Data predrii: 11 noiembrie 2015

GNOTOBIOLOGIA
Studeni: Cadrul didactic coordonator:
BERBECE ELENA FLORINA Prof. Univ. Dr. LEAU
OPREA OANA DIANA TRAIAN
Grupa 3406
 Gnotobiologia este o ramur a tiinelor biologice
care se ocup cu animalele de laborator ca modele i
reactivi tiinifici de cercetare, innd cont de mediul lor
special i specific. Aceast tiin se bazeaz pe
utilizarea animalelor libere de germeni.
 Istoric
Folosirea animalelor n cercetare i
experimentare a avut un rol esenial n
evoluia tiinelor biologice.
Intrigat de prezena bacteriilor n
instestinul animalelor, Louis Pasteur a
propus in 1885 studiul n profunzime a
acestora, ajungndu-se n secolul al
XIX-lea s se izoleze bacteria n culturi.
n 1890, George Nuttall i H. Thierfelder au nceput
cercetri n urma crora s-a constatat c fetuii de
mamifere triesc izolat n uterul mamei i sunt proteja i
mpotriva contaminrii cu bacterii pn la natere, ceea
ce i-a fcut s considere cezariana cea mai bun cale
de a ncepe un studiu pe o cultur aseptic. Ei au ajuns
pn n punctul n care au izolat animalele de mediul
nconjurtor cu ajutorul unui aparat de izolare construit
de ei, n ideea de a-i ine liberi de germeni pe durata
studiului sau pn mureau.
ANUL EVENIMENTE DERULATE N GNOTOBIOLOGIE
1885 Louis Pasteur sugereaz nsmnarea de bacterii pentru a ntelege func ia florei
intestinale

1895 Un porc de guineea supravieuieste o perioada de timp n absena bacteriilor

1914 O capr e crescut normal, dar fr bacterii timp de o lun

1930 Un porcuor de guineea traiete aseptic, fiind prima fiin liber de germeni din lume

1933 Apare gnotobiologia ca stiin, odat cu publicarea lucrrilor despre diferen ele
biologice

1936 Extinderea folosirii izolatoarelor n histerectomia maimu elor i porcilor de guineea i

meninerea psrilor libere de germeni

1944 nrcarea primului oarece izolat de organisme din alte specii (axenic)
1948 Primul izolator din oel inoxidabil
1957 Primul izolator flexibil din plastic, foarte uor de folosit
1960 Primele vanzri de animale libere de germeni
 Gnotobiotic (gr. gnotos) este animalul scos prin
intervenie cezarian sau ecloziune steril din ou, crescut
i meninut continuu n condiii de izolator, prin tehnici
germ-free.

Gnotofor - animal purttor al unei (unor) specii

cunoscute de microorganisme inoculate n mod deliberat.

Axenic (steril sau germ-free) - animal lipsit de

orice microorganism viabil.

Monognotofor - animal axenic, inoculat cu o

singur specie cunoscut de microorganisme.

Dignotofor - animal axenic inoculat cu dou specii

de microorganisme cunoscute.
 Convenional - animal crescut n condiii obinuite,
n mediu deschis, care conine microorganismele
asociate tractului digestiv.

Convenionalizat - animal axenic, trecut ulterior n

condiii de via liber.

SPF (Specific pathogen free) - animale purttoare

ale unei microbiote convenionale normale, n absena
oricrui agent patogen (microorganism sau virus) cunoscut.

COBS - Cesarian Obtained Barrier System. Ele sunt

derivate din animale obinute prin cezarian i meninut n
conformitate cu sistemul de barier.

