1

Cuprins1 AMINOACIZII .....................................................................................................10 2 1.1 CLASIFICAREA AMINOACIZILOR.....................................................................................11 1.1 CLASIFICAREA AMINOACIZILOR..........................................................................11 1.1.1 Aminoacizii proteinogeni........................................................................................11 1.1.1.1 Aminoacizii cu radicali nepolari.....................................................................11 1.1.1.1 AMINOACIZII CU RADICALI NEPOLARI........................................................11 1.1.1.2 Aminoacizii cu radicali polari.........................................................................13 1.1.1.2 AMINOACIZII CU RADICALI POLARI.............................................................13 1.1.2 Aminoacizi necodificai genetic, care intr n structura unor proteine.................16 1.1.3 Aminoacizi necodificai genetic, care nu intr n structura proteinelor. ..............17 1.2 PROPRIETILE AMINOACIZILOR....................................................................................18 1.2 PROPRIETILE AMINOACIZILOR.......................................................................18 1.2.1 Stereoizomeria i proprietile optice. ..................................................................18 1.2.2 Proprietile acido-bazice......................................................................................20 1.2.3 Proprieti chimice ale aminoacizilor ...................................................................22 1.2.3.1 Reaciile gruprii carboxil...............................................................................22 1.2.3.1 REACIILE GRUPRII CARBOXIL..................................................................22 1.2.3.2 Reaciile specifice radicalilor..........................................................................22 1.2.3.2 REACIILE SPECIFICE RADICALILOR..........................................................22 1.2.3.3 Reaciile gruprii amino...................................................................................23 1.2.3.3 REACIILE GRUPRII AMINO...........................................................................23 2 PEPTIDELE........................................................................................................................24 2.1 EXEMPLE DE PEPTIDE.....................................................................................................24 2.1 EXEMPLE DE PEPTIDE...............................................................................................24 2.2 PROPRIETILE PEPTIDELOR...........................................................................................26

2.2 PROPRIETILE PEPTIDELOR................................................................................26 3 3 PROTEINELE....................................................................................................................26 3.1 STRUCTURA PROTEINELOR. NIVELE DE ORGANIZAREA STRUCTURAL .........................27 3.1 STRUCTURA PROTEINELOR. NIVELE DE ORGANIZAREA STRUCTURAL ...................................................................................................................................................27 3.1.1 Structura primar a proteinelor. ..........................................................................28 3.1.2 Structura secundar a proteinelor..........................................................................32 3.1.2.1 Structura helix.............................................................................................33 3.1.2.1 STRUCTURA HELIX..........................................................................................33 3.1.2.2 Structura pliat 3.1.2.2 STRUCTURA PLIAT .......................................................................................33 ...................................................................................33

3.1.2.3 Structurile secundare non-repetitive ...............................................................34 3.1.2.3 STRUCTURILE SECUNDARE NON-REPETITIVE ..........................................34 3.1.2.4 Conformaiile colagenului i elastinei.............................................................34 3.1.2.4 CONFORMAIILE COLAGENULUI I ELASTINEI.......................................34 3.1.3 Structura teriar a proteinelor..............................................................................38 3.1.3.1 Studiul structurii teriare cu raze X..................................................................38 3.1.3.1 STUDIUL STRUCTURII TERIARE CU RAZE X.............................................38 3.1.3.2 Forele stabilizatoare ale structurii teriare.......................................................39 3.1.3.2 FORELE STABILIZATOARE ALE STRUCTURII TERIARE.....................39 3.1.3.3 Denaturarea proteinelor....................................................................................40 3.1.3.3 DENATURAREA PROTEINELOR.........................................................................40 3.1.4 Structura cuaternar a proteinelor. ......................................................................41 3.2 SEPARAREA PROTEINELOR..............................................................................................41 3.2 SEPARAREA PROTEINELOR.....................................................................................41

3.2.1 Extracia din celule.................................................................................................41 3.2.2 Solubilitatea proteinelor.........................................................................................42 3.2.3 Gel-filtrarea, dializa i cromatografia de afinitate................................................42 3.2.4 Separarea proteinelor ca polielectrolii.................................................................43

4 ACIZII NUCLEICI ............................................................................................................45 4.1 NUCLEOBAZE, NUCLEOZIDE I NUCLEOTIDE. DERIVAI.................................................45 4.1 NUCLEOBAZE, NUCLEOZIDE I NUCLEOTIDE. DERIVAI.............................45 4.1.1 Nucleobaze..............................................................................................................45 4.1.2 Nucleozidele............................................................................................................46 4.1.3 Nucleotidele............................................................................................................47 4.2 STRUCTURA PRIMAR A ACIZILOR NUCLEICI. ...............................................................48 4.2 STRUCTURA PRIMAR A ACIZILOR NUCLEICI. ...............................................48 4.3 CONFORMAIILE ADN. .................................................................................................51 4.3 CONFORMAIILE ADN. .............................................................................................51 4.3.1 Forele stabilizatoare ale conformaiei ADN.........................................................52 4.3.2 Denaturarea acizilor nucleici.................................................................................52 4.4 PROIECTUL GENOMUL UMAN......................................................................................53 4.4 PROIECTUL GENOMUL UMAN.............................................................................53 5 CROMOPROTEINELE.....................................................................................................55 5.1 IMPORTANA CROMOPROTEINELOR................................................................................55 5.1 IMPORTANA CROMOPROTEINELOR..................................................................55 5.2 STRUCTURILE MIOGLOBINEI I HEMOGLOBINEI..............................................................56 5.2 STRUCTURILE MIOGLOBINEI I HEMOGLOBINEI..........................................56 5.3 OXIGENAREA MIOGLOBINEI I HEMOGLOBINEI..............................................................58 5.3 OXIGENAREA MIOGLOBINEI I HEMOGLOBINEI............................................58 5.3.1 Efectul Bohr............................................................................................................61

5.3.2 2,3-difosfoglicerat (2,3-DPG), efector alosteric al hemoglobinei. .......................62 5 5.4 DERIVAII HEMOGLOBINEI.............................................................................................63 5.4 DERIVAII HEMOGLOBINEI.....................................................................................63 5.4.1 Oxihemoglobina. ....................................................................................................63 5.4.2 Carbaminohemoglobina. .......................................................................................63 5.4.3 Carboxihemoglobina. ............................................................................................64 5.4.4 Methemoglobina. ...................................................................................................64 5.4.5 Glicohemoglobina (HbA1c). ..................................................................................64 6 GLUCIDELE.......................................................................................................................65 6.1 ASPECTE GENERALE ......................................................................................................65 6.1 ASPECTE GENERALE .................................................................................................65 6.2 MONOZAHARIDELE.........................................................................................................66 6.2 MONOZAHARIDELE....................................................................................................66 6.2.1 Stereoizomerie........................................................................................................66 6.2.2 Forme ciclice ale monozaharidelor........................................................................69 6.2.3 Derivaii monozaharidelor ....................................................................................70 6.2.3.1 Condensarea cu alcooli....................................................................................70 6.2.3.1 CONDENSAREA CU ALCOOLI.............................................................................70 6.2.3.2 Oxidarea i reducerea monozaharidelor...........................................................70 6.2.3.2 OXIDAREA I REDUCEREA MONOZAHARIDELOR.....................................70 6.2.3.3 Ali derivai ai glucidelor.................................................................................71 6.2.3.3 ALI DERIVAI AI GLUCIDELOR......................................................................71 6.3 DIZAHARIDE I POLIZAHARIDE.......................................................................................72 6.3 DIZAHARIDE I POLIZAHARIDE.............................................................................72 7 LIPIDELE............................................................................................................................78 7.1 LIPIDE, GENERALITI I IMPORTANA BIOLOGIC ......................................................78

7.1 LIPIDE, GENERALITI I IMPORTANA BIOLOGIC ..................................78 6 7.2 TRIGLICERIDELE.............................................................................................................79 7.2 TRIGLICERIDELE........................................................................................................79 7.3 FOSFOGLICERIDELE........................................................................................................80 7.3 FOSFOGLICERIDELE..................................................................................................80 7.4 SFINGOLIPIDELE..............................................................................................................83 7.4 SFINGOLIPIDELE.........................................................................................................83 7.5 STEROIZII........................................................................................................................84 7.5 STEROIZII.......................................................................................................................84 7.6 PROSTAGLANDINELE.......................................................................................................85 7.6 PROSTAGLANDINELE.................................................................................................85 7.7 LIPOPROTEINELE.............................................................................................................86 7.7 LIPOPROTEINELE........................................................................................................86 8 VITAMINELE.....................................................................................................................87 8.1 GENERALITI................................................................................................................87 8.1 GENERALITI.............................................................................................................87 8.2 VITAMINE HIDROSOLUBILE.............................................................................................89 8.2 VITAMINE HIDROSOLUBILE....................................................................................89 8.2.1 Vitamina B1-Tiamina..............................................................................................89 8.2.2 Acizii lipoici, acizi tioctici......................................................................................91 8.2.3 Acidul pantotenic ...................................................................................................93 8.2.4 Nicotinamida, vitamina PP.....................................................................................94 8.2.5 Riboflavina, vitamina B2........................................................................................96 8.2.6 Piridoxina, vitamina B6..........................................................................................98 8.2.7 Biotina, vitamina B7 ............................................................................................100 8.2.8 Acidul folic............................................................................................................102

8.2.9 Ciancobalamina, vitamina B12............................................................................104 7 8.2.10 Acidul ascorbic, vitamina C ..............................................................................105 8.3 VITAMINE LIPOSOLUBILE..............................................................................................108 8.3 VITAMINE LIPOSOLUBILE......................................................................................108 8.3.1 Vitaminele A..........................................................................................................108 8.3.2 Vitaminele D ........................................................................................................109 8.3.3 Vitaminele E..........................................................................................................112 8.3.4 Vitaminele K.........................................................................................................113 8.3.5 Vitaminele F..........................................................................................................115 9 COMPOZIIA CHIMIC A DINILOR......................................................................118 9.1 SMALUL......................................................................................................................118 9.1 SMALUL......................................................................................................................118 9.1.1 Constituenii anorganici ai smalului...................................................................118 9.1.2 Constituenii organici ai smalului ......................................................................124 9.2 DENTINA.......................................................................................................................125 9.2 DENTINA.......................................................................................................................125 9.2.1 Constituenii anorganici ai dentinei.....................................................................125 9.2.2 Constituenii organici ai dentinei.........................................................................125 9.3 CEMENTUL....................................................................................................................126 9.3 CEMENTUL...................................................................................................................126 9.4 PULPA...........................................................................................................................127 9.4 PULPA.............................................................................................................................127 9.4.1 Constituenii anorganici ai pulpei........................................................................127 9.4.2 Constituenii organici ai pulpei............................................................................127 10 MINERALIZAREA CEMENTULUI DENTINEI I MINERALIZAREA SMAULUI...........................................................................................................................128 10.1 CALCIFIEREA CEMENTULUI I A DENTINEI.................................................................128

10.1 CALCIFIEREA CEMENTULUI I A DENTINEI..................................................128 8 10.2 CALCIFIEREA SMALULUI...........................................................................................132 10.2 CALCIFIEREA SMALULUI...................................................................................132 11 PROCESULUI DE FORMARE A DINILOR...........................................................133 12 CHIMIA SALIVEI..........................................................................................................133 12.1 COMPOZIIA CHIMIC A SALIVEI................................................................................134 12.1 COMPOZIIA CHIMIC A SALIVEI.....................................................................134 12.2 COMPUII ANORGANICI...............................................................................................134 12.2 COMPUII ANORGANICI........................................................................................134 12.3 COMPUII ORGANICI...................................................................................................134 12.3 COMPUII ORGANICI.............................................................................................134 12.4 PROPRIETILE SALIVEI.............................................................................................135 12.4 PROPRIETILE SALIVEI.....................................................................................135 13 NOIUNI DE BAZ ALE CHIMIEI POLIMERILOR ORGANICI.......................136 13.1 GENERALITI ...........................................................................................................136 13.1 GENERALITI ........................................................................................................136 13.2 REACII DE FORMARE A POLIMERILOR.......................................................................137 13.2 REACII DE FORMARE A POLIMERILOR.........................................................137 13.2.1 Reacia de polimerizare......................................................................................137 13.2.1.1 Polimerizarea prin mecanism radicalic........................................................138 13.2.1.1 POLIMERIZAREA PRIN MECANISM RADICALIC.....................................138 13.2.1.2 Polimerizarea prin mecanism ionic..............................................................140 13.2.1.2 POLIMERIZAREA PRIN MECANISM IONIC................................................140 13.2.2 Reacia de policondensare..................................................................................141

13.3 CONCEPTUL DE POLIMERI IONICI................................................................................143 9 13.3 CONCEPTUL DE POLIMERI IONICI....................................................................143 14 CIMENTURI FOLOSITE N MEDICINA DENTAR..............................................144 14.1 CIMENTURILE FOSFAT DE ZINC...................................................................................144 14.1 CIMENTURILE FOSFAT DE ZINC.........................................................................144 14.2 CIMENTURILE SILICAT................................................................................................144 14.2 CIMENTURILE SILICAT.........................................................................................144 14.3 CIMENTURILE OXID DE ZINC/EUGENOL......................................................................145 14.3 CIMENTURILE OXID DE ZINC/EUGENOL........................................................145 14.4 CIMENTURI POLICARBOXILAT DE ZINC.......................................................................146 14.4 CIMENTURI POLICARBOXILAT DE ZINC.........................................................146 14.5 CIMENTURI IONOMERE DE STICL..............................................................................148 14.5 CIMENTURI IONOMERE DE STICL..................................................................148 15 AMALGAMELE.............................................................................................................151 15.1 GENERALITI............................................................................................................151 15.1 GENERALITI.........................................................................................................151 15.2 PILITURA.....................................................................................................................152 15.2 PILITURA....................................................................................................................152 15.3 PARTICULE SFERICE....................................................................................................152 15.3 PARTICULE SFERICE..............................................................................................152 15.4 STRUCTURA I FENOMENUL DE PRIZ........................................................................152 15.4 STRUCTURA I FENOMENUL DE PRIZ...........................................................152 15.4.1 Mecanismul de priz al amalgamelor cu coninut redus de cupru....................153 15.4.2 Mecanismul de priz al amalgamelor cu coninut crescut de cupru..................154

10

I. CHIMIA BIOMOLECULELOR

1 AMINOACIZII
n natur exist mai mult de o sut de aminoacizi, dar acest capitol se va limita la caracterizarea a unui sfert din acetia care sunt cei mai importani n biologia mamiferelor i bacteriilor. Dintre acetia toi sunt constitueni ai proteinelor, cu excepia a patru sau cinci. Toi aminoacizii care formeaz proteinele au gruparea NH2 legat de atomul de carbon alturat gruprii COOH. Din acest motiv aceti aminoacizi se numesc aminoacizi (atomii de carbon sunt denumii , , , , etc. ncepnd cu carbonul de care se leag gruparea COOH H 2N COOH C H C C C

1.1 Clasificarea aminoacizilor

monoamino-monocarboxilici, diamino-monocarboxilici,

11 monoamino-dicarboxilici,

O clasificare fcut n funcie de structura chimic mparte aminoacizii n 6 clase: hidroxiamino-acizi, tioamino-acizi i ciclici. Cea mai utilizat clasificare a celor 20 de aminoacizi proteinogeni ine cont de polaritatea radicalilor R ai acestora. Utilitatea acestei clasificri rezid din tendina proteinelor aflate n soluie apoas s adopte acele conformaii (aranjamente spaiale ale atomilor constitueni) n care radicalii hidrofili (polari) se orienteaz n aa fel nct s fie hidratai, iar radicalii hidrofobi ( nepolari) se orienteaz astfel nct s exclud contactul lor cu moleculele de ap. 1.1.1 Aminoacizii proteinogeni. Analiza unui mare numr de proteine a artat c ele sunt compuse din resturile a 20 de aminoacizi care particip la biosinteza lor. Aceti aminoacizi se numesc proteinogeni sau "standard". Cu excepia prolinei toi ceilali sunt -aminoacizi avnd structura general RCH(NH2)COOH. Cu excepia glicinei, dup cum rezult din structura generat, la toi ceilali aminoacizi atomul de C este asimetric. 1.1.1.1 Aminoacizii cu radicali nepolari. 1. Glicina; Gly; G; Acid aminoacetic. Numit i glicocol acest aminoacid are cel mai mic radical, un atom de hidrogen. Glicina constituie o treime din radicalii aminoacizilor din structura colagenului i a gelatinei care este produs al hidrolizei pariale a colagenului. Organismul sintetizeaz glicina i, n afara H COOC H NH 3+

biosintezei proteinelor, ea servete la sinteza srurilor biliare primare, a bazelor purinice .a. Glicina este un neurotransmitor inhibitor. Ea particip la detoxifierile hepatice. Datorit volumului su mic, radicalul opune cea mai mic piedic steric pentru radicalii vecini, particularitate important pentru stabilitatea moleculei de colagen. 2. Alanina; Ala; A; Acid -aminopropionic. Cu excepia prolinei toi aminoacizii proteinogeni pot fi considerai ca derivai ai alaninei. Organismul sintetizeaz alanina iar prin transformrile pe care le sufer n celul, ea face legtura dintre metabolismul proteic i glucidic. 3. Valina; Val; V; Acid -aminoizovalerianic. Ovalbumina, cazeina i globulinele sanguine sunt proteine bogate n valin. n cursul evoluiei lor anumite forme de via au pierdut capacitatea de sintez a H H COOC CH3 NH 3+ COO-

CH3 C CH NH 3+ CH3

unor aminoacizi. Omul nu poate sintetiza valina i prin urmare ea este indispensabil n 12 alimentaia lui. Din acest motiv valina se numete aminoacid esenial. Aminoacizii pe care organismul uman i poate sintetiza n suficient cantitate pentru a acoperi necesitile organismului se numesc neeseniali. Aminoacizii a cror biosintez nu acoper necesitile se numesc semieseniali. 4. Leucina; Leu; L; Acid -aminoizocaproic. Este prezent n cantiti nsemnate n structura globulinelor. Leucina este un aminoacid esenial organismul fiind capabil s o transforme n compui numii corpi cetonici. Are o mic solubilitate n ap. n H COOC CH2 NH 3+ CH3 CH CH3

smalul incisivilor centrali, de la ftul uman s-a reuit izolarea leucinei n cantiti apreciabile. Leucin s-a identificat i ntr-un peptid izolat din smalul imatur de bovine. 5. Izoleucina; Ile; I; Acid -metil-,-aminovalerianic. Este un izomer de caten al leucinei, aminoacid esenial care ca i leucina are o mic solubilitate n ap datorit caracterului hidrofob al radicalului. n cazul aminoacizilor prezentai pn acum, acest caracter se intensific ncepnd cu glicina i terminnd carbon asimetrici. 6. Metionina; Met; M; Acid -amino-Smetiltiobutiric. Se gsete n cantiti nsemnate n H cazein. n organism joac un rol important ca COOC NH3 CH2
+

COO- CH3 H C C* CH2 CH3 NH3+ H

cu leucina i izoleucina care au cei mai voluminoi radicali. Izoleucina conine doi atomi de

CH2

CH3

donator de grupri metil, n reacia de transmetilare. Favorizeaz transformarea grsimilor insolubile n lecitine mai solubile mpiedicnd degenerescena gras a ficatului. Particip la hematopoez i la detoxifierile hepatice. Metionina este un aminoacid esenial, principal surs de sulf organic pentru organism. 7. Prolina; Pro; P; Acid pirolidin--carboxilic. Este un -aminoacid cu grupare amino secundar care face parte din categoria aminoacizilor la care un atom din gruprile funcionale particip la nchiderea unui ciclu. Structura rigid, fr libertate de rotaie a ciclului prolinei n jurul legturilor peptidice prin care el este inserat n catena polipeptidic, influeneaz puternic panta de ncolcirea, specific, a colagenului. Prolina este un H
-

OOC C

H2 C N H

C H2 C H2

aminoacid neesenial. Ea a fost identificat n proteinele izolate din smalul matur ct i 13 n smalul imatur al ftului, unde reprezint un sfert din totalul de resturi de aminoacizi ai proteinei izolate. 8. Fenilalanina; Phe; F. Este prezent n aproape toate proteinele cunoscute. Cele mai bogate n fenilalanin sunt ovalbumina, cazeina, colagenul. Radicalul ei are o pronunat hidrofobicitate. Este un aminoacid esenial, principal surs de nuclee benzenice pentru organism. 9. Triptofanul; Acest Trp; W; Acid are un -amino-nucleu H H COOC NH 3 COOC CH2 N NH 3+ CH2
+

indolilpropionic.

aminoacid

heterociclic numit indol. Se gsete n aproape toate proteinele iar n organism servete la sinteza serotoninei, vitaminei PP .a. Triptofanul este un aminoacid esenial, este foarte hidrofob. 1.1.1.2 Aminoacizii cu radicali polari.

lipsa lui din alimentaie determinnd grave tulburri. Ca i n cazul fenilalaninei, radicalul su

1. Serina; Ser; S; Acid -amino--hidroxipropionic. Este prezent n proporie mare n sericin (proteina mtsii naturale). Joac un rol important n centrul activ al enzimelor numite serin-enzime. O concentraie mare de serin s-a gsit n proteinele din smalul dinilor i pare s fie o caracteristic H a proteinelor din smalul matur. Rolul posibil al serinei este c de ea COOC NH 3 CH2
+

OH

leg o grupare fosfat care este iniiatoarea formrii cristalelor anorganice din smal. De asemene n fosfoproteinele din dentin, serina i fosfoserina au o pondere important. Tot de aceast grupare (OH) se leag covalent oligozaharidele (catene de monozaharide sau derivai ai lor, cu numr mic de subuniti) la catena polipeptidic din structura glicoproteinelor. Organismul sintetizeaz serina din glicin i o folosete chiar i pentru sinteza unor lipide (fosfatidilserine). 2. Treonina; Thr; T; Acid -amino--hidroxibutiric. Omolog superior al serinei, treonina joac un rol similar cu al acesteia n centrul activ al. enzimelor. Este, de asemenea, centru de legare a oligozaharidelor n glicoproteine. Treonina este un aminoacid esenial i conine doi atomi de carbon asimetrici. H COOC C* NH3+ H CH3 OH

14

3. Asparagina; Asn; N; Acid -amino--amidosuccinic. H

Este amida acidului aspartic. Gruparea amidic poate fi locul de legare covalent a oligozaharidelor n glicoproteine. Asparagina este mai rspndit n proteinele vegetale dect n cele animale.

COOC CH2 C NH 3+

O NH 2

Gruparea amidic, dei nu are caracter acid, poate participa la formarea legturilor de hidrogen. Este un aminoacid neesenial. Grupare amidic hidrolizeaz transformndu-se n grupare carboxil i rezultnd acid aspartic, din acest motiv cnd nu se poate preciza care dintre radicalii celor doi aminoacizi se afl ntr-o poziie pe catena polipeptidic, se indic prescurtarea Asx sau B. 4. Glutamina; Gln; Q; Acid -amino-COOC CH2 CH 2 C NH 2 NH 3+ O

amidoglutaric. Este omologul superior al asparaginei. H Particip la fel ca i asparagina la legturi de hidrogen. Este un aminoacid neesenial. n caz de incertitudine se

simbolizeaz cu Glx sau Z. Glutamina este forma detoxifiat de transport a amoniacului metabolic. 5. Tirozina; Tyr; Y; p-Hidroxifenilalanin. Este un aminoacid cu o larg rspndire n structura proteinelor. Tirozina joac un rol important n centrul activ al enzimelor unde funcioneaz ca donor de protoni. H COOC CH2 OH NH 3+

Organismul o sintetizeaz prin hidroxilarea fenilalaninei i prin urmare este un aminoacid neesenial. Tirozina servete la sinteza unor compui cum sunt catecolaminele, hormonii tiroidieni, melaninele. Alturi de leucin se ntlnete n polipeptidele din smalul matur uman i n smalul bovinelor. De asemenea, tirozina intr n compoziia colagenului. 6. Cisteina; Cys; C; Acid -amino--tiopropionic. Se gsete n mari cantiti n keratine. Gruparea tiol a cisteinei este uor oxidabil, chiar i cu oxigen molecular transformndu-se prin formarea unei puni disulfurice n cistin. Puntea disulfuric poate lega catene H polipeptidice diferite ca de pild n keratine, sau poate produce COOC CH2 SH NH 3+

plierea unei singure catene ca n cazul ribonucleazei (enzim care catalizeaz hidroliza ARN). Capacitatea de a se oxida a cisteinei, face ca ea sau unii compui care o conin, ca de exemplu glutationul, s participe la procesele oxido-reductoare din celule. Cisteina joac un rol

important n centrul activ al tiol-enzimelor. Atomii de sulf tiolic reacioneaz cu metalele 15 grele (mercur, plumb .a.) ceea ce explic otrvirea tiol-enzimelor cu aceste metale. Datorit solubilitii reduse, n situaii patologice, cisteina se poate acumula n calculi vezicali sau renali. Cisteina este un aminoacid neesenial. 7. Lizina; Lys; K; Acid , diaminocaproic. Este prezent n aproape toate proteinele cunoscute de origine H animal. Lizina joac un rol important n COOC CH2 CH2 CH2 CH2 NH3+ NH3+

procesele de cretere, lipsa ei n diet provoac tulburri ale acestora. Este un aminoacid esenial: Bazicitatea gruprii -amino, face ca, n condiii fiziologice (t = 37C; pH = 7,4), aceast grupare s fie protonat, ceea ce confer radicalului lizinei sarcina electric pozitiv (q = +1 u.e.s.). Datorit sarcinii i reactivitii ei, aceast grupare asociaz sau leag coenzimele la catena polipeptidic a enzimelor. 8. Arginina; Arg ;R; Acid amino--guanidinovalerianic. Prin hidroliz aginina produce un acid , - H diamino-monocarboxilic, ornitina, COOC CH2 CH 2 CH 2 NH C NH 3+

NH 2 NH 2+

implicat n ciclul ureogenetic. Arginina alturi de ornitin particip la transformarea amoniacului metabolic n uree (ureogeneza). Arginina este principalul component al unor proteine bazice protaminele i histonele. ntruct n timpul creterii organismului, biosinteza argininei nu acoper necesarul, el este un aminoacid semiesenial. Datorit bazicitii sale mari gruparea guanidil este n stare protonat. 9. Histidina; His; H; Acid -amino--imidazolilpropionic. Se gsete n cantitate mare n proteina hemoglobinei, globina (cca. 10 % procente masice). Histidina joac un rol important n centrul activ al multor enzime din clasa hidrolazelor (enzime care catalizeaz reacii de hidroliz). Este un aminoacid semiesenial. 10. Acidul aspartic; Asp; D; Acidul aminosuccinic. Acidul aspartic sau aspartatul se gsete n cantiti apreciabile n structura albuminei i globulinelor sanguine, dar i n proteinele vegetale. Este un H aminoacid neesenial pe care organismul l folosete n COOC CH2 C NH 3+ O OH COOC CH2 N H N NH 3+

ureogenez i n sinteza bazelor pirimidinice. Aspartatul este un neurotransmitor excitator. 16 Datorit aciditii gruprii carboxil a radicalului, la pH fiziologic aceast grupare este ionizat, ceea ce confer radicalului sarcina q = -1. Din acest motiv cel mai frecvent se folosete denumirea de aspartat i nu de acid aspartic indiferent dac aminoacidul este liber sau legat ntr-o caten polipeptidic. 11. Acidul glutamic; Glu; E; Acid -amino-glutaric. Acidul glutamic sau glutamatul se gsete n numeroase proteine vegetale i animale cum ar fi gliadina din gru i cazeina. El este un aminoacid neesenial care ocup o poziie H COOC CH2 CH2 C NH 3+ O O-

central n metabolismul aminoacizilor. Este un neurotransmitor excitator. Ca i la aspartat datorit aciditii gruprii carboxil a radicalului, la pH fiziologic radicalul are sarcina q = -l. De aceea denumirea mai frecvent folosit este aceea de glutamat. 1.1.2 Aminoacizi necodificai genetic, care intr n structura unor proteine. Codul genetic este identic pentru aproape toate formele de via cunoscute, el conine numai cei 20 de aminoacizi "standard" . Cu toate acestea exist n plus mai muli aminoacizi care se ntlnesc n componena unor proteine ai cror radicali apar ca urmare a unor modificri chimice pe care le sufer radicalii aminoacizilor standard dup ce catena polipeptidic a fost sintetizat. Aceste modificri fac parte dintr-un proces mai amplu numit procesare posttranslaional a catenelor polipeptidice native. Hidroxiprolina i hidroxilizina sunt constitueni importani ai colagenului. Hidroxiprolina mpreun cu prolina, reprezint 20-25% din totalul resturilor de aminoacizi din H
1 2

COOC
3

CH2

NH 3+

H H OOC 1 C2 3 4C OH C2 5 H C + 2 H N CH2 NH 3 4CH2 6 5 CH H OH

-

colagen. Hidroxiprolina se ntlnete i n proteinele din smalului, care sunt diferite de colagen, avnd o structur pliat (colagenul are o structur triplu helical). Hidroxilizina contribuie la maturizarea colagenului prin formarea unor legturi ncruciate ntre lanurile polipeptidice ale colagenului. De asemenea, hidroxilizina formeaz legturi O-glicozidice cu glucidele ce fac parte din structura colagenului de la vertebrate. Apariia gruprilor hidroxil legate la radicali Pro i Lys se datoreaz aciunii catalitice a unor enzime din clasa hidroxilazelor, care acioneaz numai dup constituirea
CH2OH H HO H OH HO H CH2OH H OH NH 2 CH2 O CH H H H O CH2 CH2 H2NCH COOH

o
H

o
H

COOH OH H CH2 O CH2 S NH CH

CH3

lanului polipeptidic. Hidroxilazele, respectiv peptidil prolin hidroxilaz i peptidil lisil 17 hidroxilaz, necesit drept cofactori, oxigen molecular, ioni de fer 2+, -cetoglutarat i nu n ultimul rnd acid ascorbic. N-formilmetionina este captul N-terminal al tuturor proteinelor organismelor procariote care, este ndeprtat n cursul maturizrii lor. Acidul -carboxiglutamic se asociaz cu ionul de Ca2+ ceea ce confer proteinelor din care acest aminoacid face parte, o afinitate crescut pentru acest ion. Mai multe proteine implicate n coagularea sngelui prezint aceast proprietate, ionul Ca important factor al coagulrii. 1.1.3 intr n structura proteinelor. Aceti aminoacizi, ca i cei menionai anterior nu sunt codificai din punct de vedere genetic dar, spre deosebire de aceia, nu apar n structura proteinelor. -Alanina intr n compoziia acidului pantotenic, compus din grupa vitaminelor B. Acidul aminobutiric (GABA), este neurotransmitor inhibitor. Homoserina, omolog superior al serinei, este intermediar n biosinteza unor aminoacizi. Homocisteina, omolog superior al cisteinei, este intermediar metabolismului aminoacizilor cu sulf. Ornitina este intermediar al ureogenezei. COOH C CH2
+ CH2 CH2 NH 3
2+

COO-

fiind un H C CH2 CH COO+ NH 3

COO-

Aminoacizi necodificai genetic, care nu

COO+ CH2 NH 3

H C un COO CH2

+ CH2 CH2 NH 3

COOH C NH 3 CH2
+

CH2 OH

al

COOH C NH 3 CH2
+

CH2 SH

NH 3+

Acidul p-aminobenzoic (PABA) intr n compoziia acidu1ui folic, esterii si fiind folosii ca anestezici locali (procaina, novocaina). 3, 5, 3', 5' - Tetraiodotironina (tiroxina) este hormon tiroidian. I HO I O I I COOCH2 CH NH 3+

18

1.2 Proprietile aminoacizilor

1.2.1 Stereoizomeria i proprietile optice. Datorit faptului c, cu excepia glicinei, la toi aminoacizii atomul C este asimetric, ei sunt optic activi. Un atom de carbon asimetric se mai numete centru chiral. Cnd un fascicul de lumin monocromatic plan-polarizat strbate un strat, cu grosimea de 1 dm de soluie a unui compus optic activ, de concentraie c (g/ml), planul de polarizare al luminii se rotete cu unghiul (rad). Acest unghi mai depinde de lungimea de und a radiaiei luminoase, temperatur i solventul soluiei. O msur cantitativ a HO activitii optice este rotaia specific. Msurarea unghiurilor de rotaie optic se face cu polarimetrul, scopul fiind de obicei determinarea concentraiei, compusului optic activ din soluie. Unul din neajunsurile sistemului de clasificare n izomeri optici este acela c el nu furnizeaz nici o indicaie privind configuraia absolut, adic poziia substituenilor n jurul centrului chiral. Convenia Fischer este un criteriu sistematic de clasificare care folosete ca structur de baz glicerinaldehida, cea mai simpl monozaharid cu un atom de carbon asimetric. Conform acestei conveniei, enantiomerii levogir (-) i dextrogir (+) ai glicerinaldehidei sunt notai cu simbolurile L i respectiv D. Dup regulile Fischer legturile chimice trasate vertical sunt dirijate n spatele planului paginii iar cele orizontale sunt dirijate deasupra acestui plan. Probabilitatea ca formulele lui Fischer s fie corecte a fost de 50 %. n 1949, cu ajutorul tehnicilor cristalografice de raze X, s-a vzut c, alegerea lui Fischer a fost corect, adic stereoizomerul L al glicerinaldehidei coincide cu enantiomerul levogir al ei i, n consecin, D coincide cu cel dextrogir. La aminoacizi, pentru stabilirea configuraiilor acestora, se ine cont de urmtoarea secven de citire a substituenilor legai la C i anume: NH2, COOH, R. Dac molecula de CHO C
H

CHO H C OH

CH2OH L

CH2OH D

aminoacid este aezat n aa fel nct atomul de hidrogen s fie diametral opus ochiului, iar 19 secvena sus menionat de deruleaz n sens antiorar, aminoacidul face parte din seria L i invers. Toi aminoacizii rezultai prin hidroliza blnd a proteinelor au configuraia stereochimic L. Exist organisme, n special bacteriile, care au n coninutul proteinelor proprii, D-aminoacizi. Acestea sunt constituente ale biomoleculelor din pereilor celulelor bacteriene. Probabil c prezena lor acolo confer anumit rezisten acestor perei fa de atacul peptidazelor, enzime care catalizeaz hidroliza legturilor peptidice, pe care mai multe organisme le utilizeaz pentru a digera aceti perei. D-aminoacizi se gsesc i n structura antibioticelor valinomicina, actinomicina D i gramicidina S. Spre deosebire de enantiomeri care difer doar prin sensul de rotaie a planului luminii polarizate, diastereoizomerii sunt diferii ntre ei prin numeroase proprieti fizice i chimice: punct de topire, spectru, reactivitate chimic. Prin urmare ei sunt compui diferii n sens uzual. Acest lucru este explicabil deoarece la enantiomeri gruprile care compun molecula au aceleai poziii relative, aa c un reactant vine n contact cu aceleai grupri. Dimpotriv, la diastereoizomeri poziiile reciproce ale gruprilor sunt diferite. n pofida utilitii sale practice, convenia Fischer este uneori ambigu, n special cnd se aplic moleculelor cu mai muli atomi de carbon asimetrici. Din acest motiv Robert Cahn, Christopher Ingold i Vladimir Prelog au formulat n 1956, sistemul RS care permite descrierea precis a acestor molecule. n acest sistem cei patru substitueni legai la centrul de asimetrie sunt ierarhizai ntr-o ordine de prioritate. La baza ei st regula dup care atomul cu numr atomic mai mare are prioritate fa de cel cu numr atomic mai mic. Dac substituenii se leag, la centrul chiral prin atomii aceluiai element, prioritatea lor este stabilit de numerele atomice ale celorlali atomi din componen. Pentru a stabili configuraia n sistem ( RS) a unui centru chiral, se privete molecula dinspre centru spre substituentul cu prioritatea cea mai mic. Presupunem c ceilali 3 substitueni au ordinea de prioritate W>X>Y. Dac citirea n aceast ordine a lor se face n sensul orar, configuraia centrului chiral se noteaz cu ( R). Litera provine din cuvntul latin rectus. Dac citirea se face in sens antiorar, notarea se face cu ( S) de la sinistrus. Prin urmare
L-glicerinaldehida

este (S) glicerinaldehida. Cu excepia L-Cys, care este (R)-Cys, toi

aminoacizii proteinogeni monochirali sunt (S)-aminoacizi. L-Thr este (2S, 3R) - Thr iar L-Ile 20 este (2S, 3S)-Ile. Reaciile chimice de sintez ale moleculelor chirale produc de obicei amestecuri racemice. Una din trsturile lumii vii este capacitatea ei de a produce activitate optic. Biosinteza unei substane chirale produce totdeauna numai unul din stereoizomeri. Faptul c toi aminoacizii proteinogeni au configuraie L este o ilustrare a acestei reguli. 1.2.2 Proprietile acido-bazice. n soluii neutre, ca i n stare cristalin, gruparea -aminocarboxilic din aminoacizi are structur dipolar sau amfiionic. n soluie un acid monoamino-monocarboxilic, n funcie de pH poate exista sub forma a 3 specii ionice, nici una neionic: H3N+CH(R)COOH H3N+CH(R)COOH2NCH(R)COO- cation - amfiion - anion

Echilibrele care se stabilesc ntre aceste specii ionice pot fi studiate prin urmtorul experiment aplicat la glicin. Unui litru de soluie de glicin 1M i se adaug NaOH i se urmrete variaia pH-ului. Se procedeaz la fel adugndu-se HCl, obinndu-se o curb de titrare. Aceiai curb se obine dac se, titreaz cu NaOH o soluie de glicin 1M al crui pH a fost ajustat cu HCl n prealabil la aproximativ 1. La pH acid exist un echilibru chimic ntre cationii i amfiionii moleculelor de glicin: La pH alcalin exist un echilibru chimic ntre amfiionii i anionii moleculelor de glicin: H3N+CH2COO- H2NCH2COO- + H+ Curba de titrare a 1 litru de soluie de aminoacid (glicin) 1 M cu NaOH. Valorile nscrise pe abscis indic numrul de echivaleni de baz. n chenare apar formulele speciilor ionice de aminoacizi. Platourile din H3N+CH2COOH H3N+CH2COO- + H+

jurul valorilor pH = pK1' i pH = pK2' sunt intervale de pH n care soluia de glicin are 21 capacitate de tamponare. Constanta de aciditate clasic a cationului este dat de relaia:

' 1

[H N = [H N
3 3

+ +

CH 2 COO H+ CH 2 COOH

] [ ] ]

Constanta de aciditate clasic a amfiionului este dat de relaia:

COO K = H+ + H 3 N CH 2 COO
' 2

[ H N CH
2

] [ ] ]

Logaritmnd aceast expresie obinem, n cazul echilibrului cation-amfiion:

pH = pK

' 1

[H N + log [H N
3 3 2

CH 2 COO CH 2 COOH

] ]

n cazul echilibrului amfiion-anion obinem:

pH = pK

' 2

[ H N CH COO ] + log [ H N CH COO ]

