, Liefeith (1994) i Hildebrand (1995) au dezvoltat un sistem

de msurare cu ajutorul crora testele de coroziune in vitro pot fi efectuate

n electrolii biologici. O extensie a acestui sistem ca un bioreactor ofer
informaii despre adeziunea celulelor folosind microscopie fluorescent.
Cu ajutorul spectroscopiei fluorescente induse de laser, este posibil s se

evalueze condiiile fiziologice ale organismelor testate.

Laborator biologie celular

TESTAREA BIOLOGIC A BIOMATERIALELOR

(A).Teste de evaluare iniial
1. Citotoxicitate
Prin utilizarea tehnicilor de cultur celular, aceste teste
determin liza (moartea) celular, inhibiia creterii celulare i
alte efecte asupra celulelor provocate de dispozitivele, materialele
i/sau extractele lor.
2. Sensibilizare
Aceste teste evalueaza pe un model corespunztor, probabilitatea
sensibilizrii la contactul cu materialele, dispozitivele i/sau
extractele lor. Aceste teste sunt adecvate, cci o expunere sau un
contact chiar i n cantiti minime de substan potenial
extractibil, poate s conduc la reacii de sensibilizare sau
alergie.

TESTAREA BIOLOGIC A BIOMATERIALELOR

(A).Teste de evaluare iniial
3. Potenial iritant
Aceste teste evalueaz potenialul iritant al dispozitivelor,
materialelor i/sau extractele lor, utiliznd zone corespunztoare
sau esuturi de implantare ca pielea, ochiul i mucoasele, pe un
model adecvat.
Testul (testele) realizat(e) trebuie s adapteze zona de aplicare

(piele, ochi, mucoas) i durata expunerii cu scopul de a

determin efectele iritante ale dispozitivelor, materialelor i
substanelor potenial extractibile.

TESTAREA BIOLOGIC A BIOMATERIALELOR

(A).Teste de evaluare iniial
4. Reactivitate intracutanat
Aceste teste evalueaz reacia local a esutului la extracte cu dispozitiv. Ele sunt
aplicabile atunci cnd determinarea potenialului iritant prin testri cutanate sau pe
mucoase sunt neadecvate (de exemplu, pentru dispozitivele cu acces la circuitul
sanguin). De asemenea, aceste teste pot fi utile atunci cnd substanele extractibile
sunt hidrofobe.
5.Toxicitate sistemic (acut)
Aceste teste evalueaz pe un model animal potenialele efecte duntoare datorate
expunerii unice sau multiple, ntr-un timp mai mic de 24 h, a dispozitivelor,
materialelor i/sau al extractelor lor. Ele sunt adecvate atunci cnd contactul
antreneaz o absorbie posibil de substan extractibila toxic i produsele de
degradare. Testele de pirogeniticitate sunt incluse pentru a detecta pirogeniticitatea
extractelor, dispozitivelor sau materialelor. O singur testare nu poate diferenia
pirogeniticitatea indus de ctre material, datorit contaminrii cu endotoxine.

TESTAREA BIOLOGIC A BIOMATERIALELOR

(A). Teste de evaluare iniial
6. Toxicitate subcronic (subacut)

Aceste teste determin efectele unei expuneri simple sau multiple a

dispozitivelor, materialelor i/sau extractelor lor pe o perioad de timp

de cel puin 24 h, la cel mult 10% din durata de via a animalului de
experien (de exemplu, pn la 90 zile).

7. Genotoxicitate
Aceste teste utilizeaz culturi de celule de mamifere sau nemamifere, sau
altfel de tehnici pentru a deternima mutaiile genetice, modificri ale
numrului i structurii cromozomiale precum i alte efecte toxice asupra
ADN-ului sau genelor, provocate de ctre dispozitivele, materialelor
i/sau extractele lor.

TESTAREA BIOLOGIC A BIOMATERIALELOR

(A).Teste de evaluare iniial

8. Implantare
Aceste teste evalueaz efectele patologice locale asupra
esuturilor vii, att la nivel macroscopic ct i microscopic, ale
unui eantion de material sau produs finit plasat sau implantat
ntr-o zon de implantare sau un esut corespunztor pentru
aplicaia prevazut. Se convine ca aceste teste s fie adaptate
zonei i duratei de implantare. Pentru un material, aceste teste
sunt echivalente celor de toxicitate subacut, dac se studiaz i
efectele sistemice.

