d e sa t ra r i u A c d u la ra h d o n c i i i e ong a r i l

A c d u l ln o e c i i l i a c . , 2 o c t d e ca d e n o c 91 a i i

ENZIMELE Energia liber i teoria strii de tranziie

Enzimele mresc viteza reaciilor biochimice prin micorarea energiei libere de activare G*.

ncercnd s se rspund la ntrebarea care este criteriul de spontaneitate pentru o reacie chimic, se definesc cteva mrimi termodinamice. n cursul procesului entropia total crete, adic S (sistem) + S (mediu)>0. O funcie termodinamic care s se refere numai la sistem care s fie uor de msurat este entalpia, H = E + PV. O funcie termodinamic care s conin att termeni entalpici ct i termeni entropici este energia liber Gibbs definit de relaia: G = H - TS. S considerm acum reacia A + B X* P + Q. v = d[P]/dt = k2 [X*].Teoria strii de tranziie presupune c X* este n echilibru cu reactanii, adic K* = [X*]/[A][B]. Aceast presupunere permite introducerea funciei termodimanice G* care este energia liber Gibbs de activare. Intre constanta K* i aceast energie exist relaia: G* = RTlnK*.

COOH C CH2 N H N NH3+

ENZIMELE Tipuri de cataliz enzimatic Cataliza acido-bazic.

ENZIMELE Tipuri de cataliz enzimatic Tensionarea substratului

ENZIMELE Tipuri de cataliz enzimatic Cataliza covalent Zimogenii sunt precursori inactivi ai enzimelor proteolitice. Dac acestea ar fi sintetizate direct n form activ, ele ar digera chiar esuturile care le-au produs. De aceea ele sunt sintetizate n stare inactiv i eliberate sub form de vezicule nvelite n membrane proteolipidice. Ca o protecie suplimentar, secreia pancreatic conine inhibitorul pancreatic al tripsinei. Acesta formeaz cu enzima un complex foarte stabil . n anumite situaii cum ar fi traumatismele pancreasului, se poate instala o boal grav, pancreatita acut, caracterizat prin activarea prematur a zimogenilor.

ENZIMELE Alte tipuri de cataliz enzimatic Factorul geometric (proximitate i orientare). ntr-o soluie a doi reactani A< i B<>, acetia pot avea diferite orientri. Probabilitatea ca cei doi reactani s se uneasc pe direcia corect i cu suficient energie pentru a se produce reacia, este mic la 37 n soluii diluate. Dac o enzim, care posed doi centri de legare pentru aceti reactani,

este introdus n soluia lor, ei se vor asocia la enzim exact dup direcia corect: A< <>B. Ca rezultat al legrii substraturilor la centrul activ al enzimei, ele vor fi tensionate apropiindu-se astfel de starea de tranziie. Asocierea la enzim a moleculelor de substrat influeneaz puternic interaciunea dintre ele, fcnd posibil reacia.
Cataliza cu ion metalic. Aproape o treime din enzimele cunoscute necesit prezena ionilor metalici pentru activitatea lor. Exist dou clase care difer prin tria interaciunii metal-protein: a. Metaloenzime care conin ionul metalic strns legat. Ionii metalici sunt: Fe2+, Fe3+, Cu2+, Zn2+, Mn2+, Co3+. b. Enzime activate de metale care asociaz slab ionii metalici: Na+, K+, Mg2+, Ca2+. Metalele particip la procesul catalitic n 3 moduri: - Prin legarea la substrat pentru a-l orienta n centrul activ al enzimei; - Prin medierea reaciilor redox n care i schimb reversibil starea de oxidare; - Prin stabilizare electrostatic sau ecranarea sarcinii negative.

Cataliza electrostatic. Legarea substratului exclude n general apa de la centrul activ al enzimei. Cataliza electrostatic rezult din faptul c distribuia de sarcin din zona centrului activ este n aa fel aranjat pentru ca s stabilizeze starea de tranziie a reaciei catalizate. Acest mod de cretere a vitezei este similar catalizei cu ioni metalici ENZIMELE Efecte ale mediului asupra catalizei enzimatice

Efectul pH-ului. temperaturii

Efectul

ENZIMELE Cinetica reaciilor enzimatice

ENZIMELE Inhibiia enzimelor

Inhibiia ireversibil (otrvirea) Inhibiia reversibil Inhibitori competitivi. Inhibitori necompetitivi.

ENZIMELE Controlul activitii enzimelor. Reglarea covalent a enzimelor.

ENZIMELE Controlul activitii enzimelor. Reglarea alosteric a enzimelor. Interaciuni homotropice. n acest caz substratul se constituie ca modulator accelernd sau ncetinind reacia catalitic. Interaciuni heterotropice. Pentru enzimele oligomere, fiecare protomer are 3 centri de legare specifici i independeni pentru: a)substratul care se leag numai n stare relaxat. b)activatorul care se leag numai n stare relaxat. c)inhibitorul care se leag numai n stare tensionat.

