Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Eluent
Oglind Amestec
Rezervor
Surs
Senzor
Fant Coloan
0. Prefa..............................................................................................................................1
1. Informaia Analitic .........................................................................................................3
2. Proba pentru analiz.......................................................................................................23
3. Metode chimice de analiz - interferene cu analizele instrumentale ............................35
4. Metode electrochimice...................................................................................................47
5. Metode optice de analiz ...............................................................................................67
6. Spectrometria de absorbie n UV-VIS ..........................................................................71
7. Spectrometria de absorbie n IR....................................................................................84
8. Analiza prin absorbie atomic (AA) .............................................................................97
9. Spectrometria de emisie...............................................................................................107
10. Fluorimetria i spectrometria de chemiluminescen ................................................116
11. Nefelometria i turbidimetria.....................................................................................126
12. Refractometria i polarimetria ...................................................................................133
13. Spectrometria de fluorescen X (XRF) ....................................................................137
14. Metode cromatografice - privire de ansamblu ...........................................................149
15. Cromatografia de gaze (GC)......................................................................................159
16. Cromatografia de lichide de nalt performan (HPLC) ..........................................174
17. Cromatografia ionic (IC)..........................................................................................189
18. Cromatografia planar (TLC) ....................................................................................194
19. Analiz spectral nuclear .........................................................................................202
20. Prelucrarea datelor rezultate din msurtori ..............................................................214
21. Anexe .........................................................................................................................237
22. Bibliografie ................................................................................................................249
24
Prefa
Prefa
Cluj-Napoca,
1 Octombrie 2009
Lorentz JNTSCHI&Horea Iustin NACU
[1] Solak H. H. et al., Measurement of strain in AlCu interconnect lines with x-ray microdiffraction, Journal of
Applied Physics, 86, 884, 15 July 1999.
Chimie Analitic i Instrumental 1
2
Informaia analitic
Nici un efect a crui exactitate are o valoare mai slab de 10 % nu merit a fi cercetat
- Walther Nernst (1864-1941), Chimist fizician german -
Informaia analitic
Generaliti
Se vorbete de o analiz chimic atunci cnd activitatea depus, de o persoan, grup
sau organizaie, are drept rezultat cel puin o caracteristic chimic calitativ (adic o
proprietate ce indic prezena sau absena unei specii chimice) sau cel puin o cifr care indic
un coninut dintr-o specie sau material dat. Ansamblul de operaii i msurtori, plus
condiiile experimentale, menite s dea, mcar n parte, compoziia fizico-chimic a unei
"probe" din material, produs sau esut biologic, convenim s-l numim sistem analitic.
Supunnd un material (numit prob) operaiilor unui sistem analitic, consumnd
reactivi i materiale auxiliare (de exemplu detergeni), energie i manoper (lucrul efectiv), se
obine rspuns la una din ntrebrile:
Este prezent specia (caracteristica) X n prob?
n ce cantitate este prezent specia X?
A rspunde doar la ntrebarea (a) nseamn a face o analiz chimic calitativ iar a
rspunde la ntrebarea (b) nseamn a executa o analiz chimic cantitativ. A rspunde la
ambele ntrebri pentru toate speciile cunoscute constituie analiza complet.
Dac se urmrete evoluia unei anumite mrimi analitice, n timp, spunem c se
realizeaz monitorizare a acesteia. Deci, numim monitorizare, msurarea periodic, la
intervale predeterminate de timp, a concentraiei unuia dintre factorii poluani sau parametrii
caracteristici ai mediului. Aadar,
O analiz fizico - chimic sau un procedeu de monitorizare se poate defini ca
un proces de obinere a informaiei analitice
Perturbaii
X0
Proces de
Material Informaie
analiz
X1 X2 Xn
Parametri fizico-chimici
[2] Martin Todd M., Gupta Ram B., and Roberts Christopher B., Measurements and Modeling of Cloud Point
Behavior for Poly(propylene glycol) in Ethane and in Ethane + Cosolvent Mixtures at High Pressure,
Industrial & Engineering Chemistry Research, p. 185-194, Volume 39, Issue 1, January 4, 2000.
4
Informaia analitic
vederea unor analize chimice sunt: absorbia sau emisia de energie [7-9] rotaia optic [10],
indicele de refracie [11], constanta de echilibru [12] constanta vitezei de reacie [13,14]
energia de activare [15] sau cldura de reacie [16,17]. Orict de simple sau complexe ar fi
aceste msurtori, sigurana, utilitatea, precizia, interpretarea i realizarea lor depind de
analist, care trebuie s fie preocupat nu numai de efectuarea analizei, ci i de cum, de ce i
unde se utilizeaz n final rezultatele obinute. Analistul are obligaia de a efectua determinri
bazate pe procedee sigure, reproductibile i verificate.
n trecut, rezultatele analizelor n medicin erau obinute n mod calitativ, de aceea,
majoritatea diagnosticelor erau bazate pe simptoame i/sau examinrile cu raze X, dei era
cunoscut faptul c multe boli fiziologice erau nsoite de schimbri chimice n lichidele
[3] Mussari Lelia, Postigo Miguel, Lafuente Carlos, Royo Flix M., and Urieta Jos S., Viscosity Measurements
for the Binary Mixtures of 1,2-Dichloroethane or 1,2-Dibromoethane with Isomeric Butanols, Journal of
Chemical & Engineering Data, p. 86-91, Volume 45, Issue 1, January 13, 2000.
[4] Dunstan Dave E., Stokes Jason, Diffusing Probe Measurements of Polystyrene Latex Particles in
Polyelectrolyte Solutions: Deviations from Stokes-Einstein Behavior, Macromolecules, p. 193-198,
Volume 33, Issue 1, January 11, 2000.
[5] Devireddy Ramachandra V., Barratt Paul R., Storey Kenneth B., Bischof John C., Liver Freezing Response
of the Freeze-Tolerant Wood Frog, Rana sylvatica, in the Presence and Absence of Glucose. I.
Experimental Measurements, American Society, CRYO, p. 310-326, Volume 38, Issue 4.
[6] Lau Ka-Sing, Ngai Sze-Man, Multifractal Measures and a Weak Separation Condition, American Society,
AIMA, p. 45-96, Volume 141, Issue 1.
[7] Roncin Jean-Yves, Launay Franoise, Bredohl Harald, Dubois Iwan, The Vacuum Ultraviolet Absorption
Bands of the Pink Afterglow Spectrum of Molecular Nitrogen Revisited at High Resolution, American
Society, JMSP, p. 243-249, Volume 194, Issue 2.
[8] Meng Q., Daniels-Race T., Luo Z., McNeil L. E., The polarization sensitivity of optical absorption in tensile
strained GaAs/InAlAs double quantum wells, American Society, SPMI, p. 583-590, Volume 25, Issue 4.
[9] Baldo M.A. et al., Very high-efficiency green organic light-emitting devices based on
electrophosphorescence, Applied Physics Letters, 75, 4, July 5, 1999.
[10] Peddle Derek R., Hall Forrest G. and LeDrew Ellsworth F., Spectral Mixture Analysis and Geometric-
Optical Reflectance Modeling of Boreal Forest Biophysical Structure, Remote Sensing of Environment, p.
288-297, Volume 67, Issue 3, March, 1999.
[11] Kendrick Brent S., Kerwin Bruce A., Chang Byeong S. and Philo John S., Online Size-Exclusion High-
Performance Liquid Chromatography Light Scattering and Differential Refractometry Methods to
Determine Degree of Polymer Conjugation to Proteins and ProteinProtein or ProteinLigand
Association States, p. 136-146, Analytical Biochemistry, Volume 299, Issue 2, 15 December, 2001.
[12] Ortiz T. M., Meyer B. A., and Razani A., Empirical Correlation of Equilibrium Separation Factors in the
Pd-H2/D2 System with Temperature and Composition, Journal of Chemical & Engineering Data, p. 120-
123, Volume 45, Issue 1, January 13, 2000.
[13] Dillingham Mark S., Wigley Dale B., and Webb Martin R., Demonstration of Unidirectional Single-
Stranded DNA Translocation by PcrA Helicase, Measurement of Step Size and Translocation Speed,
Biochemistry, p. 205-212, Volume 39, Issue 1, January 11, 2000.
[14] Laarhoven Lucas J. J. and Mulder Peter, -C-H Bond Strengths in Tetralin and THF: Application of
Competition Experiments in Photoacoustic Calorimetry, The Journal of Physical Chemistry B, p. 73-77,
Volume 101, Issue 1, January 2, 1997.
[15] Mitchell T. E., Hirth J. P. and Misra A., Apparent activation energy and stress exponent in materials with a
high Peierls stress, p. 1087-1093, Acta Materialia, Volume 50, Issue 5, 14 March, 2002.
[16] Cedeo Fidel Oscar, Prieto Mara M., and Xiberta Jorge, Measurements and Estimate of Heat Capacity for
Some Pure Fatty Acids and Their Binary and Ternary Mixtures, Journal of Chemical & Engineering Data,
p. 64-69, Volume 45, Issue 1, January 13, 2000.
[17] Dai Wenbin, Kojima Kazuo, and Ochi Kenji, Measurement and Correlation of Excess Molar Enthalpies of
Carbon Dioxide + 2-Butanol and 2-Propanol Systems at the Temperatures 303.15 K and 308.15 K and at
Pressures from 7.0 to 8.5 MPa, Journal of Chemical & Engineering Data, p. 6-10, Volume 45, Issue 1,
January 13, 2000.
Chimie Analitic i Instrumental 5
1
metabolice [18]. Uneori erau utilizate teste pentru a detecta componenii normali sau anormali
n diferite probe recoltate pentru analiz. Aceste teste n procedee prin intermediul crora a
devenit posibil determinarea cantitativ a componenilor inclui [19,20]. Pe msur ce
precizia a crescut i au fost stabilite proporiile normale, a devenit clar c rezultatele de
laborator au putut fi folosite n scopul precizrii diagnosticelor [21].
n prezent, pentru examinarea medical general a unui bolnav sau pentru a
diagnostica un ansamblu specific de simptoame este nevoie de o serie de analize cantitative
ale unor probe recoltate din corpul omenesc. n ultimul timp, peste dou miliarde de probe
sunt executate anual n laboratoarele clinicilor medicale pe probe biologice i acest numr
crete mereu. Majoritatea acestor teste includ determinarea glucozei, ureei, proteinelor,
sodiului, calciului, HCO3-/H2CO3, acidului uric i pH-ului [22-29].
[18] Joyce Michael A., Fraser Marie E., James Michael N. G., Bridger William A., and Wolodko William T.,
ADP-Binding Site of Escherichia coli Succinyl-CoA Synthetase Revealed by X-ray Crystallography, p.
17-25, Biochemistry, Volume 39, Issue 1, January 11, 2000.
[19] Clausen Tim, Schlegel Anja, Peist Ralf, Schneider Eva, Steegborn Clemens, Chang Yuh-Shin, Haase
Andrea, Bourenkov Gleb P., Bartunik Hans D., and Winfried B., X-ray structure of MalY from
Escherichia coli: a pyridoxal 5'-phosphate-dependent enzyme acting as a modulator in mal gene
expression; EMBO J., 19, p. 831-842, 2000.
[20] Ishikawa Kohki, Mihara Yasuhiro, Gondoh Keiko, Suzuki Ei-ichiro, and Asano Yasuhisa, X-ray structures
of a novel acid phosphatase from Escherichia blattae and its complex with the transition-state analog
molybdate; EMBO J., 19, p. 2412-2423, 2000.
[21] Shewchuk Lisa, Hassell Anne, Wisely Bruce, Rocque Warren, Holmes William, Veal James, and Kuyper
Lee F., Binding Mode of the 4-Anilinoquinazoline Class of Protein Kinase Inhibitor: X-ray
Crystallographic Studies of 4-Anilinoquinazolines Bound to Cyclin-Dependent Kinase 2 and p38 Kinase,
Journal of Medicinal Chemistry, p. 133-138, Volume 43, Issue 1, January 13, 2000.
[22] Chakraborty Debashis, Chandrasekhar Vadapalli, Bhattacharjee Manish, Krtzner Ralph, Roesky Herbert
W., Noltemeyer Mathias, and Schmidt Hans-Georg, Metal Alkoxides as Versatile Precursors for Group 4
Phosphonates: Synthesis and X-ray Structure of a Novel Organosoluble Zirconium Phosphonate,
Inorganic Chemistry, p. 23-26, Volume 39, Issue 1, January 10, 2000.
[23] Gabelnick Aaron M., Capitano Adam T., Kane Sean M., Gland John L., and Fischer Daniel A., Propylene
Oxidation Mechanisms and Intermediates Using in Situ Soft X-ray Fluorescence Methods on the Pt(III)
Surface, Journal of the American Chemical Society, p. 143-149, Volume 122, Issue 1, January 12, 2000.
[24] Solak H. H. et al., Measurement of strain in AlCu interconnect lines with x-ray microdiffraction, Journal of
Applied Physics, 86, 884, 15 July 1999.
[25] Steger-Hartmann T., Lnge R., Schweinfurth H., Environmental Risk Assessment for the Widely Used
Iodinated X-Ray Contrast Agent Iopromide (Ultravist), Ecotoxicology and Environmental Safety, 274-
281, 42(3).
[26] Chapman Wendy Webber, Fizman Marcelo, Chapman Brian E., Haug Peter J., A Comparison of
Classification Algorithms to Automatically Identify Chest X-Ray Reports That Support Pneumonia,
American Society, JBIN, p. 4-14, Volume 34, Issue 1.
[27] Venezia A. M., Liotta L. F., Deganello G., Schay Z., Guczi L., Characterization of Pumice-Supported Ag-
Pd and Cu-Pd Bimetallic Catalysts by X-Ray Photoelectron Spectroscopy and X-Ray Diffraction;
American Society, JCAT, p. 449-455, Volume 182, Issue 2.
[28] Ohno Youichi, The Scanning-Tunneling Microscopy, the X-Ray Photoelectron Spectroscopy, the Inner-
Shell-Electron Energy-Loss Spectroscopy Studies of M Te2and M3SiTe6(M=Nb and Ta), American
Society, JSSC, p. 63-73, Volume 142, Issue 1.
[29] Johnson Daniel J. D., Nugent Philip G., Tuddenham Edward G. D., Harlos Karl, Kemball-Cook Geoffrey,
Crystallization and Preliminary X-Ray Analysis of Active Site-Inhibited Human Coagulation Factor VIIa
(des-Gla), American Society, JSBI, p. 90-93, Volume 125, Issue 1.
6
Informaia analitic
[30] Jackson Togwell A., West M. Marcia, and Leppard Gary G., Accumulation of Heavy Metals by Individually
Analyzed Bacterial Cells and Associated Nonliving Material in Polluted Lake Sediments, Environmental
Science & Technology, p. 3795-3801, Volume 33, Issue 21, November 1, 1999.
[31] Bishop Gary A., Stedman Donald H., Hektner Mary, Ray John D., An In-Use Snowmobile Emission Survey
in Yellowstone National Park, Environmental Science & Technology, p. 3924-3926, Volume 33, Issue 21,
November 1, 1999.
[32] Fernndez Pilar, Vilanova Rosa M., and Grimalt Joan O., Sediment Fluxes of Polycyclic Aromatic
Hydrocarbons in European High Altitude Mountain Lakes, Environmental Science & Technology, p.
3716-3722, Volume 33, Issue 21, November 1, 1999.
[33] Taran Y. A., Fischer T. P., Cienfuegos E. and Morales P., Geochemistry of hydrothermal fluids from an
intraplate ocean island: Everman volcano, Socorro Island, Mexico, Chemical Geology, p. 51-63, Volume
188, Issues 1-2, 30 August 2002.
[34] Aleinikoff John N., Wintsch Robert P., Fanning Mark C. and Dorais Michael J., U-Pb geochronology of
zircon and polygenetic titanite from the Glastonbury Complex, Connecticut, USA: an integrated SEM,
EMPA, TIMS, and SHRIMP study, p. 125-147, Volume 188, Issues 1-2, 30 August 2002.
[35] Shi Ji Ping and Harrison Roy M., Investigation of Ultrafine Particle Formation during Diesel Exhaust
Dilution, Environmental Science & Technology, p. 3730-3736, Volume 33, Issue 21, November 1, 1999.
[36] Haefliger Olivier P., Bucheli Thomas D., and Zenobi Renato, Comment on "Real-Time Characterization of
the Organic Composition and Size of Individual Diesel Engine Smoke Particles", Environmental Science
& Technology, p. 3932-3932, Volume 33, Issue 21, November 1, 1999.
[37] Reilly Peter T. A., Gieray Rainer A., Whitten William B., and Ramsey J. Michael, Response to Comment on
"Real-Time Characterization of the Organic Composition and Size of Individual Diesel Engine Smoke
Particles", Environmental Science & Technology, p. 3933-3934, 33(21), 1999.
[38] Swackhamer Deborah L., Schottler Shawn, and Pearson Roger F., Air-Water Exchange and Mass Balance
of Toxaphene in the Great Lakes, Environmental Science & Technology, p. 3864-3872, Volume 33, Issue
21, November 1, 1999.
[39] Wehner B., Bond T. C., Birmili W., Heintzenberg J., Wiedensohler A., and Charlson R. J., Climate-
Relevant Particulate Emission Characteristics of a Coal Fired Heating Plant, Environmental Science &
Technology, p. 3881-3886, Volume 33, Issue 21, November 1, 1999.
[40] Emmrich Monika; Kinetics of the Alkaline Hydrolysis of 2,4,6-Trinitrotoluene in Aqueous Solution and
Highly Contaminated Soils, Environmental Science & Technology, p. 3802-3805, 33(21), 1999.
[41] Paulson Anthony J., Balistrieri Laurie, Modeling Removal of Cd, Cu, Pb, and Zn in Acidic Groundwater
during Neutralization by Ambient Surface Waters and Groundwaters, Environmental Science &
Technology, p. 3850-3856, Volume 33, Issue 21, November 1, 1999.
Chimie Analitic i Instrumental 7
1
poluani asfalturi, solveni, monomeri sintetici, cauciucuri butilice, negru de fum i pulberea
de cenu de la termocentralele electrice care utilizeaz crbune sau particule de zgur
rezultate din diferite procese industriale [42,43]. Lista se completeaz cu poluani gazoi ai
aerului i particulele datorate unei poluri locale sau accidentale. Apa este un sistem la fel de
complex ca i aerul atunci cnd este studiat pentru determinarea componenilor poluani.
Tabelul 1. Componeni organici n apele reziduale industriale
Domeniul Componente reziduale n apele uzate
Minerit, uzine de prepararea Humus, praf de crbune, ageni de flotaie
minereurilor
Turntorii Cianuri, fenoli, gudroane, praf de crbune
Prelucrarea fontei i a Ageni de umectare i lubrifiani, cianuri, inhibitori, hidrocarburi,
oelurilor reziduuri de solveni
Prepararea crbunilor, Humus, praf de crbune, cianuri, rodanine, fenoli, hidrocarburi,
cocserii piridine bazice
Producia de mangal Acizi grai, alcooli (n special metanol), fenoli
(crbune din lemn)
Industria petrolier Emulsii de uleiuri, acizi naftenici, fenoli, sulfonai
Past de lemn pentru Metanol, cimol, furfurol, hidrai de carbon solubili, acizi lignosulfonici
fabricarea hrtiei
Viscoz i celuloz Xantogenai, semiceluloze alcaline
Industria hrtiei Acizi rezinici, polizaharide, fibre celulozice
Industria textil Ageni de degresare i umectare, ageni de nivelare, apreturi, ageni de
ncleiere, acizi grai, acid nitrolotriacetic (trilon), colorani
Spltorii Detergeni, celuloz carboximetilic, enzime, ageni de nlbire,
colorani, murdrii, proteine, snge, cacao, cafea, etc.
Industria pielriei i Produi de degradare a proteinelor, spunuri, ageni de tanare, spun
tanailor de calciu emulsionat, pr
Rafinrii de zahr Zahr, acizi vegetali, betain, pectin
Fabrici de amidon Compui solubili n ap pe baz de proteine, pectine, hidrai de carbon
Fabrici de produse lactate Proteine, lactoz, acid lactic, emulsii de grsimi, ageni de splare i
cltire
Fabrici de spun i grsimi Glicerin, acizi grai, emulsii de grsimi
Fabrici de conserve Componeni vegetali solubili
Fabrici de bere Componeni vegetali solubili, reziduuri de bere, ageni de cltire
Fabrici de produse Acizi grai i aminoacizi, alcooli, hidrai de carbon
fermentate
Abatoare Snge, componeni solubili n ap sau emulsionai ai crnii
[42] Bond T. C., Bussemer M., Wehner B., Keller S., Charlson R. J., and Heintzenberg J., Light Absorption by
Primary Particle Emissions from a Lignite Burning Plant, Environmental Science & Technology, 3887-
3891, 33(21), 1999.
[43] Gallego-Jurez Juan A., Riera-Franco De Sarabia Enrique, Rodrguez-Corral German, Hoffmann Thomas
L., Glvez-Moraleda Juan C., Rodrguez-Maroto Jesus J., Gmez-Moreno Francisco J., Bahillo-Ruiz
Alberto, Martn-Espigares Manuel, Acha Miguel, Application of Acoustic Agglomeration to Reduce Fine
Particle Emissions from Coal Combustion Plants, Environmental Science & Technology, 3843-3849,
33(21), 1999.
8
Informaia analitic
[44] Srbu Costel, Jntschi Lorentz, Validarea i Evaluarea Statistic a Metodelor Analitice prin Studii
Comparative. I. Validarea Metodelor Analitice folosind Analiza de Regresie, Revista de Chimie,
Bucureti, p. 19-24, 49(1), 1998.
[45] Nacu Horea, Jntschi Lorentz, Hodian Teodor, Cimpoiu Claudia, Cmpan Gabriela, Some Applications of
Statistics in Analytical Chemistry, Reviews in Analytical Chemistry (Freud Publishing House), p. 409-
456, XVIII(6), 1999.
[46] Baker G. L., Gollub J. P., Blackburn J. A., Inverting chaos: Extracting system parameters from
experimental data, Chaos, p. 528, Vol. 6, No. 4, 1999.
[47] Hatton Angela D. and Gibb Stuart W., A Technique for the Determination of Trimethylamine-N-oxide in
Natural Waters and Biological Media, Analytical Chemistry, p. 4886-4891, Volume 71, Issue 21,
November 1, 1999.
Chimie Analitic i Instrumental 9
1
Principiile metrologiei
Orice analiz chimic reprezint o msurtoare. Pentru a avea certitudinea c
msurtoarea are un sens real n sensul c poate fi realizat oriunde in ar (sau n lume) i are
aceeai semnificaie pentru oricine se apeleaz la regulile stabilite de metrologie. Metrologia,
sau tiina msurtorilor s-a dezvoltat ncepnd din secolul 18. n fizic metrologia a dus la
sistemul SI care asigur faptul c msurtoarea este cu adevrat comparabil iar valorile
obinute de diverse laboratoare din lume sunt foarte apropiate pentru acelai obiect (material)
de cele adevrate. Sistemul SI recunoate 7 uniti bine definite: metrul, kilogramul, secunda,
amperul, kelvinul, molul i candela. Unitile derivate se formeaz pe baza combinrii
acestora. Exist de asemenea un mecanism de administrare bine stabilit astfel nct disputele
legate de msurtori sunt astzi de domeniul trecutului. Exist i o organizaie mondial
denumit ISO (International Organisation for Standardisation) care public ghiduri ce
stabilesc reguli de urmat pentru a face msurtorile comparabile pe tot globul.
