AGENI BIOLOGICI FOLOSII N BIOTEHNOLOGIE 1.

Microorganisme vii, libere

Vegetale sau animale; Microscopice:
Virusuri i bacteriofagi Bacterii i actinomicete Drojdii (levuri) Alge Protozoare

2. Celule din esuturi de organisme superior organizate: de

plante, animale, umane

3. Componente celulare: protoplaste, mitocondrii, membrane

celulare, sisteme enzimatice intracelulare

4. Produi extracelulari: fermeni (preparate enzimatice),

coenzime

5. Celule i componente celulare imobilizate:

organite ale celulelor de microorganisme sau ale unor organisme superioare, enzime imobilizate, produse extracelulare fixate

Metabolit: orice produs de transformare a unui corp chimic organic n cadrul unei celule, esut sau mediu sangvin

CLASIFICAREA MICROORGANISMELOR FOLOSITE N BIOTEHNOLOGIE

PROCARIOTE
Bacterii i alge - nucleu neseparat de restul celulei Celula conine ribozomi Are existen autonom, se multiplic prin diviziune celular
Tip de microorganisme Fotoautotrofe Fotoheterotrofe Chimioautotrofe Lumina Lumina Compui organici CO2 Compui organici CO2 Compui organici Sursa de energie Sursa de carbon

Chimioheterotrofe Compui organici

BACTERII

Escherichia Colli

BACTERII
Microorganisme unicelulare cu nucleu difuz Aerobe sau anaerobe n funcie de morfologie pot fi:
Coci (sferici) singulari, diplococi (cte 2), streptococi (grupai n lan), tetracoci (grupai cte 4), stafilococi (aglomerai neregulat), sarcina (arajament n cub) Vibrioni sub form de virgule Spirili prezint curburi i au extremitile ascuite Spirochetele celule cu mai multe curburi Corineformele forme neregulate

Sporii sunt formaiuni primitive de difereniere celular i au rezisten termic deosebit; pot fi endospori, artrospori, cidiospori; cel mai adesea prezint spori Clostridium i Bacillus, au forme ovale sau sferice i rezisten la temperaturi de peste 100oC

Coci singulari

Vibrioni

Diplococi Spirili Streptococi Vibrionul holerei

Stafilococi

tetracoci

Spirochete

Leptospirilla

Bacterii
Gluconobacter, Acetobacter folosite la obinerea
oetului din vin, cidru sau cartofi

Lactobacillus, Lactococcus, Streptococcus

fabricarea iaurtului i brnzeturilor, acidului lactic, murturilor, furajelor nsilozate

Clostridium butyricum folosite n nmuierea inului i a

cnepii

Bacillus thermoprotheolyticus industria detergenilor Bacillus stearothermophilus produc -amilaze, care

convertesc amidonul n glucoz

B. Stearothermophilus

Lactobacillus sporogenes
Lactobacillus acidophilus

Clostridum botulinum

Clostridum difficile

Clasificarea bacteriilor patogene dup testul Gram

Analiza sub microscop a microorganismelor este facilitat i ctig acuratee dac morfologia acestora se evideniaz folosind substane colorante Bacteriile Gram-pozitive rein colorantul cristal violet, dup splarea probei cu soluie apoas decolorant Bacteriile Gram-negative sunt acele bacterii care nu rein colorantul cristal violet n cursul caracterizrii microbiologice Gram.

 n Testul Gram, dup adugarea cristal violetului se adaug un alt reactiv de contraculoare (n mod obinuit, safranin), care coloreaz bacteriile Gramnegative n roz. Comportarea diferit se datoreaz compoziiei peretelui celular Bacteriile Gram-negative sunt responsabile pentru dizenteria bacilar (genul Shigella), febrele enterice i toxiinfeciile alimentare (genul Salmonella), infecii urinare sau cu alte localizri (genul Proteus, Morganella sau Providencia), cium, septicemii, enterite (genul Yersinia), patogenitate general (Enterobacter, Serratia, Citrobacter)

