CUPRINS

INTRODUCERE....................................................................................3
CAPITOLUL I.........................................................................................6
ETERI COROAN UTILIZAI N CHIMIA ANALITIC..........................6
1.1 Consideraii generale................................................................6
1.2 Tipuri de eteri coroan..............................................................8
1.3. Ion selectivitatea eterilor coroan.........................................9
1.4. Eterii coroan ca ioni transportori n electrozi ion selectivi
...............................................................................................11
1.5. Eteri coroan n cromatografia de lichide..............................14
CAPITOLUL II......................................................................................15
CICLODEXTRINE I CALIXARENE UTILIZATE N COMPLEXAREA
UNOR COMPUI CHIMICI...........................................................15
2.1. Consideraii generale.............................................................15
2.2. Structura i proprietile ciclodextrinelor................................17
2.3. Cteva aplicaii ale ciclodextrinelor n procesele de separare
...............................................................................................19
2.4. Folosirea ciclodextrinelor n separare prin membrane...........21
2.4.1. Membrane lichide cu ciclodextrine...............................21
2.4.2. Membrane polimerice coninnd ciclodextrine pentru
separarea izomerilor..................................................22
2.4.3. Membrane polimerice coninnd ciclodextrin pentru
separarea amestecurilor alcool-ap...........................24
2.5. Complexarea aminoacizilor cu calixarene sulfonate
hidrosolubile ca studiu al unui posibil mecanism de
recunoatere a calixarenelor sulfonate de ctre proteine......26
2.6. Incluziunea succesiv a apei, [H3NCH2CH2NH3]2+ i
[H3NCH2CH2NH2]+ n cavitatea aromatic a calix [4] arenelor psulfonate................................................................................29
2.7. Complexarea L--aminoacizilor naturali prin calix [4] arene
solubile n ap........................................................................32
CAPITOLUL III.....................................................................................34
COMPLEXAREA UNOR COMPUI AMINICI CU RECEPTORI
MACROCICLICI............................................................................34
3.1. Complexarea unor compui aminici cu eteri coroan............35
3.2 Complexarea aminelor cu criptonzi........................................40
3.3 Complexarea aminelor cu calixrene.......................................40
3.4 Complexarea aminelor cu aza eteri coroan..........................40
CAPITOLUL IV....................................................................................40
EXTRACIA CU SOLVENI A AMINOACIZILOR FOLOSIND LIGANZI
MACROCICLICI............................................................................40
4.1. Caracteristici generale ale aminoacizilor...............................40

4.2. Echilibre de repartiie n procesul de extracie.......................40

4.3. Raportul de distribuie al aminoacizilor n sistemul solvent
ap.........................................................................................40
4.4. Factorii ce influeneaz procesele de extracie......................40
4.4.1. Influena structurii ligandului macrociclic utilizat ca
extractant...................................................................40
4.4.2. Influena reapariiei liganzilor macrociclici....................40
4.4.3. Influena cationului n procesul de extracie.................40
4.4.4. Influena anionului n procesul de extracie..................40
4.4.5. Influena solventului.....................................................40
4.4.6. Influena pH-ului n extracia complecilor aminoacizilor
...................................................................................40
4.5. Extracia i transportul aminoacizilor prin membrane lichide. 40
4.5.1 Extracia i transportul aminoacizilor sub form de
compleci cationici.....................................................40
4.5.1.1. Compleci ai aminoacizilor cu eteri coroan. 40
4.5.1.2. Compleci ai aminoacizilor cu dinonil naftelen
sulfonat (DNNS)...........................................40
4.5.2. Extracia i transportul aminoacizilor sub form de
compleci anionici......................................................40
4.5.2.1. Compleci metalici ai liganzilor macrociclici cu
aminoacizi....................................................40
4.5.2.2. Compleci ai aminoacizilor cu sruri
cuaternare de amoniu..................................40
CAPITOLUL V.....................................................................................40
PARTEA EXPERIMENTAL................................................................40
5.1 Consideraii generale..............................................................40
5.2. Aparatur i reactivi...............................................................40
5.3. Influena pH-ului asupra extraciei complecilor aminoacizilor
cu liganzi macrociclici............................................................40
5.4.2. Determinarea constantei de extracie..........................40
5.5. Transportul aminoacizilor derivatizai prin membrane lichide 40
5.6. Concluzii................................................................................40
BIBLIOGRAFIE....................................................................................40

INTRODUCERE
Tehnicile de separare i concentrare prin membrane au fost
introduse progresiv, n procesele convenionale din chimia analitic n
unele tehnologii biochimice. Cercetrile n acest domeniu s-au
concentrat asupra aspectelor biomimetice ale sistemelor care sunt
capabile s imite in vitro transportul biologic. Studiile asupra
transportului prin membrane lichide a unor specii cu implicaii
biologice prezint dou aspecte de baz: teoretic i aplicativ; teoretic:
deoarece permit accesul la mecanismele de transport prin membrane
biologice, i aplicativ: deoarece pot duce la procese de separare
eficiente ale compuilor biologici. Conform cercetrilor lui Brun,
rezultatele

studiilor

prospective

asupra

membranelor

sunt

remarcabile. Astfel, se poate constata c transportul prin membrane

va ctiga o importan deosebit n tehnologiile biomedicale, n
proiectarea echipamentelor viitoare i n controlul bioreactoarelor. Se
sper c n viitorul apropiat, reaciile chimice se vor efectua prin
membrane de transport folosind sisteme integrate. Cuplnd cele dou
fenomene se pot facilita transformrile chimice, se pot accelera ,
procesele de transport sau procesele pot deveni mai selective.
O dezvoltare major a mecanismelor de transport prin
membrane a fost realizat prin introducerea modelelor naturale care
se bazeaz pe conceptul de recunoatere molecular, preluat din
chimia supramolecular.
Complementaritile structuralo-funcionale dintre molecula
acceptoare

hidrofobic

substratul

complex

pot

duce

la

funcionalitatea supermoleculei lipofilice care asigur transportul

substratului prin mediul organic, acesta funcionnd ca o membran
biologic. Membrana este constituit dintr-o faz lichid organic, de

regul mai dens dect apa (n care transportorul este dizolvat),

dispus ntre dou faze apoase: una care conine specia transportat
definit ca faz surs i cealalt faz care accept specia
transportat definit ca faz acceptoare. Tipurile de membrane care
se folosesc mai des sunt: membrane lichide compacte, membrane din
emulsie lichid ca N.N.Li obinut prin agitare unei emulsii apsolvent organic n faz apoas i membrane lichide depuse pe
materiale polimerice poroase.
Structura fizic i geometria membranelor lichide sunt
importante n optimizarea proceselor de transport. Fluxul de transport
prin membrane lichide i selectivitatea de separare sunt influenate de
factori fizici (natura solventului, viteza de agitare a fazei, temperatura)
i chimici (structura transportului i substratului, reaciile de
complexare i cele de decomplexare la interfaa fazei, gradienii
chimici ca: pH, pX, potenialul redox dintre fazele apoase). Toi aceti
factori influeneaz echilibrul fazei de separare n procesul de
extracie n cele dou faze biofizice ale sistemului lichid-lichid, mai
mult chiar, aceti factori acioneaz asupra sistemelor r membranei pe
ambele interfee, ceea ce complic extracia Iichid-Iichid, dar n
acelai timp multiplic numrul posibilitilor de optimizare a
proceselor de separare. Studiile asupra transportului prin membrane
lichide s-au extins recent i asupra unei categorii de compui naturali
care sunt importani n biochimie i sunt folosii n industriile
farmaceutic, alimentar i n cosmetic - aminoacizii.
n funcie de pH, aminoacizii se pot transforma (n soluie
apoas) n cationi R - NH 3 (R =-CH(R)-COOH), dar i n form
anionic R' - CH(NH2) COO-, ei putnd fi extrai din soluia apoas
n solveni organici ca perechi de ioni, cuplndu-i apoi cu un anion
sau cu un cation adecvat. Prin aceast cuplare, ionii vor poseda un

puternic caracter lipofil necesar deplasrii aminoacidului spre faza

organic. O intensificare a caracterului lipofilic a perechii de ioni
extractibili a fost obinut n aminoacizi utiliznd liganzi macrociclici
neutri, de tipul polieteri coroan care au i ei un pronunat caracter
lipofilic. Aceti Iiganzi pot complexa forma cationic a aminoacidului n
mediul acid pentru a forma un cation complex care, n prezena unui
anion adecvat, este extras i formeaz o pereche de ioni. n mediu
bazic (M+, OH-), ligandul macrociclic formeaz cu cationul alcalin M +
un complex cationic care este extras i cuplat cu forma anionic a
aminoacidului.
Liganzii macrociclici pot aciona i ca molecul acceptoare a
cationilor

organici

sau

anorganici.

Selectivitatea

cavitii

endopolarofilice i a caracterului exolipofilic al liganzilor macrociclici le

ofer acestora bune caracteristici pentru a fi folosii ca ageni selectivi
de extracie i transport prin membrane lichide.

CAPITOLUL I
ETERI COROAN UTILIZAI N CHIMIA ANALITIC
1.1 Consideraii generale
Eterii coroan sunt oligoeterii ciclici ce conin numai atomi de
oxigen drept atomi donori, iar aceast denumire se datoreaz
structurii lor spaiale ce se aseamn cu o coroan.
Primii eteri coroan au fost sintetizai n anul 1967 de C. J.
Pedersen[1] i sunt polieteri macrociclici polidentai caracterizai prin
aceea c au molecule formate din inele constituite din 9 60 de atomi
printre care se afl atomii donori de oxigen sau atomii de oxigen, azot
sau sulf realiznd o structur coroan, cu o cavitate central i o
cochilie hidrofob de natur alifatic sau aromatic.
Primii eteri coroan ce au fost sintetizai de C.J. Pedersen 6
(18C6) i respectiv dibenzo18coroan6 (DB 18C6) contrar
nomenclaturii IUPAC, mai puin sugestiv i destul de complicat,
arat astfel:
Structur

Nomenclatur
IUPAC

1,4,7,10,13,16
hexaoxaciclo
octadecan

2,5,8,15,18,21hexaoxaciclo20,4,0,0,9,14hexacosa1(22),9,11,13,
23,24 haxaen

Nomenclatur
Pedersen

18 coroan 6

dibenzo 18
coroan 6

Notaie
scurt

Noul
sistem

18C6

18O6
coronand6

DB18C6

18O6 (1,2
benzen
22-(1,2
benzen)
22
coronand
5

n nomenclatura utilizat de C.J. Pederson sunt cuprinse:

numrul i tipurile de grupri substituente, numrul total de atomi din
inel i numrul de atomi donori din inel (heteroatomi).
De exemplu, n cazul compusului DB 18C6, dibenzo
desemneaz cele dou inele benzenice anexate nucleului, 18
reprezint numrul total de atomi din inel, urmeaz specificarea clasei
coroan iar numrul 6 reprezint numrul heteroatomilor din inel.
Aceast nomenclatur a lui C.J. Pedersen d o caracterizare
aproximativ a compuilor respectivi, n care atomii de oxigen sunt
legai cel mai adesea, prin puni etilenice, pe care pot fi grefai diferii
substitueni.
Aceast nomenclatur a lui C.J. Pedersen d o caracterizare
aproximativ a compuilor respectivi, n care atomii de oxigen sunt
legai cel mai adesea, prin puni etilenice, pe care pot fi grefai diferii
substitueni.
Notaia lui C.J. Pedersen, dei este sugestiv i foarte simpl,
se poate furniza ns destule informaii n ceea ce privete localizarea
atomilor donori i a substituenilor.
De aceea, s-a propus o nomenclatur mai sistematic, ce se
poate aplica tuturor liganzilor ciclici i neciclici, precum i complecilor
lor.
Aceast

nomenclatur

pstreaz

aceleai

simboluri,

specificndu-se c numrul ce precede parantezele unghiulare

indic mrimea inelului, deci numrul total de atomi n prezena
substituenilor pe inel, se alege calea cea mai scurt spre primul atom
donor.
Parantezele unghiulare conin:

a)

heteroatomii (oxigenul, de exemplu) reprezentani prin

simbolurile elementelor;
b)

punile, lanurile C-C ntre atomii donori, indicate prin

numere ce corespund atomilor donori prin punte, poziia unitilor

punte, de exemplu cea a nucleelor benzenice este indicat prin
numere n paranteze rotunde; se noteaz cu (2) puntea etilen, cea
mai frecvent, dar nu se noteaz dac este prezent numai aceast
grupare n punte sau dac nu afecteaz claritatea notaiei;
c)

numele clasei (coroana);

d)

numrul total de heteroatomi.

n cazul monociclurilor mixte cu oxigen, azot, sulf, ordinea

atomilor donori este dat conform regulilor IUPAC.
Heteroatomii cu puni donoare sunt tratai ca atomi mici:
ordinea segmentelor n lan fr heteroatomi corespunde celei a
heteroatomilor ncepnd cu atomul donor cu prioritate maxim.
Gruprile funcionale i substituente n scheletul de baz sunt
redate prin sufixe i prefixe.

1.2 Tipuri de eteri coroan

Eterii coroan sunt compui macrociclici sintetici fr sarcin
electric, care posed n structura lor legturi simple tip C-C i C-X
(unde X pot fi heteroatomii O, N, S), iar uneori i sisteme de legturi
conjugate cum ar fi ciclul benzenic. Toat aceast structur le confer
o stabilitate deosebit n diferite condiii redox i acido-bazice.
n figura 1.2 sunt descrise diferite tipuri de transportori
macrociclici.

n=1

18C6

dibenzo 18C6

n=2

21C7

(DB 18C6)

Ditio 18C6

Diazol 18C6

(DT 18C6)

Kriptofix [2.2.2]

Kriptofix [2.2]

1.3. Ion selectivitatea eterilor coroan

n principal, stabilitatea eterilor coroan cu ionii metalici este
guvernat de o serie de factori, dintre care amintim:

a) mrimea relativ a ionilor i cavitatea eterilor coroan;

b) sarcin electric a ionilor metalici;
c) tipul, numrul i amplasarea heteroatomilor la locurile lor de
legare n inelul eterului coroan;
d) flexibilitatea conformaional a inelului eterului coroan;
e) interacia ion solvent.
C.J. Pedersen a examinat stabilitatea diferiilor eteri coroan
sintetizai de el prin extracia solventului.
Ion selectivitatea eterilor coroan a fost interpretat de ctre
Pedersen n funcie de mrimea relativ a ionilor metalici i cavitatea
eterului coroan i a constatat c derivaii 12 C 4 prezint
selectivitate la Li+; derivaii 15 C 5 fa de Na+, iar derivaii 18 C
6 fa de K+.
Selectivitatea ionic a eterilor coroan este dependent de toi
factorii menionai anterior, dar adaptabilitatea ionului metalic la
cavitate este un factor foarte important.
Complecii eterilor coroan cu ionii metalici pot fi n raport de
1:1 (inel/ion), dar uneori se formeaz compleci 2:1 cu ionii metalici
care sunt puin mai mari dect cavitatea, exist posibilitatea ca,
uneori, doi ioni metalici s se ncorporeze ntr-o singur cavitate.
A fost sintetizat un eter coroan numit poli sau bis (eter
coroan) la formarea complecilor 2:1, stabili, cu ionii metalici care
sunt mai mari dect cavitatea, prin cumularea activitii a dou uniti
adiacente de eter coroan, prin aceasta dezvoltndu-se o selectivitate
mai mare fa de ionii metalici dect a eterilor coroan monociclici
corespunztori; de exemplu, poli i bis (15 C- 5) prezint
selectivitate fa de K+ dintre ionii metalelor alcaline i derivaii 18 C
6 fa de Cs+.