Exactitatea
Exactitatea (sau acurateea) este msura ncrederii acordat msurtorii efectuate cu un
mijloc de msur. Aceasta se refer la sistemul analitic, n ansamblu, indiferent de locul i
timpul msurtorii. Exactitate a se msoar folosind un material (substan) zis etalon - n
care ncrederea este deplin. Diferena dintre valoarea adevrat, adic aceea recunoscut
unanim, i cea msurat o denumim eroare. Este esenial ca etalonul s fie recunoscut de
toate laboratoarele interesate. Exactitatea este msurat i de corelaia ce exist ntre un
standard i o prob, la msurtori repetate. n acelai timp, exactitatea estimeaz posibilitatea
de apariie a erorilor sistematice. O comparaie intuitiv dintre exactitatea unei analize i
trasul la int cu o puc scoate n eviden sensul exactitii (vezi fig. 2).
a b
Fig. 2. Analogie ntre trasul la int cu o arm i o metod de analiz chimic:
a - o metod exact; b - o metod precis dar inexact ( - inexactitatea)
10
Informaia analitic
Precizia
Gruparea analizelor individuale n jurul valorii medii se evalueaz prin precizie
(sinonim cu fidelitatea). Precizia poate fi definit drept o msur a variaiei rezultatului unei
msurtori. Schia de mai jos (fig. 3) ne permite s caracterizm dou trageri la int, una
precis i alta imprecis. Cea imprecisa are o varian mai mare. n cazul analizelor chimice
precizia exprim concordana dintre rezultatele unei serii de determinri efectuate pe acelai
eantion (sau prob supus analizei).
SE
a b
Fig. 3. Ilustrarea preciziei: A-tir precis analog cu o analiz chimic precis, B-tir imprecis
analog cu o analiz chimic imprecis, SE reprezint eroarea standard
( x i x ) 2
SEx=
n (n 1)
unde xi reprezint valoarea numeric a unei analize, x - valoarea mediei tuturor analizelor, n
fiind numrul de determinri i reprezint eroarea standard a variabilei X, o msur
matematic a mprtierii rezultatelor n jurul mediei (alta dect abaterea standard).
Selectivitatea
Selectivitatea sau specificitatea este msura n care rezultatul unei analize este
influenat de prezena unui alt component. De exemplu, pentru identificarea ionului Ni2+ avem
la dispoziie un reactiv numit dimetilglioxim, ce nu reacioneaz cu nici un alt ion. Spunem
c aceasta este o reacie specific (i deci metoda este selectiv). Cu alte cuvinte analiza nu
este influenat de concentraiile altor ioni aflai n aceeai soluie. Selectivitatea indic, prin
valoarea sa, interferena altor ioni (sau, mai general, a altor specii chimice). S notm cu y un
semnal dependent de concentraie i fie n numrul de componeni de analizat, fiecare
contribuind la cele n semnale diferite: y1, y2, ... , yn, printr-un sistem de ecuaii liniare de
forma:
y1 = 11C1 + 12C2 + ... + 1nCn
y2 = 21C1 + 22C2 + ... + 2nCn
...
yn = n1C1 + n2C2 + ... + nnCn
[48] SE este prescurtarea din a termenului standard error folosit n literatura de specialitate internaional.
12
Informaia analitic
Sensibilitatea
Dac nu exist interferene i singurul component de analizat are analiza bazat pe
funcia Y = f(c), unde Y reprezint semnalul analitic iar C, semnalul analitic, numit i funcie
de rspuns, aceasta este exemplificat n fig. 4 pentru o specie oarecare. Panta acestei curbe
indic chiar sensibilitatea, S:
Y
S=
C
La funciile liniare, de forma Y = a + bx, cea mai frecvent folosit mrime, n calitate
de sensibilitate a analizei, este chiar coeficientul b - panta curbei - adic: S = b.
n cazul existenei mai multor funcii liniare msurarea sensibilitii, Hn este chiar
determinantul corespunztor coeficienilor funciilor de rspuns (vezi sistemul de ecuaii
liniare precedent):
Hn = det(), unde matricea coeficienilor ij
Pentru analiza chimic instrumental trebuie gsite astfel de condiii experimentale
sau de prelucrare a datelor, ca elementele de pe diagonala principal s fie maxime iar restul
egale cu zero sau ct mai mici. Sistemul are n acest caz o sensibilitate i selectivitate mare.
Limita de detecie
Limita de detecie (Cd), reprezint coninutul minim, sigur detectabil. n general, se poate reda
sub forma funciei: Cd = f(0 + kdsfond). Valoarea coeficientului de discriminare kd se alege
din considerente practice una dintre valorile: kd = 2...6, 0 reprezentnd media zgomotului de
fond iar sfond simboliznd abaterea standard a semnalului de fond. n practic, din
considerente statistice, cea mai obinuit modalitate de exprimare este aceea cu kd = 3 (fig. 5).
Validarea
Pentru ca o metod analitic s poat fi utilizat pentru analiza unui poluant sau
component al mediului orice metod standardizat sau nou introdus trebuie supus
procesului de validare. Scopul acesteia este acela de a dovedi ca operaiunile succesive (sau
combinate) implicate n metodologia de msurare (analiz chimic) sunt adecvate inteniei
pentru care se execut analiza. De exemplu validarea verific dac nivelul de exactitate,
precizie sau ali parametrii relevani asociai unui rezultat servesc n mod real obiectivului
pentru care se face determinarea. Pe de o parte pentru c nu are rost sa se execute o
msurtoare cu un nivel de exactitate mai ridicat dect cea necesar, iar pe de cealalt parte
trebuie s alegem acea metod care asigur exactitatea necesar. n procesul de validare se
determin parametrii metodelor fiecare cu o semnificaie aparte. Semnificaia are de multe ori
alt sens dect cel atribuit noiunii respective n vorbirea curent.
14
Informaia analitic
Evidena analizelor
Activitatea de laborator este reflectat n registrele de analize. Acestea sunt registre,
cu pagini numerotate, n care se trec toate rezultatele analizelor efectuate i semntura
executantului sau a celui ce rspunde de analiza respectiv. n mod obligatoriu se
nregistreaz data i ora primirii probei, numele celui ce a efectuat analiza, rezultatul, data i
ora eliberrii buletinului de analiz. Caietele de laborator, folosite de fiecare co-participant la
execuia analizei chimice, conin, pe zile: msurtori, cntriri, calcule etc. se numeroteaz de
asemenea, pagin cu pagin, i se pstreaz n arhiv. Acelai sistem este valabil n cazul
monitorizrilor cu deosebirea ca datele nu se mai pstreaz doar pe hrtie ci i n memorii ale
calculatoarelor, n aa numitele baze de date, din care informaiile nu se pot terge niciodat.
Pentru a se putea verifica rezultatele analizelor, n caz de litigii ulterioare referitoare la
calitatea probelor ce fac obiectul analizei, fiecare laborator are obligaia de a lua o astfel de
cantitate de proba de analizat nct pentru analiz s nu se foloseasc dect cel mult un sfert
din cantitatea luat. De asemenea, are obligaia s pstreze restul probei un anumit timp (6
luni) astfel ca proba s nu-i modifice compoziia n acest timp. Probele este bine s fie
pstrate n vase speciale, nchise i care se deschid n vederea unei noi analize numai n
prezena tuturor prilor interesate. n cazul unor probe prelevate din mediu, concentraiile
coborte fac practic imposibil acest deziderat. Buletinul de analiz este actul prin care este
certificat compoziia sau calitatea oricrui material, primit pentru analiz de ctre un
laborator. Comunicarea telefonic grbete adesea transmiterea informaiei dar nu poate
constitui prob ntr-un eventual litigiu.
luarea probei medii pentru diferite materiale, de exemplu probe de sol, de aer de ap, nisip,
gru sau minereu.
n cazul n care nu s-au elaborat nc reete standard, fiind vorba de un produs nou,
analizele se fac pe baza unei norme interne stabilite de comun acord ntre productorul i
beneficiarul respectivei analize. Colecia de metode unanim acceptate formeaz un sistem de
standarde de analiz chimic i acestea sunt denumite diferit n funcie de ar. De exemplu,
ASTM n SUA, DIN n Germania iar n ultimul timp, pentru Comunitatea European,
standardele ISO.
Este foarte important stabilirea de standarde sau de referine pentru orice fel de
msurtoare. Astfel, standardul de baz n cazul msurrii unor proprieti fizice este o unitate
de msur foarte precis definit.
n chimie, standardul de baz poate fi o substan a crei puritate a fost verificat.
Deoarece standardele de baz nu sunt ntotdeauna accesibile, se recurge la comparaii cu
materialul de referin. Acestea sunt numite standarde secundare.
Este de menionat c cuvntul standard se mai folosete n chimie i n alt context.
Astfel, sunt stabilite standarde sau metodologii de execuie pentru analize chimice privind
coninutul de poluani admii n aer, de impuriti din alimente, din medicamente sau pentru
reziduurile de pesticide n produsele agricole. n acest caz, pentru un analist se pune problema
de a determina dac un produs a fost fabricat astfel nct s se ncadreze ntr-un anumit tip de
standard.
Standardele chimice sau substanele de referin au o contribuie major n succesul
unei metode analitice. Alegerea materialului de referin pentru etalonare determin calitatea
msurtorilor. Aceste substane sau materiale trebuie alese astfel nct s ndeplineasc
urmtoarele condiii: s fie accesibile i la un pre convenabil; s aib o puritate cunoscut de
cel puin 99%; s fie stabile n solventul utilizat; s fie stabile i ne-higroscopice; s participe
la reacii n proporii stoechiometrice; s posede o mas molecular mare. Numrul de
substane ce satisfac toate aceste cerine este limitat. Totui, pentru majoritatea metodelor
analitice este necesar un etalon chimic - standard de baz.
O substan care ndeplinete condiiile amintite anterior poate fi considerat un
standard primar. Cu ajutorul acesteia se pot apoi prepara standarde secundare, care nu
prezint aceleai caliti ca i standardul primar, ns realizeaz cerinele minimale pentru
determinrile pe care le efectum cu ajutorul lor.
n principiu, pentru o analiz cantitativ sau calitativ instrumental trebuie utilizai
reactivi de puritate analitic (pro analysis sau pentru analiz, prescurtat p.a.). Astfel de
reactivi sunt furnizai de regul de ntreprinderi specializate (de exemplu Merck n Germania
16
Informaia analitic
[49] A transvaza - a trece prin turnare (manual sau instrumental) un lichid dintr-un vas n altul.
[50] Bailey Nigel J. C., Cooper Paul, Hadfield Stephen T., Lenz Eva M., Lindon John C., Nicholson Jeremy K.,
Stanley Paul D., Wilson Ian D., Wright Brian, and Taylor Stephen D., Application of Directly Coupled
HPLC-NMR-MS/MS to the Identification of Metabolites of 5-Trifluoromethylpyridone (2-Hydroxy-5-
trifluoromethylpyridine) in Hydroponically Grown Plants, Journal of Agricultural and Food Chemistry, p.
42-46, Volume 48, Issue 1, January 17, 2000.
Chimie Analitic i Instrumental 17
1
Analiza cantitativ
Analiza cantitativ este bazat pe msurarea unei proprieti care este corelat direct
sau indirect, cu cantitatea de constituent ce trebuie determinat dintr-o prob. n mod ideal,
nici un constituent, n afar de cel cutat, nu ar trebui s contribuie la msurtoarea efectuat.
Din nefericire, o astfel se selectivitate este rareori ntlnit.
Pentru a proceda la o analiz cantitativ, trebuie urmate o serie de etape:
1. Obinerea unei probe semnificative prin metode statistice;
2. Prepararea probei;
3. Stabilirea procedeului analitic n funcie de:
Metode: (chimice; fizice cu sau fr pierderi de substan);
Condiii: (determinate de metoda de analiz aleas; determinate de substana cercetat);
Cerine: (rapiditate, exactitate, costuri; posibilitatea de amortizare);
18
Informaia analitic
Metode de separare
Adesea este necesar s se ndeprteze impuritile din prob nainte ca aceasta s fie
supus analizei. Procedeele folosite pentru acest lucru sunt cuprinse sub titlul general de
metode de separare. Metodele de separare se bazeaz pe fenomene fizice sau chimice i nu
totdeauna sunt asociate doar cu separarea impuritilor [51].
Separarea componenilor dintr-un amestec poate avea o importan att calitativ ct i
cantitativ, separarea poate fi util pentru purificare, pentru concentrarea unuia dintre
componeni sau a tuturor. O clasificare a metodelor de separare este dat n tabelul 4.
Sub aspect analitic, procedeele de separare sunt deosebit de importante, deoarece
metodele de analiz sunt selective i conduc la rezultate corecte numai dac n prealabil s-au
izolat constituenii probei [52]. Metodele de separare aplicate sistemelor chimice au ca scop
[51] Utille J.-P., Boutron P., Separation of Racemic from meso-2,3-Butanediol, Cryo, p. 398-402, 38(4), 1999.
[52] Oleinikova M., Muraviev D., Valiente M., Aqua-Impregnated Resins. 2. Separation of Polyvalent Metal
Ions on Iminodiacetic and Polyacrylic Resins Using Bis(2-ethylhexyl) Phosphoric and Bis(2-ethylhexyl)
Dithiophosphoric Acids as Organic Eluents, Anal. Chem., p. 4866-4873, Volume 71, Issue 21, 1999.
20
Informaia analitic
separarea sau mprirea unui amestec eterogen sau omogen n unitile sale individuale, n
grupuri, componente sau chiar n elemente [53].
ntrebri de verificare
1. Poate o metod imprecis s fie exact?
2. Care sunt principalele caracteristici ale unei metode de analiz instrumentale?
3. Ce "produs" final rezult dintr-un flux analitic?
4. Valoarea adevrat a compoziiei probei etalon este necesar n cazul determinrii
exactitii sau n cel al determinrii preciziei?
5. Ce denumire poart materialul supus unui proces analitic?
6. Care este produsul unui flux analitic?
7. Prin ce caracteristic a metodelor de analiz mbuntesc metodele de separare calitatea
rezultatelor analizelor?
8. Presupunnd c funcia de rspuns este liniar, ce parametru al dreptei este reprezentativ
[53] Ishii Y., Ryan A.J., Processing of Poly(2,6-dimethyl-1,4-phenylene ether) with Epoxy Resin. 1. Reaction-
Induced Phase Separation, Macromolecules, p. 158-166, 33(1), 2000.
Chimie Analitic i Instrumental 21
1
pentru sensibilitate?
9. Ce mrime intervine n calculul preciziei n afara valorii medii a determinrii analitice
respective?
10. Cum de poate defini limita de detecie a unei metode?
11. Ce denumire poart metoda de analiz care determin 1 g prob?
12. Indicai trei tipuri de metode de analiz chimic stoechiometrice!
13. Ce caracteristic a unei metode de analiz indic panta funciei de rspuns?
14. Dac media zgomotului de fond este ridicat, ce mrime caracteristic a unei metode de
analiz este afectat?
15. Cum se procedeaz cu excesul, rmas dup analiz, din proba primit de ctre un
laborator?
16. Ce reprezint o metod de analiz standardizat?
17. Ce nseamn reactiv p.a.?
18. Se poate face o analiz exact avnd la dispoziie doar un standard primar? Dar dac avem
doar o substan standard secundar fra un standard primar?
19. Ce deosebire exist ntre caietul de laborator i registrul de analize de laborator?
22
Proba pentru analiz
De cele mai multe ori, luarea unei probe, la o analiz fcut n laboratoarele didactice,
este urmat imediat de o cntrire sau o msurare a unui volum cu care se ncepe lucrul n
laborator. Trebuie s avem n vedere c practica din realitate este diferit. i anume,
msurarea probei constituie etapa cu care ncepe analiza n laborator dar originea
eantionului adus la laborator este alta - provenind din materialul de analizat. Pe de alt parte,
etapa cu care se ncepe analiza chimic din laboratorul de analiz instrumental rmne
msurarea probei. Deci, ncepem acest capitol cu atenionarea c:
Prelevarea probelor
Toate procedeele de analiz cantitativ includ cteva operaiuni de laborator comune.
Acestea sunt: luarea probelor, uscarea, cntrirea i dizolvarea [54]. Dizolvarea este singura
operaiune care nu este ntotdeauna necesar, deoarece exist unele metode instrumentale prin
care msurarea se face direct pe prob [55]. Orice analist experimentat execut aceste
operaiuni acordndu-le o atenie deosebit, deoarece este tiut c o pregtire adecvat pentru
msurare este la fel de important ca i msurarea n sine. O prob trebuie s fie
reprezentativ pentru toi componenii lundu-se n considerare i proporiile n care aceste
componente sunt incluse n materialul de analizat. Dac materialul este omogen, prelevarea
probei nu constituie o problem. Pentru materialele eterogene se impun msuri de precauie
speciale pentru a obine o prob reprezentativ. O prob de mrime potrivit pentru laborator
se poate alege ntmpltor sau se poate seleciona dup un plan elaborat n mod statistic, care
n mod teoretic, ofer fiecrui component din prob o ans egal de a fi decelat i analizat.
Exist instruciuni standardizate pentru o serie de materiale n ceea ce privete luarea
probei.
n ceea ce privete prelevarea probelor solide materiale frecvent eterogene -
principiul general, care va duce la o regul comun, este acela c proba medie trebuie s se
compun dintr-un numr ct mai mare de poriuni mici, luate din diferite locuri ale
[54] Ungurean Mihaela, Jntschi Lorentz, Desulfuration of Gases. Chemical Methods, Oradea University
Annals, Chemistry Fascicle, p. 19-24, VIII, 2001, ISSN 1224-7626.
[55] Ungurean Mihaela, Jntschi Lorentz, Dicu Delia, Desulfuration of Gases. Electrochemical Methods,
Oradea University Annals, Chemistry Fascicle, p. 25-30, VIII, 2001, ISSN 1224-7626.
Chimie Analitic i Instrumental 23
2
24
Proba pentru analiz
Fig. 1. Sond pentru luarea probei; Fig. 2. Luarea probelor din grmezi, camioane
(a) poziie nchis sau vagoane. Cifra de sus indic ordinea iar
(b) poziie deschis cea de jos, adncimea de la care se ia proba
I II
IV III
Fig. 3. Aspectul grmezii de material granulat sau pulbere, din Fig. 4. Ilustrarea metodei
profil, nainte de a se aplica reducerea prin metoda cuartrii cuartrii (vezi textul)
Fig. 5. Dispozitive de tiere pentru reducerea probei - zdrobitor, tietor transversal i paralel
aer
apa
[56] Mendes Adlio M. M., Costa Carlos A. V., and Rodrigues Alrio E., Analysis of Nonisobaric Steps in
Nonlinear Bicomponent Pressure Swing Adsorption Systems. Application to Air Separation, Industrial &
Engineering Chemistry Research, p. 138-145, Volume 39, Issue 1, January 4, 2000.
[57] Slawig T., Domain optimization of a multi-element airfoil using automatic differentiation, p. 225-237,
Advances in Engineering Software, Volume 32, Issue 3, 15 December, 2000.
[58] Davidson Gregg R., Use of SF6 to label drilling air in unsaturated, fractured rock studies: risk of over-
purging, p. 1361-1370, Applied Geochemistry, Volume 17, Issue 10, October, 2002.
[59] Liao Chung-Min, Chen Jein-Wen, Chen Jui-Sheng and Liang Huang-Min, A transfer function model to
describe odor causing VOCs transport in a ventilated airspace with mixing/adsorption heterogeneity, p.
1071-1087, Applied Mathematical Modelling, Volume 25, Issue 12, December, 2001.
26
Proba pentru analiz
eantion peste o coloan (tubuor) care conine suportul respectiv. Un astfel de exemplu este
prezentat n fig. 7 unde tubul (4x100mm), iniial nchis la cele dou capete (la flacr),
conine mai muli adsorbeni (1-4 din figura 7), fiecare destinat unui anumit compus.
1 2 3 4
De exemplu acestea pot fi diferite sortimente de crbune poros (activ), grafit, polimeri
organici poroi avnd fixate prin legturi chimice diferite funciuni precum i adsorbeni
mbibai cu soluii de reactivi sau chiar coninnd reactivi solizi. O pomp cu debit controlat
asigur aspirarea unui anumit volum. Dup nchiderea cu capace etane tubuorul din sticl
sau material plastic este transportat n laborator. Aici, compuii adsorbii sunt recuperai, fie
prin extracie ntr-un solvent (de preferat CS2) fie prin desorbie termic, simultan cu
splarea, realizat cu un gaz inert. Marele avantaj al ultimei metode este acela c proba nu se
dilueaz nainte de introducerea n analizor (gaz cromatograf). Totul se realizeaz prin
utilizarea unui mic cuptora, nclzit rapid la circa 300C, timp de cteva secunde. O
alternativ la soluia tehnic de mai sus s-a materializat n existena unor tubuoare pentru
retenie, de dimensiuni mici, care pot fi n ntregime introduse ntr-un injector cromatografic
modificat. n aceste cazuri, recuperarea compuilor se consider satisfctoare dac se face n
proporie de 60%. Acest tip de prelevare a probelor este specific igienei industriale i
controlului polurii mediului.
Ca exemplu reuit de prelevare a probelor pe suporturi solide putem da cazul
determinrii aldehidei formice din aer. Aceasta provine din degradarea rinilor
ureoformaldehidice. n contact cu reactivul 2-hidroximetilpiperidin aceasta conduce printr-o
reacie chimic la oxazolidine, combinaii stabile care pot fi ulterior desorbite i analizate.
Luarea probelor din atmosfer este o problem dificil. Diferii factori cum sunt
vntul, temperatura sau ploaia sunt variabili i greu de controlat.
Luarea probelor din lichide pure sau omogene este direct i n mod uzual, se poate
folosi orice dispozitiv sau vas care nu distruge puritatea sau omogenitatea. Prelevarea
probelor din amestecurile lichide eterogene ridic unele probleme mai dificile. Procedeul
ntrebuinat se selecioneaz n funcie de amestecul supus analizei, dac este o suspensie, o
emulsie, o mixtur de faze lichide nemiscibile sau un lichid coninnd reziduuri solide. Cnd
amestecul lichid este instabil (de exemplu o emulsie), dac conine componeni volatili, sau
dac conine gaze dizolvate, intervin dificulti suplimentare [60]. n general, cotele pri
(prile alicote) [61] sunt prelevate la ntmplare de la diferite adncimi i din toate locurile
din proba de lichid. Acestea pot fi analizate n mod separat sau pot fi combinate pentru a da o
prob cu compoziie, n mod static, reprezentativ pentru proba original. Amestecurile de
lichide nemiscibile sunt destul de frecvente n tehnic [62]. Cele mai cunoscute sunt
amestecurile de ulei + ap i benzine + ap. Acestea apar la deversrile de produse petroliere
accidentale care sunt evenimente foarte neplcute pentru ecosisteme. Pentru aceste amestecuri
separarea fazelor, msurarea raportului de amestecare i apoi analiza cantitativ a fraciilor
separate sunt metode uzuale n analiza instrumental a lichidelor.
Extracia lichid - lichid prin coloane cu suport solid este una dintre cele mai moderne
metode de prelevare a probelor lichide, de exemplu n cazul analizei unor poluani ai apelor.
Aceast metod, aprut relativ recent (uneori este denumit extracia lichid-solid), a
revoluionat o procedur de laborator mai veche - extracia cu solveni pentru separarea
analiilor din probele lichide. Este o metod binecunoscut de separare dar totodat de
concentrare a analitului. Este o tehnic folosit mai ales n cazul concentraiilor mici (cum
este i cazul poluanilor) i const n trecerea unui volum cunoscut de prob, lichid sau n
soluie, peste un cartu de extracie umplut cu adsorbent solid cu o compoziie care s
favorizeze reinerea unor anumite clase de compui. Situaia ntlnit cel mai frecvent este
prezentat n fig. 8 i parcurge 4 etape.