VAF -Virus Antibody Free . Ele sunt animale care nu

au anticorpi detectabili prin examene serologice.
 Au fost crescute n condiii axenice, gndaci i
melci, rae, gini i prepelie, oareci, obolani, cobai,
iepuri, oi, cini, porci, bovine, maimue i ponei. Ele
au fost pstrate n condiii de sterilitate
microbiologic mai multe generaii, cu un
comportament aparent normal.
Sistemul izolator de cretere este alctuit din
mai multe compartimente ermetic nchise. Fluxul de
aer, hran i ap sunt sterilizate.
 Principalele caracteristici ale
animalelor gnotobiotice
Animalele axenice sunt, n esen, animale
normale, care difer de cele convenionale prin
absena microbiotei asociate.
Animalele libere de germeni prezint
dezvoltarea, greutatea i temperatura corpului
egale cu cele alea animalelor convenionale. La
animalele germfree, inima este mai mic, i, n
consecin i funcia cardiac, dar i fluxul de
snge de la nivelul pielii, ficatului i
intestinului. Animalele germfree ajung la
maturitate sexual ceva mai trziu.
 Diferenele sunt prezente la nivelul sistemului imunitar i a
florei intestinale. Morfologia intestinal a animalelor libere de
germeni se caracterizeaz printr-o reducere extins a grosimii
peretelui intestinal. Se observ histologic o diminuare a
vilozitilor. Modificrile enunate reduc n mod semnificativ
suprafaa de absorbie a mucoasei intestinale.
Ganglionii limfatici, la animalele axenice sunt subdezvoltai,
iar numrul limfocitelor este redus. Concentraia
imunoglobulinelor este de numai 15 - 50% din cea normal.
 Obinerea de animale gnotobiotice se face n diferite moduri. Cel
mai simplu mod este asocierea prinilor gnotobiotici. Mamiferele
sterile se obin prin intervenie chirurgical - cezarian, n spaiu
steril, urmat de histerectomie (extirparea uterului) i transferul
uterului n camera steril a unui izolator, n care este eliberat nou-
nscutul. Nou nscuii sunt hrnii de femele gnotobiotice, alegndu-
se cele cu un instinct matern pronunat, acesta fiind cel mai practicat
sistem. n caz contrar pot fi hrnii cu o diet special. O alt metod
folosit n mod regulat este transferul de embrioni.
Oule aflate la sfritul
perioadei de incubare
sunt supuse unei bi
germicide, iar
ecloziunea are loc ntr-
un dispozitiv sterilizat.
Aplicaii ale animalelor gnotobiotice

Cel mai recent Simpozion Internaional de Gnotobiologie,

al XIII-lea ca numr, a avut loc la Stockholm. n timp ce
roztoarele ocupa un loc important, exist de asemenea i
alte specii utilizate, printre care se numr de exemplu
porcul, datorit utilizrii n xenotransplant (transplantul
de organe ntre specii diferite) i utilizarea sa frecvent n
toxicologie.
Animalele gnotobiotice constituie modele extrem
de utile pentru obinerea de informaii despre
funciile corpului care depind direct sau indirect de
microorganismele prezente n organism. De
asemenea, permite explorarea relaiilor dintre
diferitele microorganisme precum i ntre diferii
membri ai ecosistemului intestinal.
Animalele gnotobiotice sunt de asemenea
utile pentru testarea antitumoral
terapeutic. Motivul este c substanele
antimitotice i citotoxice utilizate pentru
combaterea cancerului afecteaz sistemul
imunitar cauznd imunosupresie, astfel
nct animalele supuse unor tratamente
convenionale cedeaz la infecii banale.
La animalele gnotobiotice este posibil
dezvoltarea i perfecionarea terapiei,
complicaiile infecioase fiind evitate. n
mod similar, modelele sunt utilizate pentru
a aborda problemele legate de
mecanismele i tratamentul infeciilor la
transplantul de organe sau la pacienii cu
deficiene imunitare, arsuri grave, etc.
 Echipamentul de izolare
n timp ce animalele gnotobiotice pot fi
pstrate n camere sterile, n prezent, se
prefer folosirea izolatorilor. Izolatorii
moderni sunt camere etane de dimensiuni
variabile, construite din material plastic,
flexibil, transparent. nainte de punerea n
funciune, interiorul se dezinfecteaz cu
vapori de acid peracetic, efectundu-se
periodic controale de sterilizare. Accesul
n interior se face printr-o trap germicid
avnd ncorporat un sterilizator. Toate
elementele necesare, precum hran, cuti,
aternuturi, materiale chirurgicale, precum
i animalele se introduc aseptic prin trapa
germicid.
n general, se prefer ventilaia individual pentru fiecare
izolator, dar de asemenea este posibil conectarea mai multor
izolatoare la un sistem central de ventilaie. Aerul trece prin
filtrele de nalt eficien i presiunea din interiorul izolatorului
este meninut uor mai ridicat, pentru a evita posibila
contaminare n cazul unei pene sau defeciuni a izolatorului. n
caz contrar, este necesar s se controleze condiiile de mediu din
izolator mai mult sau mai puin continuu (temperatura,
umiditatea si concentraiile de CO2 i NH3 relative).
 Curioziti:

? Apa furnizat animalelor germfree este

acidifiat la pH 2 (asemanator pH-ului gastric),
pentru a preveni proliferarea microorganismelor.
? Aerul intr n cuc trecut printr-un proces
de ultrafiltrare. Particulele solide nu intr, iar
unele gaze sunt reinute n filtru.

? oarecii germfree se mbolnavesc i mor

dac sunt srutai de o persoan sntoas.
Un astfel de act este lipsit de etic i poate fi
considerat o crim mpotriva vieii
animalelor, ceea ce nseamn o amend sau
penaliti de la 3 luni la 1 an de nchisoare.
 Ce animale se folosesc pentru experimente?
Drosophila melanogaster
Este banala i pretutindeni-prezenta
musculi de oet, o mic insect ce d
trcoale fructelor coapte i zemurilor
dulci lsate la fermentat. De ea se
leag o mare parte din cunotinele
noastre de genetic.

Ce anume o face att de util ca animal de laborator? Este uor de

crescut, necesitnd cheltuieli mici. Este o specie prolific i
prezint o succesiune rapid a generaiilor, astfel nct, ntr-un timp
scurt, pot fi studiate multe generaii, pentru a urmri caracteristicile
ereditare. Modificrile la nivelul genelor se exprim adesea prin
modificri morfologice uor de identificat.
 Caenorhabditis elegans
Este un mic vierme nematod, cu corpul transparent, lung
de numai 1 mm i care triete n sol. i-a nceput carierea
de animal de laborator n 1974, fiind utilizat pn n ziua
de azi pentru studii de biologie molecular, genetic i
biologia dezvoltrii. Corpul su transparent permite
vizualizarea diferenierii celulare i se cunoate chiar
numrul exact de celule din corpul minuscul al animalului:
959 la adulii hermafrodii, 1031 la adulii de sex masculin.
Cercettorii au ajuns, practic, s cunoasc fiecare celul
din corpul viermiorului, s i tie locul i s-o urmreasc
n dezvoltarea ei.
 oareci, obolani i alte roztoare
Obinuiii oareci de cas (Mus
musculus) i obolani (Rattus
norvegicus) au fost selecionai
pentru obinerea unor rase speciale
de laborator, pe care s-au desfurat
mii de proiecte de cercetare.
oarecele este considerat cel mai
bun model pentru studiul bolilor
ereditare ce afecteaz omul, cci
oamenii i oarecii au n comun
peste 90% dintre gene.
Cobaiul (Cavia porcellus) era, la un moment dat, animalul de
laborator prin excelen, de unde i utilizarea termenului de "cobai" ca
metafor pentru orice fiin devenit subiect al unui experiment, de
orice fel. n secolul al XX-lea au luat parte la teste n cadrul unor
programe spaiale; au fost utilizai pentru testarea unor vaccinuri,
pentru studii de alergologie, de dermatologie, n cercetri asupra
multor boli infecioase (difteria, tifosul, holera, tuberculoza i diverse
boli ale animalelor domestice), ori careniale (precum scorbutul,
determinat de lipsa vitaminei C, deoarece cobaii, la fel ca i omul, nu
pot sintetiza vitamina C n propriul lor organism, ci trebuie s i-o
procure exclusiv din surse externe, prin alimentaie.
 Iepurii
Mii de experimente au fost realizate pe iepuri i numeroase
realizri medicale de excepie li se datoreaz i lor. Vaccinurile,
de pild, sunt i azi preparate, n mare msur,
utiliznd anticorpi furnizai de iepuri inoculai cu agenii