--------------------------------------------------------------GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA Prin definiie glicoliza este conversia glucozei n piruvat, cu producere de ATP i NADH. Glicoliza este foarte intens n creier, muchi, ficat, rinichi, iar pentru anumite tipuri de celule, eritrocite, neuroni, spermatozoizi ea este principala surs de energie. Gluconeogeneza este sinteza glucozei din precursori neglucidici cum ar fi, piruvatul i lactatul; glicerolul; intermediarii ciclului citric; 18 aminoacizi codificai genetic numii i aminoacizi glucoformatori. Aceti precursori pot fi transformai ntr-un metabolit comun oxalacetatul, care este materialul de pornire al gluconeogenezei hepatice. GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA Gluconeogeneza poate avea loc n principal n dou organe, ficatul i rinichii i intensitatea ei depinde de condiiile metabolice. n condiii normale ficatul asigur 85-95% din necesarul total de glucoz. Efortul fizic prelungit consum rapid rezervele de glicogen hepatic i muscular, ceea ce face necesar intensificarea gluconeogenezei n ficat, din precursori cum ar fi lactat rezultat din glicoliza anaerob, precum i din glicerolul rezultat n urma lipolizei hormon dependente. Glicoliza i gluconeogeneza, joac un rol important n energogenez, i n homeostazia glicemiei. Intensifi carea gluconeogenezei determin 5

intensificarea conversiei aminoacizilor gluconeogenetici circulani, care pot fi de origine alimentar, n intermediari ai ciclului citric ct i degradarea acizilor cu numr impar de atomi de carbon n propiaonat. GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
P i
G cz l oo u 6o a z - st a f f a

Gcz l oa u

A T P
H oi aa e k z x n

1
G- P 6

H2O

AP D

Fs g c o ol o f u i o eaa zm z r

P i
F c zr t o uo do a z i st a f f a

F- P 6

A T P
Fs fut oo c f r o k aa i z n
2

2
F, 1 P 6

H2O

AP D

Ao z l l a da

Mecanismul chimic al glicolizei i gluconeogenezei

ND A
+

DA OP ND A
+

Too s t r zf f i oa i o eaa zm z r
+

G e l ei - lcr dh 3 i a d P
G ea e i - lcr l h 3 i d d P dh r gnz e i oe aa d

+i P

+i P
+

ND+ AH H

ND+ AH H AP D
Fs gcr o ol eo f i k aa i z n

1 - iof gcr t , d s l e 3 f oi a AP D AP T 3of g ea - s lcr t f oi

A T P
Fs gcr t o ol ea f i maa uz t

2of g e t - s lcr f oi a
Eo z nl a a

Fs eo i ua of nl r vt o p AP D AP T
Pua i vt r k aa i z n

GPC D+ O

3
Pua i vt r

PPK EC

G T P

O l ae t x oct a a

3
A +O T C P

Pua i vt r cr oiaa abx z l

APP D+ i
2

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
Gliceraldehid-3-fosfat GAPDH 1,3-Difosfoglicerat PGK 3-Fosfoglicerat PGM 2-Fosfoglicerat Pi 2,3-difosfoglicerat fosfataza difosfoglicerat mutaza
22-

H C

OPO3

CH2OPO3 2,3-Difosfoglicerat

untul Rapaport-Luebering

n eritrocite exist dou enzime care realizeaz o "bucl metabolic" corelat cu glicoliza, necesar sintezei 2,3-DPG. Ea const n conversia 1,3DPG n 2,3-DPG sub aciunea unei mutaze i n transformarea 2,3 DPG n 3-PG sub aciunea unei fosfataze. Aceast bucl elimin reacia de fosforilare la nivel

de substrat, ceea ce anuleaz beneficiul energetic (ATP) creat de glicoliz n eritrocit. GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA

O C O R N C NH2 O
NA DH
-

O C O R
+N -

H+ H C O
P iruva t

Fermentaia lactic i alcoolic

H C OH
L a cta t

C H3

C NH2 O
NA D
+

C H3

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA n pofida simetriei celor dou conversii (glucoz piruvat) parcurgerea n sens invers nu este identic cu parcurgerea n sens direct a ei. n condiii fiziologice, din cele 10 reacii ale glicolizei, trei sunt ireversibile 1, 3, 10. Parcurgerea n sens invers a acestor 3 reacii necesit un echipament enzimatic specific gluconeogenezei, n timp ce parcurgerea n sens gluconeogenetic a celorlalte 7 reacii utilizeaz aceleai enzime ca i glicoliza datorit reversibilitii lor.
Mecanismul chimic al gluconeogenezei

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA

Conversia piruvatului n fosfoenolpiruvat (PEP)

Dac precursorul nu furnizeaz NADH citosolar, strict necesar gluconeogenezei n faza ei citosolar, se parcurge calea malat. Este cazul precursorilor piruvat i alanin.
CITOSOL + LACTAT
lactat DH membrana mitocondrial

MATRIX MITOCONDRIAL

NAD

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA

NADH

Pyr H

Pyr

ATP+CO 2
piruvat carboxilaz

OA

ADP+Pi GTP CO2

Conversia piruvatului n fosfoenolpiruvat (PEP)

PEP-CK

PEP

PEP

GDP

Dac precursorul poate furniza NADH n citosol, se parcurge calea PEP este calea al crei precursor gluconeogenetic este lactatul

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
Hidroliza F-1,6-P cu formarea F-6-P

Aceast reacie este a doua reacie tipic gluconeogenetic care ocolete reacia glicolitic 3. Bypass-ul gluconeogenetic este posibil datorit prezenei fructozo-1,6-difosfatazei, enzim Mg2+ dependent, care, n condiiile artate, face ca reacia ocolitoare chiar s genereze energie liber. Fructozo-1,6- difosfat este principala enzim reglatoare a gluconeogenezei al crei control alosteric se face prin activare de ctre citrat i prin inhibiie de ctre AMP i F-2,6-P2. Activatorii alosterici ai fructozo-1,6-difosfatazei sunt inhibitori ai PFK1 i invers activatorii alosterici ai PFK1 sunt inhibitori ai fructozo-1,6-difosfatazei. GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
Hidroliza glucozo-6-fosfatului

Este a treia reacie gluconeogenetic care ocolete reacia glicolitic. Enzima hidrolitic este glucozo-6-fosfataza Mg2+ dependent. Ea este localizat n reticulul endoplasmatic al hepatocitelor fiind absent n muchi sau n creier, ceea ce face ca gluconeogeneza s nu se poat produce n aceste esuturi. Muchii i creierul sunt principalii consumatori de glucoz sintetizat de ficat i rinichi.

