GENETICA BACTERIANA

BACTERIOFAGUL
VARIABILITATEA GENETICA LA
BACTERII

GENETICA BACTERIAN
Ereditatea: nsuirea tuturor vieuitoarelor de a
transmite caracterele specifice speciei la urmai
Variabilitatea: apariia unor caractere diferite de cele
ale genitorilor.
Suportul material al ereditii: ADN.
Structura i replicarea acestuia este similiar cu cea de
la celulele eucariote.
Totalitatea determinantilor genei bacteriene reprezinta
genomul bacterian
Genomul asigura ereditatea bacteriei, avand
capacitatea de a transmite descendentilor caracterele de
specie
Totalitatea acestor caractere reprezinta informatia 2

Organizarea materialului genetic la

bacterii
Repliconi = formaiuni genetice ce se replic independent

A. celula bacteriana are un singur cromozom, format dintrun singur lant de AND dublu catenar, elicoidal
in general, bacteriile au un singur replicon, reprezentat de
intregul cromozom
exceptii: Rhodobacter sphaeroides, Vibrio cholerae - au mai multi repliconi

B. elementele genetice extracromozomiale

plasmidele
genomul bacteriofagilor

C. elementele genetice transpozabile

fragmentele de inserie
transpozonii).
3

Cromozomul bacterian haploid =

echivalent nuclear
codific informaiile absolut necesare supravieuirii speciei n
condiii normale
organizarea supercoil sau supertwist a ADN (dublu spiralat
spre dreapta i suprahelicat spre stnga) asigur mpachetarea
economic a ADN i o configuraie optim activitii funcinale a
ADN (replicare, transcripie, recombinare).

O
C
HN

H2N-C

5 terminal
OH
O

P
OH

5
CH2

3
O
O P
CHO
2

Guanina
CH

N
NH2
1

2
O
O

CH
CH

O
HN

O P
CHO
2

Citozina

legturi
fosfat
diesterice
3 5

ADN = poli-deoxiribonucleotid

O
O

O P
CH2
O

3
Timina

CH
NH2

CH3

C
N

HC

Adenina
CH

O
3

OH

Cele 2 lanuri sunt ANTIPARALELE,

adic au sensuri opuse: - un lan se rsucete
de la 5 la 3
- al 5
doilea lan se
3
rsucete de la 3 la 5
Datorit
complementaritii
structurale raportul
Curbura mare
molecular
A+G=C+T (A + G) / (C +
T) = 1
A+C=G+T (A + C) / (G +
T) = 1

Curbura mic

aceast
caracteristic
Proporia de
baze complementare
asigur
meninerea
este constant
n cadrul unei
specii.
Raportul
adeninmoleculei
n conformaie
de
timin/guanin-citozin
(AT/GC)
dublu helix!!
servete drept criteriu taxonomic
de baz n clasificarea modern a

3
5

DECI
ADN este constituit din 2 catene
polideoxiribonucleotidice asociate prin
puni
de hidrogen, dispuse elicoidal, constituindH un dublu
H N
O
N
H
H
helix C
Citozin
C C
C C
N

N H

C
N

Guanin

C
N H

N
C

H
N
CH

H N

N C
N

C-H

CH3
C C

Adenin
7

C-H
N

Timin

Perechile de baze azotate sunt situate n centrul helix-ului iar

resturile fosfat sunt situate n exterior

~20

We have discovered the secret of

life!
Proclamation by Francis H. C.
Crick to patrons
of The Eagle, a pub in Cambridge,
England
(1953)

1962 Premiul Nobel pentru

Medicin
James D. Watson (1928)
Francis Crick ( 1916 2004)
Maurice Wilkins (1916 - 2004)
9

Analiza prin difracie de raze X a ADN din timus de viel

Rosalind Franklin i Raymond Gosling, Kings College
London, 1952

Rosalind
Franklin
19201958

Photo 51
10

carea ADN

are ca rezultat dublarea

materialului genetic
Asigur reproducerea fidel a
informaiei genetice coninut n
cele dou catene de ADN
Molecula parental, bicatenar se
disociaz i cele dou catene
servesc fiecare ca matri pentru
biosinteza pe baz de
complementaritate a 2 noi catene
=> o nou molecul de ADN
identic cu cea veche
Enzimele de replicare: ADN
polimeraze (I, II i III - au
specificitate de aciune) i ADN
ligaze
Mononucleotidele se leag ntre
ele n direcia 5 3
Este nevoie de ADN preformat

11

Formaiunile genetice
extracromozomiale
Plasmidele : molecule circulare de ADN autonome, libere
n citoplasm care se replic independent de cromozom
conjugative - se pot transfera singure la alte bacterii
(plasmidele R)
neconjugative - care nu pot prsi ele nsele bacteria de
origine, ci numai prin intermediul unui alt plasmid conjugativ sau
a unui bacteriofag (de exemplu plasmidul care codific secreia
de beta-lactamaz la S.aureus)
episomi, care se pot integra prin recombinare n
cromozomul bacterian, pierzndu-i autonomia de replicare
(plasmidul F sau factorul de fertilitate).

