HEMOGLOBINA

Un eritrocit conine aproximativ 280 de milioane de molecule de hemoglobin HEM = Protoporfirina IX + Fe2+ Reprezentarea schematic a Hemului

Sinteza hemoglobinei - n elementele tinere nucleate ale seriei roii din MRH: eritroblast bazofil, policromatofil i oxifil - n reticulocit !Eritrocitul adult: sinteza de hemoglobin = 0 reaciile de sintez ale hemului cu treceri succesive ale porfirinelor din mitocondrie citosol la nivel mitocondrial din 2 precursori: succinatul + glicocolul -ALA Hemoglobinele fiziologice

Electroforeza hemoglobinei la pH alcalin (8,2-8,6), suport de migrare gelul agar - pune n eviden tipurile de hemoglobin normale: - hemoglobina A1 (Hb A1, predominant la adult), - hemoglobina A2, (Hb A2) i - hemoglobina fetal, (Hb F) precum i existena unor hemoglobine anormale (hemoglobinopatii) Principiul metodei ntr-un cmp electric particulele ncrcate cu o anumit sarcin electric se deplaseaz n funcie de: - intensitatea cmpului electric, - ncrcarea lor electric, - mrimea i forma moleculei La acest pH, hemoglobina prezint o sarcin electric negativ i va migra ctre anod

n cazul hemoglobinelor anormale modificarea structural duce la modificarea sarcinii electrice, ceea ce permite migrarea i separarea lor electroforetic Hemoglobine patologice - toate hemoglobinele patologice au HEMUL normal - peste 150 variante de Hb patologice notate cu litere mari ale alfabetului: G, H, I, J, S, rezultate prin: - substituirea unuia sau mai multor AA din lanurile globinice

C, D,

- lipsa unuia sau mai multor AA !Anomaliile structurale ale moleculei de Hb modificarea proprietilor fizico-chimice i funcionale ale Hb. Combinaiile hemoglobinei Oxihemoglobin (HbO2): transport O2 - O2 legat de hemoglobin nu devine ionic, ci se transport i se cedeaz esuturilor sub form molecular Hb + 4O2 Hb4(O2) Carbhemoglobin (HbCO2): transportCO2 Carboxihemoglobina (HbCO): CO se leag reversibil de fierul din Hb, la locul de legare al O2 nu transport O2 Methemoglobina (MetHb) - conine Fe3+ n loc de Fe2+ - datorit Fe3+, MetHb nu poate fixa O2 - normal, exist sub 2% MetHb, - este redus de sist. methemoglobin-reductazice E: NADH-citocrom b5 reductaza - patologic: MetHb n intoxicaia cu nitrii, nitrai, anilin, KMnO4 Sulfhemoglobina (HbS) - nu permite transportul O2 - se poate forma n tulburri digestive cu constipaie i producere de H2S Funcia de transport a O2 i CO2 Cantitatea total de O2 din snge = O2 dizolvat (1%) + O2 legat de Hb (99%) Cantitatea total de CO2 din snge = CO2 dizolvat + CO2 legat de Hb + CO2 legat de Na Semnificaia fiziologic - Hb trebuie s fie capabil de a lega - Hb trebuie s fie capabil s elibereze capilarelor Capacitatea de oxigenare a sngelui - volumul maxim de O2 ce poate fi fixat de Saturaia cu O2 a sngelui (HbO2%) - raportul ntre cantitatea de HbO2 i poate fi legat = 95-97,5% n sngele arterial oxigenul n plmni oxigenul la nivelul

1g Hb i este de 1,34 ml O2. cantitatea total ce

= 75% n sngele venos. Curba de disociere a HbO2 - relaia ntre PO2 i gradul de saturaie al Curba de disociere a HbO2 Perutz 1960 - fixarea i eliberarea de O2 de ctre Hb nu se face simultan de toi cei 4 atomi de fier ai Hb, ci succesiv, n trepte, cu vitez progresiv crescnd Hb n O2 (HbO2%)

reflect modificrile structurale determinate de legarea O2 la prima grupare HEM, transmise i celorlate grupri hem din tetramer

! Afinitatea hemoglobinei pentru ultima molecul de O2 este de 300x mai mare fa de cea pentru prima molecul de O2 Curba de disociere a HbO2 = curb sigmoid Form de S italic: - pant abrupt ntre PO2 10-50 mmHg -pant orizontal ntre PO270-100 mmHg. P50 = exprim afinitatea ntre O2 i Hb = PO2 la care saturaia n O2 a Hb = 50% = 26,6 mmHg (la pH = 7,4 i t0 de 37oC Modificrile conformaionale ale helixului F induse de legarea O2

Interaciunile ionice din structura Hbg reduse Puni saline necovalente dispuse ntre radicalii NH3+ i COO ai aminoacizilor terminali: 4 legturi ntre lanurile 1-2 2 legturi - 2 legturi ionice intralanuri , prin intermediul unei molecule de 2,3 - DGP Legarea O2 - ruperea legturilor saline - nchiderea cavitii centrale - expulzarea 2,3 DGP !Modificrile = rapide (0,01 sec) Starea T Starea R Factorii care influeneaz afinitatea Hb pentru O2 pH - concentraia de protoni [H+], Efect Bohr [CO2], [2,3 DPG] din hematii, temperatura

