Universitatea Ovidius

2016-2017

Biochimia Manganului

Studeni: Ene Diana

Cucu Daniela
Program de studii: Master Chimie

Biochimia Manganului
Este un metal alb-argintiu, asemntor fierului, care se gsete n
stare liber n natur (deseori n combinaie cu fierul) i n mai multe
minerale.
Manganul este larg rspndit n scoara pmntului, sub form de oxizi, carbonai i
silicai, considerat al doisprezecelea element i al cincilea metal ca abunden. Acesta, dei se
gsete n organisme n cantiti extrem de mici, este esenial pentru metabolismul tuturor
vieuitoarelor. Manganul, fierul i zincul sunt micronutrieni eseniali pentru plantele i animalele
din sistemele acvatice. Concentraia manganului este foarte mare n sedimentele de pe fundul
lacurilor , mrilor i oceanelor, de unde poate fi eliberat prin acidifierea apelor rezultat n urma
polurii artificiale.

Figura 1. Mangan
Fr ndoial, n doze mari este toxic, determinnd o serie de patologii, care au la baz
generarea de radicali liberi ai oxigenului (ROS). Radicalul liber primar n sistemele biologice
aerobe este radicalul superoxid, care este n echilibru cu forma sa protonat radicalul
hidroperoxil. Sursele majore ale acestor radicali provin din lanul transportor al mitocondriei i
din reticulul endoplasmic. Dei anionul superoxid este relativ nereactiv n comparaie cu ali
muli radicali, sistemele biologice l convertesc n specii mult mai reactive, cum ar fi: radicalii
peroxil, alcoxil i hidroxil.

Producia anormal de ROS poate duce la dereglri n homeostazia redox, cunoscut ca

stress oxidativ. Din fericire, celulele au mecanisme antioxidante proprii de aprare pentru a
neutraliza nivelele crescute de ROS, prin intermediul compuilor antioxidani ca vitaminele C i
E, glutation (GSH), ubiquinona i enzime antioxidante: glutation peroxidaza, superoxid
dismutaza i catalaza. Lezarea oxidativ intervine cnd ROS celulare depesc capacitatea
antioxidant. Consecinele pe termen lung ale stresului oxidativ au fost asociate cu patogeneza
multor maladii i toxiciti, incluznd ateroscleroza, diabetul, maladiile inflamatorii cronice,
tulburri neurologice i maladii cardiovasculare.
Mn induce stresul oxidativ ntr-o manier dependent de timp i concentraie, conform
msurtorilor parametrilor citotoxici, lactat dehidrogenazei i peroxidrii lipidelor. Creterea
toxicitii a fost asociat cu reducerea glutationului la nivel mitocondrial, tripeptid abundent cu
proprieti antioxidante i stimularea expresiei genice a proteinelor de oc termic heat shock 27
(hsp 27) i heat shock 70 (hsp 70), att la nivel tisular ct i la nivel celular.
Manganul se poate acumula i cauza citotoxicitate i distrugerea celulei. Dup alterarea
activitii diferitelor enzime i nivelelor de expresie a genelor, distrugerea intracelular indus de
Mn include ruperea catenelor ADN, distrugerea cromosomilor, i peroxidarea lipidic.
Mecanismul complicat al citotoxicitii acestui metal greu nu a fost nc bine stabilit, dar sunt
dovezi c generarea de ROS i creterea stresului oxidativ joac un rol cheie. Pentru a preveni
distrugerea celular indus de agentii toxici, celulele rspund apelnd la diverse ci de
semnalizare i la stimularea expresiei genelor ce codific factori de trascripie sensibili la stres,
proteine ca metaloproteinele i enzimele antioxidante.
Culturile primare de hepatocite sunt considerate sisteme in vitro importante pentru studiul
funciei hepatice ca rspuns la diferii inductori. Ele au aplicaii variate n toxicologie, n
screeningul compuilor citotoxici i genotoxici i evaluarea agenilor chemoprotectori precum i
n determinarea leziunilor caracteristice celulei hepatice i a mecanismelor biochimice asociate,
induse de compuii toxici.
n vivo, este dificil s se disting ntre efectele primare ale unui compus de cele induse
secundar deoarece funciile ficatului se gsesc sub influena diferiilor factori endogeni i
exogeni care interacioneaz cu alte organe. Datorit inconvenientelor asociate studiilor n vivo
de hepatotoxicitate indus de ageni chimici, sistemele n vitro reprezint o abordare