patogeni ai bolilor respective. Astmul bronic, fibroza chistic,
cancerul, diabetul, accidentele vasculare cerebrale se numr
printre afeciunile investigate cu ajutorul unui mare numr de
iepuri de laborator.
 Petii-zebr
Danio rerio este un petior cu lungimea de numai civa centimetri,
numit "zebr" datorit dungilor de pe corp. Petele-zebr (Danio rerio)
este la ora actual, o specie de mare importan n cercetrile de
oncologie, toxicologie, biologia reproducerii, neurobiologie, genetic.
Sunt studiate, cu ajutorul lui, aspecte din domenii foarte actuale i
importante ale cercetrii tiinifice: celulele stem, medicin
regenerativ.
 Maimuele
Grupate sub termenul modern de primate
non-umane, maimuele sunt astzi implicate
n teste toxicologice, n studii de neurologie,
genetic, n cercetri asupra
comportamentului, asupra reproducerii, n
cercetri legate de SIDA i hepatit, precum
i de transplanturi.
 Cinii
Cinii sunt utilizai i
astzi ca organisme-
model pentru studii
de endocrinologie,
cardiologie, boli ale
aparatului locomotor,
studii ale cror
rezultate pot fi
extrapolate la om.
 Tatu-ii
Faptul c tatu-ii sunt mai puin cunoscui ca animale
de laborator se explic nu prin faptul c ar fi mai
puin importani, ci prin acela c ei sunt foarte
"specializai", fiind asociai cu o boal rar
astzi: lepra. Tatu-ii sunt printre puinele mamifere
care se pot mbolnvi de aceast maladie, de care
poate suferi i omul. Spre deosebire de multe alte
bacterii patogene, aceti bacili de Mycobaterium
leprae nu pot fi cultivai in vitro, de aceea, pentru
studierea lor, sunt de maxim importan animalele
de laborator ce pot dezvolta boala. Aa au ajuns tatu-
ii n galeria animalelor utilizate n cercetri medicale,
iar studiile realizate cu ajutorul lor au ajutat la
elucidarea unor aspecte legate de acest boal, atta
vreme misterioas i nfricotoare pentru om, astzi
rar ntlnit i vindecabil.
 Numeroi oameni de tiin susin c aceste studii pe
animale (numite in vivo) sunt indispensabile pentru mersul
nainte al tiinei, pentru nelegerea unor procese care au loc
n organismele vii n condiii normale i patologice.
Militanii pentru drepturile i libertatea animalelor susin, n
schimb c asemenea studii nu sunt, de cele mai multe ori,
necesare i c, n orice caz, modul n care sunt tratate
animalele n multe laboratoare de cercetare este oribil i
revolttor.
La ora actual, n lumea tiinific predomin concepia
conform creia studiile pe animale sunt necesare i
acceptabile, cu condiia de a micora pe ct posibil suferinele
animalelor.
Bibliografie:

1. Delma Pegolo Alves, Luiz Augusto Corra Passos, Ana

Maria Aparecida Guaraldo, Marcos Zanfolin (2002) -
Gnotobiologia, Editura Fiocruz, Rio de Janeiro.

2. Coates M. E., Gustafson B. E. (1984) - The Germfree

Animal in Biomedical Research, Londra.

3. Iliu Alexandru (2011) - Utilizarea animalelor

experimentale n cercetarea balnear, Vol. 2.

4. Carmen Fernandez Criado, Ricardo Feinstein, Susan

Sanchez Gamarra - Estado sanitario I. Patologa: control y
prevencin en roedores, Cap.7.

5. http://www.wikiwand.com/pt/Gnotobiologia

6. http://www.descopera.ro/stiinta

7. http://www.veterinarypharmacon.com
 IM !
U M
M UL