2 + 3 2

n curba de titrare prezent mai sus se vede c atunci cnd pH pK', adaosurile, de acid sau baz modific puin pH-ul soluiei de glicin. Deci soluia de glicin are capaciti maxime de tamponare la pH = 2,3 i la pH = 9,6. pH-ul izoelectric pI este pH-ul la care numrul sarcinilor pozitive asociate la moleculele de aminoacizi este egal cu numrul sarcinilor negative. La pH izoelectric acizii monoamino-monocarboxilici se gsesc numai sub form de amfiioni. n consecin ei nu

migreaz n cmp electric, proprietate folosit pentru separarea lor. La pI solubilitatea acestor 22 aminoacizi este minim, deoarece amfiionii se atrag puternic ntre ei. pI-ul se poate calcula pentru aminoacizii monoaminomonocarboxilici, ca fiind egal cu semisuma valorilor pK. Deci sarcina electric pe care o poart fiecare dintre aminoacizi depinde de pH-ul soluiei n care se gsesc. innd seama c n organismele vii aminoacizii sunt cuprini n lanurile polipeptidice ale proteinelor este important de tiut comportarea ca acizi sau baze a resturilor de aminoacid, ct i sarcina electric pe care o poart aceste resturi la pH-ul fiziologic. Resturile aspartil i glutamil au n aceste condiii o sarcin net () pe cnd resturile lizil, arginil i histidil au sarcin (+). 1.2.3 Proprieti chimice ale aminoacizilor 1.2.3.1 Reaciile gruprii carboxil Gruparea carboxil se poate transforma n derivaii ei obinuii: esteri, amide, nitrili, halogenuri acide, anhidride. O reacie important este decarboxilarea cu producerea de compui numii amine biogene: H2NCH(R)COOH RCH2NH2 + CO2 Majoritatea aminelor biogene rezultate au importan biologic deosebit. Acidul glutamic se transform n GABA (neurotransmitor), histidina n histamin (hormon tisular cu puternice efecte asupra aparatelor circulator i digestiv), serina n etanol amin (component important al lipidelor), lizina n cadaverin (precursor al poliaminelor, care se asociaz cu AND i ARN), cisteina n cisteamin (component a coenzimei A). Alte exemple vor fi date la capitolul "Metabolismul aminoacizilor". 1.2.3.2 Reaciile specifice radicalilor - oxidarea blnd a cisteinei conduce la cistin - oxidarea energic a cisteinei produce acid cisteic iar decarboxilarea acestuia din urm produce taurin, compus ce intr n structura srurilor biliare primare. HOOCCH(NH2)CH2SH HOOCCH(NH2)CH2SO3H HOOCCH(NH2)CH2SO3H NH2CH2CH2SO3H+CO2 - prin fosforilarea serinei se obine acid serin-fosforic.
COOH H C CH2 NH 2 SH NH 2

HS CH2 C H 2O NH 2

COOH 1/2O2

COOH H C CH2 NH 2 S S

CH2 C

cistin

COOH

1.2.3.3 Reaciile gruprii amino - condensarea cu formaldehida produce baze Schiff: H2N-CH(R)-COOH + CH2O CH2 = N-CH(R)-COOH + H2O

23

Pe aceast reacie se bazeaz metoda Srensen de determinare cantitativ a gruprilor carboxil din aminoacizi: baza Schiff rezultat poate fi titrat ca un acid carboxilic cu NaOH. - alchilarea cu ageni de metilare. Monometilarea glicinei produce sarcozina, CH3NHCH2 COOH. Metilarea pn la sruri cuaternare de amoniu produce betaine, HOOCCH(R)N+ (CH3)3. Betaina glicinei este foarte rspndit n plante, n special n sfecl ( Beta vulgaris). Betaina prolinei (stahidrina) a fost izolat din planta numit popular vindecea sau iarb de rni (Betonica oficinalis). -acilarea cu cloruri acide, anhidride sau clorocarbonai de alchil servete la protejarea gruprii amino de aciunea altor reactani. Protejarea cu clorocarbonat de ter-butil numit i t-butil oxicarbonil (t-BOC) se practic n cursul sintezei n faz solid a polipeptidelor. (CH3)3C-OCOCl + H2N-CH(R)-COOH (CH3)3C-OCONH-CH(R)-COOH + HCl aminoacid t-BOC-protejat Un grup special de reacii ale gruprii -amino l constituie derivatizrile aminoacizilor n scopul
NH 3 Hidrindantin O H OH H3N
+

Ninhidrin O OH OH

+
R C

COOH O C R

+ CO2

determinrii calitative i cantitative. a) Reacia cu ninhidrin. n urma reaciei ninhidrinei cu un aminoacid rezult, un compus colorat, de culoare albastru-violet, purpura de Ruhemann. Reacia ninhidrinei cu prolina produce un compus de culoare galben. b) Reacia cu 2,4-dinitrofluorbenzen. Numit i reactiv Sanger, acesta a servit pentru
O
-

Ninhidrin H2 O O N O O Purpura de Ruhemann

prima determinare a ordinii de legare a aminoacizilor ntr-o polipeptid, insulina (Frederick Sanger, 1953). Reacia are loc n mediu slab alcalin conform ecuaiei:

24

C6H3(NO2)2F + H2N-CH(R)-COOH C6H3 (NO2)2NH-CH(R)COOH + HF c) Reacia cu clorura de dansyl. Clorura de dimetilaminonaftil sulfonil
N Fenilizotiocianat R1 NH C S R1 HC N C N H H+ C C S Derivat de feniltiohidantoin N C S O NH CH C S + H 2N R1 CH O C OHO C OH OH

(dansyl) a nlocuit reactivul Sanger n analiza polipeptidelor i aminoacizilor ntruct derivaii rezultai prezint o fluorescen intens. Un reactiv cu structur asemntoare dansylului este clorura de dabsyl (dimetilaminoazobenzen sulfonil). Acesta produce cu aminoacizii derivai care absorb i lumina vizibil. d) Reacia cu fenilizotiocianat (PITC). Numit i reactivul Edman, PITC este cel mai folosit reactant pentru analiza proteinelor (Pehr Edman, 1975). Prin derivatizarea aminoacizilor cu PITC rezult derivai de feniltiohidantoin care absorb lumin ultraviolet.

R1 HC HN

2 PEPTIDELE
O peptid este format din 2-10 resturi de aminoacid. Polipeptidele conin 11-100 resturi iar peste acest numr vorbim de proteine. Caracteristica pentru peptide este gruparea peptidic CO NH . Exist peptide care au n schelet nu numai C ci i C, ele nu rezult prin hidroliza parial a unei proteine

2.1 Exemple de peptide

Glutationul GluCysGly are proprieti redox datorit gruprii tiolice. Glutationul oxidat este format din dou molecule de glutation unite printr-o punte disulfuric. Reacia este catalizat de enzima glutation reductaz. Carnozina este un alt exemplu de peptid format din Ala i His. Carnozina a fost izolat din esutul H O C CH2 CH2 C COON H NH 3+

SH CH2 CH C O H N CH2 COO-

muscular al mamiferelor. Ea este hidrolizat, de ctre carnozinaz, enzim izolat din ficatul 25 i rinichiul mamiferelor. Hormonul de eliberare a tireotropinei (THR) Acid piroglutamicHisprolinamid. Este un hormon eliberat de hipotalamus i stimuleaz secreia tireotropinei (TSH), care la rndul lui acioneaz asupra tiroidei care va secreta hormonii tiroidieni. THR este folosit n clinica medical cu rezultate bune pentru diagnosticarea timpurie a strilor de premixoedem, n tiroiditele cronice. Peptide antibiotice secretate de fungi conin frecvent aminoacizi din seria D (gramicidinele, valinomicina, bacitracinele, alameticina, etc.).

Valinomicina este un decapeptid ciclic care complexeaz specific ionul K+ nvelindu-l ca pe o anvelop hidrofob solubilizndu-l n mediu lipidic al membranelor membran. Ocitocina este un nanopeptid care conine o legtur disulfuric
Cys Tyr S S Phe Gln Asn Cys Pro Arg Gly NH 2 S S

transportndu-l

prin

Fig.2.1. Valinomicina

intracatenar, ntre doi radicali Cys pe care i conine. Stimuleaz Cys contracia musculaturii netede uterine i nu numai. Vasopresina are efect hipertensiv este tot un nanopeptid difer de ocitocin prin dou resturi de aminoacid. Insulina este format din dou catene: A 21 de resturi i B 30 de resturi legate prin intermediul a dou puni disulfurice. Glucagon, care este un polipeptid format din 29 de resturi, alturi de insulin glicemiei. Hormonul adrenocorticotrop (ACTH) este un lan de 39 resturi de aminoacizi, particip la homeostazia
Tyr Ile Gln Asn Cys Pro Leu Gly NH 2

Ocitocina Vasopresina

este secretat de hipofiza anterioar i intensific sinteza hormo-nilor steroizi n 26 corticosuprarenale. Angiotensina II AspArgValTyrIleHisProPhe, are un puternic efect hipertensiv. Ea se sintetizeaz prin clivajul angiotensinogenului, care este o globulin produs de ficat. Encefalinele sunt peptide sintetizate de sistemul nervos central. Induc analgezia cnd se cupleaz cu receptorii specifici de pe membrana celulelor nervoase (TyrGlyGly PheMet). Somatostatina, polipeptid format din 14 resturi de aminoacid, este sintetizat de hipotalamus i pancreas, inhib hormonul de cretere, somatotropina.

2.2 Proprietile peptidelor

Peptidele scurte au activitate optic aditiv. Fig.2.2. Transformarea preproinsulinei n insulin n ceea ce privete valoarea constantelor de aciditate difer de constatele gruprilor funcionale ale aminoacizilor liberi avnd n vedere distana dintre gruprile NH 2 i COOH, deci nu vor interaciona. Curba de titrare a peptidelor fr radicali acido-bazici arat ca i curba de titrare a unui aminoacid. Proprietile chimice sunt aceleai cu ale aminoacizilor. Reacia cu ninhidrin duce la formarea de compui fotometrabili. O reacie specific peptidelor i proteinelor este reacia biuretului. Biuretul (H2NCONHCONH2) formeaz cu ionii de Cu2+ un complex de culoare violet. Ionii de Cu2+ formeaz cu peptidele dar i cu proteinele compleci de acelai tip, fotometrabili. Gruparea peptidic are capacitatea de a absorbi radiaia UV < 210 nm, proprietate ce st la baza dozrii spectrofotometrice a peptidelor i proteinelor.

3 PROTEINELE
Proteinele se pot clasifica, n funcie de prezena sau absena n molecul, a unui compus chimic diferit de lanul polipeptidic, numit parte prostetic. Astfel proteinele sunt, simple numite i homoproteiene, alctuite numai din aminoacizi i proteine conjugate numite heteroproteine, alctuite dintr-o parte peptidic (apoproteien) i o parte prostetic. Proteinele sunt de o diversitate funcional deosebit iat cele mai importante funcii ale proteinelor n procesele biologice:

Cataliza enzimatic. Aproape toate reaciile din sistemele biologice sunt enzimatice. Ele 27 mresc vitezele de reacie chiar i de milioane de ori. Nu toate enzimele sunt proteine. Stocare i transport. Hemoglobina transport O2, CO2; transferina - Fe3+; albuminele - acizi grai, bilirubin; pompe ionice transport, cu consum de energie (ATP), - Ca 2+, Mg2+, Na+, K+; canale ionice faciliteaz trecerea ionilor de Ca2+, Na+, etc. prin membranele biologice. Proteine care stocheaz diferii compui sunt mioglobina O2, feritina Fe3+, calsequestrina Ca2+. Micarea coordonat. Contracia muscular produs de miofilamente de actin i miozin. Microtubulii care determin micarea intracelular. Micarea ochilor este determinat tot de proteine contractile. Protecie i suport mecanic. Elasticitatea pielii i a oaselor este asigurat de colagen i elastin proteine elastice. Prul unghiile conin keratin, protein insolubil. Reeaua microtrabecular, microtubulii i microfilamentele, formeaz citoscheletul celular, sunt tot de natur proteic. Imunitatea. Anticorpii sunt proteine care se combin cu bacteriile i viruii sau proteine i celule ale altor organisme pe care le precipit i le neutralizeaz. Generarea i transmiterea impulsului nervos. Rspunsul celulelor nervoase la stimuli este mediat de receptori proteici. Rodopsina fotoreceptor din retin. Receptorii membranei i cei intracelulari mediaz aciunea unor molecule mici asupra metabolismului sau asupra transmiterii impulsului nervos. Receptorii colinergici declaneaz potenialul de aciune sub influena acetilcolinei n membrana neuronal postsinaptic. Reglarea activitii celulare i fiziologice. Parathormonul i hormonul tireostimulator au structur proteic. Controlul creterii i al diferenierii. Numai o mic parte a genomului unei celule este exprimat. n bacterii proteinele represoare inhib exprimarea genetic. n organismele superioare creterea i diferenierea sunt reglate de proteine numite factori de cretere. Factorul de cretere nervos, ghideaz formarea reelei neuronale.

3.1 Structura proteinelor. Nivele de organizarea structural

Exist 4 nivele de organizarea structural: Structura primar reprezint ordinea de niruire a resturilor de aminoacizi i locul de legare a punilor disulfurice. Aceast structur este conservat de legturi covalente.

Structura secundar se refer la aranjamentul spaial al atomilor care compun scheletul 28 polipeptidic. Cele mai cunoscute conformaii regulate sunt helixul i foaia pliat.

Detecia structurii elicoidale n soluie apoas se face prin dispersie rotatorie optic (variaia rotaiei optice cu lungimea de und). n stare cristalin structura este analizat prin difracie n raze X. Structura teriar este structura catenelor polipeptidice n ntregime cu precizarea interaciunii ntre atomi, situai departe unii de alii n secvena linear dar apropiai spaial. Factorii care stabilizeaz aceast structur sunt legturile de hidrogen, forele van der Waals, punile disulfurice. Studiul structuri se face prin difracie n raze X. Structura coaternar o au numai proteinele formate din mai multe catene polipeptidice unite prin legturi necovalente. O astfel de protein se numete oligomer, iar prile componente protomeri sau subuniti. Structura coaternar se refer la aranjarea spaial a subunitilor. Determinarea numrului de protomeri se face prin metodele de separare a proteinelor (ultracentrifugare, electroforez, gel filtrare, etc.) iar structura spaial prin difracie n raze X. 3.1.1 Secvenierea. n 1953 F.Sanger a fcut prima determinare de secvena complet a insulinei. n ciuda perfecionrilor, principiul secvenierii este cel inventat de Sanger. El const n urmtoarele etape: A. Pregtirea proteinei pentru secveniere. a. Determinarea numrului de catene polipeptidice distincte ale proteinei; b. Ruperea legturilor disulfurice inter i intracatenare; c. Separarea catenelor i determinarea compoziiei n aminoacizi a acestora. B. Secvenierea. a. Clivajul unei catene n fragmente destul de mici pentru a putea fi secveniate; b. Separarea fragmentelor; c. Secvenierea fragmentelor; d. Repetarea c1ivajului catenei cu un agent cu specificitate diferit iar apoi separarea i secvenierea noilor fragmente. C. Deducerea secvenei ntregii proteine. a. Ordonarea fragmentelor prin metoda suprapunerii; Structura primar a proteinelor.

b. Determinarea poziiei punilor disulfurice.

29

Numrul de catene distincte se poate afla identificnd capetele N-terminale sau cele C-terminale ale lor. De exemplu: insulina are cantiti echivalente de Gly i Phe ca resturi Nterminale. Prin urmare cele doua catene distincte sunt n raportul 1:1. Captul N-terminal se poate determina cu reactiv Sanger i cu reactivul Edman care se bucur de proprietatea c prin hidroliza derivatizat aminoacidul polipeptidului marcare, hidroliz polipeptidului se elimin N-terminal, N- H3N numai restul
+

R1 CH

O C

...

Rn-1 O NH + CH C NH Polipeptid

Rn CH COO
-

pstrndu-i urmat de

NH 2

NH 2

Hidrazin

integritatea. Prin urmare procesul de separarea aminoacidului derivati-zat poate fi repetat ceea ce nseamn secvenierea lui n sensul NC. Captul pornire pentru C-terminal n
H3N
+

R1 CH +

O C NH NH 2 Hidrazide de aminoacil NH NH
2

...

Rn-1 O H3 N CH C Rn

general nu poate servi ca punct de secveniere. enzime care

H3N
+

NH

CH

COO

Carboxipeptidazele,

catalizeaz clivajul restului C-terminal al

Fig.3.1. Hidrazinoliza

catenei polipeptidice, ar pute fi folosite pentru determinare acestuia. Ele nu pot fi folosite totui, pentru determinarea secvenei din motive de natur cinetic. Viteza de clivare depinznd de natura radicalilor, nseamn c, dac dup un clivaj lent urmeaz un clivaj rapid nu se mai poate stabili ordinea aminoacizilor eliberai. Identificarea captului C-terminal se face prin hidrazinoliz. Catena polipeptidic este tratat cu hidrazin. Acest reactant cliveaz toate legturile peptidice rezultnd hidrazide ale aminoacizilor corespunztori din structura catenei, cu excepia amino-acidului C-terminal care rezult n stare liber. Acesta poate fi difereniat i identificat prin HPLC. Ruperea legturilor disulfurice se face n scopul separrii catenelor pe care acestea le unesc. n acest fel, se pune la dispoziia enzimelor proteolitice,
CH O H C O OH HS CH 2CH2 OH Acid performic SO 3Mercaptoetanol 2 CH CH 2 SH CH2 S S CH2 CH

2 CH

CH 2

Radical de acid cisteic

Radical de cistein

folosite 30

pentru

determinarea

structurii primare, substratul cu legturile peptidice desfurate. Ruperea se poate face prin oxidare cu acid performic. Un dezavantaj major este ca acidul performic oxideaz i radicalul metionin. Ruperea legturilor disulfurice se poate face i cu mercaptani cum ar fi -

Tabelul 3.1. Principalele endopeptidaze i specificitatea lor. Enzima Tripsina Chimotrip sina Elastaza Pepsina HNCH(Rx-1)CONHCH(Rx)CO Rx-1= Arg, Lys; Rx Pro Rx-1= Phe, Trp, Tyr; RxPro Rx-1= Ala, Gly, Ser, Val; RxPro Rx-1 Pro; Rx = Leu, Phe, Trp,Tyr

mercaptoetanolul. Separarea catenelor polipeptidice. Disocierea i denaturarea catenelor se face cu ajutorul, detergenilor sau a agenilor chaotropici (uree, guanidium). Purificarea se face prin cromatografie de schimb ionic. Compoziia unei catene, se determin prin hidroliza complet urmat de analiza amestecului de aminoacizi. Digestia enzimatic complet necesit amestecuri de proteaze deoarece, luate separat, ele cliveaz numai anumite legturi peptidice. Un amestec de proteaze cu denumirea generic de pronaz, extras din medii de cultur ale microorganismului Streptomyces griseus este folosit pentru proteoliza complet. Cantitatea de enzim folosit este limitat de faptul c, enzima se autodigera contaminnd cu aminoacizi proprii, hidrolizatul. Analiza digeratelor se face prin HPLC. Clivajul unei catene n fragmente. Clivajul se face cu endopeptidaze care "recunosc" legtura peptidic n funcie de radicalii care o flancheaz. Cea mai specific i deci, cea mai utilizat este tripsina. Ea cliveaz numai legaturile peptidice de dup resturile cu radicali ncrcai electric pozitiv. Centrele de clivaj, pot fi create sau eliminate prin reacii chimice. Celelalte endopeptidaze au specificiti mai slabe dect tripsina producnd chiar fragmente parial superpozabile. Adic prin clivajul legturilor din dou catene identice nu rezult dou seturi identice de fragmente. Ajustarea condiiilor de reacie, limitarea timpului de reacie sunt precauiile necesare pentru o proteoliz limitat, astfel nct s rezulte fragmente bune pentru secveniere.

Separarea fragmentelor peptidice se face n prezena detergenilor sau a agenilor 31

Fagmente peptidice I Agentul I de clivaj Asp Trp Ser Met Gly Ala Lys Agentul I de clivaj Leu Pro Met Asp Phe Arg Cys Ala Glu

Agentul II de clivaj

Agentul II de clivaj

Fagmente peptidice II

chaotropici. Prin fragmentarea catenei polipeptidice, radicalii nepolari nu mai sunt "ferii" de contactul cu apa prin includere ntr-un miez hidrofob, aa cum se petrece n proteinele native. De aceea fragmentele rezultate agreg i se precipit, aa se explic necesitatea agenilor de solubilizare. Secvenierea fragmentelor se efectueaz prin ciclarea degradrii Edman. Piesa principal a sistemului de secveniere numit sequenator cu faz solid, este o cup rotitoare din sticl cu perete poros, care se rotete 1000 - 4000 r.p.m. Peptidul este ataat la un suport inert aplicat pe peretele interior al cuvei. Filtrarea derivailor de feniltiohidantoin se realizeaz prin peretele cuvei derivaii ieind n exteriorul ei datorit forei centrifuge. Un sistem HPLC echipat cu detector UV poate identifica derivaii de resturi de aminoacid. Ordonarea fragmentelor peptidice se face prin aa-zisa metod a suprapunerii. Secvenele fragmentelor unui set obinut prin aciunea unui agent de clivaj, se compar cu secvenele altui set de fragmente obinute prin clivajul catenei de ctre alt agent. Determinarea poziiei punilor disulfurice se poate face prin electroforez diagonal. Dup o prim separare a unui set de fragmente obinute prin digerare, electroforegrama se expune la vapori de acid performic care oxideaz punile disulfurice. Hrtia este supus apoi la a doua electroforez pe direcia perpendicular pe prima. Fragmentele care iniial nu au coninut legturi disulfurice se vor dispune de-a lungul unei diagonale deoarece mobilitile electroforetice a fragmentelor nu depind de direcia de migrare. Fragmentele care iniial au coninut legturi disulfurice intercatenare se vor scinda n

cte dou peptide cu mobiliti diferite i prin urmare, acestea nu se vor situa pe diagonal 32 dup a doua migrare. Fragmentele separate sunt eluate de pe suportul electroforetic i secveniate pentru

localizarea resturilor de cistein formatoare de legturi disulfurice. 3.1.2 Structura secundar a proteinelor Cercetrile peptidelor n raze X a condus la observaia c gruparea peptidic are o structur rigid plan. Cu ocazia msurtorilor s-a vzut c legtura peptidic, C-N, este mai scurt cu 0,15 dect legtura simpl C-N din amine i c legtura C=O a gruprii peptidice este mai lung cu 0,02 dect aceiai legtur din aldehide sau cetone. Cauza este conjugarea p- dintre electronii neparticipani ai atomului de azot i electronii ai gruprii C=O. Energia de rezonan a legturii peptidice este maxim atunci cnd gruparea peptidic este plan. Stnjenirea steric mpiedic gruparea peptidic s adopte structura cis. Aceasta este mai ncrcat cu energie deci mai puin stabil dect structura trans. Scheletul unei proteine este un lan de grupri peptidice plane, singurele variabile fiind unghiurile de torsiune i

. Acestea nu pot avea orice valori. Exist constrngeri sterice care limiteaz domeniul de variaie conformaional a catenei polipeptidice. Prin calcularea distanelor dintre atomii unui tripeptid i confruntarea lor cu un set de distane limit pn la care se pot apropia aceti atomi, se pot determina unghiurile i permise ale restului de aminoacid.

3.1.2.1 Structura helix Structurile elicoidale sunt conformaii caracteristice proteinelor. Dac o caten polipeptidic este rotit cu acelai unghi n jurul fiecrui atom C, apare o conformaie elicoidal. Pentru ca o conformaie permis s aib stabilitate n timp, este necesar meninerea ei de numeroase puni de hidrogen. Conformaia helix ndeplinete aceste condiii. L.Pauling i R. Corey au propus n 1951 structura numit helix la dreapta n care scheletul catenei polipeptidice este rsucit la dreapta nfurnd un cilindru imaginar cu diametrul de 5 . Spirala are pasul de 5,4 i 3,6 resturi de aminoacid pe spir. Radicalii sunt orientai spre exteriorul helixului ptrunderea lor n interior fiind mpiedicat steric. Punile de hidrogen angajeaz toi heteroatomii gruprilor peptidice ceea ce determin nalta hidrofobicitate a scheletului catenei.

33

Dintre proteinele cu structur predominant helicoidal amintim -keratinele prezente n firul de pr i fibrina din cheagul de snge. 3.1.2.2 Structura pliat Structurile pliate au fost descoperite n 1951 tot de L. Pauling i R.Corey. Conformaia foaie -pliat ia natere datorit faptului c gruprile peptidice se afl pe un plan ndeplinind i ele

cele 2 condiii, a unghiurilor de torsiune permise i a stabilizrii prin puni de hidrogen. n 34 aceast conformaie scheletul catenei urmeaz un drum erpuit, o succesiune de plane care constituie o foaie pliat ale crei muchii sunt create de atomii C. Exist 2 tipuri de foaie pliat paralel i antiparalel. n tipul paralel segmentele vecine de caten au acelai sens N C sau C N. n tipul antiparalel aceste sensuri sunt opuse. Conformaia foaie -pliat se afl n proporie de 100% n fibroin. Secvena fibroinei este reductibil la un hexapeptid care se repet (GlySerGlyAlaGlyAla). Segmentele nu mai pot fi ''ntinse" datorit conformaiei lor extinse aproape la maximum. Totui fibrele sunt flexibile datorit asocierii mai multor foi -pliate prin fore van der Waals. Foile -pliate din structura proteinelor globulare au o tendin de nfurare la dreapta prin care i formeaz propriile ''miezuri". 3.1.2.3 Structurile secundare non-repetitive Aceste structuri ntrerup conformaiile repetitive. Amintim conformaiile bucl, bucl randomizat i semibucl, structur care realizeaz schimbrile de direcie pentru structura foii -pliate antiparalele. Aproape toate proteinele formate din mai mult de 60 resturi conin una sau mai multe bucle formate din 6-16 resturi numite bucle . 3.1.2.4 Conformaiile colagenului i elastinei Colagenul reprezint o treime din masa proteic total, fiind principala protein a esutului conjunctiv. Intr n compoziia pielii, tendoanelor, vaselor de snge, dinilor. A1turi de colagen, n esutul conjunctiv, se mai gsete elastina. Colagenul reprezint un interes deosebit, deoarece este matricea pe care cristalele de apatit se depun, pentru a forma dentina, cementul i oasele. Colagenul prezint o insolubilitate mare, totui, colagenul imatur poate fi extras deoarece moleculele acestuia nu sunt imobilizate prin legturi ncruciate. Tropocolagenul, subunitile colagenului, este compus din 3 catene polipeptidice, elicoidale la stnga, nfurate una n jurul celeilalte la dreapta. Compoziia n aminoacizi a catenelor depinde de tipul colagenului.

Prin denaturarea termic sau cu ageni chaotropici (uree, tiocianat, etc.), a colagenului rezult n aparen trei tipuri de molecule notate cu , , . Aceste trei tipuri de molecule pot fi separate dup denaturare prin ultracentrifugare, cromatografie de schimb ionic sau electroforez n gel. n majoritatea metodele tipurilor de colagen, s-a prin reuit cromatografice,

35

separarea a dou uniti distincte, denumite 1 i 2 cu aceeai mas molecular, n raport de 2:1. Dup identificarea, unui alt lan de tip a crui compoziie n aminoacizi este diferit de a lanului 1, a fost denumit 1(I), restul lanurilor de tip , separabile prin cromatografie, i-au

pstrat denumire de 2, 3 etc. Unul dintre cele mai rspndite tipuri de colagen, ntlnit n colagenul vertebratelor, inclusiv n dentin i cement, are compoziia lanului peptidic de tipul [1(I)]22, din O parte minor, dar semnificativ din colagen are o compoziie diferit. Astfel, colagenul din cartilaj are aproape majoritar, compoziia celor trei lanuri peptidice, identic. Acest lan polipeptidic a fost denumit 1(II), iar compoziia molecular a lanului, [1(II)]3. Sunt i alte tipuri de colagen n tabelul 3.2. sunt prezentate cele mai importante tipuri de colagen i esuturile unde pot fi ntlnite. Prin elucidarea secvenei de aminoacizi din compoziia lanului 1(I), (conine mai mult de 1000 de resturi de Tabelul linear a acestuia, ea este Tipul I II III IV 3.2. Principalele tipuri de colagen i aminoacizi) s-a stabilit structura rspndirea acestora. Forma molecular [1(I)]22 [1(II)]3 [1(III)]3 [1(III)]3 Distribuia Oase, piele matur, dentin, pulpa dentar, ficat Cartilaje Piele tnr, sistemul cardiovascular, pulpa dentar, n structura unor membrane anatomice

36 format numai din aminoacizi legai amino corboxil. Caracteristica lanurilor este faptul c tot al treilea rest de aminoacid este glicina la mai mult de 95% din lungimea lanului. Tot al treilea radical este orientat spre interiorul triplului helix al tropocolagenului. El trebuie s aib un volum foarte redus deoarece tripla spiral este strns mpletit. n secvena catenelor tropocolagenului intr 2 resturi care apar rar n alte proteine: 4HO-prolina i 5-HO-lizina. Prolina i hidroxiprolina reprezint aproximativ 20-25% din totalul resturilor de aminoacid din colagen. O alt caracteristic a colagenului este proporia relativ mic, de tirozin i fenilalanin, ct i absena total a cisteinei. Cercetrile fcute pe polipeptide sintetice, modele ale colagenului, au artat c temperatura de topire (temperatura la care jumtate din structura elicoidal a tropocolagenului se pierde) pentru poli(ProProGly) este de 24C iar pentru poli(ProHOProGly), este de 58C. Aceasta indica faptul c hidroxiprolina din colagen, este un stabilizant termic. Macromoleculele de colagen, tripluhelicale (tropocolagenul), se autoasambleaz cap cod formnd protofibrile. Protofibrilele la rndul lor se asociaz pentru a forma microfibrilele. Microfibrilele sunt striate cu zone mai opace i zone mai transparente, vizibile la microscopul electronic. Zonele opace corespund unei poriuni de suprapunere a moleculelor de tropocolagen, iar zonele mai transparente corespund poriunii de suprapunere parial a acestora. Se pare c aceste zone mai puin transparente, ce corespund de fapt distanei dintre capul i coada moleculelor de tropocolagen, sunt punctul de iniiere al mineralizrii esuturilor osoase. Capetele N i respectiv C terminale care nu conin 16-17 aceast de distribuie a glicinei. Aceste capete conin resturi aminoacid, numite teloproteine, au o structur diferit de a colagenului. Ele au n structura lor poliprolin n captul C terminal. La captul N terminal majoritar teloproteina resturi care de conine lizin i la
CH CH2 CH2 Hidoxi Lizina CH2 CH2 NH2 CH2 OH CH CH2 CH2 CH2 OH CH2 N CH CH2 CH2 CH Hidroxi Allizina CH2 OH CH2 CH OH OHC CH CH2 CH2 C CH CH CH2 CH2 CH2 OH CH CH2 CH2 CH2 OH CH2 CH2 CH2 CH CHO CHO Hidroxi Allizina CH CH2 CH2 CH2 OH CH2 NH2 Hidoxi Lizina

OH CHO Produs de condesare crotonic

hidroxilizin,

contribuie

CH2

Dehidrodihidroxi lizinonorleucin baz Schiff

formarea legturilor ncruciate ntre lanurile . De asemenea captul N terminal conine37 o parte a determi-nantului imunologic al colagenului. Colagenul este stabilizat de legturi ncruciate intercatenare care ntresc conformaia tropo-colagenului i leag moleculele vecine de tropocolagen ntre ele. La formarea acestor legturi particip radicalii lizin. Lizil oxidaza este enzima care catalizeaz oxidarea a 2 radicali lizin sau hidroxilizin cu formare de derivai aldehidici (allizin sau hidroxiallizin). Acetia sufer o reacie de condensare crotonic rezultnd o legtur intercatenar sau prin condesare cu nou molecul de lizin respectiv hidroxilizin, formeaz baze Schiff. Dehidrodihidroxilizinonorleucina este principalul component, care face legturile ncruciate n colagenul insolubil din structurile calcificate cum ar fi oase, dentin, cartilaje. Se pare c aceste puni de dehidrodihidroxilizinonorleucin sunt responsabile de, totala insolubilitate a colagenului din esuturile mineralizate. Colagenul matur, prezint o mare stabilitate rezistnd la metodele uzuale de hidroliz chimic sau enzimatic. Exist totui o clas de enzime numite colagenaze care sunt capabile s catalizeze clivajul hidrolitic al colagenului. Clostridium histolyticum este o bacterie care cauzeaz gangrena gazoas a plgilor. Aceast bacterie este capabil s secrete un grup de colagenaze. Elastina este o protein cu nalt elasticitate. Ea este componentul de baz a fibrelor elastice care prin ntindere i mresc de mai multe ori lungimea pentru ca, mai apoi s poat reveni la dimensiunile iniiale. Se gsete n pereii vaselor de snge i n ligamente. Subunitatea de baza a elastinei este tropoelastina care, ca i tropocolagenul este bogat n Gly, Ala i Pro. De asemenea, conine n special aminoacizi nepolari (Val, HN CH (CH2)2 Leu i Ile). Tropoelastina este un tip aparte de OC helix n care legturile transversale se realizeaz prin intermediul desmozinei, structur aromatic ce rezult prin oxidocondensarea a patru molecule de lizin. Datorit acestor legturi "n 4 puncte" elastina prezint elasticitate bidimensional. HN CO CH (CH2)3 (CH2)2 N
+

NH CH CO

(CH2)4 CH HN CO

38

Miozina i actina sunt filamente proteice ale sarcomerului, implicate n contracia

muscular. Miozina este format din dou polipeptide alfa-elicoidale rsucite una n jurul celeilalte. Ea are un "cap", protein globular care posed activitate enzimatic. Mai multe molecule de miozin sunt asamblate formnd filamente groase de miozin. Intercalate ntre acestea se gsesc filamente mai subiri de actin. Un filament de actin (F-actina) este format din dou iruri de G-actina suprancolcite. Un alt sistem de proteine lungi este cel al microtubulilor. Un microtubul este format din 13 filamente aranjate paralel n form de tub. Un filament este o niruire de dou tipuri de proteine globulare: -tubulina i -tubulina aezate alternativ. Microtubulii sunt prezeni n cili i flageli. 3.1.3 Structura teriar a proteinelor 3.1.3.1 Studiul structurii teriare cu raze X. Relaiile dintre atomii catenei polipeptidice, situai la distan mare unii de alii n secven liniar, constituie structura teriar a proteinei. Prima protein globular creia i s-a determinat structura teriar a fost mioglobina din caalot. Cristalografia de raze X este un mijloc puternic de investigare, alturi de rezonana magnetic nuclear (RMN). Un cristal proteic este traversat de un fascicul monocromatic de raze X iar spectrul de difracie este nregistrat pe un film fotografic. ntruct razele X interacioneaz numai cu electronii, difractograma este imaginea densitii de electroni. Hrile de densitate electronic sunt seciuni paralele prin cristalul cercetat. Un set de hri suprapuse produc o hart tridimensional de densitate electronic. Pornind de la observaia c multe enzime sunt active i n stare cristalin se deduce c, n cristal moleculele proteice au structuri tridimensionale asemntoare cu cele adoptate n soluii apoase. Spre fibrilare, structurilor deosebire de proteinele realizeaz La proteinele secundare globulare

structuri teriare datorit plierii la nivelul non-repetitive. majoritatea proteinelor globulare cele dou conformaii helix i pliat sunt adoptate

de 20-30% din lungimea catenelor. n ceea ce privete localizarea radicalilor, sunt respectate 39 cteva reguli: a. Radicalii nepolari sunt orientai spre interiorul "globului", fiind exclus contactul lor cu moleculele de ap. b. Radicalii polari ncrcai electric sunt localizai pe suprafa, n contact cu moleculele de ap. c. Radicalii polari nencrcai att pe suprafa ct i pe interior. Aranjamentul micelar al radicalilor a condus la presupunerea c o protein globular este asemenea unei picturi uleioase nvelite cu un strat polar. 3.1.3.2 Forele stabilizatoare ale structurii teriare Proteinele native sunt entiti uor de denaturat. Trecerea structurii teriare de la starea nativ, ordonat, la una dezordonat, se face cu consum mic de energie. Rezult c structura teriar nativ este un "compromis" la care au ajuns forele de interaciune interne i forele de interaciune cu moleculele de solvent. Forele ionice se supun legii lui Coulomb, variaz cu r2 i depind de constanta dielectric a mediului. Perechile de ioni sunt expuse de obicei ctre mediul apos i, ntruct energia de hidratare a lor este apropiat de energia de legtur, contribuia lor la stabilizarea structurii proteinelor este mic. Forele van der Waals se exercit ntre dipoli permaneni sau indui variind cu r3. Energia lor este cu un ordin de mrime mai mic dect a punilor saline. Totui, fiind numeroase ele contribuie n mod semnificativ la stabilizarea structurii teriare. n structura gruprilor nepolare pot apare dipoli fluctuani, care polarizeaz fluctuant atomii vecini, ntre cele dou tipuri de dipoli, inductor i indus, existnd interaciuni numite fore de dispersie London (variaz cu r6). Fig. 3.3. Forele stabilizatoare ale structurii teriare Fig.3.2. Structura tridimensional a unei se afl proteine globulare, zonele cilindrice helix, sgeile plate - pliat, firul subire structuri non-repetitive

40

Punile de hidrogen sunt tot interaciuni de natur electrostatic. Ele au proprietatea

de direcionalitate este maxim cnd atomii implicai sunt coliniari. La molecula proteic nativ predomin punile de hidrogen dintre proprii atomi pe cnd la molecula denaturat predomin punile de hidrogen stabilite cu moleculele de ap (sunt un factor minor de stabilizare). Forele hidrofobe determin tendina moleculelor nepolare de a-i reduce contactul cu apa. Proteinele avnd structura micelar sugereaz importana forelor hidrofobe n stabilizarea structurii native a proteinelor. Legturile disulfurice particip la stabilizarea structurii proteinelor numai dac mediul nu este prea reductor. Caracterul reductor al citoplasmei slbete aceste legturi ceea ce explic lipsa de activitate n acest mediu al unor enzime care au destinaie extracelular. 3.1.3.3 Denaturarea proteinelor. Atunci cnd o protein este nclzit numeroase proprieti fizice ale ei se modific brusc. Cele mai multe proteine au Tm < 100C (Tm temperatura de topire). Efectul denaturant al detergenilor se datoreaz aciunii lor de a interfera cu forele hidrofobe care stabilizeaz structura teriar. n aceast competiie detergenii desfac legturi hidrofobe care menin catena n stare mpachetat. La fel, substanele organice solubile n ap, cum sunt alcoolii alifatici. Variaiile mari de pH modific starea de ionizare a radicalilor determinnd ruperea punilor saline. Srurile au efecte diferite asupra proteinelor. Unele stabilizeaz structura teriar, iar alte destabilizeaz aceast structur. Fig. 3.4. Denaturarea i renaturarea

Ribonucleazei A. Ureea a disociat punile de hidrogen, iar mercaptoetnolul a rupt punile disulfurice

3.1.4

Structura cuaternar a proteinelor.

