Organizarea Moleculară A Membranelor Text

Mircea Leabu i Marina T.
Nechifor Biomembranele, unitate n diversitate
2.1. Consideraii generale asupra membranelor

biologice (biomembranelor)
2.1.1. Definiia noiunii de membran celular
Pentru ca o celul s supravieuiasc i s-i desfoare eficient activitatea
trebuie s i asigure o independen relativ fa de mediul nconjurtor. Asta
nseamn c trebuie att s-i protejeze structurile i echilibrele moleculare interne,
ct s i fie capabil s recepteze informaii despre ce se ntmpl n jurul su, s le
interpreteze i s i adapteze corespunztor comportamentul. Pentru rezolvarea
acestor nevoi ale celulei trebuie s existe o component n organizarea celulei care s
delimiteze i s protejeze celula de variaiile necontrolabile din mediu. Aceast
component, acceptat intuitiv de mult vreme, a fost la nceput denumit
membran plasmatic. Noiunea i are originea n lucrrile lui Wilhelm
Friedrich Benedikt Hofmeister (1824 1877) care, n 1867, a postulat c fiecare
mas plasmatic este mrginit la suprafaa exterioar de un strat subire mai
translucid, cu indice de refracie a luminii mai mare i cu densitate i tenacitate
crescute. Hofmeister a numit aceast structur de mrginire ca strat de piele al
protoplasmei (Hautschicht). Noiunea de membran plasmatic i caracterul su
semipermeabil au nceput s fie menionate n manuale numai dup studiile de
osmolaritate ale botanistului, chimistului i farmacistului german Wilhelm
Friedrich Phillip Pfeffer (1845 1920), respectiv de permeabilitate ale
botanistului i geneticianului olandez Hugo Marie de Vries (1848 1935). O alt
denumire sinonim, sub care poate fi ntlnit ceea ce acum se denumete
membran celular este aceea de plasmalem.
Am putea defini lapidar membrana celular ca acea ultrastructur,
format n principal din lipide polare i proteine, care separ, dar i unete
celula cu mediul. Se va vedea c pe msur ce vom nainta n prezentarea
organizrii moleculare i a funcionrii membranei celulare definiia se va ncrca de
semnificaii. Este aici momentul s menionm o convenie: vom numi ultrastructur
n cursul acestui manual orice component supramolecular din structurile vii, n
acest context din celule, care nu poate fi observat la microscopul optic (a crui
putere de rezoluie este de 0,2Pm), ci doar la microscopul electronic. Aadar,
convenional, n contextul biologiei celulare, numim ultrastructur orice element de
organizare a celulelor, esuturilor sau organelor care nu se poate observa dect la
microscopul electronic, iar structur ceea ce se poate observa la microscopul optic.
Membrana celular i, n general, biomembranele, unde includem i
endomembranele, au o grosime de 7-10nm (0,007-0,01Pm), adic sunt de ~20 de ori
mai subiri dect o structur observabil la microscopul optic.
O scurt incursiune n istoria evoluiei cunotinelor despre organizarea
molecular a membranei celulare poate fi util formrii gndirii tiinifice a tinerilor
interesai s se ndrepte ctre cercetarea biomedical.
2.1.2. Repere istorice n cunoaterea organizrii membranei

celulare
Prezena unei ultrastructuri care s nveleasc celula, pentru a o separa de
mediu i a menine homeostazia intern, a fost intuit, aa cum am amintit mai sus,
dinainte de a se cunoate din ce este format la nivel biochimic i cum este
organizat pentru a ndeplini funciile de baz: separarea mediului intracelular de cel
extracelular i permiterea interaciunilor celulei cu mediul, fr de care nu ar fi
posibil supravieuirea. Aceast intuire a reprezentat totodat o provocare pentru
oamenii de tiin din domeniu. Dup studiile de pionierat menionate mai sus,
primul care a contribuit la obinerea unor informaii utile n dezvoltarea
13
Mircea Leabu i Marina T. Nechifor Biomembranele, unitate n diversitate
cunotinelor despre natura (bio)chimic a membranei celulare a fost Charles

Ernest Overton, care n 1899 [1] a raportat o serie de rezultate ce au artat c
permeabilitatea prin membran a unor compui chimici este cu att mai ridicat cu
ct solubilitatea lor n lipide este mai ridicat. Aceste rezultate au dus la ideea c
lipidele sunt componente majore ale membranelor celulare. Experimentele au fost
efectuate att pe celule vegetale, ct i pe eritrocite, dovedindu-se c lipidele
structureaz membranele celulare indiferent de regnul crora acestea aparin.
Acestei informaii i s-au adugat rezultatele studierii tipurilor de molecule din
diverse organisme, care au dovedit c lipidele sunt de departe cele mai abundente
molecule hidrofobe din sistemele celulare. Investigaiile asupra proprietilor fizice
ale membranelor celulare au artat c rezistena lor electric sau capacitana sunt n
domeniile celor obinute n sisteme create prin folosirea lipidelor izolate.
Evidenierea de ctre Irving Langmuir1 a faptului c lipidele amfifile ntinse
ntr-un film pe o suprafa apoas se orienteaz cu capul polar ctre ap i cu prile
hidrofobe ctre aer, a reprezentat premiza unor experimente care au dus la
aprofundarea cunoaterii modului de organizare a membranelor celulare. Aceasta
pentru c, n 1925, medicul olandez Evert Grter (1881 1954) i asistentul su
Frank Grendel, folosind tehnica lui Langmuir au descoperit c lipidele extrase din
membrana eritrocitar acoper o suprafa dubl de monofilm, fa de suprafaa
populaiei eritrocitare din care lipidele au fost extrase [2]. Ei au propus c lipidele
sunt organizate n membranele celulare sub forma unui bistrat i pot fi considerai
prinii actualului model de organizare a membranei celulare, pe care l vom dezvolta
i analiza detaliat ceva mai jos.
Urmtorul moment n nelegerea organizrii moleculare a membranei
celulare a fost n 1935, cnd James Frederic Danielli (1911 1984) i Hugh
Davson (1909 1996), ambii de la University College din Londra au stipulat c la
nivelul membranelor trebuie s existe i proteine ntruct tensiunile superficiale de la
suprafaa unui bistrat lipidic sunt mult mai ridicate dect cele de la suprafaa
membranelor celulare. Adugarea de proteine n mediul de formare a unui bistrat
lipidic duce la scderea tensiunilor superficiale. Pe baza acestor rezultate
experimentale Danielli i Davson au propus modelul sandwich de organizare a
membranei celulare conform cruia aceasta este format dintr-un bistrat lipidic
plasat ntre dou straturi de proteine globulare.
Modelul Danielli-Davson a prut s fie confirmat de aspectul trilaminat
evideniat electrono-microscopic pentru membranele celulare (Fig. 2.1). Examinarea
electrono-microscopic a membranelor ntr-o diversitate de celule i observaia c
toate arat la fel, l-a determinat pe J. David Robertson (1923 1995) s lanseze,
n 1957, modelul unit membrane. Toate membranele se evideniau ca dou
straturi (lamine) electrono-opace ce delimitau unul electrono-transparent. Modelul
meninea ideea c membranele sunt alctuite dintr-un bistrat lipidic plasat ntre
dou straturi proteice, iar observarea atent sugera c proteinele din exterior sunt
diferite de cele din interior [3].
Anii 60 70 ai secolului XX au reprezentat perioada unor dezvoltri care au
dus n 1972 la elaborarea de ctre Seymour Jonathan Singer (n. 1924) i Garth
L. Nicolson (n. 1943) a modelului n mozaic fluid de organizare a membranei
celulare [4], model valabil i pentru endomembrane, adic pentru toate tipurile de
biomembrane. Articolul care a introdus denumirea modelului a fost anticipat de o
lucrare a celor doi, din noiembrie 1971, n care au definit principiile organizrii
moleculare a membranei celulare [5]. n conformitate cu acest model, formaiunea
1 Irving Langmuir, chimist i fizician (1881 1957), a primit n 1932 Premiul Nobel n chimie pentru lucrrile sale
n chimia suprafeelor, aa cum a motivat juriul ("for his discoveries and investigations in surface chemistry").
14
de baz a unei membrane este un bistrat lipidic cu proprieti fluide manifestate

bidimensional, mozaicat cu proteine care fie sunt ataate de o parte sau de cealalt a
bistratului, fie sunt cufundate n acesta strbtndu-l complet sau parial.
Fig. 2.1. Biomembranele (membranele celulare i endomembranele) se evideniaz n imaginile

de microscopie electronic de transmisie ca ultrastructuri cu aspect trilaminat. Punctele negre
de pe suprafaa celulei reprezint markeri electronodeni (aur coloidal cu diametrul de 5nm) pregtii
pentru evidenierea componentei glucidice a membranei. Mircea Leabu, 2014.
Fig. 2.2. Imagine de microscopie electronic de transmisie pentru un preparat obinut prin
tehnica de ngheare-fracturare. n jumtatea dreapt a imaginii, unde fractura a trecut printre foiele
bistratului lipidic al unei membrane celulare, se observ abundena de particule proteice care
reprezint proteine ce strbat complet structura lipidic de baz. (Imagine pus cu amabilitate la
dispoziie de Dr. Florea Lupu, University of Oklahoma Health Sciences Center.) Florea Lupu, 2014.
15
Fig. 2.3. O reprezentare la nivel molecular a organizrii biomembranelor sub forma mozaicului
fluid. Desenul sugereaz diversitatea de componente (diferite lipide, variate proteine n verde,
multiple structuri glucidice hexagoane albastre) care argumenteaz eterogenitatea organizrii, ca i
distribuia asimetric a biomoleculelor la nivelul ultrastructurii. Mircea Leabu, 2014.
Membranele, organizate n mozaic fluid (Fig. 2.3), se caracterizeaz prin

eterogenitate compoziional (bazat pe o mare diversitate de tipuri de molecule ce
intr n alctuirea lor) i prin aranjare asimetric (ce este conferit chiar de
elementul de baz, bistratul lipidic, la nivelul cruia foia extern conine
preponderent anumite tipuri de lipide, iar foia intern altele). Asimetria este sporit
de proteinele ce completeaz organizarea membranelor, cele adsorbite pe faa
extern fiind diferite de cele prezente pe faa intern, n timp ce proteinele cufundate
n structura lipidic de baz expun poriuni diferite ale lanului polipeptidic de o
parte sau de cealalt a bistratului. Pe de alt parte, componenta glucidic a
membranelor se gsete numai la suprafaa acestora, crescnd caracterul asimetric al
organizrii lor. n sfrit, diversitatea de molecule care organizeaz membranele
prezint o permanent dinamicitate, ceea ce le confer un comportament fluid. Mai
mult, micarea componentelor lipidice sau proteice se realizeaz aproape n
exclusivitate n planul membranei, fr rsturnri spontane ale moleculelor care s
permit trecerea lipidelor dintr-o foi a bistratului n cealalt, sau s permit
proteinelor s treac poriunile expuse la exterior ctre interior, sau invers. Aceast
mobilitate restricionat la micrile n plan determin caracterul fluid manifestat
bidimensional al membranelor. Toate aceste caracteristici, datorate
comportamentului componentelor moleculare ale membranelor, se rsfrng, ntr-un
mod fericit, asupra funcionalitii lor, aa cum se va vedea n detaliile de mai jos
asupra organizrii ultrastructurii care separ, dar i unete celula cu mediul
nconjurtor.
16
n ceea ce urmeaz ne propunem s abordm organizarea molecular i

funcionarea membranei celulare parcurgnd drumul de la molecule la o structur
funcional.
2.1.3. Compoziia chimic global a membranei celulare

Pentru o abordare logic i angajarea n drumul pe care ni l-am propus, putem
pleca de la ceea ce conine sub aspect chimic membrana celular. n compoziia
membranelor se afl ap ntr-un procent de 20-30, restul de 70-80% fiind reziduu
uscat. Ct privete compoziia acestui reziduu uscat, substanele minerale sunt slab
reprezentate (pn la 1%), restul de 99% fiind substane organice, adic lipide 40-
50%, proteine 50-60% i o component glucidic de pn la 10%2.
Compoziia chimic global mai sus menionat poate prea contradictorie
cunotinelor noastre despre cantitatea de ap din sistemele biologice. Este corect, n
sistemele biologice apa reprezint aproximativ 70-80%, iar substana uscat numai
20-30%. Care este logica acestei situaii rsturnate? O putem nelege plecnd de la
nsi definiia membranei celulare: ultrastructura care separ, dar i unete celula
cu mediul.
S dezvoltm raionamentul. Ce caracter fizico-chimic are interiorul celular?
Unul hidrofil. Apa este solventul biologic fr de care reaciile biochimice care stau la
baza proceselor celulare nu s-ar putea desfura. Dar ce proprieti fizico-chimice are
mediul extracelular? Tot hidrofile. Aadar, membrana celular trebuie s separe
dou medii hidrofile. Este de ateptat, n conformitate cu legile fizicii, ca o barier
eficient ntre dou medii hidrofile s aib caracter hidrofob. Aa stnd lucrurile,
aceast ultrastructur cu caracter hidrofob trebuie s exclud masiv apa, de unde
procentul redus de ap aflat la nivelul structurii membranelor. Aadar, soluia
optim s-a dovedit a fi o ultrastructur bazat pe lipide. Care sunt modalitile de
aranjare i rolurile lipidelor, proteinelor i componentei glucidice din organizarea
molecular a membranelor vom dezvolta n cele ce urmeaz, abordnd pe rnd
aceste componente i avnd n minte, n permanen, modelul mozaicului fluid de
organizare a ultrastructurii denumit membran celular.
Ceea ce mai putem meniona aici este faptul c aa cum se sugera din definiia
noiunii de membran celular aceasta trebuie s se comporte ca o barier ntre
mediile extracelular, respectiv intracelular, ns aceast barier nu trebuie s fie una
absolut ci selectiv, adic s permit interaciunea celulei cu mediul. De aceea,
putem afirma c membrana celular trebuie s ndeplineasc dou mari categorii de
funcii: (i) funcie de barier (adic s nu permit trecerea ntmpltoare prin ea)
i (ii) funcie metabolic (adic s asigure celulei schimburi de informaie i de
substan cu mediul, n ambele sensuri: dinspre exterior spre interior i dinspre
interior spre exterior).
Bibliografie selectiv
1. Overton E. (1899) ber die allgemeinen osmotischen Eigenschaften der Zelle, ihre vermutlichen
Ursachen und ihre Bedeutung fr die Physiologie. Vierteljahrsschr. Naturforsch. Ges Zrich 44: 88
114.
2. Gortel E, Grendel F. (1925) On bimolecular layers of lipoids on the chromocytes of the blood. J Exp
Med. 41, 439443.
3. Robertson JD. (1957) New observations on the ultrastructure of the membranes of frog peripheral
nerve fibers. J Biophys Biochem Cytol. 3: 1043-8.
4. Singer SJ, Nicolson GL. (1972) The fluid mosaic model of the structure of cell membranes. Science.
175: 720-31.
2 Repartizarea procentelor ntre substanele organice se raporteaz la totalul acestora; adic totalul lipide +
proteine + glucide = 100%. Atragem atenia cititorilor c n toate situaiile n care se opereaz cu procente,
acestea trebuie corect raportate la baza de referin.
17
5. Singer SJ, Nicolson GL. (1971) The structure and chemistry of mammalian cell membranes. Am J
Pathol. 65: 427-37.
6. Steck TL, Weinstein RS, Straus JH, Wallach DF. (1970) Inside-out red cell membrane vesicles:
preparation and purification. Science. 168: 255-7.
7. Steck TL. (1972) Selective solubilization of red blood cell membrane proteins with guanidine
hydrochloride. Biochim Biophys Acta. 255: 553-6.
8. Steck TL. (1974) The organization of proteins in the human red blood cell membrane. A review. J Cell
Biol. 62: 1-19.
9. Marchesi SL, Steers E, Marchesi VT, Tillack TW. (1970) Physical and chemical properties of a
protein isolated from red cell membranes. Biochemistry. 9: 50-7.
10. Tillack TW, Marchesi SL, Marchesi VT, Steers E Jr. (1970) A comparative study of spectrin: a
protein isolated from red blood cell membranes. Biochim Biophys Acta. 200: 125-31.
11. Tillack TW, Marchesi VT. (1970) Demonstration of the outer surface of freeze-etched red blood cell
membranes. J Cell Biol. 45: 649-53.
12. Segrest JP, Jackson RL, Andrews EP, Marchesi VT. (1971) Human erythrocyte membrane
glycoprotein: a re-evaluation of the molecular weight as determined by SDS polyacrylamide gel
electrophoresis. Biochem Biophys Res Commun. 44: 390-5.
13. Nicolson GL, Marchesi VT, Singer SJ. (1971) The localization of spectrin on the inner surface of
human red blood cell membranes by ferritin-conjugated antibodies. J Cell Biol. 51: 265-72.
14. Marchesi VT, Tillack TW, Jackson RL, Segrest JP, Scott RE. (1972) Chemical characterization
and surface orientation of the major glycoprotein of the human erythrocyte membrane. Proc Natl Acad
Sci U S A. 69: 1445-9.
15. Tillack TW, Scott RE, Marchesi VT. (1972) The structure of erythrocyte membranes studied by
freeze-etching. II. Localization of receptors for phytohemagglutinin and influenza virus to the
intramembranous particles. J Exp Med. 135: 1209-27.
16. Segrest JP, Kahane I, Jackson RL, Marchesi VT. (1973) Major glycoprotein of the human
erythrocyte membrane: evidence for an amphipathic molecular structure. Arch Biochem Biophys. 155:
167-83.
18
2.2. Lipidele membranare

2.2.1. Aspecte generale
Lipidele reprezint 40-50% din materialul organic al membranelor. Sub
aspect molecular ele constituie componenta biochimic de baz a membranelor
celulare (raportul molecular lipide/proteine fiind de ~50/1).
Aa cum stipuleaz modelul n mozaic fluid al organizrii
membranelor, lipidele sunt organizate n membrane sub form de bistrat, cu
capetele hidrofile la exterior i cozile hidrofobe n interior, bistrat care prezint
proprieti fluide, manifestate bidimensional. n bistrat lipidele au o distribuie
(dispunere) asimetric i sunt de o mare eterogenitate. Aadar, membranele celulare
au la baza organizrii lor un bistrat lipidic cu comportament fluid manifestat
bidimensional, caracterizat prin asimetrie i eterogenitate.
n cele ce urmeaz vom cuta s argumentm aceste afirmaii de ordin
general, detaliind aspectele legate de eterogenitatea lipidelor ce intr n componena
membranelor, dispunerea lor asimetric n cadrul bistratului i comportamentul lor
fluid, manifestat bidimensional, cu scopul de a nelege cum acestea asigur
funcionarea membranelor. Informaiile se vor nuana i ne vor ajuta s nelegem
mai bine cum opereaz membranele celulare, prin abordarea ulterioar a aspectelor
legate de proteinele membranare ca i prin discutarea componentei glucidice a
membranelor. De punctat c tot ce vom prezenta aici, n principiu, pentru
organizarea i funcionalitatea membranei celulare se aplic i membranelor din
interiorul celulelor, aa-numitele endomembrane, cele care structureaz organitele
delimitate de membrane.
2.2.2. Definiia lipidelor membranare

n problema definirii lipidelor membranare, nu ne propunem un enun cu
valabilitate absolut. Intenia este de a formula o definiie operaional, pentru
interesul nostru, astfel nct s avem aceeai percepie a noiunii. Vom structura
aceast definiie dup modelul logic al definirii prin gen proxim i diferen(e)
specific(e)3.
3 Logica, tiina care ne nva cum s gndim corect pe baza unor structurri raionale ale cunotinelor,
stabilete patru modaliti de construcie a definiiilor pentru noiuni (fiine, obiecte, fenomene). Aceste patru
modaliti conduc la patru tipuri de definiii care sunt: (i) definiiile genetice (constructive) prin care se
indic modul n care a luat fiin noiunea; (ii) definiiile ostensive (demonstrative sau prin indicare) prin
care se enumer civa dintre membrii (preferabil reprezentativi) clasei din care face parte noiunea de definit;
(iii) definiiile enumerative prin care se enumer toi membrii clasei; (iv) definiiile prin gen proxim i
diferen(e) specific(e) prin care, mai nti se stabilete o categorie mai larg de noiuni creia i aparine i
cea pe care dorim s o definim (genul proxim), dup care se identific i se enumer attea caracteristici, specifice
noiunii pe care urmrim s o definim, cte sunt necesare pentru o extragere fr ambiguiti din genul proxim i
pentru definirea clar.
Pentru extinderea demersului intelectual al acestei note de subsol, s exemplificm cu definiii pentru fiecare tip
din cele patru.
n privina definiiilor genetice am putea propune una pentru ce este Romnia i vom spune: Romnia este o ar
european format printr-un proces ndelungat de unire a unor ri medievale mici, mai nti a Moldovei cu ara
Romneasc, n a doua jumtate a secolului al XIX-lea, proces finalizat prin adugarea Ardealului i Basarabiei la
sfritul primului rzboi mondial.
Ca exemplu de definiie ostensiv s ncercm aplicarea la Oceania, spunnd: Oceania este o regiune de insule din
Oceanul Pacific ntre care se afl Papua Noua Guinee, Insulele Marshall, Samoa, Noua Zeeland.
Definiia enumerativ o putem exemplifica pentru rile scandinave i vom putea spune: rile scandinave sunt
Norvegia, Suedia, Finlanda i Danemarca.
Nu vom da exemplu de definiie prin gen proxim i diferen(e) specific(e), deoarece folosim metoda n text la
definirea lipidelor membranare, dar vom remarca faptul c toate celelalte tipuri de definiii se adreseaz, de
regul, unor iniiai (n istorie sau geografie pentru exemplele folosite), pe cnd tipul de definiie ce face subiectul
acestei fraze este unul instructiv, care poate ajuta nelegerea i unora mai puin sau deloc iniiai. Definiia cu gen
proxim i diferene specifice este cel mai des utilizat n tiine, dac nu n exclusivitate. Prin acest tip de definiie
se pot defini chiar i obinuinele, despre care tot tiina logicii ne spune c sunt greu de definit. Condiia este ca
cel care definete s cunoasc foarte bine ceea ce trebuie s defineasc. Pentru cei care sunt instruii, acest tip de
19
Lipidele membranare reprezint o categorie larg de substane organice

relativ insolubile n ap, solubile n cei mai muli solveni organici, cu caracter
amfifil, multe dintre ele fiind esteri ai unor alcooli polihidroxilici cu acizi grai (acizi
carboxilici cu lan alifatic liniar, adic o caten liniar coninnd mai muli atomi de
carbon).
Se observ c, din punct de vedere al structurii chimice, definiia este foarte
cuprinztoare sub aspectul speciilor moleculare pe care le poate include. S nu
uitm, ns, c interesul nostru este de natur biologic, aa c, privind din aceast
perspectiv, mai multe ntrebri pot frmnta dorina de a ptrunde logic domeniul.
Care ar fi acestea?
1. De ce lipide (n elementul de baz al organizrii biomembranelor care este
bistratul lipidic)?
2. Care dintre lipide (particip la organizarea membranelor)?
3. De ce (dispunere n) bistrat?
S lum pe rnd aceste ntrebri i s punctm aspecte care s ne ajute n a
gsi rspunsuri, cu rsfrngere asupra nelegerii funcionalitii membranelor.
2.2.3. Descrierea lipidelor membranare i caracterizarea

bistratului lipidic
2.2.3.1. Lipidele sunt componente ideale pentru structurarea
membranelor
Aceast seciune i propune s rspund la prima ntrebare din cele de mai
sus: de ce lipide? Caracterele fizico-chimice ale lipidelor le definesc drept molecule
ideale pentru structurarea de membrane, a cror principal menire este aceea de a
separa dou compartimente apoase (interiorul celulelor de mediul nconjurtor). De
ce le definesc drept molecule ideale? Pentru c structura chimic i caracterul lor
amfifil induce proprieti amfipate arhitecturii pe care o organizeaz, partea
hidrofob putnd crea o barier, iar partea hidrofil conferind capacitatea de a
acomoda mediile apoase aflate de o parte i de cealalt, adic interiorul, respectiv
exteriorul celulei.
Lipidele sunt molecule mici cu posibiliti mari de mobilitate, astfel nct
structurile pe care le pot asambla nu sunt rigide (acest lucru reprezentnd un avantaj
pentru biomembrane). Sunt molecule relativ insolubile n medii apoase, prezentnd
tendin de asociere spontan, ceea ce confer structurilor pe care le formeaz
tenacitatea de a-i pstra integritatea sau de a se reface rapid, atunci cnd sunt
agresate mecanic. Tendina spontan de asociere implic un consum energetic
minim n pstrarea integritii bistratului, ceea ce reprezint un avantaj n economia
celular. Dei sunt molecule mici, structura lor este deosebit de complex (chiar
numai rememornd definiia, dar i, cum se va vedea n cele ce urmeaz, cnd vom
rspunde ntrebrii Care dintre lipide?). Vom vedea c aceast complexitate
chimic este exploatat judicios de celul (vezi la seciunea despre rolul lipidelor
membranare). Dac ar fi s punctm, pentru nceput, avantajele ce rezult n privina
structurrii membranelor, notm c defectele, ce ar putea aprea n structura
chimic a lipidelor membranare sau n organizarea bistratului, sunt uor de acceptat
i, ulterior, de corectat, fr a induce efecte biologice catastrofale (caracterul amfifil
nu se pierde). Mai mult, modelarea structural a lipidelor, dup cum va reiei mai jos
(vezi la seciunea despre rolul lipidelor membranare), care se face printr-un bagaj
enzimatic adecvat, consistent i bine elaborat, folosete integrrii celulei n contextul
biologic n care se afl i funcioneaz.
definiie este elocvent din punct de vedere formator, deoarece creeaz o imagine sugestiv pentru obiectul,
noiunea sau fenomenul care se definete.
20
2.2.3.2. Clasificarea lipidelor membranare

