Examinarea patogenității in vivo

1.Infecția experimentală (Bioproba) constă în inocularea unei culturi microbiene (în

mediu lichid sau suspensie din cultura de pe suprafața mediului solid) sau a unei suspensii
obținute dintr-un produs patologic la animale dintr-o specie sensibilă față de tulpina de testat.
Ȋn efectuarea bioprobei trebuie să se aibă în vedere anumiți factori, care condiționează
reuşita acestui experiment:
-receptivitatea specie animale față de tulpina de testat;
-vârsta, sexul animalului de experiență;
-calea de inoculare;
-cantitatea de inocul (doza de germeni);
Etapele infecției experimentale:
-selectarea speciei animale pe care se execută bioproba se realizează ținând cont de
tulpina microbiană de testat (ex. în cazul tulpinilor de bacilul rujetului se preferă porumbelul sau
şoarecele, pentru Listeria se recomandă iepurele sau cobaiul, pentru Bacillus anthracis,
şoarecele);
-marcarea animalelor se realizează în funcție de specia (prin vopsire, mărci metalice,
etc.);
-contenția animalelor se execută de către operatorul însuşi (în cazul şoarecilor), de
personalul ajutător sau cu un alt mijloc de contenție;
-inocularea animalelor se poate realiza pe diferite căi: enteral (per os, per rect),
parenteral (intradermic, subcutan, intramuscular, intravenos, intraperitoneal, intracerebral,
intraocular, intranazal, intraarticular, în sacul conjunctival, etc); (conform Tabelului 1.)
-observarea animalelor inoculate: se execută zilnic sau de mai multe ori pe zi prin
tehnicile semiologice clasice (inspecție, palpație, termometrie, uneori se apelează şi la metodele
paraclinice, examen hematologic, etc.). Se înregistrează curba termică şi se notează simptomele
manifestate de animal: tulburări digestive, respiratorii, nervoase (hiperexcitabilitate
neuromusculară în infecția experimentală cu Clostridium tetani). Durata infecției experimentale
variază în funcție de mai mulți factori, cum ar fi: specia microbiană, specia animală, calea de
inoculare.
Uneori, la locul de inoculare se constată leziuni caracteristice pentru o anumită infecție
experimentală:
-tumori emfizematoase în cazul inoculării agenților gangrenei gazoase (Clostridium
perfringens, Clostridium septicum);
-edemul cărbunos în infecția experimental cu Bacillus anthracis;
-cheratoconjunctivită purulentă la iepure sau cobai (Listeria monocytogenes);
-liza țesuturilor la locul de inoculare (Clostridium histolyticum).
Ȋn etapa de examinare clinică se recoltează diferite probe de la animale pentru
efectuarea analizelor bacteriologice. Ȋn perioada de maxim a curbei termice se execută
hemoculturi (însămânțarea sângelui pe medii lichide sterile).
După moartea animalelor se efectuează examenul necropsic. Se notează leziunile
constatate şi se fac însămânțări pentru examene bacteriologice, din organe; în cazul infecțiilor
septicemice, însămânțările se execută din cord şi os lung.

1
 2. Determinarea DLM, se respectă următoarele etape:
- se obține o cultură de 24 de ore în bulion, din tulpina de testat sau suspensie din
cultura de 18 ore de pe agar;
-se execută diluții zecimale din cultura de testat;
-se lotizează animalele de experiență (cel puțin 2 animale în fiecare lot care se vor
inocula cu aceeaşi diluție);
-animalele din fiecare lot se marchează diferit față de celelalte loturi şi se țin sub
observație. Se înregistrează simptomele exprimate, data morții, leziunile observate şi rezultatele
examenului bacteriologic;
-DLM (doza letală minimă) se exprimă prin diluția maximă care a determinat moartea
animalelor inoculate în proporție de 100% sau prin numărul de germeni corespunzător diluției
respective.

Tabel nr.1

Receptivitatea animalelor de laborator față de unele bacteria patogene

Specia bacteriană Specia animală Calea de inoculare Durata medie a

infecției
Agenții gangrenei cobai i.m. 24h-4zile
gazoase
Bacillus anthracis şoarece, cobai s.c. 1-7zile
Escherichia coli Şoarece i.p. 12-24h
Listeria iepure Sacul conjunctival 2-3zile (vindecare)
monocytogenes
Mycobacterium cobai s.c. 30-80zile
tuberculosis
Mycobacterium bovis Cobai, iepure s.c.,i.v. 30-80zile
Mycobacterium Găină, porumbel i.v. 30-60,30-80 zile
avium
Pasteurella multocida şoarece s.c. 24-72h
Salmonella Şoarece i.p., s.c., per os 24-48h/3-21zile
Staphylococcus iepure i.v. 1-3zile
aureus
Streptococcus equi şoarece i.p. 12-48h
*Legendă: s.c.-subcutanat; i.m.-intramuscular; i.v.-intravenos;
i.p.-intraperitoneal;