41

Supunnd proteinele ultracentrifugrii Svedberg a descoperit c unele proteine sunt compuse din mai multe catene nelegate covalent ntre ele. Aranjamentul spaial al acestora corespunde anumitor simetrii i se numete structur cuaternar. Subunitile se numesc protomeri iar, proteina se numete oligomer. Hemoglobina este format din 2 protomeri - acetia fiind formai din cte 2 subuniti, i . Prin urmare hemoglobina are formula Fig.3.5.Structura oligomeric ()2. neuraminidazei cuaternar a

3.2 Separarea proteinelor

3.2.1 Extracia din celule. Pentru izolarea unei proteine este necesar alegerea unei surse care s furnizeze mari cantiti de esut cum sunt vaca, porcul, gina dar i oarecele, ieftin i uor de prelucrat. Alternativ pot fi folosite culturi de Escherichia coli sau Saccharomyces cerevisiae. n ultimul timp s-a dezvoltat tehnica clonrii moleculare pe baza creia poate fi produs aproape orice protein codificat genetic. n acest scop, un microorganism este supus manipulrii genetice pentru a putea produce proteina dorit iar apoi este cultivat. Prima etap n izolarea unei proteine este transferul ei din celul ntr-o soluie. Dac proteina este citosolar este suficient citoliza care se poate face pe cale osmotic suspendnd celula ntr-o soluie hipotonic, sau enzimatic prin degradarea peretelui celular cu enzima lizozim. Citoliza mecanic se poate face prin mojarare cu pulbere de alumin sau cu ultrasunete. Fragmentele tisulare se pot ndeprta prin filtrare sau centrifugare iar apoi membranele i organitele se separ prin centrifugare diferenial. Principalul criteriu n alegere a condiiilor de purificare este meninerea sub control a factorilor denaturani n toate etapele ei. Dup extracia din celule se trece la separarea proteinei de celelalte molecule dizolvate. Aceasta se realizeaz prin operaii bazate pe diferena de solubilitate, dimensiuni moleculare, afinitate fa de liganzi, sarcin ionic, proprieti de adsorbie.

42

3.2.2

Solubilitatea proteinelor.

ntruct proteinele sunt polielectrolii, solubilitatea lor depinde de concentraia srurilor, pH i constanta dielectric ale mediului de dizolvare. Concentraia srurilor este uneori exprimat prin fora ionic, dependent de concentraia speciei i de sarcina electric a acesteia. La for ionic mic solubilitatea proteinelor crete cu concentraia srurilor (dizolvare salin). Ea atinge o valoare maxim dup care scade (precipitare salin) datorit scderii activitii apei, ceea ce face ca interaciunea protein-protein s devin mai puternic dect interaciunea protein-solvent. Cea mai folosit, n precipitarea salin, este cea cu (NH4)2SO4. Efectul pH-ului depinde de natura proteinelor deoarece acestea au pI caracteristic la care solubilitatea este minim (precipitarea izoelectric). Solvenii organici cum sunt acetona i etanolul precipit proteinele la adugare n soluia apoas deoarece au constanta dielectric mic i reduc hidratarea proteinelor. 3.2.3 Gel-filtrarea, dializa i cromatografia de afinitate. Faza staionar a unei coloane de filtrare prin gel const din microsfere poroase cu pori micronici ntre anumite limite dimensionale. Moleculele mari care nu pot penetra porii vor trece rapid prin coloan. Masa celei mai mici molecule de acest fel se numete vor fi limit eluate a de n excludere. ordinea maselor. Moleculele cu masele mai mici descresctoare

Microsferele pot fi fcute din dextran (un polimer al glucozei), agaroz Fig. 3.6. Gel filtrare (polimer n care alterneaz D-galactoza cu 3,6 -anhidro- L-galactoza) sau poliacrilamid. Dializa este un procedeu n care proteinele se separ de moleculele mici prin penetrarea celor din urm prin membrane semipermeabile ai cror pori sunt inaccesibili

proteinelor. Materialele folosite sunt acetatul de celuloz i nitroceluloza. Dac, n plus, 43 se aplic un cmp electric, membranele fiind ncrcate electric, vorbim de electrodializ care, n desalifierea soluiilor de proteine, este superioar dializei. Cromatografia de afinitate se bazeaz pe capacitatea unei proteine de a se lega specific de o molecul numit ligand. Cnd un amestec de proteine este trecut printr-o coloan care conine ligandul fixat pe un suport, acesta reine numai proteina specific lui. Suportul, inert chimic i cu o bun porozitate, este agaroza care conine i numeroase grupri funcionale necesare fixrii ligandului. Folosinduse ca ligand insulina, a fost purificat suprafaa receptorul unor de insulin, o protein aflat la celule. de folosete ca Fig. 3.7. Cromatografie de imunoafinitate Cromatografia imunoafinitate 3.2.4

liganzi anticorpi monoclonali specific pentru proteina care se purific. Separarea proteinelor ca polielectrolii Separarea proteinelor pe baza diferenei de sarcin, electric se face prin cromatografie de schimb ionic i electroforez. Ca schimbtori de ioni se folosesc ca anionit dietilaminoetil-celuloza (DEAE - celuloza) i drept cationit carboximetil-celuloza (CMC). Separarea prin tehnica electroforezei presupune plasarea proteinei cu sarcin net q ntr-un cmp electric . Vitezei de migrare i se opune fora fricional, care depinde de dimensiunea, forma i starea de hidratare a moleculei. Mobilitatea electroforetic a proteinei, depinde de pH -ul mediului datorit structurii de polielectrolit a acesteia. Dac un amestec de proteine este supus electroforozei ntr-un mediu cu gradient de pH, fiecare protein va migra pn la locul unde pH = pI (focusare izoelectric).

44

Electroforeza zonal

folosete ca medii de migrare o fie de hrtie, un strat de agaroz sau de poliacrilamid (PAGE). Adugarea unui detergent n mediul de migrare schimb criteriul de separare prin asocierea detergentului la diferite molecule proteice le Fig. 3.8. Cromatografie de schimb ionic confer aceiai form (denaturare) i le egalizeaz sarcina specific . Prin urmare, n aceste condiii separarea se face numai n funcie de masa molecular. Electroforeza bidimensional. Pentru a separa dou sau mai multe proteine cu mase moleculare apropiate se apeleaz la electroforeza bidimensional. n aceast tehnic proteinele sunt separate n dou trepte: n prima treapt, n funcie de ncrcarea electric, iar n a doua n funcie de masa molecular. Primul pas const ntr-o electroforez ntr-un tub ncrcat cu gel de poliacrilamid n care s-a introdus amestecul de proteine. Dup electroforez proteinele sunt separate n funcie de ncrcarea electric i de gradientul de pH care este n tub. n etapa a doua gelul cu fraciunile proteice separate este scos din tub i aplicat pe placa cu gel de poliacrilamid la care se aplic un cmp electric. Cea de-a doua separare se va face n funcie de masa molecular a proteinelor. Proteinele odat separate se coloreaz cu colorani specifici i se determin concentraia acestora n funcie de intensitatea culorii cu ajutorul unor integratoare. Fig. 3.9. Separarea proteinelor prin electroforez bidimensional

4 ACIZII NUCLEICI
4.1 Nucleobaze, nucleozide i nucleotide. Derivai.
4.1.1 Nucleobaze HOCH 2 H H O H OH H HOCH 2 H H O H Acidul deoxiribonucleic (ADN) este un polimer de deoxiribonucleotide iar acidul ribonucleic (ARN), un polimer de ribonucleotide. Un nucleotid const dintr-o baz azotat (nucleobaz), anomerul al D-

45

OH

OH H

-D-2'-deoxiriboza 2'-deoxiribozei sau al D-ribozei i o grupare fosfat.

H OH OH -D-riboza

Nucleobazele sunt de dou tipuri: pirimidinice (uracilul, timina i citozina) i purinice (adenina i guanina). n structura ADN nucleobazele predomin n form lactamic. H C 4
1

N3 HC
2

5 6

CH CH O HN C

O C CH CH HN O C

O C C CH3 O N C

NH 2 C CH

N Pirimidina

N H Uracil

CH N H Timina

CH N H Citozina O

1 2

H C 6
3

5 4

C C

N 7
9

NH 2 CH N HC C N C C N CH N H HN H2N C

C N

HC

N H

C C

N CH N H

Purina

Adenina OH HN HO C C CH tautomerie O HN C O C O CH HN HC C C N

Guanina O HN CH O C C C C N CH

CH N H Uracil forma lactimic

CH N H Uracil forma lactamic

C N N H Hipoxantina Hipoxantina i

N N H H Xantina

xantina ca intermediari ai metabolismului adeninei i guaninei. Acidul uric este produsul final al catabo-lismului purinic la om. N HO C

OH C N C C N C OH

N H Acidul uric

46

H3C N O

CH3 N

H3C N O

O N N N H HN O

CH3 N

CH3 CH3 CH3 Teofilina Teobromina Cafeina Exist civa derivai metilai ai xantinei. Cafeina (1, 3, 7 -trimetilxantina) se gsete

n cafea, ceai i alte plante iar teobromina (3,7-dimetilxantina) i teofilina (1,3-dimetilxantina) se gsesc n ceai i cacao. 4.1.2 Nucleozidele sunt riboza alctuite printr-o dintr-o baz pirimidinic NH 2 Adenozina Citidina C C N CH N N C CH O C CH HC C N N N NH 2 HOCH 2 O CH HC HC C H OH OH 9- -D-riboziladenina Nucleozidele deoxiriboza sau

sau purinic la care este ataat legtur -N1- glicozidic respectiv - N9 glicozidic. Denumirea lor se formeaz adugnd la

rdcina HOCH 2 O CH HC numelui bazei primidinice sufixul HC C H idin i al bazei purinice sufixul OH OH ozin. Rezult urmtoarele denumiri: 1- -D-ribozilcitozina uridin, timidin, citidin, adenozin, 4.1.3 Nucleotidele
N HC

guanozin, deoxitimidin, deoxicitidin, deoxiadenozin i deoxioguanozin.

NH 2 C C C N CH N HC NH 2 C C C N CH

Nucleotidele sunt esteri ai nucleozidelor cu H3PO4. n cazul deoxinucleotidelor poziia de fosforilare poate fi 3 sau 5. n cazul nucleotidele din ARN pot fi fosforilate n una din poziiile 2', 3' sau 5'. Denumirile acestor nucleotide sunt uridin monofosfat (UMP), citidin

N N N N ' ' 5 5 HOCH2 O H2O3POCH2 O ' ' 4' C H 4' C H HC1 HC1 HC HC C H C H 3' 3' 2' 2' H H H2O3PO OH Deoxiadenozin-3'-fosfat Deoxiadenozin-5'-fosfat

monofosfat (CMP) sau deoxitimidin monofosfat (dTMP), deoxiadenozin monofosfat (dAMP). Aceste nucleotide mai pot fi numite acid adenilic, acid deoxitimidilic, etc. n denumirea complet se indic i locul n care este esterificat pentoza, de pild, 2' -deoxi - 5' - fosfat. n

afara nucleotidelor monofosforice exist nucleotide di- i trifosforice. Astfel, adenozin 47 difosfatul (ADP) conine dou grupri fosfat unite ntre ele printr-o legtur de anhidrid iar adenozin trifosfatul (ATP) conine trei grupri fosfat. Caracterul macroergic al ATP se -O datorete celor dou legturi macroergice de anhidrid fosforic A i B ale cror atomi conin, la pH fiziologic, sarcini negative care se resping reciproc. Prin hidroliza ATP, ATP + H2O ADP + H3PO4, se formeaz ADP cu mai puine sarcini negative, elibernduse o mare cantitate de energie liber N N O
-

NH2 ATP O P
-

N HC O CH2 H H

C N O

C C

N CH N

O A O
-

O P
-

PBO O

H H OH

Adenozin-5'-trifosfat ATP adenilat ciclaza NH 2

OH

PPi

(7,3kcal/mol), ceea ce evideniaz potenialul nalt de fosforilare al ATP. Sub aciunea catalitic a enzimei adenilat ciclaz, ATP elimin anhidrida fosforic (PPi) i rezult 3', 5'AMP ciclic care, (AMPc), sub un O fosfodiester ciclic aciunea P

N N

CH2 O OH

fosfodiesterazei se transform n AMP. AMPc joac un rol important n metabolismul celular, fiind numit al doilea mesager.

O O 3',5'- AMP ciclic

H2O

fosfodiesteraza AMP

Activitatea adenilat ciclazei este reglat de receptori hormonali, proteine membranare aflate n vecintatea ei. GMPc rezult din GTP sub aciunea guanilat ciclazei i este un antagonist al AMPc. Un derivat important al AMP este adenozin -3' -fosfat -5' -fosfosulfat (PAPS) care, datorit caracterului macroergic, este numit "sulfat activ". Un alt derivat este S-adenozilmetionina (SAM) care, datorit caracterului macroergic are un potenial ridicat de metilare a unor compui.

COO HC CH2
CH O 2

NH 2 N HC C N C C N CH N

NH 2

Analogii sintetici ai nucleobazelor i nucleozidelor 48 sunt folosii ca citostatice n tratamentele

O H3 C
-

S
+

oncologice. Pentru ca o celul s se divid este necesar replicarea ADN i pentru aceasta sunt necesare nucleotidele "standard". Analogii (5fluorouracil, 6-tioguanin, arabinozilcitozina) altereaz structura acizilor nucleici n timpul diviziunii, frnnd proliferarea celular (citostatice).

O OO P O
F

O
N

CH2 C O N N C H H CH HC C N H H SH N OH
N

NH 2

OH N OH CH 2 O N H2N SAM N O N N N H H N H H H 6-Tioguanina 5'-Fluorouracil H H Allopurinol

HN
-

HO 3PO PAPS

OH

Allopurinolul, analog al hipoxantinei, este utilizat n tratamentul gutei.

4.2 Structura primar a acizilor nucleici.

Subunitile monomerice ale ADN sunt dTMP, dCMP, dAMP i dGMP. Ele sunt legate prin puni 3', 5' fosfodiesterice. Prin convenie secvenele de polinucleotide sunt scrise cu captul 5' la stnga. Acest capt nu este fosforilat iar captul 3' este fosforilat, adic molecula este polar. Subunitile monomerice ale ARN sunt UMP, CMP, AMP i GMP. ADN este molecula ereditii n toate formele de via. Cele dou funcii de baz ale ADN sunt replicarea i transcripia. Cele trei tipuri majore de acid ribonucleic din celule sunt ARN mesager (ARNm), ARN de transport (ARNt), i ARN ribozomal (ARNr). Toate cele trei tipuri de ARN sunt lanuri monocatenare, care se deosebesc ntre ele, prin mase moleculare i coeficieni de sedimentare.

O N G N 5' CH2 O P H H O H H O H P O O O NH NH 2 C CH2 O H H H H O H P N N O H3C T CH2 O H H H H O H P N Segment de ADN O NH O NH 2 N A CH2 O H H 3' O H H H P N N N

N H2N

O N G N 5' CH2 O P H H O H H O HO P NH NH2 C CH2 O H H H H O HO P O O N N O U CH2 O H H H H O HO P N Segment de ARN O NH O NH2 N A CH2 O H 3' H H H HO P O N N N

49

N H2N

ARN mesager particip la translaie (biosinteza proteinelor). Pe fiecare lan se gsesc triplete de baze numite codoni. Secvena codonilor din ARNm este complementar celei din lanul AND ce se transcrie. Dup transcripie ARNm trece din nucleu n citoplasm i apoi la ribozom, unde servete ca matri pentru ordonarea secvenial a aminoacizilor n procesul de biosintez a proteinelor. Moleculele de ARNm sunt monocatenare, dar pe anumite poriuni, acolo unde o permite complementaritatea bazelor se organizeaz n structuri dublu helicoidale.

Fig. 4.1. Reprezentarea spaial i plan a ARNt

50

Fig. 4.2. Structura secundar i teriar a unei molecule de ARN ARN de transport este un oligonucleotid ce conine cca 85 nucleotide, care activeaz aminoacizii standard. Pe lng bazele purinice i pirimidinice, ARNt conine un numr apreciabil de baze rare, care pot reprezenta 10% din totalul ARNt. n plus, ARNt conine unele nucleotide neuzuale ca, acidul pseudouridilic i acidul ribotimidilic. ARN ribozomal (ARNr) se gsete n structura ribozomilor, reprezentnd 65% din masa acestora. ARNr separat din ribozomii de Escherichia coli au structur monocatenar, linear, cu coeficieni de sedimentare de 23 S, 16 S i 5 S (S = unitate Svedberg sau coeficient de sedimentare n cmp centrifugal) i cu secvena bazelor diferit. n celulele eucariote, care au ribozomi mai mari dect celulele procariote, exist patru tipuri de ARNr: 5S, 7S, 18 S i 28 S. O parte din bazele din ARNr sunt metilate.

4.3 Conformaiile ADN.

E. Chargraff n 1950 a descoperit c raportul dintre numrul de baze primidinice i cel de baze purinice ale ADN este foarte aproape de 1. n esuturile umane acest raport este 0,96.

Indiferent de organism i de esut, ntre limite strnse, raportul ntre numrul de baze T : A51 i C : G este n jurul valorii 1. Studiile de difracie de raze X pe fibre de ADN i-au permis lui Francis Crick s deduc natura elicoidal a moleculei de ADN i aranjamentul inelelor plane al bazelor, care se suprapun ca treptele unei scri elicoidale. Pe baza acestor informaii, a fost elaborat modelul Watson-Crick (1953) al ADN. Difractograma arat c fibrele de ADN adopt aa-numita conformaie B. Aceasta este conformaia fiziologic, ea fiind observat prin cercetarea spermatozoizilor intaci. Catenele. Molecula de ADN este format din dou catene polinucleotidice care se nfoar la dreapta n jurul unei axe comune pentru a forma un dublu helix (duplex). Catenele sunt antiparalele i nu pot fi separate fr desfurarea helixului, adic nfurarea este plectonemic. Nucleobazele. Scheletele ribozofasfodiesterice se afl la suprafaa duplexului, restriciile impuse rotaiei n jurul legturilor fosfoesterice, determinnd orientarea bazelor spre interiorul duplexului. Cele dou catene sunt legate ntre ele prin puni de hidrogen care se stabilesc ntre baze timina pe se principiul mperecheaz complementaritii:

numai cu adenina i citozina se mperecheaz numai cu guanina. n perechile Watson - Crick bazele se afl n forma lactamic. nlocuirea unei perechi T-A cu C-G i invers, precum i nlocuirea unei perechi T-A cu A-T sau C-G, cu G-C, nu deformeaz scheletul duplexului. Dimensiuni. Duplexul are diametrul de 20 i 10 perechi de baze pe spir, o coloan de 10 baze are nlimea de 34 ceea ce reprezint pasul helixului.

52

Profil. Pe suprafaa moleculei exist dou anuri elicoidale, unul minor i unul major

n care se gsesc proteine bazice specifice ataate prin puni de hidrogen i legturi ionice. Prezena lor justific denumirea de nucleoproteine. Un exemplu l constituie proteinele bazice numite histone. n afara conformaiei B, duplexul poate adopta conformaiile A i Z Dac umiditatea relativ scade, ADN trece reversibil din conformaia B n A , care este un duplex la dreapta mai lat i mai neted. Planul perechilor de baze este mai nclinat ceea ce adncete anul major i netezete anul minor. Conformaia Z este un duplex la stnga n care scheletul unei catene se nfoar n zig-zag n jurul axei moleculei de ADN. Aceast conformaie este stabilizat de prezena cationilor unor poliamine ca spermina i spermidina. Metilarea citozinei, modificare implicat n reglarea expresiei genice, favorizeaz conformaia Z. Aceasta sugereaz c transformarea B-ADN n Z-ADN este implicat n reglarea expresiei genice. Conformaia A este adoptat de duplexul ADN-ARN care se formeaz in cursul transcripiei. 4.3.1 Forele stabilizatoare ale conformaiei ADN. mperecherea bazelor prin puni de hidrogen pare a fi "liantul" care menine mpreuna catenele ADN. ntruct sunt puin probabile punile de hidrogen "specifice", este de presupus c, n afara complementaritii geometrice, perechile Watson - Crick satisfac i o complementaritate electronic. Ca i la proteine, punile de hidrogen contribuie doar n mic msur la stabilitatea conformaiei, principalul rol fiind al interaciunilor hidrofobe. Faptul c temperatura de tapire (Tm,) a ADN crete cu concentraia cationilor din mediu, sugereaz influena stabilizatoare a acestora. 4.3.2 Denaturarea acizilor nucleici. Ca i la proteine, denaturarea acizilor nucleici poate fi determinat de nclzire i variaiile de, pH. Duplexul ADN sau regiunile dublu catenare ale ARN se desperecheaz, ceea ce determin creterea marcata a absorbiei optice n UV. Ca i colagenul, ADN este o

structur stabilizat prin interaciuni cooperative care, luate separat sunt slabe, dar sunt multe 53 i se condiioneaz ntre ele. Desfacerea uneia determin desfacerea celor din apropiere. ADN denaturat poate fi parial renaturat, fenomen numit de "clire" care se poate face prin meninerea soluiei de ADN denaturat la o temperatur ceva mai mic dect Tm . Pe aceasta se bazeaz hibridizarea acizilor nucleici i construirea duplexului AND-ARN.

4.4 Proiectul Genomul uman

Human Genome Project reprezint proiectul major suprastatal de cercetare fundamental al secolelor XX i XXI. Directorul acestui proiect este James Watson, acelai american care n 1962 a luat premiul Nobel pentru descoperirea structurii helicale a acidului nucleic. Obiectivele acestui proiect sunt: identificarea i cartografierea tuturor genelor din cromozomii organismului uman; alctuirea unui atlas al genelor umane. n ultimii 10 ani, laboratoarele de genetic ale Universitii Berkeley din California au elaborat metode foarte rafinate de cartografiere genetic; a fost construit o main automat pentru citirea secvenelor de baze nucleotidice din acizii nucleici, cu viteza de 7000-8000 secvene de baze pe zi; n prezent se lucreaz la un nou sistem pentru citirea acestor secvene de baze cu viteze i mai mari, de 30 de milioane de baze n 3 secunde. Din cantitatea total de ADN a genomului uman, de 3 miliarde de perechi de secvene nucleotidice, doar 1-3% se pare c au funcii definite (gene funcionale pentru sinteza proteic i ARN) formnd exonii, n timp ce marea parte de 93% din acest ADN nu are o funcie genetic definit, reprezentnd aa-numitul gunoi genetic (intronii). Boala4.1. Cteva dintre bolileDefectul Frecvena Tabelul genetice genetic ce urmeaz a fi tratate prin terapie genetic Diabetus mellitus Deocamdat necunoscut 3 la 1000 de persoane Nanism hipofizar Somatotropina (GH) 1 la 50 000 de persoane Emfizem pulmonar 1 la 4000 de persoane -1-antitripsina Hipercolesterolemia receptor LDL 1 la 500 de persoane 1 la 500 de persoane n Talasemia -globina zona mediteranean Hemofilia A factorul VIII 1 la 10 000 de persoane Hemofilia B factorul IX 1 la 30 000 de persoane Sindromul Gaucher Glucocerebrozidaza 1 la 2500 de europeni Fenilcetonuria fenilalanin-4-hidroxilaz 1 la 9000 de persoane hipoxantin-guaninSindromul Lesch-Nyhan 3 la 10 000 de persoane fosfori-loziltransferaza Studiul genomului uman va avea de asemenea un rol imens n clarificarea mecanismelor unor boli, astzi socotite nc incurabile: boli genetice i metabolice, alergii, boli autoimune, boli

ale sistemului nervos central, afeciuni dermatologice, alcoolism, cancere - considerate astzi 54 boli cu predispoziie genetic. Astzi se apreciaz c minimum 4000 de boli umane au o component genetic. La descifrarea genomului uman se lucreaz n prezent prin alctuirea simultan a 3 hri diferite i anume: - prima hart va reprezenta o bibliotec de clone de gene umane. Prin clonarea genelor se nelege multiplicarea ADN-ului (a secvenelor nucleotidice respective) din structura acestora. Multiplicarea acestui ADN a devenit posibil, prin utilizarea reaciei polimerazei n lan (PCR); cu ajutorul acesteia, doar n cteva ore, din probele de ADN se obine un numr foarte mare de copii identice (cantitatea amplificat de ADN) corespunztoare unei anumite gene. Trebuie menionat c circa 90% din materialul genetic uman este identic la toi indivizii, doar 10% din perechile de nucleotide ale genomului uman prezint diferene ntre indivizi. - a doua hart se va realiza prin identificarea genelor din bibliotec ; n vederea selectrii i identificrii unei gene din miile de clone ale bibliotecii, se folosete o sond genetic (segment ADN unic lan cu secvene nucleotidice cunoscute i marcate); prin fixarea acesteia pe o anumit gen se ajunge n final la identificarea secvenelor de baze ale acesteia. Deci, cu ajutorul acestor sonde, fragmentul ADN corespunztor unei anumite gene din biblioteca de gene poate fi gsit i identificat prin fixarea pe el a sondei genetice corespunztoare marcate, pe baza principiului complementaritii perechilor de baze. - a treia hart va reprezenta cartografierea tuturor genelor, proces considerat a fi o munc de Sisif, ea se va realiza printr-o tehnic complet automatizat. n paralel, se lucreaz la elaborarea unui aparat pentru diagnosticul rapid al bolilor genetice. n prezent este posibil realizarea diagnosticului precoce al fenilcetonuriei, acest diagnostic fiind deja introdus n programele sanitare de screening (de mas) n multe ri ale lumii. Fenilcetonuria este o tulburare condiionat genetic a metabolismului fenilalaninei. Cauza acestei boli este absena (sau deficiena) enzimei fenilalanin-4-hidroxilaza. n aceste condiii, fenilalanina nu mai poate fi convertit n tirozin, acumulndu-se n toate fluidele organismului; se produce transaminarea fenilalaninei, rezultatul fiind formarea fenilpiruvatului care se acumuleaz n urin. Cu fenilcetonuria apar asociate i alte tulburri metabolice, n special cele ale compuilor aromatici. Aceste tulburri metabolice provoac aproape la toi indivizii netratai ntrzieri severe mentale. De curnd gena uman pentru

enzima fenilalanin-4-hidroxilaza a fost clonat, astfel nct n prezent este posibil diagnosticul 55 prenatal al fenilcetonuriei, prin utilizarea probelor de ADN (recoltare de la mam prin amniocentez). Din punct de vedere teoretic, terapia genetic se poate realiza la dou niveluri: - la nivel de celule somatice (efectul tratamentului rmnnd restrns doar la pacienii tratai, dar fr influen asupra descendenilor) - la nivel de celule sexuale (efectul tratamentului s-ar transmite prin celulele germinative descendenilor).

5 CROMOPROTEINELE
5.1 Importana cromoproteinelor.
Cromoproteinele sunt heteroproteiene, care au ca parte prostetic, una sau mai multe molecule de hem. Dintre cromoproteine au o importan biologic deosebit mioglobina i hemoglobina. Majoritatea proteinelor aflate n celulele vii sunt mult mai complexe i mai dezordonat pliate dect catenele proteinelor fibrilare. Ele sunt mpachetate n forme globulare. Mioglobina i hemoglobina sunt proteine globulare intracelulare. Trecerea de la viaa anaerob la cea aerob a fost un mare pas deoarece prin degradare aerob glucoza furnizeaz o cantitate de energie de 19 ori mai mare dect prin degradare anaerob. Animalele mari i-au perfecionat un sistem circulator care s transporte oxigenul de la plmni sau alte organe captatoare de O2 la esuturile periferice i a CO2 n sens invers. Mioglobina se gsete n celulele muchilor scheletici i n deosebi la mamiferele subacvatice (balen, foc, mors, etc.). Concentraia mioglobinei n muchii acestora este de 10 ori mai mare, dect la restul mamiferelor. Are rolul de a stoca oxigenul n celule i mrete viteza de difuzie n celul. Mioglobina asigur o concentraie suficient de mare de oxigen intracelular pentru ca, mitocondriile s poat capta un flux de oxigen suficient de mare. Sngele transport la celulele musculare sau alte tipuri de celule consumatoare, cantitatea de oxigen necesar arderilor din interiorul lor. Prin aciunea lor secvenial, mioglobina i hemoglobina contribuie esenial la realizarea unul intens transfer al oxigenului de la plmni la mitocondriile esuturilor consumatoare.

Structura teriar a mioglobinei, protein monomeric este aproape identic cu structurile 56 teriare ale celor 4 protomeri ai hemoglobinei cele dou proteine sunt foarte diferite din punct de vedere funcional. Mioglobina asociaz/disociaz O2, conform legii aciunii maselor, n timp ce hemoglobina resimte efectul mai multor stimuli chimici n procesul de asociere/disociere a O2. Afinitate ei pentru O2, este influenat de pH, pCO2 compui organofosforici. Similitudinea structural, la care se adaug faptul c mioglobina i protomerii hemoglobinei conin hem, sugereaz faptul c cele dou proteine provin dintr-o hem-protein ancestral comun.

5.2 Structurile mioglobinei i hemoglobinei.

Att hemoglobina ct i mioglobina au ca parte prostetic molecula de hem. Molecula CH2 de hem este o molecul aromatic plan cu un nucleul tetrapirolic. n soluie apoas hemul se combin cu O 2, prin oxidarea Fe2+ Fe3+ i reducerea O2 O2-, (radical anionic superoxid), adic prin transferul H C C C 3 unui electron de la Fe2+ la O2. Prin tria ei legtura N 3+ C C ionic dintre Fe i O2 face ca aceast reacie s fie ireversibil. Aceast reacie redox implic formarea unui intermediar, compus dintr-o molecul de oxigen i dou molecule de hem. Pentru ca molecula de hem s funcioneze ca transportor de O2 trebuie ca reacia redox s fie hem s fie separate una de alta. n mioglobin i n protomerii hemoglobinei, hemul este nvelit de catenele proteice ale acestora ceea ca asigur separarea moleculelor de hem. La aceste proteine oxigenul molecular se asociaz cu hemul n raportul molar 1:1, fr transfer de electroni, ferul rmnnd n starea de oxidare inferioar iar oxigenul n stare molecular. Structurile tridimensionale ale mioglobinei i hemoglobinei au fost determinate la sfritul anilor 50, prin difracie de raze X. Din punct de vedere structural se pot face urmtoarele precizri: H2C HC C H2C COO
-

CH3 C HC C N Fe N

CH C C CH
2+

C C N C C

CH3 CH CH2

C CH C

CH2 CH3 CH2

-

COO mpiedicat adic este necesar ca moleculele de Fig. 5.1. Structura moleculei de HEM

Catena polipeptidic a mioglobinei (apomioglobina, 153 resturi de aminoacizi) are o structur 57 globular compact n interiorul ei ncap numai 4 molecule de ap. Cu excepia a doi radicali de histidin, orientai pe direcia axei principale a hemului, toi radicalii din interiorul moleculei de mioglobin sunt nepolari determinnd o structur globular. n mediul hidrofob astfel creat este amplasat hemul. La suprafaa moleculei de mioglobin predomin radicalii polari datorit crora proteina este solubil n ap. Molecula plan de hem se gsete ntr-o fisur a ghemului proteic de care este asociat prin legturi necovalente. Ionul Fe 2+ formeaz o legtur coordinativ cu un rest imidazolic de histidin. Legtura cu histidina distal se face prin intermediul unei molecule de oxigen n oximioglobin. Prin urmare, situsul de oxigenare este o pung hidrofob. Oxigenarea deoximioglobinei se produce prin simpla inserie n pung a O2, de unde poate fi eliberat cu uurin. Ptrunderea n pung a unei molecule de ap produce oxidarea: Fe2+ Fe3+ i pierderea consecutiv a capacitii de oxigenare a mioglobinei. Mediul hidrofob al hemului mpiedic ptrunderea apei. Hemoglobina adultului uman este format din 4 catene polipeptidice protomere: dou de tip (141 resturi) i dou de tip (146 resturi). Ele sunt asociate prin legturi necovalente ntr-o structur cuaternar cu o geometrie aproximativ tetraedric. Foarte diferite prin secvena de

Fig. 5.2. Structura teriar i cuaternar a mioglobinei i a hemoglobinei aminoacizi, catenele i au structurile teriare aproape identice. Studierea unui set de 20 specii de hemoglobine a artat c sunt cteva poziii n secvenele protomerilor, poziii cu rol

important pentru funciunea de transport a O2, care sunt ocupate de aceleai resturi de 58 aminoacizi indiferent de specie. Structura teriar a mioglobinei este foarte asemntoare cu structurile teriare ale protomerilor hemoglobinei. Aceiai similitudine s-a constatat n ce privete locul ocupat de hem i natura liganzilor care coordineaz ionul Fe 2+ al acestuia. Aceast structur teriar este comun mioglobinelor i hemoglobinelor tuturor vertebratelor. Nu toate hem-proteinele au aceiai structur teriar. Citocromul c este o hem-protein a crei structur teriar este total diferit de a mioglobinei i hemoglobinei. Astfel citocromul c nu transport O2, ci electroni. Rezult c hemul nu determin n mod unic structura apoproteinei la care este asociat. n schimb structura apoproteinei este hotrtoare pentru rolul jucat de hem n funciunea proteinei.

5.3 Oxigenarea mioglobinei i hemoglobinei.

Reacia reversibil de asociere a O2 la mioglobin produce oximioglobina. Mb + O2 H MbO2 ; Constanta de echilibru a oxigenrii este: K=

[ MbO 2 ] [ Mb] [ O 2 ]

Fracia de oxigenare a mioglobinei este: Y =

[ MbO 2 ] [ MbO 2 ] [ Mb]

Substituind prima ecuaie n a

doua obinem: Y =

K [ O2 ] ntruct oxigenul K [ O2 ] + 1

molecular este n stare gazoas este convenabil s exprimm concentraia sa n termenii presiunii pariale, pO2. Obinem: Y =

K pO 2 pO 2 = K pO 2 + 1 p 50 + pO 2

p50 este presiunea

parial a oxigenului la care jumtate din moleculele de mioglobin sunt oxigenate. Alura curbei de oxigenare a mioglobinei este consecina faptului c procesul descris de aceast curb este unul de echilibru chimic care respect legea aciunii maselor. Fig. 5.3. Curbele de disociere ale oximioglobinei, a oxihemoglobinei i a oximethemoglobinei

59 Prin difracie de raze X s-a descoperit c, la oxigenare, tetramerul hemoglobinei sufer o modificare a structurii cuaternare. Dimerii 1-1 i 2-2, au o structur relativ rigid, n schimb se modific poziia reciproc a lor. Ei se rotesc cu 15 grade unul fa de altul, n jurul unei axe comune, revenind n poziia iniial prin deoxigenare. Astfel, cromo-proteina poate trece dintr-o stare nerotit (tensionat, T) a deoxihemoglobinei n cealalt rotit (relaxat, R) a oxihemoglobinei. n stare relaxat hemoglobina are fa de oxigen o afinitate de 5.000 de ori mai mare dect n stare tensionat. La nivelul atomic fenomenul poate fi descris astfel: oxigenarea unui protomer (protomerii nu pot ncepe oxigenarea deoarece ei au punga de inserie a oxigenului blocat cu un rest de valin) provoac deplasarea ionului Fe2+ dintr-o poziie exterioar planului nucleului tetrapirolic al hemului ntr-o poziie coplanar. De fapt, ionul Fe2+ ajunge ntr-o poziie n care poate forma o legtur coordinativ cu cel de-al 6-lea ligand care, n acest caz este O2. Aceast deplasare o sufer i restul His F8 care coordineaz direct ionul feros. Odat cu acest rest se deplaseaz ntregul segment F8 al protomerului oxigenat. Prin aceast micare este forat ruperea unor legturi care stabilizeaz structura tensionat a hemoglobinei, producndu-se trecerea acesteia n starea relaxat. n aceast stare, pungile de oxigenare ale protomerilor sunt deblocate, oxigenarea putnd continua pn la saturaie (Hb4O2). Acesta este mecanismul submolecular al

fenomenului numit cooperativitate pozitiv constat la oxigenarea hemoglobinei. Cu alte 60 cuvinte, dup oxigenare, un protomer coopereaz cu protomerii neoxigenai n sensul c uureaz oxigenarea acestora (mrete afinitatea pentru O2) i invers. Mioglobina fiind monomer, nu se pune problema cooperativitii. n ce privete hemoglobina, datorit cooperativitii dintre protomeri, oxigenarea ei nu se supune legii aciunii maselor. Curba cu aceast alur este o dovad a existenei fenomenului de cooperativitate i, prin urmare, o dovad c proteina respectiv este un oligomer. Presiunea parial medie a O 2 n plmni este 100 torr (mm Hg), n sngele venos 40 torr iar n capilare musculaturii este 20 torr. Prin trecerea mioglobinei de la presiunea mai mare la cea mai mic ea cedeaz doar 12 % din ncrctura maxim de oxigen. Din acest motiv mioglobina nu poate fi un transportor eficient de O2 al sistemului circulator sanguin. Totui ea este un rezervor eficient pentru oxigenul tisular. Oxihemoglobina este capabil s furnizeze esuturilor periferice 35-45 % din oxigenul pe care este capabil s-1 asocieze. Fenomenul n care o modificare a unui centru de reacie, determinat de aciunea unui efector, cum ar fi de pild deplasarea Fe 2+ sub aciunea O2 care oxigeneaz un protomer al hemoglobinei, determin o modificare a structurii teriare i / sau cuaternare a proteinei prin care sunt influenate proprietile altor centre, se numete alosterism. Hemoglobina este o protein alosteric. Noiunea de alosterism depete cadrul noiunii de cooperativitate. Aceasta din urm se refer la interaciuni ntre centri identici. Acest fel de interaciune se numete homotrop. Ea este pozitiv deoarece creterea concentraiei efectorului mrete afinitatea proteinei pentru ligand (O2). Interaciunile alosterice includ i interaciuni heterotrope la care efectorul difer de ligand. Astfel ionii H + i Cl- i moleculele de CO2 i de 2,3-difosfoglicerat (2,3-DPG) sunt efectori negativi pentru oxigenarea hemoglobinei. O urmare a faptului c H+ i CO2 influeneaz oxigenarea hemoglobinei este efectul Bohr (Christian Bohr, 1904). 5.3.1 Efectul Bohr. Curba de disociere a O2 pentru oximioglobin este afectat n mic msur de variaia de pH sau de pCO2. n cazul hemoglobinei se constat c aceti factori au efecte semnificative. n domeniul

fiziologic, scderea pH-ului sau creterea pCO 2 (chiar i la pH constant) deplaseaz spre 61 dreapta curba de disociere a oxihemoglobinei. Prin oxigenare hemoglobina sufer o modificare conformaional prin care devine un acid mai tare. Acest lucru poate fi scris astfel: Hb(O2)nHx + O2 Hb(O2)n+1 +xH+ unde n = 0,1 ,2 sau 3, iar x = 0,6 n condiii fiziologice. Ecuaia chimic arat c nu exist o relaie stoichiometric ntre O 2 i H+. O molecul de oxigen deplaseaz 0,6 protoni de pe molecula de hemoglobin i viceversa. Reacia de mai sus este expresia chimic a efectului Bohr. Conform ei, putem formula astfel acest efect: Creterea pH-ului, adic neutralizarea protonilor, stimuleaz legarea O2 la hemoglobin i, invers, scderea pH-ului, adic acidificarea mediului, favorizeaz eliberarea O2 de ctre oxihemoglobin. La nivelul capilarelor esutului muscular echilibrul reaciei este deplasat spre stnga. Astfel, este atenuat acidificarea pe care acest esut o sufer datorit producerii pe cale metabolic a acidului lactic. Aproximativ 80 % din CO 2 rezultat reacioneaz cu apa, sub aciunea catalitic a anhidrazei carbonice, enzim eritrocitar foarte activ, formnd acid carbonic care disociaz n ioni bicarbonat i protoni. Bicarbonatul intr n rezerva alcalin a sngelui iar protonii sunt captai conform reaciei de mai sus. La nivelul capilarelor alveolelor pulmonare reacia este deplasat spre dreapta. Protonii eliberai reacioneaz cu ionii bicarbonat pentru a reface acidul carbonic care, la rndul su sub aciunea aceleiai enzime, elibereaz CO2 eliminat apoi prin expiraie. Aproximativ 15 % din CO2 transportat de snge este legat direct de hemoglobina ca urmare a unei reacii cu formare de carbonai. Eliberarea CO2 din acetia, n plmni, face din hemoglobin un dublu transportor de gaze: de O2 de la plmni la esuturile consumatoare i de CO 2, n sens invers. 5.3.2 2,3-difosfoglicerat (2,3-DPG), efector alosteric al hemoglobinei. 2,3-DPG este prezent n eritrocite n concentraie relativ mare, spre deosebire de celelalte celule n care se

Fig. 5.4. Localizarea 2,3 DPG n centrul de simetrie al tetramerului hemoglobinei

gsete numai n urme. 2,3-DPG se asociaz specific la deoxihemoglobin n raportul 62 stoichiometric 1:1. Aceast stoichiometrie se explic prin faptul c 2,3-DPG se leag la un centru de pe axa de simetrie a tetramerului. El determin un efect alosteric major. Tetramerul are o cavitate central n care 2,3-DPG se potrivete numai cnd hemoglobina este n stare tensionat. 2,3-DPG conine 4 sarcini negative prin care formeaz legturi ionice cu protomerii beta ai deoxihemoglobinei. Prezena lui este esenial pentru fiziologia respiraiei, prin prezena sa, 2,3-DPG, reduce de 26 ori afinitatea pentru O2 a hemoglobinei. n absena 2,3-DPG, hemoglobina ar avea o afinitate apropiat de a mioglobinei. Prin oxigenarea hemoglobinei, cavitatea axial i reduce dimensiunile iar 2,3-DPG este eliminat din ea. n aceast influenare reciproc const interaciunea alosteric dintre centri O 2 i 2,3-DPG. ntruct cei doi efectori au structuri chimice diferite, vorbim de interaciune alosteric heterotrop. Atunci cnd o persoan, care triete la nivelul mrii, urc la o nlime de 2-3000 metri, n decurs de cteva ore concentraia 2,3-DPG din eritrocitele sale crete semnificativ. Reducerea afinitii pentru O2 repoziioneaz curba de disociere a oxihemoglobinei conservnd eficiena cu care aceasta oxigeneaz esuturile, n ciuda scderii pO2. Creteri similare ale concentraiei 2,3-DPG apar la diferite anemii sau insuficiena cardiopulmonar. Exist diferene de afinitate dintre hemoglobina adultului i hemoglobina fetal (HbF). Aceasta din urm leag mai slab 2,3-DPG i de aceea afinitatea ei pentru O 2 este mai mare dect a HbA. Diferen asigur oxigenarea sngelui fetal de ctre sngele matern. Principalii efectori ai hemoglobinei care moduleaz alosteric de aciunea ei sunt 2,3DPG, H+, CO2, i Cl-. Prezena lor n snge face ca afinitatea hemoglobinei pentru O 2 s se ncadreze ntre limitele corespunztoare celui mai eficient transfer al oxigenului de la plmni la esuturile consumatoare.

