Transaminazele serice

Transaminazele serice acioneaz la nivel intracelular, cataliznd reacia de transfer a unei grupri
amino (-NH2) de la un -aminoacid la un -cetoacid. Actiunea lor nu se manifest n plasm, putnd fi
considerate enzime plasmatice nefuncionale.
Reactia de transaminare reprezint una dintre cile gemerale de catabolizare a aminoacizilor n
organism, alturi de decarboxilare i de dezaminare. Ea are importan n metabolismul intermediar n
sinteza aminoacizilor neeseniali proprii organismului, utiliznd aminoacizi i cetoacizi n exces din
rezerva metabolic (pool). Tot prin aceast reacie se stabilete corelaia dintre metabolismul protidic cu
cel glucidic prin intermediul -cetoacizilor rezultai din ciclul Krebs.
Exist dou transaminaze serice cu aplicaii clinice importante:
a) glutamat-oxaloacetat transaminaza (GOT sau TGO) sau aspartat-aminotransferaza (AST)
catalizeaz transferul gruprii amino de la acidul L-aspartic la acidul -cetoglutaric rezultnd acidul
oxalilacetic i acidul L-glutamic.
Ea exist n concentraii mari n miocard i ficat i n concentraii mai redus n muchiul scheletic, rinichi
i esutul cerebral.
b) glutamat-piruvat transaminaza (GPT sau TGP) sau alanina-aminotransferaza (ALT) catalizeaz
transferul gruprii amino de la L-alanin la acidul -cetoglutaric, rezultnd acidul piruvic i acidul
L-glutamic:
Ea exist n ficat, concentraia fiind mai redus n miocard i n muchiul scheletic, rinichi.Nivelele
crescute din ficat i localizarea sa exclusive citoplasmatic explic relativa sa specificitate n bolile
hepatice.

Determinarea activittii enzimatice a transaminazelor serice prin metoda colorimetric cu 2,4-

dinitro-fenil-hidrazin (DNFH)
Principiul metodei: Se incubeaz substrat GOT sau GPT cu ser nehemolizat. Acidul piruvic eliberat n
reacie reacioneazcu 2,4-dinitro-fenilhidrazina n mediu bazic formnd dinitrofenilhidrazona, colorat n
rou-crmiziu.Intensitatea culorii este proporional cu acitivitatea enzimei din proba analizat.
Modul de lucru:
Reactivi (ml) Proba de analizat (P) Standard (S) Martor (M)
Substrat 0,5 0,5 0,5
0
Se incubeaz 5 minute la 37 C
Ser nehemolizat 0,1 - -
Standard piruvat - 0,1 -
Ap distilat - - 0,1
Se omogenizeaz, se incubeaz 60 minute pentru GOT i 30 minute pentru GPT la 370C.
2,4-DNFH 0,5 0,5 0,5
Repaus 20 minute la temperatura camerei
NaOH 0,4N 5 5 5
Repaus 5 minute la temperatura camerei.
Calcul:
Concentraia de piruvat rezultat din reacia enzimatic este proproional cu concentraia enzimei din ser
i depinde de durata incubrii.
Activitate GOT:
EP/ES x CS x 10-3x 1/t=EP/ES x 2x 10-3 x 1/60 =EP/ESx33,3mol/l/min/ml ser
Activitate GPT:
EP/ES x CS x 10-3 x 1/t =EP/ES x2x10-3x1/30 =EP/ES x 66,6mol/l/min/ml ser
CS = 20mM = 2x10-3 mol
Valori normale:
GOT: copii sub 3 luni maxim 40UI
1
 copii 3 luni-5ani 2-28 UI
aduli 2-20UI
GPT copii sub 5 ani 0,2-13 UI
aduli 2-16,5UI

