UNIVERSITAEA ALEXANDRU IOAN CUZA IAI FACULTATEA DE BIOLOGIE

Biotehnologia producerii alcaloizilor tropanici (scopolamina) la specii vegetale din familia Solanaceae

Coordonator: Confereniar dr. Smaranda Vntu Masterand: Ioni Radu

IAI 2013

Introducere
Alcaloizii sunt substane organice heterociclice de origine vegetal, cu caracter bazic, rezultate n urma metabolismului secundar al plantelor, care dau reacii caracteristice i au aciune asupra organismelor animale, de cele mai multe ori de natur toxic dar cu importan farmaceutic foarte mare. Scopolamina este unul dintre cei mai vechi alcaloizi izolai din surse vegetale, fiind utilizat n formele sale purificate (cum ar fi sruri variate, inclusiv clorhidrat, bromhidrat, iodhidrat i sulfat). Structura i efectele scopolaminei au fost descrise de cercettorul german Albert Ladenburg aceasta fiind izolat pentru prima oar la sfaritul secolului al XIX-lea.

Figur 1. Formul chimic scopolamin

Scopolamina este un alcaloid toxic care poate fi gsit n frunzele i seminele plantelor Scopolia japonica, Hyoscyamus niger, Atropa belladonna, Datura stramonium sau Brugmansia, dar poate fi i sintetizat pe cale artificial (pentru prima oar la jumatatea secolului al XX-lea). Doza toxic letal de scopolamin pentru om este de circa 100 de mg, sau o injecie subcutanat cu 1 mg are acelai efect. Dozele mai mici de scopolamin au un efect uor sedativ, hipnotic, spasmolitic i antiemetic; apar i simptome de apatie ca i de slbire a voinei. De aceea pn n anul 1950 cnd a fost nlocuit cu pentotal de sodiu, a fost folosit la interogarea agenilor secrei. n urm cu cteva decenii scopolamina se folosea mpreun cu morfina ca i calmant al pacienilor cu boli nervoase. n prezent este folosit n medicin sub form de Dexamphetamin ca nlocuitor de drog.

Figura 2. Atropa belladonna (Adekomi et al., 2011).

Drogul a fost folosit n combinaie cu morfin, oxicodon sau alte opiacee dinaintea anului 1900 i pn n anul 1960, ca anestezic n naterea copiilor. n medicin scopolamina a fost i nc este utilizat n urmtoarele scopuri: -utilizarea ei principal este pentru tratarea greii i mpotriva varsturilor postoperatorii, dar este folosit i de scafandri mpotriva rului de mare; -tratament mpotriva crampelor intestinale; -pentru scopuri oftalmice; -adjuvant la analgezice narcotice; -ca agent preanestezic; -ca un agent de uscare a sinusurilor, plmnilor i n domenii conexe: n ORL este folosit pentru uscarea cilor respiratorii superioare; -pentru a reduce motilitatea i secreiile n tractul gastro-intestinal; Scopolamina este de asemenei i unul dintre cele mai nspimntatoare droguri efecul acesteia fiind foarte nociv pentru cel care il consum. Persoana care l consum este treaz, articulat, vzut din exterior pare normal, sigur pe sine i pe aciunile sale. n realitate ns, drogul elimin liberul arbitru, persoana pierdndu-i controlul asupra aciunilor i gndurilor sale, fiind uor de influenat i la dispoziia oricui vrea s profite de ea. Efectul secudar cel mai oribil al acestui drog este cauzarea unei amnezii totale. Scopolamina este un drog fr gust, miros sau culoare. Dozele mai mici, cum am precizat anterior au efect usor sedativ, hipnotic, spasmolitic i antianemic. n prezent este folosit n medicin sub form de Dexamphetamin ca nlocuitor la cei dependeni de stupefiante. Exemplul 1. Datura stramonium face parte din familia Solanaceae, este local cunoscut sub numele de Sikrane i este raspndit n nordul Algeriei. Principalii alcaloizi toxici n Datura stramonium sunt atropina i scopolamina. Toate parile plantei sunt toxice, dar cea mai mare cantitate de alcaloizi este localizat n seminele coapte.

Figura 3. Datura stramonium

Seminele plantei au fost colectate n Europa de Sud ntre lunile august i septembrie. Acestea au fost pstrate la temperatura camerei, n loc uscat. Dup uscare acestea au fost inute ermetic n containere.

Figur 4. Datura stamoniu

Exemplul 2. Scopina carniolica Jacq. (Solanaceae) aceasta este studiat n biotehnologice i fitochimice pentru c aceste specie din flora slbatic a Romnia i are o importan foarte mare pentru industia farmaceutic prin coninutul lor ridicat de scopolamin.

Figur 5. Scopina carniolica

Obtinerea de scopolamin Explantul folosit este de obicei o poriune din frunz sau o sman. Acestea dup sterilizare sunt puse pe medii de cultur ce conin amestecuri nutritive i fitohormoni. Pentru a produce scopolamina este necesar localizarea esutului specializat n producerea sa. Acesta este cel din rdcinile firoase. Acestea au fost induse cu succes de ctre Agrobacterium rhizogenesis (tehnica hairy root). n practic se induce creterea rdcinilor firoase prin tehnica hairy root la unele specii vegetale care au un coninut ridicat din acest alcaloid, proces indus de ctre Agrobacterium rhizogenesis. Dup activarea bacteriei, acestea sunt puse n suspensie n agar YEM (utilizat n cultivarea Agrobacterium sp.) timp de 72 de ore (106bact/ml). Inocularea soluiei bacteriene se face cu ajutorul unei seringi la baza fragmentelor de hipocotil de 0,5 1 cm. Acestea provin de la germeni de Datura sp. cultivate in vitro timp de 2 luni. Rdcinile aprute dup inoculare sunt colectate, cnd au o lungime de aproximativ 2 cm. se colecteaz doar rdcinile firoase crescute n locurile n care se produce inocularea. Rdcinile ce prezint viteza cea mai mare de cretere sunt reinute, iar cele care cresc greu sau formeaz calusuri sunt eliminate.

Figur 6. Culturi hairy root la Solanaceae

Dup toate aceste etape rdcinile sunt mutate n bioreactoare i multiplicate.

Bibliografie
1. L. Ajungla and col., 2009, Influence of biotia and abiotic elicitors on accumulation of hyoscyamine and scopolamine in root cultures of Datura metel L., Indian Journal of Biotechnology, Vol. 8; 2. https://www.wpi.edu/Pubs/ETD/Available/etd-0529103 162012/unrestricted/mccoymark.pdf ; 3. http://www.landesbioscience.com/curie/chapter/4368/ 4. http://www.intechopen.com/books/genetic-transformation/transformed-root-culturesof-solanum-dulcamara-l-a-model-for-studying-production-of-secondary-metabo 5. F. Stnic, 2004, Micronmulirea plantelor horticole, ed. INVEL-Multimedia Bucureti.