12

 determinanii genetici eseniali ai plasmidelor

codific informaiile legate de replicarea lor
autonom
determinanii accesori codific caractere
fenotipice neeseniale supravieuirii celulei
bacteriene n condiii naturale
gene de transfer (tra),
gene de rezisten la antibiotice (factorul
R),
gene de secreie a unor toxine etc.

13

Plasmide de interes medical

A. Plasmidele de virulen poart determinanii

genetici ai unor factori de virulen
secreia de enterotoxina (termolabil i
termostabil)
factorul de colonizare la Escherichia coli,
hemolizina la Staphylococcus aureus, Streptococcus
faecalis i E.coli
exfoliantina la S. aureus
gena de invazivitate la Shigella

14

B. Plasmidele R -de rezisten (Factorul R) sunt

molecule circulare de ADN care constau n esen din
dou regiuni genetice:
genele care codific rezistena la antibiotice R, unice
sau multiple (prin aglomerarea mai multor gene de
rezisten R, pe acelai plasmid, prin fenomenul
transpoziiei repetate de material genetic)
genele RTF care confer
plasmidului capacitatea
de a se transfera

RTF

R determinant

15

Peste 90% din tulpinile de spital prezint o rezisten

de tip plasmidic:
familia Enterobacteriaceae, genurile:Escherichia,
Salmonella, Shigella, Proteus, Providencia, Klebsiella,
Serratia
genurile Pseudomonas, Acinetobacter, Vibrio, Yersinia,
Pasteurella, Campylobacter, Haemophilus, Neisseria,
Bacteroides, Staphylococcus, Streptococcus, Bacillus,
Clostridium, i Corynebacterium.
Plasmidele prezente la bacilii gram-negativi sunt mai
mari dect cele evideniate la bacteriile gram-pozitive.

16

C. Plasmidul F plasmid de de sex factor de

fertilitate
- conine genele de transfertra
-se pot transmite prin conjugare-mediaz
transferul de gene de la o celul donor la una
receptor
-n funcie de prezena factorului

bacterii F-, lipsite de factorul F, denumite

celule femele i care sunt receptoare de material
genetic,
bacterii F+, masculine, care au factorul F+,
autonom, ca plasmid n citoplasm i care sunt
celule donoare,
bacterii Hfr, care au factorul F+ integrat n
cromozom, de asemenea masculine,
bacterii F , care au factorul F+ ca plasmid
autonom, dup ce acesta a fost integrat n
cromozom i l-a prsit rupnd un fragment
ADN din cromozom.
17

FF+
F
Hfr

Hfr

FA B

A B
C

E D

ED C

F+

F
A BC
D
E

C D

A B
E

C
D

18

Bacteriofagii

phagein (gr.) = a manca

Descrisi prima data in 1915
19

Bacteriofagii
virusuri care pazariteaz
bacteriile
mancatori de bacterii
Morfologie.
un cap hexagonal alctuit
dintr-un
nveli
proteic
caracteristic
virusurilor
(capsida) i adpostete ADN
un gt
o prelungire numit picior
(coad). Coada este un cilindru
rigid nvelit ntr-un manon
proteic asemntor miozinei* i
se
termin
cu
o
plac
hexagonal
ce
conine
o
*miozina
= proteina
contractila
a fibrei
musculare
enzim
de
tipul
lizozimului**.
**lizozim = enzima bacteriolitica ce lizeaza peretele

20

Cap, capsid

Structura
bacteriofagului

Manon
contractil

Coa
d

Fibrele
Placa
bazal
21

Infecia celulei gazd cu bacteriofag

Adsorbia fagului
Ataarea
ireveversibil-prin
existena unor receptori de
perete specifici