Semnificaie diagnostic:
a) GOT exist n cantiti mari n miocard i esutul hepatic i mai puin n muchii striai, rinichi,
pancreas, plmni, eritrocite.Creteri ale activitii enzimatice ale GOT apar n:
1. infarct miocardic
2. infarct pulmonar creterile sunt uoare pn la moderate, persistnd pn la 3-5 zile de la atacul de
durere;
3. insuficiena cardiac dreapt cu congestie (staz hepatic);
4. operaii pe cord;
5. distrofii musculare progresive sau boli traumatice musculare;
6. sindromul de zdrobire, arsuri;
7. infarcte renale, splenice i intestinale;
8. pancreatit acut;
9. leziuni necrotice ale sistemului nervos central;
10. toxemie gravidic.
11. afeciuni hepatice nivelul ca i durata creterii transaminazelor sunt paralele cu extinderea leziunii
(aidc cu modificarea permeabilitii celulare i necroza); determinrile de GOT sau de GPT sunt
deosebit de utile n urmrirea evoluiei hepatitei cornice sau acute, dar interpretarea valorilor anormale
trebuie fcut cu pruden i innd seama de contextual clinic.
b) GPT creterile acestei enzime reprezint un semn precoce n hepatitele virale, aceste determinri
putnd fi utilizate ca martor al leziunii hepatocitelor i astfel s se poat face o difereniere ntre afectarea
hepatic i cea produs prin colestaz.
Creteri de 100 de ori peste valoarea normal apar n;
Afeciuni hepatice
o Hepatita viral acut (naintea apariiei icterului);
o Hepatita toxic (chloroform, CCl4, compui organici ai fosforului)
Afeciuni pancreatice
o Pancreatit acut
o unele tipuri de tumori
Creteri moderate de 1-9 ori valoarea normal apar n:
o Colestaz hepatic cronic
o ciroz
o ictere mecanice (pn la 7-10 ori valorile normale);
o tumori hepatice;
o leziuni ale musculaturii.
Un parametru important legat de activitatea transaminazelor este raportul GOT/GPT numit raport de
Rittis care in condiii fiziologice normale este egal cu 1,3. n afeciunile hepatice acest raport este
mai mic dect 1,3. Cnd GOT are valori crescute, iar GPT are valori normale este posibil suspectarea
prezenei unui infarct miocardic, iar raportul de Rittis devine mai mare dect 1,3.

Creatinfosfokinaza (CPK)
Creatin fosfokinaza catalizeaz fosforilarea creatinei de ctre ATP n celulele musculare i esutul
cerebral. Datorit rolului su n producerea de energie pentru organism, CPK reflect catabolismul tisular
normal.CPK se prezint sub forma a trei izoenzime:
1. CPK-BB (CPK1) localizat n special n esutul cerebral;
2
2. CPK-MB (CPK2) localizat n special n muchiul cardiac i puin n muchiul scheletic;
3. CPK-MM (CPK3) localizat n muchii scheletici.

Scopurile determinrii activitii enzimatice a CPK:

detectarea i diagnosticul infarctului miocardic acut i a reinfarctizrii (n special prin CPK-MB);
evaluarea posibilelor cauze ale durerii precordiale i monitorizarea severitii ischemiei miocardice
dup chirurgia cardiac sau dup catetrism;
detectarea afeciunilor musculaturii scheletice care nu sunt de origine neurogen de xemplu:
distrofia muscular Duchenne i dermatomioliza precoce.
Valori de referin: CPK total: brbai : 40 175U/l
femei : 25 140U/l
n serul subiecilor sntoi se gsesc aproape exclusiv izoenzimele CPK-MM, astfel nct o
cretere a izoenzimei CPK-MB atrage atenia asupra unor leziuni miocardice. De fapt, o cretere a
activitii CPK la peste 160U/l i o activitate CPK-MB de peste 5% din activitatea total este sugestiv
pentru infarctul miocardic acut. n IMA sau dup chirurgie cardiac, CPK-MB ncepe s creasc n 2-4
ore, atinge valoarea maxim n 12-24 de ore i revine la normal de obicei n 24-48 de ore. Persistena
valorilor crescute indic evoluia afectrii miocardice i s-a constatat c 2/3 din pacieni prezint valori
crescute dup 72 de ore de la debut. Atunci cnd cresterile dureaz mai mult de 3 zile de la debutul
infarctului, prognosticul este foarte rezervat. Reinfarctizarea este indicat de valori crescute ale CPK
aprute la un interval de cinci zile dup o revenire prealabil la normal.
Izoenzima CPK-MB poate prezenta valori crescute n:
traumatismul cardiac;
miocardit (uneori);
insuficiena caridac congestiv (creteri moderate);
chirurgia cardiac i nlocuirea valvelor cardiace;
angiografia coronarian (creteri tranzitorii);
ocuri i traumatisme electrice i termice (valori crescute apar la aproximativ 50%
din pacieni, dar nu sunt susinute de LDH1> LDH2).
Detectarea CPK-BB poate indica leziune tisular cerebral, tumori cerebrale maligne, oc sever,
insuficien renal.
Valorile crescute ale CPK-MM urmeaz afectarea musculaturii scheletice dup un traumatism sau
dup o boal muscular. Creteri moderate apar i n hipotiroidism, iar p cretere marcat apare n
activitatea muscular intens cauzat de strile de agitaie.
Creteri ale valorilor CPK total se pot datora cardiomiopatiei alcoolice, intoxicaiei cu monoxide de
carbon, hipertermiei severe,hipokaliemiei sever (scderi marcate ale poasiului seric) sau apar dup
convulsii.

