Determinarea prezenei i identificarea bacteriei

Listeria monocytogenes
SR ISO 11290-1:1998
SR ISO 11290-2:1998

L. monocytogenes este o bacterie Gram +, cu form de bastona scurt, nesporogen, cu

mobilitate prin rsucire la 25, facultativ anaerob, beta hemolitic i care d testul
CAMP pozitiv pentru S. aureus pe agarul cu snge de oaie.

L. monocytogenes face parte din familia Listeriaceae, numit dup Joseph Lister.

Determinarea prezenei i identificarea bacteriei

Listeria monocytogenes

L. monocytogenes este catalaz pozitiv, oxidaz negativ, reaciile RM i VP pozitive,

bil-esculin pozitiv, fermenteaz glucoza, nu reduce nitratul, fermenteaz ramnoza,
nu fermenteaz xiloza i manita, nu hidrolizeaz urea, nu produce hidrogen sulfurat n
mediul TSI i are o cretere caracteristic sub form de umbrel n geloza moale.

Catalaz pozitiv
Listeria monocytogenes test de motilitate n agar
moale cu aspect caracteristic de "umbrel.

Determinarea prezenei i identificarea bacteriei Listeria monocytogenes

Genul Listeria include 7 specii diferite: L. monocytogenes, L. ivanovii, L. innocua, L.

welshimeri, L. seeligeri, L. grayi, i L. murrayi. Att L. ivanovii precum i L.
monocytogenes sunt patogene pentru oareci, doar L. monocytogenes fiind asociat
constant cu mbolnviri la om.
Exist 13 serotipuri de L. monocytogenes care pot cauza boal, dar peste 90% din
izolatele umane aparin la doar 3 serotipuri: 1/2a, 1/2b, i 4b.
Tulpinile de L. monocytogenes serotipul 4b sunt responsabile de 33 pn la 50% de
cazurile sporadice de la om din ntreaga lume i de toate cazurile majore de TIA din
Europa i America de Nord ncepnd cu 1980.

Determinarea prezenei i identificarea bacteriei

Listeria monocytogenes

Reprezint unul dintre patogenii cei mai viruleni dintre cei ce determin TIA,
determinnd moartea la 20-30% dintre infeciile clinice.
Responsabil de aproximativ 2500 de mbolnviri i 500 de mori n SUA anual,
listerioza este principala cauz a mortalitii fa de ceilali germeni patogeni ce
determin TIA, cu rate de fatalitate depind pe cele ale Salmonellei i Clostridium
botulinum.

Determinarea prezenei i identificarea bacteriei

Listeria monocytogenes

Determinarea prezenei i identificarea bacteriei

Listeria monocytogenes

Studiile sugereaz c pn la 10% din tractul gastrointestinal uman poate fi colonizat cu L.

monocytogenes.
Bolile clinice determinate de L. monocytogenes sunt mai frecvent depistate de medicii
veterinari: ex. meningoencefalita la rumegtoare.
Datorit patogenitii frecvente, cauznd meningit la nou-nscui (infectai transvaginal),
femeile nsrcinate sunt sftuite s nu consume brnz de tipul: Brie, Camembert, feta,
queso blanco fresco, care pot fi contaminate i permit dezvoltarea L. monocytogenes.
Reprezint a-3-a cea mai comun cauz a meningitei la nou-nscui.

L. monocytogenes pe
Palcam agar

Determinarea prezenei i identificarea bacteriei

Listeria monocytogenes

1.A. Resuscitarea
25 ml (g) prob + 225 ml ap peptonat tamponat. Incubare 1-2 ore la 20C.
1.B. Prembogirea primar n mediu de cultur lichid LEB1
25 ml (g) prob + 225 ml LEB-1 (Demi-Fraser). Incubare 24 ore la 30 C.
2. mbogirea selectiv folosind mediu lichid selectiv:
1 ml ap peptonat cultivat + 100 ml LEB-2 (Fraser). Incubare 24 h la 30 C
1 ml LEB-1 (Demi-Fraser) + 100 ml LEB-2 (Fraser). Incubare 24 h la 30 C

Determinarea prezenei i identificarea bacteriei Listeria

monocytogenes
3. Izolare selectiv
Din cele 2 medii de resuscitare i prembogire i respectiv din mediul de mbogire
selectiv se striaz cu ansa pe suprafaa unui mediu solid selectiv de izolare recomandat:

1.A. Resuscitare:
25 ml (g) prob+225 ml ap
peptonat tamponat.
Incubare 1-2 ore la 20 C

1.B. Prembogire:
25 ml (g) prob+225 ml
LEB-1 (Demi-fraser).
Incubare 24 ore la 30 C

2. mbogirea selectiv:
1 ml+100 ml LEB-2 (Fraser)
Incubare 24h la 30 C

3. Medii selective de izolare:

0,1 ml cultur ca atare sau din amestecul
0,5 ml cultur+4,5 ml KOH se striaz pe
suprafaa agarului Palcam.
Incubare 24-48 de ore la 35 C

Oxoid Chromogenic Listeria Agar

Listeria selective agar

Agar Listeria Ottaviani Agosti ALOA

Oxford agar (Biokar)

Determinarea prezenei i identificarea bacteriei

Listeria monocytogenes

4. Izolarea coloniilor caracteristice:

5 colonii cu aspect caracteristic se paseaz pe suprafaa agarului TSYEA sau agar nutritiv.
Incubare 18-24 de ore la 35 C - 37 C.
5. Identificare confirmare:
Pentru genul Listeria:
- coloraie Gram
- reacia catalazei
- testul mobilitii

Pentru specia L. monocytogenes:

-Testul hemolizei
- producerea de acid din: ramnoz i
xiloz
- testul CAMP

Determinarea prezenei i identificarea bacteriei

Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes test de motilitate n agar

moale cu aspect caracteristic de "umbrel.

Reacia catalazei +
Testul hemolizei

Determinarea prezenei i identificarea bacteriei

Listeria monocytogenes
Testul CAMP de confirmare a
identificrii

ALOA Confirmation agar

RAPID'L.mono: 24h mbogire + 24h detecie + 6h confirmare

Rhamnose test