Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Pregtirea obiectelor pentru sterilizare. Metode de sterilizare: 1. Sterilizarea prin caldur (uscat sau umed) a) Caldura uscat: - nclzirea la incandescen
b) Caldura umed: - sterilizarea prin vapori sub presiune ( autoclavare ) 2. Sterilizarea cu substane chimice 3. Sterilizarea cu radiaii ionizante 4. Sterilizarea prin filtrare La fiecare metod se precizeaz parametrii se sterilizare, materialele care pot fi sterilizate prin metoda respectiv i metodele utilizate pentru control.
Dezinfecia
Definiie
distrugerea i/sau ndeprtarea numai a anumitor microorganisme (n special a celor patogene) de pe suprafaa i din interiorul unor obiecte.
Metode de dezinfecie: 1. Dezinfecia prin cldur a) Cldur uscat: - Flambarea b) Cldur umed: - fierberea - pasteurizarea - tindalizarea - sterilizarea cu vapori cureni 2. Dezinfecia prin radiaii 3. Dezinfecia cu substane chimice. Antiseptice i dezinfectante, grup heterogen de substane care nu se supun principiului toxicitii selective.
ntrebri de control:
1. Sterilizarea prin caldura uscata: a) se face prin autoclavare; b) se utilizeaza pentru sterilizarea sticlariei de laborator; c) se utilizeaza pentru sterilizarea instrumentarului chirurgical; d) se utilizeaza pentru sterilizarea ansei bacteriologice e) se poate efectua prin incalzirea la incandescenta; 2. Flambarea este utilizata pentru sterilizarea: a) medii de cultura cu zaharuri; b) gatul eprubeteleor si baloanelor in momentul utilizarii; c) seringi de unica utilizare dupa intrebuintare; d) material infectios ( culture microbiene, produse patologice); e) pipete gradate si pipette Pasteur inainte de utilizare.
CUM- tehnica corect de recoltare CND momentul se stabilete n raport cuperioada evolutiv a bolii i obligatoriu nainte de administrarea de chimioterapice CT- exist o cantitate suficient pentru examenul bacteriologic/serologic
ntrebri de control:
1. Urina in vederea efectuarii uroculturii, se recolteaza: a) Prin metoda jetului intrerupt b) Din prima urina de dimineata c) Dupa toaleta riguroasa a organelor genitale externe d) In orice moment al zilei e) Intotdeauna seara 2. In microbiologie se utilizeaza pentru diagnosticul etiologic al unei boli infectioase: a) Preparatul nativ b) Preparatul frotiu c) Preparatul colorat Gram d) Preparatul colorat Ziehl-Neelsen e) Preparatul colorat Moeller
Coloraia simpl
se face cu albastru de metilen sau cu fucsin Este utila in diagnosticul prin ex. microscopic direct din produsul patologic n gonoree, meningita cerebrospinal epidemic etc.
Coloraia Gram
permite clasificarea bacteriilor n Gram-pozitiv i Gram-negativ pe baza diferenelor de structur ale peretelui celular tehnica de colorare 1. frotiul fixat este acoperit cu violet de genian : 1-2 min.(Se spal cu ap de la robinet ). 2. se acoper cu o solu ie de lugol pentru mordansare, 2 min.(Se spal cu ap). 3. decolorare cu alcool-aceton timp de 20 sec, pn nu se mai dizolv colorant. (Se spal cu ap). 4. se recoloreaz cu fuxin diluat/ safranin , 2 min.( Se spal cu ap) 5. se usuc frotiul i se examineaz cu imersie.