Se folosesc coloane n form de sering (denumite cartue de extracie) cu
dimensiunile de 5-10 cm care se supun, ntr-o prim, etap condiionrii adsorbentului prin
tratare cu reactivi potrivii (et.I fig. 8). Apoi, n etapa II se toarn prin cartu soluia cu proba
de analizat care, infiltrndu-se lent prin coloan, permite reinerea (extracia) selectiv a
compusului sau compuilor de analizat (de exemplu pesticidele dintr-o ap). Urmeaz
splarea compuilor nedorii, rmai nereinui n interstiiile coloanei (III). n final (etapa IV)
are loc dizolvarea i totodat concentrarea ntr-un volum mic a analitului prin turnarea peste
coloan, n mai multe poriuni mici, a unui solvent care dizolv substanele de analizat
reinute, realiznd totodat i o concentrare a acestora.
[60] Wassenaar L.I. and Koehler G., An On-Line Technique for the Determination of the 18O and 17O of
Gaseous and Dissolved Oxygen, Anal.Chem., p. 4965-4968, 71(21), 1999.
[61] alicot adjectiv feminin, termen matematic, din francezul aliquote; parte alicot = parte a unui tot,
coninut n el de un anumit numr ntreg de ori; alicuante adjectiv, feminin, termen matematic, din
francezul aliquante; parte alicuant = parte care nu intr de un numr exact de ori ntr-un tot;
[62] Lu H., Matsumoto T., Gratzl M., Fine Chemical Manipulations of Microscopic Liquid Samples. 2.
Consuming and Nonconsuming Schemes, Anal.Chem., p. 4896-4902, 71(21), 1999.
28
Proba pentru analiz
I II III IV
Fig. 8. Principiul reteniei selective a analitului pe coloane prin extracie; se observ fixarea
selectiv a analitului, n timp ce impuritile nu sunt reinute
Dup ce proba a fost uscat, urmeaz de obicei cntrirea. Pentru aceasta se folosesc
balane. Balanele sunt instrumente de msurare a masei; sunt de mai multe tipuri: balane
tehnice (cu precizie de ordinul gramelor, folosite pentru cntriri de substane a cror mas
depete 1 kg), balane farmaceutice (cu precizie de la 1 la 10 mg, folosite pentru cntriri de
substane a cror mas depete 100g), balane analitice (cu precizie de 0,1 mg, folosite
pentru cntriri de substane a cror mas este sub 100g), balane electronice (permit
nregistrarea variaiilor de mas n timp) [63].
Dup cntrirea probei, urmtoarea etap este dizolvarea. Dac proba este solubil n
ap, nu exist probleme de dizolvare, dei cteodat proba poate s hidrolizeze lent n ap,
formnd compui insolubili. Materialele organice sunt n mod obinuit dizolvate de solveni
organici sau n mixturi de solveni organici i ap. Exist ns o varietate de procedee chimice
i instrumentale care necesit un solvent de compoziie anumit. n alte cazuri nu mei este
necesar etapa dizolvrii. Astfel, dac proba este excitat n arc sau n scnteie i este
analizat energia radiant rezultat atunci se poate utiliza n mod direct o prob lichid sau
solid. Dac se cere s fie analizat partea organic a amestecului din proba prelevat, atunci
trebuie utilizai pentru dizolvare solveni organici i tehnologii specifice chimiei organice.
Pentru probele anorganice, cazul cel mai frecvent n industrie, proba se dizolv ntr-un acid
sau se topete cu un fondant. Dac se utilizeaz acizi, este important s se cunoasc
proprietile chimice ale probei, dac este nevoie de acid oxidant sau neoxidant, dac
procedeul aplicat trebuie s respecte restricii legate de tipul anionului din soluie, i dac
dup dizolvare trebuie s se elimine sau nu excesul de acid.
Situaii specifice: H2SO4 nu trebuie utilizat pentru probe ce conin Ba (BaSO4 pp. alb
insolubil); HCl nu trebuie utilizat pentru probe cu Ag sau sruri de Ag (AgCl pp. insolubil).
Selecionarea anumiilor acizi pentru a putea fi utilizai la dizolvare se realizeaz n
funcie de proprietile lor chimice, dac sunt oxidani sau neoxidani. Acizii neoxidani
folosii sunt HCl, H2SO4 diluat i HClO4 diluat. Acizii oxidani sunt: HNO3, H2SO4 fierbinte
concentrat i HClO4 fierbinte concentrat.
Cele mai puternice condiii de oxidare se obin la utilizarea HClO4 fierbinte i
concentrat, care dizolv toate metalele obinuite. Acesta este periculos datorit exploziilor pe
care le poate provoca. Adeseori se obin avantaje din utilizarea unor combinaii de acizi. Cel
mai familiar este apa regal (1:3 HNO3:HCl) n care HNO3 este un oxidant, iar HCl are
proprieti de complexare i furnizeaz aciditate puternic. De reinut:
solubilitatea multor ioni metalici este meninut numai n prezena agenilor de complexare
[63] Jntschi Lorentz, Chira Ioan Ovidiu, Caiet de Lucrri practice de Chimia i Biochimia Poluanilor, U.T.
Press, Cluj-Napoca, 113 p., 2000, ISBN 973-9471-46-3.
30
Proba pentru analiz
32
Proba pentru analiz
Tabelul 2. Principalii analii din apele supuse monitorizrii i tipul metodei utilizate curent
Analit Tipul metodei
Ioni metalici Absorbie atomic
Cationi i anioni Cromatografie ionic
Ioni metalici, NH4+, NO2-, NO3- , SiO2 Colorimetrie sau metode chimice
Metale, P, S Spectrometrie de emisie, analiz
prin activare, fluorescen X
Pesticide, substane cu P, S, ioni Metode cromatografice (de gaze sau
metalici n soluii lichide)
TOC (cont. total de carbon) i deficit Spectrometrie IR sau metode
de oxigen chimice
pH Electrozi ion selectivi
Potenial redox (rH) Electrozi redox
Monitorizarea aerului
Multe din principiile analizelor de aer se regsesc n cazul analizelor de ap. Locul de
poziionare a punctului de prelevare trebuie de asemenea s in cont de reglementrile locale
i de posibilitile de intervenie, respectiv de lucrrile de ntreinere. n cazul aerului,
rezultatele mai depind de direcia i viteza vntului, de gradientul vertical de temperatur, de
topografia locului, de turbulena sau precipitaiile prezente.
Studiile preliminare pentru formarea unei idei despre factorii ce trebuie avui n vedere
sunt cel mai bine realizate pe staii mobile, iar prin monitorizare se realizeaz modele
matematice pe baza crora se determin numrul optim de poziii ale staiilor de monitorizare.
Poziia intrrii aerului n analizor trebuie s fie de aproximativ 3m de la sol respectiv 3m de
orice structur excluzndu-se orice zone cu aer imobil (de ex. cele din vecintatea unui zid
nalt).
Cel mai important considerent n luarea probelor de aer este tipul de poluant
monitorizat. Pentru aer cele mai importante analize includ: dioxidul de sulf (SO2), dioxidul de
carbon (CO2), monoxidul i dioxidul de azot (NO, NO2), hidrogenul sulfurat (H2S), ozonul
(O3), particulele n suspensie, acidul fluorhidric (HF) i hidrocarburile. Toate acestea sunt
accesibile unor msurtori fizice n vederea monitorizrii. n tabelul 3 se prezint sintetic
cteva dintre metodele preferate.
ntrebri de verificare
1. Cu ce se preleveaz probele solide?
2. Ce instrument (aparat) servete n laborator pentru msurarea probelor solide la nceperea
unei analize chimice?
3. n cazul probelor solide trebuie uneori luate precauii suplementare pentru ca acestea sa
fie reprezentative. Despre ce fel de probe este vorba?
4. Care dintre urmtoarele substane se folosete ca solvent n condiii supracritice: SO2,
CO2, H2O?
5. n ce const metoda cuartrii?
6. n ce caz este util extracia lichid-lichid pe coloane cu suport solid?
7. Care este prima etap n utilizarea cartuelor de extracie pe suport solid?
8. Ce sunt discurile de extracie?
9. Ce exemplu de prob lichid eterogen apare frecvent n poluarea mediului?
10. Care este cea mai preferat metod de prelevare a probelor de poluani ai aerului?
11. Ce metod se prefer n cazul unor poluani aflai n concentraii coborte n probe lichide
(ape)?
12. Numii trei tipuri de balane folosite la cntrirea probelor n laborator?
13. Ce metod instrumental se prefer n cazul analizei pesticidelor din ape?
14. Ce etap elimin influena asupra rezultatului analizei a coninutului variabil de ap din
probele solide?
15. Ce parametrii importani trebuie menionai n cazul lurii probelor de aer?
16. De ce parametru important trebuie inut cont n cazul probelor solide?
17. Dai dou exemple de fondani uzuali i dou de fondani folosii n ultimul timp!
18. Ce se nelege prin dezagregarea unei probe n vederea unei analize?
19. De ce este periculos acidul percloric n calitate de reactiv pentru dezagregare?
20. La ce distan maxim fa de monitor trebuie s se afle gura pentru luarea probei de ap
din mediu?
21. Care este metoda preferat n cazul polurii cu metale att n cazul apelor ct i n cazul
aerului?
22. Ce metod este preferat pentru determinare NO, NO2, O3 n cazul monitorizrii polurii
aerului?
23. Ce dispozitive se prefer pentru luarea probelor de poluani ai aerului?
34
Metode chimice de analiz - interferene cu analizele instrumentale
Chimia ...este una dintre cele mai cuprinztoare ramuri ale tiinei,
pentru simplul motiv c atunci cnd ne gndim la ea, totul este chimie.
Luciano Caglioti, The two faces of Chemistry, MIT Press, Massachusetts, 1985
Metode de precipitare
Procesul de precipitare este cunoscut de foarte mult timp ca un procedeu folosit pentru
separare. Separarea prin precipitare se bazeaz pe diferenele ntre stabilitile
precipitatelor, n anumite condiii experimentale [64].
Nu toate reaciile de precipitare sunt cantitative. De exemplu Pb(II) poate fi precipitat
sub form de PbCl2, la rece deoarece reacia cu este practic total. Creterea temperaturii face
s creasc foarte mult solubilitatea PbCl2. Adeseori sunt precipitate, filtrate i astfel separate
grupe de ioni metalici. Un exemplu clasic este separarea ionilor metalici bazat pe
solubilitatea sulfurilor (tabelul 1).
[64] Kekedy L., Chimie Analitic Calitativ, Ed. Scrisul Romnesc, Craiova, 1970.
Chimie Analitic i Instrumental 35
3
n alte cazuri, scopul principal al precipitrii este purificarea. n orice caz, procedeele
de analiz gravimetric i cele de separare prin precipitare sunt similare.
Gravimetria este o metod de analiz cantitativ bazat pe msurarea masei unui
precipitat. Toate msurtorile pentru determinarea masei sunt efectuate n acest caz cu balana
analitic. O analiz gravimetric se realizeaz printr-o serie de etape experimentale: se
cntrete exact proba ce trebuie analizat; se dizolv proba cntrit; printr-un procedeu
adecvat se nltur speciile ce pot interfera n metoda aleas; se ajusteaz condiiile
experimentale: pH, stare de oxidare, concentraie; se adaug agentul de precipitare adecvat
(organic sau anorganic); precipitarea se face n soluii diluate la cald; se separ precipitatul
prin filtrare; se spal precipitatul; se usuc, calcineaz i aduce la mas constant precipitatul;
se calculeaz constituentul analizat din prob bazat pe stoechiometrie.
Cteva exemple de reacii cu formare de precipitate sunt:
Ba2+ + SO42- BaSO4 (pentru determinarea sulfatului),
Ag+ + Cl- AgCl (pentru analiza argintului sau clorurii),
Ca2+ + C2O42- CaC2O4 (pentru determinarea calciului).
Gama reaciilor folosite este foarte diferit i de aici denumirea de metod chimic care se d
gravimetriei. De exemplu, se pot folosi reactivi care reduc specia chimic solubil la un
element pur - insolubil. Astfel, clorhidratul de hidroxilamin (NH2OHHCl) se poate folosi
pentru reducerea Au, Se, Te la precipitate metalice din combinaii solubile ale acestora.
Gravimetria
n gravimetrie analiza chimic se bazeaz pe cntrirea exact a unei substane solide,
pure, provenite din analit, folosind procedee specifice. Este vorba, n primul rnd, de
36
Metode chimice de analiz - interferene cu analizele instrumentale
separarea prin precipitare a unui ion aflat ntr-o soluie rezultat din prob sau, mai rar, de
ndeprtarea prin volatilizare a unei specii chimice devenite gaz la nclzire n tehnica
denumit gaz-gravimetrie.
Analiza gravimetric ncepe, ca orice analiz chimic cantitativ, cu cntrirea la
balana analitic (fig. 2) a unei mase de prob - solid sau lichid - care se supune mai nti
unor transformri chimice. Dup realizarea solubilizrii sau dezagregrii probei, n
gravimetrie specia chimic analizat se izoleaz, de regul, printr-o operaie numit
precipitare. Evident, substana precipitat trebuie s fie una foarte greu solubil astfel nct n
soluia rmas (denumit soluie mum) s nu mai rmn dect o cantitate infim din
aceasta. Cantitatea rmas n soluie trebuie s fie sub limita de sensibilitate a balanei
analitice, deci o cantitate att de mic nct s nu mai poat fi sesizat de ctre balan i care,
n consecin, nu modific rezultatul. Apoi, precipitatul se separ prin filtrare, urmat
obligatoriu de o splare. Se obine, n final, compusul precipitat pur care, dup uscare sau
uscare i calcinare, se cntrete.
Degajarea de gaze este de asemenea folosit gravimetric. Se nregistreaz pierderea
de mas a probei prin volatilizarea unei pri din prob.
Dintre metodele care au la baz ndeprtarea unei combinaii la nclzire, amintim
reacia de volatilizare a silicei cu acid fluorhidric (reacia se execut ntr-un creuzet de platin
sub ni):
SiO2(s) + 4HF(l) SiF4(g) + 2H2O(l) (pentru analiza siliciului)
Reaciile folosite n gravimetrie trebuie s ndeplineasc cteva condiii:
S fie, n anumite condiii, cantitative,
S rezulte combinaii bine definite,
S aib loc cu vitez suficient de mare,
Produsele reaciilor trebuie s fie uor filtrabile i s nu se redizolve n urma splrii.
Dup filtrare i splare, se ndeprteaz apa prin uscare la etuv i, de regul, urmeaz
o calcinare n cuptor - proces prin care compoziia chimic se poate modifica.
Un exemplu simplu de analiz gravimetric l constituie determinarea ferului. Etape:
1. Se aduc prin calcinare creuzetele la pondere constant (2-3 probe paralele).
2. Se oxideaz soluia coninnd fer, provenit din solubilizarea unei mase de prob
cunoscute, utiliznd oxidani potrivii: (Fe2+ Fe3+)
3. Se precipit hidroxidul de fer, Fe(OH)3 care se filtreaz i se spal.
4. Se calcineaz precipitatul ntr-un creuzet (rezult Fe2O3).
5. Se cntrete suma creuzet + Fe2O3.
6. Se calculeaz coninutul de Fe din prob din masa probei i masa de precipitat pur obinut.
Chimie Analitic i Instrumental 37
3
Dac notm cu M(Fe2O3) masa unui mol de oxid de fer (III) i cu M(Fe) masa atomic a
ferului avem (v. fig. 1) corespondenele:
M(Fe2O3) .................... 2M(Fe)
mppt .................... x
x = mppt*2M(Fe)/M(Fe2O3) f = 2M(Fe)/M(Fe2O3)
Metodele gravimetrice sunt dificile i consumatoare de timp. ns, dac sunt executate
de personal calificat, sunt cele mai exacte metode de analiz chimic cunoscute. Etaloanele
materialelor folosite n analizele instrumentale sunt analizate prin astfel de procedee.
n rezumat, succesiunea de operaii din cadrul analizelor gravimetrice este urmtoarea:
cntrirea probei i dezagregarea; precipitarea; filtrarea; splarea precipitatului; uscarea;
calcinarea; cntrirea; calculul.
38
Metode chimice de analiz - interferene cu analizele instrumentale
Balana analitic
Instrumentul de msur utilizat pe larg n gravimetrie este balana analitic (fig. 2).
Aceasta are o sensibilitate ridicat, care permite determinarea masei cu un numr mare de
cifre semnificative (3-5 cifre). Puine instrumente fizice permit o astfel de performan. De
asemenea permite msurarea precis a maselor cu o eroare 210-4g. De aceea, balana
analitic se consider, inima laboratorului de analize chimice. Fiind un instrument exact i
precis, balana necesit n cadrul laboratorului analitic instrumental un plasament privilegiat,
ntr-o ncpere fr circulaie, fr variaii mari de temperatur i pe un suport ferit de
vibraii. Balanele moderne au ncorporate greutile care le menin exactitatea pe perioade
mari de timp. Periodic toate balanele au nevoie de verificare i atestare metrologic. Acestea
se fac prin comparaie cu setul de greuti etalon existente n cadrul reelei naionale a
serviciilor de metrologie.
Scal
Scala afiat Raz transparent Lampa
Sistemului
optic
Greutate
ncorporat
Contragreutate
Atenuator de
oscilaii
Talerul
balanei Cuit/suport
etalon sintetice, solide, folosite pentru comparaie n diversele instrumente analitice care vor
face obiectul urmtoarelor capitole.
Aproape toate procesele chimice care au loc n natur, fie c este vorba de organismele animale fie de cele
vegetale, sau de poriunea lipsit de via a pmntului..., au loc ntre substane aflate n soluie
Wilhelm Ostwald (1853-1932), Chimist german
Volumetria
n volumetrie, denumit i analiz volumetric sau titrimetrie, concentraia analitului
din prob se determin msurnd precis volumul de reactiv consumat - reactiv aflat sub form
de soluie. Operaia de msurare a volumului se numete titrare.
Titrarea este operaia de adugare treptat, n poriuni mici,
utiliznd o biuret (Figura 3), a reactivului pn la terminarea reaciei,
cnd se atinge aa-numita echivalen, adic reactivul cu care se
titreaz este n cantitate echivalent cu analitul din prob. Reactivii
folosii sunt soluii diluate a cror concentraie se exprim molar sau
normal, de exemplu: 0,1molL-1 (sau 0,1M) respectiv 0,1eL-1 (sau
0,1N). n vederea utilizrii analitice, soluiei i se determin (sau
calculeaz) titrul, notat T - adic masa, exprimat n grame, coninut
ntr-un mililitru. Fig. 3. Biuret
Evident, reacia care are loc este una precis cunoscut i este cantitativ, iar
concentraia reactivului (titrul) este de asemenea stabilit cu exactitate, nainte de efectuarea
analizei. Reactivul utilizat poart i numele de titrant i se prepar fie cntrind la balana
analitic o substan denumit etalon primar (care se aduce la un volum cunoscut), fie
stabilindu-se coninutul exact al acestuia printr-o titrare fa de un alt etalon primar. n acest
ultim caz vorbim de un etalon secundar.
Punctul n care s-a consumat tot analitul se numete punct de echivalen. Calculul se
face cunoscnd masa de prob, volumul de reactiv consumat pn la punctul de echivalen i
stoechiometria reaciei. Ca i la metoda gravimetric, pentru a se mri viteza de calcul, se
calculeaz n prealabil, pe baze stoechiometrice, un factor volumetric care nmulit cu
volumul de echivalen d direct masa analitului.
Stabilirea punctului de echivalen se realizeaz i cu ajutorul indicatorilor. Exist
dou tipuri de indicatori: vizuali (tabelul 2) i instrumentali. Indicatorii vizuali pot fi chiar
reactivii - dac sunt intens colorai (cazul KMnO4) - care-i modific prin reacie culoarea,
sau sunt reactivi de culoare, adugai n cantiti mici, care interacioneaz cu excesul de
titrant imediat dup echivalen. Acetia sunt foarte diferii n funcie de reacia utilizat i
40
Metode chimice de analiz - interferene cu analizele instrumentale
Reaciile chimice
Reaciile chimice pe care se bazeaz titrimetria trebuie s fie echilibre chimice, practic
total deplasate spre dreapta. Aceste echilibre trebuie s se stabileasc rapid, deci vitezele de
reacie trebuie s fie mari. Reaciile consacrate n volumetrie, care ndeplinesc condiiile
amintite, sunt cele din categoria echilibrelor ionice
Reacii acid-baz (ambele tari) : H+ + OH- H2O;
Reacii redox: Ox1 + Red2 Red1 + Ox2;
Reacii de complexare: M + nL MLn
unde cu Ox i Red s-au notat formele oxidate i reduse ale partenerilor redox iar cu M i L
s-au notat ionul metalic, respectiv ligandul.
n general constantele de echilibru ale acestor reacii trebuie s fie mai mari de 106.
Reaciile de precipitare se utilizeaz, dar destul de rar. Cele care se aplic sunt cele care duc la
precipitate cu produse de solubilitate mai mici de 10-10.
Etaloane primare i secundare n volumetrie
Aa cum am amintit, pentru prepararea reactivilor folosii n titrri se utilizeaz
substane etalon, primare sau secundare. Primele - etaloanele primare (denumite i substane
standard, titrimetrice sau de referin) sunt reactivi activi din punct de vedere chimic, extrem
de puri, stabili i care au o mas molecular ridicat. Din aceste substane, prin simpl
cntrire urmat de dizolvare i aducerea la un volum cunoscut, se obin soluii cu titru
cunoscut, care pot fi utilizate ca atare n analizele volumetrice. Exemple de astfel de substane
sunt: carbonatul de potasiu (K2CO3), acidul oxalic, H2C2O42H2O, pentru titrrile acido-
bazice, iodatul acid de potasiu, KH(IO3)2, permanganatul de potasiu, KMnO4, iodul, I2,
sulfatul fero-amoniacal, Fe(NH4)2(SO4)212H2O), pentru titrrile redox i complexonul III,
respectiv acetatul de zinc, pentru cele complexometrice.
Etaloanele secundare sunt tot substane pure, reactive i totodat ieftine dar, pentru c
nu sunt stabile n contact cu atmosfera (absorb ap fiind higroscopice, pierd ap de cristalizare
etc.), titrul soluiilor acestora se stabilete pe baza unor etaloane primare. Acestea sunt de
multe ori preferate n cazul analizelor n serie. Dintre etaloanele secundare cele mai folosite
amintim: NaOH, KOH, HCl, H2SO4, tiosulfatul de sodiu (Na2S2O35H2O).
Etapele analizei volumetrice
n majoritatea cazurilor metodele volumetrice parcurg urmtoarele etape:
1. Prepararea reactivilor.
2. Cntrirea probei, dezagregarea i aducerea la balon cotat a soluiei limpezi.
3. Pipetarea unei cote-pri (de exemplu 1/10 din coninutul balonului cotat) i tratarea
fizico-chimic n laborator.
4. Titrarea n prezena unui indicator.
5. Calculul.
Se remarc, dac comparm cu etapele metodei gravimetrice, c sunt mai puine
etape. Metoda este mult mai rapid, mai ieftin dar mai puin exact. De multe ori cele dou
metode se aplic simultan pe aceeai prob - un component se determin gravimetric iar altul
volumetric - n filtratul rezultat dup precipitare.