Prin ceea ce vom include n rspunsul la ntrebarea: care dintre lipide? vom
argumenta caracterul eterogen al organizrii moleculare a membranelor celulare.
Biochimia descrie o mare diversitate de clase de lipide, grupate n dou mari
categorii: lipide complexe, caracterizate prin prezena n structura lor a acizilor grai
(acilgliceroli, fosfogliceride, sfingolipide, ceruri) i lipide simple (steroizi,
prostaglandine i terpene). Ne putem ntreba, pe bun dreptate, dac toate aceste
clase de lipide pot fi ntlnite n structura membranelor celulare. Ei bine, rspunsul
este: NU! n membranele celulare ntlnim numai trei tipuri de lipide pe care le
putem clasifica, n funcie de structura lor chimic global, n: (1) fosfolipide, (2)
colesterol i (3) glicolipide.
Enumerarea este n funcie de abundena n care apar. Fosfolipidele reprezint
70-75% dintre lipidele membrane, colesterolul 20-25%, iar glicolipidele 1-10%. O
meniune de fcut, n legtur cu glicolipidele din membranele celulelor animale,
este aceea c ele sunt din clasa sfingolipidelor (vezi despre sfingolipide mai jos, la
clasificarea n funcie de poliolul din structur). Iat, n aceast prim clasificare a
lipidelor membranare, o prim dovad a eterogenitii lipidelor membranare.
Ideea de eterogenitate a lipidelor membranare sporete, ns, dac ne-am
propune s abordm chiar i numai complexitatea tipurilor de lipide din clasa
fosfolipidelor, cele mai bine reprezentate lipide din membranele celulare, sub
aspectul abundenei. Acestea se pot clasifica, n funcie de poliolul din structur n:
(i) fosfogliceride (glicerofosfatide) dac poliolul este glicerin (un
triol);
(ii) fosfosfingozide (sfingofosfatide, sau simplu sfingozide) dac
poliolul este sfingozin, de fapt un aminodiol cu un lan alifatic (acesta
constituie unul din lanurile alifatice ale cozii hidrofobe, cel de al doilea
fiind un acid gras inserat printr-o legtur amidic la gruparea amino a
sfingozinei).
Dar eterogenitatea fosfolipidelor membranare nu se termin aici. Ea se
nuaneaz prin analiza detaliilor referitoare la structura lor chimic. n cele ce
urmeaz, vom discuta despre eterogenitatea structural a fosfogliceridelor, dar
menionm c unele aspecte se extind i asupra sfingozidelor.
Structura de principiu a unui fosfoglicerid este reprezentat grafic, n mod
intuitiv, n Fig. 2.4. Se observ c pe scheletul polialcoolului (glicerina) se afl grefate
pe de o parte (la hidroxilii din poziiile 1 i 2) dou lanuri alifatice provenind de la
acizii grai esterificai cu gruprile hidroxil (acestea formnd coada hidrofob a
lipidului membranar), iar, pe de alt parte (la hidroxilul din poziia 3), o molecul,
notat simbolic cu X (variabil), ataat prin intermediul unei grupri fosfat,
mpreun formnd partea esenial a capului hidrofil al fosfolipidului.
n funcie de compusul hidrofil, variabil X, fosfogliceridele se mpart n:
(i) fosfatidilcoline (prescurtare internaional PC, denumire uzual
lecitin), cnd X este colin (Fig. 2.5);
(ii) fosfatidiletanolamine (PE), X fiind etanolamin;
(iii) fosfatidilserine (PS), la care X este serin;
(iv) fosfatidilinozitoli (PI), n care X este inozitol;
(v) acid fosfatidic (PA), cu X-ul fiind, simplu, un atom de hidrogen.
Fosfolipidele enumerate mai sus se afl n diferite proporii n membranele
diverselor celule, dei exist date care le clasific n anumite intervale de abunden,
cum se va meniona puin mai jos. Celula controleaz aceste rapoarte ntre cantitatea
de diferite fosfolipide n membrane n funcie de nevoile ei, n diferitele situaii
concrete n care se poate afla.
21
Fig. 2.4. Structura schematic, de principiu, a unui fosfoglicerid. n

verde este reprezentat miezul glicerolului; n cafeniu sunt reprezentate
lanurile alifatice ale acizilor grai; cu X, n albastru, este reprezentat
partea variabil din capul hidrofil.
Echivalentul fosfatidilcolinelor pentru sfingofosfolipidele membranare sunt

sfingomielinele (SM). De amintit aici (pentru sporirea ideii de eterogenitate a
fosfolipidelor membranare) i dou tipuri de fosfolipide neuzuale: 1) fosfolipidele
n care dou molecule de acid fosfatidic sunt condensate la hidroxilii laterali ai unei a
treia molecule de glicerin, formnd cardiolipine (1,3-difosfatidil-gliceroli),
fosfolipide specifice membranei mitocondriale interne; 2) fosfolipidele echivalente
fosfatidilcolinelor sau fosfatidiletanolaminelor, care n poziia 1 a glicerinei au
eterificat un alcool gras nesaturat cu dubla legatur ntre C1 i C2, numite
plasmalogene i reprezentnd ~10% dintre fosfolipide n creier, muchi, testicul,
rinichi. De remarcat c n muchiul cardiac nivelul plasmalogenelor ajunge la 50%,
speculndu-se c ar putea proteja miocardul fa de efectul speciilor reactive de
oxigen de tipul oxigenului singlet.
Ct privete abundena sub care tipurile de fosfolipide apar n organizarea
bistratului, PC, SM, PE i PS sunt majoritare, reprezentnd fiecare, n medie, dac ar
fi s calculm considernd toate membranele despre care
avem date, ntre 20 i 25%. PI i PA sunt fosfolipide mai
slab reprezentate, nsemnnd pn la 10-15% primul,
respectiv 1-2% cel de-al doilea; n ciuda acestui fapt (sau
poate tocmai de aceea) aceste dou fosfolipide sunt
implicate n procese celulare deosebit de importante (vezi
la rolul lipidelor membranare). Dincolo de aceste valori
medii, mai uor de reinut, abundena fiecrui tip de
fosfolipid n diversele biomembrane variaz, ns, n limite
destul de largi [1].
Fig. 2.5. Structura unei fosfatidilcoline (1-stearil-2-oleil-fosfatidil-

colin). Lecitina, denumirea uzual a acestui fosfoglicerid, vine de la
cuvntul (lekithos), care n limba greac nseamn glbenu
de ou, ntruct acesta are un coninut foarte bogat n lecitin.
22
Fig. 2.6. Lipidele membranare n foiele bistratului. Este evideniat diversitatea i distribuia
difereniat ntre cele dou foie ale bistratului, inducnd membranelor caracterul eterogen i
asimetric.4 Aceast reprezentare simbolic a bistratului lipidic i tipurilor de lipide membranare va fi
utilizat n figurile din carte ori de cte ori este nevoie. Mircea Leabu, 2014.
Dup prime argumente referitoare la eterogenitatea lipidelor membranare,

aduse pn n acest moment, ne aflm acum n situaia de a putea puncta aspecte
legate de dispunerea asimetric a fosfolipidelor n biomembrane (Fig. 2.6).
Experimental s-a dovedit c PC i SM sunt preponderent distribuite n foia extern a
bistratului, n timp ce PE este preponderent distribuit n foia intern, iar PS i PI
sunt, dup datele existente pn n prezent, aproape exclusiv n foia intern, n
condiii normale [2]. Mai mult, apariia PS n foia extern a bistratului reprezint o
dovad timpurie a intrrii celulei ntr-un proces apoptotic [3-5]. De asemenea,
activarea plachetelor sanguine este nsoit de apariia PS n foia extern a
bistratului lipidic membranar [6]. Colesterolul este, n general, egal distribuit ntre
ambele foie ale bistratului, dei anumite situaii pot determina o redistribuire
asimetric a sa. Glicolipidele se afl numai n foia extern a bistratului lipidic. De
curnd, distribuia asimetric a fosfolipidelor bistratului lipidic membranar a nceput
s fie investigat n contextul anumitor patologii [7, 8], afectarea ei fiind nsoit de
defecte n funcionarea normal a celulelor.
Ideea eterogenitii fosfolipidelor membranare este argumentat i de
diversitatea tipurilor de acizi grai care intr n structura lor. Acetia au un numr
par de atomi de carbon cuprins ntre 12 i 24 (C12-C24), dei limitele valorilor
menionate sunt controversate, n sensul c ar fi prea largi pentru cea inferioar i c
ar fi mai precaut s considerm cifra 14 ca adevrat. La acizii grai cu mai puin de
12 atomi de carbon, solubilitatea n ap a lipidelor pe care acetia le formeaz crete
prea mult, ceea ce poate afecta integritatea bistratului i rolul de barier al acestuia.
Acizii grai cu mai mult de 24 de atomi de carbon n molecul sporesc prea mult
hidrofobicitatea lipidelor i ngroa bistratul reducnd eficiena sub aspectul
proprietilor de permeabilitate selectiv i i reduc fluiditatea, prin creterea
interaciunilor la nivelul cozilor hidrofobe. Aadar, din motive de eficien n
funcionarea membranelor acizii grai evideniai a structura lipidele membranare
conin ntre 12(14) i 24 de atomi de carbon. Ei pot fi acizi grai saturai sau
4 Exist ntre profesionitii domeniului o convenie ca atunci cnd n desene, scheme sau imagini de microscopie
electronic se prezint poriuni din membranele celulare spaiul extracelular s se aeze sus (ctre nord), iar
citosolul jos (ctre sud). Vom respecta n carte aceast convenie.
23
nesaturai, cu catena hidrocarbonat neramificat. n ceea ce privete poziionarea

acizilor grai n structura glicerofosfatidelor putem face urmtoarele afirmaii:
1. n poziia 1 a glicerinei, de regul, se afl esterificat un acid gras saturat. Cei
mai des ntlnii sunt (i) C14, acidul miristic, (ii) C16, acidul palmitic i (iii)
C18, acidul stearic. O ordine a frecvenei sub care apar ar fi: C16 > C18 > C14.
2. n poziia 2 a glicerinei, de regul, este esterificat un acid gras nesaturat. Cei
mai des ntlnii sunt (i) C18:1,5 acidul oleic, (ii) C18:2, acidul linoleic i (iii)
C18:3, acidul linolenic. Trebuie s amintim aici, pentru rolul su deosebit de
important (vezi Rolul lipidelor membranare), acidul arahidonic sau
acidul eicosatetraenoic (C20:4).
De menionat, n ncheierea acestui comentariu, c acizii grai din sfingolipide
sunt, de regul, saturai.
nainte de a trece la aspecte mai detaliate asupra organizrii lipidelor la
nivelul membranelor i cum aceasta se rsfrnge asupra comportamentului
bistratului lipidic i funcionalitii sale, merit de punctat, pentru o ultim
argumentare a amplei eterogeniti a lipidelor membranare, faptul c, lund n
considerare cele dou poziii de esterificare i doar cei 20 de acizi grai mai des
ntlnii, numrul diverselor entiti moleculare din fiecare tip de fosfolipid (PC, PE,
PS, PI, SM) poate atinge valoarea de 400. Bineneles c aceste valori teoretice nu se
regsesc n realitate dintr-o multitudine de motive de constrngere specifice
sistemelor biologice.
2.2.3.3. Structura de bistrat rezolv dezideratul esenial al organizrii
membranei
Vom ncerca s precizm aici cteva argumente logice pentru a rspunde
ntrebrii De ce bistrat?. Bistratul este cea mai simpl form de organizare a
lipidelor care poate nchide un volum mare de mediu hidrofil, spre a-l separa de un
altul, tot hidrofil (capetele hidrofile la exterior, putnd acomoda cele dou medii
hidrofile; cozile hidrofobe n interior, n adncimea structurii, conferind rolul de
barier). Aadar, bistratul este o form de organizare a lipidelor amfifile care poate
corespunde dezideratelor celulelor de a fi separate de mediul nconjurtor i de a-i
menine ntr-o manier eficient homeostazia intern.
Asamblarea n bistrat se poate face spontan, fiind deci favorizat energetic, iar
bistratul nu poate prezenta, din considerente termodinamice, capete libere. Acest
lucru confer membranelor tenacitate n pstrarea integritii structurale i
capacitate de refacere rapid chiar n cazul unor distrugeri datorate agresiunilor
mecanice.
Organizarea sub form de bistrat i dispunerea asimetric a componentelor
acestuia confer proprieti fizico-chimice diferite celor dou fee ale membranei;
mai mult, asigur comportament independent celor dou fee ale membranei, dar i
solidar, atunci cnd nevoile celulei o cer, aceasta avnd cile de a controla
comportamentul (independent sau solidar) al componentelor membranare.
2.2.3.4. Starea fizic a bistratului lipidic
Discuia asupra strii fizice a bistratului lipidic i propune s ne dea o
imagine intuitiv privind efectele comportamentului bistratului asupra funcionrii
5 n simbolistica notrilor abreviate ale acizilor grai, prima cifr din indicele inferior reprezint numrul de
atomi de carbon din molecul, : reprezint simbolul pentru prezena dublelor legturi, iar cifra a doua
reprezint numrul de duble legturi din molecul. n biochimie notaiile pot fi mult mai detaliate pentru
indicarea suplimentar a poziiei dublelor legturi n lanul alifatic, ns, n economia discuiei noastre i n
nelegerea implicaiilor biologice, aceste detalii nu sunt semnificative. Totui, variabilitatea poziionrii dublelor
legturi n acizii grai nesaturai reprezint un argument suplimentar al eterogenitii lipidelor membranare (n
special pentru fosfolipide).
24
membranelor. Bistratul lipidic este fluid, adic ntr-o continu dinamic, aceasta
avnd efect asupra interrelaiilor dintre moleculele care l compun, interrelaii care
sunt ntr-o permanent modificare. Fluiditatea bistratului lipidic este o rezultant a
diverselor posibiliti de micare a lipidelor ce l alctuiesc. n ce const aceast
diversitate? Lipidele membranare pot executa urmtoarele tipuri de micri:
1. Micri intramoleculare, pe care lipidele le realizeaz n raport cu propria
lor structur (n raport cu propria lor ax, n raport cu propria lor geometrie), spaiul
ocupat de ele putnd fi aproximat cu un cilindru avnd o baz cu suprafaa de ~60 2
(raz de ~4.4 ) i o nlime de ~30 . Aceste micri intramoleculare pot fi:
x De rotaie, cu o frecven de 109 rotaii/s; aceste micri izvorsc din
capacitatea lanurilor acizilor grai de a se roti n jurul legturilor C-C, nsoit
de vibraia atomilor de carbon angajai n legtur, iar aceste micri se
rsfrng asupra comportamentului ntregii molecule, prin cuplurile de fore pe
care le induc; rezultanta acestui zbucium intern molecular este micarea de
rotaie a moleculei lipidice n ansamblu.
x De flexie a cozilor hidrofobe, cu o frecven de 108 flexii/s; aceste micri
trebuie nelese tot ca rezultat al micrilor din interiorul moleculelor de lipid,
la nivelul cozilor hidrofobe ale acizilor grai nesaturai, care, din cauza
mpiedicrilor datorate prezenei celuilalt acid gras din structur, nu pot
executa, de regul, dect micri asemntoare tergtorului de parbriz, dei
mobilitatea celuilalt lan, saturat, poate permite chiar rotaii complete; efectul
la nivelul ntregii molecule este acela al micrii de flexie a cozii.
2. Micri intermoleculare, care implic schimbarea poziiei moleculelor de
lipid unele n raport cu altele. Acestea pot fi:
x Micri de translaie (difuzie lateral), micri ale lipidelor n planul
membranei, n aceeai foi a bistratului, unele printre altele; dinamicitatea
acestei micri este sugerat de frecvena schimbrilor de direcie, care este de
107/s, distana parcurs de un lipid n unitatea de timp neavnd o semnificaie
biologic major. Trebuie menionat faptul c prezena colesterolului n
bistrat determin o diminuare a mobilitii laterale.
x Micri flip-flop, denumite astfel prin termenul importat din limba
englez, adic micri de trecere a lipidelor dintr-o foi a bistratului n
cealalt; aceste micri presupun o rsturnare a moleculei n planul
membranei, pentru a-i pstra capul hidrofil la exteriorul structurii, adic
trecerea capului hidrofil prin poriunea hidrofob a membranei; frecvena
acestor micri este foarte mic, practic nul (dac ar fi s riscm o cifr, am
putea spune c aceast micare ar putea avea loc o dat pe lun pentru fiecare
molecul individual), ceea ce pare logic; exist totui o endomembran la
nivelul creia micarea de flip-flop are loc frecvent i anume membrana
reticulului endoplasmic (aspecte ce vor fi detaliate n capitolul Biogeneza i
traficul intracelular al membranelor din volumul al II-lea al crii).
Valorile pentru frecvene, mai sus menionate, sunt rezultatul unor msurtori
fizice pe bistraturi artificiale. n membranele celulare i n biomembrane, n general,
micrile lipidelor nu se supun legilor micrii browniene, ci sunt mai reduse, fiind
limitate de organizarea molecular complex i de ultrastructurile proteice corticale,
aflate n spaiul citosolic de sub membrane [9].
Revenind la tema acestei seciuni, s punctm c absena practic a micrilor
flip-flop explic bidimensionalitatea strii fluide a bistratului lipidic, elementul de
baz din organizarea membranelor celulare. Micrile lipidelor se manifest practic
numai n cadrul aceluiai strat al bistratului. De asemenea, frecvena extrem de
redus a micrilor flip-flop are ca efect meninerea distribuiei asimetrice a
25
moleculelor de lipide ntre cele dou straturi, distribuie construit de celul cu mare
consum energetic odat cu biogeneza de novo a membranelor (vezi la Biogeneza
membranelor n volumul al II-lea). Manifestarea bidimensional a fluiditii
bistratului lipidic d membranei celulare caracterul de structur cu proprieti
mezomorfe, proprieti specifice cristalelor lichide. Acest comportament mezomorf
este accentuat de capacitatea lipidelor de a organiza microdomenii bogate n
sfingolipide (parte dintre ele glicolipide), colesterol i anumite proteine membranare.
Aceste microdomenii sunt denumite plute lipidice (n englezete lipid rafts)
i au deosebit importan att structural (organizeaz ultrastructuri specializate
ale membranei, cum ar fi caveolele), ct i metabolic innd laolalt molecule i
macromolecule destinate a funciona mpreun n complexe supramoleculare [10].
Pentru a nelege mai bine organizarea microdomeniilor de membran, s
menionm c lipidele, aa cum nu sunt echilibrat repartizate ntre cele dou foie ale
bistratului, nu sunt omogen amestecate nici n cadrul fiecrei foie a bistratului, ci se
asociaz ntr-un mod neomogen pe baza unor considerente fizico-chimice. Plutele
lipidice fie planare, fie invaginate sub forma caveolelor (numite vezicule
plasmalemale n celula endotelial) se caracterizeaz printr-o fluiditate mai mic n
comparaie cu restul bistratului. Prezena plutelor lipidice i eterogenitatea lor susin
i nuaneaz ideea de organizare a membranelor ca un mozaic fluid. Plutele lipidice
pot fi asemuite unor sloiuri de forme, dimensiuni i compoziie biochimic variate, ce
plutesc n oceanul lipidic mai puin specific organizat. Caveolele reprezint o form
de plute lipidice, ce se dispun individual sau n ciorchini la nivelul membranei.
Eterogenitatea plutelor lipidice a fost evideniat prin interpretarea
rezultatelor diferitelor metode de obinere sau de studiu:
- diveri detergeni neionici utilizai (duc la fraciuni cu compoziie diferit);
- sonicarea preparatelor de membrane i analizarea fraciunii uoare (alte
rezultate);
- analize imunocitochimice (diferite ncrcturi proteice la nivelul diverselor
microdomenii reprezentate de plutele lipidice).
Dei rezultatele experimentale sunt, n anumite limite, variate, sugernd
diversitatea compoziional a plutelor lipidice, se pot extrage, totui, cteva
caracteristici generale [10]:
- colesterolul este de 3-5 ori mai abundent dect n restul membranei i reprezint
33-50% din totalul lipidelor la acest nivel;
- sfingolipidele (SM i glicolipidele) sunt mbogite i reprezint 30-35% dintre
lipidele din plute;
- glicerofosfolipidele sunt srac reprezentate (n comparaie cu restul membranei);
d30% pentru PC + PE, fa de ~50% n restul membranei;
- lipidele specifice foiei interne a bistratului (PS, PI) sunt slab reprezentate la
nivelul plutelor lipidice;
- n foia intern de la nivelul plutelor, lipidele conin preferenial acizi grai
saturai (prin aceasta, s-ar putea realiza necesarul de rigiditate corespunztor
celui al foiei externe, unde sfingolipidele, coninnd acizi grai saturai, sunt
bogat reprezentate).
Anticipnd, vom meniona aici c plutele lipidice se caracterizeaz i prin
capacitatea de a aglomera anumite tipuri de proteine membranare. Aadar, repetm
pentru reinerea mai atent, organizarea lipidelor membranare n microdomenii
accentueaz aspectul de mozaic fluid al membranelor (ca nite sloiuri plutind n
bistrat). Conceptul de plut lipidic este ntr-o continu dezvoltare [11].
n ciuda acestor organizri eterogene, capacitatea lipidelor de a se mica n
cadrul bistratului este doar nuanat pe ntinsul suprafeei membranei i nu anulat.
26
Aceast capacitate de micare a lipidelor n cadrul membranei determin