--------------------------------------------------------------Metabolismul trigliceridelor tisulare Biosinteza trigliceridelor nu are loc prin simpla esterificare a glicerolului ci este un proces consumator de ATP. Metabolii de pornire n majoritatea esuturilor sunt -glicerolfosfat sau DOAP i forma activat a acizilor grai, acilCoA . Degradarea trigliceridelor

Reglarea metabolismului acizilor grasi si a trigliceridelor Sinteza acidului arahidonic

Sinteza unor prostaglandine

-------------------------------------------------------------Biosinteza AND (replicarea)

10

Replicarea la procariote

11

Replicarea la procariote

Replicarea la procariote

12

BIOSINTEZA ARN PE MATRI DE ADN Transcrierea-

13

Sinteza de ADN pe matri de ARN -revers transcriptia-

BIOSINTEZA PROTEINELOR CODUL GENETIC

14

BIOSINTEZA PROTEINELOR
Ribozomii Pro 70S = 30S + 50S S = coeficient de sedimentare O unitate format din ARNr + proteine ribozomale insolubile la pH 7 Eu 73-80S 80S = 60S +40S G.E.Palade ARNm an ntre cele dou subuniti 8 codoni (ribonucleaze) Dou situsuri P i A

15

BIOSINTEZA PROTEINELOR

16

--------------------------------------------------------------OXIDAREA BIOLOGIC Reaciile de oxido-reducere (redox) au o semnificaie biochimic important, prin intermediul lor fiinele vii i procur energia liber din aceste reacii. n metabolismul aerob, care se desfoar n toate celulele eucariote i la cea mai mare parte a procariotelor, energia liber de oxidare a hidrailor de carbon serveasc la sinteza ATP. n general, ntr-o reacie redox un donor (reductor) cedeaz electroni unui acceptor (oxidant). De exemplu n reacia Fe3+ +Cu+ Fe2+ +Cu2+. Aceast reacie poate fi separat n dou pri numite cupluri redox, adic o semireacie de oxidare Cu+ Cu2++e- i una de reducere: Fe3++e- Fe2+. Cele dou cupluri sunt Cu+/Cu2+ i Fe3+/Fe2+. Viteza cu care au loc aceste reacii ar putea fi foarte mic n absena enzimelor, componentele proteice ale enzimelor oxido-reductoare joac un rol important n reaciile de transfer electronic Catena transportoare de electroni din 17

mitocondrie, este sursa primar de ATP la eucariote, n cadrul acesteia electronii de la NADH trec de la un acceptor la altul, pn la O2. OXIDAREA BIOLOGIC Lanul respirator Substraturile catenei transportoare de electroni sunt nucleotidele NADH i FADH2 de la care electronii sunt preluai n prima faz prin reacii de dehidrogenare. n final ei vor reduce oxigenul molecular cu formare de ap. Reaciile globale ale oxidrii biologice vor fi: NADH+H++1/2O2 NAD+ + H2O; respectiv FADH2+1/2O2 FAD + H2O, Cele dou semireacii din care este constituit reacia de oxidare a NADH sunt: NAD+ + H+ +2e- NADH; i 1/2O2 +2 H+ +2e- H2O Cantitate de energie degajat din ultimele dou reacii, dac s-ar elibera brusc sub form de cldur, ar distruge celula. Catena respiratoare asigur o "temporizare" a eliberrii energiei i o partiie a ei n dou forme, cldur i energie liber. O parte din aceast energie este capturat sub form chimic macroergic n ATP n procesul numit fosforilarea oxidativ. Energia liber standard necesar sintezei unui mol de ATP din ADP i Pi este 30,5 kJ. La oxidarea unui mol de NADH (-218kJ/mmol) s-ar genera energie suficient pentru sinteza a 7 moli de ATP. Lanul respirator Secvena lanului respirator
NADH 2e FADH 2 2e FAD
-

NAD

ADP + Pi
Rotenona sau Amytal

Complexul I o' G = - 69,5 kJ/mol Complexul II CoQ

ATP ADP + Pi
Antimicina A

Tenoiltrifluoro acetona

Complexul III o' G = - 36,7 kJ/mol Citocrom c

ATP ADP + Pi

Complexul IV o' G = - 112 kJ/mol 2e + 2H + 1/2 O2 H2O

CN

ATP

Electronii (de fapt atomii de hidrogen separabili n electroni i protoni) sunt preluai de la NADH sau FADH2 i, prin intermediul complexelor enzimatice I respectiv II sunt transferai la coenzima Q, de la care ei sunt preluai, prin intermediul complexului III de citocromul c. De la citocromul c electronii sunt transferai, prin intermediul complexului IV, pe oxigenul molecular.

18

Complexul I catalizeaz oxidarea NADH de ctre CoQ a crei reacie este urmtoarea: NADH+CoQox NAD+ +CoQred Complexul II catalizeaz oxidarea FADH2 de ctre CoQ cu reacia: FADH2+CoQox FAD+CoQred Complexul III catalizeaz oxidarea CoQred de ctre citocromul c oxidat (cit.c (Fe3+)) care trece n form redus CoQH2+Cit c ox CoQ+Cit c red + 2H+, Complexul IV catalizeaz oxidarea citocromului c de ctre O2, ultimul acceptor de electroni al catenei transportoare de electroni: Cit c red +1/2O2 + 2H+ cit c ox+H2O Lanul respirator Componentele lanului respirator

Lanul respirator Fosforilarea oxidativ ATP sintaza este compus din 2 pri cu structuri complexe. Cele dou pri ale sintazei se noteaz cu FO i F1. FO este componenta transmembranar a sintazei, (indicele O se refer la sensibilitatea la oligomicin) insolubil n ap datorit hidrofobicitii ei, formeaz canalul de protoni.