experimental mai bun pentru evaluarea potenialului compuilor hepatotoxici i investigarea

mecanismelor prin care acetia induc leziuni hepatice.
n concentraii mici, manganul prezint un efect protector prin reducerea radicalilor. OH,

producnd

2+ .
Mn(OH ) De asemenea cationului

2+
Mn

poate lega coordinativ aminoacizi,

meninnd i prin aceast cale homostazia speciilor reactive. n concentraii mari, manganul se
acumuleaz n principal la nivel mitocondrial, producnd grave dereglri ale metabolismului
normal: inhibarea oxidrii succinatului, inhibarea NADH dehidrogenazei i a NADH citocrom c
reductazei.

Necesarul zilnic:
0-6 luni
0,3-0,6
mg

7-12
luni
0,6-1
mg

1-3 ani
1-1,5
mg

4-6 ani
1,5-2
mg

7-10
ani 23 mg

Peste 11
ani 2-5
mg

Surse dietetice de mangan:

Alimentele cu coninut ridicat de mangan sunt cerealele integrale, vegetalele verzi,
sfecla, fasolea verde, nucile i ananasul.

Superoxid dismutaza (SOD)

n 1969, McCord i Fridovich au raportat pentru prima data faptul c o protein izolat
din eritrocite funcioneaz ca enzim de tip superoxid dismutaza. De atunci s-au publicat sute de

lucrri despre formarea

2
O

n diferitele reacii chimice sau de efectul inhibitorilor produs

prin simpla adugare a SOD n mediul de reacie.

n general, exist trei tipuri de superoxid dismutaze, fiecare avnd un ion metalic diferit
n situsul catalitic. Astfel, cele mai ntlnite forme ale enzimei sunt superoxid dismutaza ce
conine cupru i zinc (Cu,Zn-SOD) (se gsete intracitoplasmatic), superoxid dismutaza ce
conine mangan (Mn-SOD) (care se afl n matricea mitocondrial) i superoxid dismutaza ce
conine fier (Fe-SOD) (care se gsete la bacterii i plante). Recent a fost descoperit i o
form a enzimei cu nichel (Ni-SOD) n Streptomyces griseus.

Figura 2. Mn-SOD

Figura 3. Mn-SOD mitocondriala (om)

Figura 4. (a) Mn-SOD mitocondrial (om); (b) centrul activ

Toate mamiferele consum oxigen ca suport al respiraiei, dar o cantitate considerabil
din acest oxigen este metabolizat ca superoxid. Organismele aerobe conin o cantitate mare de
SOD care asigur protecia celulei fa de acest agent toxic rezultat din procesul de respiraie.
Superoxidul poate suferi o disproporionare spontan cu formare de ap oxigenat i oxigen
(reacia 1), mecanismul fiind dependent de pH, dar efectul catalizei de ctre SOD este remarcabil
(reacia 2).
HO2

O2

H 2 O2

(1)
HO2

2
+
2
O + H O +

H 2 O2

(2)
Superoxid dismutaza poate accelera foarte mult acest proces. La pH fiziologic, viteza
reaciei catalizate de Cu, Zn-SOD are o viteza mult mai mare (k=1,6 x109 M-1s-1) comparativ
cu cea necatalizat (9,7 x 107 M-1s-1). Reacia catalizat de Mn SOD decurge cu o vitez de
k=1,8x 10 9 M-1s-1.
Aceast valoare este apropiat de limita de difuzie i prezint o energie de activare foarte
mic; constanta scade prin creterea vscozitii solventului. Cu Zn - SOD este inhibat de CN
avnd o constant de inhibare I50 = 0,036 mM, de nitril I50 = 20 mM, de dietil ditiocarbamat I50
= 10,6 mM si de azida de sodiu. Importana SOD const nu numai n ndeprtarea excesului de
2