Lactatdehidrogenaza (LDH) face parte din clasa oxidoreductazelor i catalizeaz transformarea

acidului lactic n acid piruvic n prezena NAD+ ca acceptor de H+.
Ecuaia reaciei catalizate este:
CH3 CH3

CH OH + NAD+ C = O + NADH +H+

COOH COOH
Ea poate fi separat electroforetic n 5 izoenzime LDH 1, LDH2, LDH3, LDH4, LDH5, separarea fiind
fcut n ordinea scderii mobilitii lor electroforetice. Fraciunile rapide (LDH1, LDH2) sunt de

3
provenien miocardic, iar cele lente (LDH4, LDH5) provin mai ales din ficat i parial din musculatura
scheletic.
n infarctul miocardic acut, LDH este aproape ntotdeauna crescut, nc din primele 10-12 ore de
la debut, atingnd un vrf dup 48-72 de ore. Persistena valorilor crescute timp de 10-14 zile este util
pentru diagnosticul mai trziu la primul consult al pacientului dup o perioad suficient de lung astfel
nct valorile CPK i GOT s devin normale. Valori ale LDH mai mari de 2000U/l sugereaz un
prognostic foarte rezervat. Deoarece exist numeroase afeciuni n care valorile LDH cresc, este necesar
i determinarea activitii izoenzimelor LDH1 i LDH2. Valorile LDH1 pot rmne crescute chiar dac cele
ale LDH total revin la normal. n infarctele minore, LDH 1 poate fi crescut, n timp ce LDH total prezint
valori normale. n IMA asociat cu insuficiena cardiac congestiv pot apare valori crescute ale LDH 1 i
ale LDH2. n insuficiena cardic congestiv propriu-zis, valorile izoenzimelor LDH sunt normale.
Introducerea valvelor intracardiace prostetice determin constant hemoliza cronic nsoit de
creteri ale LDH total, ale LDH1 i LDH2. Astfel de creteri apar i nainte de interveniile chirurgicale la
pacienii cu modificri hemodinamie severe ale valvelor cardiace.

Creteri ale izoenzimelor LDH n diferite tipuri de afeciuni

Afeciunea Izoenzime LDH
crescute
Infarct miocardic acut I i II
Infarct cortical renal acut I i II
Anemie pernicioas I
ocuri electrice i termice, traumatisme V
IMA cu congestie hepatic acut I i V
Limfoame maligne III i IV
Carcinom de prostat V
Embolie pulmonar i infarct II i III
Dermatomiozite V

Determinarea activitii LDH este util i n cazul respingerii acute a transplantului de inim
deoarece LDH1 crete mai mult de 100U/l i - ca procent - ajunge la 35% din LDH total n primele 4
sptmni dup intervenie. Aceste valori pot scdea sub o terapie imunosupresoare corespunztoare;
LDH total continu s rmn crescut, chiar dac LDH1 revine la normal.