proprietatea numit fluiditate. Fluiditatea membranelor poate fi modulat
(modificat, reglat) de mai muli factori. Aceti factori pot fi de natur fizic, sau
chimic. Ca factori fizici amintim temperatura i presiunea. Fluiditatea membranelor
este direct proporional cu temperatura i invers proporional cu presiunea.
Efectivitatea acestor factori fizici n modularea fluiditii membranare este ns
limitat, dup cum uor ne putem da seama. Nici presiunea i nici temperatura nu
pot varia n limite largi (ba dimpotriv) n condiii fiziologice. Mult mai pregnant este
efectul factorilor chimici n modularea fluiditii membranei. Acetia, n funcie de
provenien, se pot clasifica n (i) factori chimici intrinseci sau (ii) factori
chimici extrinseci.
Factorii chimici intrinseci, pe care celula i folosete n modularea fluiditii
membranei n funcie de necesiti, sunt cantitatea de acizi grai nesaturai din
structura fosfolipidelor sau a glicolipidelor i/sau cantitatea de colesterol din bistrat.
Fluiditatea membranei este direct proporional cu procentul de acizi grai
nesaturai din structura chimic a lipidelor bistratului (crete cantitatea de acizi grai
nesaturai, crete i fluiditatea), n timp ce creterea procentului de colesterol duce la
rigidizarea membranei (micorarea fluiditii). Aadar, fluiditatea membranei este
invers proporional cu cantitatea de colesterol din bistrat (Fig. 2.7). Cum trebuie
nelese sugestiv motivele acestor efecte ale colesterolului i acizilor grai nesaturai
asupra fluiditii membranei celulare? Descriptiv, geometria angular a cozilor
acizilor grai nesaturai are ca efect deprtarea spaial a lipidelor i micorarea
interaciunilor ntre acestea att la nivelul poriunii hidrofobe, ct i al capetelor
hidrofile. n ceea ce privete efectul colesterolului, din motive structurale (datorit
geometriei spaiale), acesta sporete tria interaciunilor att la nivelul cozilor
hidrofobe, ct i al capetelor hidrofile, anulnd efectul acizilor grai nesaturai
Factorii chimici extrinseci se clasific la rndul lor n (a) fiziologici
(hormoni sau mediatori chimici liposolubili), (b) patologici (metabolii liposolubili
ai unor ageni patogeni, substane chimice toxice, liposolubile) sau (c) terapeutici
(medicamente liposolubile). Multe analgezice, ca i unele anestezice, fiind compui
liposolubili, acioneaz i prin modificarea fluiditii membranelor neuronale. Dovezi
experimentale recente dovedesc faptul c, alturi de efectele datorate modificrii
fluiditii membranare, anestezicele i/sau analgezicele acioneaz i prin
modificrile conformaionale induse la nivelul unor proteine transmembranare,
afectndu-le funcia.
Fig. 2.7. Efectul rigidizant al colesterolului la nivelul bistratului. Datorit geometriei moleculare,
colesterolul are abilitatea de a se insera n spaiile dintre fosfolipide sporind interaciunile moleculare
att la nivelul capetelor hidrofile, ct i la nivelul cozilor hidrofobe. Mircea Leabu, 2014.
27
Dup cum vom vedea, fluiditatea membranelor este modulat i nuanat i

de ctre celelalte componente ale membranelor: proteinele i structurile glucidice.
Practic, dinamicitatea componentelor membranare, care asigur buna funcionare a
lor i, prin aceasta, a ntregii ultrastructuri, difer de la un moment la altul n funcie
de starea n care (macro)moleculele se afl: independente sau n interrelaie cu alte
componente din membrana nsi sau din spaiile apropiate (citosolul cortical sau
elemente din exterior).
2.2.4. Rolul lipidelor membranare

Dup cum am artat pn acum, rezult c fr bistrat lipidic nu pot exista
membrane celulare. Bistratul lipidic reprezint componenta de baz a organizrii
membranelor, funcia structural a lipidelor membranare organizate n bistrat
fiind esenial. Dincolo de funcia structural prin care ofer membranei cel mai bun
element pentru organizare i funcionare, bistratul lipidic confer membranei
celulare rolul de barier, aceast menire a lipidelor membranare fiind enunat nc
de la dovedirea prezenei lor n membrane. Dar lipidele nu se afl, nici pe departe, n
membrane numai din considerente structurale. Ele sunt implicate n importante
funcii metabolice, acele funcii care unesc celula cu mediul nconjurtor, o
integreaz pe aceasta n ambiana biosocial. Mai mult, echilibrul dintre diferitele
tipuri de lipide din membrane influeneaz comportamentul normal al celulei, iar
modificarea lui poate atrage deviaii patologice. De aceea, lipidele membranare pot
reprezenta inte terapeutice [12].
Glicolipidele sunt implicate n fenomene de recunoatere i semnalizare
intercelular (vezi la Componenta glucidic a membranei).
Detalii referitoare la rolurile metabolice ale lipidelor sunt cunoscute pentru
fosfolipide. Acestea pot fi modificate de enzime specifice numite fosfolipaze. De
regul, aceste modificri se petrec ca urmare a unor procese de semnalizare, parte
dintre metaboliii rezultai acionnd ca mesageri secunzi (vezi semnificaia
sintagmei la Semnalizarea celular) i faciliteaz numeroase procese prin care
celulele rspund semnalelor receptate.
Exist mai multe tipuri de fosfolipaze, care au proprietatea de a elibera diverse
molecule din complexa structur biochimic a fosfolipidelor (Fig. 2.8). Acestea sunt:6
(i) fosfolipaza A1 (prescurtare internaional PLA1, cu PL de la termenul
englezesc PhosphoLipase), care elibereaz acidul gras din poziia 1 a
glicerinei;
(ii) fosfolipaza A2 (prescurtare internaional PLA2), care detaeaz acidul
gras din poziia 2 a glicerinei, cu formare de lizofosfatide;
(iii) fosfolipaza B (prescurtare internaional PLB), care poate scoate acizi grai
din ambele poziii ale glicerolului din structura fosfolipidelor, completnd de
regul activitatea PLA1 sau PLA2; acioneaz n general asupra lizofosfatidelor
eliminnd din bistrat fosfolipidul afectat;
(iv) fosfolipaza C, care desface legtura dintre glicerin i fosfat, cu eliberarea
diacilglicerolilor (DAG), care rmn n bistrat i a unui compus hidrofil ce
difuzeaz n citosol;
(v) fosfolipaza D, care elimin restul hidrofil X, cu formarea PA la nivelul
bistratului.
6
Recomandm o modalitate mnemotehnic de a reine legtura dintre tipurile de fosfolipaze i rolul lor. Este
uor de remarcat c, plecnd de la acizii grai legai la hidroxilii din poziiile 1 i 2 ale glicerinei i mergnd ctre
compusul variabil din capul hidrofil al fosfolipidelor, fosfolipazele se denumesc succesiv de la A la D n funcie de
partea din molecul pe care o taie: A1 pentru cele care scot acizii grai din poziia 1 (A de la acid i 1 poziia), A2
elibereaz acidul gras din poziia 2, apoi B contribuie la eliminarea ambilor acizi grai, C taie legtura esteric
dintre glicerin i fosfat, iar D desface numai partea variabil din capul hidrofil.
28
Pentru exemplificarea efectelor celulare, datorate aciunii fosfolipazelor,

punctm urmtoarele (vezi i subcapitolul Semnalizarea celular):
a) Fosfolipaza A2 poate elibera acidul arahidonic, care este precursor pentru patru
clase de substane cu roluri dintre cele mai diverse: 1. prostaglandine; 2.
tromboxani; 3. prostacicline; 4. leucotriene. Aceti compui sunt obinui
prin complexe procese de metabolizare a acidului arahidonic (cu bagaje
enzimatice adecvate), dup eliberarea sa din fosfolipidele care l conin. Primele
trei tipuri rezult pe calea ciclo-oxigenazei, cea de-a patra clas pe calea lipo-
oxigenazei. Toate aceste tipuri de metabolii ai acidului arahidonic sunt
eliberate din celulele care i produc i au rol de molecule mesager n diferite
procese de semnalizare celular.
b) Fosfatidilinozitolii sunt implicai n mecanisme de transmitere transmem-
branar i intracelular a semnalelor. Cnd unele molecule semnal (liganzi) se
leag de receptorii specifici din membranele celulare, PI intr ntr-o secven de
reacii denumit cascada fosfoinozitidelor (Fig. 2.9).
n aceast cascad PI sunt, pas cu pas, fosforilai iniial la fosfoinozitolfosfai
(PIP), sub aciunea fosfatidilinozitol kinazei7 (PI kinaza), cu consum de ATP, apoi la
fosfatidilinozitol-bis-fosfai8 (PIP2), sub aciunea PIP kinazei, de asemenea cu
consum de ATP. Asupra fosfatidilinozitol-4,5-bis-fosfatului format acioneaz
fosfolipaza C (izoforme E i J ale fosfolipazei C, specifice pentru fosfatidilinozitoli)
cu eliberarea de IP3 (inozitol-1,4,5-tris-fosfat9) i DAG. IP3 acioneaz ca mesager
secund inducnd creterea Ca2+ n citosol i conducnd la rspunsuri celulare rapide
i de scurt durat (exemplu, contracia muscular). La rndul su, DAG este
implicat n declanarea unor rspunsuri celulare mai lente i de lung durat
(exemplu, semnalizarea prin cile protein-kinazei C).
Fig. 2.8. Locurile specifice de aciune pentru diferitele tipuri

de fosfolipaze, la nivelul moleculelor de fosfolipide. A1
fosfolipaza A1; A2 fosfolipaza A2; B fosfolipaza B; C
fosfolipaza C; D fosfolipaza D.
7 Prin kinaze desemnm acele enzime a cror activitate se soldeaz cu grefarea de fosfat pe diferite substrate.
8 Atenie! n denumirea acestor metabolii se folosesc particulele bis, respectiv tris i nu di sau tri, deoarece
fiecare reziduu fosfat este inserat pe un alt hidroxil al inozitolului. Formele bi/di, respectiv tri se folosesc n
denumirea compuilor n care fosfatul se leag unul de altul (exemple: adenozin-difosfat, adenozin-trifosfat).
9 Vezi nota de subsol numrul 7.
29
Fig. 2.9. Cascada fosfoinozitide-

lor. Aciunea secvenial a fosfati-
dilinozitol-kinazelor duce la formarea
PIP2. Ulterior fosfolipaza C-E, cea
din exemplul figurii, cu specificitate
pentru fosfatidil-inozitoli, elibereaz
IP3 i DAG, care sunt mesageri
secunzi n anumite procese de sem-
nalizare transmembranar.
Dei rolul colesterolului n procesele metabolice de la nivelul membranei a

fost mai puin investigat, studii recente au dovedit c el este implicat n interaciuni
cu proteine platform/proteine adaptoare care au rol n formarea de complexe de
semnalizare [13]. n felul acesta colesterolul contribuie la recrutarea acestor proteine
platform, ca endoproteine pe faa citosolic a membranei celulare, cu facilitarea
funciei acestora de a pune n bun situaie de aciune proteine implicate n diferite
procese de semnalizare i eficientizarea fenomenelor la care trebuie s participe
partenerii asociai la nivelul platformei de semnalizare astfel formate.
Ca s rezumm cele prezentate despre lipidele membranare punctm:
1. Lipidele membranare organizeaz componenta de baz a biomembranelor,
bistratul lipidic, element cu proprieti fluide, manifestate bidimensional i
caracterizat att prin eterogenitate compoziional, ct i prin asimetrie;
2. Structura de bistrat lipidic este ideal pentru separarea eficient, selectiv a
dou medii hidrofile (interiorul celular de mediul extern);
3. Prin componenta sa hidrofob, mrginit pe ambele pri de suprafee hidrofile
care l compatibilizeaz cu mediile apoase separate, bistratul lipidic asigur
funcia de barier a membranelor, fr a-i conferi caracter de barier absolut,
adic fr a mpiedica selectivitatea acestei structuri n interaciunea celulei cu
mediul (schimbul de substan i de informaie);
4. Departe de a avea numai un rol structural, lipidele membranare particip la
funcia metabolic a membranei celulare n procese de semnalizare, dar i prin
posibilitile de control a conformaiei proteinelor cufundate n bistrat,
putndu-le modula funcia.
1. Frega NG, Pacetti D, Boselli E. (2012). Characterization of Phospholipid Molecular Species by
Means of HPLC-Tandem Mass Spectrometry. In: Tandem Mass Spectrometry Applications and
Principles, editor Jeevan Prasain (ISBN: 978-953-51-0141-3). Rijeka: InTech Europe; 2012. pp. 637-
672.
2. Luckey M. Membrane structural biology with biochemical and biophysical foundations. New York:
Cambridge University Press, 2008. (Fig. 2.14, p.27).
3. Han CZ, Ravichandran KS. (2011) Metabolic connections during apoptotic cell engulfment. Cell.
147(7): 1442-1445. doi: 10.1016/j.cell.2011.12.006.
4. Armstrong A, Ravichandran KS. (2011) Phosphatidylserine receptors: what is the new RAGE?
EMBO Rep. 12(4): 287-288. doi: 10.1038/embor.2011.41.
5. Tung TT, Nagaosa K, Fujita Y, Kita A, Mori H, Okada R, Nonaka S, Nakanishi Y. (2013)
Phosphatidylserine recognition and induction of apoptotic cell clearance by Drosophila engulfment
receptor Draper. J Biochem. 153(5): 483-491. doi: 10.1093/jb/mvt014.
6. Fox JE. (1996) Platelet activation: new aspects. Haemostasis. 26: 102131.
30
7. Zwaal RFA, Schroit AJ. (1997) Pathophysiologic implications of membrane phospholipid asymmetry
in blood cells. Blood. 89: 11211132.
8. Kuypers FA. (1998) Phospholipid asymmetry in health and disease. Curr Opin Hematol. 5: 122131.
9. Kusumi A, Fujiwara TK, Chadda R, Xie M, Tsunoyama TA, Kalay Z, Kasai RS, Suzuki KG.
(2012) Dynamic organizing principles of the plasma membrane that regulate signal transduction:
commemorating the fortieth anniversary of Singer and Nicolson's fluid-mosaic model. Annu Rev Cell
Dev Biol. 28: 215-250. doi: 10.1146/annurev-cellbio-100809-151736.
10. Pike LJ. (2004) Lipid Rafts: Heterogeneity on the high seas. Biochem. J. 378, 281-292.
11. Sonnino S, Prinetti A. (2013) Membrane domains and the "lipid raft" concept. Curr Med Chem.
20(1): 4-21.
12. Escriba PV. (2006) Membrane-lipid therapy: a new approach in molecular medicine. Trends Mol Med.
12, 34-43.
13. Sheng R, Chen Y, Yung Gee H, Stec E, Melowic HR, Blatner NR, Tun MP, Kim Y, Kllberg
M, Fujiwara TK, Hye Hong J, Pyo Kim K, Lu H, Kusumi A, Goo Lee M, Cho W. (2012)
Cholesterol modulates cell signaling and protein networking by specifically interacting with PDZ
domain-containing scaffold proteins. Nat Commun. 3: 1249. doi: 10.1038/ncomms2221.
31
2.3. Proteinele membranare

2.3.1. Consideraii generale asupra prezenei proteinelor n
membrane
Modelul mozaicului fluid de organizare a membranelor biologice ne arat c,
alturi de lipidele aezate sub form de bistrat, la construcia acestor componente
celulare particip i proteinele. Raportul molecular ntre lipidele i proteinele ce
alctuiesc membranele celulare este n medie de aproximativ 50/1. Acest raport este
uor de neles innd cont de faptul c, de regul, compoziia sub aspectul masei de
material organic la nivelul membranelor este de ~40% lipide i ~50% proteine, iar
lipidele sunt molecule cu greutate molecular mic, n timp ce proteinele sunt
macromolecule.
Realitatea biologic este ns divers, existnd i excepii de la aceste
procente. De exemplu, la nivelul tecii de mielin, unde funcia de barier este
esenial rolului membranei celulelor Schwann care formeaz nveliul din jurul
axonului, procentul de mas pentru lipide este de ~80, iar cel al proteinelor de
numai ~20. De evideniat, pentru situaia diametral opus, compoziia de la nivelul
membranei mitocondriale interne unde lipidele reprezint ~20%, iar proteinele
~80%. Funcia metabolic a acestei membrane este deosebit de accentuat (vezi n
capitolul volumului al II-lea, destinat membranei mitocondriale interne), chiar dac
ar fi s menionm doar activitatea complexelor proteice implicate n transportul
electronilor (lanul transportor de electroni, numit i lanul respirator), respectiv
activitatea ATP-sintazei, complexul proteic care produce ATP. La nivelul membranei
mitocondriale interne ns, este la fel de important i funcia de barier. Poate de
aceea aici se afl cardiolipinele, fosfolipide deosebite, cu patru lanuri alifatice n
coada hidrofob (patru acizi grai n molecul), deci cu proprieti amfifile a cror
component hidrofob este amplificat.
Comentariile de mai sus, asupra complexitii realitii biologice n privina
raportului lipide/proteine n membrane, ne permit s enunm reguli de principiu
care sugereaz corespondena ntre acest raport i funcionalitatea membranei.
Aceste reguli sunt:
(i) cu ct funciile metabolice ale unei membrane (sau poriuni ceea ce se
definesc drept microdomenii sau domenii dintr-o membran) sunt mai
accentuate, cu att coninutul de proteine al acelei membrane sau poriuni de
membran este mai ridicat;
(ii) cu ct rolul de barier al unei membrane trebuie s se manifeste mai pregnant,
cu att coninutul n lipide este mai crescut.
n abordarea studiului proteinelor membranare plecm de la ceea ce tim deja
despre organizarea membranei, cu cele menionate despre caracteristicile fizico-
chimice i comportamentul membranei, aa cum am vzut c sunt induse de nsi
prezena lipidelor n elementul de baz, bistratul lipidic. Completarea cu proteine a
organizrii moleculare a membranelor celulare nu anuleaz, ci amplific i/sau
nuaneaz eterogenitatea, asimetria i comportamentul de fluid bidimensional al
structurii. Vom cuta s argumentm, prin prezentarea aspectelor legate de prezena
proteinelor n membrane, afirmaia din fraza anterioar. Proteinele completeaz
bistratul lipidic pentru definitivarea organizrii biomembranelor, n toat grosimea,
ca i pentru asigurarea funcionalitii ultrastructurii.
Pentru argumentarea ideii de eterogenitate, vom utiliza aceeai strategie
folosit la prezentarea eterogenitii lipidelor membranare: discutarea diversitii de
tipuri de proteine din membrane prin clasificarea lor pe diverse criterii.
32
2.3.2. Clasificri ale proteinelor membranare

O prim clasificare a proteinelor membranare se face n funcie de poziia lor
fa de bistratul lipidic, care permite mprirea acestora n dou mari categorii:
1. Proteine periferice sau extrinseci: acele proteine care se afl ataate de o
parte sau de alta a bistratului lipidic, interacionnd cu capetele hidrofile ale
lipidelor (dar nu numai, dup cum se va vedea din unele aspecte prezentate mai
jos);
2. Proteine integrale sau intrinseci: acele proteine care sunt cufundate n
bistratul lipidic strbatndu-l complet sau parial.
Evidenierea, descrierea i denumirea acestor dou categorii de proteine
membranare au fost fcute n deceniul opt al secolului XX de ctre Theodore L. Steck
i colaboratorii si [1] (la numai doi ani dup introducerea modelului n mozaic fluid
privind organizarea membranelor). Diversitatea de tipuri de proteine membranare
este accentuat i de alte aspecte (Fig. 2.10).
Proteinele periferice reprezint, n general, ~25% din polipeptidele unei
membrane, se extrag cu soluii saline sau ageni chelatori, au caracter hidrofil (dup
extragere nu sunt asociate cu lipide) i i pstreaz solubilitatea n ap. n funcie de
foia bistratului lipidic creia i sunt asociate, proteinele extrinseci se clasific n (i)
ectoproteine (proteine periferice asociate foiei externe a bistratului, aadar expuse
la exteriorul membranei celulare sau pe faa luminal a membranelor organitelor) i
(ii) endoproteine (proteine periferice asociate foiei interne a bistratului, aadar
expuse pe faa citoplasmatic a membranelor i endomembranelor).
Au fost evideniate atari mai ferme ale proteinelor periferice la bistratul
lipidic, prin conjugri (stabilirea de legturi covalente) cu componente lipidice.
Fig. 2.10. Diversitatea de proteine membranare i exemplificarea clasificrilor acestora. 1

protein periferic, ectoprotein; 2 ectoprotein ancorat prin glicofosfatidil-inozitol; 3 protein
periferic, endoprotein; 4 endoprotein acilat; 5 protein integral, transmembranar unipas
(prezint i acilare); 6 protein transmembranar multipas; 7 protein integral, parial imersat n
bistratul lipidic; fosfolipidele din foia intern, cu sarcin negativ reprezint fosfatidilserine. Mircea
Leabu, 2014.
33
Pe de o parte, pentru unele ectoproteine a fost evideniat o cuplare prin