Contracia manonului

Injectarea acidului
nucleic
22

Tipuri de bacteriofagi

Genomul fagic ptruns n celul duce la sinteza unor

bacteriofagi identici cu cei din care a provenit ADN.
ADN-ul se replic ribozomii bacterieni vor sintetiza
proteinele capsidale i ale cozii
Asamblarea noilor componente bacteriofagul
prsete celula=
bacteriofagi litici sau viruleni fagi care se
multiplic n interiorul celulei -gazd, lizeaz celula i
elibereaz fagii progeni=ciclu litic; produc moartea
celulei gazda

lizogeni sau temperai: fagi care nu distrug

celula-gazda; se integreaz n cromozomul celulei
gazd; ADN-ul viral incorporat se numeste profag;
ori de cate ori celula-gazda se divide, ADN-ul viral se
va copia la celulele-fiice rezultate; la un moment
dat, acest tip de bacteriofagi pot deveni virulenti,23
intrand intr-un ciclu litic.

1 Attachment

24

1 Attachment

2 Entry of phage

DNA and
degradation of
host DNA

25

1 Attachment

2 Entry of phage

DNA and
degradation of
host DNA

3Synthesis of viral

genomes and
proteins
26

1 Attachment

2 Entry of phage

DNA and
degradation of
host DNA

Phage assembly

4 Assembly
3Synthesis of viral

genomes and
proteins
Head Tail Tail fibers

27

1 Attachment

2 Entry of phage
5 Release

DNA and
degradation of
host DNA

Phage assembly

4 Assembly
3Synthesis of viral

genomes and
proteins
Head Tail Tail fibers

28

Ciclul litic al unui

bacteriofag
5

3
1

29

Phage
DNA

The phage injects its DNA.

Daughter cell
with prophage
Cell divisions
produce
population of
bacteria infected
with the prophage.

Phage DNA
circularizes.

Phage
Bacterial
chromosome

Lytic cycle

The cell lyses, releasing phages.

Occasionally, a prophage
exits the bacterial
chromosome,
initiating a lytic cycle.

Lysogenic cycle

The bacterium reproduces,

copying the prophage and
transmitting it to daughter cells
Lytic cycle
Lysogenic cycle
or
is induced
is entered Prophage

New phage DNA and proteins

are synthesized and
assembled into phages.

Phage DNA integrates into

the bacterial chromosome,
becoming a prophage.

30

Consecinele lizogeniei
profagul codific el nsui unele caractere pe care le
dobndete bacteria lizogen.
toxigeneza la bacilul difteric care este codificat
de un profag ce se afl n cromozomul bacterian.
Tulpinile de bacili difterici care nu sunt lizogenizate
de acest profag, nu sunt capabile s secrete toxina
i sunt, deci, nepatogene
transducia- transmiterea de material genetic prin
intermediul bacteriofagilor

31

Variabilitatea la bacterii
Este o latur a geneticii -important n
medicina practic si in industria
farmaceutica
Mutaia
Transfer de material genetic
Transformare
Transducie
Conjugare

Transpoziie
32

Mutaia
Modificri spontane ale genomului (modificri ale
secvenei de nucleotide din gen)produse de : raze X,
UV, ageni alchilani
Punctiform afecteaz 1 nucleotid
Inseria (adugare a sute de nucleotide)
Deleia (pierdere )
Asigur:

rezistena la chimioterapice,
structur antigenic modificat,
pierderea unor receptori specifici pentru bacteriofagi,
pierderea capacitii de sintez a unui metabolit

33

34

II. Variabilitatea la bacterii

Este o latur a geneticii -important n
medicina practic
Mutaia
Transfer de material genetic
Transformare
Transducie
Conjugare

Transpoziie
35

Transferul de material genetic

Transformarea
Reprezint transferul de material
genetic de la o celul donor la una
receptor sub forma de ADN pur,
eliberat fie prin liza celulei donor,
fie prin extracie chimic
1928 - Fred Griffith.
Streptococcus, Haemophilus, Bacillus,
Neisseria, Salmonella
se petrece nu numai ntre tulpinile
aceleiai specii, ci i ntre specii diferite
se modific structura peretelui celular,
care devine mai poros, ncrcat
electropozitiv, favoriznd legarea ADNlui strin
are loc n medii unde triesc mai multe
specii bacteriene(colon) i sunt puse n
libertate cantiti mai mari de de ADN
Se practic azi n tehnici de inginerie
genetic

36

Transformation of Bacillus subtilus

Heteroduplex DNA

37

Transducia
Transfer de gene cromozomiale de la o celul
bacterian la alta, mediat de bacteriofagi
Transductia este de 2 tipuri:
Transducia generalizat transferul oricarei
gene
Transducia specializat transferul unei gene
specifice