Derivaii 15 C 5 au o selectivitate mult mai mare fa de

ionul K+ dect derivaii 18 C 6.
Ca o msur a selectivitii ionice poate fi considerat
constant de stabilitate pentru complexarea eterilor coroan cu ionii
metalelor.
Dependena acestei constante de stabilitate de natura
solventului este foarte mare.

1.4. Eterii coroan ca ioni transportori n electrozi ion

selectivi
Funcionarea membranei lichide tip electrod folosind un
transportor neutru poate fi interpretat ca un tip aparte al fenomenului
de transport al ionilor prin ionofori.
Trebuie luate n considerare urmtoarele trei procese ce
trebuie s fie echilibrate pentru ca ionii s fie efectiv transferai:
a) Complexarea ionoforilor i ionilor metalici;
b) Lipofilicitatea corespunztoare trebuie s fie conferit
moleculelor ionofore. Aceasta va spori, ca volumul molecular s
creasc, dar pentru a avea o difuziune uoar (plan) moleculele
ionofore nu vor fi la fel de mari. Apoi n scopul eliberrii rapide a
ionului metalic.
c) Viteza de complexare trebuie s fie mare. Se cunosc
electrozi selectivi de K+ sau NH+4 utiliznd derivai de valinomicin sau
de nonactin cu ionofori naturali existeni. n prezent electrozii
selectivi de K+ comercializai cel mai mult sunt electrozi de tip
valinomicin.
Eterii coroan sunt de asemenea utilizai ca transportori neutri
i performani ai diverselor tipuri de film lichid, tipului de film PVC i

electrozilor mbrcai n srm. Selectivitatea diferiilor electrozi de K +

folosind eteri coroan monociclici este mai mare de 10 -2.
Un complex cu K+ d i derivatul DB 18-e-6 care manifest o
conformaie omogen cu cea a valinomicinei.
Selectivitatea ionic n formarea complexului nafto-15-C-5 nu
este apreciabil, dar n cazul electrodului selectiv de K + folosind acest
eter coroan ca transportor neutru este evident c K KNaPot=210-4
comparabil cu cea a valinomicinei i n primul electrod interferena
pentru Pb+.

n=12
A

n=12
B
Figura 2. Exemple al derivaiilor Bis (eter coroan)
Compusul A (n=11 formeaz rapid un complex similar cu Tl + ca
i cu K+ de asemenea este folosit i ca electrod selectiv pentru Tl +.
Compusul B (n=1) este Bis (eter coroan) descris ca
transportator pentru electrodul selectiv de Na + un complex stabil
intramolecular 2:1 (inel/ion).
Acest electrod selectiv al Na+, dnd o selectivitate ionic
KKNapot=910-3 uor inferioar electrozilor de sticl convenionali are
avantajul de a nu solicita condiionarea periodic care este
indispensabil n rspunsurile, potenialul de stabilitate i durabilitatea
electrozilor de sticl.
Recent s-au descoperit transportori neutri noi care dovedesc
buna selectivitate a Li+ i Ca2+.

1.5. Eteri coroan n cromatografia de lichide

A fost studiat utilizarea esterilor coroan drept component a
fazei mobile n cromatografia de lichide. Pe msur ce eterii coroan
se adaug fazei mobile, n faza invers cromatografic a aminelor
aromatice, aminoacizilor i amidelor, comportarea la separare este
serios

alterat,

depinznd

de

stabilitatea

amidelor

care

nu

interacioneaz puternic cu eterii coroan nu este influenat

cromatograma.
Avnd n vedere c eterii coroan interacioneaz mai puternic
cu ionul de amoniu primar dect cu cel secundar, separarea
amestecurilor primare i secundare este posibil fcnd uz de faza
mobil care conine eter coroan.

CAPITOLUL II
CICLODEXTRINE I CALIXARENE UTILIZATE N COMPLEXAREA
UNOR COMPUI CHIMICI

2.1. Consideraii generale

Ciclodextrinele au fost descoperite n anul 1891 de ctre
Villiers[2] i au fost preparate i separate de Schardinger[3] n anul
1903.
Ciclodextrinele sunt o familie de oligozaharide, obinute prin
degradarea amidonului cu enzima ciclodextrin-transglicozilaza ce
prezint proprietatea de a forma compleci cu o mare varietate de 6,
7 respectiv 8 uniti gluconice per macrociclu. Mrimea cavitii
ciclodextrinelor, ce este dat de numrul de molecule de glucoz
rmas n interiorul coroanei ciclodextrinei, poate fi 4, 5, 7 i 8,5
pentru , respectiv -ciclodextrina. Datorit acestor dimensiuni
diferite ciclodextrinele formeaz compleci cu stabiliti diferite.
Unul dintre cei mai importani factori pentru formarea unui
complex stabil este alegerea corect dup mrime a ligandului n
funcie de ciclodextrin.
n cadrul acestor compleci legtura dintre receptor i ligand
(legturi de hidrogen, fore van der Waals i interaciuni hidrofobe) au
o foarte mare importan n domeniul farmaceutic, n biochimie i
chimie analitic.
n industria farmaceutic ciclodextrinele au fost utilizate ca
solveni,

diluani

ori

ca

ingradient

mrirea

stabilitii

medicamentelor i n mrirea capacitii de asimilare a acestora.

n cadrul metodelor de separare ciclodextrinele sunt utilizate n
cromatografie, electroforez, electroforez capilar.

n industria chimic ciclodextrinele sunt utilizate cu rol de

catalizatori sau aditivi ai catalizatorilor, mbuntind selectivitatea
separrii i purificrii n cadrul proceselor industriale.
Avnd posibilitatea de a solubiliza componenii hidrofobici n
ap, ciclodextrinele pot fi utilizate drept catalizatori de transfer de
faz.
n industria alimentar i cosmetic, ciclodextrinele au rol
important n stabilizarea aromelor i eliminarea gusturilor nedorite.
Aplicaiile ciclodextrinelor n colorani i textile sunt: stabilirea
culorilor, tiprire, vopsele laser, materiale din bumbac parfumate i
noii auxiliari n procesul de vopsire i splare a textilelor.
Au

fost

preparate

numeroase

tipuri

de

derivai

ai

ciclodextrinelor cum ar fi: derivai anhidri, derivai lipofilici, derivai

amilici, rotaxami, polirotaxami.
Pentru msurrile poteniometrice ale puritii efedrinelor n
prezena serului cationic au fost realizai electrozi ion-selectivi cu
peroctilat -ciclodextrin.
n analitic, ciclodextrinele i derivaii lor au fost utilizai pentru
a

mbunti

analiza

prin

metode

fluorimetrice.

Factorii

influeneaz semnalul fluorimetric n prezena ciclodextrinelor sunt:

i)

tipul ciclodextrinei utilizate (, , );

ii)

natura constituenilor ciclodextrinei derivate;

iii)

concentraia ciclodextrinei adugate;

iv)

temperatura;

v)

prezena altor aditivi.

ce

2.2. Structura i proprietile ciclodextrinelor

Este bine tiut c cea mai important proprietate a
ciclodextrinelor este abilitatea lor de a forma compleci cu un numr
mare de compui organici i anorganici de natur neutr sau ionic
cu gazele nobile, ambele n stare de agregare solid i n soluii.
Structura complecilor ciclodextrinei cu variai compui a fost studiat
cu ajutorul radiaiilor X i monocristalelor.
Ciclodextrinele au un exterior hidrofil i o cavitate hidrofob
capabil s extrag un numr mare de liganzi n funcie de mrime,
form i hidrofobicitate att a ligandului ct i a ciclodextrinei. Factorii
sterici sunt importani n formarea i stabilitatea complecilor
ciclodextrinei, structura ciclodextrinelor a fost studiat att n faz
solid ct i n soluie. Proprietile caracteristice ale ligandului, ca
solubilitate, reactivitate, valorile pKa, difuzie, proprieti electrochimice
i proprietile spectrale se schimb.
Unele proprieti, ca de exemplu solubilitatea n mediu apos
(14,5; 1,85 i 23,2 g/100 ml pentru , i -ciclodextrin),
hidrofobicitatea cavitii, structura rigid i chiralitatea, care este
foarte important, au un mare impact n aplicaiile ciclodextrinelor.
Ciclodextrinele sunt stabile n soluii alcaline, dar sunt susceptibile la
hidroliza acid depinznd de temperatur i aciditate. Ciclodextrinele
pot forma supramolecule diastereoizomerice. Aceast proprietate
confer ciclodextrinelor posibilitatea de a fi folosite n chimia analitic
pentru enantioseparaii. Stereoselectivitatea ciclodextrinelor prin
complexare a fost descoperit de Cramer[4]. Deci, ciclodextrinele au
abilitatea de a separa nu numai molecule de diferite forme sau
mrimi, dar i antipozi optici.

Ciclodextrinele au fost folosite ca model la complecii cu

substrat enzimatic, pentru c ele pot forma compleci n soluii
apoase.
n

soluii

apoase,

ciclodextrinele

pot

primi

liganzi

corespunztori ca i compuii aromatici, acizi carboxilici, azo-derivai

i ali compui cu care formeaz compleci. n general, raportul
stoechiometric al ligandului, n soluii este de 1:1, 2:1 i 2:2. Un numr
mare de cercetri, au utilizat tehnica folosit pentru studierea
fenomenului de incluziune, spectometrie, titrimetrie calorimetric,
spectroscopie

fluorescent,

dicrosim

circular,

poteniometrie,

spectrometrie RMN, HPLC i inhibiia cinetic. Cea mai folosit

metod instrumental pentru studierea complecilor ciclodextrinelor
cu diferii liganzi este RMN-ul, pentru c aceast metod are
posibilitatea s furnizeze date despre structura complecilor. Aceast
metod arat i diferena dintre incluzie i interacii externe; efectul
nuclear overhauser poate juca un rol important n priceperea
mecanismului

de

recunoatere

chiral

folosind

ca

liganzi

ciclodextrinele. Ciclodextrinele pot forma compleci cu compui

complicai, ca de exemplu compui de tip compleci metalici i
polimeri cu selectivitate ridicat.

2.3. Cteva aplicaii ale ciclodextrinelor n procesele de

separare
Diversitatea aplicaiilor implicnd ciclodextrinele are un impact
deosebit n procesele de separare (n separri enatiometrice, faze
unite combinate, HPLC, faze staionare n cromatografia de gaz),
spectroscopie i analize electrochimice (electrozi cu membran,
polorografie

voltametrie).

Hinze[5]

prezentat

aplicaiile

ciclodextrinelor n separrile cromatografice i n metodele de

purificare.
n

chimia

analitic

ciclodextrinele

sunt

folosite

pentru

enantioseparri n cromatografia de gaz, cromatografia de lichide de

nalt performan, cromatografia de fluid supercritic i electroforeza
capilar. Ciclodextrinele conin faze mobile folosite pentru separri
enantiometrice la diferii compui chirali ca: barbiturice, fenilalanina,
-piren, pseudoefedrine.
Un numr mare de aplicaii interesante au fost publicate
despre recunoatere chiral a derivailor cationici i aminoacizi ai
ciclodextrinelor. Derivaii cationici ai ciclodextrinelor coninnd grupri
amino i alchilamino au fost utilizai ca selectori chirali n electroforeza
capilar. O cercetare mai detaliat a derivailor ncrcai cu sarcin ai
ciclodextrinelor folosii ca selectori chirali n enantioseparare prin
electroforeza capilar a fost fcut de CHANKVETADZE[6] i alii. Ei
au stabilit c derivaii ionici ai ciclodextrinei, n special ciclodextrin
alchil-sulfaii, manifest o abilitate de recunoatere chiral pentru
compui bazici (factorul cel mai important n acest proces este
mobilitatea mare, opus curentului, a selectorului chiral) i compui
neutri racemici. Pentru enantiosepararea moleculei de thalidomid i
metaboliilor ei neutri s-a folosit ca selector chiral carboximetil-ciclodextrina. Folosind ciclodextrina ca selector chiral n electroforeza
capilar este posibil separarea enantiomeric a unei varieti de
compui chirali ca DL triptofan i () epinefeine, norefedrine,
norepinefeine i propanol.
Este tiut faptul c ciclodextrinele i formele derivate formeaz
compleci cu aminoacizii aromatici sau cu oligopeptidele acestora. n
interacia proteine-peptide cu ciclodextrinele responsabile sunt

rmiele aminoacizilor aromatici. Aplicaii ale ciclodextrinelor n

msurtorile

analitice

de

fluorescen

au

fost

studiate

de

YAMASHOJI[7] i alii. Ei au determinat constantele de formare a

complecilor, 1:1 a ciclodextrinelor cu aminoacizi, cu derivai ai
aminoacizilor, folosind fluorescena, spectroscopic prin ecuaia
BENESI-HILDEBRAND[8]. Un efect special al ciclodextrinelor asupra
intensificrii chiruiluminescenei a fost prezentat de KARATANI[9].
Astfel, aminele biologice, aminoacizii, peptidele, catecholaminele i
compui steroidici, pot fi determinai i separai ca i derivaii lor
dansyl.

2.4. Folosirea ciclodextrinelor n separare prin membrane

Datorit abilitii de a forma compleci de incluziune cu un
numr mare de molecule organice, ciclodextrinele pot fi utilizate n
procesele de separare prin membranare.
Mai muli autori au relatat modificarea membranelor la
introducerea oligomerului ciclodextrin i influena lor asupra separrii
i abilitatea catalitic. Aciunea catalitic a ciclodextrinelor asupra
hidrolizei esterilor n sisteme omogene (ciclodextrinele fiind dizolvate
n mediul de reacie) sau ciclodextrin imobilizat n membran de
etilen-vinil alcool (copolimer),

a fost de asemenea studiat.

Ciclodextrinele n membrane groase lichide, au fost folosite pentru

determinarea constantelor de asociere a compuilor ciclodextrinhidrocarbur aromatic.
2.4.1. Membrane lichide cu ciclodextrine

Procesul de separare prin membrane lichide este o tehnic

eficient

pentru

separarea

selectiv,

pentru

purificarea

concentrarea compuilor chimici i biologici. Membranele lichide

folosite la separarea unor compui au avantajul de transport sporit
(intensificat) prin folosirea unui purttor selectiv anionic sau cationic
dizolvat ntr-un solvent organic.
Separarea enantiomerilor poate fi realizat folosind membrane
lichide cu transportori chiralici. Abilitatea de incluzie a cavitii
ciclodextrinelor pentru muli compui formnd compleci a fost
utilizat la membrane lichide.
Folosind transportul hidrocarburilor aromatice (orto, meta,
paraxilen, naftalin, antracen i piren) de la o faz hexamic la alta
prin faza apoas cu -ciclodextrina i -ciclodextrina, POH a
determinat constantele de asociere a complecilor ciclodextrinhidrocarbur

aromatic.

