Determinarea DL50 (Dosis Letalis 50%)

Cel mai frecvent utilizată este metoda Reed şi Muench. Se respectă

următoarele etape:
-se lotizează animalele, fiecare lot trebuie să conțină minim 5 animale de
aceeaşi vârstă şi greutate;
-se execută diluții zecimale din cultura de testat, DL50 trebuie să fie
încadrată de minim două diluții superioare şi inferioare;
-se inoculează fiecare lot cu câte o diluție;
-se marchează animalele;
-rezultatele se înregistrează într-un tabel, determinarea DL50 efectuându-se
prin metoda totalurilor cumulative;
Se propune următorul exemplu: pentru stabilirea DL50 a unei tulpini de
E.coli se folosesc 40 de şoareci grupați în 8 loturi a câte 5 subiecți. Fiecare lot se
inoculează pe cale intraperitoneală cu câte o diluție. Rezultatele se consemnează
într-un tabel, înregistrându-se numărul şoarecilor morți şi supraviețuitori pentru
fiecare diluție. Se calculează totalurile cumulative de morți, prin adunarea
animalelor moarte la fiecare diluție, pornind de la diluția maximă spre prima diluție
şi a tuturor supraviețuitorilor pornind de la diluția minimă către cea maximă.
Astfel, se obțin pentru fiecare diluție, valorile cumulative pentru mortalitate şi
pentru supraviețuire. Ȋn continuare, pentru fiecare diluție se calculează procentul
mortalității care se raportează la numărului de şoareci morți plus supraviețuitori de
la totalurile cumulative.

Tabel 1

Tabel pentru înregistrarea datelor în vederea calculării DL 50

Diluție I M S Rata M S Rata Morți%

morți mortalit.
10-1 5 5 0 5/5 23 0 23/23 100
10-2 5 5 0 5/5 18 0 18/18 100
10-3 5 4 1 4/5 13 1 13/14 93
10-4 5 3 2 3/5 9 3 9/12 75
10-5 5 3 2 3/5 6 5 6/11 55
10-6 5 2 3 2/5 3 8 3/11 27
10-7 5 1 4 1/5 1 12 1/13 7
10-8 5 0 5 0 0 17 0 0

1
 Din datele prezentate în table, rezultă că diluția care ar determina moartea
unui număr exact de 50 din animalele inoculate este situată între diluția 10 -5şi 10-6.
Calcularea factorului de corecție se realizează după formula propusă de
Reed şi Muench:

Procentul la diluția imediat - 50

superioară celei 50%

Procentul la diluția imediat - Procentul la diluția imediat

superioară celei 50% inferioară celei 50%

55-50 = 5 = 0,2
55-30 25

Coeficientul de corecție obținut (0,20) se adaugă logaritmului diluției

imediat superioare (+5). Ȋn concluzie, DL50 va corespunde diluției 10-5.2.
Relația toxicității cu timpul (TE50 sau TL50)
Orice raport despre un test de toxicitate trebuie să includă informații asupra
evoluției în timp a efectelor observate. Este foarte important a fi cunoscut faptul că
o singură doză produce anumite reacții imediat după administrare, după ore sau
zile, dacă efectul ei este de scurtă durată sau prelungit/ireversibil. Din punct de
vedere ptactic, este important să se cunoască dacă un subiect, care este uşor afectat
la o oră după expunerea la o doza apreciabilă este cu adevărat în afara oricărui
pericol sau este posibil ca în orice moment să ajungă într-o stare critică.
Teoretic, instalarea rapidă a semnelor de boală, după dozarea animalelor de
experiență la nivelul sau sub DL50, sugerează faptul că toxicul se absoarbe repede
şi acționează direct. Revenirea rapidă la starea normală sugerează faptul că toxicul
este metabolizat/excretat rapid.
Pe de altă parte instalarea înceată a semnelor intoxicației consecutive
dozării, la aproape orice nivel de dozaj, sugerează fie că toxicul este absorbit încet
fie că este metabolizat eficient înainte de a acționa. Starea prelungită de boală
consecutivă administrării dozajului la nivelul sau sub valoarea DL50 adesea
sugerează că detoxifixarea şi excreția toxicului sunt ineficiente, dar uneori poate
însemna şi că toxicul produce o leziune biochimică sau anatomică greu sau deloc
reversibilă.
Raporturile de timp ale toxicității pot fi cel mai bine exprimate înregistrând
intervalul de timp necesar producerii unui efect observabil. Prelucrarea statistică a
datelor observate, prezentate apoi ca TE50 sauTL50 oferă o estimare mai bună a
timpului (acesta poate fi anticipat în testările repetate; se poate exprima printr-o
valoare medie corectată cu deviația sa standard).
2
 TE50 este o estimare statistică a intervalului de timp de la administrarea
dozajului (dozare) până la apariția unui răspuns specific, de tipul “totul sau nimic”
la 50% din subiecții unei populații suficient de mare, expusă la un toxic dat, în
anumite condiții. Ȋn sens larg, un efect de tipul totul sau nimic poate fi o valoare
specificată a unui răspuns cantitativ, de exemplu timpul de apariție al primei
tumori sau timpul în care presiunea sangvină sistolică atinge valoarea de 150mm
col Hg. TL50 este un caz particular de TE50 sau TE50 în care efectul urmărit în timp
este cel letal. Valorile TE50 şi TL50 determinate prin prisma efectului procentual
cumulativ cu logaritmul timpului necesar producerii efectului. (în practică, calculul
se realizează în aceeaşi manieră ca şi pentru DL50).