carboxilul terminal la gruparea amino a etanolaminei din captul liber al structurii
glucidice a unor glicofosfatidilinozitoli (Fig. 2.10, exemplul 2). Fenomenul se
numete glipiare [2-4]. Partea lipidic rmne n foia extern a bistratului i
poart numele de ancor glicofosfatidilinozitolic. Funciile acestor proteine
modificate prin glipiare sunt intens studiate. Exist dovezi experimentale care
confirm rolul acestor modificri ntr-o multitudine de procese care se petrec la
suprafaa celulei, dar i intracelular. De exemplu, unele din moleculele de adeziune
celular sunt glipiate, unele proteine glipiate sunt implicate n procese imune, exist
ectoproteine cu rol enzimatic ancorate prin glipiare, proteine glipiate rein la nivelul
lor molecule din spaiul extracelular i contribuie la endocitoza lor i a fost
evideniat direcionarea ectoproteinelor ancorate la bistrat prin glipiare ctre
domeniul apical al membranelor din celulele polarizate (celule ale epiteliilor
monostratificate).
Pe de alt parte, unele dintre endoproteine se pot asocia tranzitoriu i
reversibil bistratului lipidic prin reacii de acilare, cum ar fi miristilare, palmitilare,
farnezilare, geranil-geranilare (Fig. 2.10, exemplul 4), radicalul acil fiind cufundat n
foia intern a bistratului [2] (vezi CASETA 2.1). Aceste modificri reversibile sunt
importante pentru exprimarea funciilor acestor proteine. Mai mult, unele dintre ele,
cum ar fi proteinele G mici, numite i proteine G monomerice (vezi ce sunt acestea la
Semnalizarea celular) pot tranzita, pe baza acestor modificri, din starea de
protein citosolic n starea de protein periferic pentru exercitarea funciilor (vezi,
de asemenea, detalii la Semnalizarea celular). Au fost evideniate modificri prin
acilare i pentru proteine transmembranare (Fig. 2.10, exemplul 5).
De menionat c att proteinele membranare acilate, ct i cele glipiate au
tendina de a se acumula n caveole sau la nivelul plutelor lipidice (microdomenii de
membran definite i discutate parial, mai sus la seciunea despre lipidele
membranare). Acolo a fost anticipat informaia c asemenea modificri ale
proteinelor le fac candidate la acumularea n microdomenii de membran de tipul
plutelor lipidice.
CASETA 2.1. Ancorarea proteinelor membranare prin intermediul conjugrilor cu
elemente lipidice (acilare)
Proteinele care i exercit funcia biologic exclusiv pe una din cele dou fee ale bistratului lipidic
sunt adesea asociate mai ferm bistratului prin interaciuni cu lipide din foia expus fie mediului
extracelular, fie celui intracelular. O serie de proteine intracelulare (endoproteine) cu rol n
procese de semnalizare celular se ataeaz, prin modificri covalente, la stratul lipidic dinspre
faa citoplasmatic a membranei. Aceast asociere mai ferm se datoreaz legrii covalente a unor
funciuni chimice din proteine fie la catene ale acizilor grai, fie la grupri prenil (farnezil sau
geranil-geranil). Astfel, au fost evideniate urmtoarele modaliti de ataare la bistratul lipidic a
unor proteine hidrosolubile (dup biosinteza lor n citosol), pe baza unor modificri covalente,
post-traducere: (i) miristilarea, prin formarea unei legturi amidice ntre gruparea amino-
terminal aparinnd unui rest de glicin de la captul catenei polipeptidice i gruparea carboxil a
acidului miristic; (ii) palmitilare, formarea unei legturi tip tioester ntre un rest de cistein din
interiorul catenei polipeptidice i gruparea carboxil a acidului palmitic; (iii) prenilare, constnd
n formarea unei legturi tioeter ntre un rest de cistein (poziionat iniial n poziia a patra de la
captul carboxi-terminal i ulterior n poziie terminal, dup fixarea de gruparea lipidic i
clivarea celor trei aminocizi de la extremitatea catenei polipeptidice) i o grupare prenil (3-metil-2-
buten-1-il). Deseori ataarea proteinei printr-o singur ancor lipidic nu este suficient de ferm,
fiind necesar fixarea suplimentar de o ancor lipidic secundar. De exemplu, membrii familiei
de proteine Ras (proteine G mici cu funcie GTP-azic, avnd rol n semnalizare) sunt recrutate la
nivelul membranei plasmatice prin fixarea cu o grupare prenil combinat cu fixarea prin acidul
palmitic. Prenilarea proteinelor este mediat de trei tipuri de enzime, respectiv farneziltransferaza
i geranilgeraniltransferazele de tip I i II. n ultimii ani inhibitorii farneziltransferazei s-au
dovedit candidai terapeutici importani pentru tratamentul unor forme de cancer i al unor
infecii cu parazii aparinnd genului Plasmodium, agentul infecios al malariei, i genului
Trypanosoma (specia T. brucei), agentul infecios al bolii somnului.
34
Proteinele integrale (Fig. 2.10, exemplele 5-7) reprezint, de regul, ~75%

din proteinele unei membrane, se pot extrage din structura bistratului lipidic prin
folosirea de detergeni (adic dup distrugerea integritii bistratului lipidic), dup
extragere rmn asociate cu lipide, sunt insolubile n ap (dializarea detergentului
duce la precipitarea lor prin floculare) i au caracter amfifil (poriunea hidrofob
fiind reprezentat de zona imersat n bistratul lipidic, poriunea/poriunile
hidrofil/hidrofile reprezentnd domeniile lanului polipeptidic expuse n afara
bistratului lipidic). Proteinele integrale care traverseaz complet bistratul lipidic sunt
denumite proteine transmembranare (Fig. 1.10, exemplele 5 i 6) i reprezint cea
mai mare parte a proteinelor intrinseci. Cele care sunt parial cufundate n bistratul
lipidic (Fig. 2.10, exemplul 7) nu au primit o denumire specific. Mai mult, acestea
din urm au fost considerate pn prin ultimul deceniu al secolului XX a fi practic
inexistente. Se specula n favoarea acestei idei pe considerente structurale i
termodinamice. Explicaia era c nu putea fi adoptat de ctre aceste proteine o
conformaie care s asigure hidrofobicitate n poriunea de pliere a lanului
polipeptidic n interiorul bistratului lipidic. n momentul de fa sunt cel puin dou
proteine integrale candidate la imersare parial n bistratul lipidic al membranelor
crora le aparin: citocromul b5 din membrana reticulului endoplasmic i
caveolina, la nivelul membranelor celulelor ce pot structura caveole ca formaiuni
specializate de membran (de exemplu, celule musculare netede, celule endoteliale,
enterocite etc.). Schimbarea atitudinii comunitii stiinifice n privina acestei
situaii, dup raportarea dovezilor experimentale legate de aranjamentul celor dou
proteine n membrane, este un exemplu al dinamicii cunoaterii n biologia celular
i al modului rapid n care conceptele pot evolua n acest domeniu.
Revenind la proteinele transmembranare, acestora li se definesc trei domenii
structurale: (i) un ectodomeniu, numit si domeniu extern (poriunea expus pe
faa extern a membranei), (ii) un endodomeniu, numit i domeniu citosolic
(poriunea expus pe faa intern a membranei) i (iii) un domeniu
transmembranar (poriunea ce strbate bistratul lipidic). n ceea ce privete
modul de organizare structural a ecto- i endo-domeniilor, lanurile proteice se pot
mpacheta combinat n aceste zone att ca -helixuri, ct i ca
-pliuri, aa cum se
ntmpl cu toate proteinele. Situaia este oarecum diferit pentru domeniul
transmembranar. Pentru acesta, pn prin deceniul 9 al secolului XX, a existat
accepiunea c nu poate fi structurat dect sub form de -helix, astfel nct s poat
fi mascate ctre axul acestuia poriunile hidrofile ale lanului polipeptidic, iar la
exteriorul su s fie expuse prile hidrofobe, acomodabile cu hidrofobicitatea din
profunzimea bistratului lipidic. Se justifica i n acest caz prin considerente de ordin
structural i termodinamic. ntre timp ns, au fost identificate proteine
transmembranare care, la nivelul domeniului transmembranar, prezint
-pliuri
orientate n contrasens care se organizeaz asemenea doagelor unui butoia. n acest
fel fiecare doag (poriune organizat n
-pliuri) expune ctre zonele hidrofobe ale
bistratului suprafaa hidrofob i ascunde ctre interiorul butoiaului componentele
hidrofile din structura lanului polipeptidic. Asemenea proteine se ntlnesc, de
exemplu, n membrana mitocondrial extern formnd porine. Descifrarea structurii
porinelor a reprezentat un alt exemplu de schimbare de atitudine pe care evoluia
cunoaterii realitii biologice a impus-o comunitii tiinifice.
Proteinele transmembranare se pot clasifica i pe baza altor criterii. Astfel, n
funcie de numrul de treceri ale lanului polipeptidic prin planul membranei ele se
mpart n (i) unipas (o singur trecere; exemplul 5 n Fig. 2.10) i (ii) multipas
(mai multe treceri; exemplul 6 n Fig. 2.10). Este lesne de neles c proteinele
structurate ca
-pliuri la nivelul domeniului transmembranar (porinele) nu pot fi
unipas.
35
n funcie de poziia fa de bistrat a captului amino al lanului polipeptidic,

proteinele transmembranare se clasific n (i) proteine transmembranare de tipul I
(cnd captul amino se afl n ectodomeniu) i (ii) proteine transmembranare de
tipul II (cnd captul amino se afl n endodomeniu).
Toate aceste clasificri ne sugereaz marea diversitate de proteine
membranare, astfel nct este clar c prezena proteinelor n structura membranelor
respect caracterul eterogen al organizrii acestora, nuanndu-l. n acelai timp,
existena ecto- i endoproteinelor (firesc entiti moleculare diferite, rezultat al unor
fenomene diferite de biosintez i asamblare; vezi la seciunea Biogeneza
membranelor din volumul al II-lea) sporete asimetria organizrii moleculare a
membranelor. Mai mult, asimetria membranelor este accentuat i de prezena
proteinelor transmembranare cu ectodomeniul diferit de endodomeniu, ca i prin
caracterul asimetric al organizrii lanului polipeptidic cruia i putem asocia
caracteristici vectoriale (origine, direcie, sens), chiar dac similitudinea nu trebuie
neleas n sensul strict algebric. Originea unei proteine poate fi convenional
atribuit captului amino-terminal (cu acesta ncepe biosinteza proteinelor la nivelul
ribozomilor), direcia nu este deloc una rectilinie, iar sensul este dinspre captul
amino-terminal spre captul carboxi-terminal.
Vom comenta ceva mai jos efectul i importana proprietilor eterogenitate i
asimetrie (care sunt amplificate de prezena proteinelor), asupra funcionalitii
membranelor. De fapt, insistena noastr n prezentarea acestor caracteristici de
organizare a biomembranelor (eterogenitate, asimetrie i comportament dinamic de
fluid bidimensional) nu s-ar justifica dac nu ar fi deosebit de important
semnificaia biologic a lor.
2.3.3. Exemple de proteine membranare

Primele i cele mai detaliate informaii asupra proteinelor membranare au
fost obinute din studiul membranelor eritrocitare [5]. Motivaia este simpl i se
bazeaz pe urmtoarele aspecte:
(i) materialul biologic este uor de obinut n cantitate suficient (eritrocitele
reprezint populaia celular majoritar din snge);
(ii) omogenitatea populaiei celulare este uor de asigurat (celelalte tipuri celulare
reprezint o mas mic, sunt mai uoare, sedimentnd deasupra eritrocitelor
la centrifugare, sau doar n cmp gravitaional, iar eliminarea lor se poate face
chiar cu pierderi de eritrocite, pentru siguran n eliminarea impurificrii
preparatului final);
(iii) membranele se obin fr dificultate printr-un simplu oc hipoton urmat de
centrifugare; membranele obinute (numite i fantome eritrocitare) nu sunt
impurificate cu endomembrane (membrane ale organitelor celulare),
inexistente n hematii.
Proteinele membranelor astfel purificate au fost rezolvate prin electroforez n
gel de poliacrilamid n prezen de dodecilsulfat de sodiu (SDS-PAGE). Avantajele
acestui tip de electroforez constau n faptul c detergentul (dodecilsulfatul de sodiu,
numit i laurilsulfat de sodiu) pe de o parte elibereaz toate proteinele (att pe cele
periferice, ct i pe cele integrale) din arhitectura membranei, solubilizndu-le dup
dezorganizarea bistratului lipidic [6], iar pe de alt parte se adsoarbe unitar pe
lanurile polipeptidice, conferindu-le o densitate de sarcin negativ unitar. n
aceste condiii migrarea proteinelor n cmp electric, prin mediul vscos de
poliacrilamid, se face numai n funcie de greutatea lor molecular.
Rezultatele unei asemenea abordri pentru descrierea proteinelor membranei
eritrocitare se nfieaz sub forma unui spectru de benzi proteice distribuite ntre
20 i 250 kDa, care iniial au primit denumiri sub form de cifre (banda 1, banda 2,
36
etc.), nuanndu-se cu, spre exemplu, banda 4.1, banda 4.2, acolo unde benzile
apreau ca dublete. Ulterior, unele dintre proteine au primit denumiri specifice. n
momentul de fa organizarea i funcionarea membranei eritrocitare poate fi
discutat pe baza informaiilor disponibile referitoare la proteinele ei. Comentariile
asupra proteinelor membranei eritrocitare ne vor ajuta s nelegem mai aprofundat
organizarea acestor macromolecule n arhitectura biomembranelor, care este n
strns legtur cu funcionalitatea lor.
Vom ncepe cu o protein, de fapt o glicoprotein (60% din masa molecular a
glicoconjugatului este reprezentat de ncrctura glucidic), numit glicoforin
(etimologic nsemnnd purttoare de glucide), prezent din abunden n membrana
eritrocitului, care migreaz atipic (se dispune electroforetic undeva pe la 90kDa, dei
masa ei molecular este de numai ~30kDa). Exist mai multe izoforme de glicoforin
[7] identificate pn n prezent: A, B, C, D i E. Izoforma glicoforin A a fost prima
protein a membranei eritrocitare cunoscut detaliat [8], sub aspectul structurii
biochimice. Are 131 aminoacizi, cunoscndu-i-se integral secvena; este protein
transmembranar unipas, tip I (captul amino n ectodomeniu); domeniul expus la
suprafaa membranei este mare (70 de aminoacizi) i poart 16 lanuri glucidice (15
O-glicozidice i unul N-glicozidic), acestea dublnd practic gabaritul acestei molecule
(aceast organizare biochimic a glicoproteinei reprezint o explicaie pentru
migrarea electroforetic atipic; practic densitatea de sarcin negativ pe unitatea de
mas este mai mic dect n mod normal, detergentul SDS adsorbindu-se unitar
numai pe lanul polipeptidic, nu i pe structurile glucidice); endodomeniul este mic
(39 de aminoacizi), purtnd captul carboxil al lanului polipeptidic; domeniul
transmembranar este structurat n -helix i conine 22 de aminoacizi, care sunt
identificai.
Paradoxul este c, dei structural glicoforina i-a dezvluit repede secretele,
funcia nu i se cunoate nc exact. Totui, pentru izoforma glicoforin C a fost
dovedit o funcie structural [9] (vezi mai jos la citoscheletul asociat membranei),
iar pentru izoforma glicoforin A un rol de restabilire a funciei unei forme mutante a
proteinei banda 3, prin interaciunea dintre cele dou [10]. Ciudenia este cu att
mai mare cu ct exist eritrocite (Ena-) din a cror membran glicoforina lipsete,
fr ca funcionalitatea s le fie afectat. Populaiile cu asemenea defecte de
exprimare a glicoforinei sunt n zonele cu malarie endemic, iar exprimarea
deficitar n glicoforin A reprezint un mecanism de adaptare, parazitul
Plasmodium falciparum invadnd eritrocitele gazd prin legarea la o structur
glucidic purtat de aceast protein transmembranar [11].
O situaie diametral opus o reprezint proteina banda 3, cunoscut i ca
AE1 (de la numele n englez, Anion Exchanger 1) [10], despre care informaia
asupra detaliilor structurale a evoluat mai anevoios, dar a crei funcie a fost repede
i clar stabilit: este proteina care structureaz canalul anionic de schimb ntre
bicarbonat (HCO3-) i clorur (Cl-). Banda 3 este protein transmembranar, are 911
aminoacizi n lanul polipeptidic i o mas molecular de ~100kDa. Partea N-
terminal a proteinei (aminoacizii 1-359) intr n structurarea endodomeniului,
asigurnd interaciuni cu alte proteine membranare. Domeniul transmembranar, la
nivelul cruia se formeaz canalul de schimb anionic, are 12-14 treceri n -helix prin
bistratul lipidic (~50kDa din masa molecular). La endodomeniul mare format n
principal din captul N-terminal se adaug captul C-terminal scurt (format din 33
aminoacizi) aflat tot spre citosol. Aadar, endodomeniul conine ~400 din
aminoacizii care formeaz proteina, adic ~40kDa i poart att captul N-terminal
(protein transmembranar de tip II), ct i captul C-terminal. Ectodomeniul este
mic, ncrctura glucidic este redus (se pare c doar un lan, cu o structur extrem
de eterogen [12]) i este reprezentat de bucle dintre poriunile transmembranare. n
poriunea C-terminal banda 3 leag anhidraza carbonic II, important pentru
37
funcia transportorului prin furnizarea anionului bicarbonat [13]. Au fost identificate

forme mutante pentru proteina banda 3 care induc o serie de patologii specifice
eritrocitelor [10], iar glicoforina A pare a fi de ajutor acestor forme mutante n
restabilirea funciei de transport.
Cea de-a treia protein pe care o amintim este spectrina, care, mpreun cu
celelalte dou amintite mai sus, reprezint peste 60% (procente de mas) din
proteinele membranei eritrocitare. Spectrina este o protein periferic situat pe faa
intern a membranei (aadar o endoprotein) i reprezint componenta de baz a
ceea ce numim citoschelet asociat membranei sau simplu citoschelet
membranar ori citoscheletul membranei.10
Citoscheletul membranei este o reea de endoproteine cu ochiuri i
noduri, solidar membranei prin ataarea la endodomeniul unor proteine
transmembranare. Grosimea acestei ultrastructuri membranare este de 5-10nm.
Citoscheletul membranei este solidar i cu organitul denumit citoschelet.
Citoscheletul ca organit este reprezentat de filamente sau microtubuli distribuite n
ntreg volumul citosolic i este responsabil, ntre altele, de meninerea i/sau
modificarea formei celulelor, ca i de geometria membranei. La unele tipuri celulare
citoscheletul este implicat n organizarea specializrilor de membran cum ar fi
microvilii, stereocilii, cilii, flagelii. De menionat c la eritrocit forma biconcav i
maleabilitatea acesteia se datoreaz n exclusivitate citoscheletului membranar.
Spuneam c spectrina este componenta de baz a citoscheletului asociat
membranei. Ea este un heterodimer (Fig. 2.11, A) format dintr-o subunitate (-
spectrin, 280kDa) i o subunitate
(-spectrin, 246kDa). Ambele subuniti
sunt formate predominant din multiple uniti repetitive de 106 aminoacizi: 22
pentru D-spectrin i 17 pentru E-spectrin [14]. Cele dou subuniti cu geometrie
fibrilar se rsucesc uor una n jurul alteia ntr-o structur elicoidal, formnd
bastonae flexibile cu lungimea de ~100nm. Rsucirea este n contrasens
(antiparalel), fiecare bastona avnd la capete gruparea amino-terminal a unei
subuniti i gruparea carboxi-terminal a celeilalte. Captul coninnd gruparea
amino-terminal a subunitii i gruparea carboxi-terminal a subunitii
este
numit capul bastonaului, iar cellalt capt este coada acestuia. Bastonaele au
capacitatea de a interaciona cte dou, cap la cap, formnd tetrameri lungi de
~200nm (Fig. 2.11, B). Aceti tetrameri formeaz laturile reelei citoscheletului
membranar. Capetele tetramerilor, ce reprezint cozile bastonaelor de spectrin, au
capacitatea de a se asocia, de regul cte 5 sau 6, prin interaciuni cu oligomeri de
actin, formnd nodurile reelei, la nivelul crora se gsesc i alte proteine care
controleaz dinamica interaciunilor i, prin aceasta, dinamica citoscheletului
membranar.
Aadar actina este o alt protein ce particip la organizarea citoscheletului
membranei, asigurnd solidarizarea componentelor acestuia la nivelul nodurilor. n
forma sa monomeric actina este o protein globular cu masa de ~43kDa i un
diametru de ~5nm. La nivelul citoscheletului membranar formeaz fragmente mici,
de 8-12 monomeri cu rolul de a asigura asocierea cozilor tetramerilor de spectrin n
nodurilor reelei.
Tot n noduri se localizeaz o alt protein periferic, banda 4.1, cu masa de
~80kDa i conformaie globular (diametrul ~6nm). Banda 4.1 interacioneaz
dinamic, pe de o parte cu spectrina i actina n nodurile reelei citoscheletale i, pe de
alt parte, cu endodomeniul glicoforinei C, contribuind la ataarea citoscheletului pe
10 Atragem atenia c noiunea de citoschelet se utilizeaz i pentru organitul nedelimitat de endomembrane

format din filamente de actin, filamente intermediare i microtubuli. Aadar, facem apel la cititori s disjung
ntre sintagma citoschelet asociat membranei sau citochelet membranar i organitul numit citoschelet.
38
faa citosolic a membranei [10]. Rezult de aici un rol structural pentru o izoform a
paradoxalei glicoforine.
Ataarea citoscheletului asociat la membran este ns datorat n principal
unei alte proteine globulare, ankirina (masa molecular ~210kDa, diametrul
~9nm). Ankirina se leag att la subunitatea
a spectrinei, la cea de-a 15-a unitate
repetitiv [13] (n treimea dinspre cap a heterodimerului), ct i la endodomeniul
benzii 3, asigurnd ancorarea reelei citoscheletului membranar, prin intermediul
laturilor ochiurilor acestuia.
Pe scurt, citoscheletul membranei (Fig. 2.12) este format din tetrameri de
spectrin ce organizeaz laturile ochiurilor reelei, unde prin intermediul ankirinei se
leag de banda 3 (protein transmembranar) i din mici filamente de actin care
leag cozile tetramerilor de spectrin la nivelul nodurilor reelei, unde, prin
intermedierea benzii 4.1, reeaua se ataeaz suplimentar la endodomeniul benzii 3,
sau al glicoforinei. Interaciunile de afinitate dintre elementele citoscheletului asociat
membranei sunt ntr-o dinamic permanent, astfel nct aceast ultrastructur nu
este rigid, ci ntr-o continu modelare care s satisfac nevoile celulei. n acest fel
eritrocitul i modeleaz forma pentru a putea s treac prin cele mai subiri capilare
(diametrul acestor capilare este de 5Pm, n timp ce diametrul unui eritrocit este de 7-
8Pm). n timpul strbaterii acestor capilare eritrocitul capt o form concav-
convex (ca o meduz) i astfel se strecoar, cu membrana foarte aproape de cea a
celulei endoteliale din peretele vasului de snge, favorizndu-se schimbul de gaze.
Citoscheletul asociat membranei nu este doar o caracteristic a membranei
eritrocitare. El se gsete n toate celulele i este structurat asemntor, chiar dac
unele dintre componente au fost denumite diferit (spre exemplu echivalenta
spectrinei n celulele nervoase este numit fodrin). Repetm, dac la eritrocit
aceast ultrastructur este singura responsabil de forma celulei, ca i de
maleabilitatea acesteia, deoarece este un element dinamic n permanent
reconstrucie, la celelalte celule pentru asigurarea formei, citoscheletul asociat
membranei este n interrelaie cu organitul denumit citoschelet.
Fig. 2.11. Structurarea i organizarea spectrinei. (A) Ambele subuniti D i E sunt formate din
domenii repetitive de cte 106 aminoacizi i se rsucesc, antiparalel una n jurul alteia, formnd un
bastona de 100nm. (B) Heterodimerii DE se leag cap-cap formnd tetrameri lungi de 200nm.
Mircea Leabu, 2014.
39
Fig. 2. 12. Organizarea citoscheletului membranar, ca o reea dinamic de endoproteine cu