ntrebri de control:
1. a) b) c) d) e) Coloratia Gram evidentiaza: coci asezati in gramezi; coci asezati in lanturi; bacilli asezati in lanturi; bacilli asezati izolat; coci asezati in diplo;
2. Coloratia Gram: a) in coloratia Gram decolorarea se face prin tratare cu alcool-acetona; b) decolorarea se face cu acid-sulfuric si alcool etilic; c) se foloseste fuxina concentrate la cald; d) evidentiaza proprietatea de acido-alcoolo rezistenta; d) lugolul are rol de mordant;
- se acoper lama cu fucsina concentrat 5-10 min. i se nclzete pn la emisia de vapori (nu se ajunge la fierbere) - se decoloreaz cu acid sulfuric 20% - 30 sec ( se spal cu ap) - se decoloreaz cu alcool etilic 96% pn la ndepartarea colorantului - 30 sec (se spal cu ap) - se recoloreaz cu albastru metilen 2 min. - se spala frotiul cu ap - se lasa la uscat in stativ Citirea si interpretarea: - se folosete obiectivul de imersie - Micobacteriile (bacilul tuberculos, bacilul leprei) apar colorate in rosu pe fond albastru = bacili acido-alcoolo rezistenti = BAAR, celelalte specii i elementele celulare apar colorate n albastru.
Coloratii speciale
1. Coloraia pentru capsul (metoda Burri)- cu tu de China = pe fond negru bacteriile apar colorate in rosu, cu o zona clar, incolor n jur (aceasta zon corespunde capsulei, care nu se coloreaz). 2. Coloraia Mller pentru spori = sporii se coloreaz n rou, formele vegetative n albastru. 3. Coloraia cu verde malachit i safranin pentru spori = sporii se coloreaz n verde, formele vegetative n rou. 4. Coloraii pt. cili: metoda Leifson i impregnare argentic Zettnov. 5. Coloraia Neisser pentru evidenierea corpusculilor Babe-Ernst la Corynebacterium diphteriae.
ntrebri de control:
1. a) a) b) c) d) Pe un frotiu din sputa colorat Ziehl- Neelsen: bacteriile Gram(+) apar in albastru; bacteriile Gram(-); leucocitele apar rosii; bacteriile acido-alcoolo rezistente apar albastre; Mycobacterium se coloreaza in rosu.
2. Caracterul de acido-alcoolo rezistenta este prezent la la genul: a) Staphylococcus; b) Mycoplasma; c) Mycobacterium; d) Bacillus. e) Streptococcus
LP 5 - Medii de cultur
Definiie Condiiile pe care trebuie s le ndeplineasc orice mediu de cultur pentru ca s poat fi utilizat Cum se obine un mediu de cultur etape Clasificarea mediilor de cultur:
Dup consisten: lichide, solide, semisolide Dup provenien: naturale, sintetice Dup compoziie i scop: simple, complexe i speciale
Tehnici de nsmnare
Tehnica nsmnrii prin epuizare: Scop: obinerea coloniilor izolate, folosite n continuare pentru obinerea de cultur pur nsmnarea prin nepare (pe medii solide aflate n tuburi) nsmnarea n pnz
ntrebri de control:
1. Hemoliza poate fi evidentiata pe: a) Geloza sange b) Muller-Hinton c) Lowenstein-Jensen d) Levin e) Drigalski 2. Medii de cultura pentru fungi pot fi: Drigalski Geloza-socolatie Muller-Hinton Sabouraud Lowenstein-Jensen
e) f) g) h) i)
ntrebri de control:
a) b) c) d) e) 1. Testele biochimice : Permit identificarea bacteriilor Ne ajuta la stabilirea tratamentului ce trebuie utilizat intr-o anumita infectie Au la baza fenomenul de degradare a unor substraturi de catre bacterii Sunt necesare in vederea identificarii bacteriilor din Genul Staphylococcus Sunt necesare doar pentru identificarea bacteriilor acido-alcoolo rezistente 2. Studierea proprietatilor biochimice: Reprezinta o etapa a diagnosticului de laborator intr-o boala infectioasa Reprezinta o etapa a diagnosticului clinic al unei boli infectioase Este importanta pentru stabilirea genului bacterian Este importanta pentru stabilirea speciei bacteriene