5.4 Derivaii hemoglobinei.

Alturi de cel mai studiat derivat al Hb, oxi-Hb, mai exist civa care prezint importan fiziologic sau toxicologic cum ar fi carbaminohemoglobina (carbamino Hb), methemoglobina (met-Hb) i carboxihemoglobina (carboxi-Hb).

5.4.1

Oxihemoglobina.

63

Aceast denumire se refer la oricare din derivaii hemoglobinei cu O 2: HbO2, Hb(O2)2, Hb(O2)3 i Hb(O2)4. Ultima formul reprezint molecula de hemoglobin saturat cu oxigen. Hb(O2)n + O2 K Hb (O2)n+1
n

n= 0, 1, 2, 3.

Valorile Kn ale constantelor consecutive de echilibru ale reaciilor de oxigenare sunt urmtoarele: K1 = 0,1K0; K2 = 0,67K1; K3 = 3K2. Aceste valori evideniaz fenomenul de cooperativitate pozitiv dintre protomerii Hb. Deoxi-Hb i oxi-Hb au spectre de absorbie optic diferite. Aceast proprietate st la baza metodelor spectrofotometrice de dozare a celor dou forme. Toate hemproteinele prezint o band de absorbie la 400 nm numit band Soret. 5.4.2 Carbaminohemoglobina. 15 % din cantitatea total de CO2 din snge se combin cu Hb reacionnd cu gruprile amino ale resturilor de valin, aminoacidul N-terminal al celor 4 protomeri ai HbA. R-NH2 + CO2 R-NH-COOH Cantitatea de carbamino-Hb nu depinde de pCO2 cnd aceasta este mai mare de 15 mm Hg (sngele fiziologic are n medie pCO2 = 40 mm Hg). n schimb ea este influenat de gradul de oxigenare a hemoglobinei. Oxigenul deplaseaz CO 2 de pe Hb, aceast proprietate numindu-se efect Haldane. n plasma sanguin exist mai multe proteine care formeaz carbamai cu CO 2 dar, numai Hb are capacitatea de transport a acestui gaz de la esuturile productoare la plmni. Capacitatea de tamponare a unui sistem este maxim la pH = pK'. Pentru sistemul tampon HCO3 /CO2, pK' = 6,1. La pH = 6,1, [HCO 3-] = [CO2]. Drept component acid a acestui sistem tampon este CO2 deoarece 99,9 % din H2CO3 se disociaz conform reaciei: H2CO3 HCO3- +H+ La pH-ul fiziologic [HCO3- ] = 20[CO2] adic la pH = 7,4 doar 5 % din cantitatea total de CO2 este dizolvat fizic, restul de 80 % constituind rezerva alcalin. Modificarea raportului [HCO3-] / [CO2] corespunde ctorva situaii patologice. Adulii isterici sau copii cu meningit pot prezenta hiperventilaie. n acest caz [CO 2] este sczut i pH-ul sngelui este crescut, ceea ce numim alcaloz respiratorie. Hipoventilaia pulmonar ntlnit n pneumonie, emfizem pulmonar, edem pulmonar sau n deprimarea centrilor nervoi ai

respiraiei prin administrarea de supradoz de stupefiante, determin creterea [CO 2] i 64 scderea pH-ului sanguin. Acesta este cazul acidozei respiratorii. Mai frecvente sunt situaiile n care variaia pH-ului sanguin se datoreaz n primul rnd modificrii [HCO3]. 5.4.3 Carboxihemoglobina. Afinitatea Hb pentru CO este de 200 de ori mai mare dect pentru O 2. Prin inhalarea unor cantiti de CO, puterea oxiforic a Hb (volumul de O 2 legat de Hb din 100 ml snge) scade datorit formrii carboxi-Hb. Totui, n intoxicaia cu CO acesta poate fi ndeprtat de pe Hb prin creterea pO2 n aerul inspirat de cel intoxicat. La brbai puterea oxiforic este 1823 ml O2 % iar la femei 17-20 ml O2 %. 5.4.4 Methemoglobina. Dac Fe2+ este oxidat la Fe3+ , hemul se numete hemin iar met-Hb rezultat nu se mai poate oxigena. Oxidarea Hb la met-Hb poate fi determinat de mai muli ageni oxidani cum ar fi fericianurile, peroxizii, chinonele. Prin tratarea oxi-Hb cu fericianur de potasiu, O2 este eliberat n totalitate. n eritrocitul normal met-Hb reprezint cca 1 % din cantitatea total de Hb. Acest nivel redus este meninut datorit existenei n eritrocit a enzimei methemoglobin reductaza care catalizeaz reducerea Fe3+ + e Fe2+ i deci conversia metHb la Hb. 5.4.5 Glicohemoglobina (HbA1c). Gruprile NH2 ale capetelor N-terminale ale protomerilor reacioneaz neenzimatic cu glucoza liber din snge formnd baze Schiff. Nivelul HbA1c depinde de nivelul glucozei i durata meninerii la valori ridicate a acestuia. Determinarea HbA 1C este util n urmrirea strii diabeticilor.

6 GLUCIDELE
6.1 Aspecte generale

65

Glucidele sunt componente eseniale ale tuturor organismelor vii fcnd parte att din esuturile plantelor ct i esuturile animalelor. Cea mai simpl definire a acestora este polihidroxialdehide, polihidroxicetone i derivaii acestora. O alt denumire a glucidelor, zaharide deriv de la grecescul sakcharon care se traduce zahr. Denumirile de carbohidrai sau hidrai de carbon sunt conforme formulelor moleculare (CH 2O)n, n3, ceea ce a sugerat iniial, c este vorba de hidrai ai carbonului. Este uzual folosirea tuturor denumirilor menionate. Monozaharidele, au laul de atomi de carbon neramificat i fiecare atom de carbon, cu excepia unuia, conine o grupare hidroxil, atomul de carbon care nu are grupare hidroxil conine un oxigen carbonilic, cuprins ntr-o legtur aldehidic sau cetonic. Ele se mpart n trioze, tetroze, pentoze, hexoze, heptoze sau octoze n funcie de numrul de atomi de carbon. Hexozele cu stereoizomerie D, ca de exemplu D-glucoza, sunt cele mai rspndite monozaharide. Glucidele se mai pot grupa, n funcie de natura chimic a gruprii carbonil din structura aciclic a lor, n aldoze i cetoze. n cazul hexozelor exist aldohexoze i cetohexoze. Oligozaharidele sunt catene liniare sau ramificate format din 2-10 uniti glucidice identice sau diferite pe care le pot elibera prin hidroliz. Toate mono- i dizaharidele conin n denumire sufixul oz. Oligozaharidele se gsesc i n compoziia glicoproteinelor i glicolipidelor. Un exemplu de oligozaharide l constituie antigenele de grup sanguin. Dintre dizaharidele cel mai des ntlnite sunt zaharoza, lactoza i maltoza. Polizaharidele elibereaz prin hidroliz mai mult de 10 monozaharide. Ele sunt catene liniare sau ramificate cum ar fi spre exemplu dextranul i glicogenul. n funcie de numrul atomilor de carbon ai subunitilor ele se mpart n pentozani sau hexozani Polizaharidele se mai pot clasifica n homopolizaharide care conin doar un singur tip de monomer i heteropolizaharide care conin dou sau mai multe subuniti. Amidonul de exemplu conine doar uniti de Dglucoz este deci un homopolizaharid. Acidul hialuronic conine alternativ resturi de acid Dglucuronic i N-acetil-D-glucozamin, fiind n acest fel un heteropolizaharid.

Polizaharidele joac un important rol structural n toate organismele. De pild celuloza este 66 principalul material structural al plantelor. Un alt rol important este cel de rezervor nutritiv pe care l ndeplinesc glicogenul la animale i amidonul la plante.

6.2 Monozaharidele
6.2.1 Stereoizomerie Examinarea structurii aciclice a glucozei relev faptul c molecula ei conine 4 atomi de carbon asimetrici, atomii C(2)-C(5). Calculul numrului de stereoizomeri indic 2 4=16 deoarece n cazul aldozelor cu n atomi de carbon numrul lor este 2n-2.
CHO HCOH

Fig. 6.1. Stereoizomerii D-aldozelor cu CHO

CHO C H

CH 2OH GLICERALDEHIDA CHO HCOH HCOH

denumirea lor a de la glicerHO C H

OH

D-Gliceraldehida L-Gliceraldehida
HOCH HCOH CH 2OH TREOZA CHO HOCH HCOH HCOH CH 2OH ARABINOZA CHO HCOH HOCH HCOH CH 2OH XILOZA CHO HOCH HCOH HOCH HCOH CH 2OH IDOZA CHO HOCH HOCH HCOH CH 2OH LIXOZA CHO HCOH HOCH HOCH HCOH CHO HOCH HOCH HOCH HCOH

aldehid la aldohexoze CH2OH CH2OH CHO

Emil a aceste

Fischer elucidat
CHO HCOH HCOH HCOH CH 2OH RIBOZA CHO HCOH HCOH HCOH HCOH CH 2OH ALOZA

CH 2OH ERITROZA

CHO HOCH HCOH HCOH HCOH CH 2OH ALTROZA

CHO HCOH HOCH HCOH HCOH CH 2OH GLUCOZA

CHO HOCH HOCH HCOH HCOH CH 2OH MANOZA

CHO HCOH HCOH HOCH HCOH CH 2OH GULOZA

CH 2OH CH 2OH TALOZA GALACTOZA

conformaii n 1896. Centrul chiral cel mai ndeprtat de gruparea carbonil al D-glucidelor are aceiai configuraie absolut cu configuraia D-glicerinaldehidei. n acord cu convenia Fischer, un L glucid este imaginea n oglind a D-glucidului corespunztor.

CH 2OH

Glucidele care difer numai prin conformaia unui centru chiral se numesc epimeri. Astfel, D-glucoza i
D-manoza D-glucoza

67

CH 2OH DIHIDROXIACETONA CH 2OH C O

sunt epimeri n raport cu atomul C(2) iar i D- galactoza sunt epimeri n raport cu

atomul C(4). D-Manoza i D-galactoza nu sunt epimeri unul fa de altul pentru c difer prin configuraia a doi atomi, C(2) i C(4).
D-glucoza

HCOH CH 2OH ERITRULOZA CH 2OH C O CH 2OH C HOCH HCOH CH 2OH XILULOZA CH 2OH C O CH 2OH C HOCH HOCH HCOH O O

este singura aldoz care apare n mod

obinuit ca monozaharid n natur. D-Riboza, Dmanoza i D-galactoza sunt importante componente ale unui mare numr de biomolecule ntre care menionm ARN i glicoproteinele. L-glucidele apar mai rar n natur. Datorit poziiei gruprii carbonil, cetozele au un numr de centre chirale mai mic cu 1 dect aldozele cu acelai numr de atomi de carbon.
D-Fructoza

HCOH HCOH CH 2OH RIBULOZA CH 2OH C O CH 2OH C HOCH HCOH HCOH O

HCOH HCOH HCOH CH 2OH PSICOZA

HCOH HOCH HCOH

aciclic are numai 3 centre chirale.

Formula general de calcul al numrului de stereoizomeri pentru cetoze este N=2n-3. Cele mai obinuite cetoze sunt cele care au gruparea carbonil n poziia C(2). Unele din cetoze sunt denumite prin inseria particulei ul naintea sufixului oz din Xiloz.
D-Fructoza, D-ribuloza

CH 2OH CH 2OH CH 2OH FRUCTOZA SORBOZA TAGATOZA

Fig. 6.2. Stereoizomerii D-cetozelor cu denumirea lor a de la dihidroxiaceton la cetohexoze

numele aldozei corespunztoare. Astfel D-Xiluloza este cetoza corespunztoare aldozei Di D-xiluloza suntcele mai importante cetoze. Denumirea fructoz

provine de la latinescul fructus care nseamn fruct, tiut fiind c fructele sunt surse bogate n fructoz. Apartenena la familia D sau L nu indic sensul de rotaie a planului luminii polarizate de ctre glucid. Astfel activitatea optic specific a D-glucozei este +52,7 iar cea a
D-fructozei

este -92,4. De aceea este necesar ca pe lng simbolurile D i L s se noteze i

sensul de rotaie, (+) pentru dextrogir i (-) pentru levogir.

68

6.2.2

Forme ciclice ale monozaharidelor

Alcoolii pot reaciona cu gruparea carbonil din aldehide i cetone pentru a forma semiacetali respectiv semicetali. Similar, reacia poate avea loc intramolecular rezultnd structuri ciclice. Un glucid cu 6 atomi de carbon poate forma un heterociclu numit piranozic de la compusul piran, al crui derivat este. Forme heterociclice alctuite din patru atomi de carbon i un atom de oxigen, derivate de la compusul numit furan, poart numele de cicluri furanozice. Formele ciclice stabile ale glucozei i fructozei sunt de glucopiranoz respectiv fructofuranoz. n general hexozele i pentozele pot adopta forme piranozice i furanozice, compoziia de echilibru
H C H HO H H C C C C O HCOH OH H OH OH HCOH HOCH O HCOH HC CH 2OH DGlucopiranoza H CH 2OH O H H OH H OH HO H OH CH CH CH2 O CH HC PIRAN FURAN O CH CH O CH HC O

CH 2OH D-Glucoza

depinznd de tipul glucidului. n soluie apoas riboza este n proporie de 25% furanozic i 75% piranozic. Prin ciclizare atomul de carbon carbonilic devine asimetric ceea ce poate conduce la doi izomeri denumii anomeri, i . La anomerul , gruparea hidroxil al noului centru chiral format prin ciclizare se situeaz pe partea opus, n raport cu inelul glucidic, fa de gruparea CH2OH a atomului
HO H H CH 2OH C C C C O H OH OH HOH 2C COH O HOH 2C H O H HO OH H CH 2OH OH

HOCH HCOH HC

CH 2OH D- Fructoza

CH 2OH DFructofuranoza

5 a heterociclului. Cellalt anomer , are cei doi substitueni de aceiai parte a inelului glucidic. Cei doi anomeri ai D-glucopiranozei, ca orice pereche de diastereoizomeri, au proprieti fizice i chimice diferite. De pild, rotaiile optice specifice []D20 pentru -D-G i -D-G sunt +112,2 respectiv +18,7. Atunci cnd aceti anomeri sunt dizolvai n ap, rotaia optic specific se modific lent pn atinge valoarea de echilibru de +52,7. Acest fenomen se numete mutarotaie. Proieciile Haworth sugereaz c
Forma baie H HO HO H CH 2OH O H H OH H

ciclurile piranozice i furanozice sunt plane, ceea ce nu este exact. ntruct atomii inelelor sunt n stare de
Forma scaun

OH Conformatia scaun ecuatorial a glucopiranozei

hidridizare sp3 unghiurile de valen fac ca inelul piranozic, s adopte dou conformaii, 69 de baie i de scaun. Stabilitile relative ale acestor conformaii depind de interaciunile stereochimice dintre substituenii inelului. La conformerul baie substituenii atomilor de carbon din poziiile "prova" i "pupa" se stnjenesc steric. Aceasta face ca, forma baie s fie mai puin stabil dect forma scaun. Substituenii inelului n conformaie scaun se pot aranja n dou moduri: axial i ecuatorial. ntruct aranjamentul axial al -D-glucopiranozei determin o stnjenire steric mai pronunat, modul predominant este cel ecuatorial. 6.2.3 Derivaii monozaharidelor 6.2.3.1 Condensarea cu alcooli n cataliz acid gruparea hidroxil anomeric se condenseaz cu alcoolii producnd - sau glicozide. Legtura ce unete carbonul anomeric cu oxigenul acetalic se numete legtur glicozidic Polizaharidele sunt constituite din
CH 2OH O H H OH H OH + HO HO H OH -Monozaharid H H CH 2OH O H H OH H HO O H OH -Glicozid

R + H2O

monozaharide unite ntre ele prin legturi glicozidice. n mediu neutru sau bazic i n absena glicozidazelor (enzime care hidrolizeaz legturile glicozidice), legtura glicozidic este stabil. Ea nu sufer mutarotaia care se ntlnete la monozaharide. 6.2.3.2 Oxidarea i reducerea monozaharidelor Prin oxidare blnd gruparea carbonilic a unei aldoze se transform n grupare carboxilic rezultnd un acid aldonic ca de exemplu acidul gluconic. Carbohidraii care conin carbon anomeric neangajat n legturi glicozidice se numesc glucide reductoare datorit uurinei cu care gruparea carbonil reduce agenii oxidani. Prezena acestor glucide poate fi pus n evidena cu reactivii Fehling, Tollens, Benedict, Barfoed. Oxidarea gruprii de alcool primar a unei aldoze produce un acid uronic. Exemple sunt acizii glucuronic
H C H HO H H C C C C O OH H OH OH H C H HO HO H C C C C O OH H H OH

COOH COOH Acid glucuronic Acid galacturonic

sau galacturonic. Acizii uronici pot adopta structuri ciclice piranozice i furanozice. Denumirile acizilor aldonici i uronici se formeaz prin adugarea sufixelor onic respectiv uronic la rdcina numelui aldozei.

70

Att acizii aldonici ct i cei uronici au o

O C HO HO H HO C C C C H O -2H

O O O H HO

C C C C C H O O H2O O H HO

COOH C C C C OH H

puternic tendin de a se esterifica intramolecular pentru a forma lactone. Acidul ascorbic (vitamina C) este o -lacton sintetizat n plante i animale, cu excepia

CH 2OH CH 2OH Acidul L-ascorbic Acidul dehidroL-ascorbic

CH 2OH Acidul dicetoL-gulonic

primatelor. Deficitul prelungit n dieta uman a acestei vitamine produce scorbut. Boala apare n general cnd alimentele nu sunt proaspete, condiii n care acidul ascorbic este oxidat reversibil la acid dehidroascorbic care, apoi, este hidrolizat ireversibil pn la acid dicetogulonic fr activitate vitaminic. Aldozele i cetozele pot fi reduse enzimatic, dar i chimic n condiii blnde, rezultnd alcooli polihidroxilici aciclici numii alditoli al cror nume se formeaz prin adugarea sufixului itol la rdcina denumirii aldozei. Exemple sunt ribitolul, component a coenzimelor i xilitolul care este un ndulcitor folosit n guma de mestecat i bomboanele fr zahr. 6.2.3.3 Ali derivai ai glucidelor Dac o grupare hidroxil este nlocuit cu un atom de hidrogen, monozaharidul este n form deoxi. Exemple sunt D-deoxiriboza, component a ADN-ului, L-ramnoza (6-deoxi-L-manoza) i L-fucoza (6deoxi-L-galactoza). n aminoglucide una sau mai multe grupri hidroxil sunt nlocuite cu grupri amino de cele mai multe ori se gsesc n stare acetilat.
D-Glucozamina,
H H H CH 2OH C C C OH OH OH H HO H CH 2OH C C C OH H OH

CH 2OH D-Ribitol

CH 2OH D-Xilitol

HOH 2C H H

O H

OH H

OH H D2Deoxiriboza H HO O OH CH 3 H H H H OH OH LRamnoza H O OH CH 3OH H H HO OH H LFucoza H

N-acetilglucozamina (NAG), D-galactozamina, N-

acetilgalactozamina sunt componente ale heteropolizaharidelor. Acidul N-acetilmuramic (NAM) este N-acetilglucozamin eterificat cu acid DCH 2OH O O
HO

COOH Acid Nacetilmuramic C CH 2 O CH 3 C H NH HO H H C C C C C OH H H OH OH O

CH 2OH O OH NH 2 DGlucozamina
HO

CH 2OH O OH O NH C CH 3 Nacetilglucozamina
HO

OH

OH

H3C

OH O NH C CH 3 C COOH H

CH 2OH Acidul N-acetilneuraminic

lactic i este un component important al heteropolizaharidelor din structura peretelui celulelor 71 bacteriene. Acidul N-acetilneuraminic (NANA) numit i acid sialic este un derivat al Nacetilmanozaminei cu radicalul acidului piruvic, important constituent al glicoproteinelor i glicolipidelor.

6.3 Dizaharide i polizaharide

Zaharoza este cel mai rspndit dizaharid. Structura ei a fost stabilit prin analiz chimic folosind ageni de metilare, confirmat prin analiza difractometric de raze X. Denumirea ntreag a zaharozei este O--D-glucopiranozilH HO CH 2OH O H H OH H H OH Zaharoza HOH 2C O O H H HO CH 2OH OH H

(12)--D-fructofuranoz unde (12) indic faptul c legtura glicozidic leag C(1) al glucozei de C(2) a) fructozei. Avnd n vedere c legtura glicozidic se realizeaz ntre atomii de carbon anomerici, zaharoza este un glucid nereductor. Ca urmare a hidrolizei zaharozei se formeaz D-glucoz i D-fructoz, amestec, care inverseaz sensul de rotaie optic a soluiei de la dextro la levo. De aceea zaharoza hidrolizat se mai numete zahr invertit, enzima care catalizeaz hidroliza este -D-glicozidaz numit i invertafaz. Lactoza (O--D-galactopiranozil-(14)D-glucopira-noz) este principalul glucid al laptelui de mamifere. ntruct acest dizaharid conine un atom de carbon anomeric liber (al glucozei), el este un glucid reductor.
HO H CH 2OH H OH H H O H O CH 2OH O OH H OH H H H OH

H OH

Lactoza

Copii sntoi au enzima intestinal -D-galactozidaz sau lactaz care hidrolizeaz lactoza pentru ca monozaharidele componente s poat fi absorbite n tractul intestinal. Copii a cror genom a suferit mutaii, avnd drept consecin sinteza insuficient a enzimei, sau absena acesteia duce la intolerana fa de lactoz. Semnele clinice ale intoleranei se manifest prin dureri abdominale, diaree cronic, flatulen. Acumularea n intestin a lactozei, compus osmotic activ, crete presiunea osmotic i favorizeaz intrarea apei din spaiile interstiiale, n lumenul intestinal ducnd la pierderi digestive de ap. De asemenea procesele fermentative declanate de flora microbian, genereaz produi care irit mucoasa intestinal.

72 Maltoza

(O--D-glucopiranozil-(14)D-glucopiranoz)

este

CH 2OH H HO O H H OH H H CH 2OH H HO H OH H H O H O H OH H O Maltoza

CH 2OH O H H OH H OH H OH

produsul de hidroliz enzimatic, sub aciunea -amilazei, a amidonului. Izomaltoza este izomerul (16) al maltozei. Celobioza este izomerul (14) al maltozei, fiind dizaharidul repetitiv din structura celulozei. Vertebratele nu posed n esuturi enzime capabile s scindeze hidrolitic legturile (14) ale celulozei,

CH 2

O OH H OH H H HO H OH OH Izomaltoza

totui, tractul digestiv al ierbivorelor conine microorganisme simbiotice care secret mai multe enzime numite generic celulaz care realizeaz aceast scindare, rezultnd celobiz care este hidrolizat mei departe la glucoz. Termitele (Isoptera sp.) sunt capabile s sintetizeze de asemenea celulaz. Degradarea hidrolitic a celulozei este un proces lent i de aceea digestia plantelor fibroase de ctre ierbivore este o operaie de durat care are loc n stomacul multicompartimentat (mai precis n rumen) al acestora necesitnd un peristaltism special, realizat n timpul rumegrii. Amidonul este un amestec de glucani sintetizai de plante ca principal rezerv polizaharidic. El este depozitat n citoplasma celulelor vegetale sub form de microgranule insolubile formate din -amiloz i amilopectin. -Amiloza este un polizaharid linear format din mii de resturi de glucoz unite prin legturi (14) glicozidice. n ciuda faptului c -amiloza este un izomer al celulozei, proprietile lor sunt foarte diferite deoarece au configuraii deosebite. Spre deosebire de celuloz, care are o conformaie filiform, -amiloza adopt o configuraie agregat neregulat, elicoidal. Amilopectina const din resturi de glucoz legate (14) i (16) glicozidic, ultimul tip de legtur realiznd ramificaii. Stocarea glucozei sub form de amidon n citosolul celulelor plantelor reduce mult presiunea osmotic care ar fi dezvoltat dac glucoza ar fi stocat n form monomeric. Glicogenul este un homopolizaharid cu structura asemntoare amilopectinei cu diferena c prezint un grad superior de ramificare. Glicogenul este polizaharidul de rezerv al celulei animale, al microorganismelor i ciupercilor. Dextranul este numele generic dat polizaharidelor din structura peretelui celular al bacteriilor. Structura dextranului este realizat prin polimerizarea moleculelor de glucoz legate strict

CH 2OH H HO O H H OH H H OH Zaharoza HOH 2C O O H HO OH H H dextransucraza H HO

CH 2 O H H OH H H OH n HOH 2C + H OH H Fructoza O H HO H CH 2OH

73

CH 2OH

Dextran

(16). Hidroliza dextranului se poate realiza cu ajutorul dextranazei (enzim excretat de fungi), rezultnd molecule de izomaltoz. Placa dentar conine un amestec de polizaharide care include dextran, levan i glucani mai compleci n care la lanul principal (16) se prind ramificaii, prin legturi (12) i (13). Dextranul se sintetizeaz din zaharoz n prezena enzimei dextransucraz, care hidrolizeaz legtura glicozidic dintre glucoz i fructoz. Glucoza este polimerizat sub form de dextran iar fructoza este disponibil pentru metabolismul bacterian. Dextransucraz formeaz numai legturi (16). Enzimele implicate n formarea legturilor (12) i (13), nu au fost nc izolate. Levananul este numele generic dat polifructozelor. Prima oar a fost izolat ca material de rezerv la florile din familia DALIA, numit inulin. Inulina este un levan format din aproximativ 40 de molecule de fructoz, legate 12. Levanii se mai gsesc de asemenea i n polizaharidele extracelulare din placa dentar, unde sunt sintetizai dup un mecanism asemntor cu cel ntlnit la dextrani. Zaharoza este hidrolizat de o enzim bacterian numit levansucraz, fructoza rezultat este polimerizat de aceeai enzim rezultnd levani, iar glucoza rmas este disponibil pentru metabolismul bacterian. Polizaharide bacteriene sunt polizaharidele care intr n structura peretelui celular bacterian. Un exemplu tipic de polizaharid bacterian este scheletul peretelui celular al unor bacterii, format din N-acetil-glucozamin (NAG), legat de acidul Nacetil-muramic (NAM) printr-o
CH 2OH O O H3CCH HOOC NAM O NH CH 3CO O OH NH CH 3CO NAG CH 2OH O

74 legtur 14. Moleculele de N-acetil-glucozamin i de acidul N-acetil-muramic alternez formnd structuri filiforme legate ntre ele prin lanuri scurte de peptide. De gruparea carboxil al fiecrei molecule de NAM se leg un tetrapeptid (notat n figura alturat prin A-B-C-D). Acest tetra peptid conine att D -aminoacizi ct i L aminoacizi. Al treilea rest de aminoacid al tetrapeptidului (notat n figur cu litera C), care n mod curent este un diaminoacid, formeaz legturi ncruciate, care de exemplu la Staphylococcus aureus, sunt formate din pentaglicin. Astfel aceast structur tridimensional formeaz un co care apr bacteria de ocurile osmotice ct i de atacul leocucitelor. ns aceast structur este lizat de lizozim enzim prezent n lichidul lacrimal i n saliv. Glicozaminoglicanii (mucopolizaharide) sunt heteropolizaharide structurale care se ntlnesc frecvent la animale. n structura lor intr un aminoglucid acetilat care alterneaz cu un acid uronic. Acidul hialuronic, de exemplu este format din Nacetil-glucozamin care alterneaz cu acid glucuronic. Aceast structur repetitiv formeaz molecule lineare coninnd aproximativ 5000 de uniti repetitive. Acidul hialuronic este un lichid vscos i transparent care intr acidul hialuronic este prezent n piele i mucoasa oral. Condroitin sulfaii sunt structuri asemntoare cu acidul hialuronic cu diferena c glucozamina este nlocuit cu galactozamina i cu esterul ei sulfat la atomul de carbon patru sau ase. Coninutul de sulfat variaz de la un esut la altul i de la o specie la alta. Condroitinele din cornee au un coninut deosebit de sczut n sulfai. Condroitin sulfatul se gsete n cantiti relativ reduse n oase n cantiti mult mai mari n cartilajele fibroase, elastice i hialine. Dermatan sulfatul este analogul condroitin-4-sulfatului n care acidul D-glucuronic este nlocuit cu acidul L-iduronic. Proporia de dermatan sulfat crete odat cu vrsta n defavoarea
O OH OH NH CH 3CO N-acetil galactozamina 6 sulfat Fragment de condroitin-6-sulfat O O COOH OH
acid L-iduronic

COOH O O OH

13 O HO

CH 2OH O

acid glucuronic

OH

NH CH 3CO N-acetil glucozamina

Fragment de acid hialuronic

n compoziia umorii vitroase, n lichidul sinovial unde are rol de lubrifiant. De asemenea

CH 2OH O 13 HSO 3O O

OH

NH CH 3CO N-acetil galactozamina 4 sulfat

Fragment de dermatan-sulfat

COOH O

CH 2OSO3H 13 O HO O

acid glucuronic

condroitin 4 sulfatului. Prezena dermatan sulfatului n proporii mari este degradarea cartilajelor..

asociat 75 cu

Keratan sulfaii au fost izolai pentru prima oar din cornee, dar se gsesc n cantiti nsemnate i n cartilaje. Cu toate c sunt considerate polizaharide acide, n structura lor ntructva asemntoare condroitin sulfailor, acidul uronic este nlocuit cu galactoza care alterneaz cu glucozamina-6-sulfatul. Un glucozaminoglican care este un polizaharid non structural este heparina. Heparina este un anticoagulant prezent n toate esuturile, dar mai cu seam n plmn. Aceast molecul este similar condroitin sulfatului cu excepia c gruparea sulfat poate fi prezent la carbonul doi al acidului glucuronic, la carbonul ase al galactozaminei i de asemenea legat de gruparea amino n locul restului acetil. Toate legturile glicozidice sunt 14. Glicozaminoglicanii sulfatai, dup aproximativ 50 de uniti dizaharidice repetitive, se pot lega covalent de proteine prin intermediul hidroxi-aminoacizilor, respectiv serin sau treonin, formnd proteoglicani. Glicoproteinele salivare confer salivei vscozitate i oarecare proprieti adezive. Ele au o compoziie format din o treime carbohidrai i dou treimi proteine i se mai numesc
glucidul terminal al unui glicozaminoglican OH + OH CH 2 CO CH NH rest de serin inclus ntr-o protein H2O

O CH 2 CO CH NH legtura glicozidic din proteoglicani

mucine. Astfel de molecule glucido-proteice sunt rspndite n esuturile i fluidele corpului uman, inclusiv n serul sanguin, urin, n secreia mucoas a stomacului i intestinului, esutul conjunctiv, n matricea oaselor i membrana celular. Aceti compui au fost numii glicoproteine sau mucoproteine. Iniial denumirea de mucoproteine se referea la proteinele cu un coninut mai mare de 4% carbohidrai iar denumirea de glicoproteine era folosit pentru proteinele cu un coninut mai redus de 4% carbohidrai. Actualmente cele dou denumiri sunt sinonime, totui denumirea cea mai uzual fiind de glicoproteiene. Legtura dintre partea glucidic i cea proteic n glicoproteine, se face printr-o legtur glicozidic dintre un hidroxiaminoacid (Ser, Thr) i o grupare hidroxi a unui glucid terminal, ca i n cazul proteoglicanilor. n afara acestui tip de
HO

CH 2OH O OH OH + NH 2 CO NH CH 2 C CH NH O

CH 3CO Nacetil glucozamina

restnde Asn dintr-un lant peptidic C CO CH 2 CH NH

CH 2OH O NH
HO

OH

OH NH

CH 3CO

legtur mai apare 76 i un alt tip de legtur, n care Specificare sunt implicate Nacetil-glucozamine pe de o parte i pe de alt asparagina. Exist o diferen ntre coninutul de Lungimea Secven

Tabelul 6.1. Diferena dintre carbohidraii din glucozaminoglicani i glicoproteine Oligozaharide din glicoproteine 2-10 resturi Neregulat din structura Glucozaminoglicani (pot

face parte din proteoglicani) Lungimi mari Alternan aminate

ntre i

oligozaharide

Acidul N-acetilneuraminic monoglucide legat -2,6 de oligozaharid CH 3COHN O OH COOH OH CH 2OH O OH

glicoproteienelor i a proteoglicanilor. Acidul sialic de obicei se gsete la captul terminal al lanului oligozaharidic al glicoproteinelor.

CH 2 C6 al glucidului

Neuraminidaza

El se gsete de asemenea i ca rest acid n multe oligozaharide. n ambele cazuri acidul sialic confer ncrctur negativ moleculelor din care face parte. Acidul sialic poate fi ndeprtat de neuraminidaz (sialidaz) enzim hidrolitic produs de bacteriile din cavitatea bucal. S-a elucidat secvena monoglu-cidelor din lanurile de oligozaharide ale unor glicoproteine din serul uman. Captul ter-minal este aproape ntotdeauna ocupat de acidul sialic, sau de deoxiglucidul, Lfucoza (6-deoxigalactoza). Proprietile moleculelor glicoproteinelor variaz n funcie de proporia celor dou resturi terminale. Astfel dac proporia de acid sialic este mare, molecula A. un Uncaracter segment de glicoprotein are ionic i hidrofil i secretat invers n cazul n care fucoza este n proporie mai mare. glanda = N-acetil Analiza salivar calitativ a salivei umane produs de glanda submaxilar arat c glucidele galactozamin; = galactoz, acid N-acetil legate de proteine sunt: fucoz, galactozamin, acid sialic i urme de manoz i neuraminic glucoz. Saliva uman produs de parotid B. Segment glicoprotein cu un conine glucozde ne legat de proteine. Pe de coninut main redus de glucide dar mai alt parte, secreia ambelor glande complex = N-acetil galactozamin; cantitatea de glucozamin este mai mare = galactoz = de acid N-acetil neuraminic dect cantitatea galactozamin, diferena C. Structura unui proteoglican, unde se fiind mai pregnant n secreia parotidei. vede scheletul proteic de care se leag condroitin sulfai i keratani sulfai, ncrcai puternic negativ cnd nu este saturat cu contra ioni i are o mic cantitate de ap de hidratare Fig. 6.3. Reprezentarea schematic a glicoproteinelor i proteinoglicanilor de

77

7 LIPIDELE
7.1 Lipide, generaliti i importana biologic
Lipidele sunt un grup heterogen de substane, totui au o caracteristic comun, sunt solubile n solveni organici (eter, aceton, cloroform, benzen, etc.) aceast proprietate fiind folosit pentru definirea grupului. Din punct de vedere cantitativ, n celulele vii majoritare sunt trigliceridele i fosfogliceridele, care sunt esteri ai glicerinei. Alte lipide importante sunt sfingolipidele, care sunt derivai ai unui amino alcool sfingozina, i steroizii care au o structur total diferit de celelalte lipide. Prin metode histochimice s-a pus n eviden prezen prezena lipidelor n smal i dentin. Astfel tuburile odontoblastice din dintele complet mineralizat, se coloreaz rapid cu colorani specifici lipidelor, la fel ca i liniile incrementale ale smalului. Seciuni prin dinii cariai evideniaz prezena lipidelor n smal ca i n matricea peritubar a dentinei. S-ar putea crede c aceste lipide sunt de origine bacterian dar studiile ulterioare au demonstrat c ele sunt de origine endogen. Experimentul care a demonstrat originea endogen a lipidelor, a constat n decalcifierea progresiv a unui dinte sntos i colorarea acestuia cu colorai specifici.