Gama glutamil tranferaza (GGT sau -GT)

GGT catalizeaz transferul gruprii -glutamil de la peptide ctre ali aminoacizi. Este o protein
heterodimeric, fiecare subunitate constnd dintr-un singur lan polipeptidic. Este localizat la nivelul
membranei citoplasmatice a numeroase celule, centrul activ al enzimei fiind situat n exterior. GGT are un
rol important att n sintezele proteice i n reabsorbia proximal tubular a aminoacizilor din filtratul
glomerular, ct i n metabolimul mediatorilor inflamaiei (ca de exemplu, leucotrienele), al substanelor
carcinogene i toxice.
GGT msurat n ser provine n special din ficat. Cea mai mare parte este legat de lipoproteine, n
special HDL, dar i de LDL. O mic parte este hidrosolubil, fiind asemntoare GGT eliberate de
proteaze din membrana celulelor hepatice. GGT legat de HDL este crescut n special n bolile hepatice
non-icterice, n timp ce GGT legat de LDL este crescut n colestaz, iar fraciunea hidrosolubil crete
ntr-o varietate de boli hepatice. GGT este ndeprtat din plasm prin bil, activitatea enzimei n bil
fiind de 10 ori mai mare dect cea plasmatic. O parte din ea este degradat de rinichi i eliminat prin

4
urin. Sinteza GGT poate fi indus n ficat de colestaz, de consumul cronic de alcool sau de dozele
terapeutice ale unor medicamente.

Scopurile determinrii GGT:

1. depistarea alcoolismului - este cel mai sensibil indicator, fiind enzima a crei cretere depete
celelalte enzime hepatice dozate n mod curent. La alcoolici, nivelul seric al GGT poate ajunge la valori
de peste 50 ori valoarea normal, gradul de cretere depinznd att de cantitatea de alcool consumat, ct
mai ales de persistena ndelungat a consumului; practic, este enzima-marker pentru alcoolism. Este
foarte util n diagnosticarea alcoolismului ascuns i n evidenierea valorilor crescute ale fosfatazei
alcaline de origine osoas sau hepato-biliar.
2. monitorizarea abstinenei de la alcool.
3. diagnosticul bolilor hepatice i biliare n astfel de afeciuni, valorile GGT se coreleaz cu cele
ale fosfatazei alcaline.
4. diagnosticul unei hepatopatii n prezena unei afeciuni osoase, a sarcinii sau n perioada
copilriei sunt condiii n care valorile fosfatazei alcaline cresc, n timp ce valorile GGT se ncadreaz n
valorile de referin.
GGT are valori considerate fiziologic normale:
La femeile nsrcinate i la copiii de peste 3 luni.
n afeciunile osoase n cazul persoanelor aflate n perioada de cretere (copii i adolesceni).
n afeciuni renale i n efortul fizic intens.

Semnificaie diagnostic valori crescute:

n afeciunile hepatice creterile ei sunt paralele cu cele ale fosfatazei alcaline,
leucinaminoppetidazei, 5-nucleotidazei, dar este un indicator mai sensibil dect ele. n hepatita acut,
creterile ei sunt mai puin marcate dect ale altor enzime hepatice, dar ca dinamic valorile ei
sunt ultimele care revin la normal i de aceea ea este util n indicarea refacerii organismului. n
hepatita cronic, GGT crete mai mult dect n hepatita acut, valorile ei fiind mai mari dect cele ale
GOT i GPT.
GGT prezint creteri marcate (impresionante) n serul bolnavilor cu retenie biliar.
Astfel, n timp ce fosfataza alcalin crete de 3-5 ori fa de limita superioar a normalului, GGT
depete aceast limit de 10-30 ori. n ciroza biliar primar, creterea ei este marcat.
n cazurile de ficat grsos (steatoz hepatic), creterile ei sunt paralele cu cele ale TGP i
TGO, dar sunt mai marcate.
n icterul obstructiv, creterile sunt mai rapide i mai mari dect cele ale fosfatazei alcaline.
n colestaza mecanic sau viral, GGT i fosfataza alcalin au niveluri la fel de crescute,
dar n colestaza indus medicamentos, GGT este mai mare dect leucinaminopeptidaza.
GGT este ntotdeauna crescut n pancreatita acut.
GGT este crescut la 50% din pacienii cu IMA creterea ei ncepe n a 4-a, a 5-a zi dup
debutul IMA, atingnd un maxim dupa 8-12 zile.
n cancerul de prostat, creterile ei sunt paralele cu cele ale fosfatazei acide.
GGT crete de 3-10 ori peste limita normalului n neoplasmul primitiv sau metastatic al
ficatului, n insuficiena cardiac congestiv cu staz hepatic, dup administrarea de barbiturice.
GGT este uor crescut de 1,5-2 ori peste limita superioar a normalului i n serul
pacienilor cu hipertrigliceridemie, aceasta sugernd o stimulare a proteosintezelor hepatice.