Valorile

constantelor

de

asociere

complecilor 1:1 formai, coincid cu cele determinate prin alte metode.

2.4.2. Membrane polimerice coninnd ciclodextrine pentru
separarea izomerilor
Procesele de pervaporaie i de osmoz reversibil sunt
folosite ca i membranele polimerice pentru separarea soluiilor
organice apoase. Caracteristicile separrii i infiltrrii izomerilor
organici lichizi, ca de exemplu solubilitatea infiltrantului n membran
i difuzivitatea infiltrantului n membran prin diferite membrane
polimerice cu ajutorul pervaporizrii, au fost studiate de muli
cercettori.
Studiile asupra separrii izomerilor xilenului prin membrane
polietilenice prin pervaporaii au sugerat c separarea acestor

compui prin membrane polimerice obinuite nu este selectiv.

Factorul de separare care caracterizeaz astfel de separaii este
foarte mic din cauza proprietilor chimice i fizice similare ale
izomerilor. Factorii de separare pentru izomerii xilenului prin
membran din esterul celulozei sunt ntre 1,16 i 1,73. Rezultate
asemntoare au fost obinute n separarea izomerilor aromatici cu 8
atomi de carbon prin diferite membrane polimerice comerciale.
Posibilitatea imobilizrii liganzilor pe membranele polimerice a
oferit unele avantaje n procesele membranare. Este tiut c
ciclodextrinele au abilitatea de a separa antipozi optici. Astfel
separarea

unor

izomeri

cu

membrane

polimerice

coninnd

ciclodextrine devine o posibilitate atractiv.

LEE[11] a studiat caracteristicile pervaporizrii a membranelor
celulozice coninnd ciclodextrin pentru amestecurile de izomeri ai
xilenului. n acest caz selectivitatea este n ordinea pmo derivai.
Rezultatele au artat c selectivitatea a fost mbuntit de prezena
ciclodextrinelor n membran. HIRAI[12,13] a preparat membrane cu
ciclodextrine ncruciate i le-a folosit n dializ. Studiile lor au
demonstrat

utilitatea

ciclodextrinelor

separarea

diferitelor

amestecuri lichide.
Separarea optic a aminoacizilor a fost fcut folosind
membrane polimerice cu ciclodextrine. MIYATA[14] a preparat
membrane poli (vinil alcool) (PVA) coninnd ciclodextrine
(membran PVA-CD) i a studiat caracteristicile permeabilitii i
separrii izomerilor propanolului (PrOH) prin aceste membrane prin
operaiile de pervaporaie i evaporare. Evaporarea ca o nou tehnic
de separare prin membran mbuntete dezavantajele create de
perevaporare. n figura se arat posibilitatea interaciei dintre
infiltrant i ciclodextrin n cele 2 metode de separare prin membran,

pervaporare i evaporare. Rezultatele obinute folosind pervaporarea

n separarea izomerilor propanolului PrOH a demonstrat c
evaporarea a fost mai eficace pentru separarea izomerilor prin
membran PVA-CD ca i pervaporare.

Figura 4. Ilustrarea schematic a interaciilor dintre infiltrant

(n-PrOH; i-PrOH) i cilcodextrin prin pervaporare i evaporare
Permeabilitatea i selectivitatea n-PrOH au fost mbuntite
prin mrirea cavitii de ciclodextrin n membran. n acest
experiment s-a remarcat o mai mare afinitate a ciclodextrinei pentru
n-PrOH dect i-PrOH.
2.4.3. Membrane polimerice coninnd ciclodextrin pentru
separarea amestecurilor alcool-ap
Cea mai eficace operaie membranar folosit pentru
separarea amestecurilor lichide este pervaporarea. Pervaporarea
este o separare lichid/vapori n care un fluid este parial vaporizat
printr-o membran dens. Aceast operaie este folosit n principal

pentru deshidratarea alcoolului azeotrop. Fora conductoare este

diferena de activitate de-a lungul membranei. Folosirea membranelor
polimerice noi i membranelor ceramice, folosirea reactivului
ncruciat n prepararea membranelor poli (vinil alcoolice), cologenii
ncruciai sau fibrele complexe poliionice goale, sunt cteva exemple
de sisteme folosite n pervaporaie.
YAMASAKI[15] i alii au abordat o metod conservabil
pentru

prepararea

oligomerul

membranei

-ciclodextrin

poli

(vinil

alcoolice)

au

demonstrat

coninnd

caracteristicile

pervaporrii pentru amestec etanol/ap (figura 5).

Figura nr. 5 Structura ciclodextrinei (CD) folosit n prepararea

membranei de PVA/CD poli (vinil alcool) coninnd oligomerul
ciclodextrin.
Rezultatele au artat c ciclodextrina a mrit permeabilitatea
apei i a micorat-o pe cea a etanolului la concentraii mici de etanol.
Pentru concentraii mai mari de etanol, ciclodextrina a micorat
ambele permeabiliti, dar creterea n etanol a fost mult mai mare.
Aceste rezultate pot fi explicate prin puterea de ptrundere a

complecilor ciclodextrinei, apei i etanolului. Creterea selectivitii

membranelor PVA poate fi realizat prin modificarea cu ciclodextrine
i folosind diferena dintre puterile de ptrundere ale apei i alcoolului.
O serie de alte rezultate au artat c la concentraii mari de alcool,
selectivitatea apei a fost mrit de ciclodextrin pentru toate
amestecurile

urmtoarea

propanol/ap>etanoli/ap.

La

secven:
concentraii

2-propanol/ap>1mici

de

alcool

permeabilitile apei pentru propanol/ap au fost uor mrite, pe cnd

cele pentru etanoli/ap au crescut mult.
Toate aceste efecte sunt interpretate ca proprieti ale
ciclodextrinelor.
Concluzii
Ciclodextrina i derivaii ei a fost folosit n procesele de
separare prin membran, deoarece poate mbunti selectivitatea
separrilor din cauza abilitii acesteia de a forma compleci de
incluzie cu un numr mare de compui organici i anorganici. Un alt
domeniu de interes pentru cercetare este selectivitatea chiral.
Ciclodextrinele pot fi folosite pentru separarea amestecurilor racemice
prin membrane polimerice.

2.5. Complexarea aminoacizilor cu calixarene sulfonate

hidrosolubile ca studiu al unui posibil mecanism de
recunoatere a calixarenelor sulfonate de ctre proteine
Calixarenele sunt cea de a treia clas major de sisteme de
baz supramolecular, mpreun cu eterii coroan i ciclodextrinele.
SCHNEIDER[17] i colaboratorii au artat c, calixarenele derivate de
la rezorcinol formeaz compleci cu ionii organici de amoniu.

Densitatea sarcinii i mrimea calixarenelor p-sulfonate fac din

acestea candidate excelente ca simulatoare de heparin n vederea
observrii diferenei ntre etapele de sintez ale derivailor sulfonai
(trei etape) i cele ale pentazaharidei heparinice (peste cincizeci de
etape). Au analizat aceast simulare a heparinei respectnd plierea
peptidelor chiar i n interaciile protein-protein. n acest scop au
cercetat bazele fundamentale ale interaciilor dintre calix [4] arenele
sulfonate (1), calix [6] arenele (2), calix [8] arenele (3) cu reziduuri de
aminoacizi bazici, arginin (4) i lizin (5), cunoscui pentru
capacitatea lor de fixare electrostatic asupra fragmentului de
heparin (figura 6).

Figura 6 Structura calix[4] arenei (1), calix[6] arenei (2),

calix[8] arenei (3) p-sulfonate; argininei (4) i lisinei (5)

Din considerente pur electrostatice nu s-a observat nici o

interacie la pH 13 deoarece compusul gazd nu formeaz sarcini
pozitive care s se lege la sarcinile negative din compusul oaspete.
n cazul 2 i 3 s-au putut observa variaii mici pentru lizin i
arginin la pH 1 i particular la pH 5. Acestea pot fi atribuite
interaciilor electrostatice ntre aminoacizi i sistemele gazd. Aa
cum s-a artat de GUTSCHE i BAUER[18], 2 i 3 adopt o
conformaie planar n dezvoltare, iar geometriile lor foarte flexibile nu
prezint o cavitate predefinit a elementului de baz cum exist n 1.
Din acest motiv se poate forma doar legtur simpl la feele
ncrcate negativ.
S-a descoperit c n soluie apoas 1 adopt o conformaie
conic, probabil fixat ca un rezultat a unei legturi de hidrogen
intramoleculare foarte puternice ce implic gruprile O - i OH ale
unitilor fenolice. La pH 1 i 5, legarea lui 1 la lizin i arginin
cauzeaz schimbri mari n transformrile chimice ale proteinelor din
lanurile laterale de aminoacizi. Toate picurile se transfer la un cmp
magnetic mai mare cu o cretere a concentraiei colixarenei.
Transferurile cresc de-a lungul lanului, indicnd c aminoacidul este
inclus n cavitatea lui 1 i afectat de curentul ciclului componentelor
aromatice (figura 3 a) b)).
Folosirea unui model molecular (ALCHEMY) a artat c,
cavitatea lui 1 poate conine grupri terminale de arginin i lanurile
laterale din 2 aminoacizi.
Stoechiometria este 1:1 pentru toi complecii, fapt confirmat
prin diagrama lui JOB. Constantele de legtur pentru arginin sunt
mai mari dect pentru cele ale lizinei dup cum reiese din interaciile
- dintre funciunile guanidinice i gruprile aromatice ale lui 1.

Complexarea este condus prin efecte electrostatice. Titrrile

se desfoar n prezena srurilor metalice (K +, Na+, Mg2+ i Ca2+) la
concentraii metalice mari (>100 mM) ceea ce arat c nu au loc
schimbri n transformrile chimice. Aceast situaie este tipic pentru
interaciile electrostatice nespecifice dintre liganzi i receptorii
peptidici. Exist o recunoatere pH-selectiv a lui 1 pentru aminoacizii
cu legturi mult mai puternice n condiii neutre, dect n condiii
acide. Acest fapt are importante implicaii biologice; valori sczute ale
pH-ului se gsesc n stomac i vezicule, n timp ce un pH 6-7 este
fiziologic. Posibil c exist o rotire ntre poziiile de recunoatere de
pe suprafeele proteinelor legate de 1 care va depinde acum de
localizarea biologic.
Din acest motiv exist dou mecanisme de legare a resturilor
de aminoacizi pozitivi la calix-arenele p-sulfonate, incluziunea etan
n cazul lui 1 i legarea mult mai slab a resturilor fa n fa pentru 2
i 3. Astfel de mecanisme de legare diferit se transpun n diferite
efecte biologice, referitoare la legarea peptidelor receptoare de
heparin. Rezultatele preliminare au condus la concluzia c inhibiia
colagenului XIV legat la catena lateral a dermaton sulfat decorinului,
este un proces ce inhib heparina care se realizeaz n ordinea
1<23.

2.6. Incluziunea succesiv a apei, [H3NCH2CH2NH3]2+ i

[H3NCH2CH2NH2]+ n cavitatea aromatic a calix [4]
arenelor p-sulfonate
Cavitatea bogat n electroni a calix [4] arenelor p-sulfonate
hidrosolubile [H8L] reprezint un sistem pentru studierea interaciilor
speciilor de tipul apei sau cationilor cu jumtile aromatice ce sunt

implicate n multe procese de recunoatere att n biologie ct i n

chimie. Dependena de pH a acestui fenomen de incluziune a fost
interpretat n termenii interaciilor electrostatice n soluii neutre sau
repulsii hidrofolice n soluii acide.

H8L
Figura nr. 7
n absena compuilor oaspete hidrofolici, prezena apei n
interiorul [H4L]4- poate fi relevat prin cristalografie cu raze X.
Legturile de hidrogen din ciclul aromatic dintre oaspete i gazd
ajut n mod clar la stabilizarea acestui complex molecular. Nu exist
alte exemple de astfel de incluziuni a apei n calixarene dar, s-au
observat alte tipuri de legturi de hidrogen neclasice la formarea
contactelor C-H n compuii moleculari ai O-C 2B10H12 n CTV i
calix [5] arene, precum i CH2Cl2 n [HNMe3]2[(tBn-calix [4] arene)Al2].
O alt particularitate foarte interesant a derivailor H 8L n
stare solid este o structur a nveliului foarte bine ordonat care
deseori determin atribuirea denumirii de pmnt organic. Am
prezentat aici sinteza n prezena unui posibil oaspete organic a
[H3NCH2CH2NH3]2-[H4L(H2O)3]H2O, a compusului molecular [H4L]4- i
ap. Apa este eliminat din cavitate prin deprotonarea unui dintre
atomii

de

oxigen

[H3NCH2CH2NH3]2+

fenolic

ai

formnd

macrocidului

nlocuit

cu

[H3NCH2CH2NH3]1.5[(H3L)

H3NCH2CH2NH3]H2O5.5. Adugarea unui exces de etilen diamin

permite

amestecarea

srii

organice

[H3NCH2CH2NH3]2[(H3L)

NH3CH2CH2NH3](H2O)4.5, unde monocationul [H3NCH2CH2NH3]+ este

inclus n cavitatea calixarenei prin contactele aromatice N-H.
Studiile RMN au artat c acest fenomen de incluziune persisit n
soluie.

Structura cristalin

a complecilor

moleculari

a fost

determinat, incluznd primul dication i prima legtur de hidrogen

aromatic neclasic N-H n cavitatea calixarenei. Straturile
organice observate n stare solid sunt legate prin legturi de
hidrogen de ambele capete ale dicationului organic, rezultnd o nou
clas de pmnturi organice-organice.
Tratarea [H8L] cu doi echivaleni de etilendiamin n ap
permite precipitarea srii etilendiamoniu organic sub forma unui solid
alb:
H 8 L 2H 2 NCH 2 CH 2 NH 2

H2 O

[H 3 NCH 2 CH2 NH3 ] 2 [(H 4 L)(H 2 O) 3 ]

Structura molecular a compusului cristalin arat prezena

moleculelor de ap interiorul calixarenei.
Formarea compusului ce include ap este mult mai favorabil
iar, analizele elementare ale lui 1 uscat confirm prezena celor trei
molecule de ap, indicnd faptul c compusul molecular este mai
stabil. Acest rezultat este oarecum contradictoriu cu acceptarea ideii
c clustele de ap, asigur o mic hidratare la introducerea liganzilor
nepolari n interiorul cavitii aromatice a sistemelor biologice.
Dac 2,5 echivaleni de etilentiamin sunt adugai la H 8L, o
jumtate fenolic este deprotonat din centrul calixarenei, permind
formarea unei soluii galben pal de sare organic.
H8 L 2.5H 2NCH 2 CH 2NH 2

H2 O

[H 3 NCH 2 CH 2NH3 ]1.5 (H3 L)(H3 NCH 2 CH2NH 3 )

Reeaua de legturi de hidrogen produce mpachetarea

nveliului calixarenei ducnd la o cretere a stratului organic, mrime
mai mic dect cea gsit pentru un material de tip argilos al calix [4]
arenei p-sulfonate.
Dicationii [H3NCH2CH2NH3]2+ leag straturile calixarenei n
reea, iar cationii [H3NCH2CH2NH3]+ formeaz dinuri. Structura
materialului de tip argilos organic-organic face s par c de pinde de
numrul de molecule organice incluse n mpachetare.[19]

2.7. Complexarea L--aminoacizilor naturali prin calix [4]

arene solubile n ap
Recunoaterea selectiv a substanelor organice de interes
biologic, cum ar fi zaharurile i aminoacizii, prin receptori sintetici,
reprezint un interes major n chimia bioorganic i supramolecular.
n trecut erau folosite calixarenele i ciclofanii solubili n ap, pentru a
include specii ncrcate sau nencrcate, ns s-au obinut foarte
puini receptori de sintez ce complexeaz aminoacizii n soluii
apoase.
Tetrasulfonatocalix [4] arena 1, mobil conformaional este
capabil s formeze compleci de incluziune cu cteva specii
ncrcate sau nencrcate, att n stare solid ct i n ap. n
particular s-a artat c 1 este capabil s complexeze ionul trimetil
anilina (TMA) ntr-un mod neselectiv la pD=7,3.
Complexarea

L--aminoacizilor

are

loc

prin

inserarea

gruprilor aromatice sau alifatice (R) n interiorul cavitii calixarenei.