O , deci indirect, dar poate aciona i direct prin neutralizarea

O2

singlet, sau chiar n

inhibarea peroxidrii metil linoleatului in vitro n prezena catalizatoare a citocromului P450, ori
a proteciei contra ozonului.
Mecanismul de disproporionare al superoxidului poate fi separat n dou etape, prima

implic oxidarea

2
O

de ctre forma oxidat a enzimei cu generarea

O2

(reacia 3) i a

doua const din reducerea O2 de forma redus a enzimei cu formarea apei (reacia 4).

2
O2 + enzimared
O + enzimaox
(3)
2

+2

+
H + enzimared

H 2 O2 + enzimaox

(4)
SOD a fost cunoscut mai mult ca o cuproprotein (n funcie de localizarea tisular,
eritrocitar, hepatic i cerebral), crezndu-se c servete la depozitarea cuprului. De-abia n
ultimii ani SOD a fost recunoscut ca cea mai important enzima a vie ii aerobe, dep ind n
acest sens citocrom oxidaza, enzima final n respiraia tisular.
Este prima enzim din lanul enzimatic de aprare fa de toxicitatea

O2

i numai prin

apariia ei acum 3 miliarde de ani viaa aerob a putut s se afirme. Necesitatea apari iei SOD
provine din cauza structurii electronice a

reducere a

O2

O2

cu formare intermediara a

realiza prin reacii n care

O2

, reacie de spin, favoriznd calea universal de

2

O . Aceast reacie interzis de spin se poate

se combin cu un ion al unui metal tranziional (Cu2+ sau

Fe2+ ) mai ales complexat. De aceea toate enzimele implicate n reac ii directe cu

O2

au

drept grupare prostetic unul din aceti ioni.

Odat cu apariia

O2

pe pmnt, bacteriile anaerobe existente au trebuit s dezvolte

unele sisteme de aprare contra produilor rezultai din reaciile:

2 +

+
2 + 2 H

H 2 O2

+ O2

(5)

2 +
(6)

H 2 O2

OH

+ OH + O2

specii rective cu efecte nocive structurilor organice. Aceste sisteme de aprare au avut ca punct
de plecare reacia:

O 2+

+
O2
Mn
+

+
Mn(n1 )

Se pare ca la nceput a fost preferat

2+

Fe

aa cum au artat studiile ntreprinse de

Halliwell, Fee, McCord i Day:

O+

2+
+
Fe - EDTA + 2 H

H 2 O2

3+
Fe - EDTA

(7)
3+

O2
O 2 + citocrom c ( Fe )

3+
( triplet) + citocrom c ( Fe )

(8)
Ca dovada s-a observat c peroxidaza i catalaza au oarecare activitate dismutazica, iar

Yost i Fridovich au izolat de la Escherichia coli o SOD ce conine un atom de

3+
Fe

molecula. Recent, Gregory i More au aratat c tolerana mare a bacteriilor anaerobe fa de

O2

se datoreaz unui coninut variabil de SOD, mai bogate fiind speciile Bacteroides.

Descoperirea de ctre Keele tot n E. coli a unei SOD ce conine mangan sugereaz o selec ie n
alegerea unui ion metalic potrivit. Aa se explic existena SOD cu mangan la primele forme de
via aerobe.

Figura 5. Compararea structurilor cuaternare i ale situsurilor active ale MnSOD pentru
(A) om, (B) E. coli i (C) D. radiodurans
Att SOD ce conine fier ct i cea cu mangan nu au oferit vieii aerobe n curs de
dezvoltare o protecie suficient, nct s-a impus SOD ce conine Cu i Zn. Studiile lui Fee au

artat c ionii de

2+
Cu

au activitate dismutazic mic care crete prin complexare la protein.