Partea F1, expus pe suprafaa matriceal a membranei, este solubil n ap, compus din 5 tipuri de subuniti. Sunt trei subuniti de tip trei subuniti de tip una una i una .
19

Subunitile de tip conin centrul catalitic de sintez a ATP-ului. Subunitile i formeaz o structur inelar n interiorul creia se gsesc subunitile , i . Subunitatea execut o micare de rotaie n timpul sintezei de ATP. Subunitatea realizeaz legtura dintre canalul protonic FO i componenta F1.
Lanul respirator

Ipoteza chemiosmotic Lanul respirator

O H + NO 2 NO 2
+ -

OH NO 2 NO 2

Decuplani ai fosforilrii oxidative

--------------------------------------------------------------Musc hi , E ritroc ite G lu coz Fic at Lactat

Ciclurile glucozei
Glucoz

Muschi , Pyr Ala Ala Ficat Pyr Ala

Te su tul adip os , TG G lic e rol G lu co z G lice r o l

F ic at G A - 3-P G lic e rol

20

Glicerol+ATPGlicerol-3-P+ADP (glicerol kinaza) Glicerol 3-P+NAD+DOAP+ NADH + H+ (glicerol 3 P DH) DOAP GA-3-P

(trizofosfat izomeraza)

Degradarea fructozei

Degradarea galactozei

21

-2 O3POCH 2 CH 2OH O H H O H O H HO H HO OH he xok inaza OH fos fom anozo H HO OH OH HO OH izom e raza H HO H H H H OH H

CH 2OH

A TP ADP

CH 2OPO 32-

Degradarea manozei

Manoza

Manoz-6-fosfat

Fructozo-6-fosfat

Intoleran la lactoz, este o boal congenital determinat de deficitul de lactaz. Copiii afectai nu pot consuma lapte deoarece lactoza din lapte se acumuleaz, iar apoi este convertit de bacteriile tractului intestinal n produi toxici, n special acizi organici iritani, care cazeaz diaree. Odat cu producerea acizilor organici se degaj mari cantiti de CO2 i H2 care provoac crampele abdominale.

Cile secundare de oxidare a glucozei Calea pentozo fosfatilor

Metabolismul glicogenului Sinteza glicogenului (glicogenogeneza)

Sinteza G-6-P

G+ATP G-6-P+ADP Excesul de glucoz, provenit din alimentaie sau gluconeogenez, este stocat sub form de glicogen. Aceast sintez se petrece n aproape toate esuturile animale, ns cea mai mare intensitate o are n ficat i muchiul scheletic. Enzima care catalizeaz aceasat pri reacie este catalizat de hexokinaz (HK) n muchi i de glucokinaz (GK) n ficat. Dup digestia glucidelor i absorbia glucozei, glucoza ajunge prin vena port n ficat unde o parte rmne pentru sinteza rezervei de glicogen.
Sinteza glicogenului (glicogenogeneza) Izomerizarea G-6-P G-6-P G-1-P Enzima care catalizez acest reacie este una din cele mai rspndite enzime - fosfoglucomutaza -

22

Sinteza UDP-glucozei Pentru ca reacia s aib loc este necesar activarea glucozei-1-P cu UTP pentru formarea UDP-G enzima care catalizeaz aceast reacie este UDP-Gpirofosforilaz
Sinteza glicogenului (glicogenogeneza) Sinteza catenelor a (14) glicozidice

Glicogen sintaza este enzima care acionnd la captul nereductor al unei catene a(1-4) preexistente, mrete catena cu cte o unitate, adus de UDPglucoz.

Gn + UDP-G Gn+1 + UDP (glicogen sintaza)

Ramificarea catenelor de glicogen

Glicogen sintaza nu poate forma legturi (1-6) glicozidice adic, nu poate foram ramificaii. Enzima ramificant este amilo-1,4 1,6-transglicozidaz (ramificaz) care catalizeaz transferul unui fragment de 6-7 inele glucidice de la captul nereductor pentru formarea unei legturi (16) cu o molecul de glucoz, din interiorul catenei.

Sinteza glicogenului (glicogenogeneza)

Ramificarea catenelor de glicogen

Ramificaza acioneaz atunci cnd catena (14) s-a alungit cu minimum 11 resturi de glucoz. Ramificaiile se alungesc apoi cu noi subuniti glucidice legate (14) sub aciunea Gn-sintazei. Importana biologic a ramificrii este multipl, astfel creterea numrului de capete nereductoare ale biopolimerului constituie substratul aciunii simultane a mai multor molecule de glicogen sintaz, de asemenea ramificarea duce la creterea solubilitii biomoleculei

Sinteza glicogenului (glicogenogeneza)

Iniierea sintezei glicogenului

Pentru a putea ncepe sinteza unei noi molecule de glicogen este necesar o protein primer numit glicogenin. Primul rest de glucoz, din UDPG, se condenseaz cu un radicalul Tyr al glicogeninei. n etapa urmtoare glicogenina formeaz cu glicogen sintaza un complex stabil (l:l) care catalizeaz condensarea a nc 7 molecule de glucoz, din UDP-G, cu formarea unei catene (14) glicozidice ntr-o ni creat de complexul glicogenin-sintaz. n continuare complexul se disociaz i sintaza preia cataliza sintezei catenelor (14), n combinaie cu ramificaza completeaz particula de glicogen, glicogenina rmnnd ngropat n miezul acesteia.