Calculul n volumetrie
Calculul analitului se realizeaz pe baza volumului de echivalen. Pentru o mai bun
nelegere vom prezenta calculul n dou etape: (1) calculul masei de analit din proba titrat i
[68] aq = soluie apoas; alc = soluie alcoolic; alq = soluie echivolumetric alcool+ap;
42
Metode chimice de analiz - interferene cu analizele instrumentale
(2) calculul concentraiei de analit din proba supus analizei. n instruciunile standardizate de
analiz chimic se prezint doar o singur formul care nglobeaz ambele etape ale
calculului.
Pentru nceput s prezentm factorul, notat F, utilizat adeseori n formulele de calcul.
Acesta a fost introdus deoarece reactivii volumetrici ntlnii n practic nu sunt de
normalitate exact (sau de factor 1) - aa cum am dori s-i preparm. Astfel, n loc s obinem
o soluie exact 0.1N de NaOH obinem, de exemplu, o soluie 0.115N adic o soluie
aproximativ normal (cu factorul 1.15). Trecerea volumului, V, msurat ntr-o titrare
executat cu o soluie aproximativ normal, ntr-un volum teoretic, Vt, de soluie exact
normal (0.1 N n exemplul de mai sus) se realizeaz cu ajutorul factorului F. Astfel, dac
inem cont c ambele volume conin aceeai mas de reactiv de titrare, mr:
mr = VTr = VtTt; Vt = VTr/Tt = VF (8)
unde Tr este titrul soluiei n realitate (real) iar Tt - titrul teoretic al soluiei exact normale. De
aici putem exprima volumul Vt:
Deci,
factorul nmulit cu volumul de titrare transform acest volum ntr-un volum de normalitate exact
asemenea la aceasta, dar numai n apele poluate sau lipsite de aeraie i ntr-o msur foarte
mic. Contribuia major la alcalinitate o are bicarbonatul. Alcalinitatea adus de ionii
carbonat, CO32-, i hidroxid, OH-, poate deveni important doar atunci cnd activitatea algelor
din ape este ridicat sau n apele industriale.
De alcalinitate trebuie s se in cont n toate procesele de tratare a apelor potabile sau
reziduale. Aceasta acioneaz ca tampon de pH n coagulare sau n procesele de dedurizare cu
var i sod.
Dup modul de evaluare a alcalinitii distingem: alcalinitatea fa de fenolftalein i
alcalinitatea total. Ambele se determin prin titrare cu un acid tare pn la virajul
indicatorului sau cu ajutorul unui pH-metru.
Alcalinitatea fa de fenolftalein se determin prin titrarea apei cu acid sulfuric pn
la pH-ul de viraj al indicatorului fenolftalein (8.3) marcnd tot hidroxidul i jumtate din
carbonatul prezent, ceea ce se poate simboliza: OH- + 1/2CO32-
Alcalinitatea total se poate msura pn la pH-uri diferite (5.1; 4.8; 4.5 sau 3.7) n
funcie de coninutul de dioxid de carbon prezent. Aceasta reflect ntreaga alcalinitate dat de
hidroxid, carbonat plus bicarbonat: OH- + CO32- + HCO3-.
Valoarea de pH pn la care se face determinarea este urmtoarea:
30 mgL-1 CO2 - pH = 5.1
150 mgL-1 CO2 - pH = 4.8
150 mgL-1 CO2 - pH = 4.5
n cazul prezenei silicailor i fosfailor - pH = 4.5
Reziduuri industriale sau sisteme complexe - pH = 3.7
Reactivul folosit n titrare este soluia diluat de acid sulfuric. Una din reaciile care au
loc este:
OH- + H2SO4 = 2H2O + SO42-
care se termin la pH = 10. Dac se lucreaz n prezena indicatorului fenolftalein (iniial
roz) care se decoloreaz la pH = 8.3 mai are loc i o parte (1/2) din reacia:
2CO32- + H2SO4 = 2HCO3- + SO42-
Continund titrarea pn la pH = 4.5 are loc conversia total a carbonatului dar i a
tuturor ionilor bicarbonat existeni n acea ap, la acid carbonic:
2HCO3- + H2SO4 = 2H2CO3 + SO42-
Indicatorul uzual folosit n acest caz este metilorange-ul (viraj galben rou).
Deoarece culorile sunt apropiate n spectru i pot fi mai greu sesizate vizual se folosete, mai
recent, albastru de brom-fenol (albastrugalben) sau rou metil n amestec cu verde de brom-
crezol, ale cror culori se modific cu pH-ul , dup cum urmeaz:
44
Metode chimice de analiz - interferene cu analizele instrumentale
ntrebri de verificare
1. Ce se nelege prin metod absolut de analiz chimic?
2. Ce este gravimetria? Ce instrument important folosete aceast metod?
3. n gravimetrie specia chimic se separ (izoleaz) de regul prin
4. Ce condiii trebuie s ndeplineasc reaciile folosite n gravimetrie?
5. Ce exemple de reacii de precipitare cunoatei?
6. Ce este factorul gravimetric?
7. Cum se calculeaz factorul gravimetric n cazul determinrii ferului sub form de Fe2O3?
8. Care sunt etapele analizei gravimetrice?
9. Care sunt etapele analizei volumetrice?
10. Ce este titrul real i ce este titrul teoretic?
11. Unde se amplaseaz o balan analitic n cadrul unui laborator?
12. Care sunt principalele reacii chimice utilizate n volumetrie?
13. Ce sunt etaloanele primare i secundare?
14. Ce se nelege prin factorul unei soluii i care este scopul utilizrii acestuia?
Metode electrochimice
Generaliti
O reacie redox provocat prin efectele curentului electric, ce are loc de regul prin
intermediul unui electrod, ntr-o incint numit celul electrochimic, poart numele de
reacie electrochimic. Electrochimia, n general, implic folosirea unor reacii redox ce pot fi
realizate pe suprafaa electrodului cu ajutorul electricitii sau pot fi utilizate pentru
producerea electricitii pe seama substanelor de analizat. Aceasta este originea denumirii
metodelor de analiz din acest grup. Parametrii metodelor electrochimice - bazate pe astfel de
reacii - sunt legai de cei ai legii lui Ohm: U = IR dar totodat i de parametrii electrolizei.
Astfel, metodele electrochimice msoar una dintre mrimile: potenialul de electrod, ;
intensitatea curentului prin celul, I; cantitatea de electricitate scurs prin celul, Q = It;
rezistena, R (sau conductana, 1/R) soluiei din celul; timpul de desfurare a procesului de
electrod, t.
Oricare ar fi parametrul msurat, acesta poate fi corelat cu concentraia speciilor
chimice din proba supus analizei. Studiul acestor corelaii a condus la clasificarea metodelor
de analiz electrochimice n metode: poteniometrice (care msoar potenialul unui anumit
electrod, ), amperometrice (msoar I), coulometrice (msoar Q = It) i metode
conductometrice (care msoar rezistena, R, respectiv conductana, 1/R). O singur metod
electrochimic msoar masa depus la unul din electrozi: electrogravimetria, iar altele
timpul: cronoamperometria i cronopoteniometria. Unele dintre metode, care msoar tot
curentul ns n condiii de tensiune variabil liniar, se denumesc voltamperometrice. Un caz
particular al acesteia, care msoar curentul datorat polarizrii suprafeei unui electrod, poart
numele de polarografie. O alt tehnic, care msoar curentul simultan cu modificarea ciclic
a potenialului n timp, poart numele de voltametrie ciclic. Aceasta este cea mai utilizat
metod n ultimul timp, pentru studiul reaciilor chimice redox n soluie, fie a proceselor ce
au loc pe un anumit electrod.
Toate metodele utilizeaz n procesul de msurare doi sau trei electrozi scufundai n
electrolitul celulei, care funcioneaz cu sau fr diafragm. Doi electrozi pot fi identici, de
exemplu n conductometrie sau n metodele difereniale sau diferii, n marea majoritate a
metodelor. n acest caz, unul dintre electrozi, cel pe care se produce reacia, este considerat
electrodul de msur (sau de lucru), iar cellalt electrodul de referin. Se mai utilizeaz i
un al treilea, electrodul auxiliar, doar n cteva metode, dac este necesar.
Titrrile electrochimice utilizeaz msurtorile unor parametri electrochimici pentru
gsirea punctului de echivalen dintr-o analiz volumetric. Se folosete un parametru
furnizat de ctre electrozii indicatori, sensibili la una din speciile chimice implicate n titrare,
fie din titrant, fie din titrat. Msurtoarea propriu-zis este n acest caz volumul - electrozii
servind doar pentru indicarea, respectiv gsirea volumului de reactiv ce a reacionat cantitativ
cu analitul din prob.
Metode poteniometrice
n cadrul acestor metode, se determin potenialul electric la curent nul (fora
electromotoare), E, ce apare spontan, ntre doi electrozi reversibili, unul fiind electrod de
msur, caracterizat prin potenialul acestuia, m i cellalt de referin (r). Acetia se afl
scufundai n soluia supus analizei chimice. Perechea amintit formeaz un ansamblu
denumit celul electrochimic care are potenialul:
E = |m - r|
Uneori se interpun ntre electrozi i diafragme (nite corpuri poroase subiri, udate de
electrolit) care mpiedic ptrunderea unor ioni nedorii dintr-o semicelul ntr-alta. La aceste
metode curentul ce parcurge celula este practic nul i de aceea uneori se specific acest lucru
iar denumirea utilizat este i poteniometrie la curent nul.
Se cunosc dou metode principale: poteniometria direct i titrrile poteniometrice.
Poteniometria direct este mult folosit n practic ntruct semnalul se preteaz la o
prelucrare automat sau la o nregistrare continu. n aceast variant se nregistreaz n
prealabil o curb (sau grafic), n coordonate: potenial de electrod - concentraie a speciei de
analizat, i apoi, ntr-o a doua etap, se msoar potenialul de electrod din soluia supus
analizei. Din curba nregistrat se obine, fie grafic, fie analitic, concentraia necunoscut.
Aceast a doua etap n care se execut msurtoarea propriu-zis, din pcate, nu poate dura
mult timp (pentru c suprafaa nu este stabil) fiind necesar, de obicei zilnic, o nou
recalibrare a electrodului.
Titrrile poteniometrice, mai utilizate n laboratoare datorit simplitii, preului de
cost sczut, preciziei i a exactitii lor, sunt metode preferate n analize chimice, datorit
durabilitii electrozilor, a varietii reaciilor pentru care se pot aplica precum i datorit
posibilitilor de automatizare. Acestea sunt, n esen msurtori de volume, momentul citirii
volumului de titrant fiind indicat de electrodul de msur. Celula const, n ambele cazuri, din
48
Metode electrochimice
paharul (vasul) de titrare plus ansamblul format de cei doi electrozi i soluie, electrozii fiind
legai la un milivoltmetru aa cum se observ n fig. 1.
RT [ Ox ]
Ox + ze- Red, = 0 + ln
zF [ Red ]
V V
50
Metode electrochimice
Electrozii de gaz fac parte, n principiu tot din electrozii de spea I-a. ntre acetia un
loc cu totul aparte l ocup electrodul de hidrogen: (Pt)H2 | H+, (redat n fig. 3), cu echilibrul
pe electrod:
RT a (H 2 )
H+(aq) + e- 1/2 H2(g) (1 atm ), = 0 + ln
F p( H 2 )
n acest caz hidrogenul molecular este dizolvat fizic ntr-un metal nobil Pt (sau Pd). Rolul
platinei este dublu, de conductor inert i de catalizator. Electrodul propriu-zis este o plac din
Pt (sau Pd) de 0.4-0.5mm, cu suprafaa de 1cm2 legat printr-un fir tot din Pt (Pd) fixat ntr-un
tub de sticl. Pe plac se depune electrolitic Pt (platin poroas - neagr) din soluia de acid
hexacloroplatinic, H2[PtCl6], timp de 1-2 minute, la o densitate de curent de 50-100mAcm-2.
[69] condiii standard - T = 298K, activitatea ionilor activi 1 echiv./L, respectiv presiunea parial a speciilor
gazoase 1 atm.
Chimie Analitic i Instrumental 51
4
Fig. 4. Electrodul de sticl: simbolurile (1) i (2) reprezint, respectiv: (1)- specia H+ de pe o
parte a membranei (interiorul electrodului) iar (2)- aceeai specie n soluia de determinat.
52
Metode electrochimice
(2)
RT a H+
H+(1) H+(2), = const. + ln (1)
F a H+
soluia apoas intern, cu compoziie fix, n care se gsete introdus un electrod de referin
oarecare, care preia semnalul sau chiar un contact direct (fig. 6).
Dac ntre electrozii de lucru i de referin exist un curent impus, nu foarte mare
(de civa microamperi), are loc o modificare a concentraiei speciei active, din cauza
electrolizei. Titrarea se numete cu electrod polarizat. n fig. 7-stnga, se prezint curbele de
titrare pentru un curent +i , i = 0 i -i, toate obinute cu acelai electrod. Cele trei curbe nu
difer n mod esenial. Se observ c saltul se produce nainte de echivalen, pentru curba
trasat n condiiile -i i dup acesta la cea cu curentul opus: +i.
Folosindu-se doi electrozi indicatori identici dar polarizai n sens contrar (unul
parcurs de un curent +i i altul de unul -i) prin reprezentarea diferenei de potenial (fig. 7-
dreapta) aprute aceti electrozi, n funcie de volumul de titrant V, se obine o curb de titrare
al crui vrf indic punctul de echivalen. Metoda se numete titrare cu doi electrozi
polarizai, dar aceasta are un singur dezavantaj, anume necesit nregistrarea semnalului n
mod continuu deoarece, fiind foarte ascuit, vrful se poate pierde.
Conductometrie
Conducia curentului prin soluii
Metoda se bazeaz pe fenomenul de conducie a curentului electric manifestat de
electrolii (care sunt conductori de ordinul doi) i pe faptul c fiecare ion contribuie n mod
independent la conducia total (analog cu dou rezistene n paralel). Ca i n cazul metalelor,
conducia respect ntru totul legea lui Ohm conform creia intensitatea curentului, I, este
54
Metode electrochimice
Msurarea conductivitii
Msurarea rezistenei (i implicit a conductivitii) se face prin msurtori electrice.
Iniial s-a lucrat cu curent continuu, dar tot Kohlrausch (1876) a propus utilizarea n acest
scop a curentului alternativ, pentru c cel continuu ducea la o abatere mai mare a rezultatelor
(fcnd metoda inexact) din cauza fenomenelor de la electrozi ce modificau curentul
(fenomene denumite polarizri).
Primele msurtori s-au realizat cu montaje n punte Wheatstone (vezi fig. 9), unde cu
s-a notat celula a crei conductan (sau rezisten) urmeaz a se determina, iar R este o
rezisten variabil ntr-un circuit de curent alternativ. Azi se lucreaz cu surse la care
frecvena inversrii sensului curentului este mare (de circa 1000 - 2000 de ori pe secund)
astfel nct polarizarea practic dispare, iar msurarea rezistenei se face tot prin metoda
compensaiei.
Fig. 9. Montaj n punte Wheatstone Fig. 10. Cteva tipuri comune de celule utilizate n
pentru msurarea conductanelor conductometrie
Apoi are loc o scdere uoar dup care aceasta crete paralel cu (1). Dac acidul este
foarte slab, cum este cazul acidului boric sau a fenolului, nu se mai poate observa poriunea
iniial de scdere a conductanei, curba de titrare fiind asemntoare cu (3) din fig. 11. Dac
ns titrarea se execut cu o baz slab, uneori intersecia este mai net din cauz c dup
echivalen baza nu mai contribuie practic la conductan, obinndu-se o dreapt orizontal.
Metoda se poate aplica i pentru sruri ca acetatul de sodiu cu un acid tare din motive
lesne de neles - ionul acetat este de fapt o baz. Prin conductometrie se mai pot indica i
titrri bazate pe reacii de precipitare (de ex. NaCl cu AgNO3). n acest caz, la nceput se
obine o dreapt orizontal deoarece conductana precipitatului AgCl este practic nul, iar
ionul clorur din soluie se nlocuiete, pe parcursul titrrii, cu ionul azotat care practic
conduce la fel. La sfrit conductana va crete pentru c ambii ioni din excesul de AgNO3
contribuie la conducie.
58
Metode electrochimice
Printre avantajele titrrii conductometrice trebuie amintit faptul c se pot utiliza soluii
diluate, amestecuri de acizi i baze i c se pot chiar analiza soluii colorate. Nu este necesar
msurarea conductivitii (i nici etalonarea celulei) ci se msoar rezistena care se reprezint
grafic n funcie de volumul de titrare. Totui pentru c reaciile sunt exoterme i
msurtorile sunt sensibile la variaiile de temperatur se recomand termostatarea vasului
de titrare.
Coulometria
Se cunosc dou categorii de metode ce intr n aceast clas i anume coulometria la
potenial controlat (denumit i coulometrie poteniostatic) i coulometria la curent
controlat (sau amperostatic). Ambele metode au la baz legea lui Faraday i ambele necesit
un circuit cu trei electrozi, redat schematic n fig. 12, adic cu un electrod de lucru (EL), un
electrod auxiliar (EA) i un electrod de referin (ER) - de regul un electrod de argint/clorur
de argint.
Fig. 14. Aspectul semnalului n coulometria Fig. 15. Ilustrarea micorrii duratei
la potenial controlat analizei
O celul bine aleas maximizeaz valoarea p prin utilizarea unui electrod cu o arie
mare, a unei celule cu volum mic i cu un coeficient de transfer masic ridicat obinut printr-o
agitare eficient a soluiei. Cu valori p maxime se obin durate de analiz minime, la aceeai
arie de sub curbe (fig. 15). Calculul propriu-zis const n aplicarea legii lui Faraday i anume:
Nr.moli = Q/(zF)
unde Q = It reprezint numrul de Coulombi trecui iar z numrul de electroni schimbai n
procesul de electrod. Q este aria de sub curba I = f(t) care este proporional cu concentraia
speciei de analizat. De regul coulometrele moderne execut i integrarea ariei de sub curb.
Msurtoarea se oprete cnd I < 0,1I0 unde I0 este curentul rezidual, adic curentul msurat
n absena analitului. Analiza sistemelor multicomponente se poate realiza cnd E1/2 >
200mV, unde E1/2 este potenialul de semiund. Se schimb pur i simplu potenialul
electrodului la noua valoare i se ncepe o nou msurtoare. n principiu:
metoda nu are nevoie de etalon primar fiind o metod absolut, una dintre puinele metode
cunoscute pn n prezent n afara metodelor chimice - gravimetria i volumetria;
n condiii optime, limita de detecie poate fi i mai cobort - pn la 10-8 mol/l
60
Metode electrochimice
De exemplu, o soluie de iodur, I- este un precursor pentru iod, (I2) utilizat adeseori
pentru titrri iodometrice iar apa oxigenat, H2O2 un precursor pentru ionul OH- din titrrile
acido-bazice. Se utilizeaz un electrolit de baz, iar oxigenul este ndeprtat prin barbotare de
azot, mai ales dac se face apel la o reacie de reducere. Se utilizeaz n acest caz electrozi de
dimensiuni reduse din platin att pentru EL ct i pentru EA iar EA se plaseaz ntr-o incint
separat, printr-o frit, de soluia de analizat. Se aplic un curent fix un timp cunoscut n
soluii agitate pn la virajul unui indicator. Curentul este din domeniul 10A-100mA.
concentraia substanei de analizat. Curbele se mai numesc curbe polarografice iar acest salt
se denumete und polarografic avnd aspectul din fig. 16.
Curba se obine cu un aparat denumit polarograf (fig. 17) ce const din urmtoarele
pri principale:
surs de potenial variabil pe domeniul +0.4-2.5V;
un microampermetru nregistrator sensibil: 10-4-10-9A;
electrodul pictor (o capilar din sticl cu diametru 0.05-0.1mm) i un rezervor de mercur
la care se leag capilara prin intermediul unui tub flexibil i transparent (fig. 18);
electrodul de referin (cu suprafa mare).
nregistrarea polarogramei duce de regul la mai multe unde caracterizate fiecare
printr-un potenial de semiund E1/2 - o caracteristic calitativ legat direct de valoarea
potenialului standard a reaciei redox ce are loc pe electrodul picurtor i o nlime a undei
(v. fig. 16) - o caracteristic cantitativ legat direct de concentraia speciei de analizat. Dup
cum se poate remarca din fig. 16, diagrama curent - potenial tipic polarografiei, prezint i
nite oscilaii corespunztoare picturilor de mercur care picur dintr-o capilar. Unind
maximele curenilor corespunztori fiecreia dintre picturi, rezult o curb tot n form de S.
Curentul limit, atins n poriunea superioar a curbei amintite, a fost denumit i curent de
difuziune, din cauz c aici difuziunea are un rol principal la fluxul de material electroactiv n
acele puncte ale vieii picturilor.
Mercur, Hg
Electrod de
referin
I (A) Azot, N2
h2
Soluia cu
A
ionii de
analizat
h1
U
E12/ 2 Mercur, Hg
E11 / 2 E (V)
Fig. 16. Una polarografic Fig. 17. Schema unui polarograf
Pe schema din fig. 18 se observ sursa de potenial variabil redat prin cursorul C, ce
se deplaseaz pe firul AB, ampermetrul A i rezistenele n serie, RS, respectiv n paralel, RP,
ce servesc aducerii n scar a curentului precum i cei doi electrozi, cel pictor, de pe care se
62
Metode electrochimice
desprind periodic picturi, i cel nepolarizabil, format din mercurul de pe fundul paharului,
legate prin contacte n circuit.
n ultimul timp tehnica a mai fost combinat i cu polarografia cu und ptrat, care a
asigurat o reversibilitate i mai bun a metodei. Anume, scderea tensiunii are loc n trepte,
analog cu modalitatea de cretere a tensiunii n polarografia cu und ptrat. n mod cu totul
similar are loc i msurarea curentului.
Fig. 23. Aspectul evoluiei potenialului Fig. 24. Forma semnalului analitic n cadrul
electrodului de lucru n cadrul determinrii Zn i Cd prin voltametrie de
voltametriei de redizolvare anodic redizolvare anodic
ntrebri de verificare
1. Care este ecuaia care red factorii de care depinde potenialul de electrod?
2. Ce electrozi de referin cunoatei?
3. Ce tip de electrod, dintre cele 4 tipuri cunoscute, este electrodul de argint - clorur de
argint?
4. Din ce categorie de electrozi face parte electrodul de sticl?
5. Care electrod se folosete, n caz de litigiu, pentru evaluarea pH-ului?
6. De ce tip este un electrod de platin scufundat ntr-un amestec de ioni Ti4+, Ti3+?
7. Ce form are curba de titrare poteniometric?
8. Ce unitate se utilizeaz pentru exprimarea conductanei?
9. n ce tehnic se utilizeaz electrodul picurtor de mercur?
10. Cum se numete semnalul analitic n polarografie i ce caracteristici are?
11. Prin ce se deosebete voltametria ciclic de polarografie?
12. Ce mrimi fizice se nregistreaz n coulometrie?
13. Ce reprezint ecuaia lui Ilcovi?
66
Metode optice de analiz
tiina nu are patrie
Louis Pasteur (1822-1895), Chimist i biolog francez
Generaliti
Metodele optice de analiz utilizeaz ca mijloc de excitare a substanelor (respectiv
atomilor componeni ai moleculelor) radiaia electromagnetic, n vederea obinerii de
informaii privind fie natura constituenilor fie cantitatea acestora.