2+
Zn nu particip direct la mecanismul catalitic dar potenteaz capacitatea dismutazic a
2+

Cu .

Experiene interesante s-au efectuat asupra toleranei la

O2

a organismelor anaerobe.

Astfel, Lactobacillus plantarum, anaerob ce nu conine SOD este aerotolerant, dar nu poate
O2

utiliza

. Expunerea unor microorganisme facultativ aerobe ca Streptococcus faecalis, E.

coli, i Saccharomyces cerevisiae la

O2

n concentraii crescnde determin acumularea unor

nivele ridicate de SOD intracelular i o toleran crescut la

O2

hiperbaric. Transferul

celulelor din condiii anaerobe n aerobe determin inducia promt a MnSOD, n schimb
FeSOD este prezent indiferent de coninutul n
MnSOD i rezistent la toxicitatea

O2

O2

. Se pare ca exist o corelaie ntre

. Astfel, urmrind creterea unor culturi de E. coli s-a

gsit c coninutul n MnSOD crete proporional cu viteza respiraiei i corespunde rezistenei

la oxigenul hiperbaric.
Cnd concentraia substantelor nutritive este mrita brusc, coninutul n SOD crete
imediat, n timp ce viteza creterii organismului a rmas neschimbat. Cnd nivelul SOD atinge
nivelul caracteristic unui aport nelimitat n substane nutritive, viteza creterii organismelor s-a
mrit brusc. n asemenea condiii rezult clar c viteza creterii este limitat de nivelul
intracelular de SOD.
Antibiotice ca streptonigrin, mitomicin-C i porfiromicin sunt mult mai lente n
prezena

O2

, deoarece determin un ciclu de reacii redox cu producere de O2 , care n vitro

produce scindri n molecula de ADN. Microorganisme ca E. coli , B sau K12, cu un con inut
mare n SOD sunt rezistente la aciunea acestor antibiotice. n alte experimente s-au selectat
mutani de E.coli K12 pe baza intoleranei la

O2

n urma expunerii la un mutagen. Mutanii

obligatoriu anaerobi rezultai aparineau unei categorii ce nu aveau SOD, catalaz i peroxidaz
sau alta ce coninea doar SOD. Aceti mutani au fost ucii prin expunerea brusc la aer, doar o
celul din 104 au reuit s supravieuiasc. Celulele care au supravieuit i redobndiser
capacitile enzimatice lips sau au pierdut capacitatea de respira ie. Acest experiment indic
evident o legtura genetic comun ntre enzimele implicate n protecia fa de toxicitatea

O2

. i n cazul mamiferelor SOD este implicat n protecia fa de

O2

n condiii

hiperbarice. Astfel, la voluntarii expui unor condiii de hoperoxie s-a gsit un nivel crescut al
SOD n leucocite, n timp ce catalaza i glutation peroxidaza au sczut.
n timp ce valorile normale n snge pe scar animal variaz foarte mult pentru catalaz
i glutatio peroxidaz, n cazul SOD sunt grupate ntre 1200-1400 unit/gr hemoglobin. La nou
nscui, nivelul SOD este foarte mic, crescnd rapid pn n ziua a 20-a cnd atinge concentra ia
corespunztoare adultului; la btrni se gsesc valori sczute fa de tineri. Valori crescute de
SOD n hematii se ntlnesc n trisomia 21, iar un nivel sczut s-a gasit n anemia Fanconi i n
sindromul Dubin-Johnson. Nu s-a gasit n general o relaie ntre variaiile SOD i ale celorlalte
enzime implicate n protecia fa de toxicitatea oxigenului.
Superoxid dismutaza cu cupru i zinc (CuZn-SOD) este prezent n aproate toate celulele
eucariote i la multe dintre procariote.
CuZnSOD a fost izolat din citoplasma celulelor eucariotoce, de la drojdii, fungi, plante
superioare, hematii i ficatul de mamifere. FeSOD si MnSOD au fost izolate de la bacterii, alge
albastre i verzi i, n mod surprinztor, din mitocondriile de mamifere. Aceast descoperire a
furnizat baza unei ipoteze emise de Weisiger dup care forma iile subcelulare au o origine
simbiotic provenind din bacterii fotosintetice, care prin dobndirea unui sistem enzimatic pentru
scindarea H2O au creat o fotosintez oxigenat asemantoare celei existente astzi la plante.
Aceast capacitate de utilizare a