TESTAREA BIOLOGIC A BIOMATERIALELOR

(A).Teste de evaluare iniial

9. Hemocompatibilitate
Aceste teste evalueaz, pe un model sau sistem corespunztor,
efectele dispozitivelor sau materialelor n contact cu sngele,
asupra sngelui sau componentelor sanguine. Testele specifice de
hemocompatibilitate pot fi, de asemenea, imaginate pentru a
simula geometria, condiiile de contact i dinamica fluidelor, n
dispozitivul sau materialul supus aplicaiilor clinice. Testele de
hemoliz determin gradul de liz a globulelor roii i eliberarea
hemoglobinei provocat de ctre dispozitiv, materiale i/sau
extractele lor in vitro.

TESTAREA BIOLOGIC A BIOMATERIALELOR

(B).Teste de evaluare complementar

1.TOXICITATE CRONIC

Aceste teste determin efectele unei sau mai multor expuneri ale

dispozitivelor, materialelor i/sau extractelor lor pe durata unei

perioade de cel puin 10% din durata de via a animalului de
experien (de exemplu, peste 90 de zile pentru obolan). Se convine
ca aceste teste s fie adaptate zonei de aplicare i duratei de
expunere.

TESTAREA BIOLOGIC A BIOMATERIALELOR

(B).Teste de evaluare complementar

2. CARCINOGENITATE
Aceste teste determin potenialul onconogen al dispozitivelor, materialelor i/sau

extractele lor, n urma unei sau mai multor expuneri sau contacte pe o perioad de
timp acoperind toat viaa animalului supus testrii. Aceste teste pot fi concepute n
scopul examinrii toxicitii cronice i caracterului oncogen n cursul unui
experiment. Testele de carginogenitate nu sunt n general efectuate dect dac exist
rezultate care converg i care provin din alte surse. Se convine ca aceste teste s fie
adaptate zonei de aplicare i duratei de expunere.

TESTAREA BIOLOGIC A BIOMATERIALELOR

(B).Teste de evaluare complementar

3.TOXICITATEA ASUPRA REPRODUCERII I DEZVOLTRII (CRETERII)

Aceste teste evalueaz efectele poteniale ale dispozitivelor, materialelor i/sau

extractele lor asupra funciei de reproducere, dezvoltrii embrionare (teratogenitate)

i dezvoltarea prenatal i postnatal precoce. Testele de toxicitate sau testele
biologice asupra reproducerii i creterii nu sunt n general efectuate dect n cazul
unde dispozitivul are o posibilitate de impact asupra capacitii de reproducere a
subiectului. Trebuie s se in seama de locul de aplicare a dispozitivului.

TESTAREA BIOLOGIC A BIOMATERIALELOR

(B).Teste de evaluare complementar

4. BIODEGRADARE
Atunci cnd exist posibilitatea de degradare i/sau resorbie, aceste teste pot

pune n eviden procesele de absorbie, distribuie, biotransformare i

eliminare a substanelor extractibile i produsele de degradare a dispozitivelor,
materialelor i/sau extractelor lor.

TESTAREA BIOLOGIC A BIOMATERIALELOR

Medii de testare utilizate pentru simularea mediului uman
Medii anorganice
soluia fiziologic Ringer este adesea folosit n versiunea acid (pH mai mic de

2,5 prin adugarea de HCl) pentru a simula scderea pH-ului cauzat de

procesele inflamatorii.
soluie salin echilibrat Hanks, pH 7,4 (Hanks i Wallace, 1949):
0,185 g l-1 CaCl2
0,40 g l-1 KCl
0,06 g l-1 KH2PO4
0,10 g l-1 MgCl26H2O
0,10 g l-1 MgSO47H2O
8,00 g l-1 NaCl
0,35 g l-1 NaHCO3
0,48 g l-1 Na2HPO4
1,00 g l-1 D-glucoza
o soluie similar cu concetraii reduse de ioni Ca i HPO a fost propus de
asemenea de Hanawa i Ota (1991).