ochiuri i noduri. Tetramerii spectrinei formeaz laturile ochiurilor, la nivelul crora ultrastructura se
ataeaz prin ankirin la banda 3 (canalul de schimb anionic), protein transmembranar multipas,
prin aceste interaciuni reeaua solidarizndu-se membranei. Nodurile se formeaz prin ataarea
multipl a tetramerilor de spectrin la nivelul cozilor heterodimerilor DE, iar interaciunile acestora sunt
ntrite prin participarea oligomerilor de actin i a proteinei benzii 4.1. Banda 4.1 ataeaz
suplimentar citoscheletul membranar la ultrastructur, interacionnd cu domeniul citosolic al
glicoforinei (ncrctura glucidic bogat a glicoforinei este reprezentat prin norul albastru de
deasupra ectodomeniului proteinei). Traseele contorsionate ale tetramerilor de spectrin sugereaz
maleabilitatea ultrastructurii i se datoreaz punilor flexibile pe care monomerii D, respectiv E le
organizeaz ntre unitile repetitive de tip spectrinic. Mircea Leabu, 2014.
Revenind la metodologia electroforetic de studiere a proteinelor

membranare, aceasta a fost dezvoltat, prin combinare cu extragerea i ataarea
proteinelor rezolvate prin SDS-PAGE pe membrane adsorbante (din
nitroceluloz sau poli-difluorur de viniliden). Extragerea proteinelor din gelul de
electroforez se realizeaz tot sub aciunea cmpului electric aplicat unui sandvi
format de gelul obinut dup migrarea i rezolvarea proteinelor pe baza greutilor
lor moleculare i membrana adsorbant, iar procesul este numit transfer
electroforetic. Tehnica se finalizeaz cu o etap de imunodetecie a diferitelor specii
proteice prin folosirea de anticorpi, printr-o metod indirect (anticorpi primari,
direcionai specific mpotriva unei anumite proteine, urmai de anticorpi secundari,
anti-specia surs a anticorpilor primari, cuplai, de regul, cu peroxidaz de hrean,
pentru reacia de vizualizare prin chemiluminiscen amplificat). Prin aceast
dezvoltare pot fi investigate proteine membranare fr a mai fi nevoie de izolarea
iniial a unor fraciuni pure de membran. Singurul aspect ce trebuie cunoscut
anterior este localizarea membranar a proteinei investigate. Pentru exemplificarea
tehnicii (denumit n literatura de specialitate, fr o semnificaie semantic,
western blot) artm variaia exprimrii unor integrine n culturi celulare
obinute din celule musculare netede din peretele de tromp uterin (Fig. 2.13).
Tehnica este deosebit de util n studiul efectelor anumitor condiii experimentale
asupra exprimrii proteinelor studiate, ca i n studii de activare a unor proteine n
diferite procese celulare, dac exist anticorpi specifici pentru domeniile proteinei
care sufer modificri ca urmare a activrii.
40
Fig. 2.13. Investigare prin western blot a

variaiei exprimrii unor diverse subuniti de
integrine n celule musculare netede din tromp
uterin, la diferite pasaje obinute dup iniierea
unei culturi primare. 1 pasajul 2; 2 pasajul 4; 3
pasajul 6; 4 pasajul 8. Cifrele din partea stng
a imaginii reprezint masele moleculare ale
standardelor. Evidenierea E-actinei ne ajut s
dovedim ncrcarea proteic identic a probelor
supuse electroforezei. Mircea Leabu, 2014.
Investigrile funcionale i de distribuire/redistribuire ale proteinelor

membranare se pot realiza prin alte tehnici de studiere a celulelor. Microscopia de
fluorescen reprezint o asemenea modalitate de studiu ntr-o multitudine de
modelri experimentale (Fig. 2. 14 i Fig. 2. 15).
Fig. 2.14. Proteine membranare identificate prin imunofluo-

rescen. (A) Proteina CD31 (abreviaie de la Cluster of Differen-
tiation 31), cunoscut i ca PECAM-1 (de la Platelet Endothelial Cell
Adhesion Molecule 1) este uniform distribuit pe suprafaa celulelor.
(B) Conexina, o protein ce formeaz jonciuni comunicante (acestea
organizndu-se ca microdomenii de membran) are o distribuie n
pete n membrana celular. (Imagini puse la dispoziie, cu amabilitate
de Dr. Florea Lupu, University of Oklahoma Health Sciences Center.)
Florea Lupu, 2014.
41
Fig. 1.15. Evidenieri prin microscopie de fluorescen a organizrii i reorganizrii unor

proteine membranare i a citoscheletului actinic la celule n repaus (A-G), respectiv dup
stimulare cu factor de cretere epidermal, abreviat EGF, (H-N). n verde, este prezentat
distribuia integrinei D2E1 (care se leag de colagen) nainte (A), respectiv dup stimularea celular
(H). Se observ c pe celulele n repaus integrina este distribuit uniform n pete mici, iar dup
expunere la EGF exist o redistribuire cu aglomerarea semnificativ a proteinei la nivelul corpului
celular, n timp ce la nivelul lamelipodiilor, extinse datorit stimulrii celulei, se pstreaz o distribuie
n pete mici. n rou, este reprezentat situaia citoscheletului actinic. Acesta este distribuit
preponderent cortical n celulele aflate n metabolism bazal (B), n timp ce dup stimulare, alturi de o
mai accentuat organizare cortical, se formeaz fibre de stres i o reea de filamente de actin la
nivelul lamelipodiilor (I). n magenta, este evideniat receptorul pentru EGF care se distribuie
respectnd citoscheletul actinic n celulele aflate n repaus (C) i se expune amplu pe suprafaa
membranar a celulei stimulate (J). n imaginile D-G se prezint suprapunerile organizrii la celula n
repaus a diferitelor componente investigate pentru identificarea eventualelor co-localizri: integrina i
actina (D), receptorul pentru EGF i integrina (E), receptorul pentru EGF i actina (F) sau pentru
toate proteinele evideniate (G). Aceleai posibile co-localizri pot fi urmrite pentru celulele stimulate
n imaginile K-N: integrina i actina (K), receptorul pentru EGF i integrina (L), receptorul pentru EGF
i actina (M) sau n cazul tuturor proteinelor studiate (N). Celulele supuse modelului experimental au
fost ataate pe suprafee de cultur acoperite cu colagen tip I. Mircea Leabu, 2014.
Din cele discutate pn aici rezult c proteinele contribuie la caracteristicile

structurale conferite membranelor de bistratul lipidic, nuanndu-le. Astfel,
proteinele sporesc eterogenitatea compoziiei membranelor ca i asimetria
structural a acesteia.
42
Totui, n ciuda complexitii interaciunilor pe care proteinele membranare le

stabilesc ntre ele, cu lipidele membranare, sau (dup cum vei constata n
numeroase ocazii prin parcurgerea i nsuirea informaiilor de biologie celular a
biomembranelor) cu elemente moleculare complexe intracelulare, ori din afara
celulelor, aceste componente responsabile de funciile metabolice sunt mobile,
micndu-se n planul membranei. Punctnd aspecte legate de dinamica proteinelor
membranare, vom putea nelege posibilitatea redistribuiei lor n funcie de starea n
care celulele se afl (Fig. 2.16). Mai mult, reorganizrile i redistribuirea elementelor
biochimice la nivelul membranei permit celulei s i adapteze comportamentul la
nevoile impuse de condiiile de mediu sau de propriile necesiti.
2.3.4. Mobilitatea proteinelor membranare

Dinamicitatea proteinelor membranare se bazeaz pe dou tipuri de micri:
micri de rotaie i micri de translaie.
Micarea de rotaie a proteinelor membranare n jurul propriei axe, denumit
i difuzie rotaional, este de cel puin 1000 de ori mai lent dect a lipidelor.
Este lesne de neles acest lucru gndindu-ne la diferenele de gabarit ntre lipide i
proteine.
Micarea de translaie, denumit i difuzie lateral, este i ea mult mai
lent dect a lipidelor, fiind n medie de 1Pm/s. Lentoarea difuziei laterale a
proteinelor nu trebuie neleas numai prin diferenele de mrime ntre acestea i
lipide, ci i prin interaciunile pe care proteinele le stabilesc n mod dinamic ntre ele
sau cu alte structuri dinuntrul sau din afara celulei. Astfel aceeai protein, n
aceleai condiii de fluiditate a bistratului lipidic, se poate mica mai repede sau mai
ncet n dependen de starea funcional, de moment a ei (interacioneaz sau nu cu
alte componente membranare, celulare sau extracelulare). Pe de alt parte, migrarea
lateral a proteinelor membranare poate fi limitat, din considerente impuse de
nevoile funcionale ale celulelor, numai la anumite domenii ale membranei. De
exemplu, celulele polarizate ale epiteliilor unistratificate i creeaz i i pstreaz o
compoziie proteic diferit la nivelul membranei apicale, fa de cea de la nivelul
membranei latero-bazale; asta deoarece cele dou domenii diferite ale membranei
celulare au funcii diferite. Mai mult, micarea proteinelor membranare este limitat
i din cauza ngrdirilor pe care le impun organizarea citoscheletului membranar i a
filamentelor de actin din citoscheletul cortical. Au fost descrise trei niveluri
ierarhice de ngrdire a mobilitii proteinelor pe distane ntre 2 i 300nm, numite
domenii de mezoscal: domeniul dinamicii complexelor proteice (3-10nm), domeniul
plutelor lipidice (2-20nm) i domeniul compartimentrii prin citoscheletul
membranar/actina organizat cortical [15]. Toate aceste aspecte nuaneaz dinamica
proteinelor membranare ntr-un mod care se rsfrnge asupra funciilor, iar lipidele
nu par a scpa de mpiedicri similare de libertate, chiar dac rigoarea supunerii
acestora nivelelor de restricii menionate este mai puin rigid.
Dovezile experimentale asupra translaiei proteinelor (difuziei laterale a
proteinelor) n planul membranei au venit din observaii colaterale, nu neaprat din
experimente imaginate i conduse special pentru investigarea acesteia.
Prime dovezi au fost aduse n 1970 [16], cnd se urmrea obinerea de celule
hibride ntre om i oarece (aa-numiii heterocarioni). Pentru a se monitoriza
fuziunea celulelor i obinerea heterocarionilor, cele dou tipuri de celule au fost
marcate cu anticorpi specifici, ce purtau fluorescene de culori diferite. n celula
hibrid s-a observat c fluorescenele iniial localizate separat, s-au amestecat dup
40 de minute, distribuindu-se uniform n membrana heterocarionului. Aceast
observaie a fost explicat prin capacitatea proteinelor membranare de a difuza n
planul membranelor crora le aparin.
43
Alte dovezi au venit din observaiile asupra fenomenelor de patching /

capping pe care le-am putea denumi n romnete ptare (maculare) /
calotare, observate chiar la microscopul electronic n experimente corespunztor
conduse [17]. Iat n ce constau aceste observaii. Limfocitele, a cror suprafa era
marcat iniial uniform cu anticorpi policlonali marcai cu feritin [17] sau cu
fluorocromi [18], prezentau n timp aglomerri n pete, iar n cele din urm feritina
sau fluorescena se adunau n ntregime polar, sub forma unei tichii (calote sferice).
Explicaia acestei realiti experimentale nu putea fi dat dect acceptnd c
proteinele, distribuite iniial uniform n planul membranei, pot difuza lateral liber,
iar ambivalena i caracterul policlonal al anticorpilor folosii, prin legri ncruciate,
contribuiau la unirea partenerilor de reacie n complexe din ce n ce mai mari,
sfrind prin formarea unui complex singular.
Al treilea tip de experimente, de aceast dat destinate studiului difuziei
laterale a moleculelor individuale de rodopsin (cromoprotein cu fluorescen
intrinsec) din membranele discurilor celulelor cu bastonae din retin, sunt cele
care studiaz refacerea fluorescenei dup foto-stingere denumit prescurtat FRAP
(de la Fluorescence Recovery After Photobleaching). Asemenea experimente au
permis i estimarea coeficienilor de difuziune, aadar aprecierea cantitativ a
micrii proteinelor membranare [19]. Ele se pot realiza i pentru proteine care nu
sunt fluorescente de la sine, dup ce acestea au fost marcate cu fluorocromi. Pe scurt,
aceste experimente constau n stingerea fluorescenei unei zone micronice din
membran, prin aciunea unui fascicul de lumin intens i puternic focalizat (de
obicei raz laser) i n urmrirea refacerii fluorescenei n acea zon, datorit difuziei
moleculelor fluorescente din celelalte zone, neafectate (nestinse) ale membranei. n
acest fel se pot msura coeficieni de difuziune pentru proteine membranare din
orice tip de celul.
2.3.5. Rolul proteinelor membranare

Ca i n cazul lipidelor membranare, proteinele au att rol structural, ct i
rol metabolic. Este evident c atta timp ct proteinele integrale sunt cufundate n
bistratul lipidic rolul lor n organizarea membranei ca ultrastructur celular (rolul
structural) este unul intrinsec. Prezena proteinelor n bistrat nu trebuie s afecteze
funcia de barier selectiv conferit de nsui elementul de baz din organizarea
membranelor. O bun exemplificare asupra rolului structural al proteinelor
membranare l constituie comentariul aferent citoscheletului membranar (vezi mai
sus). Se poate aduga rolul unor proteine transmembranare numite caderine n
stabilirea jonciunilor dintre celule, la nivelul esuturilor sau a celor numite
integrine (vezi CASETA 2.2) implicate, de regul, n interaciunea celulelor cu
componente ale matricei extracelulare (proteine i/sau glicoproteine ce structureaz
diverse componente tisulare ntre celule). Rolul structural, al unor asemenea
proteine transmembranare, este acela de a menine celulele ntr-o ordonare coerent
n organizarea esuturilor, dar i de a permite acestora s schimbe informaii pentru
o integrare eficient, iar schimbul de informaii transcede funcia structural; aadar
att caderinele, ct i integrinele au i funcii metabolice (vezi n capitolul 3, la
subcapitolul Semnalizarea celular). Asta nseamn c nu se poate face o delimitare
ntre cele dou tipuri de funcii (lucru valabil i pentru lipide de altfel). Aceleai
entiti moleculare pot avea att rol structural, ct i rol metabolic (vezi mai sus, ca
exemplu, proteina banda 3 din membrana eritrocitar). Aa stau lucrurile i pentru
integrine, respectiv caderine care au att un important rol structural (ataarea
celulelor la substrat sau unele de altele), ct i rol n culegerea de informaii legate de
ambiana n care celulele se gsesc, ceea ce le implic n declanarea de procese
celulare menite s creeze rspunsuri specifice condiiilor concrete din mediu.
44
CASETA 2.2. Integrinele i rolul lor. Integrinele sunt glicoproteine transmembranare,

structurate ca heterodimeri (fiecare subunitate sau fiind o protein unipas, de tipul I),
cu rol n aderarea celulelor la matricea extracelular i n transmiterea de informaii legate de
caracteristicile fizico-chimice ale structurilor macromoleculare din mediul extracelular. Exist,
identificate n momentul de fa, 18 subuniti i 8 subuniti , care, prin diverse combinaii,
formeaz (dup informaiile de care dispunem n acest mement) 24 de tipuri distincte de integrine.
Aceti heterodimeri diferii au specificiti diverse, att sub aspectul partenerului de interaciune
din matricea extracelular pe care l leag, ct i sub aspectul afinitilor fa de acetia. Altfel
spus, chiar dac specificitatea integrinelor este un parametru degenerat (mai multe proteine de
matrice se pot lega de aceeai integrin i mai multe integrine pot lega aceeai protein de
matrice), afinitatea acestor interaciuni este diferit, iar semnalele pe care celula le primete dup
angajarea integrinelor n interaciunile specifice sunt, de asemenea, diferite. Dac rolul structural
al integrinelor este relativ bine caracterizat, rolul metabolic al lor (procesele de semnalizare pe care
le declaneaz) este departe de a fi cu claritate elucidat, dei nu este contestat de nimeni n
comunitatea tiinific. Integrinele sunt implicate n controlul unor procese celulare ca
diferenierea, moartea celular programat, motilitatea. Toate aceste procese sunt importante att
n organizarea normal a esuturilor i organelor, ct i n patologii dintre cele mai diverse. n
aceste aspecte de biologie normal sau patologie celular, integrinele coopereaz cel puin cu
receptorii pentru factori de cretere. Cile de semnalizare ce sunt iniiate de integrine se
intersecteaz cu cele iniiate de receptorii pentru factori de cretere [20], nuannd ntr-o plaj
larg capacitile celulelor de a rspunde factorilor externi i asigurnd o multitudine de
posibiliti de adaptare.
n general, att pentru caderine, ct i pentru integrine se poate afirma c ele

determin celula s se comporte difereniat n funcie de statusul lor: un anumit
comportament, atunci cnd sunt angrenate n interaciuni cu alte celule, respectiv
componente ale matricei celulare i un alt fel de comportament, atunci cnd sunt
detaate din astfel de interaciuni, iar gradele lor de libertate sporesc.
Detalii asupra rolurilor metabolice ale proteinelor membranare sunt
prezentate n subcapitolele privind transportul membranar i semnalizarea celular.
Aici vom aminti, doar n linii generale, c rolurile metabolice ale proteinelor
membranare se manifest n ceea ce privete schimburile de substan i informaii
dintre celule sau dintre acestea i mediu. Astfel, proteinele membranare pot fi
receptori (pentru hormoni, factori de cretere, citokine, chemokine),
transportori prin membran (canale ionice, pompe ionice, conexoni, porine)
sau transportori cu membran (clatrin, caveolin: proteine ce structureaz
nveliuri ale unor microdomenii din membran pentru a permite invaginarea
acestora i detaarea sub form de vezicule, realiznd procese denumite generic
endocitoz; alte proteine asigur fuzionarea unor vezicule cu membrana celular,
facilitnd fenomenul de secreie prin exocitoz; vezi amnunte la transportul
membranar).
Proteinele membranare mai pot funciona ca enzime (metaloproteinaze
pentru componente de matrice extracelular, fosfolipaze vezi diversitatea acestora,
mai sus, la seciunea despre rolul lipidelor membranare, kinaze, fosfataze) sau ca
proteine implicate n semnalizare (de exemplu, proteine platform/schel, numite
i proteine adaptoare sau proteine G). Detalii asupra mecanismelor prin care aceste
proteine membranare i realizeaz funciile vei gsi (i trebuie folosite ntr-o
discuie profesionist despre aceast component molecular a membranei) pe
parcursul nsuirii tuturor celorlalte informaii despre celul.
n toate aceste funcii asimetria structurrii membranei este deosebit de
important. Astfel, receptorii, dar i proteinele de adeziune (caderinele i integrinele)
prin asimetria lor structural permit prin ectodomenii interaciunea cu liganzii
specifici, iar prin endodomenii asigur transmiterea informaiei ctre interiorul
celulei i declanarea unor procese celulare care se constituie n rspuns celular la
semnalele receptate. De remarcat c n transmiterea semnalelor prin receptori sau
integrine un rol important revine domeniului transmembranar al acestor proteine
45
integrale. Domeniile transmembranare au capacitatea de a suferi rearanjri

conformaionale, induse de legarea ligandului. Aceste rearanjri conformaionale
asigur transmiterea, din afara celulei n citoplasm, a informaiei purtate de ligand
i predate prin interaciunea cu receptorul specific. Fenomenul de transmitere a
informaiei din afara celulei n citoplasm este denumit i transducie a semnalului.
Informaia, ajuns la nivelul endodomeniului receptorului, este preluat, prelucrat
i, de regul, amplificat de participanii la diversele procese de semnalizare
(mesageri secunzi i/sau efectori intracelulari, care vor fi definii la seciunea legat
de semnalizarea celular). De menionat aici c efectele asupra conformaiei
domeniilor transmembranare sunt dependente i de aspectele legate de parametrul
fizic fluiditate a membranei, detaliat mai sus, n seciunea privitoare la starea fizic a
bistratului lipidic.
n rezumat, proteinele membranare sporesc eterogenitatea compoziional i
asimetria membranelor i moduleaz proprietile fluide ale acestora, adic
accentueaz i modeleaz caracteristicile induse de bistratul lipidic. Altfel spus,
proteinele membranare coopereaz cu lipidele att n structurarea membranei ct i
n perfectarea funcionalitii acesteia, prin rolul lor metabolic, cel care asigur
integrarea celulei cu mediul. n exercitarea rolurilor lor metabolice, proteinele
membranare pot antrena att lipidele membranare, ct i componente citosolice sau
extracelulare.
1. Steck TL. (1974) The organization of proteins in the human red blood cell membrane. A review. J Cell
Biol. 62: 1-19.
2. Schultz AM, Henderson LE, Oroszlan S. (1988) Fatty acylation of proteins. Annu Rev Cell Biol. 4:
611-647.
3. Rodriguez-Boulan E, Powell SK. (1992) Polarity of epithelial and neuronal cells. Annu Rev Cell Biol.
8: 395-427.
4. Spiro RG. (2002) Protein glycosylation: nature, distribution, enzymatic formation, and disease
implications of glycopeptide bonds. Glycobiology. 12: 43R-56R.
5. Marchesi VT, Furthmayr H, Tomita M. (1976) The red cell membrane. Annu Rev Biochem. 45:
667-98.
6. Helenius A, Simons K. (1975) Solubilization of membranes by detergents. Biochim Biophys Acta.
415: 29-79.
7. Chasis JA, Mohandas N. (1992) Red blood cell glycophorins. Blood. 80: 1869-1879.
8. Tayyab S, Qasim MA. (1988) Biochemistry and roles of glycophorin A. Biochem Educ. 16: 63-66.
9. Takakuwa Y. (2001) Regulation of red cell membrane protein interactions: implications for red cell
function. Curr Opin Hematol. 8: 80-84.
10. Williamson RC, Toye AM. (2008) Glycophorin A: band 3 aid. Blood Cells Mol Dis. 41: 35-43.
11. Orlandi PA, Klotz FW, Haynes JD. (1992) A malaria invasion receptor, the 175-kilodalton
erythrocyte binding antigen of Plasmodium falciparum recognizes the terminal Neu5Ac(alpha2-3)Gal-
sequences of glycophorin A. J Cell Biol. 116: 901-909.
12. Drickamer LK. (1978) Orientation of the band 3 polypeptide from human erythrocyte membranes.
Identification of NH2-terminal sequence and site of carbohydrate attachment. J Biol Chem. 253: 7242-
7248.
13. Vince JW, Reithmeier RA. (1998) Carbonic anhydrase II binds to the carboxyl terminus of human
band 3, the erythrocyte C1-/HCO3- exchanger. J Biol Chem. 273: 28430-28437.
14. Kennedy SP, Warren SL, Forget BG, Morrow JS. (1991) Ankyrin binds to the 15th repetitive unit
of erythroid and nonerythroid beta-spectrin. J Cell Biol. 115: 267-277.
15. Kusumi A, Fujiwara TK, Chadda R, Xie M, Tsunoyama TA, Kalay Z, Kasai RS, Suzuki KG.
(2012) Dynamic organizing principles of the plasma membrane that regulate signal transduction:
commemorating the fortieth anniversary of Singer and Nicolson's fluid-mosaic model. Annu Rev Cell
Dev Biol. 28: 215-250. doi: 10.1146/annurev-cellbio-100809-151736.
46
16. Frye LD, Edidin M. (1970) The rapid intermixing of cell surface antigens after formation of mouse-
human heterokaryons. J Cell Sci. 7: 319-335.
17. de Petris S, Raff MC. (1973) Normal distribution, patching and capping of lymphocyte surface
immunoglobulin studied by electron microscopy. Nat New Biol. 241(113): 257-259.
18. Schreiner GF, Unanue ER. (1975) The modulation of spontaneous and anti-Ig-stimulated motility of
lymphocytes by cyclic nucleotides and adrenergic and cholinergic agents. J Immunol. 114(2 pt 2): 802-
808.
19. Wey CL, Cone RA, Edidin MA. (1981) Lateral diffusion of rhodopsin in photoreceptor cells measured
by fluorescence photobleaching and recovery. Biophys J. 33(2): 225-232.
20. Leabu M, Uniyal S, Xie J, Xu YQ, Vladau C, Morris VL, Chan BM. (2005) Integrin D2E1
modulates EGF stimulation of Rho GTPase-dependent morphological changes in adherent human
rhabdomyosarcoma RD cells. J Cell Physiol. 202, 754-766.
47
2.4. Componenta glucidic a membranei

n afar de lipide i proteine, n organizarea molecular a membranelor se
ntlnesc i glucide. n ceea ce urmeaz vom folosi termenul de component glucidic
a membranelor i nu de glucide membranare, pentru a fi, prin exprimare, mai
aproape de realitatea biologic. Motivaia acestei preferine este dat de faptul c, n
membranele celulare (ca i n endomembrane) glucidele nu se gsesc ca entiti
individuale, ci sunt grefate pe un purttor lipidic sau proteic, ca structuri n principal
oligozaharidice, dar i polizaharidice. Componentele biochimice complexe formate
din glucide i lipide sau din glucide i proteine poart denumirea generic de
glicoconjugate. Prile glucidice ale glicoconjugatelor sunt dispuse ntotdeauna pe
faa extern a membranelor celulare, formnd ceea ce denumim glicocalix. nc de
la nceput, n baza afirmaiei anterioare i rememornd faptul c pe faa intern a
membranelor se afl citoscheletul asociat, putem puncta faptul c prezena acestor
dou (ultra)structuri sporete asimetria membranelor. n cele ce urmeaz, abordnd
aspecte generale referitoare la prezena glucidelor n organizarea membranelor, vom
adnci argumentarea nu numai pentru caracterul asimetric al structurrii acestora,
dar i pentru eterogenitatea compoziional a lor, respectiv pentru efectele asupra
comportamentului fluid manifestat bidimensional.
2.4.1. Definiia glicocalixului i organizarea lui molecular