Glicogenoliza Fosforoliza glicogenului

23

Fosforilaza are ca centru activ o "fisur". Lungimea acesteia permite asocierea a 4-5 resturi glucidice legate (14)glicozidic. Ea este prea "strmt" pentru a permite asocierea catenelor ramificate ceea ce explic de ce eliberarea G1-P de la captul nereductor al catenei glicogenului poate avea loc numai dac distana dintre capt i prima ramificaie este de 4-5 resturi glucidice. Izomerizarea G-1-P enzima fosfoglucomutaz. Este o reacie care mobilizeaz glucoza din glicogen. Reacia const n clivajul legturilor (14) glicozidice de la capetele nereductoare ale catenei glicogenului i eliberarea esterilor fosforici ai resturilor glucidice atacate. Reacia are loc numai dac exist cel puin 4 resturi glucidice pn la prima ramificaie (legtur (16) glicozidic). Enzima, glicogen fosforilaza este un dimer, format din doi monomeri identici, reglat att prin mecanism covalent ct i alosteric.
Deramificarea catenelor Gn

Legtura (16) a restului glicozil rmas n ramificaia catenei principale este hidrolizat de a doua subunitate (b) a enzimei deramificatoare. Aceast reacie produce glucoz i catena neramificat. Prezena celor 2 subuniti (a i b) asigur o nalt eficien n procesul de deramificare. Pentru degradarea glicogenului este necesar eliminarea ramificaiilor. La acest proces concur dou subuniti ale enzimei deramificatoare: (a) Oligo (16)- (14)-glucan transferaza, mai scurt 1,4-glucan transferaza i (b) amilo1,6 glicozidaz. Prima subunitate, (a), acioneaz ca o glicozil transferaz, care mut o oligazaharid de la o "ramificaie limit" a glicogenului la captul nereductor al altei ramificaii. Aceasta reacie formeaz o nou legtur (14), elongnd catena care poate fi supus din nou fosforolizei.

DIGESTIA GLUCIDELOR
Digestia amidonului, ncepe n cavitatea bucal sub aciunea amilazei salivare. Aceast enzim cliveaz hidrolitic, n ordine ntmpltoare, legturile (14) glicozidice. Aciditatea stomacal dezactiveaz -amilaza care a redus amilaza i amilopectina la fragmente mai mici de 8 uniti glucidice. Digestia continu n intestinul subire sub influena -amilazei pancreatice, care acioneaz similar cu -amilaza salivar, pn la maltotrioz, format din 3 resturi de glucoz unite prin legturi (14) i oligozaharide cunoscute sub numele de dextrine limit care conin i legturi (16). Alturi de lactoz, zaharoz i maltoz, acestea sunt hidrolizate pn la monozaharide sub aciunea dizaharidazelor, oligozaharidazelor i dextrinazelor intestinale secretate de celulele epiteliale cu suprafa stufoas din segmentul jejuno-ileal. Hidroliza di- i oligozaharidelor este necesar ntruct n condiii normale ele nu pot fi absorbite n intestin.

24

Maltaza hidrolizeaz maltoza i maltotrioza formnd glucoz care este absorbit prin transport activ. Transportorul de glucoz este o protein complex a crei activitate este conectat cu pompa de Na+-K+. Glucoza i galactoza nu se pot asocia la transportor dect dup ce acesta s-a ncrcat cu ioni Na+. Un alt sistem de transport care funcioneaz prin mecanismul difuziei facilitate asigur absorbia fructozei n intestin.

--------------------------------------------------------------Metabolismul CM si a VLDL

25

Metabolismul HDL

Generarea de energie prin catabolizarea amino acizilor

Relatia dintre ciclul ureogenetic si ciclul ac.citric

Malat Fumarat Arg UREE Orn Carbamil fosfat Ac.Arg.Succ CG Asp Glu Citrulina

G ln GD lu H

C CK G
NH 3

G lu

CG CO2 NH3

N H GluDH
NADH+H
+

OA

C K

Glu
AP T
NAD
+

Carbamil fosfat sintetaza UREE

LOB ATP

26

Utilizarea scheletelor de carbon

Ala Gly Ser Cys Thr

Glucoza Citrat CG

Pyr

Glu Gln His Pro Arg

CH 3COSCoA

Met Val Ile Asp Asn

SuccinilCoA

Leu Lys Trp

OA

AcetoacetilCoA
Phe Tyr

Fumarat

Biosinteza hemoblobinei
Fe
2+

HEM Globina

Hemoglobina

--------------------------------------------------------------PLACA DENTARA
n lipsa igienei orale are loc depunerea la suprafaa dinilor a unei substane cu aspect gelatinos, constituit din microorganisme. Modul de constituire a plcii La suprafaa peliculei dentare se depune matricea plcii. Ca provenien, ea este de origine salivar. Apoi, n 2-4 zile de la formarea matricei, la suprafaa ei apar acumulri de microorganisme. Ulterior, fiecare colonie se nconjoar cu un halou constituit tot din microorganisme. Halourile se dezvolt rapid i, ntinzndu-se, devin confluente. Placa dentar este de dou tipuri : supragingival i subgingival.