Secvena n care s-a colorat dintele n timpul decalcifierii progresive a fost, iniial calciu 78 urmat de proteine i n final lipidele.

7.2 Trigliceridele
Trigliceridele sunt esteri ai acizilor grai cu un triol, glicerina (o alt denumire des utilizat a glicerinei este glicerolul) ele mai sunt denumite i lipide neutre sau grsimi de depozit. Grsimile solide i uleiurile sunt amestecuri de trigliceride care la temperatura camerei sunt solide i respectiv lichide. Relaia dintre glicerin acizi grai i trigliceride este artat de ecuaia de CH OH 2 mai jos care reprezint esterificarea i respectiv hidroliza. reversibil

R'COOH
esterificare

CH2OCOR' CHOCOR'' CH2OCOR''' 3 H2 O

CH OH

R''COOH
hidroliza

CH2OH

R'''COOH

n structura trigliceri-delor gruparea alchil R, R, R a acizilor grai poate fi diferit. Hidroliza poate fi fcut cu alcalii (NaOH, KOH) obinndu-se spunuri, care sunt sruri ale acizilor grai cu Na sau K. Hidroliza poate avea loc i n mediu neutru n prezena unor enzime digestive numite lipaze. Sinteza n celulele vii, nu are loc direct prin esterificarea glicerinei cu acizi garai, ci printr-un lan metabolic n care acizii grai sunt activai i care va fi prezentat n capitolul metabolismul lipidelor. Acizii grai care intr n compoziia grsimilor animale, sunt molecule cu numr par de atomi de carbon, unii au duble legturi a

CH3CH2(CH2)5CH2CH
18 17 11 10

CHCH2(CH2)3CH2CH2CH2COOH
9 8 4 3 2 1

nr.atomului de C

cror poziie este indicat de (majuscula greceasc delta) i un numr ca exponent care indic numrul atomului de carbon implicat n dubla legtur. Astfel 9 indic o legtur dubl ntre atomul de carbon 9 i 10. Numerotarea atomilor de carbon n moleculele de acizi grai se face ncepnd cu atomul de carbon din gruparea carboxilic. Acidul gras C 18 : 9 adic cu 18 atomi de carbon i o dubl legtur ntre atomul de carbon 9 i 10, acidul oleic are urmtoarea formul: Dubla legtur n acizii grai, n mod preponderent are configuraia cis cu toate c configuraia cea mai stabil este trans. Lista ctorva dintre cei mai importani acizi grai este prezentat n tabelul 7.1. Tabelul 7.1. Civa dintre cei mai importani acizi grai

Grsimile de origine lor acizi animal grai poziia este con-in n structura diveri, acestora

Denumirea uzual

Nr. de atomi de carbon 14 16 18 20 16 18 18 18 18 20

Formula

Localizare

79

randomizat, n raport cu hidroxilul gli-cerinei. n grsimile de origine vegetal acizii grai nesaturai cu 18

Miristic Palmitic Stearic Arahic Palmitoleic Oleic Ricinoleic Linoleic Linolenic Arahidonic

Acizi grai saturai CH3(CH2)12COOH CH3(CH2)14COOH CH3(CH2)16COOH CH3(CH2)18COOH Acizi grai nesaturai 9palmitic 9stearic 12() 9stearic 9,12stearic 9,12,15 stearic 5,8,11,14 arahic

Lipide din lapte General General General General General General Fosfolip. membranare Fosfolip. membranare Fosfolip. membranare

atomi de carbon se ataeaz preferenial la atomul de carbon central al glicerinei. Proporia de acizi grai nesaturai este mai mare dect grsimile de origine animal motiv pentru care au un punct de topire sczut. Margarina se obin prin hidrogenarea catalitic a dublelor legturi din uleiurile vegetale. Compoziia grsimilor de depozit din celulele animale, depinde n parte de grsimile din diet i n parte de grsimile sintetizate de novo specifice fiecrei specii. Din totalul lipidelor extrase din dini sntoi i cariai, 50% reprezint acizi grai liberi. Distribuia acestora n smal i dentin este asemntore i anume, 19-25% din totalul acizilor grai este reprezentat de acidul palmitic, 14-17% acidul stearic i 20-21% acidul oleic. O distribuie asemntore nu s-a mai observat i la alte esuturi.

7.3 Fosfogliceridele
Toate fosfolipidele conin cel puin un rest de acid fosforic per molecul. Fosfogliceridele (glicerofosfatidele) sunt un grup important al fosfolipidelor. Structura lor este asemntoare cu cea a trigliceridelor n care n locul unui acid gras hidroxilul glicerinei este esterificat de acidul fosforic. Aceast molecul poart numele generic de acid fosfatidic, de la el derivnd toate celelalte fosfogliceride. Acid fosfatidic liber se gsete n plante dar nu i n R'' O C O H 2C CH H 2C O O O C O P OH OH R'

organisme animale. Toate fosfogliceridele mai conin un alcool n afara glicerinei care este

esterificat cu restul de acid fosforic. Acest alcool poate fi etanolamina (HO-CH2-CH2-NH2), 80 sau derivatul acestuia colina (HO-CH2-CH2-N+(CH3)3), serina un hidroxi aminoacid (HOCH2-CH(NH2)COOH), sau un alcool ciclic, inozitol ((CHOH)6) O O H2C O C R' O O O H2C O C R' O
+

R'' C O CH

R'' C O CH

H2C O P O CH2 CH COOH OH NH 2

H2C O P O CH2 CH 2 N (CH 3)3 OH

Fosfatidil coline (lecitine) O O H2C O C R' O

R'' O C O H2C CH O O C O R' OH

Fosfatidil serine

R'' C O CH

H2C O P O CH2 CH 2 NH 2 OH

n H2 C Coninutul O P On lipide a dintelui sntos Tabelul 7.2.

OH OH OH OH extrase prin dou metode diferite.

OH

Fosfatidil inozitoli (inozitide) Fosfatidil etanolamine (cefaline) dentina sntoas s-au identificat o gam variat de fosfolipide dintre care amintim: fosfatidil inozitoli, sfingomieline, lecitine, fosfatidil etanolamine, lizolecitine ct i alte fosfolipide n cantiti foarte mici care nu au permis identificarea deocamdat. Prezena fosfatidil serinelor a fost confirmat n dentina cariat. Lipidele extrase din dini sntoi, n urma demineralizrii dentinei cu EDTA sunt prezentate n tabelul 7.2.

Studii fcute pe lipide extrase din smal i dentin de bovin (care mai trziu au fost 81 confirmate i pe studii efectuate pe dini umani), n trei variante (1) naintea demineralizrii, (2) dup demineralizare i (3) extracie cu un amestec de cloroform-metanol acidifiat, au artat c, smalul conine de 20 de ori mai multe fosfolipide dect dentina raportat la substan uscat. Cantitatea cea mai important de fosfolipide neutre, au fost Greutatea Metoda I de Metoda II de extracie 40,90* extracie 176,60 4,14

lipidelor totale Esteri ai 2,89 colesterolului Colesterol liber Trigliceride Digliceride Monogliceride * Toate valorile Fosfolipide

3,42 6,53 1,59 1,61 0,75 1,15 0,45 0,80 din tabel sunt exprimate 0,45 4,95 n mg din

extrase naintea demineralizrii, n timp 100 g dentin uscat la greutate constant ce fosfolipidele acide au putut fi extrase Metoda I de extracie: extracie cu un amestec de numai dup demineralizare folosind cloroform; metanol solveni acidifiai. n dentin din totalul de 56% fosfolipide, 50 % sunt lecitine, care au putut fi extrase naintea tratamentului cu EDTA. Rezultate asemntore s-au obinut i din smal. Aceste rezultate sugereaz un mare grad de asociere ntre fosfolipide i mineralizare. Folosindu-se tehnici specifice histochimice i microscopie optic, n locurile active de calcifiere s-au observat reacii sudanofile. Negru de Sudan B este folosit n histochimie pentru coloraia specific a lipidelor, de aici termenul sudanofilic, esut sau strat de celule care se coloreaz cu negru de Sudan B. Jonciunea dintre predentin i dentin ct i jonciunea dintre dentin i smal, zone acid solubile, se coloreaz specific cu negru de Sudan B. O reacie similar s-a constatat i n zona epifizal a oaselor lungi, unde celulele cartilaginoase hipertrofice ncep s se calcifice. n urma unor microdisecii pe epifiz de viel urmat de o izolare i identificare de lipide, demonstreaz c ele sunt responsabile de reacia sudanofil. n cadrul aceluiai experiment s-a constat c extracia fosfolipidelor acide se poate face numai dup mineralizare, fapt care demonstreaz implicarea acestora n cacifiere. S-au izolat vezicule din matrixul extracelular din zona epifizal a oaselor, care sunt implicate de asemenea n reacia sudanofil. Aceste vezicule izolate prin centrifugare n gradient de densitate, conin calciu, o cantitate mare de fosfolipide acide i enzime cum ar fi pirofosfataz i fosfataz alcalin. Prin microscopie electronic s-a vzut c aceste vezicule sunt locul de

depunere iniial a fosfatului de calciu. Vezicule similare s-au observat i n dentin dar nu n 82 smal. Implicarea fosfolipidelor n calcifiere are loc n faza iniial de mineralizare cnd se formeaz ntreaga cantitate de fosfat de calciu amorf sau apatit amorf. (Vezi mecanismul de mineralizare a dintelui)

7.4 Sfingolipidele
Toate lipidele din aceast clas, conin un amino alcool

H HOC

H C

complex numit sfingozin. Sfingolipidele din organismele H N+CH 3 vii se gsesc sub form de ceramide (N - acil sfingozin) CH2OH (vezi figura 7.1.) care la gruparea hidroxil a sfingozinei structur analog cu lecitinele (vezi figura 7.1.)

C (CH2)12CH3 H

are ataat un rest hidrofil. Sfingomielinele conine fosfocolin i din acest motiv are o

n acest grup al sfingolipidelor se includ i ceramidele la care se leag glucide, care poart numele de glucosfingolipide. Se pot lega glucide simple n acest caz se numesc cerebrozide, (abundente n creier mai precis n substana alb ct i n nervi), glucide sulfatate (sulfatide) sau lanuri lungi i complicate de glucide numite gangliozide (prezente de asemenea n

substana alb din creier). Sfingolipide se gsesc n proporii mari i n afara sistemului 83 nervos.

7.5 Steroizii
Steroizii i derivaii lor au roluri biologice diverse dintre care amintim: componente importante ale membranei celulare A (colesterolul), detergeni, substane cunoscute sub denumirea de sruri biliare (glicocolat i taurocolat), cu rol n digestia grsimilor, HO vitaminele D, implicate n metabolismul calciului i nu n ultimul rnd hormoni.
Aldosteron HO CH3

CH3 Colesterol CH3 C B CH(CH2)3 CH(CH3)2 CH3 D

CHO

C O

CH2OH

CH 3

O
HO Cortizol CH3

OH CH(CH 3)2C N(CH 2)2SO 3 CH 3 Taurocolat H CH 3

OH CH3 C O

CH2OH

HO

OH

CH3 Ergocalciferol Vitamina D2 CH CH CH 3 CH2 HO

CH3 CH CH CH(CH3)2

O Progesteron CH CH3 CH3

Testosteron CH 3 O

CH 3
O

OH

CH3

Estradiol

OH CH 3 H

HO

84 n modificrile patologice parodontale, un rol particular l au hormonii estrogeni i progestativi precum i prostaglandinele. Exist o legtur clinic ntre nivelele hormonilor estrogeni i progestativi i inflamaia gingival. Sunt numeroase date cu privire la accentuarea semnificativ a severitii gingivitelor n cursul pubertii (gingivite ale pubertii) sau al sarcinii (gingivite ale sarcinii). De fapt agravarea parodontopatiilor observate n cursul sarcinii au drept cauz iniial scderea catabolismului progesteronei, proces caracteristic acestei perioade fiziologice. De asemenea, concentraia progesteronei metabolizate i secretate crete la nivelul parodoniului. La rndul ei, aceast cretere favorizeaz dezvoltarea anumitor bacterii din placa dentar care au aciune parodonto-patogenic. Cei mai frecveni hormoni din saliv sunt cei steroidici (corticosteroizi i sexuali). S-a constatat c concentraia hormonii steroidici sunt n concordan cu variaiile acestora n snge i sunt independente de intensitatea fluxului salivar. De aceea se recomand ca n cazurile n care nu se pot lua probe de snge i este nevoie de stabilirea unui diagnostic privind aciunea corticosteroizilor, s se recurg la determinarea acestor hormoni n saliv.

7.6 Prostaglandinele
Prostaglandinele sunt o familie de derivai ai acizilor grai, care au o gam larg de activiti biologice de natur hormonal sau reglatorie. La nceput s-a crezut c prostagandina este o singur substan, secretat specific de tractul genital masculin, dar ulterior s-a constat c exist diferite prostaglandine care funcioneaz ca regulatori ai metabolismului, ntr-o serie de esuturi. Prostaglandinele (PG) sunt toi derivaii acidului prostanoic, acid cu 20 atomi de carbon n care atomii C(8) i C(12) sunt cuprini ntrun schelet de ciclopentan. Prostaglandinele de diferite tipuri, de la A pn la I, difer prin substituenii ataai la acest ciclu: PGA sunt cetone , nesaturate PGE sunt cetone hidroxilice PGF sunt 1,3 dioli
HO O COOH CH3 HO HO COOH CH3 HO HO PGF2 HO PGE2 HO PGE1 O
9 10 11 8 12 7 13 6 14 5 15 4 16 3 17 2 18

COOH 1
19

R1

CH 20 3 PGA COOH CH3

Acidul prostanoic

R2

Dat fiind prezena PG n toate esuturile apariia lor sub form activ sub influena unui mare numr de factori apare ca fireasc implicarea lor ntr-o varietate de tulburri care intereseaz practic toate aparatele i sistemele. Sunt cunoscute implicaiile lor n inflamaia acut i cronic, durere, i hipertensiunea periferic, arterial, cardiopatia ischemic, insuficiena circulatorie cerebral

85

ateroscleroz, ulcer gastric i duodenal, colita ulceroas, insuficien renal, eclampsie avort spontan, sindrom premenstrual, migren etc.

7.7 Lipoproteinele
Avnd n vedere c lipidele sunt insolubile n medii apoase, ele au un sistem propriu de transport n plasm. Acest sistem const n formarea unor complexe mari necovalente, ntre lipide i proteine numite lipoproteine. Lipidele nepolare (trigliceridele i esterii colesterolului) se gsesc orientate n interiorul complexului Fig. 7.2. Lipoproteina de densitate joas lipoproteic, n inima hidrofob a acestuia. n jurul acestui miez hidrofob se gsesc lipide amfipatice (molecule cu o zon polar i una nepolar) (fosfolipide i colesterol) i proteine polare care formeaz un nveli. Cele cinci clase de baz a lipoproteinelor plasmatice sunt: chilomicronii (CM), lipoproteine cu densitate foarte mic (very low density lipoproteins (VLDL)), lipoproteine cu densitate intermediar (intermediate density lipoproteins (IDL)), lipoproteine cu densitate mic (low density lipoproteins (LDL)), lipoproteine cu densitate mare (high density lipoproteins (HDL)). Caracteristicile fiecrui tip de lipoproteine sunt prezentate n tabelul 7.3. Tabelul 7.3. Compoziia i unele caracteristici ale lipoproteinelor Clasa CM VLDL IDL LDL HDL Mrimea particulelor (nm) 80-1000 30-80 25-30 20-25 10-15 Densitatea (g/cm3) <0.94 0.94-1.006 1.006-1.019 1.019-1.063 1.063-1.210 TG % 85 55 24 6 4 CE % 4 12 29 42 15 C % 2 7 9 8 4 PL % 7 18 19 22 29 AP % 2 8 19 22 47 Principalele AP A, B, C, E B, C, E B, E B A, C, D, E

TG trigliceride, CE colesterol esterificat, C colesterol, PL fosfolipide, AP 86 apoproteine Proteinele componente ale lipoproteinelor sunt cunoscute sub numele de apoproteine. Exist cinci clase principale de apoproteine A, B, C, D i E..

8 VITAMINELE
8.1 Generaliti
Vitaminele sunt substane organice cu rol funcional nsemnat, care se gsesc n cantitate mic n alimente i sunt indispensabile pentru creterea i dezvoltarea normal a organismelor. Vitaminele sunt sintetizate n principal de organismele vegetale i de microorganisme i numai n foarte mic msur de unele specii de animale. Omul i animalele i procur vitaminele din hran, fie n stare liber, fie sub form inactiv, de provitamine, care se vor transforma ulterior n organism n vitamine. Organismele animale au nevoie n permanen de vitamine deoarece nu le pot depozita dect n cantiti foarte mici. Pentru om i animale, vitaminele sunt n marea lor majoritate metabolii de origine exogen, spre deosebire de hormoni, care sunt metabolii de origine endogen. Unele vitamine pot fi sintetizate parial de om i de animale, mai cu seam cele care se gsesc n hran sub forma de provitamine (vitamina A, D) sau care provin din aminoacizi (vitamina PP - provine din triptofan). Microflora din prestomacele erbivorelor i din tubul digestiv al oamenilor i animalelor sintetizeaz de asemenea numeroase vitamine (vitamina K, biotina, acidul pantotenic, acidul paraaminobenzoic, acizi folici i folinici etc.), care acoper n mare parte necesitile organismelor. Vitaminele produse de flora intestinal sunt considerate tot factori exogeni. Necesitile organismelor animale privind unele vitamine sunt dependente de natura speciei, astfel vitamina C este strict necesar numai pentru om, primate i cobai, restul animalelor o pot sintetiza n cantitile cerute de organism, astfel nct animalele respective se pot lipsi de aportul exogen al acestei vitamine. Vitaminele au n organismele vegetale i animale un rol multiplu i complex, fiind factori alimentari "eseniali", absolut necesari tuturor organismelor. Ele se mai numesc i "factori coenzimatici", deoarece un numr nsemnat de vitamine (n mod deosebit cele din complexul B) ndeplinesc rolul de coenzime, iar altele sunt activatori enzimatici, justificndu-se i n acest fel ncadrarea vitaminelor ntre catalizatorii biologici. Coenzimele

sunt compui care transport spre i dinspre centrul activ al enzimelor, diferite grupri 87 funcionale, intermediind astfel activitatea enzimelor. Prima vitamin a fost descoperit de CAZIMIER FUNK n 1911, care a reuit s izoleze din trele de orez o substan ce vindec boala beri-beri, numit de autor vitamin, adic amin vital. I s-a dat numele de vitamin deoarece substana respectiv (vitamina B 1) conine azot aminic i era considerat indispensabil vieii. Astzi se cunosc un numr nsemnat de vitamine ce nu conin azot n molecula lor. Clasificarea vitaminelor se poate realiza dup mai multe criterii (nomenclatura alfabetic, structur chimic, rol fiziologic i terapeutic, solubilitate, spectre de absorbie, grupri funcionale etc.). Dintre toate aceste criterii, cel mai cuprinztor i mai practic s-a dovedit a fi criteriul solubilitii. Dup solubilitatea vitaminelor n solveni organici i n ap, acestea se clasific n dou grupe mari: vitamine liposolubile i vitamine hidrosolubile. Din grupa vitaminelor liposolubile, care se dizolv n solveni organici i nu se dizolv n ap, fac parte vitaminele A, D, E, K, F, iar din grupa vitaminelor hidrosolubile, care se dizolv n ap i nu se dizolv n solveni organici, fac parte complexul de vitamine B (vitaminele B1, B2, B6, B12, PP, acidul pantotenic, biotina, acidul paraaminobenzoic, acizii folici i folinici, mezoinozitolul etc.), vitaminele C, vitaminele P etc. Prin noiunea de provitamine, se neleg compui inactivi (exogeni), care se transform n organismul uman i animal n vitamine. Astfel, carotenoidele provitaminice se transform n intestin i ficat, sub aciunea carotenazei n vitamine A. Sterolii (ergosterolul, colesterolul, sitosterolul, stigmasterolul etc.) se transform prin iradiere i dehidrogenare n vitamine D. Transformarea provitaminelor n vitamine depinde i de felul speciilor, ntruct nu toate animalele au echipamentul enzimatic necesar acestor transformri. Clasificarea vitaminelor n liposolubile i hidrosolubile, realizata n 1915 de ctre Osborne i Mendel, se pstreaz i n prezent, cu toate c unele vitamine i derivaii acestora sunt insolubile in solveni nepolari i polari, iar pe de alt parte unele preparate vitaminice sunt solubile n ap, dei vitaminele naturale sunt liposolubile. Astfel, vitaminele K naturale sunt liposolubile, iar cele obinute prin sintez sunt hidrosolubile. Unele vitamine hidrosolubile se pot obine n forme liposolubile i invers. Cu toate aceste abateri de la regul, se pstreaz clasificarea vitaminelor n liposolubile i respectiv hidrosolubile.

88

8.2 Vitamine hidrosolubile

8.2.1 Vitamina B1-Tiamina
H2 N N H3C N+ H

H C H2
+

C C

n anul 1630 Jacobus Bonitus, medic olandez care lucra n insula Java, scria: "O boal grav atac oamenii de aici. Localnicii o numesc beri-beri care, n limba

S C CH2 CH2 OH

CH3 Vitamina B1

btinailor, nseamn oaie. Bolnavilor le tremur picioarele i au un mers nesigur, "de oaie". Mai trziu s-a vzut c aceast boal se datoreaz lipsei de tiamin (vitamina B 1) din dieta celor care consum cu predilecie orezul, aliment cu coninut sczut n vitamina B 1. Mai grav este atunci cnd orezul este consumat decorticat. Alcoolicii prezint aceiai caren din cauza malnutriiei. Vitamina B1, 3'-(4-amino-2-metil-pirimidil-5-metilen)-5'-(-hidroxietil)-4'-metiltiazol, este format dintr-un nucleu pirimidinic (A) i unul tiazolic (B), unite printr-o punte metilenic (-CH2-) care se leag de atomul C-5 din nucleul pirimidinic i de atomul de azot (N-3') din nucleul tiazolic. Pe nucleul pirimidinic se gsete un radical metil la C-2 i o grupare aminic la C-4, iar pe nucleul tiazolic se gsete un radical metil la C-4' i o grupare hidroxietil la C-5'. Vitamina Bl este deci un derivat de pirimidin i de tiazol coninnd n molecul dou cicluri, un heterociclu hexagonal cu doi atomi de azot i un heterociclu pentagonal cu un atom de azot i unul de sulf. Se extrage sub form cristalin din cojile boabelor de orez i se obine i pe cale de sintez. n ce privete relaia dintre structur i activitate s-a constatat c prin nlocuirea radicalului metil de la C-2 cu C2H5- se obine un compus cu activitate biologic de dou ori mai mare ca a vitaminei B1, dar prin nlocuirea aceluiai metil cu un radical butil (C4H9-) se formeaz o antivitamin B l. necesar pentru activitatea acestei
CH3 O OC C CH3 C C O + O H+ -C C HS Pyr DH S + + R N R N C C C H 2N CC S + O O R' C N O R' H C 2 N CH2 PCH3 CH3 C P O CH2 O O Pyr DH H3C N+ CH3 OH H CO 2 TPP OH OH CH3 C CH3 R R' C C S N: C C CH3 OOH

Prezena gruprii -NH2, fixat la C-4 este absolut

vitamine.

C S nlocuirea sa cu alte grupri duce la formarea de R +N C C antivitamine. Puntea metilenic (-CH2-) care unete

cele dou heterocicluri, are de asemenea un rol

CH3

R'

Hidoxietil - TPP

nsemnat n activitatea biologic a tiaminei. nlocuirea sa cu o punte etilenic (-CH 2-CH89 2-) determin o scdere a activitii vitaminice de 10 ori. Radicalul alcoolului etilic fixat la C-5' este foarte important petru formarea de esteri fosforici i pirofosforici pentru a forma coenzima activ. n creier i ficat se gsete o enzim numit tiamin pirofosfokinaza care transform tiamina n forma sa coenzimatic, tiamin pirofosfatul (TPP). Acesta este coenzim pentru enzimele care catalizeaz reacii cu transfer de aldehide activate. Exist dou tipuri de reacii care implic acest transfer: a) decarboxilarea oxidativ a alfa-cetoacizilor i b) reacia de transcetolare. Centrul activ al TPP este o grupare metinic a nucleului tiazolic, grupare care are o aciditate semnificativ mrit pentru o legtur C - H. Structura carboanionic a acestei grupri este stabilizat de prezena n vecintate a atomului de azot ncrcat cu sarcin electric pozitiv. n cadrul decarboxilrii oxidative, TPP are rolul de a activa aldehida (acetic sau succinic) i de a o transfera lipoamidei, din acest motiv TPP este considerat un transportor de grupri aldehidice. Forma activat a acetaldehidei este hidroxietil tiamin pirofosfatul. Acesta se formeaz prin adiia gruprii metinice active la acidul piruvic, urmat de decarboxilarea produsului de adiie. Aceste reacii sunt catalizate de piruvat dehidrogenaz (Pyr DH), subunitate enzimatic a complexului enzimatic numit tot piruvat dehidrogenaz. Sub aciunea catalitic a dihdrolipoil transacetilazei are loc transferul acetaldehidei la lipoamid, proces ce va putea fi urmrit n continuare n acest capitol. Vitamina Bl are o larg rspndire n natur fiind prezent n toate organismele vegetale i animale. Ea se gsete de asemenea n toate alimentele de origine vegetal i animal. Printre sursele naturale bogate in vitamina Bl fac parte drojdia de bere, seminele cerealelor nedecorticate (orez, gru, orz, porumb, ovz etc.), ficatul, inima, rinichii, muchiul de porc etc. Deosebit de bogate n vitamina B l sunt extractele apoase din drojdia de bere, drojdia alimentar, cojile cerealelor, unele ciuperci etc. Coninutul vitaminei Bl din plantele verzi variaz ntre 2,5 i 10 g/g. n germenii de gru i tre de orez, vitamina Bl are un coninut de 1,6-2,4 mg%, iar n produsele animale ntre 0,1-0,4 mg%. n drojdia de bere coninutul vitaminei B l variaz ntre 5 i 25 mg/100 g, n germenii de orez ntre 2,8-3,5 mg/100 g, iar n extract de drojdie de 30 mg/100 g. Coninutul mediu al vitaminei Bl n alimente de origine animal, exprimat n mg/100 g se prezint astfel: 0,6 la carnea de vit, 0,1-0,2 la carnea de miel, 0,8-1 la carnea de porc 0,1 la pasre, 0,02 n

laptele uman, 0,04 n laptele de vac i de capr, 0,3-0,5 n glbenuul de ou. Necesarul zilnic 90 de tiamina pentru un adult este de 1-3mg. 8.2.2 Acizii lipoici, acizi tioctici Acizii lipoici sunt factori de cretere pentru numeroase microorganisme de tipul bacteriilor (Lactobacillus casei, Streptococs faecalis) i protozoarul Tetrahymena geleii. Sunt de asemenea factori necesari decarboxilrii acidului piruvic, de unde deriv i denumirea de "factori de activare ai piruvatului". Formula general a acizilor lipoici este urmtoarea:
H2C S (CH2)n CH S (CH2)5-n COOH unde n = 1, 2 sau 3

Acidul lipoic sau tioctic are n = 1 i este numit acidul -tioctic sau 6,8 ditiooctanic.
H2C S CH2 CH S CH2 CH2 CH2 CH2 COOH

Acidul 6,8-ditio-n-octanoic

A fost obinut n stare cristalin n 1953 din extracte de ficat, de ctre L. J. Reed i I. C. Gunsalus. Posed un inel pentagonal disulfidic i o caten lateral format din acidul valerianic. Acidul lipoic este coenzim a complexelor enzimatice ale decarboxilrii oxidative a cetoacizilor: piruvat decarboxilaza n cazul acidului piruvic, cetoglutarat decarboxilaza n cazul acidului cetoglutaric. Sub form activ el este legat printr-o legtur amidic de enzima pe care o asist, prin intermediul unui rest de lisin (lipoamida)..
S S H O C NH O C C
Radical de Lys Lipoamida

H N H

Catena peptidic

n cazul decarboxilrii oxidative a acidului piruvic acetilarea acidului lipoic se produce 91

CH3 HCOH H2 C C H2 H C S + R S C
+

S C R'

TPP + H2 C C H2 H C

CoASH

N C CH3

SH O S C CH3

H2 C C H2 H C

SH + SH

CoA S C CH3
Acetil - CoA

(CH2)4 CONHR L
Lipoamida legat de un radical Lys (R L)

(CH2)4 CONHR L

(CH2)4 CONHR L
Dihidrolipoamida

Hidoxietil - TPP

Acetil dihidrolipoamida

prin preluarea acetaldehidei de la hidroxietil tiamin pirofosfat (hidroxietil - TPP) care conine o forma activ a acetaldehidei. Astfel acidul lipoic transport gruparea acetil de la TPP i o cedeaz coenzimei A, motiv pentru care acidul lipoic poate fi considerat un transportor de grupri acetil dar i alte grupri acil Aceast reacie este catalizat de dihidrolipoil transacetilaza, subunitate enzimatic a piruvat dehidrogenazei. Acidul acetil-lipoic format conine o legtur tioesteric macroergic ceea ce explic labilitatea gruprii acetil. Sub aciunea aceleiai subuniti enzimatice, el va ceda CoASH gruparea acetil rezultnd acetilCoA. Prin urmare ciclul disulfuric al lipoamidei este ancorat la catena apoenzimei printr-un "bra flexibil" de cca. 1,5 nm datorit cruia el poate "pendula" ntre centrul activ care conine hidroxietil tiamin pirofosfatul i centrul activ care conine Coenzima A. Ciclul disulfuric al lipoamidei este tensionat ceea ce determin ca potenialul de reducere al acestuia s fie foarte apropiat de al NAD+-ului. De aceea reoxidarea dihidrolipoamidei se face cu NAD +, regenerndu-se lipoamida care reia ciclul. Acidul lipoic se gsete n toate alimentele i nu s-au semnalat stri careniale naturale. Experimental carena lipoic se realizeaz prin administrarea de acid 8-metil- -lipoic, care se comport ca antivitamin. Acidul lipoic constituie un factor necesar pentru sistemele enzimatice n care particip i vitaminele B 1, B2 i PP. Se folosete n tratamentele afeciunilor hepatice determinate de dereglarea metabolic a -cetoacizilor.

92 parte mai

8.2.3 din

Acidul pantotenic "Complexul de

O
-

Acidul pantotenic face

N O CH2 N O P OH H CH2 C C

NH2 N N

vitamine B", fiind unul din cei rspndii reprezentani. Denumirea s-a actual provine de la semnificaia cuvintelor greceti "pas pantos - peste tot", care reflect larga sa rspndire n natur, fiind prezent n toate organismele animale i vegetale. Are un rol biochimic nsemnat,
-

O P O

O P O

OH C

H N C H2 H2 C C

H N C H2

H2 C

SH

CH3 CH3 O
Acid pantoic

O - alanina

- mercaptoetilamina

Acid pantotenic

lund parte activ la numeroase procese metabolice din celule i esuturi. Din punct de vedere chimic, acidul pantotenic este alctuit din acidul , -dihidroxi-,-dimetil-butiric numit i acid pantoic, legat printr-o legtur peptidic de -alanin. nlocuirea -alaninei cu un alt aminoacid (Asp, Lys, Glu, -alanin, ornitin, etc.), determin formarea unor compui fr activitate vitaminic. Prin legarea acidului pantotenic la nivelul gruprii carboxilice a alaninei cu tioetanolamina se obine panteteina, care prin legarea de adenin-fosforibozopirofosfat formeaz coenzima A. Coenzima A (CoASH) este o molecul "central" a metabolismului. Prin reacia de hidroliz a compusului acetilat al ei, acetil-coenzima A, se elibereaz acetatul i o mare cantitate de energie (-7,5 kcal/mol). Aceasta nseamn c acetil-CoA are un nalt potenial de transfer al grupei acetil ceea ce justific denumirea de transportor de acetil dat CoASH. Coenzima A este capabil s transporte i alte grupri acil motiv pentru care este considerat transportoare de grupri acil. Prin hidroliz CoASH elibereaz urmtorii compui: panteteina (acid pantotenic - -mercaptoetilamina) care este un factor de cretere pentru pantetein fosfat care este un factor de cretere pentru bacteria Acetobacter suboxydans.

Lactobacillus bulgaricus, o bacterie care transform laptele n iaurt. -

Centrul activ al CoASH este gruparea tiolic aflat la captul unui "bra flexibil" 93 de cca. 1,9 nm constituit de pantetein - 4' -fosfat. Aceasta grupare tiolic este centrul de legare a gruprilor acil Acidul pantotenic se gsete n toate organismele vegetale i animale (pas pantos peste tot). n cantitate mai mare se afl n lptiorul de matc, drojdia de bere, fina de fasole, soia, arahide, conopid, migdale etc., n medie 4-40 g/g S.U.. n lptiorul de matc se gsete ntre 150-500 g/g, iar n produsele horticole coninutul variaz ntre 0,3-20 g/g. n regnul animal coninutul acidului pantotenic este mai ridicat dect la plante, avnd un coninut mediu cuprins ntre 8-60 g/g. Ficatul conine 25-60 g/g S.U., iar rinichiul 32-49 g/g S.U. n sngele uman, concentraia de acid pantotenic este de 18-34 g/100 ml, cu o medie la diferite specii de 20 g/100 ml, care scade n strile de caren. Necesarul zilnic de acid pantotenic al unui adult este de 8-12mg. 8.2.4 Nicotinamida, vitamina PP
COOH N Acid nicotinic C N Nicotin amid O NH2

n molecula niacinei i a niacinamidei este necesar prezena ciclului piridinic, n care N-1 s nu fie substituit, sau dac are un substituent, acesta s fie uor ndeprtat, deoarece prin intermediul azotului din poziia

l, se stabilete legtura acidului nicotinic cu celelalte componente care intr n constituia coenzimelor NAD+ i NADP+. De asemenea, este obligatorie prezena celor trei duble legturi conjugate din nucleul piridinic, deoarece prin saturarea total se transform n acid nipecotinic, iar prin saturare parial se obine guvacina, ambii compui fiind inactivi biologic. Coenzima lactat dehidrogenazei, enzima care catalizeaz dehidrogenarea acidului lactic, este nicotinamid adenin dinucleotidul (NAD+).
COOH HCOH + NAD
Acid lactic

COOH LDH + C O + NADH + H

+

CH3

Acid piruvic

CH3

Capacitatea coenzimatic a NAD+ se bazeaz pe proprietatea nucleului piridinic de a funciona ca un "canal" pentru electroni datorit existenei mai multor forme mezomere cnd acesta se gsete n stare redus. NADH + H + se mai numete i echivalent reductor. Dac poziia 2' a ribozei nucleotidului adeninic este esterificat cu H 3PO4 atunci compusul se numete nicotinamid adenin dinucleotid fosfat (NADP+) i, n stare redus, se mai numete putere reductoare. Echivalenii reductori rezult de obicei n cursul proceselor catabolice.