2. Aglutinarea n tuburi se efectueaz de obicei n 6 eprubete n care se realizeaz diluii crescnde din serul imun standard sau din serul de cercetat. n aglutinarea bacterian, dup natura i localizarea antigenului care particip la reacie, exist dou tipuri principale de aglutinare: somatic sau aglutinare O i ciliar sau aglutinare H. Reacia de aglutinare n tuburi se folosete n dou scopuri principale : pentru identificarea unui microorganism (antigen) izolat dintr-o infecie i n diagnosticul serologic al unei infecii pentru evidenierea anticorpilor din serul de bolnav fa de un antigen standard. Cele mai importante reacii de aglutinare folosite n diagnosticul serologic al bolilor infecioase sunt: reacia Widal, n febra tifoid i febrele paratifoide, reacia Wright n bruceloz i reacia Weil-Felix n tifosul exantematic i alte rickettsioze. 3. Reacia de aglutinare pasiv sau aglutinarea pe suport se utilizeaz atunci cnd antigenul este o soluie molecular. n urma fixrii pe un suport particulat acesta devine aglutinabil n prezena serului imun. Reaciile se pot folosi att la identificarea unui antigen, ct i la cercetarea anticorpilor corespunztori folosind un antigen cunoscut. - latex aglutinare - hemaglutinare (ex: TPHA test de confirmare n diagnosticul sifilisului)
REACIA DE PRECIPITARE
Definiie
- este o reacie antigen-anticorp de agregare, n care antigenul este reprezentat de macromomolocule n soluie coloidal. Punerea n contact a antigenului cu anticorpul corespunztor duce la formarea unor complexe antigen-anticorp care precipit atunci cand elementele ce particip n reacie se gsesc n proporie optim.
2. Reacia de floculare - este o reacie n care precipitarea apare prin amestecul antigenului cu serul imun (n toat masa amestecului) sub fo rm de flocoane. Aceast reacie se utilizeaz n principal pentru titrarea toxinelor microbiene i a serurilor antitoxice pornindu -se de la observaia c flocularea apare prima dat n eprubeta n care exist proporie optim de antigen i anticorp (reacia de floculare Ramon). - VDRL (Veneral Disease Research Laboratory) n diagnosticul sifilisului 3. Precipitarea n gel utilizeaz gel de agar sau agaroz ca mediu n care unul sau ambele elemente care intr n reacie (antigen i anticorp) difuzeaz. - difuzia simpl (difuzeaz numai unul din reactani, cellalt gsindu-se nglobat n mediul de difuzie) - difuzia dubl n care ambii reactani difuzeaz i formeaz linii de precipitare la locul de ntalnire - difuzia n camp electric - imunoelectroforeza (IEF) este o metod care asociaz principiul electroforezei (EF) cu principiul difuziunii n gel - contraimunelectroforeza
ntrebri de control:
1. a) b) c) d) e) Tipuri de aglutinare in tuburi: Reactia Weil-Felix Reactia Widal Reactia Wright Reactia de aglutinare somatica Reactia de aglutinare flagelara
2. a) b) c) d) e)
Tipuri de reactii de precipitare pot fi : Precipitarea inelara Reactia de floculare Reactia Ascoli Reactia de fixare a complementului
Reactia Vincent-Bellot
LP 8 - Reacia de fixare a complementului (RFC). Reacii antigen-anticorp cu reactani marcai: IF; ELISA
Reacia de fixare a complementului (RFC) Definiie - este o reacie antigen-anticorp cu participarea complementului. Evidenierea reaciei se face utiliznd sistemul hemolitic. Tehnici 1. Bordet - Wassermann: era utilizat n diagnosticul serologic al sifilisului (reacia Bordet-Wassermann n bruceloz, tuse convulsiv, etc 2. Ida Bengston : folosit n diagnosticul leptospirozelor, rickettsiozelor, a infeciilor cu chlamydii, etc. 3. Kolmer. sau fixarea complementului la rece 4. Breadstreet i Taylor, larg aplicat n ultimul timp n infeciile virale, infecii cu mycoplasme, febr Q Teste care utilizeaz vizulalizarea complexelor antigen -anticorp prin artificii tehnice Sensibilitatea reaciilor antigen-anticorp poate fi mrit legnd de anticorp (mai rar de antigen) un marker care poate fi: a. o substan fluorescent (izotiocianat de fluorescein rodamin), n tehnica imunofluorescenei (IF) b. izotopi radioactivi (de obicei I125), n metoda radio-imunotestrii (RIA) c. o enzim (peroxidaz, beta-galactozidaz, fosfataza alcalina etc.), n testele imunoenzimatice (ELISA).