Glicocalixul reprezint nveliul glucidic al celulelor, constituit din structuri
oligozaharidice sau polizaharidice inserate pe lipide ale foiei externe a bistratului
sau pe proteine (adic pe ectoproteine, respectiv pe ectodomeniile proteinelor
transmembranare). n privina modului de organizare a componentei glucidice a
membranelor punctm c glicolipidele poart doar structuri oligozaharidice, n timp
ce proteinele pot purta att structuri oligozaharidice, ct i polizaharidice.
Din punctul de vedere al structurii biochimice globale, trei sunt componentele
membranare ce particip la structurarea glicocalixului prin prile glucidice din
compoziia lor: glicolipidele, glicoproteinele i proteoglicanii. Toate cele trei
categorii de componente sunt denumite generic, repetm, glicoconjugate.
Grosimea glicocalixului este, n medie, ntre 20 i 50nm, variind de la un tip de celul
la altul, dar i pentru aceeai celul de la un domeniu membranar la altul (spre
exemplu la celulele epiteliilor unistratificate ntre polul apical i cel latero-bazal).
Sunt ns raportri de grosimi ale glicocalixului ce pot ajunge pn la 200 i chiar
2000nm [1]. O regul pe care o aplicm n nelegerea grosimii glicocalixului este c
acesta are o grosime cu att mai mare, cu ct celulele sunt mai puin implicate n
interaciuni cu alte celule sau cu substrate din matricea extracelular. Aplicnd
aceast regul vom intui c glicocalixul cel mai gros l prezint celulele sanguine. Pe
de alt parte, la celulele epiteliilor monostratificate, polul apical are un glicocalix mai
abundent, fa de polul latero-bazal. La celulele epiteliilor n monostrat definim dou
domenii membranare11: domeniul apical, situat la polul orientat ctre
cavitile pe care aceste epitelii le cptuesc (polul apical al celulei), respectiv
domeniul latero-bazal, situat ctre spaiile dintre membranele a dou celule
nvecinate ale epiteliului i, respectiv, ctre membrana bazal, element al matricei
extracelulare prin care aceste epitelii se ataeaz de structurile tisulare (polul latero-
bazal al celulei). Mai mult, acolo unde mediul din cavitatea cptuit de celulele
epiteliale monostratificate este puternic agresiv (de exemplu n stomac, sau n
intestin), glicocalixul este ngroat de secreii glicoproteice de tip mucinic (vezi, mai
11
Atragem atenia a nu se face confuzie ntre noiunea de domeniu membranar i cea de microdomeniu de
membran.
48
jos, prin ce se caracterizeaz glicoproteinele de tip mucinic, numite mai scurt

mucine, din mucusul diferitelor structuri).
n cele ce urmeaz vom discuta aspectele cu caracter general legate de
organizarea glicocalixului. n privina argumentrii pentru participarea componentei
glucidice la sporirea eterogenitii biochimice a membranei, nu vom proceda la
metoda clasificrii structurilor zaharidice din glicocalix. Ar fi o munc greu de dus la
bun sfrit, ntruct complexitatea i diversitatea structural a lanurilor
oligozaharidice de la nivelul acestui nveli glucidic al celulelor face abordarea
detaliilor dificil, dar i ineficient i fr justificare n raport cu scopul nostru:
cunoaterea organizrii membranei la nivel molecular, pentru a nelege funcionarea
ei ca un sistem integrat. Aceast modificare a modalitii de abordare nu va afecta cu
nimic nelegerea organizrii acestei componente moleculare a membranelor i a
rolului ei, ci doar va simplifica transmiterea cunotinelor n toat diversitatea lor.
n structurarea glicocalixului nu particip toate monozaharidele existente n
natur. Numai apte intr, de regul, n alctuirea lanurilor oligozaharidice ale
glicolipidelor i glicoproteinelor. Acestea sunt, ntr-o ordine lipsit de o anumit
semnificaie: glucoza (Glc), galactoza (Gal), manoza (Man), fucoza (Fuc), N-
acetil-glucozamina (GlcNAc), N-acetil-galactozamina (GalNAc) i acizii
sialici (SA). Spunem acizi sialici (la plural) i nu folosim singularul deoarece ne
referim la o clas de glucide ce deriv din structura de baz a acidului neuraminic
(Fig. 2.16), un glucid cu 9 atomi de carbon n molecul, cel din poziia 1 aflndu-se
ntr-o grupare carboxil (de unde i numele de acid). De la acidul neuraminic deriv
primii reprezentani a dou serii: acidul N-acetil-neuraminic (NANA), cel mai
rspndit i acidul N-glicolil-neuraminic. Dar diversitatea acizilor sialici nu se
oprete aici, deoarece reprezentanii de baz pot fi O-acetilai la hidroxilii de la
carbonii 4, 7, 8 i/sau 9. innd cont c pot fi mono-, di- sau, mai rar, chiar tri-
acetilai ne facem o idee mai exact asupra diversitii entitilor moleculare incluse
sub numele de clas acizi sialici. Speciile tetra-acetilate nu se ntlnesc n glicocalix i
este lesne s raionm de ce: sunt componente deosebit de hidrofobe i nu pot fi
acomodate acolo, ntr-o formaiune ultrastructural prin excelen hidrofil. Aceast
diversitate enorm de tipuri de acizi sialici se constituie, iat, ca o prim
argumentare a eterogenitii structurilor glucidice ale glicocalixului.
n afar de cele apte monozaharide menionate, n proteoglicani ntlnim i
xiloza (monozaharidul prin care se poate lega structura glucidic de o serin din
partea proteic), precum i acizi uronici (acid glucuronic i acid iduronic).
Dac ar fi s ne referim la detalii fizico-chimice care caracterizeaz
monozaharidele menionate, putem afirma c numai Fuc este din seria L, toate
celelalte aparinnd seriei D.
Fig. 2.16. Structurile de baz ale seriilor de acizi sialici. Acidul neuraminic nu a fost identificat ca
atare n componenta glucidic a biomembranelor, ci doar derivaii N-acetil- i N-glicolilai si.
49
Prin enumerarea monozaharidelor ce particip la structurarea lanurilor

oligo- sau poli-zaharidice ce organizeaz glicocalixul accentum ideea de
eterogenitate structural a membranelor celulare i, n general, a biomembranelor.
Dar lucrurile nu se opresc doar la acest nivel. Pentru argumentarea caracterului
eterogen al structurrii membranelor (indus de lipide, apoi amplificat de proteine,
dar i de structurile glucidice) trebuie s subliniem c niruirea glucidelor n
lanurile oligozaharidice nu este aceeai, diferind ntre glicolipide i glicoproteine,
diferind ntre diversele glicolipide, diferind ntre diversele glicoproteine. Mai mult,
legarea monozaharidelor ntre ele se poate face n mai multe moduri, ntruct exist
mai multe grupri hidroxil disponibile. E drept c nu toate din aceste posibiliti sunt
utilizate de celule. Diversitatea de posibiliti teoretice este limitat de tipurile de
glicoziltransferaze (numele generic pentru enzimele care biosintetizeaz structuri
glucidice n celule) pe care o anumit celul le are n reticulul endoplasmic i n
complexul Golgi, organitele unde structurile glucidice din glicolipide, glicoproteine,
sau proteoglicani sunt biosintetizate. Glicoziltransferazele sunt enzime cu
stereospecificitate foarte ridicat, astfel nct legarea, pas cu pas, a glucidelor unul de
altul n structurile oligozaharidice, din glicolipide i glicoproteine, nu este
ntmpltoare.
ntre glicolipide, glicoproteine i proteoglicani exist nsemnate diferene
structurale la nivelul componentei glucidice.
Glicolipidele, care constituie ~10% dintre lipidele membranare, conin un
singur lan oligozaharidic, de regul neramificat. Lanurile glucidice din glicolipide
conin, n general, mai puine monozaharide (rar peste 13-15). Pentru a avea o
imagine corect a organizrii spaiale a lanurilor, vom meniona c acestea nu au
traiect liniar ci sunt contorsionate, tocmai datorit orientrii gruprilor hidroxil
utilizate la lungirea oligomerului glucidic (rezultat al stereospecificitii
glicoziltransferazelor).
Glicoproteinele conin uzual mai multe lanuri oligozaharidice grefate pe
lanul polipeptidic. Inserarea se poate face la azotul amidic al unei asparagine
aflate ntotdeauna ntr-o secven consens (vezi la seciunea despre biogeneza
membranelor, n volumul al II-lea) sau la hidroxilul dintr-o serin ori dintr-o
treonin. n primul caz structurile glucidice se numesc N-glicozidice, n cel de-al
doilea O-glicozidice. Structurile O-glicozidice (legate la serin sau treonin) sunt
abundente n glicoproteinele de tip mucinic. De aceea aceste tipuri de oligozaharide
din proteine sunt denumite i structuri mucinice. Structurile N-glicozidice conin
Man, cele O-glicozidice nu. Lanurile oligozaharidice ale glicoproteinelor sunt
ramificate. Ramificarea se face dup principiul dihotomic (adic din fiecare punct de
ramificare pleac numai dou ramuri). De regul, din cte se cunoate pn n
prezent, exist unul sau dou puncte de ramificare, astfel nct fiecare structur
oligozaharidic din glicoproteine poate fi biantenar sau triantenar. Structurile
oligozaharidice ale glicoproteinelor conin, de regul, un numr semnificativ mai
mare de monozaharide, n comparaie cu cele ale glicolipidelor.
Privind succesiunea monozaharidelor n lanurile oligozaharidice din
glicolipide i glicoproteine, se pot face urmtoarele afirmaii cu caracter de regul: (i)
glucoza, atunci cnd se afl, nu se gsete niciodat n poziie terminal a lanului;
(ii) acizii sialici, atunci cnd se afl (i de regul se afl), se gsesc ntotdeauna n
poziia terminal a lanului. Regula nu este nclcat nici atunci cnd o molecul de
acid sialic se afl subterminal. Aceasta nseamn c lanurile se pot termina cu acizi
sialici legai unul de altul. Un aspect cu semnificaie biologic (vezi mai jos la
seciunea despre rolul glicocalixului) ce trebuie punctat aici este faptul c, de regul,
structurile glucidice din glicolipide i glicoproteine se termin cu elemente
purttoare de sarcin negativ (dac nu cu acid sialic, cum se ntmpl cel mai
adesea, atunci cu un glucid care sufer o sulfatare la unul dintre hidroxili).
50
Dei proteoglicanii sunt mai slab reprezentai la nivelul membranelor celulare,

ceea ce a determinat i evidenierea mai trzie a prezenei lor n glicocalix,
contribuia acestora la structurarea componentei glucidice a membranelor nu poate
fi neglijat, din cel puin dou motive. n primul rnd ncrctura lor glucidic
depete cu mult componenta proteic (90-95% de mas glucide, 5-10% maxim
protein n structura proteoglicanilor, n timp ce n glicoproteine raportul masic
glucide/proteine este subunitar) i, n al doilea rnd, structurile glucidice
(polizaharidice) sunt cele mai lungi dintre toate cele ntlnite la nivelul glicocalixului.
Diferenele de organizare la nivel chimic dintre glicoproteine i proteoglicani
ndreptesc biochimitii s le considere dou tipuri diferite de glicoconjugate, dei
ambele au n structur lan polipeptidic i glucide. Lanurile polizaharidice ale
proteoglicanilor poart denumirea de glicozaminoglicani. Glicozaminoglicanii
sunt structuri polizaharidice neramificate, formate din uniti dizaharidice repetitive
alctuite dintr-un zahar sau aminozahar i un acid uronic (acid glucuronic sau
iduronic). Excepia de la aceast descriere de principiu a compoziiei moleculare o
prezint keratan-sulfaii n care unitile dizaharidice repetitive conin Gal (un zahar)
i GlcNAc (derivat de aminozahar). De subliniat i n acest context, puternica
ncrctur negativ a proteoglicanilor provenit att de la acizii uronici coninui,
ct i de la sulfatrile pe care le pot conine zaharurile sau aminozaharurile prezente
n moleculele glicozaminoglicanilor. Aceast puternic ncrctur negativ se
rsfrnge asupra caracteristicilor fizice ale suprafeei celulare. Toate celulele din
organism poart o sarcin negativ net pe suprafaa lor, iar aceasta se datoreaz, n
principal, structurilor glucidice din glicocalix.
2.4.2. Metodologia de studiu a glicocalixului

Prezena glicocalixului la suprafaa celulelor a fost evideniat la microscopul
electronic prin metode de citochimie ultrastructural att nespecifice (adic
metode care evideniaz structura, fr a aduce indicii referitoare la compoziia ei
biochimic), ct i specifice (metode care permit descrierea, cel puin parial, a
biochimiei structurii).
Ca un prim exemplu de metod nespecific amintim folosirea roului de
ruteniu (Fig. 2. 18, A). Acest compus interacioneaz cu sarcinile negative de la
nivelul glicocalixului impregnndu-i grosimea cu nucleii grei ai ruteniului i
conferind structurii electrono-opacitate. Putem caracteriza prin aceast metod
glicocalixul sub aspectul grosimii sale i al densitii lanurilor glucidice care l
formeaz.
O alt modalitate nespecific de a evidenia glicocalixul este aceea de a
vizualiza densitatea de sarcini negative de la suprafaa celulelor, prin folosirea de
trasori electrono-deni purttori de sarcini pozitive. Acest lucru se poate face cu
proteine cationizate (care la pH fiziologic poart sarcin net pozitiv) adsorbite pe
particule de aur coloidal (Fig. 2. 17, B i C). Caracterul particulat al trasorilor
electrono-opaci cu aur coloidal permite evidenierea mai multor aspecte legate de
organizarea nveliului exterior al membranelor, cum ar fi: abundena de elemente
purttoare de sarcini negative, distribuia lor pe diverse microdomenii de membran,
dar i grosimea ultrastructurii purttoare a sarcinilor negative. n ciuda acestor
detalii, metodele cu rou de ruteniu i cu trasori electrono-deni cationizai rmn
nespecifice, deoarece nu se adreseaz tipurilor de elemente biochimice care
determin marcrile. tim acum c ele sunt componente glucidice purttoare de
funciuni negative (grupri carboxil sau grupri sulfat esterificate pe hidroxili ai
glucidelor).
Ca metod specific pentru studiul glicocalixului prezentm citochimia
ultrastructural cu lectine [2, 3].
51
Fig. 2. 17. Identificarea nespecific a glicocalixului de la suprafaa celulelor pe baza ncrcrii

negative pe care o poart multe din glucidele componente. A. Decorarea suprafeei celulare cu
rou de ruteniu. B, C. Evidenierea ncrcrii negative a suprafeei luminale a celulelor endoteliale din
capilarele creierului (B), respectiv pancreasului endocrin (C) cu ajutorul albuminei serice bovine
cationizate, adsorbit pe aur coloidal de 10nm. Calitatea preparatelor ne permite s evideniem
limpede i aspectul trilaminat al membranelor n microscopia electronic de transmisie standard.
(Imagini puse la dispoziie, cu amabilitate, de Dr. Nicolae Ghinea, Dpartement Recherche
Translationnelle, Institute Curie, Paris.) Nicolae Ghinea i Mircea Leabu, 2014.
Lectinele12 sunt proteine sau glicoproteine ce leag specific structuri

glucidice, au cel puin dou situri de legare identice i nu sunt de origine imun
(adic nu sunt anticorpi mpotriva unor epitopi ce conin glucide). Pentru fiecare
lectin exist un monozaharid determinant al specificitii, dar ambiana molecular
n care acesta se afl este, de asemenea important. Lectinele mai sunt cunoscute i
sub denumirea de aglutinine deoarece, mulumit capacitii lor de a interaciona cu
structurile glucidice, ct i datorit faptului c prezint cel puin dou situri identice
de legare, pot aglutina celulele sanguine. Lectinele au fost iniial identificate n plante
i extrase din acestea (de regul din semine). Ulterior, activiti de tip lectinic au fost
evideniate i n organismele animale, fiind implicate ntr-o multitudine de procese
celulare (vezi cteva exemplificri, mai jos, la seciunea referitoare la rolul
glicocalixului).
n citochima ultrastructural lectinele pot fi folosite dup cuplare cu trasori
electrono-opaci (feritin, peroxidaz de hrean, hempeptizi, aur coloidal),
n tehnici directe sau sub form nativ, n tehnici indirecte (n sandvi), metode n
doi pai. La primul pas, suprafaa celulelor este incubat cu lectina aflat n exces n
soluia folosit, pentru saturarea interaciunilor de afinitate. Excesul de molecule de
lectin este apoi ndeprtat, rmnnd numai cele ataate specific de componente
glucidice ale membranei (prin unul din siturile de legare), care sunt vizualizate, n
pasul al doilea al metodei, prin legarea de glicoproteine corespunztoare, cuplate cu
trasori electrono-opaci. Tehnicile indirecte, n doi pai, pentru citochimia
ultrastructural cu lectine exploateaz existena celor dou situri identice de legare
12 Atragem atenia a nu se confunda termenul lectin cu cel de lecitin (nume generic pentru fosfatidilcoline).
52
ale uneltei de investigare. Glicoproteinele marcate cu trasorul electrono-opac se

fixeaz pe siturile de interaciune ale lectinelor rmase disponibile, dup legarea cu
unul din situri la componentele glicocalixului. Avantajul acestor metode este c
lectinele sunt folosite cu capacitile de legare (afinitatea i specificitatea) nealterate.
Afinitatea i specificitatea acestor unelte de studiu pot fi afectate n cazul folosirii
unor conjugate lectin-trasor electrono-opac, din cauza reaciilor chimice petrecute
n timpul cuplrii sau posibilelor mpiedicri sterice care pot aprea n conjugat.
A fost folosit o mare gam de lectine pentru caracterizarea parial a
glicocalixului diverselor tipuri de celule (Fig. 2. 18). Amintim aici pe cele mai des
utilizate, cu glucidul determinant al specificitii lor.
Concanavalina A (ConA), o lectin din Concanavalia ensiformis, care leag -
Man dintr-un miez trimanozidic al structurilor N-glicozidice sau -Glc aflat n
poziie terminal. Rezult c la nivelul glicocalixului ConA nu se leag de Glc, aceasta
nefiind situat n poziie terminal (Fig. 2.18, A i E).
Lectina I din Ulex europaeus (UEA I),13 care recunoate -Fuc aflat n poziie
terminal a lanului oligozaharidic.
Lectina din Dolichos biflorus (DBA) interacioneaz cu structuri ce conin -
GalNAc legat de o alt GalNAc.
O alt lectin ce leag -GalNAc, ns inserat pe o Gal, este cea din Helix
pomatia (HPA).
Pentru
-Gal sunt folosite lectina din arahide (PNA) i/sau lectina I din
Ricinus communis (RCA I). Specificitile celor dou lectine sunt ns diferite. PNA
(Fig. 2.18, D) se leag exclusiv de Gal aflat n poziie terminal, n timp ce RCA I
(Fig. 2.18, C i G) poate recunoate i Gal aflat n poziie subterminal, dac acidul
sialic terminal este inserat la hidroxilul de la carbonul ase al acesteia. Mai mult,
ambiana n care galactoza terminal se afl n cadrul secvenei glucidice este diferit
pentru ce leag PNA, fa de ce leag RCA I. Aadar specificitile celor dou lectine
sunt nuanate.
Au fost folosite dou lectine i pentru evidenierea citochimic a acizilor
sialici. Acestea sunt lectina din germeni de gru (WGA) i lectina din Limulus
polyphemus (LPA). WGA (Fig. 2.18, B i F) recunoate acidul N-acetil-neuraminic-4-
O-acetilat, dar i
-GlcNAc. LPA se leag de acizi sialici att din categoria celor N-
acetilai, ct i din categoria celor N-glicolilai.
Nuanrile din specificitile acestor lectine sunt bine cunoscute sub aspectul
secvenelor n care trebuie s se afle glucidul determinant al specificitii. Utilizarea
lor aduce astfel informaii nu numai asupra prezenei i abundenei tipurilor de
glucide din compoziia glicocalixului, dar i n ceea ce privete caracterizarea parial
a structurilor oligozaharidice, a secvenelor acestora. Cu ct spectrul lectinelor
folosite este mai larg, cu att imaginea asupra glicocalixului este mai detaliat. n
plus, combinarea acestor metode cu folosirea exo- sau endo-glicozidazelor,
pentru degradarea specific secvenial sau global a lanurilor glucidice,
completeaz fericit caracterizarea citochimic a glicocalixului. Trebuie ns
menionat c informaiile complete asupra structurilor glucidice ale glicocalixului le
aduc tot metodele biochimice, prin care putem segrega ntre glicolipide, glicoproteine
i proteoglicani, putem izola i caracteriza entitile moleculare. Mai mult, subtilele
implicaii ale structurilor glucidice din glicocalix asupra funcionrii membranelor se
vor putea descifra numai prin folosirea metodelor de manipulare genetic asupra
enzimelor care elaboreaz lanurile glucidice ale suprafeelor membranare. Acestea
sunt provocri ale timpurilor (nu prea ndeprtate) ce vor s vin n cercetarea de
biologie celular i molecular.
13n toate abreviaiile care urmeaz pentru lectine, A vine de la termenul aglutinin. Toate abreviaiile sunt cele
folosite internaional.
53
Fig. 2.18. Caracterizarea glicoca-

lixului pentru celule endoteliale
(A-D), respectiv monocite sangu-
ine (E-G), prin citochimie ultra-
structural cu lectine, utiliznd
tehnici indirecte. Trasorii elec-
trono-opaci reprezint aur coloidal
de 5nm, adsorbit cu glicoproteine
corespunztoare specificitii lecti-
nelor utilizate. Observm c struc-
turile N-glicozidice, evideniate cu
ConA sunt abundente i uniform
distribuite pe suprafaa endote-
liului (A) i a monocitelor (E), dar n
numr mai mare pe celulele san-
guine. Acizii sialici identificai de
WGA sunt slab reprezentai pe su-
prafaa luminal a celulelor endote-
liale (B), dar abundeni la suprafaa
monocitelor (F). Structurile glucidi-
ce recunoscute de RCA I sunt
abundente att pe suprafaa endo-
teliului (C), ct i pe cea a mono-
citelor circulante (G). Comparnd
legarea abundent a RCA I pe su-
prafaa luminal a celulelor endote-
liale (C), cu legarea relativ srac a
PNA (D), deducem c la suprafaa
endoteliului avem abunden de
galactoz ce poart la hidroxilul
carbonului ase acid sialic i
srcie de structuri oligozaharidice
terminate n galactoz. Mircea
Leabu, 2014.
54
Aadar, sperana n ceea ce privete rezolvarea problemei caracterizrii

glicocalixului i n general a biologiei glucidelor celulare, sub aspectul funciilor lor, o
reprezint biologia molecular prin capacitatea de a identifica i modela bagajul
enzimatic celular implicat.
Pentru a integra informaiile structurale prezentate mai sus, cu scopul de a
nelege organizarea spaial a glicocalixului, putem rezuma c acest nveli celular
trebuie perceput ca o lizier, ca un lstri din ce n ce mai des pe msur ce
ptrundem de la exteriorul structurii ctre bistratul lipidic. El se caracterizeaz prin
eterogenitate compoziional i de organizare, sporind asimetria membranelor,
deoarece este prezent numai pe versantul extern. Aceast organizare a sugerat i
primele idei asupra funciilor glicocalixului.
2.4.3. Rolul glicocalixului