1. Factori care diminu afinitatea pentru O2

 favorizeaz eliberarea oxigenului la nivelul esuturilor deplasarea spre dreapta a curbei de disociere a oxihemoglobinei - [H+] ( pH), - [CO2], - [2,3 DPG], - temperaturii 2. Factori care cresc afinitatea pentru O2 intensific fixarea O2 deplasarea spre stnga a curbei de disociere a oxihemoglobinei - [H+](pH), - [CO2], - [2,3 DPG], - temperaturii Cantitatea de O2 eliberat la nivelul esuturilor

Efectul Bohr: competiia ntre O2 i H+ pH-ului i PCO2 => scderea afinitii Hb pentru O2 => eliberarea O2

Efectul 2,3-DPG 2,3-DPG reglator important al legrii O2 de Hbg - cel mai important fosfat n eritrocit, concentraia lui fiind similar cu cea a Hbg - rezult din glicoliza intraeritrocitar, aproape n exclusivitate sub aciunea 2,3-DGP-mutazei (untul Rapaport Luebering), iar prin defosforilare formeaz 3-glicero-fosfatul - anion nedifuzibil, puternic ncrcat electronegativ, care se leag echimolecular de lanurile electropozitive ale Hbg reduse, dar nu i de cele ale Hbg oxigenate

Transportul CO2 1. Forma dizolvat fizic a CO2 (5%) = partea difuzibil, direct proporional cu PCO2 - determin: - sensul i mrimea difuziunii, - fixarea sub form de carbamat/bicarbonat, - eliberarea din aceti compui 2. Forma combinat cu proteinele plasmatice i hemoglobina (4,5%). CO2 fixat de: - gruprile aminice ale proteinelor plasmatice carbamai gruprile ale Hb carbHb

Controlul formrii i eliberrii CO2 de pe Hb este realizat de gradul de oxigenare al hemoglobinei (efect Haldane): - O2 tinde s elibereze CO2 - este asigurat transportul cuplat al CO2 i O2: - la esuturi: eliberarea O2 de pe Hb favorizeaz fixarea CO2 - la plmni: O2 determin eliberarea CO2 din HbCO2 3. CO2 transportat sub form de bicarbonat (90%) fenomenul de membran Hamburger - KHCO3 intraeritrocitar - NaHCO3 n plasm. n plasm: o cantitate CO2 se hidrateaz spontan H2CO3 HCO3- + H+ Curba de disociere-fixare a CO2 - nu atinge platou; nu exist punct de saturaie total - este influenat de PCO2 i de saturaia n O2 a Hb. - sngele arterial - curb de fixare-disociere a CO2 ceva mai deprimat comparativ cu a sngelui venos (explicaie: eritrocitele cu hemoglobina oxigenat pot fixa o cantitate mai mic de CO2 ). - la nivelul esuturilor fixarea CO2: PO2 + pH acid. - la nivelul plmnilor cedarea CO2: PO2 + pH ceva mai alcalin (este cedat mai ales CO2 dizolvat n plasm i cel fixat pe Hb) ANOMALII N METABOLISMUL HEMOGLOBINEI

PORFIRIILE

grup de boli al cror mecanism patogenic este reprezentat de un deficit enzimatic la nivelul uneia din etapele de formare ale hemului, n acest proces fiind implicate 7 enzime anomaliile enzimatice pot fi: - genetice (ereditare) - dobndite dup expunere la ageni toxici eritrocitari sau hepatici (ex: induse de alcool, intoxicaia cu plumb, deficitul de fier, boli cronice hepatice sau renale)

- precursorii porfirinici se pot acumula n: - plasm, eritrocite, urin i fecale ! Porfirinele = molecule fotoactive care absorb energie de la lumina vizibil din spectrul violet - acumularea precursorilor determin o varietate de simptome: - neurologice - hematologice - dermatologice - gastro-intestinale CLASIFICARE dup sediul supraproduciei i acumulrii: - HEPATICE - ERITROPOETICE dup manifestrile clinice: - ACUTE - CUTANATE

PCT este cea mai frecvent tulburare a metabolismului porfirinelor Forma ereditar (autosomal dominant) se datoreaz deficitului de uroporfirinogen decarboxilaz: - din ficat (n forma toxic sporadic) si - din toate esuturile (n forma familial) Forma dobndit (inhibitorul uroporfirinogen decarboxilazei poate fi generat n ficat) se poate datora prezenei unui hepatom, cirozei sau unor substane chimice (ex. hexaclorbenzen) - Expresia clinic a porfiriilor ctigate i ereditare urmeaz de obicei expunerii la ageni sau condiii care afecteaz hepatocitele i conduc la hepatosideroz, fierul n exces declannd formarea de specii reactive de oxigen, apariia stresului oxidativ i facilitarea porfirinogenezei HEMOGLOBINOPATII Organizarea genelor globinei Clusterul genelor - localizat n apropierea telomerului cromozomului16, - se ntinde pe o lungime de 28 kb - conine n urmtoarea ordine: - o gen zeta (), - o pseudogen (), - o pseudogen () - dou gene , care codific 2-globina i 1-globina, denumite HBA2 i respectiv HBA1 Clusterul genelor - localizat pe cromozomul 11,

