FIZIOLOGIE BACTERIAN

1. 2. 3. 4. 5.

Compoziia chimic Nutriia bacterian Metabolismul bacterian Creterea i nmulirea (multiplicarea) bacteriilor Condiiile de cultivare a bacteriilor (influena factorilor de mediu asupra nmulirii bacteriilor)

1. Compoziia chimic
Cca. 20 de elemente ale sistemului periodic: elemente de baz: H, C, O, N, P, S - rol structural i energetic elemente <1%, sub form ionizant: K, Mg, Na, Cl, Ca - rol funcional (procese de activare enzimatic, permeabilizare a membranei) oligoelementele: Mn, Fe, Co, Cu, aflate n cantiti foarte reduse intr n structura unor coenzime, necesare desfurrii metabolismului APA : 75-85% din masa celular forma vegetativa, 40% spori - libera sau legata - rol - transport, solubilizare electrolii - mediul n care se desfoar reaciile metablice Substantele organice: glucide, proteine, lipide, pigmenti, enzime, substante antibiotice, vitamine

Substantele minerale
Regleaza presiunea osmotica Favorizeaza schimburile cu mediul Reglare pH Potential redox Pot stimula cresterea si metabolismul bacterian (ex. Fierul stimuleaza producerea toxinei difterice)

Glucide: Simple: metabolism intermediar Complexe: structura perete celular, capsula Importanta in diagnostic: teste care pot stabili capacitatea unei bacterii de a metaboliza un anumit zahar valoare taxonomica

Glucide

Proteinele
Simple: metabolism intermediar Complexe, functii specializate: Mucoproteine: mucopolizaharizi de grup la Str. pneumoniae Cromoproteine: catalaze, peroxidaze, citocromi (lant respirator la nivelul membranei celulare) Nucleoproteine: acizi nucleici

Lipide
10% din greutatea uscata bacterii obisnuite, 40% Mycobacterii Libere sau combinate cu alte molecule Lipide structurale: membrana, perete, mezozom Ex. - Ac. mycolic Mycobacterii - Ceruri (acizi grasi + alcooli monovalenti superiori) ceara D: Hipersensibilitate de tip IV - Fosfolipide: Treponema palidum

Pigmentii
La bacteriile cromogene Localizare pigment clasificare bacterii: Cromofore (in citoplasma) Paracromofore (in perete sau strat mucos Staphylococcus) Cromopare (difuzibil Pseudomonas aeruginosa criteriu identificare) Rol: Protectie UV (pigmenti carotenoizi) Antibiotic (ex. Piocianina Ps aeruginosa fata de B. anthracis) Enzimatic: proteine transportoare

Pigmenti bacterieni

Staphylococcus aureus www.student.ccbcmd.edu

Pseudomonas aeruginosa www.textbookofbacteriology.net/pseudomonas.html

Enzime
Extracelulare: hidrolaze etc. Ectocelulare (membrana): permeazele etc. Intracelulare Constitutive Inductibile

Antibiotice
Sintetizate pentru a inhiba alte microorganisme!

Bacteriocine plasmide col (colicine) Bacitracina (B. licheniformis) Gramicidina (B. brevis) Polymixina (B. polymixa)
Utilizare TERAPEUTICA si TAXONOMICA IN IDENTIFICAREA BACTERIILOR

Vitamine
Biotina: sintetizata de E. coli, B. subtilis, B. anthracis Tiamina (B1): E. coli, B. subtilis Vitamine grup B si K flora bacteriana intestinala

2. Nutriia bacterian
Nutriia bacterian reprezint totalitatea proceselor prin care bacteriile i procur din mediul nconjurtor substanele necesare supravieuirii, creterii i nmulirii Respiraia bacterian - modalitatea de a-i produce energia necesar activitii metabolice

Sursa de energie fotosintetizante - energia luminoas chimiosintetizante - reacii de oxido-reducere a unor substane lithotrofe - oxideaz substanele anorganice chemoorganotrofe - oxideaz subst.organice (glucoz, AA, purine, pirimidine, f.de cretere) Sursa de carbon autotrofe - substane anorganice, CO2 mixotrofe - substane organice ct i CO2 heterotrofe - substane organice Sursa de azot aminoacizii, sruri de amoniu (Escherichia coli, Salmonella etc.).

