Determinarea DL50 (Dosis Letalis 50%)-Recapitulare

Se respectă următoarele etape:

-se lotizează animalele, fiecare lot trebuie să conțină minim 5 animale de
aceeaşi vârstă şi greutate;
-se execută diluții zecimale din cultura de testat, DL50 trebuie să fie
încadrată de minim două diluții superioare şi inferioare;
-se inoculează fiecare lot cu câte o diluție;
-se marchează animalele;
-rezultatele se înregistrează într-un tabel, determinarea DL50 efectuându-se
prin metoda totalurilor cumulative;
Se propune următorul exemplu: pentru stabilirea DL50 a unei tulpini de
E.coli se folosesc 63 de şoareci grupați în 9 loturi a câte 7 subiecți. Fiecare lot se
inoculează pe cale intraperitoneală cu câte o diluție. Rezultatele se consemnează
într-un tabel, înregistrându-se numărul şoarecilor morți şi supraviețuitori pentru
fiecare diluție. Se calculează totalurile cumulative de morți, prin adunarea
animalelor moarte la fiecare diluție, pornind de la diluția maximă spre prima diluție
şi a tuturor supraviețuitorilor pornind de la diluția minimă către cea maximă.
Astfel, se obțin pentru fiecare diluție, valorile cumulative pentru mortalitate şi
pentru supraviețuire. Ȋn continuare, pentru fiecare diluție se calculează procentul
mortalității care se raportează la numărului de şoareci morți plus supraviețuitori de
la totalurile cumulative.
Tabel 1

Tabel pentru înregistrarea datelor în vederea calculării DL 50

Diluție I M S Rata M S Rata Morți%

morți mortalit.
10-1 7 7 0 7/7 36 0 36/36 100
10-2 7 7 0 7/7 29 0 29/29 100
10-3 7 7 0 7/7 22 0 22/22 100
10-4 7 5 2 5/7 15 2 15/17 88
10-5 7 4 3 4/7 10 5 10/15 67
10-6 7 3 4 3/7 6 9 6/15 40
10-7 7 2 5 2/7 3 14 3/17 18
10-8 7 1 6 1/7 1 20 1/21 5
10-9 7 0 7 0 0 27 0 0
 S = I-M; Rata morti = M/I; Rata mortalit.=M/M+S
Din datele prezentate în tabel, rezultă că diluția care ar determina moartea
unui număr exact de 50 din animalele inoculate este situată între diluția 10 -5şi 10-6.
Calcularea factorului de corecție se realizează după formula:

Procentul la diluția imediat - 50

superioară celei 50%

Procentul la diluția imediat - Procentul la diluția imediat

superioară celei 50% inferioară celei 50%

67-50 = 17= 0,62

67-40 27

Coeficientul de corecție obținut (0,62) se adaugă logaritmului diluției

imediat superioare ( diluția imediat superioară este 10-5.....deci vom avea: 5 + 0,62
= 5,62). Ȋn concluzie, DL50 va corespunde diluției 10-5,62.