Gram-pozitive

Gram-negative

Lamel netratat

Lamel + cristal-violet

Lamel + soluie Lugol (iod)

Lamel + NaOH

Lamel + fuxin

EUCARIOTE
Drojdii (levuri) Alge Fungi (ciuperci) Au nucleu veritabil, separat prin membrana dubl

EUCARIOTE

Fungi (ciuperci, mucegaiuri)

Au structur filamentoas Majoritatea sunt aerobi Formeaz un miceliu care produce degradarea mediului n care se dezvolt Au capacitate ridicat de adaptare la condiiile de mediu Pot metaboliza glucide, alcooli, acizi, proteine, sruri de amoniu, nitrii Au capacitate de mutaie mare, ceea ce le confer posibiliti biosintetice ridicate Pot fi saprofite sau parazite Se multiplic prin spori; sporii sunt slab rezisteni la temperatur, se distrug la 100oC

Fungi de interes practic

Aspergillus Niger

Ascomyces

Rhizopus Candida

ACTINOMICETE
Clas de microorganisme plasat ntre bacterii i fungi Sunt asemntoare cu bacteriile n privina compoziiei chimice a peretelui celular, nucleul e lipsit de membran, sunt parazitate de bacteriofagi Au structur filamentoas, cu ramificaii, formnd hife specifice fungilor (au structura morfologic de miceliu i genereaz spori)

Levuri (drojdii)
Sunt organisme eucariote unicelulare saprofite sau parazite Se utilizeaz n industria fermentativ, biosintez, obinerea proteinelor furajere Domenii tipice: pine, bere, vin, alcool etilic, enzime, preparate alimentare Cel mai rspndit reprezentant: Saccharomyces cerevisiae

Drojdii

Virusuri i bacteriofagi
Au dimensini extrem de reduse (zecimi de micron) Sunt lipsite de enzime i metabolism propriu, sunt parazii Se distrug prin nclzire pn la 100oC

Enzime utilizate n biotehnologii

ENZIMELE sunt substane de natur proteic Proteine: macromolecule constituite dintr-un lan de aminoacizi unii prin legturi peptidice - CO - NH aranjate tridimensional, ntr-o arhitectur funcional susinut prin legturi disulfurice din aminoacizii cu sulf, legturi de tip puni de hidrogen i interaciuni hidrofobe. Posed caliti de catalizatori foarte activi i nalt specifici Sunt de origine organic, vegetal sau microbian

SUBSTRATURILE PROCESELOR BIOTEHNOLOGICE

A. Materii de origine vegetal i animal

Lapte, must, semine de cereale Melas, suc de trestie sau sfecl de zahr, hidrolizate de celuloz i lignin Deeuri agricole i silvice: paie, stuf, resturi de lemn Deeuri zootehnice i resturi de la abatoare Cartofi, cereale i alte produse coninnd amidon Biomas vegetal verde - frunze

B. Materii industriale
- spirturi (alcooli), acizi organici, zaharuri sintetice, alte substane de puritate tehnic - produse petroliere (alcani) - gaze naturale: metan, aragaz, dioxid de carbon, hidrogen - zcminte srace de petrol sau metalifere

C. Materii poluante
- reziduuri industriale - ape reziduale casnice i din industria agroalimentar (zeruri) - deeuri solide casnice

D. Materii complexe
- medii elaborate pentru cultura celulelor vegetale - medii elaborate pentru cultura celulelor animale sau umane

Compoziia mediilor de cultur

Microorganismele au nevoie de substane care s asigure creterea, multiplicarea, producerea de metabolii i celelalte manifestri ale activitii biologice ale microorganismelor productoare Mediile de cultur vor conine deci: Elementele chimice necesare biosintezei constituenilor celulari Componente necesare activitii sistemelor enzimatice i mecanismelor de transport celular Substane pentru producerea metaboliilor utili

Compoziia mediilor de cultur n general, nutrienii se grupeaz n 4 categorii:

Elemente majore (organogene): C, H, O, N Elemente minore: P, K, S, Mg Microelemente Factori de cretere (vitamine, precursori)

Din punct de vedere practic, preparativ, clasificm componenii din mediile de cultur n: Anorganici Organici

Componeni anorganici din celulele microorganismelor

Component anorganic Coninut de componeni anorganici, g/100 g s.u.

