Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Metodele a)-c) sunt metode termice i se pot realiza prin nclzire uscat (a)
i nclzire umed (b-c). Ultima variant este destul de eficient deoarece aburul i
apa cald acioneaz prin hidratare cu coagularea i hidroliza proteinei bacteriene.
Sterilizarea prin metoda d) se utilizeaz frecvent n cazul produselor
termolabile i cnd cheltuielile prin (a-c) sunt foarte mari; se utilizeaz filtre (plci)
poroase, Jena G5, de azbest-celuloz; cu membran.
Sterilizarea prin e) dei prezint unele dezavantaje este aplicat tot mai mult
n special pentru aerul din boxe sterile.
Sterilizarea prin f) se aplic produselor termolabile la rece cu etilenoxid,
formaldehid, fenol, etc. Se poate utiliza combinaia a)-c) i adugare de substane
chimice ca: aldehid formic, ap oxigenat, acid 5-nitrofenilacrilic.
Materiale utilizate:
- pipete;
- plci Petri;
- eprubete;
- flacoane Erlenmayer;
- vat hidrofob;
- tifon;
- hrtie ambalaj i etuv.
Mod de lucru:
Se execut dopuri de vat hidrofob pentru eprubete, astfel nct s poat fi
extrase uor n timpul inoculrii, iar densitatea materialului s asigure sterilitatea.
Eprubetele se introduc n coul de srm i se acoper cu hrtie. Pipetele se astup
la partea opus vrfului, cu un dop subire de vat care s rein microorganismele
ce ar putea ptrunde n pipet pe la partea superioar. Pipetele se ambaleaz ntr-o
fie de hrtie care se rsucete n jurul tubului de sticl, ncepnd de la vrf. Plcile
Petri se ambaleaz n hrtie de ambalaj, n funcie de numrul necesar. Flacoanele
Erlenmayer pentru medii de cultur se astup cu dop de vat nfurat n tifon.
Toat sticlria se sterilizeaz 1 or la 180 oC la etuv, timp socotit din momentul
atingerii temperaturii. Dup aceast perioad etuva se oprete i se ateapt
rcirea materialului.
4. EXAMENUL MICROSCOPIC AL
MICROORGANISMELOR
MICROSCOPUL OPTIC
Microscopul optic se compune dintr-un stativ pe care sunt montate un sistem
de transmisie optic, o platin port-obiect i un sistem de iluminare.
Sistemul de transmisie optic
Ocularele au puterea de mrire de 5x, 7x, 10x, 15x, 20x i chiar 30x. n
lucrrile curente cele mai des folosite sunt cele 7x i 10x. Ocularele au rolul de a
mri imaginea preparatului, dar i de a aplatiza i lumina cmpul optic.
Obiectivele reprezint un sistem optic bine centrat, constituit din una sau
mai multe lentile destinate a forma o imagine real a obiectului. Puterea lor de
mrire este invers proporional cu distana focal, adic cu distana dintre obiect i
lentila pe care se formeaz imaginea. Calitatea esenial a obiectivelor este puterea
lor de rezoluie. Aceasta la rndul ei depinde de mrimea deschiderii unghiului pe
care l face conul de raze care intr n lentil precum i de indicele de refracie al
mediului dintre obiect i lentil. Obiectivele sunt fixate prin nurubare pe un
revolver port-obiectiv care permite selecionarea rapid a unuia din ele, prin simpla
rotire. Gama de obiective necesare n microbiologie se compune din trei obiective
cu puterea de mrire de 10x, 20x, 40x i un obiectiv cu imersie cu grosismentul
90x. Acest obiectiv se folosete n cazul n care obiectul ce trebuie examinat este
mai mic sau dac este necesar a se observa amnunte foarte fine. La obiectivul cu
imersie este necesar a se interpune ntre obiect i lentila frontal a obiectivului un
lichid transparent (ulei de cedru, ulei de parafin, balsam de Canada etc.).
100 m
domeniul microscopiei
optice
celule epiteliale
10 m
bacterii tipice
1 m
domeniul
micr
oscopiei
micoplasme
electronice
100 nm
virusuri
10 nm (100)
proteine
1 nm (10)
aminoacizi
atomi
0,1 nm (1)
Figura 1. Domeniile microscopiei optice i electronice
Sistemul de iluminare se compune din surs luminoas i dintr-un
condensator.
