Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
COLORAREA
etapa prin care se urmrete creterea contrastului dintre diferitele componente tisulare prin modificarea indicilor de refracie ai substratului morfologic cu ajutorul
coloranilor .
COLORAREA
Tehnica de colorare depinde de natura fixatorului utilizat i de esutul pe care dorim s l examinm.
COLORANTUL HISTOLOGIC
substan chimic colorat, de obicei de natur organic, ce poate intra n celul atandu-se la nivelul componentelor celulare i permind astfel diferenierea lor optic. Nu toate substanele colorate sunt colorani!
4
COLORANI
- grupri cromofore purttoare de culoare
- grupri auxocrome capacitatea de a colora
GRUPARILE AUXOCROME
1. Ionizate ( principale ) formeaz legturi electrochimice cu substratul 2. Neionizate ( secundare) formeaz legaturi de hidrogen cu substratul. Acest tip de legatur mrete stabilitatea colorantului.
6
CLASIFICAREA COLORANILOR
- natura lor - caracterele chimice
CLASIFICAREA COLORANILOR
Naturali - vegetali : hematoxilina ,safranina , orceina , turnesolul - animali : carminul Sintetici : albastru de metil
CLASIFICAREA COLORANILOR
Acizi sunt de obicei sruri de acizi organici , gruparea auxocrom principal fiind ncrcat electric negativ.
CLASIFICAREA COLORANILOR
Bazici gruparea auxocroma principal ncrcat electric pozitiv , deci se va ataa pe un substrat ncrcat negativ
10
CLASIFICAREA COLORANILOR
Neutri grupri auxocrome principale ncrcate electric pozitiv i negativ, fiind soluii apoase de colorani bazici i acizi ntr-o anumit proporie
11
MECANISMUL COLORRII
PROTEINELE - substratul molecular la nivelul crora se fixeaz coloranii prin legturi electrochimice i de hidrogen.
12
MECANISMUL COLORRII
In funcie de tipul gruprilor ionizabile din structur , proteinele sunt 1 acide 2 bazice 3 neutre
13
MECANISMUL COLORRII
Colorant bazic substrat (=proteina) acid (ex: hemalaunul)
Nucleul caracter bazofil: albastru-nchis / violet
14
MECANISMUL COLORRII
Colorant acid substrat bazic (ex: eozina) Citoplasma caracter acidofil: roz/rou
15
16
ETAPELE COLORRII
1. 2. 3. 4.
5.
6. 7.
METODE DE COLORARE
1. In funcie de momentul colorrii
2. 3.
4.
5.
Dupa nr. de coloranti utilizai Dup mecanism Dup metoda de obinere a coloraiei optime In funcie de raportul dintre rezultatul colorrii i culoarea colorantului
18
Momentul colorrii
Vitale - colorant vital care este ncorporat de animal n timpul vieii; persist numai att timp ct celulele supravieuiesc n vitro Permanente pentru colorarea preparatelor permanente
19
Numr de colorani
a
Simple folosete un singur colorant Combinate (policrom) 2 sau mai muli colorani i. Succesiv ii. Simultan, ex . : hemalaun - eozin, azan
20
Mecanism
- direct
simplu contact dintre colorant si substrat - indirect necesit prezena unui mediator sau MORDANT , ntre colorant i substrat. Acesta fixeaz colorantul de componentele celulare.
21
- regresive - prin aciunea prelungit a colorantului pn la obinerea unei supracolorri , apoi se acioneaz cu un agent chimic decolorant (difereniator) (ex. Coloratia Nissl).
22
IMPREGNARI METALICE
PRINCIPIU: precipitat de metal care se depune pe diferitele elemente de tesuturi evideniind structuri care n mod obisnuit nu se coloreaz cu colorani.
IMPREGNARE ARGENTIC
- folosit pentru evidenierea elementelor din esutul epitelial, conjunctiv i n cercetarea sistemului nervos. Rezultate: structurile vizate sunt colorate n negru.
25
Coloraia
Componeni Rezultate
26
HEMALAUN-EOZIN
28
COLORAIA HEMALAUN EOZINA CU ALBASTRU DE METIL - coloratie REZULTATE tricrom 1. Nuclei violet 1. hemalaun 2. Citoplasma albastru cenusiu 2. eozina 3. Fibrele de 3. albastru de colagen albastru metil intens
29
30
REZULTATE 1. Nuclei negri tricrom 1. hematoxilina 2. Citoplasma galben feric 3. Fibre de 2. acidul picric colagen rou 3. fuxina acid intens
31
VAN GIESON
32
COLORATIA MASSON
- coloratie
tricrom 1. hematoxilin feric 2. soluia colorant A ce conine fuxin acid 3. soluia colorant B ce conine albastru de anilin
REZULTATE 1. Nuclei negru 2. Citoplasma rou violet deschis 3 Fibrele de colagen albastru intens
33
COLORATIA MASSON
34
COLORATIA MALLORY
Se utilizeaz : 1. fuxin acid 2 albastru Mallory ( contine albastru de anilina i orange G )
REZULTATE 1. Nuclei - rou intens 2. Citoplasma roie 3. Fibre de colagen i reticulin albastru 4. esut muscular neted - violet 5. esut muscular striat - rou portocaliu
35
COLORATIA MALLORY
36
COLORATIA AZAN
- azocarmin C
REZULTATE Nuclei rou viu Citoplasma rou Fibre de colagen i reticulin albastru deschis esut muscular striat rou , orange sau galben
37
COLORATIA AZAN
38
COLORATII CITOLOGICE
- utilizate pentru evidenierea anumitor organite celulare
39
41
mitocondriilor
43
45
46
47
1.
Fibrele de reticulin se examineaz folosind o metoda electiv - IMPREGNAREA ARGENTICA i apar colorate n negru 2. Fibrele elastice se poate utiliza coloraia cu a. Rezorcin fuxina - albastre b. Orcein cafeniu - roscate 48
49
50
METODA HEIDENHEIN
51
52
Impregnare Ag
Nissle
53
54