ntrebri de control:
1. Tehnici ce au la baza reactia de fixare a complementului: a) tehnica Wassermann b) tehnica Ida-Bengston c) tehnica Breadstreet si Taylor d) Ascoli e) Widal
ntrebri de control:
1. a) b) c) d) e) Antibiograma prin metoda difuzimetrica poate preciza: Concentratia minima inhibitorie a unui antibiotic Antibioticul la care bacteria este sensibila Antibioticul la care bacteria este rezistenta Antibioticul la care bacteria este intermediar-sensibila Nu poate preciza concentratia minima inhibitorie a unui antibiotic
- 73 -
Referine bibliografice:
http://www.biomerieux-diagnostics.com/servlet/srt/bio/clinicaldiagnostics/dynPage?doc=CNL_PRD_CPL_G_PRD_CLN_10 http://www.abbiodisk.com/bd_company.html
ntrebri de control:
1. a) b) c) d) e) Concentratia minima inhibitorie poate fi precizata prin: Metoda dilutiilor Metoda difuzimetrica E-test Prin orice tehnica de efectuare a antibiogramei Teste serologice
11
- 73 -
12
- 73 -
alta la interval de 10-14 zile, pentru a urmri creterea n dinamic a titrului de anticorpi (vezi reacii antigen-anticorp). II. Metode de diagnostic biologic care folosesc o intradermoreacie (IDR) care evideniaz fie: imunitatea umoral (IDR Shick n difterie sau IDR Dick n scarlatin) starea de hipersensibilitate tardiv, aspect al imunitii mediate celular (IDR la tuberculin) Schema de prelucrare a produselor patologice
Produs patologic
13
- 73 -
14
- 73 -
Caractere de cultur: colonii tip S lactozo-negative Teste de patogenitate: Testul Srny ntrebri de control: Reprezentanii genului Shigella sunt: a) bacilli Gram negativi b) bacilli Gram pozitivi c) se izoleaza pe mediu cu lactoza d) cauzeaza toxiinfectii alimentare e) produc dizenteria bacilara
Genul Salmonella
Esenial: - peste 2000 serotipuri Caractere generale: - bacili Gram-negativ - mobili (flageli peritrichi) - lactozo-negativi - identificarea antigenelor O, H Vi reacii de aglutinare Important Infecii (salmoneloze): Febra tifoid S.typhi Febra paratifoid S.paratyphi A, B Toxiinfecii alimentare i enterite (copii) - S.typhymurium - S.enteritidis - S.paratyphi B - S.panama Stri septico-piemice - S.paratyphi C - S.choleraesuis Diagnosticul de laborator I.Diagnostic direct, bacteriologic Recoltarea produselor patologice : snge i urin n prima saptaman, din a doua saptaman fecale. Pentru toxiinfeciile alimentare se recolteaz probe din alimentele consumate, vom, fecale, snge Examinarea microscopic- irelevant Izolarea: medii pentru enterobacterii cu lactoz Identificarea agentului patogen izolat prin studiul: - Proprietatilor morfo-tinctoriale : bacili Gram negativ , mobili - Proprietatilor de cultura : colonii S lactozo(-) - Proprietati biochimice : H2S(+),Citrat(+),rosu-metil(+) - Proprietati antigenice : caracterizarea antigenic Kauffman-White pe baza antigenul O, antigenul H, antigenul Vi II.Diagnostic indirect identificarea serologica se face prin reacia de aglutinare : Widal ntrebri de control: Ce salmoneloze cunoastei (i specia care produce afeciunea) i pentru ca re din acestea se face diagnostic serologic ?
15
- 73 -
Klebsiella pneumoniae
Esenial: - cantiti moderate n intestinul omului /animalelor - infecii respiratorii, urinare, otite - bacili Gram-negativi - capsul polizaharidic - colonii mari mucoase , fenomen de cameleonaj
16