O2

presupune o legtura funcional i filogenic ntre

mitocondrie i cloroplaste, care prin reacia catalizat de SOD vor produce

H 2 O2

. n timp

ce FeSOD i MnSOD nu sunt inhibate de cianuri, CuZn-SOD este sensibil la acestea. Totui,
celulele eucariote, conin n general CuZn-SOD n citosol i Mn-SOD n mitocondrii. Cele dou
forme sunt uor de deosebit, deoarece CuZn-SOD este inhibat de CN i este stabil la tratare
cu un amestec etanol - cloroform. Desigur ca s-au gsit i excepii cum ar fi Mn-SOD izolat din
inima de bou, ce are o mas molecular de 86.000 Da, fiind format din 4 subunit i legate ionic
i conine 2 Mn pe molecula. Trebuie amintit c MnSOD din mitocondrii i MnSOD extras din
bacterii au secvene de aminoacizi unele asemntoare i altele semnificativ diferite de cea a
apoproteinei CuZn-SOD.

Aciunea SOD
Superoxid dismutaza (SOD) este o enzim component a sistemului antioxidant mpreun
cu glutation peroxidaza i vitamina E care controleaz nivelul radicalilor liberi din organism.
Superoxid dismutaza (SOD) acioneaz n special asupra radicalului superoxid,
peroxidului de hidrogen (

H 2 O2

Radicalii liberi sunt molecule instabile care conin unul sau mai muli electroni liberi.
Aceste molecule se comport ca nite "vntori agresivi" n organism, cutnd prada cu care se
pot uni, formnd legturi chimice stabile. Au o activitate crescut, distrug aparatul genetic al
celulelor avnd efecte nocive asupra ADN-ului, ndeosebi la nivelul mitocondriilor limitndu-le
funcionarea, atac structura membranelor celulare, blocheaz enzimele i perturba funciile
fiziologice. Acestea ducnd n final la limitarea funcionarii organului respectiv.

Figura 6. Neutralizarea radicalului liber

Surplusul de radicali liberi este cauza tulburrii funciei celulare care conduce la o
mbtrnire prematur, la alergii, la boli ale sistemului cardio-vascular, la ateroscleroz, scleroza
difuz, varice ale membrelor inferioare, artrit, cataract, diabet, boala Alzheimer i boala
Parkinson, sindromul surmenajului cronic, procesele inflamatorii din esuturi i articulaii i
multe alte boli.

Figura 7. Radical liber nainte de a fi neutralizat

Figura 8. Antioxidant neutraliznd radicalul liber

Radicalii liberi au ca factori de influen extern n formarea lor radiaiile ionizate i UV,
poluarea aerului, fumatul. De asemenea ei rezult din unele procese metabolice i din reacia
sistemului imunitar n cazul inflamaiilor asupra crora acioneaz celulele albe.
Odat cu naintarea n vrst activitatea sistemului antioxidant se micoreaz.
Experimentele au dovedit c ridicarea nivelului de superoxid dismutaza (SOD) contribuie
la prelungirea vieii.
La 15% din populaie, acest nivel este mai sczut dect cel necesar, la acetia riscul
apariiei tumorilor este mai ridicat.
Aciunea superoxid dismutazei (SOD) n organism:
-

mpiedic producerea agenilor liberi nocivi

antioxidant natural

eficient n cazul bolilor cornice

apr organismul mpotriva impactului radicalilor liberi
ncetinete mbtrnirea i apr mpotriva radiaiilor UV
ajut n strile de convalescen i mpotriva dependenei de droguri
confer protecie mpotriva radiaiilor solare, poluare i pentru utilizatorii de

calculatoare
combate radicalii liberi i substanele cancerigene

Formarea ureei

Enzima: Arginaza
Necesit Ca2+, Mn2+ i are specificitate absolut
Reacia are loc in citosol
Ureea eliminat prin urin (15-30 g/24 h)