Puterea reductoare este utilizat n 94 special n reacii de biosintez. Denumirea de dinucleotid nu este precis deoarece nicotinamida nu este o baz tipic nucleotidelor. Plantele i unele animale pot nicotinamida din triptofan.
-

NAD(P)

O C NH 2 2H

H H

O C

NAD(P)H NH 2 + +H Nicotinamida redus

O O

O P O

CH2 N+ O OH OH N CH2 N O OH OH N

N R

NH 2 N

P s sintetizeze acidul nicotinic i O O

Principala surs de nicotinamid o reprezint proteinele bogate n Trp,

NADP Contine un radical PO 3
+ 2-

ca de exemplu cele din carne. Unele alimente ca cerealele nerafinate i drojdiile conin acid nicotinic. Porumbul este foarte srac n triptofan i acid nicotinic. De aceea persoanele a cror diet se bazeaz pe porumb ca principal surs de proteine pot s sufere de boala numit pelagr (piele aspr). De aceea niacinamida (nicotinamida) sau niacina (acidul nicotinic) se numete i vitamina antipelagroas sau vitamina PP. Pelagra este o boal care debuteaz cu pierderi de greutate, slbiciune, pierderea apetitului, depresii i iritabilitate. Mai trziu dac deficitul se menine apar simptomele tipice, demena, diareea i dermatita. n zonele expuse pielea este roie, aspr i solzoas. Limba este umflat i de culoare roie strlucitore, gura este dureroas, ntreaga mucoasa oral este inflamat. Vitamina PP se gsete sub diferitele sale forme structurale larg rspndit n natur att n organismele vegetale, ct i n cele animale. n plante coninutul vitaminelor piridinice este mai mic dect la animale. Exist totui surse vegetale, ca drojdia de bere, care conin o cantitate mai mare de acid nicotinic, fapt ce a determinat utilizarea acestor surse n tratamentul pelagrei. ntr-o drojdie selecionat folosit la fabricarea berii, s-a gsit acid nicotinic cu un coninut de 106 mg/100 g S.U., iar n drojdiile folosite la fabricarea pinii, 30 mg/100 g S.U.. Mamiferele conin n general 4-5 mg/100 g esut proaspt. Dintre organele mai bogate n vitamina PP fac parte ficatul (16-17 mg%), rinichiul (7 mg%), inima (5,5 mg%). Nicotinamida se afl n cantitate mai mare n drojdii, trele i germenii cerealelor, fina de mal, iar n cantiti mai reduse n varz, nuci, morcovi, spanac, castravei, mazre, cartofi etc. Laptele, vinul i berea sunt srace in aceast vitamin. Coninutul mai ridicat de vitamin n

fina de casein lactic se explic prin adsorbia vitaminei PP de proteine n coagularea 95 laptelui n mediu acid, iar coninutul extrem de redus n unt se datoreaz insolubilitii vitaminei n grsimi. Coninutul vitaminei PP n sngele total este de 0,4-0,8 mg/100 ml, n eritrocite 1,3 mg%, iar n plasm de 0,025-0,15 mg%. Valori sub 0,5 mg% n snge apar n stri careniale. Necesarul de nicotinamid pentru un adult este de 10-20 mg/zi. 8.2.5 Riboflavina, vitamina B2 de la de
N Izoaloxazina O H N H N

Sub aspect structural este format dintr-un nucleu izoaloxazinic i ribitol (6,7-dimetil9-(D-1'-ribitil)-izoaloxazina) care i provine i riboflavin. Ribitolul este un polialcool cu leag prin N-9 de nucleul izoaloxazinic. Sub aspect chimic, riboflavina este un derivat al izoaloxazinei, avnd ca substitueni dou grupri metil la C-6 i C-7, iar la N-9 un ribitil. Nucleul izoaloxazinic are o structur triciclic, fiind format dintr-un ciclu benzenic (I), H3C cu 2 metili substituii la C-6 i C-7, un heterociclu hexagonal (III), care conine dou grupri cetonice la C-2 i C-4 i doi heteroatomi de azot n poziiile
H3C
7 6 8 1'

O NH

O NH

numele

N Aloxazina O

C-5 i conine 4 grupri hidroxilce, care deriv de la riboz. Radicalul su numit ribitil, se

OH CH2 N 9 II N 10
2'

OH
3'

OH
4'

OH
5'

CH

CH

CH

CH2

N 1

O 2 III 3 4 NH

Riboflavina

N-1 i N-3, precum i un heterociclu hexagonal central (II), format prin unirea ciclurilor I i III, prin intermediul atomilor de azot N-9 i N-10. Nucleul izoaloxazinic este format astfel din trei cicluri condensate dintre care dou (II i III) sunt heterocicluri cu azot, iar unul (I) este homociclu benzenic. D-ribitilul imprim riboflavinei solubilitatea n ap, stabilitate, activitate optic i capacitatea de esterificare cu acidul fosforic, pentru formarea coenzimelor active (FMN i FAD). Coenzima succinat dehidrogenazei, enzima care catalizeaz dehidrogenarea acidului succinic, este flavin adenin CH2 COOH dinucleotidul (FAD). Dup cum se CH2 COOH poate vedea FAD-ul poate exista att acid succinic
+ FAD SDH HOOC + FADH2 H C COOH acid fumaric C H

sub form oxidat 96 ct i sub form redus Datorit abiliti FADH2. acestei FAD-ul
-

NH 2 AMP O O O P O OH OH N N O H3C N N N NH O
+2[H]

N O NH N H O

N CH2 O

H 3C H 3C

H N N R

este considerat un -O P H OH H3C trasportor de O CH2 CH2 C hidrogen. Vitamina B2 este larg
FMN C C OH H OH H

Flavina

Ribitol

rspndit n natur fiind prezent n toate celulele organismelor vegetale, animale, precum i n microorganisme. Coninutul vitaminei B2 din esuturile verzi este relativ ridicat, variind de la 2,5 la 25 g/g. Cele mai bogate produse horticole n riboflavin, sunt migdalele, alunele, ciupercile, ptrunjelul, elina. La plantele superi-oare, vitamina B2 se gsete n canti-tate mai mare n plantule, semine n stare de germi-nare, polen, frunze tinere, n general n esuturile meriste-matice. Plantele dei nu conin cantiti mari de riboflavin, au un rol important n aprovizionarea organismelor animale cu aceast vitamin datorit volumului mare al produselor vegetale din hrana omului i a animalelor. Cantiti mari de vitamin, B 2 conin bacteriile anaerobe i drojdiile cu mare putere de fermentare, n medie 3 mg/100 g, La mamifere ficatul, rinichiul, inima, splina, creierul sunt organe n care riboflavina se gsete n cantiti mai mari 1-3 mg%. Animalele superioare nu sintetizeaz riboflavina. Riboflavina provenit prin hidroliza alimentelor sau a flavin enzimelor n stomac, se absoarbe la nivelul intestinului subire, att n stare liber ct i sub form de ester monofosforic. Fosforilarea riboflavinei se realizeaz la nivelul mucoasei intestinale cu formare de flavin mono nucleotid (FMN). Srurile biliare i acidul clorhidric favorizeaz procesul de absorbie a riboflavinei. Riboflavina din produsele animale este mai uor absorbit dect cea din produsele vegetale. Dup absorbie FMN este transportat cu ajutorul unor albumine serice la ficat, unde are loc formarea FAD-ului.

n forma lor redus, FADH2 i FMNH2 se numesc tot echivaleni reductori. Hipovitaminoza riboflavinic se ntlnete de obicei asociat cu alte hipovitaminoze B. Deficiena la om se ntlnete foarte rar, ntr-o alimentaie foarte srac n proteine. Ea se manifest prin simptome asemntore pelagrei i prin dureri de picioare, ncetarea creterii, alopecie, conjunctivite, fotofobie, etc.. Tulburrile la nivelul gurii se manifest prin apariia cheilozei (inflamarea, eritemul i fisurarea colurilor gurii), stomatite angulare, inflamarea i nroirea limbii (limba magenta), glosodinie (dureri ale limbii), etc.. Necesarul zilnic de riboflavin pentru aduli este de 1,6 mg. 8.2.6 Piridoxina, vitamina B6. Piridoxina este un derivat de piridin substituit la C-2 cu o
HO H3C N HO H3C HO H3C

CH2OH

97

CH2OH
Piridoxin (Piridoxol)

CHO CH2OH
Piridoxal

CH2NH2 CH2OH
Piridoxamina gruparea OH care se poate esterifica cu H 3PO4

grupare metil, la C-3 cu o grupare hidroxil, iar la C-4 i C-5 cu cte o grupare hidroximetil. Sub aspectul structurii chimice piridoxina este 2-metil-3-hidroxi-4,5-dihidroximetil-piridina. Vitamina B6 natural este format din trei derivai piridinici care difer ntre ei prin gruprile funcionale legate de C-4, piridoxina sau piridoxolul are grupare alcoolic (C-4CH2OH), piridoxalul are grupare aldehidic (C-4-CHO), iar piridoxamina are grupare aminic (C-4-CH2-NH2). Piridoxina predomin cantitativ n organismele vegetale, iar piridoxalul i piridoxamina n organismele animale. Hidroxilului fenolic de la C-3 al piridoxinei reacioneaz cu reactivul 2,6-diclorchinonclorimida, dnd o coloraie albastr, fapt ce indic c hidroxilul de la C-3 este n stare liber. Metileterul vitaminei B6 nu reacioneaz cu tetraacetatul de plumb, fapt ce confirm c gruprile hidroximetilice se gsesc la C-4 i C-5 nu n poziiile sau a nucleului piridinic. Metilul de la C-2 este n poziie n raport cu azotul din heterociclu. Aceste elemente structurale i poziia lor n molecul au fost confirmate prin sinteza piridoxinei din etoxiacetilaceton i cianoacetamid. aminoacizilor. Concret, gruparea amino a acidului glutamic a fost
HO N PLP HO H3C
Piridoxal kinaz MgADP

CHO CH2OH N
Piridoxal MgATP

CHO CH2

O P O
-

OH

Reaciile de transaminare sunt implicate n metabolismul H3C

transferat pe scheletul acidului oxalacetic 98 rezultnd acid aspartic i acid alfa cetoglutaric. Ea este catalizat de o enzima din clasa aminotransferazelor, numit glutamic oxalacetic transaminaza (GOT). Aceast enzim are drept coenzim piridoxal fosfatul (PLP). De asemenea tirozin decarboxilaza din bacteriile care produc fermentaia lactic i pierde activitatea dac mediul de cultur nu conine piridoxin. PLP este deci coenzim i pentru enzimele din clasa decarboxilazelor ale cror substraturi sunt tot aminoacizii. PLP i piridoxamin fosfatul (PMP) se sintetizeaz n citoplasm din piridoxal, piridoxamin i ATP sub aciunea catalitic a kinazelor. Atunci cnd substratul lipsete dar este prezent enzima, gruparea aldehidic a PLP se condenseaz cu un radical de lizin din catena enzimei formnd o baz Schiff "intern". Atunci cnd n centrul activ al enzimei ptrunde un -aminoacid, gruparea amino a acestuia va deplasa gruparea amino a radicalului lizil formnd o baz Schiff substrat-coenzim. Mecanismul transaminrii implic o etap a dezaminrii oxidative a -aminoacizilor (cu formare de -cetoacizi) urmat de o alt etap care ncheie procesul de transaminare. Baza Schiff substrat-coenzim (legat la apoenzim prin puntea salin) avnd la nceput o structur de aldimin pierde un proton dnd natere unei cetimine. Aceasta hidrolizeaz i d natere HO H3 C + N H HO H3 C .. N H HO H3 C H+ R C N CH
apoenzima Lys (CH

NH
2)4

apoenzima

CH C

N CH HO H3 C H R C H3 N+ H R C N CH CH2 N
Aldimin

O CH2 P O- + OH H3 N H C H3 N+
apoenzima

punte salin

COONH

COO-

(CH2)4 CH COO
-H

punte salin

3N

O P OH

punte salin

O- +H3N

H+ COO-

Cetimin

H2O, H+ R C

H2O, H+ COO - cetoacid

O + NH2 CH2

apoenzima

Piridoxamin fosfat

cetoacidului (produs) i coenzimei piridoxamin fosfat. Aceasta din urm se condenseaz cu 99 cetoacidul (substrat) formnd baza Schiff cu structura de cetinin care, prin protonare, revine n starea de aldimin. Aldimina prin hidroliz formeaz PLP-enzim i aminoacidul (produs). Reacia global, catalizat de PLP (PMP) - enzim este deci: R-CH(NH2)-COOH + R'-CO-COOH R'-CH(NH2)-COOH + R-CO-COOH Deficiena de vitamine B6 apare rar. Exist un numr mare de substane care sunt utilizate ca medicamente i care pot induce carena de piridoxal. Izonicotil hidrazida (izoniazida) unul din cele mai eficiente medicamente antituberculoase inhib piridoxal kinaza, enzima care fosforileaza piridoxalul n citoplasma celulelor. Ea se condenseaz cu piridoxalul formnd o hidrazon care blocheaz kinaza. Concentraia enzimei n micobacterii este mic iar blocajul ei inhib dezvoltarea microbian. Vitaminele B6 sunt larg rspndite n organismele vegetale i animale. Sursele cu coninut ridicat de vitamine B6 sunt: drojdia de bere, coaja bobului de orez, polen, seminele cerealelor, ficatul animalelor, carnea de pete, glbenuul de ou etc. Capacitatea de depozitare a vitaminelor hidrosolubile n organism este mult mai mic dect a vitaminelor liposolubile. Cantiti mici de piridoxin se gsesc n toate esuturile. n cantiti mai mari piridoxina se gsete n ficat, muchi, inim, rinichi i creier. Coninutul normal al piridoxinei din snge este ntre 0,5-3 g/100 ml, iar n ser 3 - 8 g/100 ml. O bun parte din piridoxin se gsete n organism sub form de coenzime active cum sunt piridoxalfosfatul i piridoxaminfosfatul. Coninutul piridoxalfosfatului din serul oamenilor aduli este n medie de 1,2 g/100 ml, iar la copii de 0,9 g/100 ml. La femei, n perioada graviditii scade pn la 0,25 g/100 ml. Necesarul de piridoxine pentru aduli este de 1-2 mg/zi. 8.2.7 dou biotine Biotina, vitamina B7
O HN NH CH S CH COOH S HN

Sub aspect structural se cunosc naturale, cu activitate vitaminic, numite i respectiv biotina. Ele sunt substane izomere avnd aceeai formul prin molecular, punctul de dar se deosebesc topire,

O NH (CH2)4 COOH

-Biotina CH3 CH3

-Biotina

100 activitatea optic i structura catenei laterale. Biotina extras din ou s-a numit -biotin, iar cea extras din ficat -biotin. Ambele biotine au o structur complex, fiind formate prin condensarea unui heterociclu imidazolic (a), cu un ciclu tiofenic (b), la care se gsete o caten lateral de acid valerianic pentru biotin i respectiv acid izovalerianic, pentru -biotin. Biocitina, care se abine prin combinarea biotinei cu lizina, este unul din cei mai activi derivai ai biotinei. Ea a fost izolat sub form cristalin din extractele hidrolizate de drojdie este de 150 de ori mai activ dect biotina n creterea speciei Micrococcus sodonensis, dar inactiv la Lactobacillus arabinosus. Biotina este gruparea prostetic a mai multor carboxilaze, enzime care catalizeaz carboxilarea unor metabolii. Carboxilarea piruvatului are loc n dou etape: a) carboxilarea biotinei prin care rezult carboxi-biotin-enzima, un intermediar activat. Aceast etap necesit H2CO3, ATP i Mg2+. b) transferul CO2 de la carboxibiotin- enzim la un substrat. Reaciile de decarboxilare sunt spontane, mult deplasate spre dreapta. Cuplarea cu clivajul ATP face ca reacia invers, cea de carboxilare, s devin suficient de intens. Ca i acidul lipoic, biotina este ataat la apoenzim printr-o legtur amidic format
O HN NH O O Mg
2+ -

S O
-

(CH2)4 C O

O Pi

C O N O NH (CH2)4 C O

P O C O
-

ATP + HCO 3

Enzima

ADP O

HN

S NH

Anhidrida fosfo-carbonic

Enzima Biotina

S O C NH O C C
Radical de Lys Biocitina

cu radicalul Lys. "Braul flexibil" dintre ciclul biotinei i catena polipeptidic a apoenzimei, permite o "pendulare" a ciclului ntre centrul care conine anhidrida fosfocarbonic, unde capteaz CO2, i centrul care conine substratul unde i
H N H

Catena peptidic

cedeaz acestuia CO2 pentru a forma o grupare carboxilic. Din acest motiv biotine poate fi 101 considerat drept un transportor de dioxid de carbon. La om biotina este parial furnizat de flora saprofit intestinal. Biodisponibilitatea biotinei din alimente depinde de natura acestora. Fina de porumb i de soia cedeaz biotina ns fina de gru nu o cedeaz. Glbenuul de ou este o excelent surs, dar albuul nu cedeaz biotina deoarece conine o glicoprotein, "avidina", care o leag foarte puternic biotina mpiedicnd absorbia intestinal a acesteia. Avidina fiind termolabil, ea se distruge prin fierbere. Deci deficitul de biotin poate apare la persoanele care consum multe ou crude. Simptomatologia se caracterizeaz prin dermatit generalizat, cderea prului i secreie exagerat a glandelor sebacee. Legarea covalent a biotinei la catenele polipeptidice ale carboxilazelor este catalizat de holocarboxilazo-sintetaz. Deficitul acestei enzime determin acumularea substraturilor acestor carboxilaze (piruvat, propionat) n urin. Biotina este una din vitaminele cele mai rspndita n produsele alimentare naturale, neprelucrate industrial. Glbenuul de ou (300g/100g), rinichii(150g/100g), carnea de

ficatul(250g/100g),

drojdiile(6,5g/100g),

cojile

cerealelor(5g/100g),

morun(8g/100g)etc., reprezint surse importante de biotin. Biotina este larg rspndit n organismele animale, vegetale i n microorganisme. n plante, cu excepia boabelor de cereale i a nucilor, biotina se gsete predominant n stare liber, solubil n ap, n timp ce n carne, drojdii, nuci, cojile cerealelor se gsete predominant sub form de complexe proteice, insolubile n ap. Necesarul zilnic de biotin pentru un adult este de 100-300 g. 8.2.8 Acidul folic n anul 1911 a fost izolat din frunzele de spanac un factor care stimuleaz creterea microorganismului Lactobacillus casei. Acestui factor i s-a dat denumirea de acid folic sau
N H2N N
Pteridina PABA Glu

OH N3
2 4 1

N
5

vitamina B9. Acidul folic are o structur fiind complex,

OH N N

H 2N R

N
NADPH+H

N
+

6 7

CH2 OH N

10

N H N

CO

NH
+

CH CH OH 2 H CH2 N

COOH

NADP

H 2N

R R N H Acidul folic C H2 COOH C H2 + N N N NADP H2N H H Acidul tetrahidrofolic

NADPH+H

Acidul folic

Acidul dihidrofolic

H C N N H

CH2

NH

N5 - formiltetrahidrofolat

format dintr-un nucleu pteridinic, o molecul de acid p-aminobenzoic (PABA) i una de acid 102 glutamic. Legtura dintre nucleul pteridinic (pterin) i acidul p-aminobenzoic se realizeaz printr-o punte metilenic, iar legtura dintre acizii p-aminobenzoic i glutamic se face printr-o legtur peptidic. Pteridina are o structur biciclic fiind format dintr-un nuclea pirimidinic i unul pirazinic. Ea contribuie la formarea pterinei (2-amino-4-hidroxi-6-metil-pteridina), care mpreun cu acidul p-aminobenzoic formeaz acidul pteroic, iar prin ataarea unui rest de acid glutamic (Glu) se obine acidul pteroilmonog1utamic, respectiv acidu1 folic. Acidul folic poate avea fixat la N-5 din inelul pteridinic un radical formil i se satureaz dublele legturi din inelul B cu 4 atomi de hidrogen. Acidul folinic este un derivat tetrahidrogenat al acidului folic, cu denumirea de acid N-5-formil-5, 6, 7, 8-tetrahidropteroil-glutamic. Acidul folinic are un rol important n reaciile de formilare, de. fixare i transfer a gruprilor C1 (formil, hidroxiformil, metil, metilen, metin, etc.). Spre deosebire de plante sau bacterii, celulele animale nu pot sintetiza acidul PABA i nici nu pot ataa glutamatul de acidul pteroic (pteridin - PABA). Principala surs de acid folic sunt frunzele plantelor. Forma coenzimatic este acidul tetrahidrofolic (FH4) rezultat prin reducerea cu NADPH a acidului folic rezultat prin hidrogenare cu putere reductoare. FH4 transport gruprile: metil, metilen, metenil, formil i formina. Principala surs de grupri C1 este serina.
H N N H CH2 N CH3 N N H

Ser + FH4 Gly + N5, N10 metilen FH4 + H2O

CH2 CH2 N + N N H CH CH2 N H N N H CH2 H N C O

N10 - metiltetrahidrofolat

N5, N10 -metiltetrahidrofolat

N5,N10 - metenil tetrahidrofolat

N10 - formiltetrahidrofolat

Acidul folic i derivaii acestuia au o larg rspndire n alimente. Se gsesc n cantitate mai mare n ficatul animalelor, n frunzele plantelor superioare, n special n spanac, n mazre, germenii de gru, drojdii, sfecl, lmi. Cele mai mari cantiti de acid folic i de folai se gsesc n regnul animal, n ficatul de bou se gsesc 290 g%, n ficatul de pui 370 g%, iar n cel de porc 220 g% acid folic. Cerealele conin n medie 35 g%, iar dintre fructe lmile 80 g%, bananele 30 g%, portoealele 23 g%. Legumele au un coninut mai redus, fiind cuprins ntre 8 i 25 g%. O bun parte din acidul folic este sintetizat de flora intestinal, fapt ce ngreuneaz stabilirea necesitilor pentru om i animale.

acid apariia

OH OH H H H H O CH2 N N

Carena n folic la om,

N N NH 2

NH 2 CONH 2 CO CH2 NH 2 CO CH2 H CH3 CH2 CH2 H CH3 C C C N C C C N C C Co N C C C CH3 C C CH3 CH3 CH2 CH2 H O C CH2 NH 2

103

determin anemiei

5'- Dezoxiadenozil

macrocitare megaloblastoz. degradare anemiei, apar a

asociat Se produce procesului

cu

CN C
2+

o HC 3 C de
H 2C

N C C

CONH 2

hematopoiez care determin apariia agranulocitozei ulceraii, i glosite, trombocitopenie. Ca efecte secundare, infecii, neuropatii periferice. Necesarul zilnic de acid folic i folai pentru un adult este de 5 g. 8.2.9 Ciancobalamina, vitamina B12

H2C CH3 C C NH CH2 HC O P CH3 O

O H CH2 CH3 CH3 CO NH 2 O OH CH2O OH OH N N CH3 CH3

Ciancobalamina sau factorul extrinsec, are un nucleu porfirinic modificat, numit nucleu corinic, coninnd ionul Co2+ n centru, o ribonucleotid ce are ca baz azotat 5, 6dimetilbenzimidazolul, aminopropanol i anionul cian. Totui, cianul este de fapt un ion provenit din tehnica de izolare, fiind cunoscui compleci asemntori i cu ali ioni, ca: azotit, sulfit i hidroxid. Vitaminele B12 care ndeplinesc rolul de coenzime se prezint sub mai multe forme structurale diferite, dintre care cele mai importante sunt 5-dezoxiadenozincobal-amina a i metilcobalamina. n cele dou forme coenzimatice gruparea cian este nlocuit cu mutazei) este singurul compus biologic cu legtur covalent carbon-metal. Vitamina B12 este sintetizat exclusiv de ctre flora intestinal i absorbia ei intestinal este mediat de receptori, situai n mucoasa ileal, prin care transportul (absorbia) se face numai dac cobalamina este asociat cu o glicoprotein numit factor intrinsec. La traversarea mucoasei ileale factorul intrinsec este eliberat, iar cobalamina este transferat pe o 5dezoxiadenozina i respectiv cu gruparea metil. Coenzima B12, (coenzim a metilmalonil CoA

protein plasmatic de transport numit transcobalamina. Metilarea homocisteinei este o 104 reacie care utilizeaz metilcobalamina drept coenzim i CH 3-FH4 ca sursa de metil. Ea este catalizat de homocistein metiltransferaz. n aceast reacie apoenzima leag cobalamina care accept gruparea metil de la CH3-FH4. Apoi, metilcobalamina cedeaz homocisteinei gruparea metil. n absena cobalaminei aceast reacie nu se produce iar CH3-FH4, se acumuleaz. Datorit acestei strnse corelaii metabolice dintre cobalamin i acidul folic, este dificil s se precizeze carena vitaminic primar. Unul din principalele efecte ale carenei de FH 4 este dereglarea hematopoiezei. Att n anemia pernicioas, determinat de deficiena de vitamina B 12, ct i n deficiena de FH4 apare anemia megaloblastic. Dintre sursele alimentare folosite de om mai bogate in vitamina B 12 sunt ficatul (35 50 g/100 g s.u.), rinichiul (15 - 20 g/100 g), carnea (5 g/100 g), oule (3 g/100 g) i laptele (2 g/100 g), restul alimentelor au un coninut foarte mic de vitamin. Ficatul de viel, ficatul petilor i al crustaceelor conine aproximativ 2,4 ppm s.u. Un coninut relativ mai mare de vitamin B12 se gsete de asemenea n splin i n culturile unui mare numr de actinomicete i bacterii. n plantele superioare coninutul vitaminei B12 este extrem de redus. Necesarul de vitamin B12 pentru un adult este de 3 g/zi. 8.2.10 Acidul ascorbic, vitamina C
COOH C C HC HO CH CH2OH
Acidul 2,3 - dienol - L -gulonic

Vitamina C se mai numete acid ascorbic, vitamin antiscorbutic, factor antiscorbutic etc. Este cea mai veche i mai bine cunoscut vitamin, n lipsa creia din hran apare la oameni boala numit scorbut. Acidul ascorbic sub aspect structural este -lactona acidului 2,3dienol-L-gulonic, ce se formeaz din acidul 2-ceto-gulonic. Vitamina C dei este un acid hexozic monocarboxilic nu are gruparea carboxilic liber deoarece este blocat sub forma unei legturi lactonice. Caracterul acid al

OH OH OH

vitaminei C este determinat de gruprile -OH enolice, de la atomii de carbon C-2 i C-3, al 105 cror atom de hidrogen poate fi uor substituit cu metale. Structura molecular a vitaminei C se caracterizeaz prin prezena, a dou grupri -OH enolice vecine, la C-2 i C-3, ntre care exist o dubl legtur, prezena unei grupri alcoolice primare la C-6 i a unui hidroxil secundar la C-5 n poziie L, un ciclu furanic cu funcie lactonic format ntre atomii C-1 i C-4 i o caten lateral format din 2 carboni, legat de C4. Vitamina C reprezint deci -lactona acidului L-gulonic, care conine o grupare caracteristic en-diol la C-2 i C-3. Vitamina C are atomii de carbon C-4 i C-5 asimetrici i se poate prezenta sub forma a doi izomeri optic activi i doi izomeri structurali L i D, dintre care numai izomerul L prezint activitate vitaminic, iar izomerul D este inactiv. Vitamina C are o larg rspndire n natur fiind biosintetizat att de organismele vegetale ct i de cele animale (cu excepia omului, maimuei i cobaiului), ct i de numeroase microorganisme. Vitamina C are un rol foarte important n organism ntruct are pronunat caracter antioxidant. Protejeaz de degradri oxidative numeroase substane biologice active, stimuleaz sistemul imunitar, biosinteza colagenului i a acizilor folici, secreia unor hormoni steroidici i a unor transmitori neurotisulari, previne formarea nitrozaminelor n stomac, ia parte n metabolismul aminoacizilor, glucidelor, acizilor grai, fierului, hemoglobinei i a altor substane. Una din funciile biologice fundamentale a vitaminei C la om i la animale o constituie reglarea formrii i meninerii activitii colagenului n matricea oaselor, cartilajelor, dentinei, endoteliului vaselor, n esutul fibros, a matrixului intercelular i a esutului mezenchimatos. n caren de vitamina C celulele nu mai pot produce substane intercelulare ca oseina, clentina, colagen. Aciunea vitaminei C se exercit n special asupra fibroblastelor care biosintetizeaz colagenul. Vitamina C are un rol fundamental n formarea i meninerea integritii matricei intercelulare. Celulele din esuturi sunt incluse ntr-o substan fundamental vscoas (matricea intercelular), format predominant din glicoproteine, mucopolizaharide, glucozamine. Aceast substan vscoas, izoleaz celulele de mediul ambiant. Moleculele din masa vscoas (glicoproteine, proteoglicani, glucozaminoglicani etc.) se unesc i formeaz cu fibre colagen o structur tridimensional, care reprezint un adevrat mediu

intern. n caren de vitamin C scade formarea colagenului, transformarea prolinei n 106 hidroxiprolin (vitamina C fiind cofactor al prolinhidroxilazei) i formarea tropocolagenului, care prin procese de hidroxilare i fixare intercatenar se transform n colagen matur. Vitamina C are un rol important n calcifierea dinilor, n creterea tonusului muchilor netezi i n scderea contractibilitii muchilor striai. Mrete rezistenta organismelor la oboseal, frig, infecii, intoxicaii, cancerizare etc. Fumatul reprezint un factor de risc, care mrete deficienele n coninutul vitaminei C. Fiecare igar micoreaz rezervele de acid ascorbic n organism deoarece consum o anumit cantitate din aceast vitamin. Starea precarenial se manifest prin oboseal, slbirea organismului, insomnii, iritabilitate, slbirea rezistenei la infecii. Deficienele mai mari n acid ascorbic determin apariia scorbutului care este o boal caracteristic acestei avitaminoze. Simptomele scorbutului sunt multiple, de la anemie i astenie marcat, la hemoragii cutanate, musculare, subperiostale, urmate de inflamaii i dureri n oase, pierderea dinilor, oprirea creterii, tulburri n structura sistemului muscular i nervos etc n cantitate mai mare, acidul ascorbic se gsete n fructele citrice (lmi 30-80 mg%, portocale 40-80mg%, mandarine 30-45 mg%), mcee 120-800 mg%, coarne 50-60 mg%, coacze negre140-300 mg%, fructe de ctin, nuci necoapte, mere etc. Coninutul vitaminei C din plantele ierboase scade odat cu maturarea i mbtrnirea acestora. n plantele uscate, cantitatea de acid ascorbic este mult redus. n organismele animale, cantitatea de acid ascorbic variaz n funcie de organ i esut. Un coninut ridicat n acid ascorbic l au glandele suprarenale, hipofiza, ficatul, rinichii etc. n suprarenalele de bou, acidul ascorbic se gsete n cantitate de 150-270 mg%, iar la porc de 90-200 mg%. La om coninutul acidului ascorbic variaz n funcie de vrst, avnd valori de 30 mg% pn la vrsta de un an, 20 mg% ntre 1 10 ani, iar la batrnee pn la 5 mg%. O cantitate mai nsemnat de acid ascorbic se gsete i n zona peridentar, n cristalin i cornee acidul ascorbic inhib evoluia cataractei. Coninutul mediu al acidului ascorbic depozitat n corp este de 20 mg/kg greutate corp.
O
Acid L-ascorbic

CH2OH H OH OH OH 2H

O O

H CH2OH H OH O

Acid L-dehidroascorbic

Coninutul n acid ascorbic din diferite organe i esuturi este cu att mai mare cu107 ct activitatea metabolic a acestora este mai intens. Necesarul zilnic de vitamin C pentru un adult este de 50-70 mg.

8.3 Vitamine liposolubile

8.3.1 Vitaminele A
CH3CH3
17

Din punct de vedere chimic, vitamina A1 este un alcool ce are n molecul un inel -iononic hidrocarburic, o caten lateral format din nou atomi de carbon, conine cinci duble legturi conjugate i cinci radicali metili. Prile structurale caracteristice sunt: nucleul -iononic; gruparea alcoolic primar s-a identificat prin reacia de formarea a retinalului, printr-o oxidare blnd; cinci duble legturi (una

CH3CH3
2 3 6 4 5 1

16

19

CH3

CH3

7CH 8 9 3 10 18

O 20 CH3 C 15 H CH2OH Retinal 11 13

12 14

CH3

CH3

Retinol, Vitamina A 1

CH3CH3

CH3

CH3 COOH

CH3

Acid retinoic

n ciclul -iononic i patru n catena lateral), care prin hidrogenare catalitic se poate hidrogena; dou grupri metil din catena lateral se pun n eviden prin formarea a dou molecule de acid acetic, n urma degradrii catenei laterale prin oxidare cu
CH3CH3 CH3 CH3 CH3 -Caroten CH3

permanganat de potasiu n mediu bazic; trei metili fixai pe inelul -ianonic de la C-16,
CH3

CH3

CH3CH3

C-17, C-18, se pun in eviden prin formarea a trei molecule de acid acetic. Vitamina A1 (1,1,5-trimetil-6-(15-hidroxi-9,13-dimetil-nona-7,9, 11, 13-tetraenil)ciclohexen-5) se formeaz n organismul omului i al animalelor prin scindarea oxidativ a catenei interne a carotenoidelor provitaminice, care conin n molecul cel puin un ciclu iononic nesubstituit n urma oxidrii carotenoidelor provitaminice A, se formeaz iniial retinalul, care prin reducere se transform n retinol. Acesta se va esterifica cu acizi grai, acid palmitic, stearic etc. i se va depozita, n cea mai mare parte n ficat, restul circulnd prin snge i limf cuplat cu proteine i lipoproteine. O foarte mic cantitate de vitamina A 1 se depune n esutul adipos, rinichi, derm, organe genitale, ochi etc. Vitamina A1 conine o grupare alcoolic primar, la C-15, n poziie trans i are o configuraie all-trans (adic trans-trans).

108 Vitamina A2 are dou duble legturi conjugate n inelul -iononic una situat ntre atomii de carbon C-5 i C-6, la fel ca i la retinol, iar cea de a doua dubl legtur se gsete petilor de ap dulce.

CH3CH3

CH3

CH3 CH2OH
Vitamina A 2

CH3

ntre atomii de carbon C-4 i C-5. Vitamina A 2 se gsete n cantitate mai mare n ficatul Vitaminele A sunt necesare n general n procesele de cretere i n particular unor procese ale vederii, reproducerii, n integritatea epiteliilor. Deficitul de vitamine A determin numeroase simptome la oameni cum ar fi xeroftalmie retardare n cretere, sterilitate masculin, incapacitatea de a vedea n lumin crepuscular. n celulele-bastonae din retin 11cisretinalul se asociaz specific la proteina vizual numit opsin pentru a forma rodopsina. Cnd rodopsina este expus la lumin ea disociaz (i se decoloreaz) n opsin, protein vizual i trans-retinal. Aceast reacie este nsoit de declanarea impulsului nervos ceea ce se traduce n percepia de imagini n sistemul nervos central. Cele mai bogate surse de vitamine A de origine animal le formeaz uleiul de pete (2,5-40 mg%). Laptele i derivatele acestuia, n special untul i glbenuurile oulor reprezint i acestea surse importante de vitamine A. Cele mai importante surse de carotenoide provitaminice A le constituie morcovii (6-8 mg%), fructele de ctin i mceele (6-7 mg%), fructele citrice (5 mg%), florile i fructele de bostan (4-5 mg%), spanacul i varza (3-4 mg%), ardeiul i polenul (2-3 mg%). Cantitatea cea mai mare de vitamina A 1 se gsete n grsimea din ficatul petilor marini (60 mg/100 g), procurat sub form de ulei de pete sau untur de pete. Necesarul zilnic de vitamine A pentru un adult este de 1,5-2,5mg (5000-8300 UI). 8.3.2 Vitaminele D
19 18 2 3 1 12 11 13 14 9 8 10 6 7 21

Toate vitaminele D au o grupare hidroxilic liber la C3 din inelul A, inelul B deschis, cu trei duble legturi
CH2

CH3

CH3

HO

4 5

20 22 17 16 23 15 24 28 25 CH3

H3 C

26

27

CH3

Vitamina D 2 (Calciferol)

conjugate, un nucleu indanic i o caten lateral legat la C-17 a nucleului indanic, 109 caracteristic fiecrei vitamine. Catenele laterale ale vitaminelor D se deosebesc ntre ele prin numrul atomilor de carbon i prin prezena sau absena unei duble legturi. Dintre vitaminele D, putere biochimic mai mare o au vitaminele D2 i D3. Vitamina D7, are o putere vitaminic de 10 ori mai mic dect a vitaminei D3. Puterea vitaminic depinde att de structura molecular a vitaminelor ct i de speciile asupra crora acioneaz. Dublele legturi conjugate din inelul B deschis HO sunt situate ntre atomii de carbon C-10 - C-18; C-5 - C-6; C-7 - C-8, iar la nivelul catenei laterale ntre atomii C-22 i C-23. La unele vitamine de atomul C-24 se leag un metil (D 2), respectiv un radical etil (D6). Captul terminal al catenelor laterale este ramificat,
CH2 C OH CH2 HO
1,25 - Dihidroxi-colecalciferol (Calcitriol)

terminndu-se n izopropil. Toate vitaminele D deriv din steroli i toate au acelai schelete de baz. Ele difer una de alta prin catena lateral, HO care n funcie de numrul atomilor de carbon, a
HO

Vitamina D3 (Colecalciferol)

substituenilor pe care i conin, prin prezena sau absena unei duble legturi, dau caracterul particular i specific al vitaminei respective. Toate vitaminele D au aciune antirahitic, dar se

O OH CH3

CH2 Vitamina D7

HO
Vitamina D6

deosebesc ntre ele prin intensitatea acestei aciuni, care la rndul ei depinde de felul catenei laterale i de specia asupra creia acioneaz. Astfel, vitamina D3, este mai activ la om dect vitamina D2, dar ambele au aceeai eficien vitaminic asupra obolanilor. Vitamina D2, are o activitate vitaminic de aproximativ 1 000 de ori mai mic asupra puilor de gin dect asupra copiilor. Activitatea vitaminic comun a tuturor vitaminelor D este determinata de prezena nucleului indanic, a hexaciclului A i a celor trei duble legturi conjugate din inelul deschis B. Esterii vitaminelor D sunt inactivi, fapt ce confirm c gruparea HO liber contribuie la stabilirea activitii vitaminice. Vitaminele D2 i D3 de origine alimentar, iniial prezente n micele intestinale, sunt absorbite n intestinul subire proximal. Indiferent de origine, n snge ele circul legate de o

globulin specific. Ajungnd la ficat ele sunt hidroxilate n poziia 25. Enzima este o 25110 hidroxilaz aflat n microzomii hepatici. 25-hidroxi-colecalciferolul nu are o aciune direct asupra esuturilor int ale vitaminei D. El este principala form circulant a vitaminelor D. O important parte a ei sufer un circuit enterohepatic. n tubulii renali, os i placent exist o 1hidroxilaz care hidroxileaz 25-hidroxi-D3 n poziia 1 rezultnd 1,25-dihidroxiD3(calcitriol), vitamina D activ. n aceleai esuturi i n intestin exist o 24-hidroxilaz care produce 24,25-dihidroxiD3. La calcemie normal nivelele 1,25- dihidroxi-D3 i 24,25dihidroxi-D3 sunt aproape egale. Producerea 1,25- dihidroxiD3 este reglat de parathormon, fosfatemie i de propriul nivel. Calcitriolul este singura form a vitaminei D care, n cantiti fiziologice este capabil s menin calcemia la nivel normal la animale nefrectomizate sau paratiroidectomizate. n hipocalcemie aciunea stimulatoare asupra 1hidroxilazei o exercit parathormonul al crui nivel este crescut. Nivelul sczut al fosfatemiei stimuleaz direct sinteza 1,25-dihidroxi-D3. esuturile int ale 1,25-dihidroxi-D3 sunt intestinul, rinichiul i osul. n os 1,25-dihidroxi-D3 afecteaz maturizarea prin formarea legturilor ncruciate a colagenului i intensific sinteza proteinei cu afinitate pentru calciu numit osteocalcin, sintez dependent de vitamina K. Prin aceasta vitamina D influeneaz procesul de mineralizare a esutului osos. Deficitul de calcitriol cauzeaz hipocalcemie i hipofosfatemie i efectele acestuia asupra sistemului osos la copii sunt cunoscute sub denumirea generic de rahitism, boal caracterizat de calcificarea inadecvat a oaselor i cartilajelor. Prevenirea ei se face prin expunere la soare i prin consumul unor alimente bogate n vitamin D cum este uleiul de pete. La aduli deficitul de calcitriol determin boala numit osteomalacie. n stare liber, vitaminele D se gsesc n cantitate mai mare n unele alimente de origine animal, cum sunt uleiul din ficat de pete (1 200-40 000 UI/g), ficatul de batoc, scrumbii de mare, heringi, untura de pete, glbenuul oulor (300 UI/100 g), untul de vac (60 UI/100 g), n carnea petilor marini etc. n organismele vegetale, vitaminele se gsesc predominant sub form de provitamine i numai ntr-o proporie redus n stare liber. n alimente i n organismele animale o parte nsemnat din vitaminele D se gsesc sub form de
HO
24,25 - Dihidroxi-colecalciferol