Necesitile bacteriilor de interes medical

chimiosintetizante heterotrofe (cu necesiti diferite) paratrofe sunt dependente de aparatul enzimatic al celulelor gazd, fiind bacterii cu habitat obligatoriu intracelular (chlamydii, rickettsii) auxotrofe pierd propr. de a sintetiza un compus (E.coli - timidina) prototrofe tulpinile originale din care provin

3. Metabolismul bacterian
Cuprinde totalitatea reaciilor biochimice care au loc n celula bacterian i n mediu reacii catabolice metabolizarea substratului nutritiv cu eliberare de energie reacii metabolice intermediare - energia rezultat din reaciile catabolice este nmagazinat n compui macroergici reaciile anabolice, prin care celula bacterian i sintetizez substanele proprii, cu consum energetic

3. Particularitatile metabolismului bacterian

Unicelular, necompartimentat (lipsa organite) Plasticitate: adaptare la diferite tipuri de substante nutritive Flexibilitate: utilizarea aceluiasi substrat in mai multe cai distincte, dar intricate Eficienta maxima Este foarte intens (viteza reaciilor este mare) n toate reaciile metabolice intervin catalizatori proteici specifici enzimele Produsele intermediare din procesele catabolice pot fi utilizate direct n calitate de precursori pentru reaciile anabolice (amfibolism)

Reaciile catabolice
Parcurg n principiu 4 faze: descompunerea extracelular a substanelor organice n uniti mai mici absorbia substanelor din mediul extern: prin mecanism pasiv sau activ (fosforilarea glucozei - glucoza -6 fosfat) pregtirea substanelor pentru oxidare prin reacii de decarboxilare oxidarea substanelor cu eliberare de energie -respiraia bacterian respiraia -acceptor final de H este O atmosferic fermentaia -acceptor final este o substan organic respiraia anaerob -acceptor final este O prezent ntr -o sare anorganic.

Metabolismul glucidic
Calea Embden Meyerhoff anaeroba; suita r.: glucoza 2 piruvati + 2ATP Calea hexozomonofosfatului: hexoza pentoza; ac. nucleici, aa aromatici, vitamine Calea Entner- Doudouroff furnizeaza rezerve de precursori, vitamine pt. sinteza ADN si ARN Calea fosfocetolazei Ciclul acizilor tricarboxilici: Acetil-Coa CO2 + H2O la nivelul membranei citoplasmatice

Metabolismul soarta compusilor simpli

Aa: Transaminare, dezaminare ciclul Krebs Bazele purinice si pirimidinice: endo si exonucleaza utilizate ca sursa de C; sinteza atom cu atom Lipide: glicerol+acizi grasi (lipaze) ciclul Krebs Sinteza ac. grasi: AcCoa carboxilaza si acid gras sintetaza

Respiraia bacterian
Bacterii strict aerobe se dezvolt numai n prezena O atmosferic - respiraia aerob (Pseudomonas aeruginosa, M.tuberculosis, Bacillus) Bacterii strict anaerobe nu se dezvolt n prezena O atmosferic - fermentaia n condiii anaerobe (Clostridium, Bacteroides, Prevotella) Bacterii facultativ anaerobe -se dezvolt n prezena sau absena O atmosferic - enterobacteriile Bacterii anaerobe aerotolerante folosesc numai fermentaia n prezena aerului atmosferic, fr participarea oxigenului (Streptococcus pyogenes) Bacterii microaerofile - n prezena CO2, 6-10% (Neisseria)

4. CRETEREA I NMULIREA BACTERIILOR

Rezultat al nutriiei i metabolismului Creterea volumului celulei, dublarea materialului nuclear, dezacord mas -volum

Cresterea
Formare de noi constituenti celulari Sinteza specifica pornind de la substante nutritive simple a unor compusi noi, care sunt ulterior asamblati formand copii fidele ale constituentilor celulari Depinde de: Informatia genetica Substantele din mediu (natura, concentratie) Continua pana intr-un moment critic (raport volum/suprafata), cand cresterea se intrerupe si apare multiplicarea

Multiplicarea
Diviziune directa - coordonata de ADN Scindare celula mama in 2 celule fiice Prin invaginare membrana (Gram negative) sau formare sept transversal (Gram pozitive) Bacili, spirili: plan transversal, perpendicular pe lungime Unii spirili: longitudinal Coci: planuri perpendiculare succesive (1,2,3) Inmugurire: bacterii fotosintetice Fragmentare: bacterii filamentoase Segmentare - Tip special de spori: Streptomyces

Diviziunea binara

fig.cox.miami.edu/.../c7.12.11.fission.jpg

Diviziunea prin inmugurire (Ex. Candida)

www.mshri.on.ca

4.1 Curba de cretere i multiplicare a bacteriilor n mediu limitat

Dac se introduce un inocul de celule bacteriene dintr-o cultur pur ntr -un mediu de cultur proaspt i se incubeaz , bacteriile vor crete i se vor multiplica -timpul scurs de la o diviziune la alta =timp de generaie Aprecierea nr de celule bacteriene la intervale de timp de la momentul inoculrii -grafic numr total de germeni (vii i moarte) numr de celule vii -apreciaz nr bacteriilor capabile s se multiplice n continuare

Curba de multiplicare a bacteriilor n mediu limitat

A. Faza de lag = adaptare la noile condiii

Durata n funcie de specie, condiii de mediu, de numrul de celule din inocul (1/2 h i 3-4 h la bacteriile sporulate) Numrul bacteriilor este staionar Metabolismul este intens Crete volumul bacteriilor Sensibilitate crescut la antibiotice