Figura 9. Formarea ureei sub actiunea arginazei

Figura 10. Ureogeneza

CONCLUZII
Manganul:
1. Activeaz mai multe enzime i vitamine din organism: vitamina C, arginaza, colina;
2. Intervine n producerea unor hormoni ca insulina, adrenalina, noradrenalina;
3. Exercitarea funciilor vitaminei C (detoxifierea organismului, funcia imun, sinteza
colagenului etc.) este condiionat de prezena unor enzime, n care manganul este
cofactor;
4. Activeaz arginaza, care are i ea funcii detoxifiante prin eliminarea amoniacului din
organism sub form de uree, dup combinarea cu bioxidul de carbon;
5. Previne afectarea esuturilor, cauzat de oxidarea lipidelor, deoarece este component
al enzimei mangan superoxid-dismutaza
6. Are rol important n metabolismul glucozei i sinteza glicoproteinelor, deoarece
celulele beta pancreatice au nevoie de mangan.

BIBLIOGRAFIE
[1] M.J. Green, H.A.O. Hill, Methods Enzymol. 105 (1984) 93104.
[2] I. Fridovich, Annu. Rev. Biochem. 64 (1995) 97112.
[3] J.M. McCord, I. Fridovich, J. Biol. Chem. 244 (1969) 60496055.
[4] I. Spasojevic , I. Batinic-Haberle, J.S. Rebouas, Y.M. Idemori, I. Fridovich, J. Biol. Chem.
278 (2003) 68316837.
[5] J.O. Bockris, A.K.N. Reddy, M.G. Aldeco, Modern Electrochemistry, Kluwer Academic
Plenum Publishers, New York, 2000.
[6] M. Baudry, S. Etienne, A. Bruce, M. Palucki, E. Jacobsen, B. Malfroy, Biochem. Biophys.
Res. Commun. 192 (1993) 964968.
[7] S. Melov, J. Ravenscroft, S. Malik, M.S. Gill, D.W. Walker, P.E. Clayton, D.C. Wallace, B.
Malfroy, S.R. Doctrow, G.J. Lithgow, Science 289 (2000) 15671569.
[8] S. Melov, S.R. Doctrow, J.A. Schneider, J. Haberson, M. Patel, P.E. Coskun, K. Huffman,
D.C. Wallace, B. Malfroy, J. Neurosci. 21 (2001) 83488353.

[9] F. Fucassi, J.E. Lowe, K.D. Pavey, S. Shah, R.G.A. Faragher, M.H.L. Green, F. Paul, D.
OHare, P.J. Cragg, J. Inorg. Biochem. 101 (2007) 225232.
[10] G.M.P. Giblin, P.C. Box, I.B. Campbell, A.P. Hancock, S. Roomans, G.I. Mills, C. Molloy,
G.E. Tranter, A.L. Walker, S.R. Doctrow, K. Huffman, B. Malfroy, Bioorg. Med. Chem. Lett. 11
(2001) 13671370.
[11] S.R. Doctrow, K. Huffman, C.B. Marcus, G. Tocco, E. Malfroy, C.A. Adinolfi, H. Kruk, K.
Baker, N. Lazarowych, J. Mascarenhas, B. Malfroy, J. Med. Chem. 45 (2002) 45494558.
[12] R. Liu, Y. Ingrid, X. Bi, R.F. Thompson, S.R. Doctrow, B. Malfroy, M. Baudry, Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 100 (2003) 85268531.
[13] S.R. Doctrow, M. Baudry, K. Huffman, B. Malfroy, S. Melov, in: Medicinal Inorganic
Chemistry, American Chemical Society Series: Models for Neurodegenerative Diseases of
Aging, 2005, pp. 319347.