27

Procesele metabolice din placa dentar Unele servesc construirea plcii, altele o deterioreaz. Cele mai frecvente procese metabolice sunt cele prin care microorganismele produc polizaharide. Unele din polizaharidele sintetizate de microorganisme sunt nmagazinate intracelular; altele sunt depozitate extracelular. Streptococcus mitis catabolizeaz polizaharidul nmagazinat intracelular folosind calea glicolitic, pn la acid lactic. Alte polizaharide extracelulare de tip levan se degradeaz pn la stadiul de acid lactic. Catabolismul proteic la nivelul plcii dentare a fost pus n eviden prin formare de amoniac, att din aminoacizi ct i din uree. Un mediu alcalin favorizeaza dezvoltarea tartrului dentar i remineralizrii smalului atacat. 1. TEORIA CHIMICO-PARAZlTIC Avansat de Miller din anul 1882. El a susinut c distrugerea dentar este o boal chimico-parazitic i se caracterizeaz prin dou stadii distincte : a) decalcifierea (sau nmuierea) esutului tare dentar b) solubilizarea restului de esut moale. Cauza acestei distrugeri a fost atribuit tuturor microorganismelor din cavitatea bucal care au capacitatea de a provoca o fermentaie acid a alimentelor. Toate microorganismele din cavitatea bucal, avnd aciune proteolitic, pot participa la declanarea stadiului al doilea. O completare a acestei teorii, iniierea i progresarea leziunii carioase necesit fermentaia glucidelor n placa dentar sub aciunea ei se produce acidul lactic sau ali acizi slabi care difuzeaz prin smal, dizolvnd substana mineral. 2. TEORIA PROTEOLIZEI (SAU TEORIA PROTEOLITICA) Cnd cavitatea carioas progreseaz n profunzimea smalului, ajungnd pn la nivelul dentinei, ptrunderea cariei n dentin nu mai poate fi explicat prin dizolvarea constituenilor minerali. Dentina conine n msur apreciabil substane organice n primul rnd colagen, insolubil n acid. Aceste observaii l-au ndreptit pe Gottlieb s avanseze, n 1947, ideea c pentru ptrunderea cariei n dentin este absolut necesar intervenia unor bacterii proteolitice. De fapt, s-a considerat c nsui atacul iniial al smalului n procesul carios este realizat de microorganisme care hidrolizeaz proteinele din matricea primului nveli tare al dinilor. Procesul carios ncepe n straturi de prisme necalcifiate din smal la nivelul crora se gsesc i proteine. Sub aciunea enzimelor eliberate de microorganisme, proteinele constituente ale smalului sunt hidrolizate n produi de degradare. Apoi, prin acelai mecanism, sunt degradate i proteinele din dentin. n majoritatea cazurilor, degradarea proteinelor este ntovrit de o producere limitat de acid. Sub aciunea acestor cantiti reduse de acid o parte din substanele minerale constituente se dizolv 3. TEORIA PROTEOLIZEI I CHELRII Potrivit rezultatelor experimentale obinute de Schatz, s-a conchis c diverse produse ale activitii bacteriene asupra smalului, dentinei, hranei i unor constitueni salivari au proprietatea de a forma combinaii complexe cu calciu; acidul lactic i glicina. Multe substane organice, inclusiv unele din placa dentar, pot forma chelai cu ionii Ca2+ la valori de pH neutru sau alcalin i n mediu saturat cu ionii Ca2+ i PO43+. Dac substana chelatoare se afl n plac, ea se poate combina direct cu ioni Ca2+ din smal sau acetia pot fi absorbii n cuprinsul plcii. Se nelege c n asemenea condiii concentraia ionilor Ca2+ ar scdea sub cea corespunztoare saturaiei. Combinaiile organice susceptibile a forma chelai sunt n primul rnd produse de degradare hidrolitic a proteinelor.

28

4.TEORIA ENDOGEN Aceast teorie a fost conceput de Csernyei care a afirmat c procesul carios este pulpogenetic, n sensul c el survine dintr-un dezechilibru biochimic avnd loc n pulp, dar care se manifest clinic la nivelul smalului i al dentinei. Acest dezechilibru se stabilete ntre magneziul i fluorul din pulp. Or, dup cum se tie, ionii de magneziu (Mg2+) sunt activatori iar ionii de fluor (F-) sunt inhibitori ai fosfatazei. Pe de alt parte, fosfataza este enzima care hidrolizeaz fosfaii organici (glicerofosfaii, hexozofosfaii) cu eliberare de ioni fosfat ce particip la constituirea fosfatului de calciu. Se nelege astfel c orice dezechilibru ntre ionii care activeaz i inhib enzima se repercuteaz asupra principalilor constitueni minerali din smal sau dentin. Din ionii fosfat eliberai din fosfaii organici de ctre fosfataz se elibereaz acidului fosforic, dizolv fosfatul de calciu din esutul calcifiat i favorizeaz procesul carios. 5.TEORIA GLICOGENULUI Egyedi a avansat ideea c susceptibilitatea la carii a indivizilor este n relaie strns cu aportul mare de zaharuri n perioada de dezvoltare a dinilor. Acest fapt are ca rezultat formarea unor depozite excesive de glicogen i glicoproteine n structura matriceal a dinilor. Ulterior, dup constituirea plcii dentare, acizii generai la nivelul ei, sub aciunea anumitor enzime, hidrolizeaz att glicogenul ct i glicoproteinele pn la stadiile de glucoz i glucozamina. Bacteriile plcii acioneaz, n continuare, degradnd glucoza i glucozamina pn la stadiu de acizi. Aceti acizi sunt, bineneles, demineralizani, nlesnind astfel formarea cariilor. 6.TEORIA ORGANOTROPICA Leimgruber a formulat teoria organotropic, susinnd c procesul carios nu reprezint o distrugere local a esutului tare dentar ci este o boal a ntregului dinte. Acesta este considerat ca un sistem biologic compus din pulp, esuturi tari i saliv. esuturile dentare tari ar aciona ca o veritabil membran ntre snge i saliv, nlesnind diverse schimburi de constitueni. Direcia de schimb ntre cele dou medii fluide ar depinde att de proprietile biofizice i biochimice ale mediilor ct i de rolul activ sau pasiv al membranei. Aceasta este alctuit din substane minerale i constitueni organici n special proteici. Ambele feluri de constitueni sunt unii ntre ei prin legturi chimice polare. Datorit lor, substanele minerale i matricea din smal sau dentin sunt meninute ntr-o stare de echilibru biodinamic. Orice agent, n msur s desfac legturile chimice stabilite ntre componeni, stric echilibrul biodinamic i constituenii respectivi devin susceptibili la diverse degradri care favorizeaz apariia i dezvoltarea cariilor. 7. TEORIA BIOFIZICA Neuman i DiSalvo au avansat teoria biofizic pe baza rspunsului proteinelor fibrilare la stressul de compresiune mecanic. Ei au considerat c prin compresiunea exercitat n cursul masticaiei, proteinele din structura matricei dentare ar suferi modificri structurale sclerotice. Aceste modificri sunt ntovrite de o pierdere de ap care este "legat" de catenele polipeptidice ale proteinelor fibrilare constitutive. n continuare, schimburile structurale - produse prin compresiune - modific rezistena dinilor fa de agenii distructivi din mediul bucal, facilitnd formarea sau dezvoltarea cariilor