Se tie c radiaia electromagnetic este o forma a materiei specific, cu proprieti
att de und ct i de particul (comportament dual). Componentele - electric i magnetic -
oscileaz perpendicular una pe alta dar i pe direcia de propagare. Caracteristicile cantitative
ale luminii sunt: lungimea de und a oscilaiei (), frecvena () legat de lungimea de und
prin: = c/ unde c este viteza luminii, amplitudinea (A), unghiul de polarizare.
Orice raz de lumin este asociat unui flux de fotoni, fiecare foton avnd energia E i
masa de micare (masa de micare este totdeauna mai mare dect masa de repaus, mult mai
bine cunoscut din mecanica clasic) m:
E = h = hc/ = hc = mc2 (1)
Adeseori se folosete n locul frecvenei () numrul de und ( ).
Fasciculele de electroni i neutroni se supun acelorai legi ca i fotonii, dar masele
particulelor fiind mai mari, lungimile de und sunt mult mai mici.
Intensitatea undei electromagnetice, I, este definit ca energia ce trece prin unitatea de
suprafa transversal la und i este legat de amplitudinea, A, prin ecuaia:
I = A2c/8 (2)
Interaciunea cu materia a diferitelor radiaii, pe diversele sale domenii spectrale, a
constituit o surs bogat de informaii privind proprietile i compoziia chimic a
materialelor dar i ale mediului ambiant.
O mare parte din informaiile cantitative pe care le deinem la ora actual privind
structura atomilor, moleculelor sau materialelor au fost obinute prin excitarea substanei cu o
anumit form de energie electromagnetic - deci prin metodele spectrale (optice).
Similar metodelor electrochimice (unde substanelor li se aplic din exterior energie
electric), metodele optice se bazeaz pe acelai principiu n care energia electric este
nlocuit de cea luminoas [71].
De exemplu, radiaia infraroie posed o energie potrivit pentru a face atomii
[71] metode optice se consider cele care lucreaz n domeniul UV, vizibil i IR iar tehnicile care aplic tot
principii optice dar n alte domenii (X, etc.) se consider metode spectrale.
Chimie Analitic i Instrumental 67
5
moleculelor din aer s intre n vibraie. Cednd energie, lumina infraroie scade n intensitate.
Energia nu dispare ci se transform n energie termic - form de energie ce maximizeaz
entropia i spre care tinde orice sistem. Pe de alt parte, lumina ultraviolet (UV), anume cea
cu lungimi de und sub 200nm, are o energie potrivit pentru a excita electronii din atomii
componeni ai moleculelor (covalente) din substanele aflate n stare gazoas n aer. Molecula
excitat are un timp de via scurt, ~10-8s. Dup acest interval, aceasta revine la starea
fundamental, n care a existat iniial, emind (cednd) la rndul ei energie, dar de aceast
dat n toate direciile. Aceasta este radiaia difuzat (mprtiat). Anumite molecule, ca
dioxidul de sulf de exemplu, nu revin direct n starea fundamental deorece au nivele
intermediare. Acestea, cnd revin din starea intermediar la starea fundamental, moleculele
emit lumin n o alt lungime de und fa de cea primit, n general mai srac n energie
(deci de lungime de und mai mare, vezi eq. 1). Spunem n acest caz c s-a emis o radiaie de
fluorescen. Aadar n domeniul UV moleculele din aer absorb lumin din cauza salturilor
electronilor din atomi pe nivele energetice mai nalte i fa de alte domenii ale energiilor
luminoase, substanele pot fi transparente domeniului UV.
Urmtorul exemplu este similar comportrii radiaiei luminoase. S presupunem c
mergem pe biciclet pe o osea neted. Drumul are asperiti dar noi nu le simim pentru c,
denivelrile fiind mult mai mici fa de diamentrul roilor, nu interacioneaz cu acestea. Dac
coborm o vale i apoi urcm o pant uoar, o neregularitate cu raza de curbur mult mai
mare dect diametrul roilor, de asemenea nu ne face s simim mare lucru. Dac ajungem cu
bicicleta pe un drum cu denivelri de ordin de mrime apropiat de raza roilor, bicicleta
ncepe s vibreze, i s piard din viteza de naintare (deci din energie). Cnd ajungem pe o
poriune cu gropi mari, de 10-20cm nu mai putem nainta practic ntreaga energie imprimat
bicicletei fiind pierdut. n cazul energiei radiaiei electromagnetice transmise substanelor, o
oscilaie de o anumit dimensiune este absorbit de atomii, respectiv electronii legturilor
chimice din molecule indic faptul c n interiorul acestora exist acelai ordin de mrime al
tranziiilor energetice. Cnd energia radiaiei trece practic nereinut (transparen), nseamn
c energiile puse n joc n molecula respectiv au cu totul alte ordine de mrime.
Lumina (sau radiaia electromagnetic) se transmite doar n buci, numite cuante de
energie (definite de eq.1).
Domeniul de lungimi de und fiind foarte larg, radiaia electromagnetic (i implicit
cuantele de energie asociate) este foarte diferit. Dac ar fi s facem o comparaie ntre
energiile radiaiilor IR i X, de exemplu, prima este ca un bulgre de vat aruncat cu mna iar
a doua este, fa de prima, ca un obuz tras dintr-un tun. De aceea, pentru orice legtur
chimic sau pentru orice energii implicate n moleculele substanelor exist un domeniu de
68
Metode optice de analiz
energii (ale undelor electromagnetice) n care acestea vor interaciona cu substana respectiv.
n funcie de natura interaciunii radiaiei cu substana, metodele optice de analiz se
pot clasifica n:
Bazate pe absorbie,
Bazate pe emisia radiaiei electromagnetice,
Bazate de absorbia urmat de emisie, dintre care: fluorescen, fosforescen i
luminescen;
Bazate pe difracie,
Bazate pe refracie (refractometrie) i interferen (interferometrie),
Bazate pe polarizare (polarimetria),
Bazate pe difuzie,
i metode ce combin principiile de mai sus.
n funcie de lungimea de und radiaiile se clasific aa cum se regsete n Tabelul 1.
ntrebri de verificare
1. Ce este o cuant de energie?
2. Ce devine, n cele din urm, orice energie furnizat materiei?
3. Pe ce interval de lungimi de und se gsete domeniul de radiaii vizibile?
4. Cnd nu poate o radiaie interaciona cu materia, trecnd practic neabsorbit prin aceasta?
5. Ce sunt razele Rntgen?
6. n ce secol a aprut spectrometria de emisie?
7. Ce tranziii au loc n domeniile vizibil i UV?
8. Ce fel de tranziii au loc n cazul apariiei unui spectru IR?
9. Care radiaii au energie mai ridicat, razele X sau cele ?
10. Din ce domeniu spectral face parte metoda care se bazeaz pe modificri ale strii de
rotaie a spinului electronic?
70
Spectrometria de absorbie n UV-VIS
Principii generale
Una dintre primele metode instrumentale aprute i utilizate frecvent n practica
laboratoarelor de analize chimice din zilele noastre este metoda bazat pe absorbia luminii
din domeniul vizibil (domeniu notat n literatura internaionala VIS). Se cunosc mai multe
variante importante pentru aceast metod: colorimetria, fotometria i spectrofotometria.
Colorimetria, una dintre tehnicile extrem de mult utilizate n practica analitic,
reprezint varianta n care intensitatea culorii probei [72] se compar vizual sau instrumental,
n lumin alb, cu un set de soluii etalon - preparate n condiii absolut identice cu proba.
Aceasta este o metod subiectiv i mai puin selectiv, pentru c rezultatele depind mult de
persoana care execut analiza. Se remarc faptul c sensibilitatea maxim a ochiului omenesc
atinge maximul pentru domeniul 550-560nm (domeniul culorii verzi), lucru important cnd
compararea probei cu etalonul se face vizual. n aceast tehnic se pot realiza msurtori, prin
comparaie vizual, chiar n eprubet la lumina zilei, rezultnd analize chimice cu exactiti
mai slabe dect 1%. Cu ct exist mai multe soluii etalon, pentru comparaie, cu att metoda
este mai exact. Exist, dup cum am amintit i metode colorimetrice instrumentale,
obiective, dar acestea sunt tot mai puin folosite. n schimb se folosesc aparate ieftine care
utilizeaz metode colorimetrice bazate pe reacii executate pe hrtie de filtru, pe substane
aflate n stare adsorbit pe suporturi granulare - n cazul gazelor - i chiar pe reacii de culoare
n soluii.
Fotometria i spectrofotometria msoar instrumental lumina transmis de o soluie
colorat [73] lucrnd cu o surs de lumin monocromatic. Cnd lumina incident este
filtrat, prin filtre optice, avnd un spectru mai larg, avem de a face cu o fotometrie iar cnd
domeniul filtrat este mai ngust (utiliznd monocromatoare) vorbim de spectrofotometrie. n
ultima variant, este posibil fixarea mai precis a lungimii de und la care se lucreaz. Cu
ambele variante se poate chiar trasa un spectru de absorbie, adic o curb, obinut prin
msurarea semnalului n funcie de lungimea de und a radiaiei incidente. n literatura de
specialitate uneori se folosete pentru ambele metode i denumirea de metod colorimetric
(sau chiar spectrocolorimetric), ceea ce uneori poate crea confuzii. n domeniul UV, ochiul
omenesc nepercepnd lumina, se utilizeaz doar spectrofotometria. ntruct principiile sunt
identice iar aparatele sunt n multe privine similare n cele dou domenii, n ultimul timp, n
afar de aparatele dedicate domeniului VIS sau a celor pentru UV, de multe ori se utilizeaz
un singur instrument pentru ambele intervale de lungimi de und, ceea ce a dus la denumirea
din titlu. Construcia instrumentelor are n general dou variante anume spectrofotometrele
monocanal, cu un singur drum optic i cele comparative, prevzute cu dou canale. n
spectrometrele comparative printr-o singur msurtoare, proba etalon cu cea de analizat se
compar utiliznd dou radiaii care-i au originea n aceeai surs (coerente).
Schematic, un spectrometru de absorbie este redat n figura 1:
solvent + solut
I0 I
D
b
P L F
L
S
Legend: S - sursa de radiaie; P - monocromator (prism); L - lentil; F - fant; D - detector
Fig. 1. Spectrofotometru de absorbie: principiul metodei
Se observ (fig. 1) c radiaia incident, monocromatic, realizat cu ajutorul
monocromatorului P, trece prin cuveta cu prob (ce conine solvent i solut), unde
intensitatea I0 scade fa de situaia n care n locul probei de analizat se pune o aa-numit
prob martor (sau prob oarb) - o prob de referin de concentraie zero. Apoi fascicolul
cade pe detectorul D, unde semnalul optic este transformat n semnal electric. Semnalul
rezultat, dup o amplificare, poate fi n final msurat i nregistrat. nregistrat nu mai
nseamn astzi ntotdeauna preluarea semnalului cu un nregistrator ci mai degrab
introducerea acestuia n memoria unui calculator urmnd de regul prelucrarea automat a
datelor. Materialele din care se confecioneaz diferitele pri componente ale
spectrofotometrelor sunt prezentate n tabelul 1.
Tabelul 1. Componentele unui spectrofotometru de absorbie n vizibil i n ultraviolet
Domeniu
Surs (lamp, bec) Monocromator (prisma) Cuv Detector
spectral
UV cu H sau D cuar/NaCl ( mic), reea dens cuar celul fotoelectric
VIS filament: W sticl/cuar, reea medie sticl/cuar / fotomultiplicator
Se poate remarca faptul c detectorii sunt identici iar cuva de cuar permite lucrul n ambele
domenii. Doar sursele difer. Prin nglobarea ambelor surse - lampa cu deuteriu i cea cu
wolfram - n acelai instrument, funcionnd consecutiv, s-a reuit realizarea
spectrofotometrelor UV-VIS.
72
Spectrometria de absorbie n UV-VIS
k .b
I0 .e
0
0 k .b 5
Fig. 2. Forma exponenial a legii Lambert-Beer
Introducnd absorbana [74], A, n ecuaia precedent, legea Lambert-Beer mai poate
fi scris:
A = kb (5)
unde A este absorbana, k - coeficientul de absorbie iar b - lungimea parcurs de lumin prin
mediul colorat adic lungimea celulei.
[74] Unele lucrri mai vechi utilizeaz i termenul de densitate optic, n locul absorbanei i aceasta se noteaz
cu D (din l. francez: densit optique).
Chimie Analitic i Instrumental 73
6
Spectre de absorbie
Spectrele de absorbie reprezint dependena semnalului de lungimea de und, .
Exist mai multe variante de prezentare dar cea mai utilizat este varianta reprezentrii
absorbanei n funcie de lungimea de und: A = f(). Celelalte variante, mai puin utilizate -
numite toate spectre de absorbie - sunt T = f(), log A = f(), = f() sau log = f().
Ultimele dou servesc n special pentru caracterizarea speciilor moleculare.
Fiecare substan are un spectru de absorbie caracteristic, ca form general, ca
domeniu spectral, ca numr de maxime (denumite picuri) precum i ca raporturi ntre
intensitile diverselor picuri. Caracteristicile unui spectru sunt redate pe fig. 3. Poziia picului
este caracterizat de valoarea sa maxim, max . Se numete maxim de absorbie att vrful ca
atare ct i lungimea de und care corespunde maximului. Pot exista unul sau mai multe
maxime de absorbie. Numrul de maxime precum i forma general a curbei, reprezint
caracteristica calitativ dup care se pot identifica substanele. De exemplu, n fig. 4 se afl
spectrul de absorbie n UV al benzenului, aflat n soluie. Maximele acestuia sunt
inconfundabile i acesta poate servi, la nevoie, pentru identificarea sau analiza benzenului din
soluii.
74
Spectrometria de absorbie n UV-VIS
A
4
Amax max
3.8
lo g ()
3.6
3.4
200 210 220 230
x (nm )
A1.2
6
C5
A51
C4
A0.8
4
C3
A0.6
3
C2
A0.4
2
C1
A0.2
1
A00
= max
0 0.4 0.8 1.2 1.6 2
A6
A5
A
4
A3
AX
A2
CX
A
1
A
0
C0 C1 C2 C3 C4 C5 C6
76
Spectrometria de absorbie n UV-VIS
Frecven
P Q R ...
6
5
4
3 +1
2
1
0
...
... ... ... 6
5
Transmisie
4
3
2
1
0
Legend: 0, 1, 2, ... - reprezint nivele de rotaie; , +1 - reprezint nivele de vibraie; Ramura P conine
toate tranziiile cu J = -1: P(J) = S(+1,J-1)-S(,J) = - 2BJ; Ramura R conine toate tranziiile cu J =
+1: R(J) = S(+1,J+1)-S(,J) = + 2BJ; Ramura Q conine toate tranziiile cu J = 0: Q(J) = S(+1,J)-
S(,J) = ; Ramura Q este permis doar pentru tranziii electronice n unele molecule diatomice (ex. NO)
i molecule poliatomice neliniare.
Fig. 6. Diagram energetic corespunznd variantelor tranziiilor de rotaie, vibraie i
electronice posibile pentru o molecul dat
Tabelul 2. Cteva dintre cele mai intense grupri cromofore caracteristice moleculelor
covalente coninnd azot:lungimea de und a absorbanei maxime i coeficientul de extrincie
Denumirea Amin Oxim Nitro Azotit
Cromoforul -NH2 =N-OH -NO2 -O-NO
max (nm) 195 190 210 230
max (Lmol-1cm-1) 3000 5000 3000 1500
Cnd nu este posibil analiza unor specii chimice, direct, din cauza lipsei culorii
acestora, se pot provoca reacii care dau compui colorai, prin apariia unor grupri
cromofore, pe baza crora se pot analiza anumite substane n prezena altora, realizndu-se
78
Spectrometria de absorbie n UV-VIS
pH=7
pH=6
pH=5
Fig. 7. Aspectul punctului izobestic n cazul unui indicator acid-bazic
Punctul izobestic, sau de egal absorban (fig. 7) este punctul de intersecie a unei
familii de curbe de absorbie ale aceleiai substane, n condiii fizice sau de mediu diferite (de
exemplu la mai multe valori ale pH-uri diferite) i semnaleaz existena a dou specii chimice
diferite, aflate n echilibru chimic una cu cealalt - indiferent de tipul reaciei chimice ce are
loc. Numrul de puncte izobestice reprezint numrul de specii chimice, aflate n echilibru
ntre ele, fiecare absorbind lumina la lungimi de und diferite. Lungimea de und izobestic
este valoarea pentru care coeficientul molar de extincie, , este egal pentru ambele
componente i fie M, respectiv N, aceste componente. Algebric, acest lucru se reflecta n
expresia absorbanei la lungimea de und respectiv ():
A() = ()([M] + [N])b,
unde b este lungimea celulei; cum concentraia lor global este aceeai, fiind dat de suma:
C = [M] + [N] = const.,
absorbana la punctul izobestic (), va fi:
A() = ()bC,
adic tot o constant.
Instrumentaia
Aa cum s-a artat, orice spectrofotometru reprezint o reuniune de 4 pri
componente distincte: (1) sursa, (2)sistemul dispersiv sau monocromatorul, (3) detectorul i
(4) nregistratorul. Ultimul, poate fi un simplu dispozitiv de citire a rezultatului nregistrarea
Sursele luminoase cele mai obinuite utilizate n domeniul UV-VIS, sunt lampa cu
incandescen prevzut de obicei cu filament incandescent de W - deosebindu-se de becurile
electrice obinuite prin aceea c zona de ieire a radiaiei este confecionat din sticl de cuar
- i lampa cu deuteriu prevzut cu arc de descrcare n deuteriu, aflat la o presiune medie
(ceea ce asigur un spectru continuu). O astfel de lamp, a crui punct de descrcare este zona
cenuie din interiorul cutiei mari (fig. 8) permite obinerea unui spectru continuu pe domeniul
160-400nm, care se completeaz foarte bine cu spectrul becului cu incandescen (fig. 9). Un
spectrometru prevzut cu ambele surse, poate acoperi tot domeniul UV-VIS (fig. 9). Razele
de lumin trec prin aer, dar mai nou dirijarea acestora se face i prin fibre optice.
Sistemul dispersiv sau monocromatorul poate fi, n vizibil, un filtru colorat din sticl
sau material plastic transparent dar i un filtru cu interferen, iar n UV-VIS o prism
confecionat din cuar sau, n ultimul timp, sisteme bazate pe reele plane sau concave cu
circa 1200 trsturi per mm. Aceste reele sunt integrate n monocromatoare care permit
extragerea unei zone nguste din spectrul UV-VIS.
Limea domeniului spectral care trece prin monocromator depinde mult de limea
fantelor de intrare i ieire. Cele mai bune rezoluii se obin prin utilizarea unor oglinzi
prevzute cu distane focale mari (0.2-0.5m).
Detectorul transform semnalul luminos n semnal electric. Acest dispozitiv d aadar
un semnal proporional cu intensitatea care iese din celula de msur. Intensitatea semnalului
recepionat va depinde de lungimea de und - deci de lungimea de und selecionat prin
poziia oglinzii - dar i prin deschiderea fantelor de intrare, respectiv de ieire, din
monocromator. Acestea din urm, limiteaz domeniul spectral dar i intensitatea luminii, n
80
Spectrometria de absorbie n UV-VIS
Spectrometrele monocanal, a cror schem bloc este prezentat n fig. 10, sunt cele
mai utilizate n aplicaiile de rutin. De regul n calea razei incidente se plaseaz succesiv
proba martor sau de referin (care conine solventul plus eventual reactivii necesari pentru
analiz) i proba de analizat. Pentru a se compensa i variaiile sursei luminoase se utilizeaz,
la instrumentele ceva mai sofisticate, sisteme split-beam bazate, de exemplu, pe o oglind
semitransparent.
n sistemele cu dispozitive split-beam, raza care iese din monocromator este desprit
n dou i una dintre aceste raze cade pe un detector care preia fondul (de exemplu, o
fotodiod), iar cealalt, dup ce trece prin prob (respectiv prin proba martor), cade pe un al
doilea detector. Semnalul final rezult prin diferena dintre semnalele date de cele dou
detectoare i prelucrat pentru a se msura (sau nregistra) direct absorbana. Pe figura alturat
se poate observa funcionarea alternativ a lmpii pentru domeniul vizibil (VIS) cu cea pentru
domeniul UV.
Spectrometrele bazate pe comparaie (cu dublu canal) sunt cele mai performante
spectrofotometre cunoscute. n acestea, dup desprirea razei incidente, monocromatice n
dou fascicule, una dintre acestea traverseaz proba iar alta, simultan sau secvenial,
traverseaz celula de referin care conine proba martor. Se cunosc cel puin dou variante de
astfel de montaje. n una dintre acestea (fig. 11), montajul folosete pentru desprirea
fascicolului metoda amintit anterior, n cazul spectrometrelor monocanal - oglinda
semitransparent - iar detectoarele (dou fotodiode) sunt montate n opoziie. Avantajul
const n faptul c rspunsul detectorului este meninut constant, n funcie de , prin reglarea
automat a intensitii de intrare n monocromator (printr-un mecanism de feed-back).
Celul de
msur
Surs Monocromator
Detector
Oglind semitransparent
sau chopper
Oglind Celul de
referin
Fig. 11. Schema de principiu a spectrofotometrului cu dublu fascicol prevzut cu oglind
semitransparent i fotodiode
Spectrometria fotoacustic
O variant indirect a spectrometriei de absorbie nu msoar intensitatea luminii
absorbite de ctre prob ci schimbarea strii termice a acesteia n urma procesului de
absorbie. n fond este tot o msurtoare indirect a intensitii luminii absorbite, cu singura
deosebire c mrimea msurat nu este una optic.
Modificarea ce are loc n prob nu este doar termic, ci termodinamic, adic sunt
implicai toi parametrii legai de temperatur, de exemplu, presiunea sau densitatea probei.
Metodele fotoacustice fac apel tocmai la modificrile de presiune sau de densitate ale probei
ca urmare a absorbiei luminii. De aceea nu are importan dac gazul, lichidul sau solidul
supus msurtorii provoac o modificare a direciei luminii din drumul optic, de exemplu
conine neomogeniti sau particule opace (fum, cea, pulberi n suspensie etc.), precizia
metodei rmnnd neafectat.
Dei, n principiu, se poate utiliza orice surs luminoas UV-VIS sau IR, n zilele
noastre, sursele preferate au devenit laserele. Motivele principale sunt dou:
Semnalul fotoacustic, ntr-o prim aproximaie, este proporional cu creterea de
temperatur a probei, deci depind de energia absorbit, respectiv de pulsul de energie
primit de ctre aceasta (ori laserele asigur intrarea unei mari cantiti de energie).
Pentru multe aplicaii, selectivitatea metodei depinde de lrgimea domeniului de lungimi
de und al sursei (de monocromaticitatea acesteia), iar laserele au acest domeniu extrem de
ngust.
Denumirea foto-acustic provine i de la faptul c modulaia sau frecvena pulsurilor
radiaiei laser incidente este reglat n aa fel nct s cad n domeniul acustic. n acest fel,
folosindu-se metodele de amplificare specifice semnalelor acustice, s-a reuit obinerea unor
82
Spectrometria de absorbie n UV-VIS
ntrebri de verificare
1. Prin ce se aseamn instrumentele din domeniile UV i VIS?
2. Ce este transmitana, absorbana i care este relaia dintre acestea?
3. Scriei una din formele legii lui Lambert-Beer.
4. Ce componente are un spectrofotometru monocanal simplu?
5. Metodele colorimetrice sunt recomandate pentru soluii concentrate sau diluate?
6. Prin ce se deosebesc metodele spectrofotometrice de cele colorimetrice?
7. Care este caracteristica calitativ i care este cea cantitativ, n cazul unui spectru de
absorbie?