Condensatorul este o pies care se gsete imediat sub platina
microscopului i care are rolul nu att de a strnge (condensa) razele luminoase
venite de la sursa de lumin, ct de a mri seciunea conului de lumin pentru o
mai bun claritate a imaginii.
Sistemul de reglare Deplasarea platinei port-obiect sau a sistemului optic
se efectueaz cu ajutorul unei cremaliere, prin intermediul a dou butoane: unul
mare care d o micare ampl i rapid (viza macrometric) i altul mic, pentru
reglajul fin ( viza micrometric).
Modul de utilizare a microscopului
Preparatul este plasat pe platina microscopului, avnd grij s fie bine fixat n
dispozitivul de prindere. Este selectat obiectivul; n general, un examen debuteaz
cu utilizarea obiectivului cel mai mic. n practic, se utilizeaz obiectivul 10x, apoi
20x pentru un preparat necunoscut sau pentru drojdii i mucegaiuri i obiectivul
40x pentru bacterii. Se regleaz distana lentilei obiectivului fa de preparat prin
micarea vizei macrometrice i a celei micrometrice. (Obiectivele au o distan de
reglare care descrete cu puterea lor). Cutarea imaginii este apoi efectuat prin
manevrarea butonului care acioneaz cremaliera, iar dup fixarea imaginii se face
o nou reglare a acesteia. Curarea sistemului optic se efectueaz regulat cu xylol
i nu cu alcool etilic.
Reglarea intensitii luminii condensatorului se face innd seama de puterea
de mrire a obiectivelor; cu ct aceasta este mai mare, cu att poziia
condensatorului este mai ridicat.
medii de cultur generale care asigur dezvoltarea unui mare numr de specii
medii de cultur selective care permit dezvoltarea unui numr restrns de microorganisme
medii de conservare
medii semi-sintetice: sunt constituite din produse chimice bine definite, dar i din
produse de origine natural (cu compoziie cunoscut).
Constituenii principali ai mediilor de cultur sunt:
1. Extracte de carne i macerate
Temperatura,
o
C
100
105
110
112
115
120
121
122
128
130
135
140
Presiunea, kg/m3
0,00
0,20
0,43
0,55
0,69
0,99
1,00
1,33
1,55
1,72
2,16
2,65
Presiunea, atm
0,00
0,20
0,42
0,50
0,67
0,96
1,00
1,29
1,50
1,65
2,09
2,56
Principiul metodei:
Microorganismele pot fi cultivate pe medii de cultur n plci Petri sau n tuburi, att
pentru studiul lor, pentru conservarea lor prin refrigerare, ct i pentru obinerea culturilor stoc i
de lucru, n diversele procese biotehnologice. Operaia de trecere a unei culturi dintr-un vas de
cultur n altul se numete repicare sau trecere, iar fragmentul de cultur ce se trece pe alt
mediu se numete inoculum.
n jurul flcrii becului de gaz exist o zon steril cu
diametrul de aproximativ 20 cm, n lipsa curenilor de aer. Toate
manipulrile care necesit deschiderea recipientelor sterile sau
coninnd culturi trebuie efectuate n aceast zon de protecie.
Materiale utilizate:
- mediu de cultur: agar nutritiv sterilizat n flacoane Erlenmayer de 500 mL;
- plci Petri sterile;
- pipete sterile;
- eprubete cu cte 9 ml ap steril;
- probe de ap din diferite surse;
- baie de ap la 45 oC;
- termostat la 37 oC;
- dispozitiv de numrat colonii.
Mod de lucru:
Mediul de cultur coninut n balonul Erlenmayer se pune la topit pe baie de
ap. Dup fluidificarea complet, se termostateaza, tot pe baie de ap la 45 oC.
Folosind pipeta steril, se pregtesc cte 3 diluii din probele de ap i apoi
se recolteaz cte 1 cm3 din aceste diluii i, prin desfacerea plcii Petri sterile, se
las s treac numai pipeta i se scurge coninutul.