---------------------------------------------------------------

29

Ciclul acidului citric Decarboxilarea oxidativ a acidului piruvic

Decarboxilarea oxidativ a piruvatului are loc n matricea mitocondrial sub aciunea catalitic a complexului, multi enzimatic piruvat dehidrogenaz. -E1, piruvat dehidrogenaza cu coenzima TPP ataat prin fore coulombiene, -E2, dihidrolipoil transacetilaza cu coenzima lipoamida legat covalent i coenzima A care nu se recicleaz -E3, dihidrolipoil dehidrogenaza cu coenzima FAD i coenzima NAD+, cea din urm fiind nereciclabil. De remarcat faptul c structurile complexelor decarboxilrii oxidative a altor -cetoacizi au tot 3 enzime ce conin aceleai coenzime i catalizeaz aceleai tipuri de reacii. Ciclul acidului citric Decarboxilarea oxidativ a acidului piruvic

Ciclul acidului citric Mecanismul chimic

ntregul echipament enzimatic al ciclului citric se gsete n matricea mitocondrial cu excepia succinat dehidrogenazei care este "ngropat", n membrana intern.

Ciclul acidului citric Caracterul amfibolic al ciclului citric. Ciclul acidului citric Caracterul amfibolic al ciclului citric.

Reaciile anaplerotice rencarc ciclul pornind de la precursori ne-citrici. Principala reacie anaplerotic n ficat i rinichi este carboxilarea piruvatului.Pyr + CO2 + ATP + H2O OA + ADP +Pi -piruvat carboxilaz, biotin-dependent n miocard i muchiul scheletic are loc reacia:

30

PEP + CO2+ GDP OA + GTP - PEP carboxikinza O seric de ci catabolice produc intermediari ai ciclului citric printre care menionm oxidarea acizilor cu numr impar de atomi de carbon i degradarea valinei, izoleucinei i metioninei, care dau natere propionil-CoA, care n urma a dou reacii ulterioare trece n succinil-CoA. De asemenea fenilalanina, tirozina i aspartatul se degrada dnd natere la fumarat i acetoacetat n cazul Phe i Tyr i respectiv fumarat Propionic CoA+ CO2 + ATP Succinil- CoA + ADP +Pi propionil CoA carboxilaza .

--------------------------------------------------------------METABOLISMUL ACIZILOR GRAI

Celulele care i procur energia din oxidarea acizilor grai pot obine aceti acizi din 3 surse: a. grsimile din diet, b. trigliceridele de stocaj, c. lipidele sintetizate de un organ pentru a fi exportate ctre alte organe. (Ficat convertete excesul de glucide din alimentaie n TG pe care le export sub form de lipoproteine ctre alte esuturi. nainte de asimilare lipidele din diet trebuie s fie digerate, pentru aceasta ele sunt aduse n intestin n stare fin dispersat de micele microscopice. Srurile biliare ca deoxicolatul i taurocolatul de sodiu formeaz micele mixte cu triacilglicerolii ceea ce mrete foarte mult accesul enzimelor hidrolitice cum ar fi lipazele.

Monoacilglicerolii, AGL i glicerolul care rezult sunt absorbii n celulele peretelui intestinal unde se resintetizeaz TG. mpreun cu apolipoproteinele B48 lipidele resintetizate constituie chilomicronii care ajung pe cale limfatic n circulaia sanguin. Lipoproteinlipaza plasmatic degradeaz. TG din chilomicroni iar AGL rezultai, vehiculai de albumina plasmatic, sunt captai de celulele consumatoare (miocite, adipocite). n afar de lipaz, n intestin mai acioneaz i alte hidrolaze ale digestiei lipidelor: lecitinaza i colesterol esteraza. Prima cliveaz lecitina n lizolecitin i AGL iar a doua desface esterii de colesterol n componente, colesterol i AGL. Lizolecitina i, n parte, lecitina nemodificat ajung mpreun cu glicerolul direct n circulaia portal. Trigliceridele, ca de exemplu dipalmitostearina, sunt rezervoare concentrate de energie metabolic deoarece ele sunt substane reduse i anhidre. Circa 39 kJ se produc prin oxidarea complet a 1 g lipide i doar 17 kJ prin oxidarea unui gram de glucide. Trigliceridele de stocaj se gsesc acumulate n citoplasma adipocitelor sub form de picturi care ocup majoritatea volumului celulelor. Adipocitele sunt specializate n sinteza i depozitarea TG ct i n mobilizarea componentelor lor. Lipaza adipocitar hidrolizeaz TG la AGL i glicerol, reacie similar cu cea catalizat de lipaza pancreatic n intestin. Aceast enzim se mai numete lipaz hormon-sensibil deoarece activitatea ei este stimulat de adrenalin, glucagon, ACTH (Hormonul adenocorticotrop ) i este inhibat de insulin prin intermediul AMPc. AGL prsesc adipocitele intrnd n circulaia sanguin unde sunt vehiculai de albumina seric. Glicerolul poate intra pe calea glicolitic dup ce este transformat n DOAP. Modul de intrare depinde de esut. n hepatocit i esuturile

