Lab4 Test de toxicitate prin determinarea biomasei umede

1.Principiul metodei
Metoda se bazeaza pe capacitatea drojdiei, Candida Krusei, de a se dezvolta
intr-un mediu lichid care ofera conditii optime de crestere si inmultire.
Totalitatea celulelor formate in decurs de 1 h la temperature de 30 reprezinta
biomasa umeda.Testul se bazeaza pe alcatuirea unui system mediu-microorganism-
substanta toxica pentru fiecare substanta de testat si determinarea biomasei umede la
finalul perioadei de inmultire.Rezultatele obtinute se raporteaza la un martor care va
contine doar mediul de cultura si drojdia.
2.Material biologic
Se utilizeaza drojdia Candida Krusei pe mediu Sabouraud agarizat.Se
preleveaza cu ansa masa celulara dezvoltata pe suprafata mediului suspensionandu-se
in 10 ml mediu lichid iar prin agitare usoara obtinandu-se o suspensie celulara omogena
3.Substante chimice de testat
Se utilizeaza 2 compusi anorganici respective azotit de natriu si ZnSO4 precum
si un compus organic,fenolul, in concentratie de 0,1g/10 ml.
4.Mod de lucru
Se pregatesc 4 eprubete de centrifuga:una pentru martor si 3 pentru substantele
toxice de mai sus.
Se cantaresc eprubetele la balanta tehnica si se noteaza valorile.
Se pipeteaza in fiecare eprubeta cate 8 ml mediu de cultura lichid si 2ml
suspensie de celule de drojdie.
Se adauga substantele toxice prin cantarirea a 0,1g la balanta tehnica, se agita
pentru dizolvare si omogenizare iar sistemele de reactive obtinute se incubeaza timp de
1 h la thermostat la 30 pentru dezvoltarea microorganismelor.Dupa aceasta perioada
se executa o centrifugare la 6000 rot/min timp de 10 min.Se deverseaza
supernatantul,se tamponeaza cu hartie de filtru pentru indepartarea urmelor si se
cantaresc din nou eprubetele de centrifuga la balanta tehnica notand valorile obtinute.
Diferenta dintre ultima cantarire si cea initiala reprezinta cantitatea de biomasa
umeda dezvoltata in curs de 1 h in martor si probele de substanta toxica.
Se compara rezultatele obtinute raportandu-ne la valoarea martorului
constatandu-se efectul toxic sau nu al substantelro testate.