8. Ce condiii trebuie ndeplinite pentru o analiz cantitativ corect?
9. Cnd se poate aplica legea lui Lambert-Beer pentru analiza a dou componente diferite
din aceeai soluie?
10. Descriei ce este un punct izobestic i explicai de ce apare acesta pe o familie de curbe de
absorbie la aceleai coordonate (A, ).
11. Ce este o grupare cromofor i care este rolul su n determinarea maximelor de
absorbie?
12. Care sunt cele mai rspndite tipuri de spectrometre de absorbie?
13. Ce dispozitive servesc la separarea celor dou raze n spectrofotometrele cu dublu
fascicol?
14. Ce variant a spectrometriei de absorbie este adecvat pentru soluii concentrate i chiar
pentru cele tulburi?
[75]Haisch C., Niessner R., Light and sound photoacoustic spectroscopy, Spectroscopy Europe, 14(5), p. 10-
15, 2002.
Chimie Analitic i Instrumental 83
7
Spectrometria de absorbie n IR
Introducere
Domeniul infrarou (IR) al spectrului undelor electromagnetice conine radiaii cu
lungimi de und cuprinse ntre 0.8 i 1000m. La ora actual se cunosc i se aplic un grup de
metode de analiz chimic care valorific semnalele obinute prin absorbia radiaiilor din
acest domeniu. Domeniul amintit, poate fi divizat la rndul su n trei subdomenii: IR-
apropiat (ntre 0.8 i 2.5m), IR-mediu (ntre 2.5-25m) i IR-ndeprtat (peste 25m).
Domeniul mediu se mai numete i IR fundamental. Acesta este cel mai bogat n informaii i
cel mai accesibil experimental. n vorbirea obinuit este domeniul IR care servete n mod
curent att pentru analiza chimic ct i pentru recunoaterea calitativ a combinaiilor
anorganice, organice sau naturale dar i n determinri de structur chimic. Domeniul IR
apropiat, destul de srac n benzi de absorbie specifice anumitor legturi, are o importan
mare tocmai n aplicaii cantitative ale lichidelor. Domeniul IR ndeprtat este nc n studiu.
Ca i n alte domenii ale spectrometriei, n IR se determin transmitana dat de
raportul intensitilor transmise, I, respectiv incidente, I0, adic:
I0
T= (T<1). (1)
I
Se mai poate exprima transmitana procentual: T% = 100T sau absorbana, A,
definit de:
1
A = log (2)
T
Spectrul IR al unei substane este adesea o reprezentare grafic, n coordonate (T, )
unde cu s-a notat numrul de und [76] dat de ecuaia:
1
= (3)
Pe acest grafic de disting mai multe maxime mai nguste - linii - sau mai largi - benzi.
Pe axa ordonatelor, n loc de T poate aprea T% sau A - absorbana - dar n mod obinuit se
utilizeaz numrul de und n cm-1 (sau Kaysers) din necesitatea de a nu se apela la numere
att de mari ca frecvenele - exprimate n Hz - sau lungimile de und - exprimat n nm.
Exist la ora actual o diversitate de metode de analiz bazate pe spectrele IR. Astfel
exist spectrometre bazate pe dispersie dup lungimea de und, sau bazate pe transformata
84
Spectrometria de absorbie n IR
[76] numrul de und (notat uneori i ) se exprim prin relaia = /C unde este frecvena iar C viteza
luminii; se observ c este proporional cu frecvena.
[77] n afar de cei trei termeni amintii, mai exist energia micrii de translaie (necuantificat) i energia
nucleelor. Doar termenii amintii sunt ns importani pentru producerea spectrelor optice.
Chimie Analitic i Instrumental 85
7
dect cea a electronilor de legtur. Acetia din urm interacioneaz n special cu radiaia din
domeniul UV-VIS. Cei trei termeni, care apar adesea simultan n spectre, sunt foarte diferii
ca valoare energetic i se poate considera c cei trei variaz independent unii de alii.
Aceast aproximaie este posibil pe baza teoremei Born - Oppenheimer, care permite o
abordare simplificat a problemei [78].
Micarea de vibraie a unei legturi dintr-o molecul poate s fie asimilat unei
deplasri asemnntoare cu un arc spiral - situat n direcia legturii. Micarea ritmic a
acestuia, de-a lungul legturii, duce la creterea, respectiv scurtarea distanei interatomice.
Totodat, poate s ia i aspectul unei deformri (sau ndoiri) a legturii, care implic
deplasarea atomilor n afara axei dintre acetia. Numrul mare de legturi duce implcit la un
numr mare de benzi.
Amintim de asemenea, c experimental nu s-au observat spectre de linii pentru
compui n fazele condensate (lichid sau solid), n schimb sunt frecvente astfel de linii n
faz gazoas. Motivele sunt tocmai interaciunile dipol-dipol, dintre molecule aflate n faz
condensat, precum i solvatarea reciproc ntre acestea, lucru care implic, foarte probabil,
perturbaii ale nivelelor energetice ale legturilor chimice individuale. Pe de alt parte,
lrgirea unei linii este invers proporional cu durata strii excitate. Aceast durat fiind mai
scurt n strile condensate, liniile spectrale IR ale lichidelor i solidelor se lrgesc
suplimentar, predominnd benzile de absorbie.
ntindere () Deformare ()
Fig. 1. Cele dou tipuri de vibraii a unei legturi covalente polare implicate n absorbie IR
[78] Conform acestei teoreme deplasarea electronilor are loc independent de deplasrile nucleelor.
[79] Legea lui Hooke se refer la oscilaia unui resort elastic i se exprim: F=kx unde k este o constant de
for iar x distana sau elongaia deplasrii.
86
Spectrometria de absorbie n IR
[80] n mecanica cuantic soluiile matematice apar prin rezolvarea ecuaiei lui Schrdinger iar soluiile
prezentate n diferite lucrri reprezint aproximaii plauzibile.
Acest model are ca rezultat o expresie matematic, denumit ecuaia lui Morse:
2
1 h 2 2 1
EVIB = h V + V + (7)
2 4D 2
unde V este tot numrul cuantic de vibraie iar D reprezint energia de disociere a moleculei,
E(fig. 3).
E(x-x0) parabol E
x0 x
V=1
V=0 Emin
[81] Regulile de selecie au fost la nceput impuse de constatrile experimentale. n ultimul timp, aceste reguli au
o fundamentare teoretic (mecanic-cuantic) i nu mai sunt absolute. Adic chiar tranziiile interzise din
vechile reguli, devin tranziii cu o probabilitate mic i corespund unor linii de intensitate sczut.
88
Spectrometria de absorbie n IR
Variaiile energiei de rotaie sunt cu mult mai mici dect ale celei de vibraie i n
consecin nivelele energetice de rotaie, pentru aceeai stare a energiei vibraionale, au valori
extrem de apropiate. Dar pentru fiecare nivel de vibraie exist mai multe nivele de rotaie. Un
tablou complet al tranziiilor energetice posibile trebuie s combine cele dou tipuri de nivele
(fig. 4). Se poate remarca c variaia energiei de vibraie este hotrtoare n ceea ce privete
poziia benzii n spectrul IR.
j=4
j=3
V=1
j=2
j=1
V=1 j=0
j=4 j=4
j=3 j=3
V=0
j=2 j=2
j=1 j=1
V=0 j=0 j=0
a b c
j=4
E
j=3
V=1
j=2
j=1
j=0
j=4
j=3
V=0
j=2
j=1
R3 R2 R1 R0 Q P1 P2 P3 P4 j=0
A
seria R Q seria P
iese pregnant n eviden iar n acest domeniu analizele IR au posibilitile cele mai mari de
aplicare practic.
Analiznd mai atent structura fin a spectrelor de vibraie-rotaie, se poate observa c
acestea sunt compuse din trei tipuri de benzi care formeaz aa-numitele ramuri P, Q i R ale
unui maxim din spectrul de absorbie n IR. Astfel s-a constatat c exist tranziii n care se
modific doar starea de vibraie (de la V = 0 la V = 1) n timp ce valoarea numrului cuantic
de rotaie j rmne aceeai. Astfel de tranziii dau toate o singur frecven n spectrul de
absorbie, notat cu Q, a crei explicaie (origin) este redat punctat pe fig. 4.
De aceea aceast band este cea mai intens i apare doar la moleculele poliatomice
dar nu exist de loc la cele biatomice, fiind interzis. n cazul tranziiilor n care variaz
numrul cuantic de rotaie (de exemplu, de la j(V=0)=1 la j(V=1)=2, deci j = +1) apar o serie de
linii de absorbie cu frecvene mai mari dect frecvena Q - notate n ordinea cresctoare a E
cu R0, R1, R2, (chiar dac nivelele nu sunt echidistante). Totalitatea acestora formeaz
seria R a benzii. n fine, exist tranziii n care starea de rotaie scade cu o unitate (de
exemplu, de la j(Vo)=1 la j(V1)= 0, deci j = -1) care alctuiesc seria P a benzii spectrale - toate
avnd frecvene mai joase - care se noteaz n ordine descresctoare a E cu P1, P2, P3, .
Pe fig. 4 se prezint schematic i corespondena dintre tranziiile de absorbie i liniile
structurii fine a spectrelor de vibraie-rotaie n coordonate absorban - numr de und.
Prezentm mai jos, pentru exemplificare, spectrul IR al metanului gazos (fig. 5) care
ilustreaz convingtor existena celor trei ramuri P, Q i R ale unei benzi, care corespund doar
vibraiilor C-H asimetrice.
Aparatura
Primele instrumente comerciale pentru domeniul IR au aprut nc din anii 1940.
Diversitatea extraordinar de aparate utilizate astzi n cele mai diferite domenii se poate
mprii n trei categorii:
90
Spectrometria de absorbie n IR
Fotometre nedispersive bazate pe filtre simple formate uneori chiar din gazele de analizat.
Aceste pot fi monocanal sau comparative.
Spectrometre bazate pe dispersia luminii (folosind prisme sau monocromatoare bazate pe
difracie i interferen) i care pot fi prevzute cu dou canale sau monocanal (cu sau fr
chopper).
Spectrometre bazate pe transformata Fourier, care permit intrarea n celul a ntregului
domeniu spectral i care sesizeaz interferometric liniile caracteristice de absorbie. Aceste
instrumente, datorit unei rezoluii mai bune i a rapiditii, datorate cuplrii cu
calculatorul, n ultimul timp au devenit preferate.
Chiar dac nu permit obinerea unor spectre de absorbie, deci sunt inutile n ceea ce
privete analiza calitativ, fotometrele nedispersive servesc doar pentru analize de amestecuri
dinainte cunoscute (de exemplu CO, CO2 sau H2O, D2O) n procese industriale sau controlul
mediului. Aceste analizoare sunt robuste, uor de utilizat i ieftine. Se pot analiza astfel sute
de soluii formate din mai multe gaze sau lichide n controlul tehnologic sau al mediului
ambiant. Un exemplu de aplicaie de acest tip este analizorul de CO i CO2 din gazele de
eapament ale automobilelor - prezent practic n orice service auto. Acestea msoar
absorbana la 2170cm-1 n cazul CO i la 2350cm-1 n cazul CO2. Una dintre numeroasele
variante ale acestui analizor este cel prezentat n fig. 6. Gazul circul prin celula C, de
lungime b, avnd concentraia necunoscut. Lumina de la sursa S, filtrat de filtrul F,
parcurge celula i cade pe detectorul D. Celula de referin, R, este umplut cu gazul de
analizat ntr-o concentraie cunoscut iar celula de nul, N, este umplut cu azot (N2 - care nu
absoarbe n IR).
C R D
S
b Chopp.
N
Fig. 6. Schema de principiu a unui analizor IR nedispersiv
92
Spectrometria de absorbie n IR
succes n acest tip de detectori sunt sulfatul de triglicin deuterat (DTGS) sau tantalatul de
litiu (LiTaO3).
Dintre detectorii termici, cei mai folosii n ultimul timp, amintim: termocuplurile,
termorezistenele i detectorii pneumatici.
Termocuplurile, sunt dispozitive care se bazeaz pe generarea unei tensiuni electrice
ntr-un circuit coninnd dou jonciuni identice, formate din metale diferite (prin topire
local). Cele dou jonciuni trebuie s se afle la temperaturi diferite (efect Peltier), condiii n
care apare tensiunea amintit.
Termorezistenele sau bolometrele sunt alctuite dintr-un conductor sau semiconductor
care i modific rezistena cu temperatura. Cele cu semiconductori se mai numesc i
termistori.
Detectorii pneumatici sunt termometre cu gaz foarte sensibile. Un astfel de detector
const dintr-o capsul metalic (cilindric) avnd un capt nchis cu o plcu metalic
nnegrit iar la cellalt cu o plcu metalic flexibil. Radiaia IR cznd pe partea nnegrit,
nclzind gazul din celul, provoac dilatarea acestuia. Ca urmare, gazul provoac o deplasare
a membranei flexibile datorit mririi volumului incintei. Micarea poate fi sesizat prin
includerea acestei membrane flexibile ntr-un condensator care, la rndul lui, este inclus ntr-
un circuit de msurare a capacitii.
la 99mg KBr). Pastila transparent obinut dup mcinare i presare se fixeaz ntr-o ram
potrivit i se introduce n aparat n faa fascicolului IR.
94
Spectrometria de absorbie n IR
ntrebri de verificare
1. Care este domeniul de numere de und ai spectrometriei IR?
2. La ce servete domeniul IR apropiat?
3. Care dintre cele trei domenii IR: apropiat, mediu i ndeprtat este cel mai bogat n
informaii structurale?
4. Ce mrime, notat cu T, se msoar n spectrometria IR?
5. Ce fel de micri de vibraie exist pentru o legtur covalent?
6. De ce moleculele H2, O2, N2 nu se pot analiza prin spectrometrie de absorbie IR?
7. Ce surse se utilizeaz n spectrometrele IR? Ce fel de celule se folosesc?
8. Ce tranziii determin structura fin a spectrelor IR?
9. Care sunt translaiile determinante pentru spectrul IR - fundamental?
10. Cum se pot analiza amestecurile multicomponente prin spectrometrie IR?
11. Ce modele servesc pentru descrierea teoretic a vibraiilor n spectrul IR?
12. Care sunt regulile de selecie pentru numerele cuantice de vibraie i rotaie?
13. Ce sunt fotometrele nedispersive i la ce servesc n analizele chimice?
14. Cum se prepar probele solide i lichide n vederea analizei prin spectrometrie IR?
15. Ce sunt detectorii pneumatici i pe ce principiu funcioneaz?
16. Prin ce se deosebesc monocromatoarele n IR fa de UV-VIS?
Metoda analizei prin absorbie atomic (AA), introdus n analiza chimic din anul
1952 de ctre australianul A. Walsh [82], se bazeaz pe fenomenul cunoscut cu aproape o sut
de ani nainte (1859) - descoperit de germanul G. R. Kirchhoff - i anume inversia liniilor
spectrale. Principiul, stabilit pe baze experimentale, se poate enuna sub form de lege fizic -
legea lui Kirchhoff - astfel: fiecare element chimic absoarbe acele radiaii pe care le poate
emite n aceleai condiii, bine determinate, de temperatur i presiune. Primul instrument
folosit a fost o improvizaie pentru a se obine absorbia atomic n cadrul unui fotometru cu
flacr (un spectrometru de emisie n care excitarea atomilor se realizeaz ntr-o flacr).
Acesta, ca i celelalte instrumente care au urmat, msoar concentraia unui element dintr-o
prob, prin determinarea absorbiei realizate de ctre atomii probei, adui ntr-o flacr sau,
mai general, n faz gazoas (la o temperatur suficient de ridicat) asupra unei radiaii
monocromatice furnizate de o surs extern. Evident c radiaia respectiv este astfel aleas
nct s fie caracteristic unui anumit atom.
Spectrometrul de absorbie atomic msoar radiaia absorbit de atomii care rmn
n stare fundamental (neexcitai) n stare gazoas. Numrul acestora fiind de obicei mult mai
mare dect a celor excitai, spectrometria de absorbie atomic (AAS [83]) este o metod
caracterizat de o sensibilitate mult mai bun, cel puin pn la temperaturi de 5000K.
Remarcm faptul c aparatura pentru absorbie atomic poate fi utilizat, la nevoie, i pentru
lucrul n emisie.
Principiul metodei
Ionii din soluia de analizat, prin pulverizare (sau nebulizare) ptrund o dat cu gazul
purttor ntr-o zon cu temperatura ridicat (de ex. o flacr) i devin atomi. Acetia trebuie
adui ntr-o stare energetic potrivit n vederea favorizrii absorbiei i reducerii la minim a
emisiei. Acest lucru se realizeaz n flcri cu temperaturi din domeniul 2000-3000K
(obinute de exemplu folosind arztoare cu aer-acetilen).
Modul n care se produc atomii metalici n stare gazoas este descris mai amnunit n
continuare (fig. 1). La aspirarea soluiei ntr-o flacr se petrec, ntr-o succesiune rapid,
urmtoarele etape:
[82] http://www.science.org.au/academy/memoirs/walsh2.htm
[83] AAS = prescurtarea denumirii n l. engl., Atomic Absorption Spectrometry.
Chimie Analitic i Instrumental 97
8
1 6
2 3 4
1 2 3 4
9 5
8
9 7 8
Specii: Procese:
+ -
0: M + X (soluie) 1: evaporare solvent
1: M+X- (aerosol) 2: sublimare sare
2: MX (molecul) 3: disociere termic
3: M (atom) 5: ionizare recombinare
4: M* (atom, stare excitat) 6: combinare descompunere (cu
5: MO, MOH (specii cu oxigenul) oxigenul)
6: MO*, MOH* (specii cu oxigenul, stare excitat) 4, 7, 8, 9: absorbie emisie
7: M+ + e- (ion)
1-2-3-4: lanul de procese favorabile
8: M+* (ion, stare excitat)
observrii absorbiei i emisiei atomice
9: MX* (molecul, stare excitat)
Fig. 1. Transformri posibile ale analitului n dispozitivul de atomizare (flacr)
E2 M**
E1 M*
Emisie Absorbie
E0 M
Fig. 2. Absorbia de rezonan este cea mai utilizat tranziie (linie n spectru) din analiza
chimic prin absorbie atomic
De aceea, pentru a se realiza o selectivitate bun, sursa de radiaii ce emite fascicolul
care urmeaz s parcurg celula, trebuie s fie o surs monocromatic avnd o frecven egal
cu cea a liniei de rezonan a atomilor din proba de analizat (vezi fig. 2). O astfel de tranziie
are loc la trecerea unui electron de pe stratul de valen, dintr-un atom n stare fundamental,
98
Analiza prin absorbie atomic (AA)
avnd o energie E0 (energie prin convenie luat egal cu 0) pn la primul nivel accesibil, de
deasupra sa, E1. Aceast tranziie are loc ca urmare a absorbiei de radiaie electromagnetic
monocromatic, adic corespunztoare unei cuante h = E1-E0. Absorbia, n urma creia
apare tranziia de pe starea fundamental pe primul nivel de energie, se numeste absorbie de
rezonan i i corespunde o linie de rezonan, aceeai att n absorbie ct i n emisie.
Desigur, electronii pot trece prin absorbie i pe alte nivele de energie ns cu o
probabilitate mai mic, adic dau linii mai puin intense. n emisie, tranziiile au loc n sens
invers. Relaia dintre numrul de atomi excitai, N1, i cei aflai n stare fundamental, N0, este
cunoscut din chimia fizic, sub denumirea: ecuaia lui Boltzmann i se poate scrie:
N1/N0 = (g1/g0)exp(-E/kT) (1)
unde N1 este numrul de atomi n stare excitat pe nivelul 1, N0 - numrul de atomi aflai n
stare fundamental, g1/g0 - reprezint raportul ponderilor statistice pentru starea excitat
respectiv fundamental, mrimi ce depind de numerele cuantice ale nivelelor existente n
fiecare atom n parte, E = h - variaia de energie a tranziiei, k - constanta lui Boltzmann, T
- temperatura absolut n K. n mod obinuit raportul N1/N0 este subunitar. Se poate observa
c N1/N0 depinde att de E ct i de T. O cretere a temperaturii i o scdere a valorii
intervalului energetic, E, va conduce implicit la o mrire a raportului N1/N0. Calculele
demonstreaz c, n cele mai favorabile condiii, doar o mic parte din atomi se gsesc n
stare excitat, lucru vizibil i din datele prezentate n tabelul 1, pentru cteva linii de
rezonan tipice.
Tabelul 1. Raportul dintre numrul de atomi din strile excitat, N1, respectiv fundamental,
N0, la dou temperaturi, 2000, respectiv 4000 K
Element E Lungime de und N1/N0
(eV) (nm) 2000K 4000K
Na 2.1 589.0 9.86.10-6 4.44.10-3
K 2.93 422.7 1.91.10-6 6.03.10-3
Zn 5.79 213.9 7.31.10-6 1.48.10-7
Walsh a fost cel care a propus primul, pentru aceast metod, n calitate de surse de
lumin, nite lmpi de construcie special denumite lmpi cu catod cavitar [84] (fig. 3) care
emit un spectru atomic, format din linii, caracteristice materialului (metalului) din care este
confecionat catodul. Cu ajutorul monocromatorului se selecteaz doar linia dorit, de obicei
linia de rezonan a elementului respectiv.
Spre
flacr
n afara sursei, deosebit de toate sursele utilizate n celelalte metode optice, schema
bloc a acestei metode (fig. 4) este cu totul analog spectrofotometriei de absorbie n general.
Deosebirea este aceea c, n cazul absorbiei atomice, n loc de soluii lichide, probele se afla
n stare gazoas ntr-o flacr i nu sunt constituite din molecule ci din atomi n stare
fundamental.
Lamp cu catod cavitar (surs) Flacr sau cuptor (celul) Monocromator Detector
Fig. 4. Schema bloc a spectrometrului de absorbie atomic
Surs Monocromator
Detector
Oglind Celul de
referin
Fig. 5. Schema de principiu a spectrofotometrului cu dublu fascicol prevzut cu chopper i
detector (fotomultiplicator)
[85] din l. engl., to chop - a tia n buci sau a toca, respectiv chopper - main de tocat
100
Analiza prin absorbie atomic (AA)
fascicul incident, de intensitate I0, n urma trecerii prin stratul absorbant, de grosime l, devine
un fascicul de intensitate I, relaia dintre I i I0 este dat tot de legea Lambert-Beer scris
diferit:
I = I0e-KbN (2)
unde: K este coeficientul de absorbie atomic, b - lungimea flacrii, N - numrul de atomi,
aflai n stare fundamental, din unitatea de volum. Analog cu spectrofotometria de absorbie,
dac notm cu A absorbana:
A = ln(I0/I) (3)
ecuaia (2) devine:
A = KbN (4)
Deci A (absorrbana), pentru un atom dat, pentru parametrii fizici ai sistemului optic
dai i o flacr fix, este proporional cu N (numrul de atomi). Cum N din unitatea de volum
depinde de mai muli factori constani (debit, vscozitate etc.) dar mai ales de concentraia C a
soluiei pulverizate n flacr, introducnd concentraia (C) n locul numrului de atomi (N),
ecuaia devine:
A = kC (5)
unde k este un coeficient constant care nglobeaz constantele de transformare, propriu
fiecrui element la lungimea de und aleas i n condiiile unui instrument dat i ale unei
flcri stabile. Relaia, liniar n coordonatele A-C, este util pentru analiza cantitativ
propriu-zis i exploatat cu totul analog ca n spectrofotometria de absorbie UV-VIS.