Prin asemnare cu rolul protector al prii glucidice din glicoproteine
mpotriva aciunii proteazelor, se poate afirma c glicocalixul protejeaz structura
membranei celulare mpotriva agresiunilor fizico-(bio)chimice. Lucrul acesta nu este
departe de realitatea biologic. Modul n care glicocalixul este organizat, confer
membranei rezisten mecanic, controlnd accesul oricror factori de agresiune
ctre straturile profunde ale ultrastructurii, deci ctre bistratul lipidic i ctre
componentele proteice ale acesteia. Rolul acesta este cu att mai important cu ct
prezena factorilor agresivi este mai mare. Aceasta este o motivaie pentru care
celulele sanguine sau polii apicali ai celulelor epiteliale dispuse n monostrat au
glicocalixul abundent. Mai mult, n anumite situaii n care agresiunile pot fi mai
accentuate, membranele sunt protejate de secreii glicoproteice abundente (de
exemplu n mucoasele gastrice i intestinale).
Dar glicocalixul nu este, nici pe departe, important numai pentru acest aspect.
Prin componentele acide din structura lor (acizii sialici, acizii uronici, gruprile
sulfat), lanurile oligo-/poli-zaharidice ale glicocalixului particip la asigurarea
sarcinii negative a suprafeei celulare. ncrctura negativ a suprafeei celulare, o
caracteristic general valabil tuturor celulelor, face ca interaciunile dintre acestea
s nu se poat realiza dect sub control celular, n zone (microdomenii) ale
membranelor nalt specializate n realizarea acestei funcii. n aceste zone, se
formeaz ceea ce numim jonciuni celulare (vezi n volumul al II-lea, la subcapitolul
despre jonciunile celulare), structuri specializate ale membranelor cu organizri i
funcii diverse. Stabilirea jonciunilor celulare are la baz fenomene de recunoatere
celular n care sunt implicate i componente glucidice ale membranelor.
Participarea structurilor glucidice (de regul prin glucidul terminal) n fenomenele
de recunoatere celular reprezint o explicaie pentru care glucoza nu se gsete n
poziie terminal; glucoza este glucidul aflat liber n umorile organismelor i ar
competiiona structurile glucidice ale glicocalixului n interaciunile pe care ar trebui
s le stabileasc n diferitele procese de recunoatere, interfernd cu funciile
acestora i mpiedicnd celula s le controleze eficient.
Aadar, componentele structurale ale glicocalixului (componentele glucidice
ale membranelor) sunt implicate n fenomene de recunoatere celular, cu rol n
organizarea de esuturi i organe, att prin interaciuni ale celulelor ntre ele, ct i
prin aderarea acestora la substrate extracelulare (la componente ale matricei
extracelulare). Se formeaz astfel ultrastructuri cu caracter permanent sau cu
existen de lung durat. n ciuda caracterului lor permanent sau de lung durat,
aceste elemente ultrastructurale de la nivelul membranelor nu trebuie nelese ca
rigide i imuabile. Ele sunt ntr-o permanent dinamic, rspunznd nevoilor celulei
n ceea ce privete amploarea lor, capacitatea de a se forma i desface n diferite zone
ale membranelor celulare sau capacitatea de a implica n momente diferite
componente moleculare diverse, pentru a-i nuana funcia. Caracterul permanent
55
sau de lung durat al existenei lor trebuie neles n sensul c ntotdeauna celulele
prezint asemenea ultrastructuri necesare organizrii esuturilor.
Aspectele menionate mai sus ne pot da o semnificaie biologic a faptului c
toate celulele din organism poart la suprafa o sarcin negativ net. Aceast
realitate face imposibil interaciunea i agregarea nespecific (doar pe baza unor
posibile interaciuni electrostatice) a celulelor. Ca s nelegem i mai pregnant
importana acestei ncrcturi electrice a suprafeei celulelor, s ne gndim ce s-ar
ntmpla dac n snge unele celule ar purta sarcin electric de suprafa pozitiv,
iar altele negativ. Celulele ar agrega nespecific, iar circulaia sanguin ar fi blocat,
aprnd fenomene de embolie; organismul nu ar putea supravieui.
Exist fenomene fiziologice care se desfoar pe baza unor modificri ale
structurilor glucidice ale suprafeei celulare. De exemplu, eritrocitele de mamifer
dup desialilarea structurilor din glicocalix sunt eliminate din circulaie la nivelul
ficatului i splinei [4]. Pierderea de acid sialic din poziia terminal a structurilor
glucidice din glicocalix reprezint semnal de mbtrnire a acestor celule. De
asemenea, plachetele sanguine desialilate i micoreaz timpul de via n circulaie
i determin sporirea trombocitopoiezei [5]. Eliminarea din circulaie a celulelor cu
structurile glucidice desialilate implic receptori cu activitate lectinic ndreptat
mpotriva galactozei ajuns n poziie terminal, receptori aflai n membrana i
expui la suprafaa celulelor cu rol de macrofage din organele curitoare.
Fenomenele de recunoatere celular sunt implicate i n procese biologice n care
interaciunile dintre celulele participante sunt temporare i tranzitorii. Exemplificm
prin (i) ceea ce se ntmpl la extravazarea leucocitelor n zonele de inflamare
tisular i (ii) prin implicarea structurilor glucidice n procesul de fertilizare.
(i) Extravazarea celulelor sanguine (leucocitelor) are loc printr-un
proces al crui efect este trecerea lor printre celulele endoteliale, din fluxul sanguin
n esuturi, fenomen denumit diapedez. Diapedeza se produce sub aciunea unei
varieti de stimuli, care depind de i difereniaz procesele biologice ce duc la
extravazarea diferitelor tipuri de celule sanguine [6-8]. Recrutarea leucocitelor aflate
marginal n fluxul sanguin din vasele de snge aflate la nivelul zonelor inflamatorii,
implic structurile glucidice ale glicocalixului acestora (Fig. 2.19, A). Este vorba de
interaciunea dintre o protein membranar cu activitatea de tip lectin (protein
care apare tranzitoriu la suprafaa celulei endoteliale) i o structur glucidic din
glicocalixul leucocitelor antrenate de fluxul sanguin n capilarele din zonele
inflamatorii. Cum se petrec, n linii mari, fenomenele (Fig. 2.19) descriem n cele ce
urmeaz, ncercnd s punctm elementele eseniale ale fenomenelor.
____________________________________________________________________________________________________________________________
Fig. 2. 19. Fenomenele celulare i moleculare care se petrec n cursul extravazrii limfocitelor
n zonele inflamatorii. Procesul este iniiat de interaciuni care implic glicocalixul limfocitului i
anume a unor structuri oligozaharidice numite antigene Lewis X (A), care sunt purtate att de proteine
(glicoproteine), ct i de lipide (glicolipide). Aceste oligozaharide sunt legate de selectine expuse la
suprafaa celulelor endoteliale activate din zonele inflamatorii (A i B-1). Aceste interaciuni, de joas
afinitate, ncetinesc limfocitele marginale i le determin o rostogolire la suprafaa luminal a
endoteliului. Evenimentul faciliteaz interaciunea unui receptor specific cu factorul de activare
plachetar (PAF), care este produs de celulele endoteliale sub aciunea stimulilor eliberai de procesul
inflamator (B-2). Interaciunea receptorului cu PAF stimuleaz limfocitul, prin aceasta rezultnd ac-
tivarea integrinei DLE2, care se leag de partenerul expus constitutiv la suprafaa celulelor endo-
teliale i anume cu molecule de adeziune celular din familia imunoglobulinelor (ICAM), determinnd
o ataare mai ferm a limfocitului la endoteliu (B-2). Interaciunile integrin-ICAM, de nalt afinitate,
induc etalarea limfocitului la suprafaa endoteliului i migrarea activ (sub control celular), ctre zone
joncionale dintre dou celule endoteliale (B-3), pe unde declaneaz procesul de diapedez (B-4).
Dup extravazare, limfocitul i continu migrarea ctre locul inflamaiei pentru a-i ndeplini rolul (B-
5). Mircea Leabu, 2014.
____________________________________________________________________________________________________________________________
56
57
Procesele inflamatorii duc la eliberarea de stimuli care acioneaz asupra unor

receptori din membranele celulelor endoteliale, conducnd la expunerea pe suprafaa
luminal a acestora (n ariile inflamate) a unor glicoproteine cu activitate lectinic,
denumite P-selectine. P-selectinele, care fac parte din familia selectinelor, nu se
afl permanent la suprafaa endoteliului, n condiii de repaus ele fiind stocate n
membrana unor structuri veziculare din interiorul celulelor endoteliale. Expunerea
tranzitorie a P-selectinelor la suprafaa membranelor apicale ale celulelor endoteliale
se face numai ca rezultat al stimulilor eliberai n procesele inflamatorii, stimuli care
activeaz celulele ce cptuesc peretele vasului sanguin. P-selectinele au parteneri de
aciune expui permanent pe suprafaa limfocitelor i anume structuri glucidice din
glicocalixul acestora, numite antigene sialilate Lewis-X (Fig. 2.19, A).
Interaciunile dintre P-selectine i leucocite, care au loc n zonele inflamatorii, sunt
de joas afinitate, fcndu-se i desfcndu-se, asigurnd dinamica unui proces de
rostogolire a leucocitelor pe suprafaa endoteliului i ncetinindu-le deplasarea.
Simultan cu expunerea P-selectinelor la suprafaa endoteliului, celulele endoteliale,
activate de stimulii eliberai n procesele inflamatorii, expun factorul de activare
plachetar (PAF) 14, un compus de natur fosfolipidic, produs prin fenomene de
metabolizare a fosfatidilcolinelor.
Cele ce urmeaz descriu fenomenele ce se petrec n cazul particular al
extravazrii limfocitelor T (Fig. 2.19, B). Prin legarea de receptorii de pe suprafaa
limfocitelor, PAF activeaz integrina L2, prin mecanisme de semnalizare
dependente de RhoGTP-aze (din familia proteinelor G mici, vezi la semnalizarea
celular). Integrinele sunt compui glicoproteici transmembranari cu rol n
adeziunea celular, au afinitate ridicat i sunt structurate ca heterodimeri
. Au
specificitate pentru proteine ale matricei extracelulare sau pentru proteine
transmembranare expuse pe suprafaa unor celule partenere. n starea inactiv,
domeniul extracelular al integrinelor este pliat (precum lama unui briceag n teac),
iar dup activare ectodomeniul se extinde la lungimi de 20nm (atingnd zonele
superficiale ale glicocalixului i fcnd siturile de interaciune accesibile), putnd
astfel interaciona cu partenerii specifici. Integrina L
2 activat se leag la
molecule de adeziune celular (CAM) din superfamilia imunoglobulinelor
ICAM-1 i ICAM-2, expuse constitutiv la suprafaa celulelor endoteliale.
Interaciunile integrin L
2-ICAM duc la ataarea ferm a limfocitelor la suprafaa
endoteliului i la oprirea lor din micarea n care fluxul sanguin le antreneaz.
Totodat are loc etalarea i migrarea activ a lor pe suprafaa celulelor endoteliale
pn n zonele joncionale dintre acestea. Ajunse aici, limfocitele se insinueaz
printre dou celule endoteliale prsind lumenul vasului i trecnd n esut pentru a-
i ndeplini menirea n zona tisular inflamat.
Fenomene similare se petrec i la extravazarea monocitelor (Fig. 2.20). n
acest caz integrina implicat este M
2. Aceste fenomene de extravazare nu se petrec
numai n cazul afeciunilor inflamatorii, ci i n alte situaii patologice, cum ar fi n
procesul de aterogenez, cnd monocitele circulante ptrund n intima arterelor
unde ncearc s curee peretele vaselor de depunerile lipidice nefiziologice,
devenind celule spumoase [2, 3].
n general, orice celul sanguin imunocompetent trece, prin asemenea
fenomene, din circulaia sngelui n esuturi, pentru a se achita de sarcinile de
aprare a organismului, atunci cnd este cazul. Aa se explic de ce studiul acestor
fenomene a reprezentat o provocare tiinific, att pentru fiziologia, ct i pentru
patologia celular.
14PAF rezult din derivai alchilai ai fosfatidilcolinei (alcool gras n loc de acid gras la hidroxilul 1 al glicerinei),
dup aciunea fosfolipazei A2 i acetilarea hidroxilului 2 astfel eliberat din legtura esteric iniial. Altfel spus,
PAF este 1-alchil-2-acetil-3-fosfocolino-glicerol.
58
Fig. 2.20. Monocit circulant surprins la nivelul unei zone joncionale dintre dou celule
endoteliale, pregtit s iniieze un proces de diapedez. Suprafaa ambelor tipuri celulare este
marcat pentru evidenierea structurilor glucidice N-glicozidice (manozele au legat ConA, care ulterior
a fost marcat cu o glicoprotein adecvat, adsorbit pe aur coloidal de 5nm). Mircea Leabu, 2014.
(ii) Fertilizarea este procesul prin care spermatozoidul fuzioneaz cu

ovocitul [9-11]. Pentru realizarea acestui proces, spermatozoizii trebuie s ajung n
tractul reproductor feminin, unde sufer un fenomen de capacitare, ce dureaz 5-
6 ore la om. Capacitarea const n modificri ale compoziiei lipidice i glicoproteice
a suprafeei capului spermatozoidului, ca i n creterea metabolismului i motilitii
celulare a acestuia. Mecanismele acestor transformri structurale i funcionale nu
sunt cunoscute nc n detaliu. Ele sunt declanate de ptrunderea anionului
bicarbonat prin membrana spermatozoidului i activarea unei adenilatciclaze.
Spermatozoidul astfel capacitat poate traversa stratul celulelor foliculare ce
nconjoar ovocitul, pentru a ajunge la zona pellucida, un nveli glicoproteic al
ovocitului, format din trei glicoproteine denumite ZP1, ZP2 i ZP3. Ajuns aici, el se
leag de structuri O-glicozidice ale ZP3, prin componente ale membranei zonei
acrozomale. Zona pellucida acioneaz ca o barier ce confer specificitate de
specie fertilizrii, astfel nct aceasta nu se poate realiza ntre celule ale unor specii
diferite. Acest lucru a fost evideniat prin faptul c eliminarea zonei pellucida a
ovocitului permite fertilizarea elementelor aparinnd unor specii diferite. Zigoii
hibrizi astfel obinui nu sunt ns viabili. Interaciunea descris mai sus ntre
spermatozoid i ZP3, declaneaz ceea ce se numete reacie acrozomal. Aceasta
const n eliberarea prin exocitoz a coninutului vacuolei acrozomale, ca urmare a
unui complex proces de semnalizare, indus de legarea spermatozoidului la zona
pellucida i care are ca efect creterea concentraiei Ca2+ n citosolul
spermatozoidului. Enzimele eliberate ca urmare a reaciei acrozomale (proteaze i
hialuronidaze) degradeaz local zona pellucida permind spermatozoidului s o
penetreze ca s ajung la membrana ovocitului de care se leag i cu care fuzioneaz.
Fuziunea are la baz activitatea unei proteine de fuziune din membrana
spermatozoidului expus ca urmare a modificrilor induse de reacia acrozomal.
59
Fertilizarea se sfrete cu ceea ce se numete reacia cortical a ovocitului, care

mpiedic polispermia, adic fuziunea mai multor spermatozoizi cu acelai ovocit.
Aceast reacie cortical confer protecia secundar (de lung durat) mpotriva
polispermiei. O blocare primar (de scurt durat) a polispermiei are loc pe baza
depolarizrii rapide a membranei ovocitului n momentul fuziunii cu
spermatozoidul. Reacia cortical const n activarea, n momentul fuziunii ovocit-
spermatozoid, a unei ci de semnalizare prin fosfoinozitide (fosfatidilinozitoli) care
are ca efect creterea concentraiei Ca2+ n citosolul ovocitului i exocitarea
coninutului enzimatic al granulelor corticale ale acestuia. Enzimele eliberate prin
reacia cortical modific biochimic structura zonei pellucida, prin clivarea ZP2 i
degradarea componentei glucidice a ZP3. Aceste modificri asigur rezistena zonei
pellucida la legarea altor spermatozoizi. Aadar dou dintre evenimentele eseniale
ale procesului de fertilizare (reacia acrozomal a spermatozoidului i reacia
cortical a ovocitului) implic participarea direct a unor structuri glucidice.
Complexitatea celor dou fenomene prezentate mai sus ne ndreptete s
considerm c suntem departe de a ntrevedea diversitatea i subtilitatea
fenomenelor celulare dependente de structurile glucidice att de atent i cu mare
efort elaborate de celul. Fr ndoial c, odat cu dezvoltarea unor metode i
tehnici noi de investigaie a rolului structurilor glucidice, cunotinele noastre despre
celul vor avea de ctigat, cu rsfrngere n capacitatea utilizrii fenomenelor
celulare n activitatea medical.
Pe fenomene de recunoatere celular care implic structurile glucidice ale
glicocalixului se bazeaz i compatibilitile de grup sanguin ale sistemului
ABO. Purttoarele antigenelor de grup sanguin sunt structuri oligozaharidice cu
poriuni terminale identice purtate de glicolipide i glicoproteine din membranele
celulelor sanguine. Lanurile glucidice responsabile de compatibilitile de grup
sanguin au urmtoarele structuri:
Grupa O: Fuc 12Gal

14GlcNAc
Grupa A: Fuc 12Gal

14GlcNAc
( 13)
GalNAc
Grupa B: Fuc 12Gal

14GlcNAc
( 13)
Gal
Grupa AB poart n amestec ambele antigene ale grupelor A i B. Bineneles

c apartenena la una dintre grupe este dependent de tipul de glicoziltransferaze
disponibile, ca urmare a exprimrii genelor corespunztoare. Compatibilitile de
grup sanguin sunt determinate de prezena n snge a anticorpilor anti-antigene de
grup. Indivizii din grupa A conin n plasma lor anticorpi anti-B care vor aglutina
celulele din grupele B i AB datorit legrii de structurile glucidice mpotriva crora
sunt ndreptai. Indivizii din grupa B conin anticorpi anti-A, care aglutineaz
celulele din grupele A i AB. Indivizii din grupa AB nu conin nici un fel de anticorpi
i sunt primitori universali, deoarece nu exist riscul de a aglutina celulele, indiferent
crui grup ar aparine. n sfrit, indivizii din grupa O, neavnd nici structurile
glucidice specifice grupei A, nici pe cele specifice grupei B sunt donatori universali,
celulele lor sanguine nefiind aglutinate indiferent de anticorpii anti-antigene prezeni
la primitor. Este de menionat, odat n plus ct de importante pot fi mici variaii ale
structurrii componentelor glicocalixului. Pentru aspectele legate de riscurile
60
medicale ale eventualelor ignorri a grupelor sanguine, responsabilitatea (pentru