Acest fapt pare s fie determinat de necesitatea gruprilor
nencrcate ale aminoacizilor de a iei din cavitatea colixaremic
apolar pentru a fi expuse la un mediu polar.

Interesant este c L-Ala nu a fost complexat prin elemente de

baz. O posibil explicaie este aceea c, datorit mrimii mici a
gruprii metil (R), L-Ala ar trebuie s implice i ncapsularea gruprilor
amino cu sarcin pozitiv n interiorul cavitii hidrofolsice. Nu s-a
observat nici o incluziune pentru L-Tyr.
Compusul 3 cruia i lipsesc ruprile sulfonate din marginea
superioar nu complexeaz nici unul din aminoacizii cercetai. Acest
rezultat confirm importana prezenei sarcinii n legarea apolar a
musafirilor n interiorul cavitii calixarenei. Elementul de baz 5,
care prezint patru grupri sulfonate la marginea superioar nu
prezint nici o abilitate de incluziune. L-His este complexat doar prin
compusul 1 cu conformaie mobil, n timp ce compusul 4 nu
complexeaz nici L-Val i nici L-His prezentnd o mai mic eficien
fa de aminoacizii cercetai. Cei mai eficieni receptori pentru
aminoacizi sunt sulfonatocalix [4] arenele 1 i 2 care au o eficien
comparabil, dei compusul n form conic este mai puin eficient n
recunoaterea L-Leu.
n toate cazurile incluziunea aminoacizilor are loc printr-un rest
alifatic sau aromatic i se face corespunztor interaciilor CH- (LLeu, L-val) i interaciilor - (L-Phe, L-His, L-Trp).[20]

CAPITOLUL III
COMPLEXAREA UNOR COMPUI AMINICI CU RECEPTORI
MACROCICLICI

Aminele sunt printre cele mai importante molecule din sistemul

natural viu. Multe amine active biologic conin amoniu substituit. n
biologia molecular, studiul compuilor cu amoniu substituit este o
problem important pentru nelegerea interaciilor dintre moleculele
biologice i aplicaiile lor n metodele de separare.
Multe studii se bazeaz pe designul i sinteza unei mari
varieti de macrocicli funcionali ca eterii coroan, azoeterii coroan,
criptonzii

calixarenele,

care

sunt

capabili

recunoasc

manifestarea activitii catalitice de interes biologic a amoniului gazd

(aminoacizi i peptide). Proprietile de atracie ale receptorilor
macrociclici sintetici, ce sunt capabili s formeze compleci cu
numeroi compui prin interacii noncovalente sunt utilizate pentru o
mai bun nelegere a fenomenelor date de specificitatea biochimic,
n special n domeniul recunoaterii moleculare.
Liganzii macrociclici sunt capabili s formeze compleci stabili
i selectivi cu substratul potrivit prin legturi de hidrogen, interacii
ionice i/sau interacii hidrofobice. Forele care contribuie la
stabilizarea complexului format ntre gazda macrociclic i oaspete
sunt de natur noncovalent. Acetia au fost utilizai intensiv la
separarea selectiv a cationilor metalelor alcaline i alcalinopmntoase, a ionilor metalelor grele i a compuilor amoniului din
amestecul format cu solveni de extracie sau membrane lichide.
[21,22]
n chimia supramolecular, membranele lichide sunt utilizate
frecvent la evoluarea proprietilor de complexare i transport a
receptorilor. Membranele lichide folosite la separarea aminoacizilor i

peptidelor au avantajul unui transport intensificat dat de utilizarea

unor transportori selectivi de form cationic dizolvai n solveni
organici. Transportorii utilizai au n compoziia lor i ligandul
macrociclic. Apropierea de modelul sistemului de transport biologic
necesar pentru enantiomerii aminoacizii poate fi realizat prin
utilizarea membranelor lichide ce conin eteri coroan chirali.
Separarea compuilor optic activi prin membrane lichide este de un
interes deosebit n momentul de fa.
Calixarenele derivate, binecunoscui receptori, sunt capabile
s interacioneze cu molecula gazd organic i s formeze
compleci cu cationii cuaternari de amoniu.
Importana extraciilor lichid-lichid este dat de separrile de
ioni. Factorii care pot influena interfaa lichid-lichid n sistem bifazic
sunt:

tensiunea interfazic, potenialul i viscozitatea. Pentru

studierea structurii interfeei dintre doi solveni nemiscibili se utilizeaz

metode spectrscopice. Unul din cele mai importante proprieti ale
liganzilor (calixarene, criptanzi, eteri coroan) ca molecule extractante
este afinitatea lor pentru interfaa i comportarea lor ca surfactani.

3.1. Complexarea unor compui aminici cu eteri coroan

Este bine cunoscut faptul c mrimea inelului, natura i poziia
atomilor donori a eterilor coroan au o mare influen la formarea
complecilor cu diferii compui. Influena diferiilor eteri coroan (18C
6, 15C 5, B18C 6) asupra complexrii cu amine neprotonate (nbutilamin, n-dibutilamin i N-metilbenzilamin) n metanol a fost
studiat prin titrri colorimetrice. Valorile constantelor de stabilitate
obinute sunt aproape identice. Complexarea 15C 5 cu aminele
menionate este favorizat de contribuia entropic. n cazul 18C 6,

valorile mari ale entalpiilor au fost obinute pentru amine primare, iar
pentru aminele secundare s-au obinut valori mici. Complexarea
aminelor primare cu 18C 6 este favorizat de contribuia entropic. n
cazul aminelor secundare complexarea cu 18C 8 este favorizat de
contribuia entropic i defavorizat de contribuia entalpic. Utiliznd
B 18 C 6 valorile entalpiei sunt mai sczute dect n cazul complexrii
cu 18 C6. Acest fapt poate fi explicat prin bazicitatea sczut a celor
doi atomi donori de oxigen ataai de gruparea benzo a eterului
coroan B18C6.
Randamentul transportului aminelor studiate utiliznd 18C6,
B18C6 i DB18C6 ca transportori prin membran lichid de 1,2dicloretan, este relativ sczut, ntre 25 40% pentru metilamin i npropilamin cu B18C6 i 19 25% pentru dietilamin i n-propilamin
cu DB18C6. Transportul aminelor depinde de transportul utilizat, de
cation i anion.
Un aspect interesant privind complexarea diferiilor eteri
coroan i aminobenzoeteri coroan const n posibilitatea formrii
unor agregate de eteri coroan amina substituit prin complexarea cu
aminobenzo eteri coroan protonai n soluie. O grupare amino
protonat de la un aminobenzoeter coroan este complexat cu
partea de eter coroan a unui alt aminobenzo eter coroan. n cazul
aminobenzo 18C6, autocomplexare este puternic.
Aminoacizii sunt componeni importani ai proteinelor i au o
importan deosebit n cadrul sistemelor naturale vii. Proprietile lor
chimice i fizice, ambele de interes n biologie i farmacie trebuie bine
cunoscute pentru a nelege mecanismul reaciilor din cadrul
proceselor n care sunt implicai.
Valorile constantelor de stabilitate, entalpiilor i entropiilor au
fost determinate pentru complecii formai de unii aminoacizi (L--

alanina, L-cisteina, glicina, L-leucina, L-izoleucin, L-metionin, Lfenilalanin, L-serin, L-valin i L-triptofan) cu receptori macrociclici
(18C6 i B18C6) n metanol. Comparnd constantele de stabilitate
pentru reaciile aminoacizilor cu eter coroan 18C6 cu cele obinute la
reaciile dintre aminoacizi i B18C6 se observ c valorile acestora
sunt aproximativ egale sau n cazul B18C6 un pic mai mici. Valorile
entalpiilor sunt mult mai mici pentru reaciile cu 18C6, dar sunt
compensate de componenta entropic. n general aminoacizii
manifest caracter amfionic n medii apoase neutre. n soluii cu
metanol, aminoacizii se gsesc n form amfionic, iar concentraia
acesteia poate fi influenat de condiii acide, neutre sau bazice.
Anumite aspecte experimentale au fost studiate din punctul de vedere
al ambilor solveni de extracie i al transportului aminoacizilor
macrociclici (18C6, B18C6 i DB18C6) n 1,2-dicloretan. Rezultatele
sugereaz o bun corelaie ntre proprietile structurale ale
aminoacizilor i caracteristicile fizico chimice.
Distribuia unor compleci formai de -aminoacizi cu 18C6 i
a ionului pereche n sistemul bifazic ap/1,2 dicloretan a fost corelat
cu proprietile aminoacizilor (hidrofobicitate, constante de aciditate
pKa1, pKa2 i pI) utiliznd analiza de regresie liniar i multiliniar.
Corelaia dintre constantele de extracie n sistem bifazic i
hidrofobicitate aminoacizilor, log P (hidrofobicitatea se exprim ca un
logaritm al coeficienilor de repartiie dintre 1-octanol i ap) este
prezentat n Figura 8.

6.0
18C6
DB18C6

DL-Trp

5.5

L-Leu

log Kex

L-Phe

L-Met

5.0

L-Phe

4.5

L-Leu

L-Val
L-Met

4.0

Gly
L-Val

3.5

DL-Trp

Gly

3.0

-3.0

-2.5

-2.0
x

-1.5

log P

Figura 8 Corelaia dintre constantele de extracie i hidrofobicitatea

aminoacizilor

L-Met

80

L-Leu

L-Val
L-Ala

70

Transport (%)xx

L-Phe

18C6
B18C6
DB18C6

60

L-Phe

50
L-Val

L-Leu

L-Phe

L-Met

40
L-Ala
30

L-Val

L-Met

L-Ala
-3.0

-2.5

-2.0

-1.5
x

log P

Figura 9 Relaia dintre hidrofobicitate i randamentul transportului prin

membrane lichide

Dup cum se observ n Figura 8, exist o bun liniaritate

ntre

valorile

constantelor

de

extracie

ale

aminoacizilor

hidrofobicitatea lor, atunci cnd se utilizeaz 18C6 i DB18C6 drept

extractani. Figura 9 prezint relaia dintre valorile obinute la
transportul aminoacizilor prin membranele lichide utiliznd ca
transportori 18C6, B18C6 i DB18C6 i hidrofobicitatea, logP.
Rnadamentul transportului aminoacizilor cu 18C6 ca o funcie a
hidrofobicitii lor se prezint n urmtoarea ordine:
L-Phe L-Leu L- Met L- Val L- Ala.
Se poate observa o bun corelaie ntre transportul unor
aminoacizi i hidrofobicitatea lor n cazul n care se utilizeaz ca
transportori prin membrane lichide att B18C6 ct i DB 18C6, dar
valorile obinute vor fi mai mici dect n cazul utilizrii 18C6.
Dezvoltarea receptorilor sintetici pentru peptide i aminoacizi
derivai a divinil i mai important deoarece studiul interaciilor
intermoleculare prin comlecii mici de tip molecul peptid conduce
la nelegerea multor interacii biologice de tip peptid protein.
Lipkowski[23] i colab. a studiat termodinamica complexrii unor
peptide mici cu 18C6 n ap. Utiliznd difractometria cu raze X asupra
complecilor peptidelor amfionice cu 18C6 s-a artat c aceti
compleci se formeaz prin legturi de hidrogen. Au fost studiate i
unele date experimentale (constante de stabilitate, entalpii i entropii
ale reaciilor) obinute la complexarea glicil L leucinei, ce are ca
solvent de extracie metanolul, cu 18C6, B18C6 i DB18C6, n
prezena ionului picrat, n 1,2 dicloretan. Structura ligandului,
constantele de stabilitate, constanta de extracie i natura solventului
au fost interpretate i comparate cu valorile corespunztoare
aminoacizilor ce au format aceast peptid. n tabelul 4 sunt

prezentate constantele de extracie ale Gly-L-Leu n 1,2-dicloretan cu

18C6, B18C6, Db 18C6 i criptand [2.2.2], utiliznd acid picric.
Tabel nr. 4 Constante de extracie ale glicil leucin n 1,2 dicloretan
cu liganzi macrociclici.
log Kex
Liganzi
L-leucina
glicyl-L-leucina
5,260,02
5,760,01
18C6
B18C6
5,050,3
4,300,05
4,890,07
4,150,05
DB18C6
[2.2.2]
5,100,2
4,430,04
-3
-2
-3
Cligand=2,5x10 -10 M; Cpeptide=1,0x10 M; [acid picric]=8,0x10-5M;
Caminoacid=6,0x10-4M; pH2,02 Temperatura:251C
Cel mai eficient ligand dintre cei testai pentru Gly-L-Leu este
18C6. parametri care influeneaz procesul de extracie al Gly-L-Leu
cu liganzi macrociclici sunt urmtorii: natura cationului, forma i
mrimea complementar a ligandului cu ionul marginal, dimensiunea
anionului i tipul atomului donor.
Tabel nr. 5 Constante de stabilitate i parametri termodinamici H i
TS pentru complexarea unor aminoalcoli i aminoacizi cu liganzii
18C6 i [2.2.2] n metanol la 25C.
-H
TS
Ligand
Amine
Log K
n-NH2C4H9
2,600,05
31,50,3
-16,70,6
29,72,1
-16,62,7
NH2(CH2)2OH 2,310,10
NH2(CH2)4OH 2,470,41
35,92,5
-21,94,9
33,80,1
-18,70,8
NH2(CH2)6OH 2,660,12
l-ala
34,12,0
18C
+
60,40,7
-44,41,9
NH3(CH2)6OH 2,810,22
l-ala
3,240,01
46,22,6
-27,82,7
-ala
4,190,24
52,21,1
-28,42,5
pent
3,560,06
62,40,5
-42,200,9
3,530,08
69,60,6
-49,51,0
oct
[2.2.2]
NH2(CH2)2OH 2,550,09
17,41,3
-2,91,8
NH2(CH2)4OH 2,610,10
20,81,5
-5,92,0

NH2(CH2)6OH
l-ala
-ala
pent
oct

2,590,08
3,110,09
4,830,05
3,690,07
4,140,04

17,50,9
16,00,8
39,70,9
40,71,2
38,10,7

-2,81,4
1,61,2
-12,21,1
-19,71,6
14,60,9

3.2 Complexarea aminelor cu criptanzi

Mrimea

cavitii

ligandului

criptand

[2.2.2]

(r=1,4A)

corespunde foarte bine cu mrimea gruprii -NH 3 (r=1,42A). n cele

mai multe cazuri liganzii macriciclici, cum este criptand [2.2.2],
formeaz compleci mai puternici cu specii organice dect liganzii
macrociclici. Este cunoscut faptul c stabilitatea i selectivitatea
ambilor compleci depinde de mrimea inelului macrociclic. Criptaii
depind de structura ligandului macrobiciclic i pot fi extrai n solveni
organici prin cuplarea cu anioni organici sau anorganici.
Randamentele

transporturilor

metilaminei,

dietilaminei,

dimetilaminei i n-propilaminei complexate cu criptand [2.2.2] prin

membran lichid de 1,2-dicloretan sunt relativ ridicate, n cazul
metilaminei i n-propilaminei este de 65 78%.[24]
Complexarea unor -aminoacizi (L-alanin, L-cistein, glicin,
L-izoleucin, L-metionin, L-fenilalanin, L-serin, L-triptofan i Lvalin) cu criptand [2.2.2] n metanol a fost determinat prin titrri
colorimetrice. Complexarea cu ligand [2.2.2] este favorizat de
entropie i valorile constantelor de stabilitate ale complecilor formai
din aminoacizii mai sus menionai cu criptand [2.2.2] sunt aproape
identice cu valorile obinute n cazul complexrii cu 18C6. O excepie
const n valorile entalpiei, acestea fiind mult mai mici n comparaie
cu cele obinute la complexarea cu 18C6.