TESTAREA BIOLOGIC A BIOMATERIALELOR

Medii de testare utilizate pentru simularea mediului uman
Medii anorganice

Cercetrile folosind medii de testare pur anorganice reprezint cele mai

simple teste i ajut cel puin la nelegerea comportamentului
degradrii a biomaterialelor metalice. Totui, poate fi fcut o
evaluare preliminar cu privire la rezistena la coroziune pitting,
urmat de o selecie a materialelor.
Mediile anorganice uzuale sunt urmtoarele:
soluie izotonic de NaCl: 9 g l-1 NaCl;
soluie fiziologic Ringer, pH 6,7 (Roche, 1993):
8,00 g l-1 NaCl
0,20 g l-1 CaCl2
0,20 g l-1 KCl
1,00 g l-1 NaHCO3

TESTAREA BIOLOGIC A BIOMATERIALELOR

Medii anorganice-organice
Saliv artificial (Elagli, 1993);
Ser bovin (Browne i Gregson, 1994; Good, 1996);
Mediul Eagle modificat (MEM) (Lacy, 1996);
Mediul Eagle modificat de Dulbecco (DMEM) (Lacy, 1996).

TESTAREA BIOLOGIC A BIOMATERIALELOR

Linii de celule i culturi de organe
Cercetrile pe linii de celule i culturi de organe sunt situate la grania dintre testele de
degradare i cele de biocompatibilitate. Experimentele de acest tip reprezint o legtura
important ntre analizele clasice in vitro i cele in vivo. S-a ajuns la concluzia c analizele pe
culturi de organe sunt mai relevante dect analizele pe linii de celule.
Relevana rezultatelor acestor tipuri de teste este puternic influenat de tipul liniilor de

celule folosite. Liniile permanente au avantajul comparrii rezultatelor din diferite

laboratoare fr nici o dificultate .

Culturile de celule primare au avantajul proprietilor mult mai aproapiate de cele ale

biosistemului complet. De aceea, rezultatele sunt i mai elocvente. Recent, a fost observat
o deschidere mai mare spre folosirea culturilor de celule primare. Tabelul 3.3 arat o
imagine sumar a acestor studii recente. Totui, aceste cercetri arat cteva dezavantaje,
cum ar fi acela c potenialul redox al biosistemului complet nu este acelai cu cel din
culturi.

Evalurile experimentelor pe linii celulare pot fi fcute n moduri diferite. n timp ce n

anumite cazuri sunt analizate doar forma i adeziunea celulelor, n alte cazuri se studiaz i
comportamentul de proliferare i modificare a structurii organelor, dar i evaluarea sintezei
proteinelor.

TESTAREA BIOLOGIC A BIOMATERIALELOR

Vedere generala a liniilor de celule permanente folosite frecvent

Culturi de celule
permanente

Caracteristici

MG 63

Asemntoare celulelor osteoblastice umane (Martin, 1995)

Balb/c 3T3

Celule fibroblaste (Wataha, 1993; Richards, 1995; Grant 1996)

MOLT 4

Asemntoare celulelor fibroblaste umane (Berstein, 1992)

X3T3 F10

Keratinocite (Lacy, 1996)

TESTAREA BIOLOGIC A BIOMATERIALELOR

Vedere general a liniilor de celule primare folosite frecvent
Culturi de celule primare
Celule umane de mduv osoas
Celule umane derivate din os
Celule umane fibroblaste gingivale

Aplicare
Rspunsul la produii de coroziune Co-Cr
Fixare i adeziune
Fixarea iniial a celulelor pe diferite materiale
Structura i chimia suprafeelor de titan
Topografia suprafeei de titan
Efecte comparative ale Ninitolului, Ni i Ti
Rspunsul la diferii cationi metalici

Celule osteoblaste din partea de sus a

craniului de obolan

Expresia genelor pentru fenotipul celular indus de

proteine pe Ti6Al4V, hidroxiapatit i polistiren
Caracterizarea suprafetelor implanturilor de titan

Celule epiteliale gingivale de obolan

Celule fibroblaste de obolan

Distrugerea celulelor cauzat de contactul direct

cu aliaje

Celule de mduva osoas de obolan

Efectele procedurii de scalare pe titan

Interaciunea cu titanul
Potenialul osteogenic al acoperirilor Ca/P