- se ntinde pe o lungime de 50 kb - conine n urmtoarea ordine: - o gen epsilon (), - 2 gene gamma (G si A), - o pseudogen (), - o gen delta () - o gen care codific -globina denumit HBB Hemoglobinopatii calitative caracterizate prin producia unei molecule anormale de hemoglobin, secvena de aminoacizi la nivelul lanurilor globinice fiind alterat datorit codului ADN incorect nlocuirea conservativ/neconservativ a unui aminoacid (AA) de la suprafaa structurii cuaternare a Hgb Ex: Glu -> Val n cazul HbS nlocuirea neconservativ a unui AA din buzunarul hemului Ex. His prox. -> Tyr n cazul MetHb = HbM Boston nlocuirea neconservativ a unui AA implicat n legarea 2,3DPG => modificarea afinitii pt. O2 nlocuirea neconservativ a AA de la nivelul contactelor dintre subuniti (interfaa 12) => pierderea cooperativitii nlocuirea neconservativ a unor AA implicai n stabilizarea conformaiei => instabilitatea globinelor Hemoglobinoza S (siclemia, anemia drepanocitar) = tulburare motenit HOMOZIGOT RECESIV care apare atunci cnd un individ dispune de dou copii ale genei alterate (cte una de la fiecare printe) necesare pentru sinteza lanurilor ale globinei - lanul mutant -globinic sintetizat se noteaz S, iar hemoglobina care rezult, 22S , este denumit HbS HbS 2 lanuri -globinice normale 2 lanuri -globinice mutante n care acidul glutamic din poziia 6 a fost nlocuit cu valina Patogeneza: - substituia restului de acid glutamic ncrcat negativ cu un rest de valin nonpolar determin o scdere pronunat a solubilitii Hb S n forma ei redus, din acest motiv moleculele de Hb formnd polimeri i determinnd apariia fenomenului de siclizare (forma de secer a hematiilor n sngele venos) Consecine Anemie hemolitic cronic (anemie falciform sau drepanocitoz)

! Durata de via: 10 -12 zile Obstrucia vaselor microcirculaiei ANOXIA care determin crize acute dureroase cu infarcte celulare i tisulare Forma asimptomatic - la indivizii heterozigoi:o gen normal i o gen S = tara siclemic Hematiile conin 20-40% HbS , restul fiind HbA Hematiile prezint fenomenul de siclizare numai dac saturaia cu O2 a Hb < 40%, nivel rar atins chiar i n sngele venos crizele dureroase i infarctul splenic apar numai la pacienii cu stri hipoxice severe. Forma simptomatic - la homozigoii care au numai gena anormal S Hematiile conin 80% HbS, restul fiind HbF Hematiile sufer fenomenul de siclizare la o presiune normal a O2 din sngele venos la copii apar tumefacii dureroase, neeritematoase, la nivelul minilor i picioarelor (crizele pot mima reumatismul acut), splenomegalie, oc hipovolemic Sechestrarea acut a hematiilor n splin i infeciile cu pneumococ, refractare la tratament, pot conduce la deces HbS confer protecie mpotriva malariei Ciclul transmiterii malariei Plasmodium falciparum Hematiile care conin HbS au o durat de via scurt i astfel parazitul Plasmodium falciparum nu poate ajunge la maturitate ! Hemoglobinoza C HbC - acidul glutamic din poziia 6 a fost nlocuit cu lizina Hemoglobinoza SC - unele lanuri au mutaia din siclemie, iar altele pe cea din hemoglobinoza C - pacienii rmn mult timp nediagnosticai, iar crizele pot surveni dup natere sau intervenii chirurgicale i pot fi fatale Hemoglobinopatii cantitative deficit de sintez a lanurilor sau -globinice = TALASEMIE = boal hematologic ereditar cu transmitere genetic autozomal-recesiv - deficit parial: +- sau + - talasemie - deficit total: 0- sau 0 - talasemie Alfa-talasemia Deleia genelor ce codific sinteza lanurilor -globinice (2 gene pe fiecare crz.16) Mutaia genetic const n deleia: - 1 gen talasemia silenioas; stare de purttor asimptomatic - 2 gene -talasemia minor sau tara - talasemic; anemie uoar

- 3 gene boala hemoglobinei H care este instabil i precipit = corpi Heinz anemie microcitar hipocrom moderat-sever ; splenomegalie - 4 gene -talasemia major, apare hemoglobina Bart apare hidropsul fetal - ftul moare nainte, n timpul sau la scurt timp dup natere: deces n utero Manifestrile clinico-patologice absena lanului care este necesar pentru sinteza Hb F sintezei n exces a lanurilor i care formeaz tetrameri, rezultnd hemoglobinele H (4) i Bart (4) care este instabil i incapabil s furnizeze O2 esuturilor