Reacia dintre anumii aminoalcooli (etnolamin, 4-amino-1butanol i 6-amino-1-hexanol) i aminoacizi neproteici (-alanin, acid
5-amino-pentanoic i acid 8-amino-octanoic) cu criptand [2.2.2] a fost
studiat prin titrri colorimetrice. Valorile entalpiilor sunt mai mari n
cazul aminoacizilor, n comparaie cu aminoalcoolii. Autoprotonarea
gruprii amino este responsabil pentru aceste rezultate. Totui
numrul gruprilor metilen aflate ntre gruparea amino i gruparea
carboxil nu are nici o influen asupra constantelor cu stabilitate i a
parametrilor termodinamici n cazul criptandului [2.2.2].
Valoarea constantei de extracie, log Kex, pentru Glu-L-Leu n
1,2-dicloetan cu criptand [2.2.2] utiliznd anion picrat, este de 5,10.
acest rezultat sugereaz c procesul de extracie al peptidelor
utiliznd criptanzi este realizabil i comparabil cu cel realizat de eterii
coroan.
Au fost analizate i extraciile unor -aminoacizi n form
protonat (L-leucin, L-izoleucin, L-fenilalanin, L-metionina, Lvalina i L--alanina) n cloroform cu criptand [2.2.2] ca complex ion
pereche i anion picrat drept ion . Valorile constantelor de extracie
obinute cu criptand [2.2.2] sunt bune, dar nu mai mici dect cele
obinute cu 18C6; aceste valori variaz ntre 4,55 4,15 pentru Lisoleucin,

respectiv

L--alanina.

Stereochimetria

indicat

de

cloroform prezint un raport de 1:1:1 (ligand : aminoacid : anion).[25]

Rezultatele experimentale obinute sugereaz influena mrimii
ligandului i tipului atomului donor asupra constantelor de extracie
ale aminoacizilor nu sunt suficient de diferite pentru a permite o
separare individual prin extracie.

3.3 Complexarea aminelor cu calixarene

Calixarenele sunt preparate din fenoli i aldehide prin

condensare acid-catalizat. Ele pot recunoate speciile anionice i
cationice la fel de bine ca i pe moleculele neutre. Aceti receptori au
posibilitatea

formeze

compleci

biologici,

manifestndu-i

extractabilitatea i selectivitatea. n continuare voi prezenta studii

dedicate chimiei calixarenelor i n special incluziunea molecular a
substraturilor biologice, cum ar fi aminele i aminoacizii cu aceti
receptori.
Chang et al [26] a utilizat calixarenele derivate ca transportori
selectivi la separarea prin membrane lichide de cloroform a
aminoacizilor i a stabilit un mecanism schematic ce descrie interacia
dintre etil ester att cu fenilalanina ct i cu triptofan n prezena calix
[6]

arenei.

Rezultatele

obinute

sugereaz

etoxicarbonilmetilul

substituit la p-ter-butil calix [6] aren poate fi utilizat ca transportor la

separarea i determinarea unor aminoacizi importani.
Shikai et al [27] a demonstrat c homocalix [3] arena
manifest proprietatea de recunoatere enantiomeric fa de etil
ester fenilalanina. Privind legtura realizat ntre NMe 4 i calixarene,
acelai autor a consemnat cationul cuaternar de amoniu.
Recunoaterea selectiv a butilaminelor cu esteri substituii la
p-ter-butilcalix [6] aren n comparaie cu dibenzo 18-coroan-6 a
fost studiat utiliznd metoda extraciei cu solvent standard de picrat
de butilamoniu n diclormetan.
Hexaesterii 1 4 interacioneaz cu butilamoniul dup cum
urmeaz: n-butil iso-butil-sec-butilter butil, fapt care poate fi
explicat de efectele sterice.
Recent, calixarenele, datorit capacitii lor de recunoatere i
separare, atras atenia i asupra proprietii lor de a fi buni extractani
pentru compuii aminici. Okada[28] i colab. au preparat noi derivai

ai calix [4] arenei i i-au utilizat la extracia selectiv i transportul

unor aminoacizi etil esteri n cloroform. Eficiena acestor extracii a
fost explicat prin hidrofobicitatea aminoacizilor, iar extrabilitatea lor a
fost determinat prin msurtori RMN i UV.
Aceti receptori recunosc chiralitatea L-aminoacizilor n timpul
transportului.

Din

acest

motiv,

Lee[29]

colab.

studiat

termodianamica extraciilor cu solveni ale cationilor alchilamoniu cu

alchilcalix [6] arilesteri.
n anumite rapoarte se studiaz activitatea electrochimic a
unor compui macrociclici ionoforici cum ar fi compuii calix [4]
arendichinon n prezena diferitor ioni alchilamoniu. A fost de
asemenea studiat capacitatea acestor receptori redox de a forma
compleci aminici protonai, legai prin multiple legturi de hidrogen i
relaia dintre proprietile substanei oaspete i intensificarea activitii
electrochimice.

Un

interes

deosebit

este

acordat

aplicaiilor

macrociclilor chinonei modificate n electronica molecular i n

domeniul senzorilor poteniometrici i studierii transferului electronic
n sistemele biologice.
A fost prezentat i un studiu privind simulri ale dinamicii
moleculare i complecilor cu NH 4 i a cationului NH 4 cnd sunt
legai de calix[6] aren n cloroform cu acetatul drept ion contrar. A
fost elucidat structura i localizarea compusului oaspete n substana
gazd. Solubilitatea n ap a calix [6] arenei hexsulfonate (Fig.6) face
ca legturile dintre cationii cuaternari de amoniu i acetilcolin s fie
foarte puternice. Prin cristalografia cu raze X s-a artat c la
complexul calix [4] aren tetrasulfonat, N-terminal al colinei se
gsete n interiorul cavitii aromatice a receptorului.
Antipin[30] i colab. a sintetizat noi receptori selectivi pentru
aminoacizi utiliznd calix [4] aren pe baz de -amina fosfonat.

Aceti compui manifest o remarcbil selectivitate ca transportori ai

aminoacizilor aromatici de form amfionic prin membran lichid
susinute de un suport poros de polimer.
Kubo[31,32] i colab. a realizat calixarene cromogenice ce
mbuntesc receptorii optici pentru cationiii i aminele importante
din punct de vedere biologic i/sau chimic. Calixarenele, macrocicli
derivai de fenol, sunt utilizate la realizarea sistemelor optice folosite
la detecia vizual i la separarea pe baza diferenei enantiomerice a
aminelor i aminoacizilor.

3.4 Complexarea aminelor cu aza eteri coroan

Eterii coroan de tip donor mixt (diazoeterii coroan)
manifest proprieti transportoare fa de cationul amoniu din
compuii aminici importani din punct de vedere biologic.
Tsukebe[33] a artat legturile cationului i proprietile
transportoare ale unor macrocicli poliaminici i poliamidici pentru
srurile aminoacizilor ester derivai.
Raporturile

transportului

metilaminei,

dietilaminei,

dimetilaminei i n-propilaminei complexate cu criptand [2.2] sunt

relativ ridicate 42 45% pentru dietilamin, respectiv n-propilamin.
Complexarea

-aminoacizilor

(L-alanina,

L-cisteina,

glicina,

L-

isoleucina, L- metionin, L-fenilalanina, L-serin, L-triptofan i L-valin)

cu monoaza 18C6 i diazoeter coroan n metanol a fost studiat
prin titrri colorimetrice.
Este cunoscut c prin nlocuirea unui atom de oxigen de un
atom donor de azot n molecula de eter coroan nu se produce nici o
modificare a constantei de stabilitate. Valorile entalpiilor de reacie
sunt mici n raport cu cele ale ligandului 18C6. n acest caz formarea

complexului este favorizat de componenta entropic. Substituirea a

doi atomi donori de oxigen cu doi atomi de azot duce la o scdere a
constantei de stabilitate cauzat de contribuia entropic. Comparnd
valorile constantelor de stabilitate ale complexrii aminoacizilor
menionai cu 18C6, monoaza 18C6 i criptand [2.2.2] cu valorile
constantelor de stabilitate ale acelorai aminoacizi complexai cu
diazo-18C6 se observ c cele din urm sunt mult mai mici dect
celelalte.
Valoarea constantei de stabilitate a complexului format de GlyL-leucin i monoaza-18C6 n metanol este log K= 3,15. Entalpia
reaciei dintre peptid, cu aminoacizii corespunztori (glicin i
leucin) i monoaza 18C6 este mai sczut dect n cazul utilizrii
18C6. constanta de stabilitate a complecilor formai este influenat
de structura ligandului i proprietile peptidei.[35,36]

CAPITOLUL IV
EXTRACIA CU SOLVENI A AMINOACIZILOR FOLOSIND LIGANZI
MACROCICLICI

4.1. Caracteristici generale ale aminoacizilor

Aminoacizii constituie alfabetul structurii proteice i determin
multe din proprietile importante ale proteinelor. n afara celor
douzeci de aminoacizi cunoscui ca elemente constitutive ale
proteinelor exist muli aminoacizi care ndeplinesc alte funcii n
celule.
Formula structural general a alfa-aminoacizilor ntlnii n
proteine este:

Toi au ca numitor comun o grupare carboxil liber i o grupare

amino liber, ambele grefate la atomul de C alfa, deosebindu-se ntre
ei prin structura catenelor laterale, simbolizate prin R.
O clasificare a aminoacizilor, bazat pe polaritatea radicalului
R, i mparte n patru clase:
- clasa aminoacizilor nepolari (hidrofobi): alanina, leucina,
izoleucina, valina, prolina, fenilalanina, triptofan i metionina.
- clasa aminoacizilor polari neutri - mai solubili dect cei
nepolari, gruprile funcionale neutre pot forma legturi de H cu apa :
glicocol, serina, treonina, cisteina, tirozina, asparagina, glutamina.
- clasa aminoacizilor bazici (ncrcai pozitiv) prezint sarcini
net pozitive la pH 7 : arginina, lizina, histidina. '

- clasa aminoacizilor acizi (ncrcai negativ) - prezint

sarcin negativ la pH 6-7: acid aspartic, acid glutamic.
Cunoaterea proprietilor acido-bazice este foarte important
n alegerea i analizarea proprietilor proteinelor, n unele cazuri
separarea, identificarea i dozarea diferiilor aminoacizi, determinarea
secvenei lor n proteine sunt bazate pe comportarea lor acido-bazic.
n stare cristalin aminoacizii au puncte de topire sau de
descompunere ridicate, de obicei peste 200 C. Ei sunt mult mai
solubili n ap dect n solveni nepolari. Aceste proprieti sunt exact
cele la care ne ateptam s le ntlnim, considernd c reeaua
molecular a aminoacidului n stare cristalin este stabilizat prin
fore de natur electrostatic de atracie ntre grupri cu sarcini opuse
ca n cazul reelelor cristaline ale srurilor cu puncte de topire ridicate,
ca de exemplu NaCI. Dac aminoacizii ar cristaliza ntr-o form
neionic, ei ar fi stabilizai prin fore Van der Waals, mult mai slabe i
ar avea puncte de topire joase. Aceste consideraii, ct i multe alte
dovezi au condus la concluzia c aminoacizii se gsesc n soluii
apoase neutre i cristalizeaz din aceste soluii mai degrab ca ioni
dipolari sau amfioni dect ca molecule nedisociate, fapt indicat i de
constantele dielectrice ridicate i de momentele de dipol mari, care
reflect prezena att a sarcinii negative ct i a sarcinii pozitive n
aceeai molecul.
Cnd un aminoacid amfionic cristalin, de exemplu alanina,
este dizolvat n ap, el poate aciona att ca un acid (donor de
protoni) (a), ct i ca o baz (acceptor de protoni) (b):
a) H3N+- CH
-CH3H++H2N- CH
-CH3
|
|
COOCOOb) H3N+- CH
-CH3+H+H3N- CH
-CH3
|
|

COO-

COOH

Deci aminoacizii sunt amfolii, avnd proprieti amfotere,

comportarea acido-bazic a amfoliilor fiind cel mai simplu formulat n
termenii teoriei acido bazice Bronsted-Lowry :
R- CH
-COOH
|
NH2
Forma nedisociat

R- CH
-COO|
NH3+
Amfion

R- CH
-COOH
|
NH3+
Forma cationic

R- CH
-COO|
NH2
Forma anionic

Un alfa-aminoacid simplu monoaminomonocarboxilic este

considerat a fi un acid dibazic n form complet protonat, care poate
dona doi protoni n timpul titrrii sale complete cu o baz, titrarea
decurgnd n dou trepte:
R- CH
-COOH+HO|
NH3+

R- CH
-COO-+H2O
|
NH3+

R- CH
-COO-+HO|
NH3+

R- CH
-COO-+H2O
|
NH2

Curba de titrare poate fi comparat cu cea a acizilor slabi.

Valorile pKa ale celor dou etape de ionizare ale alfa-aminoacizilor de
acest tip sunt destul de distanate pentru a se obine dou trepte net
separate. Fiecare treapt prezint un punct de echivalen unde
modificarea pH-ului cnd se adaug cantiti crescute de baz este
minim. Valorile pKa aparente pentru cele dou trepte de disociere pot
fi determinate din punctele de echivalen ale fiecrei trepte.