Aparatura
Schema de principiu, ilustrat anterior pentru spectrometrul de absorbie atomic (vezi
fig. 4), poate fi completat cu mai multe amnunte (fig. 6). ntre electrozii lmpii cu catod
cavitar se aplic 400V i un curent de 10-40mA, foarte bine stabilizat, pentru a emite un flux
luminos de intensitate constant. Soluia coninnd proba etalon, sau cea de analizat, este
transformat ntr-un aerosol fin, n interiorul unei incinte numite sistem de pulverizare, sau
pulverizator (nebulizor). Aerosolul, amestecat intim cu amestecul de gaze, oxidant plus
carburant, este condus apoi n flacr (fig. 6).
Lamp cu catod cavitar (surs) Flacr sau cuptor (celul) Monocromator Detector
Arztor
Carburant (acetilen)NebulizorAer + Prob
Fig. 6. Schem ilustrnd principul funcionrii spectrometrului de absorbie atomic
Atomii unui anumit element absorb doar lumina cu lungimea de und specific
elementului respectiv. Tocmai aceste lungimi de und caracteristice sunt emise de surs i
trecute prin flacr iar diminuarea, exprimat n unitai de absorban, este proporional cu
numrul de atomi ai elementului de analizat, prezeni n flacra. Atomii celorlalte elemente
nsoitoare nu absorb lumina la aceeai lungime de und ci fiecare la alte valori ale acesteia.
Acest lucru se asigur prin selectarea lungimii de und i cunoaterea elementelor nsoitoare.
Detectorul, de regul un foto-multiplicator, msoar intensitatea luminii monocromatice -
obinut dup parcurgerea unui monocromator.
Metoda descris este o metod relativ, adic pentru etalonare se msoar mai nti
cel puin o prob cunoscut (numit prob etalon). Operaia este denumit n mod curent
calibrare sau etalonare. Se lucreaz de cele mai multe ori prin metoda curbei de etalonare
sau prin metoda adaosului standard. Analiza chimic prin absorbie atomic este extrem de
specific, lrgimea benzii de absorbie, fiind foarte ngust - de ordinul a 10-3nm - face
aproape imposibile orice confuzii privind analitul. De aceea cu aceast metod se pot analiza
66 elemente metalice sau semimetalice, fiind puin recomandat pentru nemetale. Metoda
analizei prin AA este principala metod de analiz a elementelor metalice minore din
materiale sau din mediu, inclusiv poluarea organismelor cu acestea. Liniile specifice cad n
domeniul 190-850nm permind analize de ordinul microgramelor (g) iar n anumite cazuri
chiar a nanogramelor (10-9g) dintr-un mililitru de soluie. Sensibilitatea practic difer de la
element la element i este acea concentraie ce d o crestere de 0.00434 uniti de absorban
(aproximativ 1% din intensitatea luminii incidente). Aceasta se exprim n g/ml sau, ceea ce
este acelai lucru, n ppm (pri per milion).
n practic apar totui interferene cu alte elemente din prob, de exemplu are loc
102
Analiza prin absorbie atomic (AA)
formarea unor combinaii greu disociabile (Mg2P2O7, ZrO2 sau Ca3PO4 etc.) sau efecte legate
de temperatura flcrii cu care se lucreaz - prea mare sau prea mic - ceea ce afecteaz
numrul atomilor n stare fundamental. Acestea, indiferent de natura lor fizic, au cptat
denumirea de efect de matrice. De aceea trebuie luate contramsuri. Toate aceste probleme se
studiaz individual, folosind publicaiile de specialitate. Pentru a se asigura o limit de
detecie ct mai joas, este necesar neutralizarea fluctuaiilor fondului. Pentru acest scop s-au
pus la punct instrumente cu dublu fascicul, ale cror detectoare primesc alternativ semnale de
la raza incident care, odat traverseaz proba (flacra sau cuptorul) i, alternativ, trece
nemodificat sub form de radiaie de referin. n cazul atomizoarelor cu flacr efectul de
matrice este mai redus. n cazul utilizrii cuptoarelor tubulare efectul devine foarte important
datorit concentraiei mai ridicate a acesteia. Cele mai importante mijloace de corecie a
fondului sunt cele bazate pe lmpi cu deuteriu i cele care utilizeaz efectul Zeeman.
Fig. 6. Instrument la care corecia fondului se face cu ajutorul unei lmpi cu arc de deuteriu
n cazul dispozitivelor cu lmpi cu deuteriu (fig. 6) flacra este traversat de lumina
care iese din lampa cu catod cavitar amestecat cu raza emis de o lamp cu arc de deuteriu
(250-350nm). Cu ajutorul unei oglinzi semitransparente i a unui chopper, amestecul celor
dou raze este trimis alternativ prin flacr i pe un drum care ocolete flacra, constituind
raza de referin. Detectorul primete, cu frevena dictat de chopper, att semnalul de
referin ct i cel de msur, iar raportul celor dou raze se nregistreaz dup corecia de
fond, sub form de absorban.
Un alt mare avantaj al metodei analizei prin AA l constituie posibilitatea de a utiliza
solveni organici pentru concentrarea probei. Acetia, prin posibilitatea lor de a extrage doar
anumii ioni din soluie apoas, ntr-un volum mic, mresc i sensibilitatea i specificitatea
metodei. Cei mai adecvai solveni par a fi esterii i cetonele alifatice.
Varianta denumit metoda cuptorului tubular (sau spectrometria de absorbie atomic
fr flacr) utilizeaz un cuptora tubular (fig. 7), din grafit, nclzit electric, meninut n azot
sau alt atmosfer inert la 2000-3000K dar pornindu-se de la temperatura camerei. Aceast
Chimie Analitic i Instrumental 103
8
Fig. 7. Cuptorul tubular din grafit, nclzit electric, permite volatilizarea probelor
104
Analiza prin absorbie atomic (AA)
o
As3+
NaBH 4
AsH 3
800 C
As + 3 / 2H 2
Hidrura volatil este antrenat de gazul purttor ntr-un cuptora din cuar, plasat n
flacr unde de fapt are loc i reacia de descompunere n atomi. n acest fel s-au obinut
sensibiliti de 100 de ori mai bune, n cazul acestor elemente. n cazul particular al
mercurului, care nu d o hidrur stabil, se utilizeaz nite celule speciale din care Hg nu mai
are nevoie s fie transferat n flacr. Metoda, denumit metoda vaporilor reci, se aplic n
dispozitive specifice n care reducerea are loc cu SnCl2.
Tabelul 3. Limite de detecie prezentate comparativ pentru AA, analiza prin fluorescen
atomic i emisie atomic. Se remarc coborrea marcant a limitei de detecie pentru unele
metale (Cd, Zn, Hg) n cazul fluorescenei atomice
Element (nm) Limite de detecie (gmL-1)
Absorbie Fluorescen Emisie
Ag 328.1 0.0005 0.0001 0.002
Al 396.2 0.04 0.1 0.005
Ca 422.7 0.0005 0.02 0.0001
Cd 228.8 0.0006 0.000001 2
Hg 253.7 0.2 0.0002 40
Mg 285.2 0.0003 0.001 0.005
Mn 279.5 0.002 0.006 0.005
Zn 213.8 0.002 0.00002 50
ntrebri de verificare
1. Ce surs de radiaie folosete analiza prin absorbie atomic?
2. Care este principiul inversiei liniilor spectrale descoperit de Kirchhoff?
3. n ce stare se gsesc atomii probei n AA?
4. Ce linie este selectat, de regul, cu ajutorul monocromatorului?
5. Ce lege este utilizat pentru analiza cantitativ?
6. Cum se liniarizeaz legea lui Lambert-Beer?
7. Ce fel de metode se aplic pentru determinri cantitative prin AA?
8. Proba o dat adus n soluie se introduce n flacr prin intermediul unui dispozitiv ...
9. Pentru ce elemente se aplic, cu prioritate, metoda AA?
10. n ce domeniu de lungimi de und cad liniile folosite n analiza chimic prin AA?
11. Ce gaze se utilizeaz drept carburant n flacr?
12. Ce avantaje prezint cuptorul tubular n analiza prin AA?
13. Ce progrese recente au avut loc n analiza prin AA, n ultimul timp?
14. Ce posibiliti noi prezint utilizarea solvenilor organici pentru introducerea probei n
AA?
15. Pentru ce elemente este avantajoas transformarea atomilor acestora n hidruri n vederea
analizei ulterioare prin AA?
16. Ce avantaje prezint metoda fluorescenei atomice?
106
Spectrometria de emisie
Opera noastr nu se adreseaz dect acelora care emit pe aceeai lungime de und cu noi
Jean Cocteau (1889-1963), Journal dun inconu
Spectrometria de emisie
Introducere
Atomii sau ionii unui element, adui n diferite stri excitate, revin la nivele staionare
mai coborte ca energie sau chiar n stare fundamental, emind radiaii electromagnetice, cu
frecvene din domeniul UV, VIS i IR. Ansamblul acestor frecvene constituie spectrul de
emisie al speciei respective.
Avnd nivelele bine definite i distincte de la un atom la altul (cu foarte rare excepii),
spectrul de emisie va fi diferit - aadar va caracteriza calitativ fiecare atom - permind
identificarea i dozarea elementelor chimice. De aceea, n principiu, toate elementele chimice
pot fi analizate cu ajutorul spectrometriei optice de emisie atomic (prescurtat OES [86] n
literatura de specialitate), inclusiv elementele uoare. Nu acelai lucru se poate afirma despre
spectrometria de emisie n flacr (flamfotometria), folosind flcri convenionale, care
permite doar determinarea unui numr extrem de redus de elemente chimice. Totui n
practic se utilizeaz metoda OES pentru determinarea a circa 70 de elemente chimice,
majoritatea metalice.
Spectrul de emisie al unui atom se obine prin excitarea termic a acestuia, dup
aducerea n prealabil n stare de vapori, deci prin aducerea probei la o temperatur suficient de
ridicat nct moleculele acesteia s disocieze n atomi, care emit apoi spectre caracteristice.
Spectrele atomice ale elementelor sunt determinate de electronii de valen, fiind una dintre
proprietile periodice. Fiind adui n stare gazoas, nainte de excitare, este indiferent ce tip
de legturi chimice au existat nainte, n materialul de analizat. De aceea, analog metodei prin
absorbie atomic, informaiile structurale nu se pot obine cu ajutorul acestui gen de analize
chimice.
Cea mai intens linie din spectrul de emisie este linia de rezonan, ce corespunde
revenirii atomilor de la prima stare de excitare (sau nivelul cel mai sczut de excitare), la
starea fundamental.
Identificarea liniilor prin stabilirea lungimii lor de und, constituie baza analizei
calitative, iar determinarea intensitii liniei, I, st la baza analizei cantitative. Ecuaia ce leag
intensitatea, I, de concentraia elementului de analizat din prob, notat C, este: I = f(C),
stabilit pe cale experimental.
Pentru a emite toate radiaiile posibile din spectru, atomul trebuie sa absoarb o
energie cel puin egal cu potenialul de ionizare al su. Majoritatea elementelor au acest
potenial sub 10eV. Valorile cele mai mici, din acest punct de vedere, le au elementele
alcaline. Halogenii ns au poteniale de ionizare peste 10eV. De aceea, pentru aceeai
energie de excitare, sensibilitatea analizei spectrale va fi mai mare pentru elementele cu
energia de ionizare joas i evident mai mic pentru cele cu energia de ionizare ridicat
(adic pentru cele situate n partea dreapt i sus a sistemului periodic - halogenii i celelalte
nemetalele tipice). Elementele alcaline i alcalino-pmntoase se pot analiza i cu o aparatur
spectral mai simpl i anume prin spectrofotometrie de flacr respectiv cu cea pentru
absorbie atomic unde flacra este utilizat ca surs optic.
Privind retrospectiv, spectroscopia optic de emisie atomic (OES), a permis
descoperirea unor elemente noi, la vremea respectiv: Rb i Cs (ambele n 1860), Tl (1862)
precum i a elementelor Ga i He. Ultimul dintre acestea, decelat mai nti n lumina venit de
la Soare (1868), a fost identificat cu mult nainte de a fi fost izolat pe Pmnt (1895). Acestea
sunt doar cteva dintre numeroasele contribuii ale spectrometriei la cunoaterea uman.
Avantajele OES cantitative constau n sensibilitatea considerabil, rapiditatea
excepional, reproductibilitatea bun, necesarul de cantiti mici de proba iar dintre
dezavantaje amintim: eroarea de 2.5%, n cel mai fericit caz, exactitate relativ constant pe tot
domeniul de concentraii i posibilitatea de a analiza corect doar elementele minore. De
asemenea instrumentele pentru acest gen de analize sunt scumpe - constituind investiii
serioase, pe termen lung, ale laboratoarelor de analize chimice instrumentale.
Instrumentaia
Aparatura, cunoscut sub denumirea de spectometru de emisie atomic, se compune
din urmtoarele pri:
sursa de excitare: flacr, arc, scnteie, descrcare aureolar, plasm sau laser,
sistemul de dispersie: prism, reea sau ambele,
sistemul de receptie, msurare i nregistrare (fotomultiplicatori sau fotodetectori,
amplificatori, plac de achiziie, calculator),
sistemul optic de fante, fibre din sticl i lentile care asigur traiectoria razelor de lumin
prin instrument.
Cel mai simplu spectrometru, cel cu prism, este prezentat schematic n fig. 1.
Sursa spectral cea mai veche n OES, utilizat n variante perfecionate i astzi, o
constituie arcul electric - creat ntre doi electrozi de grafit (spectral pur) sau un electrod de
grafit i unul de cupru (sau un alt metal pur, absent din prob) - a crui intensitate a curentului
108
Spectrometria de emisie
Electrodul inferior este fasonat n form de crater, astfel nct s suporte proba (fig. 2),
aflat fie sub form de fragmente metalice, fie sub form de pulbere, n amestec cu grafit i n
ambele cazuri, presate n cavitatea micro-creuzetului. La apariia arcului electric, elementul de
analizat din prob se volatilizeaz, transformndu-se n atomi sau ioni. Arcul n curent
continuu este recomandat n analiza spectrelor atomice, iar cel n scnteie - provocat de un
curent alternativ (avnd o energie de 20-50keV), care duce la temperaturi mai ridicate - pentru
analiza spectrelor ionilor.
Spectrometrele moderne sunt prevzute cu monocromatoare cu o reea curbat care
localizeaz liniile spectrale pe acelai cerc cu cel cruia i aparine reeaua: aa-numitul cerc
Rowland, reprezentat n fig. 3.
Reea curbat
Cerc
Rowland
Lumina ptrunde spre reeaua curbat intrnd printr-o fant situat pe acest cerc i ies
printr-o alt fant situat tot pe cerc. Receptorii, astzi formai din minusculi fotoreceptori sau
fotomultiplicatori, sunt plasai chiar n dreptul fantei de ieire.
Spectometrele cu vid, sunt instrumente la care drumul optic se realizeaz n vacuum i
se utilizeaz pentru determinarea elementelor a cror radiaie este absorbit de aer la
presiunea normal: C, P, As, S.
Spectrometrul multicanal simultan are n drumul optic al radiaiei fiecrui element de
analizat cte o fant i un fotodetector. n aceast variant radiaia venit de la surs intr
Chimie Analitic i Instrumental 109
9
printr-o singur fant, fiind apoi dispersat prin reeaua concav bazat pe reflexie. Radiaia
compus, incident, ajunge la o serie de fante de ieire care izoleaz, fiecare, linia selecionat
de ctre utilizator pentru un anumit element. Fantele de intrare i cele de ieire se gsesc
ambele pe acelai cerc Rowland - avnd raza de curbur egal cu aceea a oglinzii. Raza, dup
ce trece prin cele dou fante, cade pe fotomultiplicatorul elementului respectiv care d un
semnal de ieire - un curent - care este integrat pe o capacitate, rezultnd astfel o tensiune
convertibil cu uurin n concentraie. Astfel de spectrometre moderne sunt denumite adesea
cuantometre. Instrumentele multicanal recente pot analiza simultan pn la 60 de elemente
chimice. Pentru a se rezolva interferenele aprute se msoar mai multe lungimi de und
pentru acelai element i se realizeaz corecii de fond. O analiz de 25 de elemente dureaz,
de la expunerea n analizor, graie mijloacelor de calcul moderne, circa 1-2 minute.
Spectrometrele secveniale funcioneaz similar, ns au numai dou canale de
msurare a intensiti pentru toate radiaiile emise de surs. Un canal este fix i msoar
intensitatea radiailor emise de etalon sau de martorul din prob, iar altul, mobil, nregistreaz
succesiv liniile pentru elementele de analizat. Acesta este un analizor mai lent dar totodat
mai ieftin, avnd posibilitatea de a analiza un numr mai mare de elemente dect cel simultan.
Acest analizor este avantajos n cercetarea tiinific, unde numrul de elemente chimice
analizate poate fi foarte diferit.
Prin utilizarea radiaiei laser, n calitate de mijloc de excitare, n aa-numita
spectrometrie optic de emisie atomic cu laser, se elimin interferenele datorate electrozilor
din cadrul variantelor n arc sau scnteie. Se pot realiza microspectre locale, pe incluziuni sau
zone care, observate la microscop, prezint aspecte diferite de restul probei. Se realizeaz
cratere de diametre 20-200m, din care se evapor circa 10-8-210-6g din prob. Zona
analizat se fixeaz n prealabil la un microscop. Sensibilitatea analizei prin aceast tehnic
are de suferit tocmai datorit acestei mase reduse, fiind doar 0.05-1% dintr-un anumit
element.
Analiza chimic calitativ
Analiza calitativ spectral n funcie de scopul urmrit se mparte n: identificarea
componentului major, identificarea impuritilor i analiza complet. Semnificaia calitativ a
liniei spectrale o d lungimea de und.
Poziionarea pe plac a liniei spectrale se face de obicei prin intermediul spectrului
fierului luat drept etalon. Acesta are circa 5000 de linii, cunoscute exact i tabelate, n ceea ce
privete lungimea de und. De aceea, practic, se procedeaz astfel. Cu spectrometrul utilizat
se nregistreaz spectrul fierului (folosind un arc obinut ntre un cui de fier i o bar de
grafit). Pe aceeai plac sau mijloc de nregistrare se nregistreaz consecutiv spectrul probei
110
Spectrometria de emisie
2 1
---------------------d2-------------------
2 X 1
-------d1-------
Fig. 5. Compararea spectrului ferului cu spectrul probei de analizat
Liniile spectrale ultime sunt acele linii din spectrul unui atom care dispar ultimele,
prin diluarea probei. Aceste linii confer analizei sensibilitatea cea mai mare. Drept regul
important, trebuie s reinem c n primul rnd, ntr-o analiz calitativ, se identific
elementul major i bazat pe aceasta se trece la identificarea elementelor minore, respectiv a
urmelor, prin comparaie cu cel major.
Analiza cantitativ. Intensitatea, I, a unei linii spectrale este dat de produsul dintre
numrul atomilor ce particip la tranziie, n, i energia fotonilor emii, h i anume:
I = nh (2)
Numrul n crete cu temperatura T i este cu att mai mare cu ct intervalul E al
tranziiei este mai mic.
n practic, se utilizeaz o ecuaie empiric de forma:
I = aCb (3)
lgC
Fig. 6. Aspectul curbei de etalonare n spectrometria de emisie atomic
112
Spectrometria de emisie
Curba de etalonare log (Ix/Ie) = f[log (Cx/Ce)], tot liniar, va duce la o precizie mai
bun a rezultatelor analizelor cantitative dect cea care nu face apel la un element de referin
din etalonul intern, datorit diminurii zgomotului dar i a efectului de matrice.
Printre alte msuri de ameliorare a rezultatelor analizelor amintim c este mai indicat
s se analizeze separat elementele puin volatile, cum ar fi de exemplu Al sau Si, i separat
cele volatile, ca de exemplu: Cu, Fe, Mg, Mn, pentru a se putea obine, n condiii
experimentale potrivite, de la caz la caz, valori mai ridicate ale raportului semnal-zgomot i,
n consecin, precizii mai ridicate.
n afar de etalonul intern, n substana supus analizei prin spectrometrie se
introduce, tot prin omogenizare i un aanumit tampon spectral. Acesta este o substan pur
care are rolul de a stabiliza viteza de evaporare a probei, reducnd influena matricei asupra
rezultatelor i contribuind la reducerea fondului precum i la mrirea intensitii anumitor
elemente. Exemple de astfel de substane sunt: GeO2, Mg(NO3)2, NiO i Na2WO4. n analiza
spectral a silicailor, de exemplu, se determin Fe i Mn n prezena SrCO3 iar pentru
elementele nevolatile se folosete drept tampon spectral oxidul de ytriu (Y2O3) . n cazul
prezentat elementele Sr respectiv Y servesc totodat drept etaloane interne.
[87] ICP-OES reprezint, n literatura internaional, prescurtarea denumirii din l. engl.: Inductively Coupled
Plama - Optical Emission Spectrometry
Chimie Analitic i Instrumental 113
9
Curentul de argon, ce poart cu sine proba, sub form de particule fine (un aerosol),
trece prin tubul central. Obinerea plasmei este realizat de cele dou sau trei nfurri ale
unui tub de inducie prin care circul un curent de radiofrecven (27MHz) de mare putere (1-
2KW). Un al doilea flux gazos tot de argon ionizat curge, cu un debit cuprins ntre 10 i 15
L.min-1, prin tubul intermediar i servete la meninerea plasmei. Gazul de protecie, care va
deveni n partea superioar tot plasm, curge sub forma unui curent elicoidal, izolnd termic
tubul de cuar exterior i dnd stabilitate plasmei. Iniial, plasma este pornit de o scnteie,
realizat cu un dispozitiv auxiliar, apoi se autontreine. Plasma propriu-zis are o form
inelar (toroidal), n care proba este introdus n partea central, rece, nclzindu-se pe
msur ce se apropie i intr n contact cu zona cald (vezi fig. 7).
Introducerea probei (etaloanelor) se realizeaz dintr-o soluie, de regul apoas, de
ctre un sistem de pulverizare denumit nebulizor similar celui utilizat n absorbia atomic sau
spectrometria n flacr, cu deosebirea c debitul este mai mic (1Lmin-1).
Un exemplu de pulverizator n domeniul plasmei cuplate inductiv este nebulizorul cu
debit transversal schiat n fig. 8. Acesta creeaz un aerosol purtat de gazul purttor (tot
argon) spre plasm - sursa ce emite liniile spectrale.
ntrebri de verificare
1. Care sunt domeniile de lungimi de und n care se pot obine linii spectrale n
spectrometria de emisie?
2. Care sunt elementele pentru care nu este recomandat spectrometria de emisie?
3. Ce este un etalon intern i care este rolul su?
4. Care este cea mai veche surs spectral cunoscut n spectrometria optic de emisie optic?
5. Sub ce form se poate plasa proba n arcul electric?
6. Cum se introduce proba n spectrometria cu plasm cuplat inductiv?
7. Ce este spectrometria cu descrcare aureolar?
8. Care este fenomenul care genereaz plasma, cel mai frecvent?
114
Spectrometria de emisie
Excitare
Fluorescen
Dezexcitare
Dup excitare, intensitatea luminii emise de ctre atomi, F, scade exponenial n timp
respectnd o ecuaie de forma:
F = I0 e k f t
unde F este radiaia de fluorescen produs de ctre o substan, I0 - intensitatea radiaiei
incidente, kf - o constant caracteristic substanei (analog constantei de vitez) iar t - timpul.
Trebuie fcut o distincie ntre fluorescen, care corespunde unei scderi rapide a
intensitii luminoase emise i fosforescen - la care scderea n timp este cu mult mai lent.