Bacterii P
S K Mg

Fungi 0,4 - 0,45

0,1 - 0,5 0,2 - 2,5 0,1 - 0,3

Drojdii 0,8 - 2,6

0,01 - 0,5 1,0 - 4,0 0,1 - 0,5

2,0 - 3,0
0,2 - 1,0 1,0 - 4,5 0,1 - 0,5

Na
Ca Fe Cu Mn Mo cenu

0,5 - 1,0
0,01 - 1,1 0,02 - 0,2 0,01 - 0,02 0,001 - 0,01 7,0 - 12,0

0,02 - 0,5
0,1 - 1,4 0,1 - 0,2 2,6 - 8,6

0,01 - 0,1
0,1 - 0,3 0,01 - 0,5 0,002 - 0,01 0,0005 - 0,007 0,0001 - 0,0002 5,0 - 10,0

Componeni anorganici
Rolul compuilor anorganici:
Intr n componena celulelor Favorizeaz schimbul de materie i energie ntre celul i mediu Regleaz presiunea osmotic Menin echilibrul membranar Activeaz sistemele enzimatice Regleaz pH-ul celular

Componeni anorganici
Ap (80-90%) dizolvarea componenilor hidrosolubili, mediu de transport i pentru reaciile enzimatice; C (CO2), O (O2/aer), N (NH4+, NO3-) asigur structura materialelor celulare S (SO42-, SO32-) component al aminoacizilor cu sulf, unele vitamine, coenzima A P (HPO42-) component al ATP, acizi nucleici, fosfolipide, nucleotide

Componeni anorganici
Microelemente
K+ - cation intracelular, cofactor enzimatic Mg2+ - cofactor enzimatic (kinaz), component al peretelui i membranei celulare Ca2+ - cofactor enzimatic, prezent n enzimele exocelulare (amilaze, proteaze), endospori Fe2+/Fe3+ - cofactor enzimatic, component al citocromilor, proteinelor - Oligoelemente: Zn2+, Mn2+, Na+, Mo6+, Se4+, Cu2+, Cr6+, Co2+, Cl-, Ni2+ etc.

Componeni organici
Glucide: substane energetice i plastice, 4-25% din masa celulei uscate; Glucide simple: mono- i dizaharide Glucide complexe: pentozani, hexozani (amidon, celuloz, dextran, glicogen, amilopectin) Polimeri micti: lipoproteide, glicoproteide, peptidoglicani (componeni ai peretelui celular)

Componeni organici
Lipide constituie 1-20% din masa celulei uscate Au un grad energetic nalt Pot fi lipide simple (ceruri, monogliceride, digliceride, trigliceride) sau compuse (fosfatide)
O CH2- O P O - X

OH
CH - OCOR CH2 - OCOR

Componeni organici
Proteine - cea mai important parte din structura celulei; M = 5 000 40 000 000 (C, H, O, N, S + Fe, P, Zn, Cu) Proteine simple: resturi de aminoacizi, formnd legturi de tip (C = O) - NH Proteine conjugate: pe lng aminoacizi conin grupe prostetice (nucleoproteine, lipoproteine, glucoproteine, hemoproteine, flavoproteine, metaloproteine) Acizi nucleici rezultai prin condensarea nucleotidelor (alctuite dintr-o baz purinic sau pirimidinic, o pentoz, un rest de acid fosforic esterificat cu unul dintre hidroxilii pentozei). Acizii nucleici au proprietatea de a se duplica i participa la sinteza proteinelor