La pH = pKa;, punctul de echivalen al primei trepte, donorul

de protoni (figura stnga) i acceptorul de protoni (figura dreapta) se
gsesc n concentraii echimoleculare:
R- CH
-COOH
|
NH3+

R- CH
-COO|
NH2

La pH = pKa2, donorul de protoni i acceptorul de protoni se

gsesc n concentraii echimoleculare.
Fiecare din cele dou trepte ale curbei pot fi bine aproximate
matematic
pH = pK + Ig

acceptor de protoni
[donor de protoni]

Aceasta nseamn c se pot calcula raporturile speciilor ionice

ale aminoacidului la orice pH dac se cunosc valorile pK a1 i pKa2.
La pH =1/2 (pKa1 + pKa2), unde exist un punct de inflexiune
ntre cele dou trepte ale curbei de titrare, molecula nu prezint
sarcin electric net i nu migreaz n cmp electric, acesta fiind
numit pH izoelectric (pHj).
Toi aminoacizii monoaminomonocarboxilici prezint aceast
comportare.
Din valorile pKa rezult observaii generale:
1) Gruparea

carboxil

din

poziia

alfa

aminoacizilor

monoaminomonocarboxilici are o aciditate mai mare dect gruparea

carboxil a acizilor alifatici corespunztori, aciditate crescut datorit
gruprii amino din poziia alfa i sarcinii sale pozitive care produce un
puternic efect de cmp, crescnd astfel tendina H carboxilic de a se
disocia ca proton;
2) Gruparea alfa amino a aminoacizilor monoaminomono
carboxilici este o baz mai slab dect gruparea amino a aminelor
alifatice corespunztoare ;

3) Aminoacizii cu radicali nencrcai au valori pK a1 i pKa2

aproape identice;
4) Nici unul din aminoacizii monoaminomonocarboxilici nu are
capacitatea de tamponare semnificativ n jurul pH-ului fiziologic (pH
= 6-8). Ei prezint capacitate de tamponare la pH-uri apropiate de pK a
i anume ntre pH = 1,3 3,3 i 8,6 10,6. Singurul aminoacid cu
putere de tamponare pentru pH = 6-8 este histidina.
O metod analitic util n urmrirea formrii aminoacizilor
liberi n timpul hidrolizei proteinelor de ctre enzimele proteolitice este
titrarea aminoacizilor sau amestecurilor lor n prezen cu exces de
formaldehid (titrare cu formol):
R- CH
-COO- R- CH
-COO-+H+
|
|
NH3+
NH2
R- CH
-COO-+2HCHO (HOCH2)2N- CH
-COO|
|
NH2
R
Dimetilol aminoacid
Formaldehida n exces se combin uor cu gruprile amino
libere, neprotonate ale aminoacizilor, rezultnd derivai metilol.
Aminoacidul pierde un proton de la gruparea amino ncrcat pozitiv
a amfionului, care poate fi titrat e direct cu NaOH pn la pH = 8,
punctul de viraj al fenoftaleinei.
O reacie a gruprii amino foarte larg folosit este reacia cu
ninhidrina, care poate fi folosit la dozarea unor cantiti foarte mici
de aminoacizi. Acesta poate reaciona cu dou molecule de
ninhidrin, rezultnd un produs intens colorat.
Separarea cantitativ i estimarea fiecrui aminoacid dintr-un
amestec complex, cum este hidrolizatul unei proteine, este o
problem deosebit cnd este abordat prin metode clasice:
precipitare fracionat, cristalizare, distilare.

Metodele

cromatografice

sunt

aplicabile

nu

numai

la

separarea, identificarea i analiza cantitativ a amestecurilor de

aminoacizi, dar i a peptidelor, proteinelor, nucleotidelor, acizi nucleici,
lipide, zaharuri, etc.
Metodele cromatografice i electroforetice se bazeaz pe
cunoaterea solubilitii relative i a comportrii acido-bazice a
diferiilor aminoacizi. Spectrele de absorbie parametru folosibil n
analiza chimic se obin n UV, nici unul din cei 20 de aminoacizi
ntlnii n proteine nu prezint absorbie n VIZ. Trei aminoacizi Tri,
Try, Phe datorit caracterului aromatic al radicalului R - absorb n
UV apropiat. Restul aminoacizilor absorb n UV ndeprtat (lungime
de und mai mic de 220 nm).

4.2. Echilibre de repartiie n procesul de extracie

Extracia complecilor cationici din soluie apoas n solveni
organici nepolari se face sub form de perechi de ioni prin asociere
cu un anion potrivit.
Considerm un sistem heterogen lichid n care faza apoas
conine un aminoacid n form protonat i un anion A, iar n faza
organic conine iniial un ligand macrociclic, L, capabil s
complexeze aminoacidul n form cationic.
n funcie de pH, aminoacizii, R-NH2, n care:
R: - CH
-COOH
|
R
pot fi transferai n soluie apoas pe baza echilibrului urmtor:
R NH2 + H30+

R NH3+ HOH

(1 )

cu constanta de aciditate :
K a2

R NH2 H3 O

R NH

Aminoacidul n form cationic este complexat de ligandul

macrociclic neutru, n baza echilibrului:
R-NH3++L R-NH3+L
caracterizat de constanta de stabilitate :

R NH L
R NH L

Dac anionul A are dimensiunea i structura compatibil cu

procesul de extracie, complexul cationic format se poate extrage din
faza apoas ntr-un solvent organic sub forma unei perechi de ioni [RNH3+L][A-] conform echilibrului:
(R-NH3+L)w+(A-)w(R-NH3+LA-)s
cu constanta de extracie Kex:

K ex

R NH LA

R NH L x A

n care prin W i S sunt simbolizate fazele sistemului (apoas

respectiv organic), iar prin parantezele ptrate, concentraiile n mol/I
ale speciilor implicate n proces.
Anionul A- poate fi baza conjugat a unui acid organic HA i se
formeaz n soluie pe baza echilibrului :
HA+HOHA-+H3O+
caracterizat de constanta de aciditate Ka:
Ka

A H O

HA

Aceast constant determin domeniul de pH la care

predomin A- n soluie. Ligandul macrociclic se repartizeaz ntre
cele dou faze ale sistemului lichid-lichid n baza echilibrului :
(L)w(L)s
caracterizat de constanta de repartiie :
KL

L s
L w

Pe baza echilibrelor individuale prezentate n relaiile (1), (2),

(3) i (4) poate fi determinat echilibrul global al extraciei de ioni [RNH 3 L]A(R-NH3+)w+(A-)w+(L)s(R-NH3LA)s
avnd constanta de extracie Kex
K ex

R NH LA

R NH A L

3 w

Din echilibrul (9) rezult c faza apoas trebuie s realizeze

condiiile de pH care, n baza echilibrului (1) i (5) s asigure
existena simultan a speciilor R-NH3+ i A.

Specia HA furnizoare a anionului de cuplaj, A, trebuie aleas

funcie de valoarea pH-ului la care aminoacidul este protonat. n cazul
extraciei aminoacizilor cu eteri coroan i criptanzi pH-ul optim este 2
pentru c asigur formarea att a speciei R -NH 3 ct i A- n proporii
nsemnate.
Echilibrele chimice ce au loc n sistem lichid-lichid pot fi
reprezentate schematic astfel:

3 A -)
(R-NH3+)w+(A-)w (R- NH
w

3 A-)
(R-NH3+L)s+(A-)s (R-NH3+LA-)s(L)s+(R- NH
s

(R-NH3+L-)w(L)w+(R-NH3+)w

Fig. 6 - Reprezentarea schematic a echilibrelor n procesul

de extracie a aminoacizilor
Datorit valorilor mici ale constantelor ce implic speciile
ncrcate n solventul organic, echilibrul semnificativ al extraciei se
definete astfel:
(R-NH3+)w+(A-)w (R-NH3+A-)s
cu constantele de extracie Kex:
K ex

R NH A

R NH A

3 w

4.3. Raportul de distribuie al aminoacizilor n sistemul

solvent ap
Raportul de distribuie (D) al aminoacizilor ntre cele dou faze
(organic i apoas) este o mrime ce se definete astfel:
D

R NH LA
R NH R NH
3

3 w

2 w

Din constanta de aciditate K a2 a cuplului R-NH 3 / R- NH 3

rezult c, la o valoare a pH-ului fazei apoase de pK a2 = 3 gruparea

aminic este transformat n forma R- NH 3 n proporie de 99,9%

ceea ce conduce la concluzia c n astfel de condiii:
D

R NH LA
3

R NH2 w

Constanta de aciditate a cuplului R- NH 3 / R- NH 3 la

aminoacizi este aproximativ egal cu 10 -9,7', ceea ce arat c pH-ul la
care s-a transformat specia cationic R- NH 3 n proporie de 99,9%
are valoarea 6.
La pH =6 gruparea carboxil a aminoacidului este practic
disociat pentru c valoarea constantei de aciditate (K a1) a cuplului
-COOH / -COO- are valoarea de aproximativ 10-2,3. Forma amfionic
R-CH(NH3)-COO- nu este extractibil, din cauza celor dou sarcini
prezente, pentru c liganzii macrociclici nu pot. realiza solubilizarea
acestor specii chimice n solveni organici (cloroform, docloretan) prin
intermediul cationului NH3.
Extracia devine posibil numai dac scade pH-ul astfel nct
(-COO) s se transforme n (-COOH).
Valoarea raportului de distanare depinde de pH n domeniul
din jurul va(orii pH-ului pKa = 2 i c n acest domeniu de pH relaia
(6) ia forma :
D

[R NH3LA] s
[HOOC CHR NH3 ] w [ OOC CHR NH 3 ]

Din relaiile anterioare rezult c:

D=Kex[L]s[A]w(1+10pH-pKa1)-1
din care se deduce c la pH constant :
lgD[A-]w-1(1+10pH-pKa1)=(lgLs)
lgD[L]s-1(1+10pH-pKa2)=(lgAw)
Aceste dou relaii reprezint dou trepte care au pantele
egale cu 1, fapt care, dovedit experimental, indic raportul de

combinare a speciilor componente de 1:1:1 i care permite calculul

constantei Kex din intersecia cu axa ordonatei (metoda grafic).

4.4. Factorii ce influeneaz procesele de extracie

4.4.1. Influena structurii ligandului macrociclic utilizat ca
extractant
Structura

liganzilor

macrociclici

care

imprim,

de

fapt

proprietile lor implicate n procesul de extracie, trebuie s joace un

rol important i complex. Selectivitatea liganzilor macrociclici pentru
cationi n sistem bifazic lichid-lichid nu este ntotdeauna n
concordan cu selectivitatea prin recunoatere dimensional n faz
apoas. Pentru metalele alcaline i alcalino-pmntoase, se poate
afirma c, n cazul utilizrii unui anume solvent organic, potrivirea
dimensional dintre cationul compensat i cavitatea intramolecular a
ligandului macrociclic joac un rol important n extracia perechilor de
ioni. Dac concordana dintre stabilitatea complexului i extrabilitatea
perechii de ioni nu este constant, alte fenomene ce concur la
extracie se manifest pregnant, estompnd influena stabilitii.
Fenomenul de solvatare a ionului complexat joac adesea un
rol important n procesul de extracie.
Studii de spectrometrie RMN i IR au artat c la extracia n
nitrobenzen: a complecilor metalelor alcaline i alcalino-pmntoase
cu eteri coroan i criptanzi cuplai cu anionul de dipricrilaminat, are
loc o coextracie a unei pri din moleculele de ap de hidratare ale
acestor cationi.
Eterii coroan provoac o extracie a unui numr mai mare de
molecule de ap de hidratare n comparaie cu criptanzii, i, de aici,

se constat o ; comportare diferit a celor dou categorii de liganzi

macrociclici.
4.4.2. Influena reapariiei liganzilor macrociclici
Liganzii macrociclici cu constanta de repartiie K mic,
particip n procente de extracie n care constantele de extracie K ex
sunt mari. O valoare mic a constantei de repartiie a ligandului liber
reprezint o solubilitate mare n ap a acestuia, ceea ce duce la
posibilitatea ca i complexul extractibil s fie solubil n ap i deci
extractabilitatea este micorat. Aceast contradicie se datoreaz
cunoaterii incomplete a procesului de extracie a complecilor cu
liganzi macrociclici reprezentat numai din punct de vedere al
echilibrelor n paragraful 4.2. Toate constantele de echilibru din
paragraful 4.2. sunt constante termodinamice exprimate n activiti i
nu n concentraii. Dependena raportului de distribuie i implicit a
randamentului de extracie de tria ionic (i n general de
concentraia global a fazelor), ca a unor efecte sinergetice arat
odat n plus complexitatea insuficient cunoscut a procesului de
extracie.
n funcie de constana de repartiie, ligandul macrociclic este
selecionat pentru un proces de extracie.
Cunoaterea sau determinarea constantei de extracie K ex sau
a raportului de distribuie D reprezint, n prezent criteriul sigur de
selecie al ligandului. Pentru extracia aminoacizilor cu liganzi
macrociclici, repartiia liganzilorj macrociclici n sistemul bifazic
CHCL3-ap este condiionat de valoarea pH-ului.

La pH > 6 ligandul macrociclic se va regsi relativ egal

repartizat n ambele faze (apoas i organic). La pH acid (pH = 2)
ligandul macrociclic se regsete preferenial repartizat n ap.
4.4.3. Influena cationului n procesul de extracie
Liganzii macrociclici pot complexa, n interiorul cavitii lor,
cationi anorganici i organici prin legturi de natur electrostatic.
Stabilitatea

complecilor

formai

este

controlat

de

numrul

heteroatomilor din ciclu i de potrivirea dimensional dintre diametrul

cavitii ligandului (B 18-coroan-6) i diametrul cationului complexat
(R NH 3 ).
Aceti cationi compleci sunt extrai sub form de pereche de
ioni n solveni organici, prin cuplarea cu anion adecvat.

Procesul complexrii ntre un ligand L i un cation M n+ ntr-un

solvent S, poate fi reprezentat prin ecuaia general :
Kj

(L)solv+(Mn+mS)
(Mn+L)solv+mS
K
d

unde Kj i Kd sunt definite drept constantele de vitez ale formrii i

respectiv, disocierii complexului. Raportul celor dou constante de
vitez Kj/Kd, d constanta de stabilitate Ks.

Constanta de stabilitate termodinamic, K, se exprim prin

relaia:
K

f c x[Mn L]
fL x[L]xfM x[Mn ]

unde fc, fL i fM sunt coeficienii de activitate ai celor trei specii

prezentate (complex, ligand, cation). Aceti coeficieni sunt n general,
necunoscui, de aceea se utilizeaz constanta de stabilitate exprimat
prin concentraii:
Ks K

fL fM
[Mn L]

fC
[L][M n ]

Constanta Ks este o constant de stabilitate medie pentru un

sistem aflat n echilibru termodinamic pe baza conformaiei ligandului
i a complexrii.
Valorile constantei de stabilitate Ks reflect, printre altele,
selectivitatea formrii complexului. Aceasta este legat de abilitatea
ligandului macrociclic de a diferenia diferii cationi. O msur a
selectivitii unui anumit ligand n raport cu doi cationi metalici diferii
M 1n i M n2 o reprezint raportul dintre constantele de stabilitate ale
complecilor M1L i M2L i se exprim prin relaia:
S

K S [M1L]
K S [M 2L]

Pentru

determinarea

experimental

constantelor

de

stabilitate pentru complecii formai de liganzii macrociclici tip coroan

cu cationii metalelor alcaline, alcalino-pmntoase i ai unor metale
tranziionale au fost utilizate multe metode : titrare poteniometric,
conductometrie, polarografie, calorimetrie, spectometrie optic, RMN,
extracia cu solveni. Aceste metode au fost discutate n lucrri de
sintez [37,38].