31

extrahepatice, cu excepia esutulul adipos i a mucoasei intestinale, glicerolul este fosforilat de o kinaz i apoi dehidrogenat. n adipocit activitatea glicerol kinazei este sczut. Acizi grai sunt degradai n continuare prin -oxidare.
-OXIDAREA ACIZILOR GRAI

Activarea acizilor grai n citosol Acest proces de activare este catalizat de cel puin trei acil-CoA-sintetaze (tiokinaze) care difer ntre ele prin specificitatea fa de lungimea catenei hidrocarbonate: AGL+CoASH+ATP Acil-CoA+AMP+2Pi n reacie rezult iniial PPi care este hidrolizat de o pirofosfataz. Acest mecanism a fost evideniat cu ajutorul acizilor grai marcai cu oxigen izotopic.

H 3C H3C N+ CH2 CH OH CH3

Naveta carnitin/acilcarnitin
Membrana intern mitocondrial este impermeabil pentru moleculele de acil-CoA. Exist un mecanism special de translocare a radicalilor acil ei strbat membrana intern sub form de acil-carnitin, component a unui sisteme de transport numit naveta carnitin-acilcarnitin. Pentru nceput radicalul acil este transferat de la CoA la gruparea HO- a carnitinei , sub aciunea carnitin-acil-transferazei I Apoi, acil-carnitina transloc prin membrana intern sub aciunea translocazei. Carnitin-aciltransferaza II catalizeaz transferul radicalului acil napoi la CoA. Cele dou transferaze I i II se gsesc ataate la suprafaa exterioar respectiv interioar a membranei interne. Secvena -oxidrii

CH2 COOH

BIOSINTEZA DE NOVO A PALMITIC

ACIDULUI

Enzimele care catalizeaz ciclul de reacii sunt asociate ntr-un complex enzimatic Acid gras sintetaza care conine 7 enzime, n centrul complexului enzimatic se afl o protein acil-transportoare (ACP) a crei grupare fosfopantotenic este identic cu a coenzimei A.

32

Complexul conine urmtoarele subuniti enzimatice: 1. Acetil-CoA-ACP transacetilaza; 2. Malonil-CoA-ACP transacetilaza; 3. b-cetoacilACP sintaza (enzima de condensare); 4. cetoacil-ACP reductaza; 5. -hidroxiacil-ACP dehidrataza; 6. enoilACP reductaza; 7. palmitoil tioesteraza.

Naveta citrat/piruvat Sursele de acetil-CoA mitocondrial sunt decarboxilarea oxidativ a piruvatului i oxidarea AGL. Atunci cnd cererea de ATP este mic, oxidarea acetil-CoA n ciclul citric precum i fosforilarea oxidativ diminueaz. Excesul de acetil-CoA poate fi stocat n structuri lipidice (TG, colesterol i esterii si). Biosinteza AGL are loc n citosol dar

33

mitocondrie
COO CH 2 HO C CH 2 COO citrat citrat sintaza HS-CoA COO -

membrana mitocondriala sistem de transport a ac.tricarboxilici

citosol citrat
ATP+HS-CoA ADP+Pi COO C CH 2 O Acetil-SCoA ATP citrat liaza

membrana mitocondrial este impermeabil pentru acetil-CoA. Acesta intr n citosol via sistemul de transport tricarboxilic.

Acetil-SCoA

oxaloacetat
ADP+Pi

COO oxaloacetat NADH+H COO C NAD +

malat DH

Reglarea biosintezei de novo a acizilor grai

Prin citratul stimuleaz biosinteza de novo a acizilor CH 2 grai. Prin urmare, cnd HCO 3 COO concentraia CH3COSCoA + ATP L-malat + crete n mitocondrie, crete i O NADP enzima malica concentraia citosolar a CH 3 C COO NADPH+H + piruvat citratului iar biosinteza acizilor piruvat grai este accelerat. PalmitoilCoA, principalul produs al sintezei de novo a AGL, deplaseaz echilibrul spre stnga.
piruvat carboxilaza HO H

Elongarea i desaturarea acizilor grai

Elongarea acizilor grai se face dup un mecanism asemntor cu sinteza acidului palmitic cu diferene legate de factorii coenzimatici. Desaturarea acizilor grai este catalizat la mamifere de 9, 6 5 , 4 desaturaza terminal. Astfel sunt convertii acidul stearic n oleic sau acidul palmitic n palmitoleic. Datorit prezenei 9-desaturazei acizii grai 9-desaturai sunt acizi neeseniali. Este cazul acizilor palmitoleic, 16:1 ( 9) i oleic, 18:1 ( 9). Acizii polinesaturap linoleic, 18:2( 9 1 2 ) i linolenic, 18:3( 9 1 2 1 5 ) sunt acizi eseniali adic ei sunt obinui din surse exogene cum ar fi alimentele vegetale, la care exist echipamentele enzimatice necesare desaturrilor 12 1 5 .

---------------------------------------------------------------

34

Catabolismul hemului

Biosinteza nucleotidelor purinice

35

36