CH2 HO OH

provitamine, care sub aciunea razelor ultraviolete, se vor transforma n piele, n vitaminele 111 corespunztoare. Animalele nevertebrate sunt bogate n provitamine D, n special midiile, stridiile, anemonele i viermii marini, iar la plante, ovzul, spanacul, iarba i uleiurile provenite din semine germinate. Necesarul de vitamine D pentru un adult este de 400 UI/zi. Unitatea internaional (UI) de activitate a vitaminelor D este e echivalent cu activitatea dat de 0,25 g de vitamin D3 cristalizat, cu punctul de topire la 87-89C, obinut n condiii standard. 8.3.3 Vitaminele E Vitaminele E sunt un grup de compui numii tocoferoli (din greac, tokos = a nate; phero = a purta) care se gsesc n uleiuri vegetale, germeni de gru. -Tocoferolul numit i vitamina fertilitii are pe lng rolul sugerat de denumire i acela al protejrii membranelor contra agenilor oxidani ca oxigenul. Deficiena acestei vitamine cauzeaz degenerarea ficatului i alterarea funciilor membranelor. Tocoferolii deriv de la o structur de baz comun, numit tocol, care este format dintr-un nucleu cromanic ce conine la C-6 o grupare hidroxil i la C-2 un radical metil i o catena lateral saturat, derivat din fitol, avnd 12 atomi de carbon liniari i patru radicali metili situai cte unul la C-4' C-8', iar doi la C-12'. Cromanul este format dintr-un ciclu benzenic condensat cu un heterociclu piranic, care conine oxigenul heterociclic n poziie para, iar la C-2 al heterociclului sunt substituii doi atomi de hidrogen cu, o caten saturat analog fitolului i cu un radical metil. Fitolul este un alcool alifatic nesaturat care se gsete n cantitate mare n cloroplaste, unde se gsete sub form de ester al clorofilelor. Gruparea fenolic s-a identificat pe baza proprietii sale de-a trece prin oxidare, n ceton. Reacia este reversibil, fapt ce permite tocoferolilor s ndeplineasc i rolul de transportori neenzimatici de hidrogen. Principalul tocoferol, att n ce privete activitatea biologic ct i rspndirea n natur, este -tocoferolul, Din structura de baz denumit "tocol" deriv toi tocoferolii care se deosebesc ntre ei sub aspect structural, att prin numrul i poziia gruprilor metil substituite n ciclul cromanic, ct i prin prezena sau absena unor
HO H3 C
5 10 4 9

CH3 (CH2)3 CH (CH2)3 4' CH3 - tocoferol

CH3 CH 8' (CH2)3

CH3 CH 12' CH3

6 78

3 1 2

duble legturi n catena lateral. Toi tocoferolii conin la C-6 din nucleul benzenic o grupare 112 hidroxil (OH), care le determin caracterul fenolic, iar la C-2 din nucleul heterociclic au un radical metil i o caten lateral specific, care la principalii tocoferoli este identic. Numerotarea atomilor ncepe de la atomul de oxigen heterociclic, cu cifre simple n nucleul cromanic i cu cifre prim, n catena lateral. Pn n prezent s-au identificat n natur i s-au sintetizat 7 tocoferoli, notai cu urmtoarele litere din alfabetul grecesc: , , , , , , -tocoferoli. Tocoferolii , , i au catena liniar saturat format din 12 atomi de carbon liniari i patru grupri metilice, iar tocoferolii , , i au catena lateral tot din 12 atomi de carbon, dar cu trei duble legturi situate la C3-C4; C7-C8; C11-C12 i patru grupri metilice. n afar de capacitatea de agent antioxidant se pare c -tocoferolul joac un rol n metabolismul seleniului. Deficitul de vitamin E, este rar, determinnd sterilitatea i pierderi de mas muscular. O observaie general este aceea c vitaminele liposolubile sunt vehiculate n sistemul gastrointestinal la fel ca grsimile alimentare. Tocoferolii sunt substane organice larg rspndite n natur, mai ales n organismele vegetale, care au capacitatea de a-l biosintetiza. n cantitate mai mare se gsesc n uleiurile obinute din semine germinate de cereale (250-500 mg/100g) i plante leguminoase (soia 1012mg/100g), n nuci (24mg/100g), arahide(20mg/100g), migdale(26mg/100g), porumb(20mg/100g), etc. n frunze, coninutul -tocoferolului variaz ntre 80-. 250 g/g. Tocoferolii se gsesc n cantitate relativ ridicat i n polen. Astfel n polenul florilor de mr, coninutul tocoferolilor este n medie de 80 g/g, iar n polenul unor scaiei galbeni din genul Echinops, de 170 g/g. Pe scar industrial, tocoferolii se extrag din germeni de gru, care au un coninut rnediu de 2,55 mg/g. Necesarul zilnic de -tocoferol, pentru un adult este de15 mg. 8.3.4 Vitaminele K Litera K vine de la cuvntul danez koagulation. Ea este necesar la animale pentru meninerea la nivel normal a factorilor de coagulare, sintetizai n ficat. Generarea acestor factori n stare funcional implic procesarea posttranslaional dependent de vitamina K2 a precursorilor

inactivi ai lor. Aceast procesare const n transformarea prin carboxilare a unor radicali113 de Glu n radicali de -carboxi-Glu (Gla) Radicalii Gla, care ntr-o molecul de protrombin se afl n numr de 10, chelatizeaz ionii Ca2+ i prin aceasta factorul activeaz. Deficitul de vitamin K2 determin creterea timpului de coagulare motiv pentru care acestei vitamine i se mai spune antihemoragic Din punct de vedere chimic, vitaminele K naturale sunt formate dintr-un nucleu naftochinonic care are substituit la C-3 o grupare metilic i la C-2 o caten lateral caracteristic fiecrei vitamine format din 10-50 atomi de carbon. Astfel, vitamina Kl are catena lateral format din fitil derivat din fitol, fapt pentru care se mai numete i filochinon, iar vitamina K2, conine radicalul difarnesil, de unde i deriv numele de farnochinon. Vitamina K1 (2-metlil-3-fitil-1,4-naftochinona), numit i filochinon, are catena lateral format din radicalul fitil, care conine o singur dubl legtur, n poziie trans, ntre atomii C-2'-C-3'. Vitamina K1 notat i K1(20) ntruct are catena lateral format din 20 de atomi de C, are mai muli derivai care au catena lateral format din 5 x n uniti izoprenice, cu valoarea nceputul catenei laterale, ntre atomii C-2'-C-3'. Vitamina K2 (2-metil-3-difarnesil-1,46
7

O
6
7

8 5

9 10

1 4

2 3

CH3 CH2 CH

CH3 C

CH3 (CH2)3 CH (CH2)3

CH3 CH (CH2)3

CH3 CH CH3

Vitamina K 1 - Filochinon

lui n ntre 1 i 6. Catena lateral a acestor derivai ai vitaminei K l au o dubl legtur la

O
8 5 9 10 1 4 2 3

naftochinon) se mai numete i farnochinon, ntruct are catena lateral format din radicalul difarnesil. Exist mai muli compui naturali care intr n familia vitaminelor K, numite i

CH3 CH2 CH

CH3 C CH2 H n

O
Vitamina K 2 - Menachinon

menachinone. Aceti compui au catena lateral (R) formata dintr-un numr diferit de uniti izoprenice care variaz ntre 4 i 10, fapt pentru care mai poart i denumirea generic de 3multiprenoil-2-metil-1,4-naftochinone. Lungimea lanului se noteaz fie prin numrul resturilor izoprenice, sau prin numrul atomilor de carbon din caten, sub form de coeficient i respectiv indice n parantez. Dintre aceti compui fac parte vitamina K2(35) are catena laterala format din radicalul all-trans-farnesil-geranil-geranil. Se gsete n intestinul gros al

omului i animalelor, fiind cea mai rspndit din aceast familie de vitamine. Vitamina 114 K2(30) are catena lateral format din radicalul all-trans-difarnezil, se gsete n numeroase surse vegetale. Dintre vitaminele K obinute prin sintez face parte vitamina K3 (2-metil-1,4-naftochinona), numit i menadion, care are cea mai simpl structur molecular. Menadiona formeaz compleci n soluii apoase cu cafeina, nicotinamida, acidul sialic etc., care sunt mai rezisteni la aciunea luminii dect vitamina K3. Menadiona are a putere tratamentele clinice. Menadiona dat n cantiti mari devine toxic. Vitaminele K sunt biosintetizate numai de organismele vegetale i de unele microorganisme astfel nct i rspndirea lor n natur predomin n regnul vegetal i n microorganismele din tubul digestiv al omului i al animalelor. La plante vitaminele K sunt sintetizate n cloroplaste, iar coninutul lor este mai mare n frunze, plantule, muguri i mult mai redus n fructe i rdcini. Cea mai mare cantitate de vitamine K naturale se gsete n frunzele verzi de lucern (65g/g), spanac(60g/g), urzic(50g/g). Cantiti mai mici conin, tomate coapte (30g/g), boabele verzi de mazre(30g/g) i de soia(25g/g). Frunzele plantelor verzi au un coninut mai ridicat de vitamine K dect drojdiile i ciupercile comestibile. n organismele animale vitaminele K sunt puin rspndite, iar unele lichide biologice sunt lipsite de aceste vitamine. Cele mai mari cantiti de vitamina K se gsesc n ficatul de porc (4-9g/g), apoi n muchiul de pui(2g/g), n carnea de vit (2g/g), oaie (2g/g) i porc (2g/g). Necesitile omului sunt greu de stabilit ntruct o parte din vitaminele K se procur prin hran, iar o alt parte nsemnat sunt biosintetizate de microorganismele din tubul digestiv. Sursa endogen fiind chiar mai important dect sursa exogen. Necesitile zilnice pentru omul adult sunt apreciate de mai muli cercettori ntre 1 i 2 mg. 8.3.5 Vitaminele F Vitaminele F se mai numesc i vitamine antidermatidice, deoarece n lipsa lor din hran apar tulburri metabolice la nivelul pielii.
6
7

O
8 5 9 10 1 4 2 3

CH3

O
Vitamina K3 - Menadion

biologic mai puternic de ct vitaminele K naturale, fapt pentru care este cea mai utilizat n

Vitaminele F sunt formate dintr-un amestec de acizi grai eseniali, care conin mai 115 multe duble legturi n molecul i care nu sunt sintetizai de animale. Dintre acetia, cei mai importani i mai frecvent ntlnii sunt acizii linoleic, linolenic i arahidonic. Acizii grai polinesaturai cu dou duble legturi au formula general C nH2n-4-COOH. Din aceast categorie face parte acidul linoleic, numit i acid linolic (C 18H32O2), 18:2 (9,12). Acidul linoleic este larg rspndit n natur, n special n lipidele foliare. Legturile duble situate ntre atomii de carbon C-9 i C-10 respectiv C-12 i C-13 au o configuraie cis. Acizii trietenici au formala general CnH2n-6-COOH. Din aceast grup fac parte acidul linolenic, acidul -linolenic, acidul homolinolenic i acidul elaeostearic. Acidul linolenic (C18H30O2) 18:3 (9,12,15)este un acid trietenic care nsoete acidul linoleic n numeroase produse vegetale. Se extrage n cantitate mai mare din uleiul de in i din grsimile foliare a speciilor Trifolium pratense, Lolium perene, Brassica napus, Hordeum vulgare etc. Acidul linolenic adiioneaz cu uurin halogeni (brom, iod, clor) dnd compui halogenai care servesc la stabilirea poziiei dublelor legturi. Are o configuraie cis la toate cele trei duble legturi. Se obine prin sintez, folosind ca substane de baz compui acetilenici (ENESCLT, 1990), Dintre izomerii acidului linolenic mai important este acidul elaeostearic 18:3 (9,11,15). care se gsete n semine de Cucurbitaceae i Rosaceae. Mai puin rspndii sunt acizii -linolenic 18:4 (3,6,9,12) i homolinolenic 18:4 (3,8,11,14). Acidul arahidonic (C20H28O2) 20:4 (5,8,11,14) este un acid tetraetenic. Se gsete n cantitate mai mare n semine de Typha augusta. El se gsete n cantitate mai mare n grsimile animale, n special n fosfolipidele din glandele suprarenale ale bovinelor. Se obine i prin sintez sub forma acidului tetracis-arahidonic. La omul adult necesitile zilnice sunt aproximativ de 7-8g acid linoleic, respectiv 100 mg/kg corp. La om carena n vitamina F apare n condiii deosebite, deoarece hrana conine acizi grai eseniali (uleiuri vegetale, grsimi animale etc.) n cantiti suficiente n hipovitaminoze F experimentale, efectuate pe voluntari, s-a remarcat c dup 3-6 luni de regim carenat scade coninutul acizilor grai eseniali din snge, iar valoarea indicelui de iod scade de la 123 la 93 i apar primele simptoame careniale. Hipovitaminozele F pot s apar la bolnavii hrnii o perioad ndelungat numai prin perfuzii, care sunt bogate n glucide solubile, aminoacizi i sruri minerale.

116

Acizii grai eseniali care intr n constituia vitaminelor F, se gsesc att n

organismele vegetale, ct i n produsele animale. n plante i n seminele acestora se gsete predominant acidul linoleic i acidul linolenic, iar n animale, predomin acidul arahidonic. Acizii linoleic i linolenic din organismul omului i al animalelor provin in totalitate din hran, n special din produsele de origine vegetal. Ei ptrund n organism sub form de trigliceride care sunt hidrolizate n procesul de absorbie. n organismele animale acizii linoleic i linolenic se gsesc mai ales sub form de fosfolipide i steride i mai puin sub form de lipide neutre. Acidul arahidonic se gsete predominant n produsele de. origine animal. Coninutul acestui acid, n, este de 13-14 g% n sardele, 16 g% n balen, 6,1 g% n broasca estoas, 2,4 g% la capr, 0,30 g% la om. Acidul arahidonic se gsete la animale n structura unor fosfolipide, steride i chiar trigliceride. Margarina i alte produse alimentare care provin prin hidrogenarea acizilor grai nesaturai, au un coninut foarte redus de acizi grai eseniali. Aceste produse au avantajul de a nu rncezi, de a nu primi gust i miros neplcut, dar valoarea lor vitaminic este aproape inexistent. Coninutului acizilor linoleic i linolenic n uleiurile vegetale, n comparaie cu grsimile animale este net superior celor dinti. Astfel uleiul de nuc are 68 g% acid linoleic i 9% acid linoleinic, n timp ce grsimea de porc are 16 g% acid linoleic i 0% acid linoleinic.

117

II. CHIMIA DENTARE

Fig. 8.1. Implicarea vitaminelor n metabolism

ESUTURILOR

I A MATERIALELOR DENTARE

9 COMPOZIIA CHIMIC A DINILOR

esuturile dentare au n compoziia lor att o parte anorganic ct i o parte organic. Fiecare dintre cele dou componente au importana lor n constituirea unui ansamblu care este dintele. n tabelul 9.1. sunt prezentate Tabelul 9.1. Compoziia chimic procentual cele mai importante componente ale a smalului, dentinei i cementului esuturilor dentare. Astfel se pot Componentul Smal Dentin Cement observa diferene semnificative Valori procentuale (raportate la 100 g greutate umed) 2,3 13,2 32 ntre proporiile componentelor de Ap Substane organice 1,7 17,8 22 natur mineral i organic ale Substane anorganice 96 69 46 celor trei regiuni tari dentare. Valori procentuale (raportate la 100 g cenu) Ca 36,1 35,3 35,5 Totodat, n privina coninutului Mg 0,5 1,2 0,9 0,2 0,2 1,1 n calciu, fosfor i fluor, se poate Na K 0,3 0,1 0,1 vedea concentraii asemntoare, P 17,3 17,1 17,1 ceea ce pledeaz pentru existena C (CO2) 4,0 3,0 4,4 0,3 0 0,1 n toate aceste regiuni a aceluiai Cl F 0,02 0,02 0,02 compus mineral rezultat din cele trei elemente (acelai coninut n calciu, fosfor i fluor se menine i n dinii cariai).

9.1 Smalul
9.1.1 Constituenii anorganici ai smalului Smalul sau emailul constituie 20-25% din dinte i este localizat numai n regiunea cervical a dintelui. Smalul este o substan foarte tare, cea mai dur substan din regnul animal. Aceast duritate i este conferit de structura unor componeni minerali. Calciul i fosforul. Cea mai mare parte a substanei minerale din smal cuprinde elementele calciu i fosfor. Este de remarcat c, dei coninutul n calciu i fosfor al dintelui nu variaz cu

vrsta, totui smalul dinilor de lapte cuprinde semnificativ mai puin fosfor dect smalul 118 dinilor permaneni. Acest fapt pledeaz pentru o mineralizare mai redus la nivelul smalului dinilor de lapte, prin urmare, pentru posibilitatea formrii de carii. n structura smalului calciul se afl sub form de ioni Ca 2+ i fosforul ca ioni PO43-, intrnd n compoziia cristalelor de apatit. De fapt o anume apatit, hidroxiapatita, aceasta are formula restrns (global): Ca[Ca3(PO4)2]3(OH)2. Ionii OH- din reeaua cristalin pot fi nlocuii cu F- sau Cl-, rezultnd fluorapatita sau clorapatita. n cristalele care cuprind fosfat de calciu exist un amestec de hidroxilapatit i fosfat octacalcic, Ca 8H2(PO4)64H2O. Din aceast cauz cristalele sunt formate din straturi alternante de hidroxilapatit i fosfat octacalcic. Pentru aprecierea gradului de mineralizare a unei regiuni dentare, se ia n considerare urmtoarele elemente: concentraiile ionilor de calciu (Ca2+) i fosfat (PO43-); eventuala substituire ionic n reeaua cristalin de hidroxilapatit Ca2+ cu Mg2+ sau a ionului fosfat cu ionul carbonat (CO32-) adsorbia suplimentar de ioni Ca2+ defectele din reeaua cristalin a hidroxilapatitei observate cnd ionii de fosfat teriar (PO43-) sunt nlocuii cu ionii de fosfat secundar (HPO42-). n acest caz, pentru realizarea electroneutralitii, ionii HPO42- necesit mai puini ioni de calciu. Carbonatul. Dup, calciu i fosfor, componentul mineral cel mai bogat al smalului este dioxidul de carbon sub form de anioni: carbonat (CO 32-) i uneori dicarbonat (HCO3-). Concentraia medie a carbonailor i dicarbonailor, exprimat n procente de dioxidului de carbon n smal este de 2,5, ns repartizarea lui nu este egal n toate regiunile acestuia. Astfel, concentraia dioxidului de carbon la suprafaa smalului este 1,6% iar la interfaa smal-dentin este 2,9%. Ionul carbonat este inclus n reeaua hidroxilapatitei, ionii fosfat au o concentraie mai sczut pe msur ce crete concentraia ionilor carbonat, deci acetia din urm ocup locurile ionilor fosfat din reea. O fraciune din carbonatul smalului este substituit n reeaua hidroxilapatiei, i anume, cea care ocup locul ionului hidroxil. Prin urmare, hidroxilapatita din smal nu este pur ci cuprinde i carbonatapatit. Prezena carbonatapatitei n smal se afl n strns legtur cu riscul atacului carios.

Fluorul. Acesta este un element constitutiv important al substanei minerale din dinte. El se 119 ncorporeaz n diverse etape i mprejurri : nainte de erupie, n cursul mineralizrii, cnd este captat din fluidele tisulare; dup erupie i desvrirea mineralizrii, prin fixarea la suprafaa smalului a fluorului din lichidele care ud dintele; Se constat c nivelul concentraiei fluorului este mai mare n ptura de la suprafa i scade treptat n straturile succesive spre interior. De asemenea, concentraia fluorului n smal este pe de o parte, n dependen direct cu concentraia fluorului din apa de but, iar pe de alt parte, variaz cu vrsta. Odat cu creterea concentraiei fluorului n smal, scade coninutul su n carbonat. Ionii de fluorur, alturi de ali ioni i de moleculele de ap, se pot adsorbi la suprafaa cristalelor de apatit. n genere, acest proces are loc cnd fluorul se afl n concentraii mari. Reacia de suprafa a fluorului adsorbit pe hidroxilapatit conduce la formarea fluorurii de calciu, CaF2: 3Ca3(PO4)2Ca(OH)2 + 20 F- 10 CaF2 + 6(PO4)3- + 2HOFluorura de calciu se depune uor din cauza produsului su de solubilitate mic, iar formarea fluorurii de calciu este asociat cu dizolvarea apatitei. Cnd concentraia fluorului este mai sczut, acesta reacioneaz cu hidroxilapatita, rezultnd fluoroapatita Ca10(PO4)6(OH)2 + 2F- Ca10(PO4)6F2 + 2 HOSubstituirea n reeaua hidroxilapatitei a ionilor OH- cu ionii F- permite stabilirea unor legturi de hidrogen ntre halogen i hidrogenul gruprile OH adiacente, nesubstituite. innd seama de aceste legturi suplimentare precum i de caracterul puternic electronegativ al fluorului, rezult c n structura fluorapatitei, energiile de legtur sunt mult crescute n comparaie cu cele din reeaua hidroxilapatitei pure. Fluoroza dentar este fenomenul manifestat prin apariia unor pete la nivelul smalului i care se datoreaz aportului prea mare de fluor n perioada de dezvoltare a dinilor. n cazuri de fluoroz dentar smalul i pierde luciul natural, devine alb cretos datorit prezenei CaF 2 i ulterior apar pigmentri (ca pete sau dungi) de culoare glbuie-brun.

120

Fluorul - n exces - exercit i o aciune toxic remarcabil care se datoreaz inhibrii fosfatazei din ameloblaste. Aciunea inhibant se explic prin combinarea ionilor F- cu ionii Mg2+ care sunt activatori ai fosfatazei, ct i a altor enzime. Fig. 9.1. Fluoroza dentar, n stnga pete alb cretoase, n dreapta pigmentarea zonelor cu fluoroz

Aciunea fluorului n exces nu se limiteaz numai la nivelul esuturilor dentare. Astfel fluoroacetil-coenzima A, care se formeaz atunci cnd fluorul este n exces, reacioneaz cu oxaloacetatul, transformndu-se n fluorocitrat. F-CH2-CO-SCoA + -OOC-CO-CH2-COO- -OOC-CH(F)-C(-OOC)(HO)-CH2-COOFluorocitratul astfel obinut este un substrat fals pentru aconitaz - enzim a ciclului Krebs blocnd astfel principalul furnizor de energie din celula vie, ciclul Krebs. Pe lng blocarea ciclului Krebs fluorul afecteaz i alte enzime (oxidazele acizilor grai; peroxidaze; enolaze; piruvat-kinaza hepatic; esteraze; lipaze; glucozo-6-fosfat dehidrogenaza. blocnd astfel i alte procese metabolice. Magneziul. Dup Ca2+, cationul cel mai frecvent din constituia regiunilor tari ale dintelui este Mg2+. El poate intra uor n compoziia apatitei, fie ca fosfat de magneziu, fie ca ion individual adsorbit la suprafaa cristalelor. Concentraia magneziului din smal - ca i a carbonatului - scad semnificativ n regiunile cariate. Aceste observaii au dus la concluzia c, n procesul carios ar avea loc o pierdere preferenial a componentelor minerale prin solubilizare n mediu acid, magneziul i carbonatul fiind printre primii constitueni eliminai. Sodiul, potasiul, clorul. Aceste elemente intr n cantitate mic n constituia dinilor. Aceti trei ioni nu prezint un rol important n formarea substanei minerale tari din dinte. Numai clorul, sub form de ion Cl-, este n msur s nlocuiasc ionul HO- din hidroxilapatit dar nu se fixeaz definitiv n esutul calcifiat.

Zincul. Dinii definitivi cuprind cantiti apreciabile de zinc : 20 mg/ 100 g greutate uscat. n 121 smal zincul este repartizat inegal, avnd o concentraie de 2-3 ori mai mare n stratul superficial, fa de straturile profunde, indiferent de regiunea dintelui. Cuprul se afl n cantitate mic n dinii definitivi i n cantitate mai mare n dinii temporari. Un interes deosebit prezint coninutul n cupru al smalului, deoarece acest element are capacitatea - recunoscut de relativ mult vreme - de a opri dezvoltarea cariilor. Mercurul. Smalul dinilor sntoi cuprinde - n medie - 0,01 mg/ 100 g esut. n cazul dinilor cariai i obturai cu amalgam concentraia mercurului n smal crete foarte mult, putnd ajunge pn la 15-16 mg/100 g smal. Vanadiul este un element care promoveaz mineralizarea oaselor i dinilor, asigurnd totodat i un gard ridicat de protecie fa de carii. 9.1.2 Constituenii organici ai smalului Smalul cuprinde puine substane organice, cca 2%. Din totalitatea substanelor organice ce intr n constituia smalului, aproximativ dou treimi sunt reprezentate de compui cu molecul mic, peptide i proteine solubile (toate solubile n acizi), iar treimea insolubil este reprezentat de proteine insolubile. Peptidele. Concentraia i distribuia peptidelor din smal paralelizeaz perfect pe cele ale ansamblului substanelor organice. Aceste peptide au un coninut n aminoacizi foarte asemntor cu cel al colagenului din dentin. Proteinele solubile din smal sunt reprezentate - n special - de o glicoprotein (care conine mai mult de 4% glucide). Colagenul din constituia smalului se afl n concentraie de 0,09%. O treime din aceasta este reprezentat de colagenul solubil iar dou treimi de cel insolubil. Keratinele. Unele keratine din smal (-keratinele) au catena polipeptidic dispus spaial sub form de -helix consolidat prin legturi de hidrogen intramolecular. Alte keratine din smal (-keratinele) cuprind catene polipeptidice pliate, dispuse paralel i unite prin legturi de hidrogen intermoleculare. Glucidele. Smalul dinilor omului are un coninut total n glucide cuprins ntre 1,5 i 2,5 mg pentru 100 g esut, reprezentate n special de trei aldohexoze (galactoz, glucoz, manoz), o aldopentoz (xiloza) i dou dezoxialdohexoze (fucoza i ramnoza).

Lipidele. n smal s-au identificat diverse lipide, ele se gsesc n proporie de 0,51%. 122 Colesterol i esterii colesterolului se gsesc n smal, n concentraie de 0,008%. Acidul citric se gsete n cantitate relativ mare (0,10%), reprezentnd cca 1/6 din totalul substanelor organice din smal. El poate fi sau un component de coprecipitare accidental a fosfailor de calciu, sau intr n constituia unei peptide cu coninut ridicat de arginin. Acidul lactic este distribuit n smal ntr-un mod cu totul analog distribuiei acidului citric. Spre deosebire de acidul citric, acidul lactic nu poate coprecipita cu apatita la pH-ul fiziologic.

9.2 Dentina
Dentina este localizat ntre smal i pulp. Ea cuprinde de 6 ori mai mult ap i de 10 ori mai mult substan organic dect smalul. n schimb, coninutul n substane anorganice este mai redus dect al smalului. 9.2.1 Constituenii anorganici ai dentinei n genere, dentina cuprinde aceiai constitueni anorganici ca smalul. Substana anorganic aflat n cea mai mare parte n dentin este tot apatita - n special hidroxilapatita - cristalizat sub form de prisme hexagonale mult mai mici dect cele din smal, dar cu aceleai componente de baz, calciu i fosfor. 9.2.2 Constituenii organici ai dentinei
COOH C CH2 O H NH HO H H C C C C C OH H H OH OH O

Proteinele sunt cele mai importante substane organice din dentin, aflndu-se ntr-o proporie de cca 100 ori mai mare dect n smal. O treime din fraciunea solubil, din punct de vedere al compoziiei de baz, se caracterizeaz printr-un coninut destul de mare, de tirozin i hidroxiprolin. Fraciunea proteic insolubil este reprezentat de o keratin special, numit dentinkeratin. Ea conine mult tirozin (5%) i puin hidroxiprolin. Matricea organic insolubil a dentinei - dar care nu este reprezentat de colagen conine dou glicoproteine anionice: una cuprinde 25% acid sialic iar alta nu cuprinde acid sialic dar conine un proteoglican cu condroitin-4-sulfat drept component glucidic i 6% component proteic.
O

CH2OH Acidul N-acilneuraminic mai (Acidul sialic) COOH HO3SO CH2OH O O O

OH
acid glucuronic

13 OH NH CH3CO
N-acetil galactozamina 4 sulfat

Fragment de condroitin-4-sulfat

123 Osteocalcina. n dentin s-a identificat o protein cu un coninut ridicat de acid carboxiglutamic numit osteocalcin. Ea reprezint 1% din proteina total a esutului osos, respectiv 20% din proteina necolagenic. O molecul de osteocalcin poate fixa aproximativ 104 atomi de calciu, prin intermediul resturilor de acid carboxiglutamic. Calciul odat fixat, poate fi eliberat pentru a forma cristale de hidroxiapatit. Acidul carboxiglutamic din compoziia osteocalcinei, fiind un aminoacid necodificat genetic, rezult prin carboxilarea acidului glutamic. Aceast reacie este catalizat de ctre o carboxilaz care are drept parte prostetic biotina i vitamina K Colagenul. Aa cum s-a dovedit prin studii de difracie a razelor X, molecula colagenului cuprinde trei catene polipeptidice dispuse sub form helicoidal. O treime din totalul aminoacizilor constitutivi ai colagenului este reprezentat de glicin (glicocol) iar 20-25% de prolin i hidroxiprolin. n constituia colagenului mai intr - n mic proporie - hidroxilizin, tirozin i fenilalanin. Glucidele. n constituia dentinei intr monozaharide, aminozaharuri, acizi hexuronici i mucopolizaharide sau glicozaminoglicani. De asemenea, din dentin s-au izolat i s-au analizat complexe macromoleculare constituite din componente de natur proteica i glucidic, cunoscute sub numele de proteoglicani. Dintre monozaharide predomin glucoza, iar dintre aminozaharuri predomin galactozamina i n mai mic msur, glucozamina. Acizii hexuronici - ca atare - intr n proporii mai reduse; majoritatea lor se gsesc combinai cu aminozaharurile sub form de glicozaminoglicani: condroitinsulfai i acid hialuronic. Lipidele. Dintre constituenii lipidici ai dentinei amintim: colesterol liber, esteri ai colesterolului, cele trei grupe de gliceride (mono-, di- i tri-), precum i diverse fosfolipide. Acidul citric. n dentina dinilor definitivi acidul citric intr n proporie de 0,8-0,9%. Din cantitatea total de acid citric aflat n dentin, o proporie de 7-15% se gsete sub form de acid citric liber, iar restul este adsorbit la suprafaa cristalelor de apatit sub form de complex cu o peptid. Acidul lactic din dentin se afl n proporie de cca 10,4 mg pentru 100 g esut. Enzimele. Enzima predominant n dentin este fosfataza alcalin cu pH optim 7-8.

9.3 Cementul
Din punct de vedere al compoziiei sale globale, cementul conine mai mult ap i substane organice dect smalul i dentina. n schimb, el cuprinde numai pe jumtate substane

minerale fa de smal. Spre deosebire de celelalte regiuni tari ale dintelui, cementul conine 124 mult mai mult fluor.

9.4 Pulpa
Pulpa dintelui poate fi comparat cu mduva osului deoarece este un esut moale, necalcifiat dar care se afl n strns legtur cu esutul tare. ntr-adevr, pulpa conine celulele numite odontoblaste care genereaz dentina. Din punct de vedere al constituiei sale chimice, pulpa dentar conine mult ap, o proporie redus de substane anorganice i o cantitate apreciabil de compui organici. 9.4.1 Constituenii anorganici ai pulpei Dintre elementele minerale, prezint interes, n primul rnd, cele caracteristice esutului tare, calciul, fosforul i fluorul, iar n al doilea rnd, sodiul i potasiul. 9.4.2 Constituenii organici ai pulpei Proteinele. Dintre proteine predominante sunt colagenul i elastina. Colagenul se afl n special n matricea fibrelor pulpare iar elastina n pereii canalelor largi vasculare. Pulpa mai conine albumin i cele patru categorii de globuline ( 1, 2, , ) n proporii similare celor din plasma sanguin. Glucidele. Pulpa conine cantiti relativ mari de glicogen (42,4 mg/100 g esut umed), mucopolizaharide sau glucozaminoglicani precum i monozaharide (hexoze, pentoze) participante la diverse procese metabolice. Glicogenul se afl, n genere, acumulat n acele regiuni din pulp n care se desfoar i procesul calcifierii. Lipidele. Raportat la greutatea umed, pulpa dentar conine 0,91% grsimi neutre, 0,70% fosfolipide i 0,16% colesterol. Enzimele. Dintre enzime, n pulpa dentar predomin fosfatazele i proteazele. Aminoacizii liberi. n pulpa dinilor, la omul adult, s-a determinat concentraia urmtorilor aminoacizi liberi : glicocol 1,549 mg/g esut proaspt ; alanin 0,915 ; valin 1,428 ; serin 0,290 ; treonin 1,230 ; acid glutamic 0,966 i acid aspartic 0,665.

10 MINERALIZAREA

CEMENTULUI SMAULUI

DENTINEI

125 I

MINERALIZAREA

Mineralizarea regiunilor tari ale dintelui decurge - n genere conform unui mecanism comun. Acesta include parcurgerea mai multor etape prin care se desvrete calcifierea. Calcifierea, odat nceput, se continu i, pe msur ce se acumuleaz substan, mineral n esut, se pierde apa.

10.1

Calcifierea cementului i a dentinei

la nivelul crora se desvrete mineralizarea cementului sunt

Celulele

cementoblastele. Celulele responsabile de formarea dentinei sunt ondontoblastele, care i ncep acest proces prin elaborarea unei pturi necalcifiate de predentin la nivelul jonciunii dentin-smal. Celulele secret o matrice colagenic i la nivelul membranei celulare formeaz un mugure vezical de matrice n exterior (vezi Fig. 10.1.). Acesta este necesar pentru iniierea calcifierii. Veziculele calcifiate se asociaz formnd astfel insule de substan mineral care nconjoar fibrele de colagen. Aceast prim matrice mult calcifiat este numit manta dentinal. Ulterior, odontoblastele elaboreaz o matrice calcifiat, mai structurat, numit dentin peritubular. Ea nconjoar canaliculele care se gsesc n dentin, dispuse paralel i orientate perpendicular pe jonciunea dentin-smal i camera pulpar. Cristalele de apatit sunt dispuse n lungul fibrelor de colagen i sunt mai mici dect cristalele corespunztoare din smal.

126

Fig. 10.1. Schema calcifierii regiunilor tari ale dintelui.

A - ptur celular; B - matricea precalcifiat bogat n proteine; C - suprafaa de calciflere; D - fibrele de colagen calcifiat. n partea superioar a schemei este rezumat formarea fibrelor de colagen: 1) biosinteza intracelular a procolagenului; 2) secreia procolagenului; 3) transformarea procolagenului n colagen n urma hidrolizei enzimatice; 4) condensarea moleculelor de colagen n fibre; 5) maturarea fibrelor.

n partea inferioar a schemei sunt rezumate etapele calcifierii ; 1) fixarea ionilor Ca 2+ i HPO42- de ctre celule; 2) nmagazinarea ionilor n mitocondrii(CaP); 3) formarea din membrana celular a veziculelor coninnd matricea calcifiat; 9) migrarea veziculelor prin zona B cu acumularea ulterioar de ioni i formarea de fosfat de calciu amorf (PCA); 5) transformarea PCA n apatit; 6) fixarea veziculelor la suprafaa de calcifiere unde se sparg i elibereaz substana mineral necesar calcifierii fibrelor de colagen. Fosfatul de calciu amorf i apatita se pot observa att n vezicule ct i

10.2

Calcifierea smalului

Ameloblastele elaboreaz iniial matricea proteic i ulterior secret ionii necesari formrii apatitei. Spre deosebire de dentin, smalul nu conine fosfat de calciu amorf, premergtor formrii de apatit. De asemenea, n cursul calcifierii, la nivelul smalului nu s-a observat dezvoltarea veziculelor matriceale. n smal cristalele de apatit se formeaz direct fr ase trece prin stadiul intermediar de fosfat de calciu amorf, acumulat n vezicule. Formarea

cristalelor de apatit ncepe de la nivelul jonciunii dentin-smal i radiaz ctre suprafaa 127 extern a smalului. Cristalele sunt organizate n uniti bazice structurale numite prisme. Cristalele individuale au form de bastonae hexagonale. Axele lungi ale cristalelor sunt orientate n aceeai direcie cu axa longitudinal a prismei. La suprafaa extern a smalului se afl o ptur de cristale de apatit neorganizate n prisme.

11 PROCESULUI DE FORMARE A DINILOR

Procesul de formare a dinilor, are loc n esen, n mod analag formrii oaselor dar, spre deosebire de osteogenez care se caracterizeaz prin formarea simultan a substanei organice, fundamentale i mineralizate, apariia dentinei are loc prin dou procese succesive : a) formarea matricei dentinei de ctre pulp i b) calcifierea prin depunere de sruri de calciu (fosfat tricalcic, carbonat de calciu) sub aciunea odontoblastelor. n timpul calcifierii are loc o deshidratare din ce n ce mai marcat i pstrarea unor, proporii constante de Ca, P i CO2. Formarea dinilor este reglat hormonal, ndeprtarea hipofizei determin ntrzierea erupiei dinilor iar lipsa de hormon tiroidian produce tulburri n formarea dentinei i n dezvoltarea rdcinii. Vitaminele influeneaz i ele formarea dinilor. Astfel, lipsa vitaminei. D (rahitism) ncetinete formarea dentinei, lipsa vitaminei A tulbura producerea dentinei datorit atrofierii odontoblastelor. Deosebit de marcate sunt i manifestrile lipsei de vitamin C. n acest caz are loc o atrofiere total a odontoblastelor, ceea ce ntrzie neoformarea predentinei. Formarea smalului ajunge s sufere i ea deoarece colagenul i mucopolizaharidele se diminueaz n mod evident. Este de remarcat c n afar de aport insuficient de calciu, fosfor i vitamine, alte lipsuri de elemente nutritive din raia alimentar nu influeneaz n mod definitiv dezvoltarea dinilor.

12 CHIMIA SALIVEI
Saliva reprezint produsul rezultat din secreia celor trei tipuri de glande mari aflate n cavitatea bucal (parotida, submandibulara i sublinguala) precum i din secreia multor glande mici care se gsesc n mucoasa gurii. Contribuia celor trei glande mari la formarea salivei este inegal. ntr-adevr, saliva total cuprinde 70% parotidian i 5% sublingual. saliv submaxilar, 25%

128

12.1

Compoziia chimic a salivei

Saliva conine cca 99,50% ap, ceea ce face s fie considerat drept cel mai apos produs de secreie al organismului. Aproximativ 0,5% din saliv reprezint substan uscat. Proporia acesteia variaz n funcie de natura alimentelor. Din substana uscat, cca 1/3 este de natur anorganic iar restul (2/3) este constituit din substane organice. Compusul Tabelul 12.1. mg% Compuii anorganici din saliva normal Compusul K+ Na+ Ca2+ Mg2+ Zn2+ NH3 mg%

30,8-131,0 29,6-115,0 4,5-11 0,3-1,0 0,06-0,13 2-10

ClP (total) P (organic) SCNCO2

37,1-93,7 11,9-26,0 0,9-15,0 11,7-33,0 20,0-45,0

12.2

Compuii anorganici

Cei mai importani componeni anorganici ai salivei sunt anionii i cationii din componena srurilor aflate n mod obinuit n saliv sunt prezentai n tabelul 12.1. Potasiul se afl n saliv n concentraii mult mai mari dect n serul sanguin. n schimb, sodiul se afl n concentraii mai mici dect n ser. Calciu din saliv are o concentraie intermediar celor pe care le prezint n sngele venos i cel arterial. Concentraia zincului, pentru subiecii cariorezisteni se gsesc valori mai mari (0,133 mg%) dect la persoanele susceptibile la formarea cariilor (0,065 mg%). Ionul SCN- se afla n concentraie mai mare n saliv dect n snge. Se consider c ionii SCN- din saliv reprezint o form de detoxifiere a ionilor CN - din cianuri (provenite din fructe sau din metabolismul protetic). n concentraii mult mai mici dect clorul se gsesc n saliv i ceilali halogeni. Cu privire la componentele anorganice din saliv trebuie subliniat posibilitatea combinrii unora din ioni pentru a forma compui insolubili (fosfat i carbonat de calciu) care se depun ca tartru pe dini sau sub form de calculi n canalele i glandele salivare.