4.4.4. Influena anionului n procesul de extracie

Complecii formai de liganzii macrociclici cu cationi ai
metalelor sau cu cationi organici sunt ei nii cationici purtnd de
cele mai multe ori sarcina cationului complexat.
Extracia lor n solveni organici se face sub form de pereche
de ioni cu un anion ce are structura i proprieti favorabile extraciei.
Aceti anioni de cuplaj au masa molecular mare i caracter lipofil.
n diverse procese de extracie ale cationilor compleci au fost
utilizai anioni ca : picrat, tetrafenilborat, dipicrilaminat, dinitrofenolat,
ca i anioni anorganici, de dimensiuni relativ mari : ClO
4 , I , N03, etc.

Odat cu accentuarea caracterului hidrofob anionului de

cuplaj, extracia devine mai eficient, n timp ce selectivitatea pentru
un anumit cation scade.[39]
Selecia anionului organic, pentru extracia aminoacizilor are la
baz, pe de o parte, coeficientul molar de absorbie ridicat al anionilor,
iar pe de alt parte, coincidena domeniului de pH n care trebuie s
coexiste n soluie acest anion cu cationul aminoacidului protonat.
4.4.5. Influena solventului
Influena solventului organic asupra extractibilitii perechilor
de ioni este datorat, nainte de toate constantei sale dielectrice.
Solvenii cu constanta dielectric mic mpiedic disocierea perechii
de ioni; favoriznd astfel extracia.
De asemenea solubilitatea solventului organic n ap trebuie
s fie mic pentru a evita pierderile de solvent.

Randamentul de extracie i chiar selectivitatea liganzilor

macrociclici n procesul de extracie sunt puternic influenate de
natura solventului.
4.4.6. Influena pH-ului n extracia complecilor aminoacizilor
Dac se studiaz extracia complecilor aminoacizilor ntr-o
soluie apoas B-18-coroan-6 i 15-coroan-5 n cloroform n funcie
de pH se confirm faptul c extracia optim se realizeaz la un pH
acid (pH = 2), pH la care coexist aminoacidul protonat, forma
anionic a partenerului de cuplaj i totodat gruparea carboxilic a
aminoacidului nedisociat.

4.5. Extracia i transportul aminoacizilor prin membrane

lichide
Aminoacizii constituie una din cele mai importante clase de
compui naturali de interes biologic, amplu implicai att n procese
biochimice ct i n industria medicamente(or, alimentar i
cosmetic.
Aminoacizii pot traversa membranele lichide sub form
cationic sau sub form anionic, n compania unui contraion.
4.5.1 Extracia i transportul aminoacizilor sub form de
compleci cationici
n ultimii ani mai muli compui macrociclici, eteri coroan sau
criptanzi, au atras atenia. datorit specificitii lor pentru cationii
amoniu primari i secundari n ceea ce privete utilizarea lor ca ageni
de extracie i transport specifici pentru membrane lichide.

4.5.1.1. Compleci ai aminoacizilor cu eteri coroan

O afinitate deosebit pentru cationii amoniu a unor aminoacizi
o prezint eterii coroan lipofilici, ceea ce i recomand ca transportori
specifici prin membrane de cloroform.
Din tabelul urmtor reiese c viteza de transport a derivailor
aminoacizilor prin membrana lichid de cloroform, utiliznd liganzii
macrociclici de mai sus este mai mare dect viteza de transport a
unor ioni metalici (K+, Na+, NH4).
Viteza de transport x106 mol/h
Aminoacizi
Anion
(esteri)
(contraion)
a
b
c

ClO 4
Tri OEt HCl
6
5,7
5,4

ClO 4
Leu O Et HCl
5,6
6,2
7,2

ClO 4
Ala O Et HCl
8,2
6,6
7,2

ClO 4
Gly O Et HCl
8,7
8,7
9,3

ClO 4
Pro O Et HCl
5,3
6,7
6,6

ClO 4
NaCl
0,5
0,5
0,7

ClO 4
KCl
0,8
0,4
0,4

ClO 4
NH4Cl
2,5
0,9
1,0
Tabelul 3.1 Transportul cationic cu purttori eteri coroan
Descoperirea eterilor coroan a fost neprevzut. n 1967
Pedersen a recunoscut cristalele albe care erau un subprodus n
procesul condensrii catecolului i dicloretileterului, intervenit n
sinteza compusului i confirmat a fi un eter policiclic.
S-a observat c DB18C6 formeaz compleci stabili cu
metalele alcaline i alcalino-pmntoase i c aceti compleci se
dizolv n solveni organici nepolari. Aceast descoperire duce la
sinteza unei serii de compui polieteri macrociclici care au fost

denumii

eteri

coroan

(crown

ethers)

dup

configuraia

lor

stereochimic.
Mai trziu eterii coroan i-au gsit aplicaii i n extracia i
transportul unor compui organici cum ar fi : acizi organici,
aminoacizi, peptide.
Stabilitatea eterilor coroan cu diferii cationi este dependent
de urmtorii factori :
- mrimea relativ a ionilor i cavitatea eterilor coroan;
- tipul, numrul i amplasarea heteroatomilor la locurile lor de
legare n inelul eterului coroan;
- flexibilitatea conformaional a inelului;
- sarcina electric a cationului;
- interacia ion - solvent.
Eterii coroan formeaz compleci 1:1 (inel : ion) cu cationii,
dar pot forma i compleci 2:1 (inel : ion) sau 1:2 (inel : ion).
Structurile compuilor compleci aminoacid-eter coroancontraion/ap s-au determinat cu RX. S-a ajuns la concluzia c
aminoacizii exist n complex ca amfion i sunt nlnuite cu 18-C-6
prin gruparea amino - NH 3 prin legturi i N-H...O , gruparea - COO-,
aflat n poziia alfa, ia parte la legturi de H cu moleculele de ap.
4.5.1.2. Compleci ai aminoacizilor cu dinonil naftelen sulfonat
(DNNS)
Un aminoacid n form cationic (AA+) aflat n faza apoas
acid (soluie HCI 0,1 N), care reprezint faza surs, poate fi
transportat i extras n membrana lichid utiliznd un purttor ncrcat
negativ T- (DNNS-), dinonil naftalen sulfonat, realizndu-se procesul
de extracie.

Din membran speciile AA+, DNNS- ating faza apoas bazic,

adic faza acceptoare, aminoacidul fiind extras n faza bazic prin
deprotonare (AA+ AA- 2H+), realizndu-se procesul de reextracie.
Cationul K+ este transportat simultan n sens invers 1a
interfaa faza surs - membran unde este schimbat cu AA + i
procesul se repet.
Se constat c aminoacizii sunt transportai mpotriva
gradientului de concentraie prin transport activ simultan cu
transportul n sens invers al cationilor K +.
S-a constatat c viteza de transport a aminoacizilor prin
membrana lichid variaz n sensul:
Fenilalanin > triptofan > leucina > valina > glicina
4.5.2. Extracia i transportul aminoacizilor sub form de
compleci anionici
Dat fiind c aminoacizii pot exista i n form anionic n soluii
bazice, s-a ncercat extracia i transportul acestora prin membrane
lichide sub form de complex ion-pereche folosind contraion un cation
organic cu volum mare.
4.5.2.1.

Compleci

metalici

ai

liganzilor

macrociclici

cu

aminoacizi
O nou clas de transportori ionici care fac posibil creterea
vitezei fluxului prin membrane lichide datorit eliberrii de ioni i
transportului de aminoacizi prin intermediul complecilor ligand-metal
a fost studiat de numeroi cercettori n diverse moduri.

S.

Shinkai[40]

colaboratorii

studiaz

transportul

aminoacizilor n form anionic prin membrane lichide de cloroform

utiliznd ca transportori compleci metalici ai ligandului. [19]
Este interesant sistemul de transport i anume faptul c n
membrana lichid avnd transportor complexul L-Ca 2+, aminoacidul n
form anionic este extras din faza apoas surs (bazic) ca un
contraion i eliberat n faza acceptoare ca un aminoacid n form de
amfion.
Complexul L-Ca2+ are posibilitatea de a extrage aminoacizii din
faza apoas surs i de a-i transporta n faza apoas acceptoare.
Solubilitatea sczut a aminoacizilor n forma amfionic este
favorabil procesului de eliberare de ioni. n acest caz pH-ul fazei
acceptoare a fost ajustat cu un acid boric i hidroxid de litiu.
4.5.2.2. Compleci ai aminoacizilor cu sruri cuaternare de
amoniu
J.M. Lehn i colaboratorii, precum si I. Tabushi i colaboratorii
au studiat fenomene de extracie i transport prin membrane lichide
avnd ca transportori sruri cuaternare de amoniu.[41,42]
Astfel J.M. Lehn i colaboratorii prezint studii n legtur cu
transportul unor aminoacizi i dipeptide prin membrane de toluen
mpotriva gradientului de concentraie. n acest sistem procesul este
de protonare-deprotonare cuplat cu transportul n sens invers al unui
ion anorganic (Na+, K`), deci un transport activ.
Mecanismul procesului de transport n cazul utilizrii ca
purttor a srii cuaternare de amoniu T + (T este N+) printr-o
membran lichid de toluen n cazul transportului aminoacizilor este
prezentat schematic n figura urmtoare:

Faza surs
(sol. KOH 0,1 N)
CH
R- | -COO-K+
NH2
Cl-K+

Membrana
(N+, Cl-)

R- CH
-COO-N+
|
NH2

Faza acceptoare
(sol. HCl 0,1N)
R- CH
-COO|
NH3+
2 H+Cl-

Aminoacizii n form anionic, carboxilat, sunt transportai din

faza apoas surs (soluie bazic KOH) n faza apoas acceptoare
(soluie acid HCI) cu transportorul sare cuaternar de amoniu (T +, N+),
n cazul studiat Aliquat 336, adic clorur de tricaprilmetilamoniu.
Anionul CI- este transportat napoi la interfaa membran - faza
surs unde este schimbat cu aminoacidul carboxilat.
Creterea concentraiei de AA + n faza apoas acid este
msurat ca o funcie n timp pentru diferii aminoacizi utiliznd
metode spectrometrice (UV, RMN) sau titrare cu ninhidrin (rezult
compui colorai).

Se observ o dependen liniar. Curbele sunt observate la

nceput (nainte ca sistemul s ajung la o stare staionar) i
aproape de sfritul procesului, cnd concentraia aminoacidului n
faza surs devine minim.
Msurarea coeficienilor de distribuie a aminoacizilor ntre
faza surs bazic KCI 0,1 N i membrana coninnd N; n toluen a
artat c ratele relative ale transportului AA - de la stnga la dreapta
urmeaz ordinea coeficienilor de distribuie. Astfel, specificitatea
procesului este controlat prin echilibrul termodinamic ce are loc ntre
faza surs i membran.
Paii cinetici importani, i anume transferul din faza surs n
membran i din membran n faza acceptoare, respectiv extracia i
reextracia par a fi suficient de similari pentru diferii aminoacizi, astfel
nct doar concentraia de (AA-, N+) n membran difereniaz
substratele diferite.
Rezultate similare se menin i n cazul transportorului T -. S-a
constatat c transportul gruprii OH- este competitiv cu transportul
AA-.
Este interesant de subliniat faptul c s-a constatat o diferen
de circa 20% n rata de transport ntre fenilalanilglicin i
glicilfenilalanin.
S-au observat schimbri lente de pH deoarece :
- apar procese de protonare deprotonare ale aminoacizilor;
- transportul

ionilor

hidroxil

concur

cu

transportul

aminoacizilor n form anionic.

Transportul aminoacizilor decurge asimptotic pn fa finalizare
n condiiile descrise nainte.
Schimbrile n suprafaa interfeelor determin schimbri
proporionale i n ratele de transport.

Se impune ca formarea i disocierea complexului substrattransportor, complex de tip ion-pereche s fie procese foarte rapide.
Rezultatele duc la anumite concluzii, precum i la prospecte
pentru investigaii suplimentare:
1. este demonstrat transportul aminoacizilor n form anionic
opus anionului clorur;
2. este

observat

transportul

mpotriva

gradientului

de

concentraie alimentat de energie chimic, transport cuplat;

3. specificitatea procesului este controlat termodinamic prin
echilibrul distribuiei ntre faza apoas iniial i membran;
4. efectele sterice n speciile substrat-transportor influeneaz
specificitatea extraciei i a transportului;
5. structura transportorului, modelat prin sintez organic
permite controlarea specificitii extraciei i a transportului;
6. efectele cinetice asupra specificitii proceselor sunt
similare cazurilor n care aminoacidul este sub form cationic;
7. transportul chirospecific ce permite separarea amestecurilor
racemice, poate fi observat utiliznd fie o membran optic activ, fie
un ion purttor chiral;
8. experimente similare pot fi realizate pe diferite tipuri de
molecule.

CAPITOLUL V
PARTEA EXPERIMENTAL
5.1 Consideraii generale
Studiul extraciei lichid lichid a unor specii chimice prezint
un interes deosebit, scopul fiind determinarea condiiilor optime
pentru o concentrare eficient i o bun separare a acestora.
n cazul de fa s-a studiat comportarea a trei aminoacizi
derivatizai n prezena anionului tropeolin OO la pH=2, atunci cnd
se realizeaz extracia cu liganzii macrociclici benzo 18 coroan
6 i Kriptofix [2.2]
Aminoacizii derivatizai studiai au fost.
CH3- CH
-CH2- CH
-COOCH3
|
|
CH3
NH3+Cl-

CH3-CH2- CH
- CH
-COOCH3
|
|
CH3 NH3+Cl-

L-Leucina metil-ester clorhidrat

L-Isoleucina metil-ester clorhidrat

(L-Leu OMe*HCl)

(L-Ile OMe*HCl)

HS-CH2- CH
-COOCH3
|
NH3+Cl-

CH3- CH
- CH
-COOCH3
|
|
CH3 NH3+Cl-

L-Cysteina metil-ester clorhidrat

L-Valina metil-ester clorhidrat

(L-Cys OMe*HCl)

(L-Val OMe*HCl)

CH3COO- CH
-NH3+Cl|
CH 2
|

L-Fenilalanina metil-ester clorhidrat

(L-Phe OMe*HCl)
Tropeolin 00 (difenil amino azo p-benzen sulfonic)

 Benzo 18C6

Kriptofix [2.2]

Eterii coroan pot complexa n interiorul cavitii lor cationi

anorganici prin legturi de natur electrostatic la atomii de oxigen din
lanul polieteric. Se formeaz astfel, compleci cationici a cror
stabilitate este controlat de numrul heterocationilor din ciclu i de
potrivirea dimensional dintre diametrul cavitii ligandului i diametrul
cationului complexat. Aceti cationi compleci sunt extrai apoi sub
form de pereche de ioni n solveni organici, prin cuplare cu un anion
adecvat (anionul tropeolin OO).
Mrimea cavitii ligandului criptand [2,2] corespunde cu
mrimea gruprii NH3+ a aminoacidului deci se vor forma compleci
puternici a cror stabilitate i selectivitate depinde de structura

ligandului macrociclic i pot fi extrai n solveni organici prin cuplarea

cu anioni organici sau anorganici.
n lucrarea de fa s-au determinat constantele extracie ale
unor aminoacizi derivatizai cu B18C6 i Kryptofix [2.2] n vederea
stabilirii condiiilor experimentale de separare prin membrane lichide.
De asemenea s-au determinat randamentele de transport ale
aminoacizilor derivatizai prin membran lichid de cloroform,
utiliznd B18C6 ca transportor n prezen de tropeolin 00.

