Sunteți pe pagina 1din 54

Coloraii i colorani

COLORAREA
etapa prin care se urmrete creterea contrastului dintre diferitele componente tisulare prin modificarea indicilor de refracie ai substratului morfologic cu ajutorul

coloranilor .

COLORAREA
Tehnica de colorare depinde de natura fixatorului utilizat i de esutul pe care dorim s l examinm.

COLORANTUL HISTOLOGIC
substan chimic colorat, de obicei de natur organic, ce poate intra n celul atandu-se la nivelul componentelor celulare i permind astfel diferenierea lor optic. Nu toate substanele colorate sunt colorani!
4

COLORANI
- grupri cromofore purttoare de culoare
- grupri auxocrome capacitatea de a colora

GRUPARILE AUXOCROME
1. Ionizate ( principale ) formeaz legturi electrochimice cu substratul 2. Neionizate ( secundare) formeaz legaturi de hidrogen cu substratul. Acest tip de legatur mrete stabilitatea colorantului.
6

CLASIFICAREA COLORANILOR
- natura lor - caracterele chimice

CLASIFICAREA COLORANILOR

Dup natura lor

Naturali - vegetali : hematoxilina ,safranina , orceina , turnesolul - animali : carminul Sintetici : albastru de metil

CLASIFICAREA COLORANILOR

Dupa caracterele chimice

Acizi sunt de obicei sruri de acizi organici , gruparea auxocrom principal fiind ncrcat electric negativ.

- se ataeaz pe un substrat morfologic ncrcat electric pozitiv


9

CLASIFICAREA COLORANILOR

Dupa caracterele chimice

Bazici gruparea auxocroma principal ncrcat electric pozitiv , deci se va ataa pe un substrat ncrcat negativ

10

CLASIFICAREA COLORANILOR

Dupa caracterele chimice

Neutri grupri auxocrome principale ncrcate electric pozitiv i negativ, fiind soluii apoase de colorani bazici i acizi ntr-o anumit proporie

11

MECANISMUL COLORRII
PROTEINELE - substratul molecular la nivelul crora se fixeaz coloranii prin legturi electrochimice i de hidrogen.

12

MECANISMUL COLORRII
In funcie de tipul gruprilor ionizabile din structur , proteinele sunt 1 acide 2 bazice 3 neutre
13

MECANISMUL COLORRII
Colorant bazic substrat (=proteina) acid (ex: hemalaunul)
Nucleul caracter bazofil: albastru-nchis / violet
14

MECANISMUL COLORRII
Colorant acid substrat bazic (ex: eozina) Citoplasma caracter acidofil: roz/rou

15

Evidentierea componentelor celulare ( hemalaun-eozin)

16

ETAPELE COLORRII
1. 2. 3. 4.

5.
6. 7.

Deparafinarea Hidratarea Mordansarea ( la nevoie) Colorarea propriu-zis Splarea Deshidratarea Clarificarea


17

METODE DE COLORARE
1. In funcie de momentul colorrii
2. 3.

4.
5.

Dupa nr. de coloranti utilizai Dup mecanism Dup metoda de obinere a coloraiei optime In funcie de raportul dintre rezultatul colorrii i culoarea colorantului
18

Momentul colorrii

Vitale - colorant vital care este ncorporat de animal n timpul vieii; persist numai att timp ct celulele supravieuiesc n vitro Permanente pentru colorarea preparatelor permanente
19

Numr de colorani
a

Simple folosete un singur colorant Combinate (policrom) 2 sau mai muli colorani i. Succesiv ii. Simultan, ex . : hemalaun - eozin, azan
20

Mecanism
- direct

simplu contact dintre colorant si substrat - indirect necesit prezena unui mediator sau MORDANT , ntre colorant i substrat. Acesta fixeaz colorantul de componentele celulare.
21

Metoda de obinere a coloraiei optime


- progresive

prin adugri succesive pna se ajunge la momentul optim de colorare

- regresive - prin aciunea prelungit a colorantului pn la obinerea unei supracolorri , apoi se acioneaz cu un agent chimic decolorant (difereniator) (ex. Coloratia Nissl).

22

Rezultatul colorrii i culoarea colorantului


- Ortocromatic substratul se

coloreaz n aceeai culoare ca i cea a colorantului

- Metacromatic - substratul se coloreaz n alt culoare ca cea a colorantului


23

IMPREGNARI METALICE
PRINCIPIU: precipitat de metal care se depune pe diferitele elemente de tesuturi evideniind structuri care n mod obisnuit nu se coloreaz cu colorani.