dramaticele fenomene care se pot produce) o poart doar cte un monozaharid (Gal,
respectiv GalNAc) legat n aceeai poziie a unei structuri de baz.
n ncheierea prezentrii aspectelor legate de rolul componentei glucidice a
(bio)membranelor, nu putem s nu facem cteva referiri i la receptorii celulari.
Structurile glucidice sunt necesare, dar nu neaprat suficiente funcionrii
receptorilor din membranele celulare. Cea mai mare parte dintre receptorii
suprafeelor celulare, evideniai pn n prezent, sunt glicoproteine. Pentru
unii dintre ei eliminarea componentei glucidice nu afecteaz esenial capacitatea de
legare a liganzilor, pentru alii da. Pentru cei care i pierd afinitatea fa de liganzi,
nu se poate afirma cu certitudine c structura glucidic este implicat n formarea
locului de legare. Mai degrab se speculeaz c ar fi vorba de modificri
conformaionale induse de pierderea componentei glucidice, modificri ce ar avea ca
efect distrugerea geometriei sitului de legare.
Componentele glucidice ale suprafeei celulare reprezint interes deosebit
pentru nelegerea att a fiziologiei, ct i a patologiei celulare. De exemplu, acizii
sialici terminali din glicocalixul limfocitelor T sunt implicai n aproape toate
fenomenele ce in de destinul i funciile celulei. Supravieuirea celular nsoit de
fenomenele de maturare, difereniere, motilitate i moartea celular sunt dependente
de acizii sialici i de interaciunile acestora cu proteine cu activiti lectinice,
ndreptate ctre aceste glucide terminale [12]. Modificri n glicozilarea suprafeei
celulare nsoesc diferite patologii, cum ar fi n cazul celulelor canceroase, cu
implicaii asupra progresiei tumorale i metastazrii [13].
Implicarea glicocalixului n fiziologia i patologia celular a fcut ca acesta s
fie considerat int terapeutic n tratamentele multor boli [1, 14-17], ca i n
modularea unor fenomene celulare dintre cele mai diverse [18, 19].
n concluzie, se poate spune despre componenta glucidic a membranelor c
nuaneaz, uneori ntr-o manier de mare subtilitate, funcionarea acestei
ultrastructuri care separ, dar i unete celula cu mediul.
1. Becker BF, Chappell D, Bruegger D, Annecke T, Jacob M. (2010) Therapeutic strategies
targeting the endothelial glycocalyx: acute deficits, but great potential. Cardiovasc Res. 87: 300-310.
2. Leabu M, Ghinea N, Muresan V, Colceag J, Hasu M, Simionescu N. (1987) Cell surface
chemistry of arterial endothelium and blood monocytes in the normolipidemic rabbit. J Submicrosc
Cytol. 19: 193-208.
3. Ghinea N, Leabu M, Hasu M, Muresan V, Colceag J, Simionescu N. (1987) Prelesional events
in atherogenesis. Changes induced by hypercholesterolemia in the cell surface chemistry of arterial
endothelium and blood monocytes, in rabbit. J Submicrosc Cytol. 19: 209-227.
4. Aminoff D, Bell WC, VorderBruegge WG. (1978) Cell surface carbohydrate recognition and the
viability of erythrocytes in circulation. Prog Clin Biol Res. 23: 569-581.
5. Karpatkin S, Shulman S. (1980) Asialo platelets enhance thrombopoiesis. Trans Assoc Am
Physicians. 93: 244-250.
6. Hynes RO, Lander AD. (1992) Contact and adhesive specificities in the associations, migrations, and
targeting of cells and axons. Cell. 68: 303-322.
7. Ebnet K, Vestweber D. (1999) Molecular mechanisms that control leukocyte extravasation: the
selectins and the chemokines. Histochem Cell Biol. 112: 1-23.
8. van Buul JD, Hordijk PL. (2004) Signaling in leukocyte transendothelial migration. Arterioscler
Thromb Vasc Biol. 24: 824-833.
9. Wassarman PM, Jovine L, Litscher ES. (2001) A profile of fertilization in mammals. Nat Cell Biol.
3: E59-E64.
10. Wassarman PM, Jovine L, Qi H, Williams Z, Darie C, Litscher ES. (2005) Recent aspects of
mammalian fertilization research. Mol Cell Endocrinol. 234: 95-103.
11. Wassarman PM, Litscher ES. (2008) Mammalian fertilization: the egg's multifunctional zona
pellucida. Int J Dev Biol. 52: 665-676.
61
12. Bi S, Baum LG. (2009) Sialic acids in T cell development and function. Biochim Biophys Acta. 1790:
1599-1610.
13. Dafik L, d'Alarcao M, Kumar K. (2010) Modulation of cellular adhesion by glycoengineering. J Med
Chem. 53: 4277-4284.
14. Drake-Holland AJ, Noble MI. (2009) The important new drug target in cardiovascular medicine
the vascular glycocalyx. Cardiovasc Hematol Disord Drug Targets. 9: 118-123.
15. Du J, Yarema KJ. (2010) Carbohydrate engineered cells for regenerative medicine. Adv Drug Deliv
Rev. 62: 671682.
16. Schwardt O, Kelm S, Ernst B. (2013) SIGLEC-4 (MAG) Antagonists: From the Natural
Carbohydrate Epitope to Glycomimetics. Top Curr Chem. Nov 26. [Epub ahead of print] DOI:
10.1007/128_2013_498
17. Suzuki O, Abe M. (2013) Recent progress and new perspectives in lymphoma glycobiology.
Fukushima J Med Sci. 59(1): 1-14.
18. Ryan JM, Rice GE, Mitchell MD. (2013) The role of gangliosides in brain development and the
potential benefits of perinatal supplementation. Nutr Res. 33(11): 877-887. DOI:
10.1016/j.nutres.2013.07.021.
19. Pshezhetsky AV, Ashmarina LI. (2013) Desialylation of surface receptors as a new dimension in cell
signaling. Biochemistry (Mosc). 78(7): 736-745. DOI: 10.1134/S0006297913070067.
62
2.5. Consideraii finale asupra organizrii mo-

leculare a membranelor celulare
2.5.1. Modelul n mozaic fluid este nc actual i adaptabil
Organizarea membranelor celulare (ca i a endomembranelor) are la baz un
bistrat lipidic eterogen, asimetric, cu proprieti fluide manifestate bidimensional.
Acestuia i se adaug proteine care i confer caracterul unui mozaic (proteine plutind
pe sau cufundate n marea lipidic ce formeaz bistratul). O asemenea organizare a
fost denumit n mozaic fluid, dup modelul introdus in 1972, de Singer i Nicolson.
Modelul mozaicului fluid pentru organizarea biomembranelor a fost
completat prin evidenierea i descrierea unor structuri adiacente: citoscheletul
asociat membranei (ultrastructur aflat pe faa intern a membranelor) i
glicocalixul (ultrastructur expus pe faa extern a membranelor, alctuit din
lanuri oligo-/poli-zaharidice din compoziia glicolipidelor, glicoproteinelor i
proteoglicanilor din membran). Aceste elemente adiacente susin asimetria
organizrii membranelor. Aadar, att proteinele ce intr n organizarea lor, ct i
componenta glucidic a membranelor nu diminueaz, ci accentueaz i nuaneaz
caracterul eterogen, asimetric i de fluid bidimensional al structurrii membranelor
celulare.
Tot n completarea modelului n mozaic fluid sub aspect ultrastructural, dar i
funcional au fost definite noiunile de domenii i/sau microdomenii de membran.
Acestea sunt regiuni mai extinse (domeniile) sau mai reduse (microdomeniile) din
suprafaa membranelor a cror compoziie este diferit de a altor zone. Compoziiile
diferite ale domeniilor de membran (apical versus latero-bazal) sunt riguros
controlate i pstrate de celul. Compoziia i existena microdomeniilor (caveole,
plute lipidice, structuri cu nveli de clatrin i altele pe care le vei ntlni pe msur
ce vom avansa n cunoaterea celulei) au o dinamic mai accentuat, rspunznd
nevoilor n continu schimbare ale celulelor, nevoi impuse de considerente interne
ale celulei sau de stimuli externi la care celulele trebuie s rspund.
De fapt, tot ce a nsemnat dezvoltarea cunoaterii legate de organizarea i
funcionarea biomembranelor, dup elaborarea modelului n mozaic fluid, nu a
contrazis, ci a dovedit valabilitatea celor stipulate de Singer i Nicolson, n 1972 [1-3].
Orice nou informaie, care a fost adugat cunotinelor despre modul n care
biomembranele sunt organizate i despre cum se comport biocomponentele la
nivelul acestora pe considerente fizice, chimice i biologice, a contribuit la rafinarea
modelului [4], dei uneori el este superficial prezentat n manuale [5]. Este ns
datoria celor care iniiaz n cunoaterea biomembranelor pe noii venii s prezinte
modelul de aa manier nct orice confuzie s fie eliminat, iar mintea s rmn
deschis noutilor. Modelul mozaicului fluid asupra organizrii biomembranelor are
o capacitate de adaptare nelimitat.
Componentele membranelor fie ele lipide, proteine, componente glucidice au
att roluri structurale, ct i metabolice. Aceast dualitate a rolurilor este valabil, pe
de o parte, pentru clasele de componente biochimice ale membranelor i, pe de alt
parte, pentru entiti moleculare (aceeai molecul poate ndeplini att funcii
structurale ct i metabolice).
n ciuda acestei organizri moleculare complexe (puternic eterogen i
asimetric), sau mai degrab tocmai datorit ei, biomembranele acioneaz/trebuie
s acioneze ca sisteme integrative. Detalii asupra funcionrii biomembranelor ca
atare se vor prezenta, n primul rnd, la seciunile legate de transportul membranar
i de semnalizarea celular. Aspecte legate de comportamentul biomembranelor ca
sisteme integrative sunt valabile i n legtur cu alte biomembrane, cu precdere
cele care delimiteaz o serie de organite celulare, numite endomembrane.
63
n sfrit, nu putem termina prezentarea organizrii moleculare a

membranelor fr a puncta cteva lucruri legate de semnificaia biologic a
caracteristicilor fizico-chimice ale organizrii biomembranelor (eterogenitate,
asimetrie i fluiditate manifestat bidimensional) cu rsfrngere asupra
comportamentului lor.
2.5.2. Semnificaia biologic a modului de organizare

molecular a membranelor
n toate informaiile utilizate pn acum pentru nelegerea modului de
organizare a membranelor am inut permanent seama de modelul mozaicului fluid
introdus de Singer i Nicolson, n 1972. Am parcurs o multitudine de aspecte legate
de: a) diversitatea de componente moleculare de la nivelul membranelor (ceea ce
induce eterogenitate compoziional), b) distribuia inegal i/sau aranjamentul
difereniat al componentelor ntre cele dou fee ale membranei (ce confer asimetrie
ultrastructurii) i c) dinamicitatea componentelor la nivelul membranelor care, ns,
implic numai micri pe dou direcii (definit ca fluiditate bidimensional). Toate
aceste detalii nu le-am discutat nici de dragul (bio)chimiei, nici de dragul (bio)fizicii
la care am fcut apel, ci pentru c aceste caracteristici fizico-chimice de organizare i
de comportament al componentelor eterogenitate, asimetrie, fluiditate manifestat
bidimensional au semnificaii biologice, adic se rsfrng i sunt exploatate n mod
fericit n ceea ce membrana trebuie s fac n interesul celulei, adic s o separe de,
dar s o i uneasc cu mediul. S lum pe rnd aceste caracteristici i s ncercm s
extragem elementele eseniale referitoare la semnificaia biologic a realitii lor,
altfel spus s nelegem de ce este important c (bio)membranele sunt organizate aa
cum sunt, sau, dac vrei, ce s-ar ntmpla dac nu ar fi aa, deoarece, din punct de
vedere logic, n acest fel trebuie s operm pentru extragerea semnificaiei a ceva.
De ce este important faptul c n membrana celular avem o diversitate uria
(putem spune fr temere) de componente biochimice? Altfel spus, la ce folosete
celulei aceast compoziie eterogen? S nu ne sfiim aici s facem o comparaie cu ce
putem percepe referitor la capacitatea unui grup de oameni de a realiza lucruri
complexe. Pentru aceasta este necesar ca n acel grup de oameni s se afle persoane
cu capaciti, nclinaii, talente, abiliti diferite, corespunztoare nevoilor impuse de
complexitatea problemelor ce trebuie rezolvate. Lucrurile nu stau altfel nici n
contextul membranei i al complexitii de fenomene prin care aceasta i realizeaz
menirea: separarea interiorului celular de mediu, dar i conectarea celulei cu ceea ce
se afl n afara ei cu scopul determinrii unui comportament adecvat, pentru
asigurarea supravieuirii sale i a angrenajului (citete esutului) din care face
parte. Aadar: multitudinea de biocomponente asigur multitudinea de posibiliti
de aciune, adic diversitatea de funcii. Exist o corelaionare direct ntre
complexitatea de funcii pe care membrana unei celule trebuie s o asigure i
diversitatea de biocomponente de la nivelul acesteia. Cu alte cuvinte, ca s operm cu
termeni nvai la matematic, dependena dintre complexitatea de funcii a
membranei unei celule i diversitatea componentelor din organizarea acesteia (adic
gradul de eterogenitate biochimic a acelei membrane) este una de proporionalitate
direct. Aceast regul odat stabilit i neleas n semnificaia ei biologic ne
determin s putem deduce c organizarea la nivelul biocomponentelor
membranelor a dou celule diferite este diferit, chiar dac se respect principiul
organizrii n mozaic fluid, necesitatea prezenei lipidelor amfifile, aranjate sub
form de bistrat, la care se adaug proteine i o component glucidic orientat spre
exterior. Dincolo de respectarea acestor aspecte generale, tipurile de lipide sau
proporiile dintre acestea difer, exist bagaje de entiti moleculare proteice diferite
(chiar dac unele dintre proteine se pot gsi ntr-o mare diversitate de tipuri de
64
membrane), iar structurile glucidice difer cel puin n anumite limite care fac
membranele s difere sub aspectul biocomponentelor.
Cum se rsfrnge aranjarea asimetric a biocomponentelor membranei asupra
intereselor celulei? Adic, ce putem spune despre semnificaia biologic a asimetriei
membranelor? Faptul c cele dou fee ale membranelor expun elemente biochimice
diferite, adic asigur proprieti fizico-chimice diferite celor dou suprafee (cea
expus la exterior, respectiv cea expus ctre interiorul celulei) permite desfurarea
de fenomene diferite de o parte sau de cealalt a acestei ultrastructuri. Mai mult,
celula are mecanisme prin care poate permite acestor fenomene diferite s se
desfoare independent sau s se coreleze, n funcie de nevoile ei de supravieuire i
funcionare ireproabil. Altfel spus, celula poate rmne mai mult sau mai puin
indiferent la ce se petrece n exteriorul ei, dar poate s i fie deosebit de sensibil la
ce se afl sau se petrece n afara ei pe baza informaiilor pe care le primete, le
analizeaz i le ia n consideraie.
Pentru nelegerea semnificaiei biologice a fluiditii bidimensionale a
membranei revin la exemplul utilizat la nceputul acestei seciuni (cel legat de
abilitatea unui grup de oameni de a rezolva probleme complexe), dar vom extinde
exemplul la ce se ntmpl ntr-o instituie. De fapt ncercm aici s rspundem la
ntrebarea: de ce este important c n membran biocomponentele sunt ntr-o
permanent micare? S nu uitm c aceast micare permanent a componentelor
individuale prezint grade de libertate mai mari sau mai mici, n funcie de condiiile
concrete n care celula se poate afla. Mai nti s punctm de ce este important c
micrile au loc n doar dou dimensiuni, adic n numai dou direcii,
corespunztoare micrii planare (adic bidimensionale). Aceast micare
bidimensional asigur meninerea asimetriei din organizarea membranei, iar
semnificaia biologic a acestui aranjament asimetric am punctat-o deja n paragraful
precedent. Dincolo de faptul c aceast micare este bidimensional, ea este
important pentru celul chiar prin faptul c exist. Ne ntoarcem la exemplul
invocat, chiar dac poate prea banal; l considerm sugestiv. Pentru ca oamenii unui
grup s realizeze activiti practice ei trebuie s fie adui n acelai loc. Pentru asta
trebuie s se deplaseze de acas la instituia unde lucreaz i s i fac treaba ct
dureaz programul de lucru. Asta trebuie s se ntmple i cu biocomponentele
(molecule, macromolecule) dintr-o membran. Ele trebuie s se poat mica pentru a
se ntlni ca s i fac, mpreun, treaba. Spunem c ele organizeaz microdomenii
(echivalentul unor secii sau departamente ntr-o instituie). Numai c pentru buna
funcionare a instituiei seciile sau departamentele nu sunt total independente, ele
trebuie s interacioneze, deci trebuie s existe persoane care s se mite dintr-un loc
n altul, iar uneori este nevoie s se creeze grupuri interdepartamentale pentru
rezolvarea unor probleme. Asta se ntmpl i n membran: microdomeniile sunt
dinamice; elementele din unele se pot mica i intra n componena altor
microdomenii pentru a se implica n altceva n interesul bunei funcionri a
ntregului (membrana, respectiv, mai departe, celula). Aadar, semnificaia biologic
a faptului c, n membran, componentele biochimice sunt ntr-o permanent
micare este aceea c pemite acestora s se asocieze ntr-o diversitate de modaliti,
pentru a ndeplini o multitudine de activiti. Mai mult, n membrane aceeai
component poate induce efecte multiple prin rolul su care se poate manifesta
difereniat, n funcie de partenerii de interaciune cu care se ntlnete temporar, pe
perioade mai lungi sau mai scurte de timp.
Cred c acum putem spune, n sfrit, c avem suficiente informaii care s ne
permit s credem c am neles principial membrana celular (cum este organizat
i de ce este astfel organizat) i ne putem detaa ca s o privim cu nelepciune i s
putem aplica aceast nelegere de principiu la orice situaie particular am ntlni.
Aceast poziie va fi util n abordarea aspectelor care urmeaz, legate de
65
aprofundarea cunotinelor despre membrane, adic aspectele ce ne vor ajuta s

nelegem mai bine cum funcioneaz membranele ca sisteme integrative. De fapt, se
vor aborda aspectele legate de mecanismele prin care membrana conecteaz celula la
mediu, nefiind o barier absolut. Fenomenele prin care membrana celular
realizeaz aceast conectare a celulei cu mediul sunt de dou tipuri: fenomene de
transport membranar i fenomene de semnalizare.
1. Morange M. (2013) What history tells us XXX. The emergence of the fluid mosaic model of
membranes. J Biosci. 38(1): 3-7.
2. Nicolson GL. (2013) The Fluid-Mosaic Model of Membrane Structure: Still relevant to understanding
the structure, function and dynamics of biological membranes after more than 40 years. Biochim
Biophys Acta. Nov 1. pii: S0005-2736(13)00393-3. DOI: 10.1016/j.bbamem.2013.10.019. [Epub ahead
of print]
3. Bagatolli LA, Mouritsen OG. (2013) Is the fluid mosaic (and the accompanying raft hypothesis) a
suitable model to describe fundamental features of biological membranes? What may be missing? Front
Plant Sci. Nov 13; 4: 457.
4. Nicolson GL. (2013) Update of the 1972 Singer-Nicolson Fluid-Mosaic Model of Membrane Structure.
Discoveries. 1(1): e3. DOI: 10.15190/d.2013.3
5. Leabu M. (2013) The still valid fluid mosaic model for molecular organization of biomembranes.
Accumulating data confirm it. Discoveries. 1(1): e7. DOI: 10.15190/d.2013.7
66

Organizarea Moleculară A Membranelor Text

Încărcat de

Informații document

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Organizarea Moleculară A Membranelor Text

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Mircea Leabu i Marina T.

Nechifor Biomembranele, unitate n diversitate

2.1. Consideraii generale asupra membranelor

2.1.2. Repere istorice n cunoaterea organizrii membranei

cunotinelor despre natura (bio)chimic a membranei celulare a fost Charles

de baz a unei membrane este un bistrat lipidic cu proprieti fluide manifestate

Fig. 2.1. Biomembranele (membranele celulare i endomembranele) se evideniaz n imaginile

Membranele, organizate n mozaic fluid (Fig. 2.3), se caracterizeaz prin

n ceea ce urmeaz ne propunem s abordm organizarea molecular i

2.1.3. Compoziia chimic global a membranei celulare

2.2. Lipidele membranare

2.2.2. Definiia lipidelor membranare

Lipidele membranare reprezint o categorie larg de substane organice

2.2.3. Descrierea lipidelor membranare i caracterizarea

2.2.3.2. Clasificarea lipidelor membranare

Fig. 2.4. Structura schematic, de principiu, a unui fosfoglicerid. n

Echivalentul fosfatidilcolinelor pentru sfingofosfolipidele membranare sunt

Fig. 2.5. Structura unei fosfatidilcoline (1-stearil-2-oleil-fosfatidil-

Dup prime argumente referitoare la eterogenitatea lipidelor membranare,

nesaturai, cu catena hidrocarbonat neramificat. n ceea ce privete poziionarea

Aceast capacitate de micare a lipidelor n cadrul membranei determin

Dup cum vom vedea, fluiditatea membranelor este modulat i nuanat i

2.2.4. Rolul lipidelor membranare

Pentru exemplificarea efectelor celulare, datorate aciunii fosfolipazelor,

Fig. 2.8. Locurile specifice de aciune pentru diferitele tipuri

Fig. 2.9. Cascada fosfoinozitide-

Dei rolul colesterolului n procesele metabolice de la nivelul membranei a

2.3. Proteinele membranare

2.3.2. Clasificri ale proteinelor membranare

Fig. 2.10. Diversitatea de proteine membranare i exemplificarea clasificrilor acestora. 1

Pe de o parte, pentru unele ectoproteine a fost evideniat o cuplare prin

Proteinele integrale (Fig. 2.10, exemplele 5-7) reprezint, de regul, ~75%

n funcie de poziia fa de bistrat a captului amino al lanului polipeptidic,

2.3.3. Exemple de proteine membranare

funcia transportorului prin furnizarea anionului bicarbonat [13]. Au fost identificate

10 Atragem atenia c noiunea de citoschelet se utilizeaz i pentru organitul nedelimitat de endomembrane

Fig. 2. 12. Organizarea citoscheletului membranar, ca o reea dinamic de endoproteine cu

Revenind la metodologia electroforetic de studiere a proteinelor

Fig. 2.13. Investigare prin western blot a

Investigrile funcionale i de distribuire/redistribuire ale proteinelor

Fig. 2.14. Proteine membranare identificate prin imunofluo-

Fig. 1.15. Evidenieri prin microscopie de fluorescen a organizrii i reorganizrii unor

Din cele discutate pn aici rezult c proteinele contribuie la caracteristicile

Totui, n ciuda complexitii interaciunilor pe care proteinele membranare le

2.3.4. Mobilitatea proteinelor membranare

Alte dovezi au venit din observaiile asupra fenomenelor de patching /

2.3.5. Rolul proteinelor membranare

CASETA 2.2. Integrinele i rolul lor. Integrinele sunt glicoproteine transmembranare,

n general, att pentru caderine, ct i pentru integrine se poate afirma c ele

integrale. Domeniile transmembranare au capacitatea de a suferi rearanjri

2.4. Componenta glucidic a membranei

2.4.1. Definiia glicocalixului i organizarea lui molecular

jos, prin ce se caracterizeaz glicoproteinele de tip mucinic, numite mai scurt

Prin enumerarea monozaharidelor ce particip la structurarea lanurilor

Dei proteoglicanii sunt mai slab reprezentai la nivelul membranelor celulare,

2.4.2. Metodologia de studiu a glicocalixului

Fig. 2. 17. Identificarea nespecific a glicocalixului de la suprafaa celulelor pe baza ncrcrii

Lectinele12 sunt proteine sau glicoproteine ce leag specific structuri

ale uneltei de investigare. Glicoproteinele marcate cu trasorul electrono-opac se

Fig. 2.18. Caracterizarea glicoca-

Aadar, sperana n ceea ce privete rezolvarea problemei caracterizrii

2.4.3. Rolul glicocalixului

Procesele inflamatorii duc la eliberarea de stimuli care acioneaz asupra unor

2.1.2. Repere istorice n cunoaterea organizrii membranei

2.2.3. Descrierea lipidelor membranare i caracterizarea

Fig. 2.10. Diversitatea de proteine membranare i exemplificarea clasificrilor acestora. 1

n funcie de poziia fa de bistrat a captului amino al lanului polipeptidic,

10 Atragem atenia c noiunea de citoschelet se utilizeaz i pentru organitul nedelimitat de endomembrane

Fig. 2. 12. Organizarea citoscheletului membranar, ca o reea dinamic de endoproteine cu

Investigrile funcionale i de distribuire/redistribuire ale proteinelor

Fig. 1.15. Evidenieri prin microscopie de fluorescen a organizrii i reorganizrii unor

CASETA 2.2. Integrinele i rolul lor. Integrinele sunt glicoproteine transmembranare,

n general, att pentru caderine, ct i pentru integrine se poate afirma c ele

Fig. 2. 17. Identificarea nespecific a glicocalixului de la suprafaa celulelor pe baza ncrcrii

Aadar, sperana n ceea ce privete rezolvarea problemei caracterizrii

2.5. Consideraii finale asupra organizrii mo-