Determinarea coeficientului sau indicelui fenolic

Sterilizarea prin agenţi chimici constă în folosirea unor substanţe chimice,

denumite antiseptice şi dezinfectante care acţionează diferit asupra
microorganismelor, în funcţie de concentraţia în care se găsesc;
- în doze mici, împiedică înmulţirea şi dezvoltarea microorganismelor, fără
a le distruge (efectul se numeşte microbiostatic dacă acţionează asupra întregii
flore, bacteriostatic dacă acţionează numai asupra bacteriilor, fungistatic dacă
acţionează numai asupra drojdiilor şi mucegaiurilor);
- în doze mari omoară celulele (efectul se numeşte microbicid dacă
acţionează asupra întregii flore, bactericid dacă acţionează numai asupra
bacteriilor, fungicid dacă acţionează numai asupra drojdiilor şi mucegaiurilor,
virulicid dacă acţionează numai asupra virusurilor).
Substanţele chimice care prezintă acţiune antimicrobiană în afara
organismului se numesc antiseptice (dezinfectante), iar atunci când prezintă
acţiune selectivă asupra germenilor patogeni în interiorul organismului, se numesc
chimioterapice (derivaţi ai arsenului, derivaţi ai bismutului şi ai stibiului, substanţe
colorante, rivanolul, albastrul de metilen, violetul de metil, verdele de briliant, etc).
 Substanţele antiseptice prezintă o toxicitate relativ redusă, fapt care
permite aplicarea lor pe ţesuturile vii, în scopul împiedicării sau extinderii
infecţiilor.
Efectul nociv al dezinfectantelor şi al antisepticelor asupra
microorganismelor, se manifestă prin modificarea conţinutului protoplasmatic
(coagulare, solubilizare, oxidare) sau prin încetinirea şi în final paralizarea
activităţii enzimelor celulare.
Substanţele dezinfectante prezintă toxicitate ridicată, fapt care permite
aplicarea lor numai pe substraturi inerte în scopul distrugerii microorganismelor
patogene.
După modul principal de acţiune, substanţele dezinfectante şi antiseptice
pot fi grupate în:
- agenţi care interferează cu funcţiile membranei celulare;
- agenţi care denaturează proteinele;
- agenţi care inactivează proteinele prin interacţiune cu grupările
funcţionale din moleculă.
În funcţie de compoziţia chimică şi de modul de acţiune, orice antiseptic se
caracterizează prin puterea de distrugere (doza de distrugere), exprimată prin
concentraţia la care un microorganism poate fi omorât într-un anumit interval de
timp. În doze foarte mici, unele substanţe antiseptice pot exercita chiar o acţiune
stimulativă asupra dezvoltării microorganismelor.
Puterea de distrugere a antisepticelor, depinde de mai mulţi factori:
- natura şi concentraţia antisepticului;
- solubilitatea acestuia în învelişurile externe ale celulei;
- temperatura mediului în care activează;
- disociaţia electrolitică;
- faza de dezvoltare a microorganismelor.
Un bun dezinfectant trebuie să întrunească următoarele condiţii:
- să prezinte un spectru de acţiune cât mai larg;
- să determine inactivarea ireversibilă a germenilor într-un interval
de timp cât mai scurt;
- să acţioneze independent de condiţiile de mediu;
- să fie cât mai puţin toxic pentru om şi animale;
- să nu prezinte miros neplăcut şi să nu degradeze ţesuturile, pielea,
metalele, lemnul şi alte materiale supuse dezinfecţiei;
- să fie stabil şi să-şi păstreze proprietăţile, în condiţiile obişnuite un
timp cât mai îndelungat;
- să fie uşor de manevrat şi cât mai ieftin;
- să nu fie inflamabil sau explozibil.
 Determinarea coeficientului sau a indicelui fenolic, este o metodă
utilizată pentru a aprecia eficiența diferitelor substanțe chimice utilizate ca
antiseptice sau dezinfectante. Constă în stabilirea raportului între activitatea
antibacteriană a substanței antiseptice de testat şi activitatea bactericidă a
fenolului.
Materiale necesare: cultură de 24 de ore în bulion din tulpini de
referință de Staphylococcus aureus sau Salmonella typhi; mediul de cultură,
bulion nutritiv; fenol 5%;
Procedură: Se efectuează diluții zecimale din substanța antiseptică
de testat în mediul de cultură şi în paralel se execută diluții similare din
fenol. Ȋn fiecare eprubetă se adaugă câte 0,5 ml cultură la 10ml diluție.
După 5minute, 10 minute şi 15 minute de contact se execută
transplantări cu ansa pe medii de cultură sterile pentru a testa vibilitatea
bacteriilor. Mediile însămânțate se incubează la 37̊C, 24 de ore.
Interpretare: se notează diluția maximă de substanță de testat şi de
fenol care au inactivat germenii în 10 minute, dar nu şi după 5 minute.
Coeficientul sau indicele fenolic se calculează prin raportarea diluției active
a substanței de testat la diluția activă de fenol. Dacă raportul este
supraunitar, valoarea lui arată de câte ori substanța testată este mai activă
decât fenolul, iar dacă este subunitar valoarea raportului indică de câte ori
substanța de testat este mai puțin activă decât fenolul.