38

Transducia generalizat
transferul oricarei gene
este mediat de fagii
viruleni, litici, care dup
ptrunderea n celula bacterian
se multiplic i determin liza
celulei gazd.
n timpul lizei celulei
bacteriene cromozomul acesteia
se fragmenteaz
ocazional: un fragment cu o
dimensiune apropiat de cea a
genomului fagic se integreaz n
capsida bacteriofagului, n locul
genomului fagic.
aceti fagi pot ptrunde n alte
celule bacteriene injectndu-le
ADN-ul, ce provine de fapt din
genomul celulei donoare. ADN-ul
se va integra n cromozomul
celulei receptoare prin
recombinare, conferindu-i
acesteia caractere noi:

39

Transducia specializat
transferul unei gene specifice
mediat de fagii temperai.
Dup ptrunderea n celula
bacterian a ADN-lui
bacteriofagului temperat, acesta
se inser n cromozom prin
recombinare sub forma de profag
n anumite condiii are loc un
proces de de-represie i genomul
bacteriofagic prsete
cromozomul bacterian devenind
din nou autonom si iniiaz un
ciclu litic
cnd prsete cromozomul
bacterian poate detaa din acesta
un fragment de ADN care va
rmne legat de genomul
bacteriofagic
bacteriofagul va putea intra n
alt celul integrndu-se n
cromozomul acesteia tot sub
forma de profag.
Fragmentul provenit de la prima
celul bacterian poate s codifice

40

Conjugarea
transferul de material genetic de la o
bacterie donoare la una receptoare
printr-un proces de mperechere, ce se
realizeaz prin contactul direct dintre
cele dou celule.
O celula (mascul) doneaza ADN, iar
perechea (femela) primeste genele
Se formeaza o punte citoplasmatica
intre cele doua celule, numita sex
pilus
maleness (masculinitate) =
proprietatea unei celule bacteriene de
a forma puntea citoplasmatica si de a
dona ADN
41

LE 18-17

Sex pilus

5 m
42

43

II. Variabilitatea la bacterii

Este o latur a geneticii -important n
medicina practic
Mutaia
Transfer de material genetic
Transformare
Transducie
Conjugare

Transpoziie
44

Transpozitia
Barbara Mc Clintock, 1931, 1952, 1983(gene sltree)
Fragmentele de inserie (IS)
ABCDEFG

GFEDCBA

Transpozaz

fragmente mici de ADN (fac parte in mod normal din

plasmid/cromozom)
cu limite structurale bine precizate
se pot integra repetat n mai multe situsuri dintr-un genom, se pot muta
dintr-un loc in altul in cadrul aceluiasi genom.
Transpozoni (Tn)
Enzima = transpozaza
Constau in 2 IS
conin i alte gene dect cele ce codifica transpoziia

Este unul dintre

mecanismele ce
sta la baza
rezistentei

IS

Gene de rezisten

IS

IS

Gene de rezisten

IS
45

46

IMPORTANTA
variabilitatii genetice a
bacteriilor

47

Ingineria genetic
Existena vectorilor (plasmide, bacteriofagi i n
ultimul timp descoperirea existenei unor transpozoni ce
se pot transmite de la o celul bacterian la alta) permite
transferul de gene celulei bacteriene, ceea ce
consituie baza ingineriei genetice.
Bacteria preferat a ingineriei genetice este E.coli, care
n mod natural nu este capabil de transformare, dar
creia prin clonare i s-au introdus n genom cei mai
diveri determinani genetici provenind de la organisme
ndeprtate filogenetic, cum sunt omul i animalele.
Prin aceast tehnic se introduc n genomul bacterian
gene care codific sinteza unor substane ca, de exemplu,
interferoni, insulin, STH etc., a cror obinere pe cale
chimic ar fi fie imposibil, fie foarte costisitoare.

MEDICAMENTE BIOLOGICE

48

To tackle the increase in resistance in many common

bacterial pathogens.

Genomic is providing a new strategy by revealing new

molecular targets and peptides that are giving rise to
novel antimicrobial drug.

49

Key steps in the genomics driven

antibiotic drug discovery process

50

Aplicaiile biotehnologiei moleculare

n diagnosticul clinic
Au permis apariia unei noi
discipline: diagnosticul
molecular reprezentnd
utilizarea probelor de acizi
nucleici n diagnosticul
bolilor
boli infecioase,
neoplasme,
boli ereditare
O alt aplicaie : amprenta
ADN - permite diferenierea
indivizilor prin utilizarea
unor fragmente minuscule
de esut sau probe de snge
51