B. Faza de accelerare bacteriile ncep s se nmuleasc

C. Faza de multiplicare exponenial

Bacteriile se nmulesc n progresie logaritmic. T/Nr.b liniar Este posibil doar in vitro Durata (n general 2-3 ore n funcie de TG) Escherichia coli TG 10 minute Mycobacterium tuberculosis 25 ore Bacteriile prezint toate caracterele speciei Sensibilitate mare la antibiotice Compoziia mediului se schimb Perioad de ncetinire

D. Faza staionar
Durata cteva ore Numrul de bacterii este constant (ele nu se nmulesc, nu mor) Sensibilitate sczut la chimioterapice Modificri ale morfologiei i caracterelor tinctoriale Produc anumii metabolii secundari cu distribuie taxonomic foarte riguroas Antibiotice (Actinomyces) Colicine (b.piocianic) Exotoxine (b. difteric, b. tetanic, b.botulinic, etc.) Sporogeneza la bacteriile sporulate

E. Faza de declin
Durata zile Numrul de bacterii scade constant (epuizarea substratului nutritiv i acumularea de metabolii toxici) Modificri morfologice Autosterilizare sau sporulare complet Cultivarea bacteriilor n mediu limitat este utilizat n laboratoarele de bacteriologie medical, pentru stabilirea diagnosticului unei infecii bacteriene.

Cultivarea bacteriilor n laborator

Medii lichide Mediile solide colonii

Colonii izolate

Caractere de cultivabilitate

Creterea i nmulirea bacteriilor n culturi continui

Cultivarea bacteriilor n sisteme deschise chemostate - pentru obinerea unei mase mari celulare Vaccinuri Produi bacterieni (exotoxine, enzime, antibiotice, interferoni, etc) pentru industria alimentar, farmaceutic, etc. Cercetare Mediul este nlocuit n permanen Bacteriile sunt mereu n faz logaritmic

nmulirea bacteriilor n organism

Condiiile pe care microorganismele le ntlnesc n organism le selecteaz pe acelea care cresc n anumite limite de temperatur, osmolaritate i pH. dup ptrunderea n organism a unui numr mic de microbi acetea se pot nmuli rapid i produc o infecie grav cu evoluie acut (meningita) Bacteriile cu timp de generaie lung vor produce o infecie cu evoluie insidioas, cronic (TBC)

nmulirea bacteriilor n organism

n organism, creterea i multiplicarea bacteriilor este stresat necesiti nutritive (prin competiie cu flora normal) prin mecanismele aprrii antiinfecioase

nmulirea bacteriilor n organism

Pretenii nutritive mai mari la bacteriile cu habitat exclusiv uman (gonococ) dect la celelalte (E.coli...) bacteriile cu habitat extracelular sunt expuse aciunii anticorpilor, complementului, fagocitozei, bacteriile ce se nmulesc intracelular sunt protejate de aciunea acestor factorii i scap uneori supravegherii imunologice bacteriile dezvolt mecanisme adaptative care s ocoleasc barierele ce se opun nmulirii lor

5. INFLUENA FACTORILOR DE MEDIU ASUPRA NMULIRII BACTERIILOR Temperatura Psihrofile - optim la 20C dar i sub aceast temperatur Mezofile - optim ntre 20-40C. Sunt cele patogene deoarece se nmulesc la temperatura organismului, fiind denumite i bacterii homeoterme. Termofile, care se nmulesc optim la peste 45C temperaturile ridicate distrug bacteriile, aplicaia practic a acestui aspect fiind sterilizarea

INFLUENA FACTORILOR DE MEDIU ASUPRA NMULIRII BACTERIILOR temperaturile moderat sczute, de +4oC din frigidere, nu distrug bacteriile dar opresc nmulirea lor prelungindu-le viabilitatea. Tulpini criofile!!! ngheul la temperaturi nu prea mici fa de 0oC determin cristalizarea apei ce determin leziunea structurilor membranare a celulelor bacteriene. Conservarea prin congelare. Temperatura optim este cea realizat de CO2 (-78C) sau de azotul lichid (-180C).

INFLUENA FACTORILOR DE MEDIU ASUPRA NMULIRII BACTERIILOR

pH 7,2-7,4(excepii:Brucella, v.holeric) CO2 :0,03% (10% la Neisserii) Umiditatea

n funcie de specie Liofilizarea(desicare brusc la -78C)pentru conservare

Presiunea osmotic
n mediu hiperton -pierd apa - plasmoliza n mediu hipoton -apa intr n celule - plasmoptiz exist bacterii halofile -cresc n soluii hipersaline(m. Chapmann), zaharofile

INFLUENA FACTORILOR DE MEDIU ASUPRA NMULIRII BACTERIILOR

Ultrasunetele Presiunea hidrostatic, osmotic Electricitatea Radiaiile : Neionizante (UV -cu efect bactericid) ionizante -formeaz n celul radicali cu via scurt
i protoni