12.3

Compuii organici

Cea mai mare parte a compuilor organici din saliv este constituit din proteine. n saliv sunt prezente unele proteine de origine glandular i unele de origine seric

129 (, , globuline). O parte din acestea din urm sunt imunglobuline cu aciune antibacterian marcant. Alte proteine salivare sunt glicoproteinele, ele au un coninut crescut n glucide. n genere, glicoproteinele salivare sunt adsorbite selectiv la suprafaa smalului formnd o pelicul protectoare. Dintre glicoproteinele salivare, cea mai important este mucina. Ea se poate afla n saliv n proporii relativ mari (pn la 0,2%). Mucina poate cuprinde pn la 50% zaharuri (fucoz, N-acetil-aminozaharuri, acid neuraminic, acid sialic). Mucina are proprietatea de a precipita sub aciunea acizilor (chiar slabi i chiar la rece). De asemenea, mucina are proprietatea de a conferi viscozitate salivei. Cea mai important dintre aceste enzime care se gsesc n saliv este amilaza. O alt enzim la fel de important este lizozimul produs de glandele din cavitatea bucal i aflat - ca atare - n saliv i mucinaza care este asociat cu alte componente ale salivei. Lizozimul este o polipeptid bazic sulfurat care exercit un efect bacterian special asupra germenilor, liznd polizaharidele membranei bacteriene. S-au identificat de asemenea, unele enzime proteolitice i fosfataze ct i activitatea enzimelor: peroxidaz, catalaz, ureaz, lipaz, anhidraz carbonic. Pe lng proteine, compui cu azot macromoleculari, saliva mai cuprinde i compui cu azot cu molecul mic, ureea, acidul uric, creatinina i aminoacizi liberi. Ali compui organici cu molecul mic, neazotai, aflai n constituia salivei normale sunt: acidul lactic, acidul citric, colesterolul, fosfolipidele, unele vitamine i hormoni. Hormonii mai frecveni n saliv sunt: estrogenii, cei gonadotrepici, antehipofizari.

12.4
pH-ul

Proprietile salivei

pH-ul salivar normal este situat n preajma neutralitii (6,85- 6,90) se poate cobor ns pn n regiunea slab acid (6,07) i se poate ridica pn n regiunea slab-alcalin (7,9). Aciunea tampon Saliva dispune de o remarcabil aciune tampon exercitat de sistemele tampon minerale: acid carbonic-bicarbonat, fosfai monobazici-fosfai dibazici i sisteme cu componente proteice (mucina, n special). Sistemul tampon acid carbonic-bicarbonat se opune ndeosebi la acidifierea mediului bucal iar sistemul tampon al fosfailor se opune, n special, alcalinizrii. Proteinele tamponeaz n ambele direcii, att acizii ct i bazele.

Vscozitatea 130 Vscozitatea obinuit a salivei este conferit de coninutul su n mucin i proteine (n genere). Relaia dintre viscozitate i mucin nu este n legtur cu concentraia acesteia din urm ci cu lungimea macromoleculei de glicoprotein care prezint diferite grade de polimerizare.

13 NOIUNI

DE

BAZ

ALE

CHIMIEI

POLIMERILOR

ORGANICI
Polimerii au o larg utilizare n domeniul medicinii dentare. Acetia intr n compoziia unor cimenturi dentare, materiale de obturare, de amprentare, lacuri, materiale ntrebuinate n confecionarea protezelor dentare i n multe alte scopuri.

13.1

Generaliti
Notnd cu M un monomer polimerii au

Polimerii organici sunt compui cu molecule mari, formai din mai multe uniti structurale, identice sau diferite numite monomeri. formula general (M)n, unde n este gradul de polimerizare. Din punct de vedere al gradului de polimerizare, polimerii s-ar pute mpri n, polimeri inferiori sau oligomeri cu grad mic de polimerizare i polimeri superiori, cu grad mare de polimerizare. Polimerii pot avea structur: linear, acetia sunt n general termoplastici, din aceast categorie fac parte rini vinilice, poliamide, polistirenul, etc.. structur ramificat, din aceast categorie fac parte polimerii acizilor acrilic i metaacrilic Polimerii prezint rezisten la forfecare, ndoire sau rupere, unii sunt elastici alii sunt termoplastici n funcie de aceste caracteristici se recomand pentru un anumit domeniul de utilizare. n cazul n care monomerii care intr n structura macromoleculei sunt diferii, compusul rezultat poart numele de copolimer. Considernd c la formarea compusului macromolecular particip numai doi compui pe care i putem nota cu A i B, putem distinge mai multe tipuri de copolimeri diferii din punct de vedere structural: 1. Copolimer alternativ: -A-B-A-B-A-B-A-B-A-B-A-B-A-B-A-B2. Copolimer randomizat: -A-A-B-A-B-B-B-B-B-A-A-B-A-B-B-B-

3. Copolimer bloc: -A-A-A-A-A-A-A-A-B-B-B-B-B-B-B-B4. Copolimer ramificat 5. Copolimer reticulat

131

13.2
13.2.1

Reacii de formare a polimerilor

Reacia de polimerizare.

Sunt cel puin trei tipuri de reacii: de polimerizare, de policondensare i de poliadiie. Polimerizarea este reacia de transformare a monomerilor, care sunt substane nesaturate, n polimeri, care sunt compui cu caten lung, cu caracter saturat. Polimerul se formeaz prin desfacerea dublei legturi a monomerului i formarea unei noi legturi ntre monomeri. Cei mai ntlnii monomeri sunt cei vinilici a cror structur este redat n tabelul 13.1. Tabelul 13.1. Monomerii i polimerii vinilici corespunztori folosii n tehnica dentar

132 Monomerii Eten Clorur vinil Stiren Structura monomerului

H 2C CH2

Fragment polimerului
CH2 Cl H2C H2 C

din

structura Denumirea polimerului Polieten Policlorur vinil (PVC)

CH

CH2 CH2 CH2 CHCl CH H2C H2 C CHCl

de

H2C

CH

de

H2C

CH

Polistiren
H2 C O CH C OH CH3 H2C O C C OH CH3 H2C O C C O CH3 H2C O H2C O H2 C O CH C OH CH3 C C OH CH3 C C O CH3 O O O

H2 C

CH C OH CH3

Acid acrilic

Acid poliacrilic

Acid metaacrilic

H2 C

C C OH CH3

Acid polimetaacrilic

Metaacrilat de metil

H2 C

C C O CH3

Polimetaacrilat de metil

Reacia de polimerizare are loc n prezena unor cantiti mici dintr-un compus, cunoscut sub numele generic de iniiatori. Pentru c n cursul reaciei iniiatorul se descompune consumndu-se n reacie, nu poate fi considerat catalizator. Iniiatorii formeaz specii reactive care pot adiiona la dubla legtur a monomerului, cu formarea unui radical care poate continua reacia prin adiia la o nou legtur dubl a uni alt monomer. Sunt cunoscute dou mecanisme de reacie: polimerizarea prin mecanism radicalic i polimerizarea prin mecanism ionic (anionic sau cationic). 13.2.1.1 Polimerizarea prin mecanism radicalic. Polimerizarea este declanat apariia unui radical care are electroni impari, rezultai fie prin aciunea unui agent fizic (radiaii ultraviolete, cldur, ultrasunete, etc..) fie n urma unei

reacii chimice. Aceste reacii au loc dup mecanismul reaciilor nlnuite cu cele trei etape 133 principale: iniierea, propagarea i ntreruperea. Reacia de iniiere const n transformarea iniiatorului n radical liber (cu electron impar). Cei mai des utilizai iniiatori sunt: peroxidul de benzoil C6H5COO-OOCC6H5, care elibereaz radicalii liberi C6H5COO i C6H5 ; esterii peracizilor, cum ar fi perbenzoatul deterbutil C6H5CO-OOC(CH3), care elibereaz radicalii C6H5COO i OC(CH3); precum i un azo-derivat, azoizobutironitrilul. De altfel muli dintre monomerii vinilici pot absorbi o cuant de lumin transformndu-se n radicali liberi. n cazul n care iniiatorul reaciei este peroxidul de benzoil iniierea are loc dup urmtoarea succesiune: C6H5COO-OOCC6H5 2 C6H5COO C6H5COO C6H5 + CO2 Activarea iniiatorului se poate face pe mai multe ci: - prin absorbia unei cuante de energie eliberat de lumina vizibil, ultraviolete, radiaii X, radiaii ionizante - prin nclzire - prin ultrasonicare - prin iradiere cu un fascicul laser, - folosind amine teriare (dimetil-p-toluidina, CH3-C6H4-N(CH3)2) sau mercaptani - ca rezultat al unui proces chimic n soluia de monomeri se adaug n mod curent substane cu aciune reductoare, numite stabilizani, care previn formarea radicalilor liberi (n tipul depozitrii) naintea introducerii iniiatorului. naintea procesului de polimerizare, stabilizatorii trebuiesc neutralizai prin oxidare (folosind chiar iniiatorul ex. peroxidul de benzoil). Reacia de propagare const n combinarea radicalilor liberi, rezultai din reacia de iniiere, cu monomerii avnd drept rezultat formarea de ali radicali din ce n ce mai mari. Reaciile de polimerizare sunt reacii exergonice, energia rezultat fiind folosit la formarea altor radicali liberi care vor iniia alte reacii de propagare.

134
R + CH2

CH3 C COOCH3 R CH2

CH3 C

COOCH3 CH3 R CH2 C CH2 CH3 C

CH3 R CH2 C

CH3 + CH2 C COOCH3

etc.

COOCH3

COOCH3

COOCH3

Reacia de ntrerupere const n ciocniri ntre molecule de radicali n urma crora nu mai rezult ali radicali liberi, care s propage reacia de polimerizare, ci molecule inerte, adic macromolecule. Aceste reacii pot avea loc prin reacii de dimerizare, adic ciocniri ntre doi radicali rezultai n reacia de iniiere sau ntre polimeri radicali. De asemenea reaciile de ntrerupere pot avea loc i prin disproporionare, adic transferul unui atom de hidrogen de la un radical la altul, cu formarea unei molecule saturate i a unei molecule nesaturate.

. . R.+ H.
R +R CH3 R (CH2 C)n

R R

R H CH3

CH2

.C

CH3

CH3 CH2 (C CH2)n R R

CH3 (CH2 C)2n+1 CH 2 COOCH3 CH3 CH + R COOCH3 CH3 (CH2 C)y CH COOCH3 CH3 C

CH3 C R

COOCH3

COOCH3 COOCH3 COOCH3

COOCH3

Reactii de dimerizare CH3 CH3 R (CH2 C)(x+y) CH2 COOCH3 C

CH3 R (CH2 C)x CH2 COOCH3

COOCH3

COOCH3

Reactii de disproportionare

13.2.1.2 for-meaz compleci, care pot fi fie anioni fie cationi. Catalizatorii pot fi fie amidura de sodiu sau

Polimerizarea prin mecanism ionic.

CN CH2 CH+ H2NCN H2 N CH2 CH + CH2 H2N CN CH H2 N CH2 CH2 CN CH

Acest tip de polimerizare necesit prezena unui catali-zator, care mpreun cu monomerul

. .CN CH CH2 CN CH etc.

. .

. .

Polimerizare anionica

butil litiu n acest caz formndu-se com-pleci anionici, fie halo-genuri anorganice cu atom

central cu deficit de electroni de ex. BF3, AlBr3, AlCl3, etc., caz n care se formeaz compleci 135 cationici.
N H 2C H3 C

+ CH2 AH

H3 C

CH2

N+AH3 C CH2 N CH2 CH2 N+A- etc.

CH2

N N+A- + H2 C CH2

Polimerizare cationica

Reacia are aceleai etape ca i reacia de polimerizare prin mecanism radicalic. Monomerii cianoacrilici polimerizeaz dup un mecanism anionic iar rinile epiminice dup un mecanism cationic. 13.2.2 Reacia de policondensare n timpul reaciei de policondensare se elimin o molecul simpl dintre doi monomeri, cu formarea unei noi legturi. Monomerii care particip la
X X R1 R X+ Y Y+ X R2 R Y Y X X R1 R2 R R Y + XY Y + XY

reacia de policondensare pot fi Reactii de policondensare cu monomeri diferiti si respectiv identici aceeai (siliconi, rini epoxidice, etc.) sau diferii (bachelite, nylon, etc.). Civa din cei mai importani compui macromoleculari, utilizai n medicina dentar, obinui prin policondensare sunt: 1. Nylonul se obine acidului prin adipie
n HOOC (CH2)4 HO(OC (CH2)4 COOH + n H2 N CONH (CH2)6 (CH2)6 NH2

policondensarea

(acid dicarboxilic) cu hexametilen diamina (o diamnin).

NH)nH+ nH2O

136 3. Policarbonaii sunt poliesteri ai acizilor carbonici cu diferii bisfenoli. Sunt polimeri termoplastici reversibili. Un exemplu de policarbonat este macromolecula obinut prin policondensarea difenilcarbo-natului cu un nHO C6H4 C(CH3)2 C6H4 OH + nCO(OC6H5)2 bisfenol, n prezen de oxid CH3 O de zinc drept catalizator.
H O C O C OC6H5
3 n reticulat. Datorit acestei structuri au o rezis-ten chimic i me-canic deosebit.

2. Bachelita rezult prin policon-densarea fenolului cu aldehida formic, are o structur

CH

(2n-1)C6H5OH

4. Rinile epoxidice sunt folosite ca adezivi. Un exemplu de rin epoxidic este polimerul obinut prin condensarea 2,2-Bis-(p-hidroxifenil)-propanul cu epiclorhidrina.
CH3 HO C CH3 OH 2 Cl NaOH CH3 CH2 O C CH3 NaOH O CH2 CH CH2 O 2 HCl CH3 C CH3 O 2 Cl CH2 CH CH2 2 HO O CH2 CH O CH2 O CH2 OH CH Cl CH2 CH2 CH O CH2

Cl CH2

OH CH

CH3 C CH3 OH

etc.

OH CH2 HO CH2 OH CH2 OH CH2 CH2 CH2

OH CH2 CH2 CH2

OH n + n H2CO

CH2

- nH2O CH2

5. Polisulfurile sunt constituenii de baz a unor gume sintetice. Un exemplu137 de polisulfur:

Cl R Cl + Na2Sx R Sx +2NaCl

6. Siliconii sunt polimeri anorganici sau organici care iau natere prin policondensarea silanolilor:
R n HO Si R OH H( O R Si ) OH +(n-1)H2O n R

13.3

Conceptul de polimeri ionici

CH COOZn2+ COOCH CH2

Prin conceptul de polimer ionic se nelege o macromolecul att legturi ionice ct care conine i legturi

CH2

CH COOZn2+ COOCH

CH2 CH COOZn2+ COOCH2 CH

CH2

CH COOZn2+ COO-

covalente. Astfel poliacrilatul de zinc conine catene lineare de carbon de care

CH2

CH

sunt ataate grupri carboxil (- COOH). Catenele lineare de atomi de carbon sunt unite prin legturi ionice care se realizeaz prin intermediul ionilor de Zn2+. ntregul ansamblu covalent este un polianion care particip prin intermediul gruprilor COO- la formarea unor legturi ionice cu cationul Zn2+. n funcie de raportul dintre legturilor covalente i ionice, polimerii ionici pot fi clasificai n: - Polimeri ionici cu un coninut mare de legturi ionice (sticle anorganice, poliacrilatul de zinc) sunt materiale foarte rigide i fragile. Avnd un numr mare de ioni, pot reine n reeaua lor cantiti importante de ap, prin hidratarea ionilor de ctre molecule de ap. Aceti polimeri se pot chiar dizolva n ap, formnd soluii de polielectrolii. Unele polizaharide cum ar fi alginaii sunt folosii ca materiale de amprentare elastice ireversibile.
CH COO Zn2+ COOCH
-

COOH O O O

COOH O O

COOH O O

Alginat (acid poli D-manuronic 1-4) CH2 CH2 CH2 CH COO Zn2+ COOCH2 CH2 n CH2 CH CH2 CH2 n
-

CH2

CH2

Cimenturile ionomere de sticl i cimenturile de policarboxilat de zinc sunt alte dou exemple 138 de polimeri ionici. - Polimeri ionici cu coninut mic de legturi ionice sunt termoplastici, adic se nmoaie putnd fi modelai, dup rcire i menin noua form. Datorit proporiilor variabile a legturilor ionice i a celor covalente, polimerii ionici sunt o clas de compui foarte diversificat, ale cror proprieti difer n limite largi.

14 CIMENTURI FOLOSITE N MEDICINA DENTAR

14.1 Cimenturile fosfat de zinc
Cimenturile fosfat de zinc (FOZ) se prezint sub forma unui sistem format din dou componente o pulbere i un lichid. Pulberea are o compoziie variabil, conine preponderent ZnO (80-90%), MgO (2-10%), ct i ali oxizi. Partea lichid este o soluie de acid fosforic (45-65%), ap (30-55%), la care se adaug pulbere de Al (2-3%) i pulbere de Zn (0-9%). La amestecare, principalele reacii care au loc sunt urmtoarele: ZnO + 2H3PO4 Zn(H2PO4)2H2O ZnO + H3PO4 + 2H2O ZnHPO43H2O 3ZnO + 2H3PO4 + H2O Zn3(PO4)24H2O 3MgO + 2H3PO4 + H2O Mg3(PO4)24H2O Toate aceste reacii sunt exoterme astfel nct pacientul percepe o senzaie de nclzire local. Aceste cimenturi sunt folosite la fixarea protezelor unidentare, dar se mai folosesc i pentru obturaii de baz i reconstituirea leziunilor coronare ale dinilor temporari.

14.2

Cimenturile silicat

Ca i n cazul cimenturilor FOZ, cimenturile silicat (CS) se prezint sub forma unui sistem binar, respectiv o pulbere i un lichid. Pulberea are urmtoarea compoziie SiO2 (cuar)

31,5-41,6%, Al2O3 27,2-29,1%, CaO 7,7-9%, Fluoruri 13,5-22%, Pentaoxid de fosfor (P 2139 O5) 3-5,3%, ZnO 0,1-2,9%. Pulberea este de fapt un amestec de silicai fin mcinat, cu compozii mai nainte amintit. Partea lichid are urmtoarea compoziie, acid fosforic 48,8-55,5%, Al 1,5-2%, Zn 4,2-9,1%. La amestecare are loc reacia de priz care are urmtoarele etape: Descompunerea suprafeei particulelor de pulbere de ctre partea lichid. Ionii de hidroniu rezultai din disocierea acidului fosforic, nlocuiesc ionii de Al 3+ din reeaua de aluminosilicai, ct i ionii de Na+ i Ca2+, rezultnd un silicagel hidratat. Ionii de hidroniu fiind inclui n gelul de silice pH-ul fazei lichide crete. Ionii eliberai de pe suprafaa particulelor solide, migreaz n faza lichid. Pe msur ce pH-ul crete aceti ioni precipit sub form de fosfai i fluoruri. Principalul compus care funcioneaz ca un liant este gelul alumino-fosfatic care mai conine i o cantitate mic de fosfat bazic de aluminiu sub form cristalin Al2(OH)3PO4. Numai 20% din pulbere particip la reacia chimic, avnd n vedere c numai suprafaa particulelor solide este atacat de acidul fosforic. Dup priz n structura cimentului vom gsi particule de pulbere nereacionat, particule de pulbere nvelite n gel de silice, toate nglobate ntr-un gel amorf al crui constituent principal este fosfatul de aluminiu. Cimenturile silicat se utilizeaz cu predilecie n odontologie, pentru reconstituirea suprafeelor dentare care nu sunt supuse direct presiunilor masticatorii.

14.3

Cimenturile oxid de zinc/eugenol

Cimenturile oxid de zinc-eugenol (ZOE) sunt de mai multe tipuri n funcie de utilizare (fixri provizorii, fixri permanente etc.) i anume pulbere/lichid, past/past. Din punct de vedere al timpului de priz cimenturile ZOE pot fi normale sau rapide. Compoziia variaz de la productor la productor avnd o compoziie general dup cum urmeaz: Pulberea are n compoziie ZnO purificat i colofoniu, acetat de zinc sau sulfat de zinc, pentru accelerarea prizei, unele pulberi conin i aproximativ 1% stearat de zinc care are aciune plastifiant. Unele reete au n compoziia pulberii i cantiti mici de oxid de magneziu care reacioneaz n mod similar cu eugenolul ca i oxidul de zinc.
OH O CH3

CH2

CH

CH2

Eugenol

Lichidul n funcie de reeta productorului poate fi: eugenol pur (2-metoxi-4-alilfenol) sau 140 ulei de cuioare (Eugenia Cariophilata) cu urmtoarea compoziie: 85% eugenol, 15 % acetileugenol i cariofilen. De asemenea lichidul poate s conin 85 % eugenol i 15% ulei vegetal de obicei ulei de msline, ca plastifiant. Partea lichid conine mici cantiti de aproximativ de 1% etanol sau acid acetic i mici cantiti de ap cu rol esenial pentru priza cimentului. Reacia de priz presupune o serie de procese complexe ntre componentul lichid i pulbere, cu formarea eugenolatului de zinc. Cu toate c reacia de formare a eugenolatului de zinc este cunoscut restul reaciilor care au loc nu sunt pe deplin elucidate. Reacia de priz dintre oxidul de zinc i eugenol nu poate avea loc n mediu anhidru. Se pare c gruparea fenolic a eugenolului avnd un caracter slab acid este capabil s complexeze zincul din Zn(OH)2 rezultat prin hidratarea ZnO. n absena catalizatorilor, amestecul ZnO cu eugenol ce conine 2% ap se ntrete numai n 24 de ore. Dac coninutul de ap crete la 5% timpul de priz se reduce la 15 minute. Se consider c dup ntrirea cimentului, ZnO nereacionat se afl dispersat ntr-o matrice de eugenolat de zinc. Matricea n ansamblul ei este amorf cu toate c are mici poriuni cristaline, mai ales cnd se folosete drept accelerator acetatul de zinc. n unele cimenturi ZOE mai pot rmne cantiti de eugenol liber pentru c reacia de formare a eugenolatului de zinc este reversibil. Bineneles c dublele legturi din catena alilic a eugenolatului pot avea un rol n polimerizarea moleculelor de eugenolat de zinc, contribuind astfel la ntrirea cimentului. Cimenturile ZOE se utilizeaz pentru obturaii de baz, de obicei asociate cu FOZ, pentru obturarea canalelor, acoperirea pansamentelor calmante i ca pansamente gingivale.

14.4
FOZ,

Cimenturi policarboxilat de zinc

cu
OH O CH3 H2 C CH CH2 O O H3 C Zn O CH2 CH CH2 CH3 O

Cimenturile policarboxilat de zinc (PCZ) combin rezistena mecanic ridicat a cimentului biocompatibilitatea acceptabil a cimenturilor ZOE i care ader la esuturile dentare dure. Din punct de vedere al prezentrii cimenturile
CH2 CH CH2 Eugenol

+ ZnO

- H2 O

Eugenolat de zinc

PCZ sunt pulbere / lichid. Din punct de vedere al compoziiei, compoziia pulberii nu difer 141 practic de compoziia pulberii de la cimenturile FOZ. Astfel pulberea are n compoziie ZnO ntre 50-90%, MgO 0-10%, unii aditivi cum ar fi Al 2O3 10-40% urme de SiO2 sau urme de sruri de bismut. n unele produse se adaug 1-5% SnF2, care mbuntete rezistena mecanic i proprietile de manipulare. Exist cimenturi PCZ n compoziia crora se poate ntlni sub 1% Na. Pentru sistemele anhidre pulberea conine alturi de substanele mai sus enumerate i poliacidul, parte lichid fiind n mare parte ap distilat. Partea lichid a cimenturilor PCZ este similar cu a cimenturilor ionomere i anume o soluie apoas concentrat (cca. 50%) de acid poliacrilic. Datorit apariiei unor legturi de hidrogen ntre molecule n 10-30 de sptmni de la preparare parte lichid se gelific. Aceste inconvenient se elimin dac se reduc numrul de legturi de hidrogen, prin copolimerizarea acidului acrilic cu ali acizi carboxilici nesaturai cum ar fi:
HC HC COOH COOH CH2 C CH2 COOH COOH HC C CH2 COOH COOH COOH

acid maleic

acid itaconic

acid aconitic

Produsele comerciale au n componenta lichid 30-45% acid poliacrilic sau copolimeri ai acidului acrilic cu ali acizi carboxilici nesaturai. Este de dorit ca aceast component s conin ct mai puine molecule de monomeri nepolimerizai i s nu conin sulfat rezidual din descompunerea iniiatorului de polimerizare persulfat de amoniu (NH4)2S2O8. Mecanismul de priz, const n urmtoarele reacii: Acidul poliacrilic i copolimerii si, adic ali poliacizi, se afl n stare ionizat n soluii apoase ca urmare a reaciei R COOH + H2O R COO- + H3O+, ionii de hidroniu (H3O+) rezultai reacioneaz cu ZnO elibernd ioni de Zn2+ care vor intra n soluia apoas 2H 3O+ + ZnO Zn2+ + 3H2O. n continuare ionii de Zn2+ se leag de ionii COO- din catena poliacidului. Ca urmare a formrii acestor legturi ionice ntre catenele poliacidului structura devine reticulat, ntre catenele poliacizilor stabilindu-se att puni ionice ct i legturi coordinative.

142 ZnO rmas nereacionat este nglobat n gelul amorf rezultat n urma polimerizrii. Avnd n vedere c unele cimenturi PCZ conin i MgO este de precizat c acesta se comport similar cu ZnO Avnd n vedere c marea majoritate a legturilor ce se stabilesc ntre catenele poliacide sunt de natur ionic, se explic de ce cimenturile PCZ au o plasticitate mai mare, dect cimenturile n care legturile dintre catenele polimerilor sunt de natur covalent. Datorit formrii legturilor ionice, (dar i de natura coordinativ) dintre gruprile carboxilice rmase libere ale cimentului, cu ionii de Ca 2+ din structura smalului sau dentinei, explic buna aderen a acestor cimenturi la esturile dure dentare. Aderena se explic i prin faptul c n structura catenelor poliacizilor, se gsesc lanuri de grupri metilen CH2 acestea putndu-se mula pe suprafaa cristalelor de hidroxiapatit. Cimenturile PCZ sunt utilizate pentru fixarea protezelor unidentare, lipirea unor atele de imobilizare, lipirea de inele ortodontice, pentru obturaii de baz, pentru obturaii de canal, obturaii de dini temporari, obturaii ale bonturilor dentare, etc..

CH COO-

CH2

CH2

CH2 CH COO-

CH2

CH2

CH COO-

CH2

CH2

CH2 CH CH2 n legturi COOionice

CH2

Zn2+ COOCH CH2 CH2 n COOCH2 CH CH2 COOCH2 CH n

Zn2+ legturi coordinative CH2 CH2 n

COOCH2 CH2 n

CH2 CH

14.5

Cimenturi ionomere de sticl

Cimenturile ionomere de sticl (CIS) au fost elaborate pentru obinerea de materiale de obturaie adezive i fizionomice, acceptabile, pentru refacerea leziunilor coronare ale dinilor frontali. Din punct de vedere chimic CIS sunt poliacrilai compleci sau polialchenolai de sticl. Aceti polimeri rezult din interaciunea unei soluii apoase a homo sau copolimerilor acidului acrilic sau polialchenoic, cu un silicat dublu de aluminiu i calciu. Cimenturile ionomere de sticl se prezint ntr-un sistem dicomponent pulbere / lichid, existnd de asemenea i sisteme anhidre n care acidul este liofilizat i ncorporat n pulbere. Aceast pulbere se amestec cu ap distilat sau cu o soluie de acid tartric. Actualmente se utilizeaz pe scar larg cimenturi ionomere fotopolimerizabile.

Din punct de vedere chimic pulberea este constituit din sticle capabile s elibereze ionii n urma atacului poliacidului. Sticlele sunt multicomponente obinndu-se prin topirea aluminei Al2O3, silicei SiO2, oxidului sau fluorurii de calciu n prezena unor aditivi: fluorur de aluminiu AlF 3, fosfat de aluminiu AlPO4 sau criolit [Na3(AlF6)]. Un exemplu tipic de reet de

CH2 C CH2

143
COOH COOH

acid itaconic

obinerea sticlei ar fi: SiO2 3,1%; Al2O3 19,9%; AlF3 2,6% CaF2 34,5%; NaF 3,7%; AlPO4 10,0%. Pulberea deci este asemntoare ca i compoziie, cu cea a cimenturilor silicat se prepar prin topirea amestecului la 1000-1300C. Rcirea masei topite este urmat de formarea unei sticle opace. Topitura este rcit brusc prin turnare n ap rece, sticla rezultat este mcinat. Pentru a reaciona sticla cu acizi slabi, cum este acidul poliacrilc, s-a crescut bazicitatea sticlei prin creterea raportului Al2O3/SiO2 . n produsele comerciale actuale se folosesc sticle multicomponente cu compoziia generic: 2SiO2Al2O32(1-x)CaO2xCaF2. Pulberea cimenturilor ionomere de sticl fotopolimerizabile este format dintr-o sticl fluoroaluminosilicic i un fotoiniiator. Componenta lichid este similar cu componenta lichid a cimenturilor PCZ, adic un copolimer al acidului acrilic cu acidul itaconic sau maleic, n acest caz lichidul este numit acid polialchenoic. La sistemele anhidre pulberea de poliacid este liofilizat i amestecat omogen cu pulberea de sticl. n acest caz componenta lichid este apa. Pentru cimenturilor ionomere de sticl fotopolimerizabile partea lichid este format dintr-un copolimer al acidului acrilic cu acidul itaconic, acest copolimer este dizolvat n ap i hidroxietilmetacrilat. Lichidul mai conine i fotoiniiatorul (a nu se confunda cu fotopolimerizatorul vezi subcapitolul 13.2.1.1.)

144

Reacia de priz este un mecanism complicat care cuprinde mai multe etape: 1) dizolvarea i disocierea acidului; 2) distrugerea reelei de sticl cu eliberarea cationilor i formarea acidului ortosilicic; 3) migrarea cationilor n mediul de reacie i formare de compleci ((AlF)2+, (AlF2)+, anionice (CaF)+); 4) coordinarea Ca2+ i Al3+ cu formarea grupelor COO- ale poliacidului; 5) reticularea catenelor poliacidului i precipitarea

polisrurilor de Ca i Al. Prin eliminarea ionilor de hidrogen, acidul ortosilicic se transform n silicagel, care nglobeaz particulele de sticl neatacat de acid; 6) hidratarea polisrii cu formarea matricei de hidrogel ce unete particulele de sticl nereacionate.
CH H2O H2O COO Me
-

CH2 H2O H2O

-

CH2

CH2 CH COO H2O COO

-

CH2

CH2

CH COOOH2

CH2

CH2

CH2 CH C

CH2 O-

CH2

2+

Me2+

O 3+ O Al C OCH2

OH2 F-

COO CH

COOCH2 CH2 CH n CH2 CH2 n

CH2

CH2

CH2 CH

CH2 CH

CH2

Structuri moleculare posibile ale unui ciment ionomer de sticl dup priz

Pentru cimenturile ionomere de sticl fotopolimerizabile reaciile de priz sunt prezentate n schema de mai jos.

COOH

COOH +H2O COOH H3O+ + FAS COO-

COO-

COOCOO-

145

COOH

+ 2+ Al3+ + AlF + AlF2 ....

COOAl COO3+

COO-

COO- COO Al3+ Al3+ COO- COO- COO

+ h + HEMA

COOAl3+ COO-

COO-

COO- COO 3+ Al Al3+ COO COO COO

FAS = sticl fluoroaluminosilicic

HEMA = hidroxietilmetacrilat

Cimenturile ionomere de sticl au utilizri multiple, iat cteva dintre acestea lipirea punilor i protezelor unidentare, materiale de obturaii de baz i obturaii de durat n cavitile de clasa a V-a, obturarea dinilor temporari, sigilarea anurilor i fosetelor, n diferite tehnici de colaj, etc..

15 Amalgamele
15.1 Generaliti
Amalgamele sunt materiale metalice folosite ca obturaii de durat. Ele au folosite n China antic nc din anul 600 .Cr.. Amalgamele moderne sunt folosite n obturarea cavitilor de peste 200 de ani. Amalgamele sunt aliaje ale mercurului cu unul sau mai multe metale. Amalgamele dentare sunt aliaje ale mercurului cu argint, staniu, cupru i uneori zinc. n cazul n care amalgamul rezult din alierea mercurului cu argint, staniu i cupru se numesc aliaje ternare, iar dac se mai adug i zinc aliajele se numesc cuaternare. Compoziia chimic de principiu a aliajului pentru amalgam este Ag 40-74%, Sn 25-30%, Cu 2-30%, Zn 0-2%, Hg 0-3%. n conformitate cu reglementrile internaionale n domeniu un amalgam dentar se recomand s conin Ag 65%, Sn 25%, Cu6%, Zn 2%, Hg 3%, care se adaug urme de Au i Pt. n funcie de compoziie i forma particulelor amalgamele pot fi clasificate n: aliaje cu coninut redus de cupru

sub form de pilitur 146 sub form de particule sferice aliaje cu coninut crescut de cupru cu faze dispersate sub form de pilitur sub form de particule sferice cu faz unic sub form de particule sferice

15.2

Pilitura

Pilitura este format din particule de form neregulat. Metalele din compoziie sunt nclzite n atmosfer inert, pentru a mpiedeca oxidarea, pn la topire. Dup topire se toarn n tipare, obinndu-se lingouri. Lingourile sunt rcite controlat astfel nct s se formeze mai ales Ag3Sn i cantiti mici de Cu3Sn. Lingourile astfel obinute se mrunesc de obicei prin frezare industrial. Mrunirea mecanic, adic prelucrarea la rece, produce o cretere a duritii aliajului, n structura cruia apar linii de alunecare i se distruge de asemenea n mare parte reeaua cristalin. Pentru a nltura neajunsurile prelucrrii la rece, se practic o recristalizare artificial a pulberii prin nclzire la 100C timp de 1-6 ore.

15.3

Particule sferice

Sferele iau natere prin atomizarea aliajului topit ntr-o incint nchis, care de obicei conine un gaz inert. Unele procedee folosesc atomizarea n ap, obinndu-se astfel suprafee mai neregulate a particulelor, care n acest caz se vor numi sferoidale. Sferele aliajelor convenionale cu un coninut redus de cupru sunt formate n principal din Ag 3Sn alturi de cantiti mici de Cu3Sn. Sferele din aliaje amestecate cu un coninut ridicat de cupru sunt formate n principal din Ag3CU2 . Sferele din aliaje cu compoziie unic cu coninut crescut de cupru, au o concentraie de Ag mai mare la periferie dect la centru, n timp ce staniu are concentraie mai mare la centru dect la periferie. Concentraia cuprului fiind uniform n diferitele zone ale sferei.

15.4

Structura i fenomenul de priz

Fenomenul de priz al amalgamelor este foarte complex, un numr mare de factori rmnnd nc necunoscui pe plan metalografic.

Atunci cnd aliajul Ag-Sn trece de la faza lichid la faza solid, n cursul procesului 147 de fabricaie, aliajul prezint trei modificri de structur cristalin, la temperaturile de 724C, 480C i respectiv la 221C corespunztor unor intervale de compoziie particulare. 1. Soluia solid primar apare pentru un interval de compoziie cuprins ntre 0 i 10% Sn, avnd o structur cubic cu feele centrate. Tranziia de faz de la la nu este brusc pentru aliajele cu coninut redus de Sn, avnd n vedere c cele dou faze sunt miscibile. 2. Soluia solid , o faz intermediar ce rezult din reacia la 724C a soluiei solide cu metal lichid, apre n intervalul de compoziie 13-20% Sn.. n cazul aliajelor cu coninut crescut de Sn soluia solid e miscibil cu faza . 3. Compusul intermetalic, rezult din reacia la 480C a soluiei solide , cu lichidul, apare pentru intervalul de compoziie 25-27% Sn. 4. La temperaturi mai mici de 221C i la concentraii mai mari de 26,8% Sn rezult un amestec eutectic de cristale de faze i (faza este Sn pur). Compusul Ag3Sn (faza ) constituent esenial al aliajului Ag-Sn, este cel care reacionez cu mercurul, dnd natere la dou faze cristaline 1 i 2. Faza 1 este cea care cristalizeaz prima i i se atribuie n general formula Ag2Hg3.Ulterior apar cristalele fazei 2, n sistem hexagonal, corespunztor formulei Sn7-8Hg. n cazul amalgamelor cu coninut crescut de cupru, formare fazelor Cu3Sn i Cu6Sn5 se face n detrimentul fazei Sn7-8Hg (faza 2) care astfel practic dispare. 15.4.1 26,85% Sn). n timpul preparrii i dup aceea, mercurul penetreaz n particulele de aliaj impregnnd stratul superficial; Amalgamarea reprezint nceputul reaciei chimice ntre aliaj i mercur, care decurge n mai multe etape, terminndu-se prin cristalizare; Ag3Sn + Hg Ag2Hg3 + Sn7-8Hg + Ag3Sn (nereacionat) Fazele 1 (Ag2Hg3) i 2 (Sn7-8Hg) formeaz matricea structurii (sub forma unei reele continue) n timp ce Ag3Sn nereacionat reprezint miezul; Dup priz mai au loc reacii prin procese de difuziune. Mecanismul de priz al amalgamelor cu coninut redus de cupru Punctul de plecare este reprezentat de compusul intermetalic Ag3Snb (faza : 73,15% Ag,

148

15.4.2

Mecanismul de priz al amalgamelor cu coninut crescut de cupru

1. Pentru amalgamele cu faze dispersate n prima etap are loc o reacie similar cu cea din cazul aliajelor convenionale (aliajul Ag-Cu nu particip). n a doua etap are loc reacia: Sn7-8Hg +AgCu Cu6Sn5 + Ag2Hg3 Solubilitatea mercurului n staniu este de 170 de ori mai mare dect n cupru i de 17 ori mai mare dect n argint, rezult c mercurul reacioneaz cu staniu i argintul ca n cazul amalgamelor clasice, rezultnd fazele 1 (Ag2Hg3) i 2 (Sn7-8Hg), apoi foarte rapid , faza 2 neoformat, va reaciona cu AgCu rezultnd faza (Cu6Sn5). Cu6Sn5 se prezint ca un halou ce nconjoar particulele de Ag-Cu. Dup priza final structura const dintr-un miez de Ag3Sn i AgCu, nconjurate de un halou de Cu 6Sn5 i o matrice de Ag2Hg3. 2. Pentru amalgamele cu compoziie unic Structura este similar celei de mai sus, cu excepia faptului c Cu 6Sn5 este prezent n proporie mai mare n matricea de 1 (Ag2Hg3) dect n halou. De remarcat c n aceste condiii coninutul de 2 (Sn7-8Hg) este practic nul.