- cele mai folosite sunt : Ag , Au , Os , Hg.


24

IMPREGNARE ARGENTIC
- folosit pentru evidenierea elementelor din esutul epitelial, conjunctiv i n cercetarea sistemului nervos. Rezultate: structurile vizate sunt colorate n negru.
25

Coloraia

Componeni Rezultate

26

COLORAIA HEMALAUN EOZIN


2 colorani: 1 - hemalaunul colorant bazic 2 - eozina colorant acid

REZULTATE - nuclei albastru - violet - citoplasma roz- rosu


27

HEMALAUN-EOZIN

28

COLORAIA HEMALAUN EOZINA CU ALBASTRU DE METIL - coloratie REZULTATE tricrom 1. Nuclei violet 1. hemalaun 2. Citoplasma albastru cenusiu 2. eozina 3. Fibrele de 3. albastru de colagen albastru metil intens
29

COLORAIA HEMALAUN EOZINA CU ALBASTRU DE METIL

30

COLORATIA VAN GIESON


- coloratie

REZULTATE 1. Nuclei negri tricrom 1. hematoxilina 2. Citoplasma galben feric 3. Fibre de 2. acidul picric colagen rou 3. fuxina acid intens
31

VAN GIESON

32

COLORATIA MASSON
- coloratie

tricrom 1. hematoxilin feric 2. soluia colorant A ce conine fuxin acid 3. soluia colorant B ce conine albastru de anilin

REZULTATE 1. Nuclei negru 2. Citoplasma rou violet deschis 3 Fibrele de colagen albastru intens
33

COLORATIA MASSON

34

COLORATIA MALLORY
Se utilizeaz : 1. fuxin acid 2 albastru Mallory ( contine albastru de anilina i orange G )

REZULTATE 1. Nuclei - rou intens 2. Citoplasma roie 3. Fibre de colagen i reticulin albastru 4. esut muscular neted - violet 5. esut muscular striat - rou portocaliu
35

COLORATIA MALLORY

36

COLORATIA AZAN
- azocarmin C

- albastru Heidenhein , cu anilin i orange G

REZULTATE Nuclei rou viu Citoplasma rou Fibre de colagen i reticulin albastru deschis esut muscular striat rou , orange sau galben
37

COLORATIA AZAN

38

COLORATII CITOLOGICE
- utilizate pentru evidenierea anumitor organite celulare

39

METODA CAJAL DA FANO


- evidenierea complexului Golgi
REZULTATE Nuclei necolorai Aparatul Golgi reea perinuclear de culoare neagr Citoplasma aurie
40

METODA CAJAL DA FANO

41

METODA HEMATOXILINA FERICA REGAUD


- evidenierea

mitocondriilor

REZULTATE Nucleu necolorat Nucleol negru Mitocondrii puncte negre


42

METODA HEMATOXILINA FERICA REGAUD

43

TEHNICI DE EXAMINARE A TESUTULUI EPITELIAL IMPREGNAREA ARGENTICA RANVIER


- evidentierea interstiiului dintre celulele epiteliului din seroase limitele intercelulare apar net n culoarea neagr
44

IMPREGNARE ARGENTICA ESUT EPITELIAL

45

TEHNICI SPECIALE DE EXAMINARE A TESUTULUI CONJUNCTIV


COLORAIA CU ALBASTRU DE TOLUIDIN - granulaiile din mastocite prin coloraie metacromatic n rou violet

46

47

TEHNICI SPECIALE DE EXAMINARE A TESUTULUI CONJUNCTIV


METODE PENTRU EXAMINAREA FIBRELOR CONJUNCTIVE

1.

Fibrele de reticulin se examineaz folosind o metoda electiv - IMPREGNAREA ARGENTICA i apar colorate n negru 2. Fibrele elastice se poate utiliza coloraia cu a. Rezorcin fuxina - albastre b. Orcein cafeniu - roscate 48

Fibre elastice orcein argentic

Fibre reticulin impregnare

49

TEHNICI SPECIALE PENTRU EXAMINAREA ESUTULUI MUSCULAR


METODA HEIDENHEIN - evidentiaz structura periodic a miofibrilelor. Se remarc alternana de zone clare i ntunecate.

50

METODA HEIDENHEIN

51

Metode speciale pentru evidenierea esutului nervos


- metoda Nissl
-

impregnare argentic Evidenierea tecii de mielin prin fixare cu tetraoxid de osmiu

52

Impregnare Ag

Nissle

53

54