5.2. Aparatur i reactivi

Determinrile s-au realizat observndu-se spectrele de
absorbie n vizibil la 400 nm obinute cu ajutorul spectrofotometrului
V-530 Jasco UV/VIS.
Pentru extracie s-au folosit plnii de separare, iar pentru
transport am folosit o celul membranar n form de U
Aminoacizii
CysOMeHCl,

folosii

(L-LeuOMe HCl,

L-ValOMeHCl,

L-PheOMeHCl)

L-IleOMeHCl,

firma

L-

Fheka;

Kryptofix [2.2], B18C6 i cloroformul, de puritate 99%, au fost produi

de firma cherck.

5.3.

Influena pH-ului asupra extraciei

aminoacizilor cu liganzi macrociclici

complecilor

Din studiul extraciei aminoacizilor dintr-o soluie apoas cu

liganzi macrociclici n solveni organici, n funcie de pH se confirm
faptul c extracia optim se realizeaz la un pH acid la care coexist
aminoacidul protonat i forma anionic a partenerului de cuplaj.

Realizndu-se experimentul extracia complecilor formai de

aminoacizii derivatizai, mai sus menionai, cu B18C6 i Kryptofix
[2.2] n cloroform, se constat c extracia este optim la pH=2.

Influena pH-ului asupra extraciei complexului L-lucina cu

B18C6 n prezena anionului tropeolui OO.
- soluia de Kryptofix [2.2] se prepar n mod asemntor cu
deosebirea ce se cntresc 0,2624g Kryptofix [2.2] masa molecular
M=262,35.
3. se prepar faza organic, care este de culoare galben i
se citete spectofotometric absorbana fa de cloroform saturat cu
ap distilat.
Cu ajutorul absorbanei se calculeaz coeficienii molari de
absorbie () dup relaia:

A
c l

A absorbia
c concentraia A- (tropeolin OO)
l grosimea cuvei
n tabelele urmtoare sunt prezentate valorile coeficienilor de
extincie pentru complecii aminoacizilor derivatizai studiai cu B18C6

(Tabel 1) i Kryptofix [2.2] (Tabel 2) n prezena anionului tropeolin OO

n cloroform.
Tabel 1
Aminoacid
L-Leu OMe+HCl
L-Ile OMe+HCl
L-Phe OMe+HCl
L-Cys OMe+HCl
L-Val OMe+HCl

(lmol/cm)
21630
17050
23500
6410
24880

Kex
0,214106
0,278106
0,287106
0,04106
0,06106

log Kex
5,29
5,44
5,45
4,46
4,59

Tabel 2
Aminoacid
L-Leu OMe+HCl
L-Ile OMe+HCl
L-Val OMe+HCl

(lmol/cm)
17480
16310
18550

Kex
0,0097106
0,0260106
0,0034106

log Kex
3,99
4,28
3,76

5.4.2. Determinarea constantei de extracie

Prin msurarea concentraiei de R-NH 4+LA- n faza organic de
extracie i cunoscnd coeficientul molar de absorbie () s-au putut
calcula i concentraiile la echilibru, aspect ce a permis calcul
constantei de extracie, Kex ale complecilor formai de aminoacizii
derivatizai cu liganzii macrociclici n prezena anionului tropeolin OO.
Rezultatele sunt prezentate n tabelele 1 i 2.
Pentru determinarea constantelor de extracie se prepar
urmtoarelor soluii:
PROBA: ntr-un balon cotat cu 25 ml se prepar o soluie
format din:
- 2,5 ml aminoacid (510-3 M) 510-4 M
- 12,5 ml tropeolin OO (10-4 M) 510-5 M
- 5 ml HCl (0,05 N) pH=2
- ap distilat pn la semn

MARTOR: ntr-un balon cotat de 25 ml se prepar o soluie

format din:
- 12,5 ml tropeolin OO (10-4 M) 510-5 M
- 5 ml HCl (0,05 N) pH=2
- ap distilat pn la semn
Extraciile se fac astfel:
- 5 ml prob se extrag cu 5 ml sol. Kryptofix [2.2] 10 -2 M n
cloroform;
- 5 ml martor se extrag cu 5 ml sol. Kryptofix [2.2]510-2 M n
cloroform
Dup citirea spectofotometric a absorbanilor fazei organice a
probei i a martorului, fa de cloroform, se calculeaz constanta de
extracie Kex(2).
Prin realizarea mediei aritmetice a valorilor celor dou
constante de extracte se obine Kex caracteristic sistemului.
Extraciile se realizeaz n acelai mod i pentru soluiile
B18C6 de concentraii 10-2M i 510-3M.
Constantele de extracie se calculeaz conform relaiei:
K ex

[AALA] org
[AA] w [L] org [A ] w]

; unde [AALA]org=

[AALA]org concentraie complexului n faza organic

[AA]w concentraia aminoacidului n faza apoas
[L]org concentraia anionului n faza organic
[A-] concentraia anionului n faza apoas
Echilibrul procesului de extracie:
[AA]w+[L]org+[A-]w K [AALA]org
ex

5.5. Transportul aminoacizilor derivatizai prin membrane

lichide
Transportul aminoacizilor derivatizai s-a realizat ntr-o celul
membranar n form de U, utiliznd 5 ml faz surs, 20 ml
membran lichid i 5 ml faz receptoare, agitnd timp de 4 ore.
Faza receptoare este reprezentat de o soluie de LiOH de
concentraie de 0,1M, concentraia corespunztoare unui pH=13.
Faza surs este reprezentat de o soluie de aminoacid. S-a
preparat i o soluie martor pentru a observa ct din anionul tropeolin
OO se transport.
Soluia reprezentnd proba a fost preparat ntr-un balon cotat
de 25 ml i conine: 2,5 ml aminoacid (510-3M), 12,5 m tropeolin (10 -4
M), 5 ml HCl (0,05N) i ap distilat.
Soluia martor a fost preparat ntr-un balon cotat de 25 ml i
conine: 12,5 ml tropeolin OO (10 -4M), 5 ml HCl (0,05N) i ap
distilat.
Membrana este constituit dintr-o faz lichid organic
(cloroform) n care s-a dizolvat transportorul B18C6 de concentraie
10-2 M dispus ntre dou faze apoase: una care conine aminoacidul,
specia care este transportat, definit ca o faz surs i cealalt faz
care accept specia transportat definit ca faz receptoare (soluie
de LiOH 0,1N).
Dup ce transportul a avut loc se recolteaz cte 5 ml din
fiecare faz i se citesc absorbanele, fa de apa distilat. Se iau 5
ml i din membrana lichid i se face citirea spectrofotometric a
absorbanei fa de cloroform. Citirile s-au fcut pentru fazele apoase
la 443 mm, iar pentru faza organic la 407 mm. Pentru a putea
calcula randamentul de transport se citete absorbana soluiei iniiale

de aminoacid. Valorile randamentelor obinute n cazul a trei

aminoacizi i a probei martor sunt date n tabelul 3.
Tabel 3: Randamentele de transport ale aminoacizilor derivatizai prin
membrana lichid de cloroform utiliznd B18C6 ca transportor n
prezena tropeolin OO.
Aminoacid
B18C6
+
L-Leu OMe HCl
96
+
L-Ile OMe HCl
63
+
L-Cys OMe HCl
43
Proba MARTOR
21
[AAOMe*HCl]=510-4M
[B18C6]=10-2M
[tropeolin OO]=510-5M
[LiOH]=0,1 N

5.6. Concluzii
Rezultatele obinute n urma experimentelor de extracie a
celor cinci aminoacizi derivatizai (L-LeuOMe HCl, L-IleOMeHCl, LCysOMeHCl, L-ValOMeHCl, L-PheOMeHCl) utiliznd ca ageni de
extracie B18C6 i criptandul [2.2], comercializat de firma Merck sub
denumirea Kriptofix [2.2], n prezena tropeolin 00 ca anion pereche
precum i transportul prin membran lichid a trei dintre aceti
aminoacizi au dus la urmtoarele concluzii:
aminoacizii derivatizai se extrag dintr-o faz apoas acid
ntr-un solvent organic ce conine eterul coroan B18C6.
B18C6 este un agent de extracie bun deoarece toi cei 5
aminoacizi s-au extras, iar constantele de extracie au avut valori
optime;

valoarea constantelor

de extracie ale

aminoacizilor

derivatizai descresc n urmtoarea secven:

L-Phe>L-Ile>L-Leu>L-Val>L-Cys
criptandul [2.2] extrage trei dintre aminoacizi, iar valorile
constantelor de extracie au fost mai mici, cu valori ntre 3,764,28,
dar kryptofix [2.2] poate fi folosit ca agent de extracie pentru unii
aminoacizi derivatizai.

valoarea constantelor

de extracie ale

aminoacizilor

derivatizai descresc n urmtoarea secven:

L-Ile>L-Leu>L-Val
transportul aminoacizilor derivatizai prin membran lichid
de cloroform utiliznd ca transportor B18C6 are loc cu randamente
bune i n unele cazuri excelente (L-LeuOMe HCl 96%)

BIBLIOGRAFIE
1. C.J Pedersen> J Am Chem. Soc., 7017 (1967)
2. A. Villiers, Compt. Rend, Acad. Sci. Paris, 112, 536-538, (1981)
3. F. Schardinger, Z. Unters. Nahr. Geanussne, 6, 865-880, (1903)
4. F. Cramer, Angew. Chem., 64, 437-447, (1952)
5. W.L. Hinze, Sep. Purif. Methods, 10, 159, (1981)
6. B. Chankvetadze, G. Endresz i G. Blaschhe, Chem. Soc. Rev.,
25, 141-153, (1996)
7. Y. Yamashoji, M. Ita i M. Tanaka, Chemistry Express, 8, 285288, (1993)
8. H.A. Benesi i J.H. Hildebrand, J. Am. Chem. Soc., 71, 2703,
(1949)
9. H. Karantani, Chem. Lett. (Jpre), 377, (1986)
10

. Drioli, M. Natoli, I. Koter i F. Trotta, Biotech Bioeng., 46,

415-420, (1995)

11

C.H. Lee, Sep. Sci. Tehnol, 16, 25, (1981)

12

H. Hirai, M. Komiyama i H. Yamamoto, I. Incl Phenom.,

2, 655-660, (1984)

13

H. Hirai, H. Yamanoto i M. Komiyama, Kobunschi

Ronbunshin, 43, 109-112, (1986)

14

T. Migata, T. Iwamota i T. Uragami, J. Appl. Polym. Sci.,

51, 2007-2014, (1994)

15

A. Yamasaki i K. Mizogrichi, J. Appl. Polym. Sci, 51,

2957-2062, (1994)

16

B.L. Poh i Y Mooi Chow, J. Ind. Phenom, 14, 85-90,

(1992)

17

H.J. Sahneider, D. Gtles i U. Scheider. Angew Chem.,

Int. Ed. Engl., 5, (1986); J. Am. Chem. Soc, 110, 6449-6454
(1988)

18

C.D. Gutsche i L.J. Bamer., J. Am. Chem. Soc. 107,

6052-6059 (1985)

19

Pascal C. Leverd, Patrick Berthault, bonique Lance i

Martine Nielich, Eur. J. Org. Chem., 133-139, (2000)

20

Giseppe Arena, Annalinda Contina, Fabio Giuseppe

Gulina, Antonia Magri, Francesca Sansone, Domenica Scitto i
Rocco Ungara, Tetrahedron Letters HO, 1597-1600, (1999)

21

L. Muitihac i C. Luca: Rev. Roum. Chem., 36, 85, (1991)

22

H.J. Buschmann, L. Mitehac i R. Mitehac: Sep. Sci.

Tehnol., 34, 331, (1999)

23

J. Lipkorveski, O.V. Kulikov i W. Zielenkiwcz; Supamol.

Chem., 1,73, (1992)

24

L. Mutihac, R. Mutihac i H.J. Buschniann: J. Ind.

Phenom. 23, 167, (1995)

25

H.J. Buschmann i L. Mutihac: Rev. Roum. Chem., 42,

121 (1997)

26

S.K. Chang, H.S. Hwang, H. Son, J. Youk i Y.S. Kang; J.

Chem. Commun, 217 (1991)

27

S. Skinkai: Tetrahidron, 49, 8933, (1993)

28

Y. Okada, Y. Kasai i I. Nishinuera: Tetrahedron Lett., 36,

555, (1995)

29

J.H: Lee, T. Kim, S.K. Chang i J. I. Choe: Supromol.

Chem., 4,315, (1995)

30

I.S. Antipin, I.I. Stoikor, E.M. Pinkhassik, N. Fitseva, I.

Stibor i A.I. Konovalov: Tetrahedrom Lett., 38, 5865, (1997)

31

Y. Kuba, S. Maeda, S. Tokita i M. Kuba: Nature 382,

522, (1996)

32

Y. Kuba, S. Hamoguchi, K. Kotani i K. Yoshida:

Tetrahedron Lett, 32, 7419, (1991)

33

H. Tsukube: J. Chem. Soc., Chem. Commun, 970, (1983)

34

H. Tsukube: J. Chem. Soc., Perkin Trans, 1, 89, (1989)

35

H. J. Buschmann, E. Schollmeyer i L. Mutihac: Anales de

Quimica, Int. Ed., 93, 182, (1997)

36

L. Mutihac, H.J. Buschmann i R. Mutihac: Anales de

Quimica, Int. Ed., 95, 288, (1998)

37

Y. Takeda, K. Katsuta, Y. Yvone i T. Hakushi, Bull. Chem.

Soc. Jpn, 61, 627, (1988)

38

D. M. Dishong, G. J. Diamond, J. Am. Chem. Soc., 105,

586, (1983)

39

R. Prasad, K. Sirkar, Handbook of Industrial Membrane

Technology, Nayes Data Corp., (1990)

40

S. Shinkay, A. A. Eddy, Biochem. J., 122, 701, (1971)

41

J. M. Lehn i J. P. Sauvage, J. Amer. Chem. Soc., 97,

6700, (1975)

42

J. Tabushi, J. Kabuke, Y. Imuta, J. Am. Chem. Soc., 103,

6152, (1981)

43

J. M. Coelhosa i IPSG Crespo, M. J. T. Carrondo,

Separation Science and Tech, 31, 491-511, (1996)