De aceea o specie molecular poate fi, deodat, att fluorescent ct i fosforescent. Pe de
alt parte, luminescena este tot o reemisie de lumin dar aceasta are la origine energia unei
reacii. Aceast energie nu se degaj sub form de cldur (ca n majoritatea cazurilor) ci sub
form de energie radiant. De fapt o putem considera ca pe o excitare a electronilor cu
ajutorul cldurii de reacie.
Timpul de via a unei specii moleculare excitate, 0, se definete chiar cu ajutorul
constantei de vitez kf din relaia precedent:
0 = 1/kf
116
Fluorimetria i spectrometria de chemiluminiscen
Dup acest timp intensitatea rezidual nu reprezint dect 36.7% din cea iniial adic
peste 60% dintre moleculele excitate au revenit la starea neemisiv. De aceea fluorimetria
lucreaz n regim staionar - excitarea avnd loc pe tot parcursul msurtorii - pe cnd
fosforescena, la care diminuarea intensitii n timp este mult mai lent, se studiaz doar dup
ce a ncetat faza de excitare.
Fluorescena, riguros vorbind, implic emisia de radiaie prin tranziia ntre dou
niveluri care au aceeai multiplicitate (de exemplu singlet la singlet sau triplet la triplet). Dac
tranziia are loc ntre dou niveluri de multiplicitate diferit, aceasta poart numele de
luminescen.
Metodele de analiz bazat pe fluorescen nu sunt general aplicabile oricror
substane. Dar, toate metodele analitice bazate pe att pe fluorescen ct i pe i luminescen
pe lng c sunt foarte specifice sunt i foarte sensibile. De exemplu, putem aminti c limita
de determinare a unei metode fluorimetrice, pentru o anumit combinaie chimic, este de
circa 1000 de ori mai cobort dect cea a unei metode prin absorbie n vizibil sau n
ultraviolet. De aceea, din aceast categorie de metode exist cteva extrem de utile n analiza
i monitorizarea unor poluani ai mediului.
Dei am amintit la nceput c fluorescena apare n strile lichid i solid, anumite
gaze, de exemplu aflate n atmosfera terestr, pot fi determinate cantitativ prin fluorescena
indus de excitarea cu un puls de durat foarte mic (1sec) cu ajutorul unui laser de mare
putere (dispozitiv cunoscut sub denumirea de lidar).
ntruct nivelul radiaiei de luminescen nu este ntotdeauna foarte ridicat, exist dou
tipuri de instrumente diferite: fluorimetre i spectrometre de chemiluminescen. Ultimele i-
au gsit aplicaii n domeniul analizelor N sau S din materiale precum i n monitorizarea
NOx, H2S din aer precum i n studiile, respectiv analizele fenomenelor de mbtrnire a
materialelor plastice.
urmtoare, S1. Abia apoi intervin tranziiile de fluorescen (timp de 10-9-10-7s) n urma crora
moleculele revin pe unul din nivelele notate V0, V1, ... (stri energetice de vibraie
caracterizate fiecare prin numrul de vibraie respectiv, Vi) - aparinnd nivelului iniial S0
[88].
V4
V3
E S1 V2
T1
V1
V0 Fosforescen
V4
V3
S0 V2 S0
V1
V0
Se poate observa (fig. 2) c moleculele pot pstra o parte din energia lor sub form de
energie de vibraie. Acest exces de energie urmeaz a fi disipat n mediul nconjurtor prin
coliziuni mecanice sau alte procese neradiative cunoscute sub denumirea de relaxare
vibraional. Se mai poate uneori totui produce i o emisie de fotoni, evident mai sraci n
energie, care stau la baza unei fluorescene situate n IR apropiat.
Spectrul de absorbie i cel de fluorescen pentru diferii compui prezint (cu o bun
aproximaie) o simetrie, unul reprezentnd aproape imaginea n oglind a celuilalt. Cum e i
firesc absorbia este situat la lungimi de und mai mici, respectiv n conformitate cu
ecuaiile: E = h = hc/, la valori ale energiei, E, mai ridicate (fig. 3).
Fig. 3. Poziiile relative ale absorbiei i fluorescenei n cazul eozinei (se remarc o zon de
lungimi de und comun)
[88] S0, S1, T1 ... reprezint stri electronice (nivele energetice), iar V0, V1, ...nivele energetice de vibraie
caracterizate fiecare de un numr cuantic de vibraie uneori notat tot V0, V1,... . S i T sunt prescurtri
amintind sensurile de singlet, respectiv de triplet.
118
Fluorimetria i spectrometria de chemiluminiscen
dat cu transferul unui electron pe nivelul S1 (prima stare electronic excitat dup cea
fundamental - o stare de singlet) are loc, dac relaxarea vibraional se produce suficient de
lent, modificarea spinului electronului la o stare de triplet, notat T1 (fig. 2), ceva mai stabil
(metastabil). Din acest motiv, revenirea la starea fundamental este ncetinit, deoarece
implic o nou modificare de spin a acestui electron. Ca urmare, durata strii excitate n
fosforescen poate fi de 108 ori mai mare dect n fluorescen.
Se cunosc cteva reguli privind legtura dintre structura compuilor organici i
fluorescena acestora:
Moleculele organice care nu absorb puternic lumina peste 200 nm n general nu sunt
fluorescente.
Moleculele care au banda de absorbie corespunztoare tranziiei: S0S1 (v. fig. 1),
localizat la = 250nm i pentru care absorbia luminii se datorete unei tranziii (') sunt
fluorescente.
Substituenii - donori de electroni - grefai pe un sistem -delocalizat mresc ntotdeauna
absorbia luminii, intensificnd fluorescena. n acest sens, se pot aminti, de exemplu,
funciunile: OH > OR > NH2.
Grupele funcionale puternic atragtoare de electroni (grefate la sistemul ') tind s
reduc fluorescena moleculei respective. n plus prezena, alturi de acestea, a unor
grupri donoare de electroni, tinde s diminueze fluorescena (i nu s o intensifice).
n consecin, moleculele organice care au cel puin dou legturi conjugate i care
conin i o band de absorbie la > 200nm, cu un coeficient de absorbie 103Lmol-1cm-1,
prezint fluorescen i pot fi analizate fluorimetric. De exemplu, compuii moleculari ciclici
cu sisteme conjugate (fig. 4), care mai posed grupri funcionale donoare de electroni, se
preteaz foarte bine la acest tip de determinri.
O NH2 OH
N
Intensitatea fluorescenei
Semnalul analitic n fluorimetrie l constituie intensitatea fluorescenei, F. Valoarea
acesteia depinde att de poziia punctului de unde este emis radiaia ct i de poziiile
fantelor de intrare i ieire din celula de msur. Astfel, o parte a radiaiei incidente
(excitante) este absorbit de ctre lichidul din celul nainte de a atinge punctul de emisie iar o
parte a radiaiei de fluorescen, o dat emise, este absorbit de aceeai soluie, nainte ca
aceasta s prseasc celula. Asadar, intensitatea radiaiei de fluorescen care atinge
detectorul corespunde unui volum de soluie relativ mic prezent n spaiul delimitat de
proieciile ferestrelor de intrare i ieire din celul.
Fenomenul de diminuare a intensitii luminoase - numit impropriu filtrare intern -
se datorete mai ales suprapunerii pariale a spectrelor de fluorescen i de absorbie (fig. 3).
n afar de absorbia propriu zis, denumit i diminuare prin culoare, mai pot interveni
transferuri de energie de la molecule excitate la alte molecule sau la ioni strini din celul, n
urma unor coliziuni sau formri de compleci. Acest fenomen se numete diminuare chimic.
De exemplu, prezea oxigenului atmosferic provoac o diminuare suplimentar de
fluorescen.
De aceea, pentru soluii, se definete o mrime denumit randamentul fluorescenei,
f, cuprins ntre 0 i 1 - un parametru independent de intensitatea sursei:
f = (Numrul de fotoni emii)/(Numrul de fotoni absorbii) (1)
Se poate observa c aceast mrime reprezint fracia radiaiei incidente absorbite,
care este reemis sub form de fluorescen. Cu ajutorul acesteia, n soluii diluate, se poate
scrie o ecuaie a intensitii fluorescenei, F. n primul rnd trebuie s se in cont de factorii
care determin absorbana, A, ct i de lungimea, notat cu b, a parcursului radiaiei de
fluorescen prin celul. n consecin expresia intensitii fluorescenei se poate scrie:
F = fI0Ab (2)
unde cu I0 s-a notat intensitatea radiaiei incidente, A - absorbana soluiei (A = lC) iar b -
lungimea parcursului radiaiei de fluorescen prin celula de msur. nlocuind A avem:
F = fI0lbC (3)
unde C este concentraia molar a soluiei. nglobnd toate constantele care depind de celul,
respectiv de soluie, ntr-o singur constant, K, obinem o ecuaie mai simpl:
F = KI0C (4)
Pe baza acestei ecuaii se poate gsi experimental o curb de etalonare n coordonatele
F, C care este o dreapt (fig. 5 - stnga). Desigur c aceasta este valabil doar n soluii
diluate, ntruct s-a constatat c poate suferi modificri accentuate la concentraii superioare
(fig. 5 - dreapta) tocmai din cauzele amintite.
120
Fluorimetria i spectrometria de chemiluminiscen
F log(F)
C log(C)
-5 -5
10 510 -5 -4 -3 -2
Fig. 5. Relaia liniar dintre intensitatea fluorescenei, F, i concentraia C. Domeniul liniar
este relativ ngust iar la concentraii ridicate liniaritatea dispare
Aparatura
Deoarece proba spus analizei emite radiaia de fluorescen n toate direciile, pe
fotodioda sau fotomultiplicatorul instrumentului folosit cad doar radiaiile care vin n direcia
acestuia, n timp ce restul se pierd. De aceea suprafaa senzorului care preia radiaia trebuie s
fie ct mai mare. n general se msoar radiaia care prsete celula sub un unghi de 90
fa de radiaia incident. Pentru soluii cu absorban ridicat studiul se poate realiza i n
prelungirea fascicolului incident. Pentru soluii semiopace se preconizeaz o observare sub un
unghi variabil ntre 90-180. Geometria fluorimetrelor poate fi sintetizat ca n fig. 6.
Monocromator de
Surs Celul
excitare (1)
Unghiul:
90-180
Monocromator de f Detector
emisie (2)
Fig. 6. Geometria unui spectrofluorimetru actual; unghiul preferat de observare a
fluorescenei este 90 (f - fant)
Sursele optice ale fluorimetrelor actuale emit un spectru luminos continuu. Au devenit
uzuale urmtoarele lmpi folosite n calitate de surse:
Lmpile cu arc de deuteriu (190-400nm),
Lmpile cu arc de xenon (200-850nm),
Lmpile cu arc de wolfram (380-700nm).
Se mai utilizeaz i lmpile cu vapori de mercur care produc linii spectrale intense (la
254, 313 i 365nm). Acestea, pot fi izolate individual folosindu-se nite simple filtre optice.
De asemenea au mai aprut surse cu laser heliu-cadmiu (325nm, 5-10mW) care de asemenea
necesit un filtru optic i impun folosirea unor fotomultiplicatori.
Constructiv se pot distinge dou tipuri de fluorimetre: (1) bazate pe determinarea
raportului fluorescenelor i (2) spectrofluorimetre.
Surs de xenon
Oglind Referin
semitransparent
Prob
Monocromator1
Fotodiod1 Fotodiod2
Monocromator2
Calcul
raport Rezultat, F
Fig. 7. Schema unui spectrofluorimetru cu doi detetectori care elimin deriva sursei
Aplicaii
Exist un numr mic de molecule care posed o fluorescen natural. Acestea pot fi
analizate cantitativ prin fluorimetrie dac se dispune de substana pur (etalon). Numrul
acestora este foarte mic (5-8% din total). Pe de alt parte, aa cum exist reactivii de culoare,
122
Fluorimetria i spectrometria de chemiluminiscen
exist i o serie de reactivi de fluorescen care duc, n urma unei reacii chimice, la produi
fluoresceni. Din primul grup de metode amintim analiza hidrocarburilor policiclice aromatice
din ape, n urma separrii acestora prin cromatografie. Tot n categoria acestui prim grup intr
i determinarea aflatoxinelor - nite ageni cancerigeni prezeni n alimente dar i o serie de
alte substane importante cum ar fi steroizi i vitamine. Din a doua grup de metode amintim
determinrile unor cationi metalici cum ar fi Be2+ cu reactivul morin sau unii compleci ai
metalelor trivalente cu oxina (8-oxichinoleina).
Determinarea dioxidului de sulf (SO2) prin fluorimetrie n UV
Se bazeaz pe excitarea moleculelor de SO2 din prob cu o lamp UV pulsatorie
(avnd o frecven de 20kHz) cu < 214nm. Moleculele de SO2 emit prin excitare o
fluorescen cu lungimea de unda de 214nm, foarte specific. Aceast metod st la baza
celor mai performanre analizoare de SO2 permind determinarea 1ppb n aer. Mai mult,
folosindu-se cuptoare de conversie oxidative prin care H2S este convertit la SO2 se pot
construi analizoare att pentru SO2 ct i pentru H2S.
O scem de principiu a analizorului pentru SO2 prin fluorescen n UV este
prezentat n fig. 8.
Prob Evacuare
Lamp
UV
Fotodetector de
SO2 control
Fotomultiplicator
Fig. 8. Schema de principiu a analizorului pentru dioxid de sulf bazat pe fluorescen n UV
Chemiluminescena
Exist reacii chimice care sunt nsoite de emisie luminoas. O astfel de substan este
luminol-ul care poate reaciona cu ferul (II) i permite punerea n eviden a unor concentraii
mici din acest element.
O astfel de reacie este i cea utilizat pentru determinarea monoxidului de azot, NO n
amestec cu dioxidul de azot, NO2 (fig. 8).
Aceti oxizi rezult prin arderea combustibililor la temperaturi ridicate n prezena
azotului din aer i constituie poluani ai aerului. Metoda are la baz reacia de oxidare a NO
cu ozon rezultnd, ntr-o prim faz, NO2* (adic o form excitat a dioxidului de azot) - o
Chimie Analitic i Instrumental 123
10
Prob V Mo Convertiz
or
Filtru NO NOx
NOx
Fig. 8. Reprezentarea schematic a utilizrii metodei msurrii luminescenei pentru
monitorizarea oxizilor de azot din aer
Proba de aer este n prealabil filtrat pe un filtru i se desparte prin dou conducte. Pe
drumul (1) exist o etuv-convertizor care conine o coloan umplut cu pulbere de molibden.
La nclzire, Mo din coloan provoac reducerea doar pentru dioxidul de azot:
NO2 + Mo NO + MoO3
Deci, pe drumul (2) gazul rmne nemodificat iar pe drumul (1) amestecul este
convertit integral la NO. Apoi, fraciunile (1) i (2) intr n cele dou celule de luminescen,
ambele alimentate cu ozon (O3) - produs de un ozonizator (inclus n instalaie). n celule au
loc exact aceleai reacii:
NO + O3 NO2* + O2, NO2* NO2 + h
Luminescena este emis doar de dioxidul de azot proaspt obinut (fiind n stare
excitat - notat *), aprut prin reacia amintit anterior, avnd lungimea de und = 1.2m
(1200nm), situat n infraroul apropiat. Semnalele de la cele dou celule ajung alternativ la
blocul fotomultiplicator B - durata fiind determinat de poziia chopper-ului (notat C). O
perioad de timp se nregistreaz semnalul din celula NOx i o alt perioad, cel din celula
NO (fig. 8). De aici semnalul este preluat de un microprocesor i transformat n concentraie
rezolvndu-se ecuaia:
F = KCNO (5)
124
Fluorimetria i spectrometria de chemiluminiscen
ntrebri de verificare
1. Ce este fluorescena?
2. Prin ce se deosebete fluorescena de fosforescen?
3. Ce este un reactiv de fluorescen?
4. Ce fenomen fizic st la baza luminescenei?
5. Ce avantaje i ce dezavantaje prezint metodele fluorimetrice?
6. Care fenomen este situat la lungimi de und mai mici, pentru aceeai substan, absorbia
sau fluorescena?
7. Care sunt principalele reguli care guverneaz apariia fluorescenei?
8. Ce este intensitatea fluorescenei i care sunt factorii care o determin?
9. n ce coordonate se construiete o curb de etalonare n fluorimetrie?
10. Ce surse optice se folosesc n fluorimetrie? Dar n metodele prin luminescen?
11. Ce tipuri de instrumente analitice cunoatei n fluorimetrie?
12. Ce gaze, avnd mari implicaii n protecia mediului, se pot monitoriza prin metodele
fluorescenei i luminescenei?
13. Ce metode generale de analiz prin fluorescen cunoatei?
Nefelometria i turbidimetria
Principii generale
Difuzia luminii reprezint fenomenul de mprtiere a luminii datorat
neomogenitilor mediului - indiferent dac este vorba de un mediu gazos, lichid sau solid.
Att nefelometria ct i turbidimetria reprezint aplicaii analitice ale fenomenelor
asociate difuziei luminii (fig. 1). Astfel, la trecerea luminii printr-un mediu dispers, heterogen
(sistem coloidal), dac neglijm lumina reflectat, putem scrie innd cont de difuzia i
absorbia luminii:
I0 = Ia + Id + I (1)
unde s-a notat cu I0 - intensitatea luminii incidente, Ia - intensitatea luminii absorbite, Id -
intensitatea luminii difuzate i I - intensitatea luminii transmise.
I0
I
Turbidimetrie
Nefelometrie
Id
[89] Un astfel de sistem (coloidal) are dimensiunile particulelor n domeniul 10-6 - 10-9 m.
[90] http://hyperphysics.phy-astr.gsu.edu/hbase/atmos/blusky.html#c2
126
Nefelometria i turbidimetria
Nefelometria
Nefelometria este o tehnic de analiz instrumental bazat pe msurarea intensitii
luminii difuzate, Id datorate unei anumite specii chimice, greu solubil n mediul lichid i
avnd o granulaie fin (sistem coloidal). Lucrnd la un unghi cunoscut, pe un amestec
cunoscut de substane i ntr-un mediu cu indice de refracie constant, la o finee ridicat a
particulelor (la o dimensiune apropiat de lungimea de und a luminii incidente) ecuaia lui
Rayleigh devine:
Id = I0Kcv2 (4)
unde c este concentraia substanei n suspensie, v - volumul particulelor iar K o constant de
proporionalitate. n vederea analizei chimice, evident, se recurge la o curb de etalonare
liniar: Id = f(c). Unghiul de msurare depinde de fineea particulelor. Cnd aceasta este mic
se recurge la un unghi de 45 sau 90. Cnd fineea este moderat se msoar lumina
transmis, adic = 0 iar cnd particulele sunt foarte mari sau concentraia mai ridicat, se
prefer unghiuri mari, adic se msoar deviaia napoi a luminii (retrodifuzia).
Pentru a se putea aplica metoda, n prealabil se precipit ionii elementului de analizat.
Acest lucru se realizeaz prin adaosul unui reactiv de precipitare, astfel nct s apar o
combinaie greu solubil, dar ntr-o concentraie potrivit i anume ntreaga cantitate
precipitat s ajung doar n perioada iniial de formare a precipitatului. Dup cum se tie, c
condiia de apariie a unui precipitat MA, rezultat prin combinarea unui cation M+ cu un anion
A-, este dat de produsul:
[M+][A-] > KMA (5)
unde KMA este produsul de solubilitate - o constant cunoscut pentru un compus greu solubil
(la o temperatur dat). Evident, metoda se poate aplica pentru oricare din ionii care pot lua
parte la o reacie de precipitare, de exemplu perechile de anion i cation: (SO42-; Ba2+), (Cl-;
Ag+) sau (C2O42-; Ca2+) etc.
Orice proces de precipitare depinde de mai muli factori ca: natura reactivilor,
concentraia acestora, temperatura, pH-ul, viteza de adugare a reactivilor, agitarea i mediul
de reacie. Este deosebit de dificil de reprodus ntocmai toate aceste condiii. Peste toate
acestea, nu trebuie uitat c sistemul coloidal (microeterogen) aprut nu este stabil. Pentru a se
stabiliza sistemul, se recurge la ncetinirea proceselor de difuzie - adic a deplasrii
particulelor (ceea ce micoreaz probabilitatea ciocnirilor) prin mrirea viscozitii mediului.
Pe de alt parte, alturi de electroliii din reactivii participani la reacia de precipitare, se mai
introduce un electrolit tare care, prin sarcina superficial creat, va micora viteza de
coagulare.
Turbidimetria
Tubidimetria este tehnica nefelometric n care unghiul de observaie este zero - adic
msurarea se face n lumina transmis. Pentru aceste determinri pot fi folosite tot
spectrofotometrele din domeniul vizibil dar sunt preferate instrumente specializate denumite
turbidimetre. Pn nu demult, se utilizau ca surse luminoase lmpi cu filament din W, dar
acestea consum o cantitate mare de energie. n locul acestora, la aparatele de astzi, se
folosesc fotodiodele, care au o durat de via mai mare, consum mai redus de energie i sunt
mai stabile. Unele aparate mai utilizeaz, de asemenea, tuburi bazate pe descrcri n gaze, cu
xenon.
Ultimele dou surse de lumin pot fi i intermitente (prin utilizarea unui chopper),
reducnd i mai mult energia folosind n circuitul de prelucrare a semnalului un curent
alternativ, care permite o mrire a stabilitii electronice. Frecvena pulsaiilor este n
domeniul a 5-10Hz. Fereastra optic, se poate murdri dar acest lucru se poate compensa prin
msurarea periodic a absorbiei n dou lungimi de und n ap pur, anulnd variaia. Unele
instrumente includ sisteme de curire automat fie ultrasonice, fie mecanice - utiliznd un
piston. Exist modele de aparate care combin sistemul de difuzie lateral (90) cu
transmiterea direct a luminii. Aceste instrumente permit s se fac o distincie ntre lumina
pierdut - datorit materialelor dizolvate n ap (dnd o tent colorat apei) - i particulele n
suspensie. Ambele categorii de materiale contribuie la atenuarea intensitii razei incidente,
dar numai particulele n suspensie provoac difuzia luminii.
128
Nefelometria i turbidimetria
Etapa urmtoare o constituie analiza propriu zis. 10ml de prob, supus analizei,
eventual diluat n prealabil, se aduce ntr-un balon de 100ml, se adaug tot 20ml electrolit i
se completeaz pn la 40ml cu ap distilat. Apoi se adaug 15ml de BaCl22H2O 10% i
dup omogenizare se aduce la semn cu ap distilat. Se ateapt 5 minute i se msoar
absorbana, n exact aceleai condiii. Se repet proba de 2-3 ori, i se calculeaz media
citirilor absorbanei. Cu ajutorul acesteia, de pe curba de etalonare se determin concentraia
probei necunoscute.
Metoda turbidimetric, n afar de varianta direct, amintit anterior, se mai poate
aplica i n alte dou variante. Una dintre acestea poart denumirea de cinetic turbidimetric.
n aceast variant, se determin viteza reaciei, notat dx/dt unde cu x s-a notat concentraia
produsului reaciei de precipitare. Pentru momentul iniial se poate scrie ( k este constanta de
vitez iar cu [c]0 s-a notat concentraia iniial a ionului de analizat iar cu [R]0 concentraia
iniial a reactivului de precipitare):
dx
= k [c]0 [R]0 (7)
dt
De regul, n aceast variant se msoar viteza reaciei n momentul iniial, cnd
concentraia x este joas, pn n momentul atingerii unei variaii de concentraii fixate x. n
aceste condiii se poate scrie relaia aproximativ:
x = k [c]0 [R]0 t (8)
Msurndu-se de fiecare dat timpul i absorbana, pn la atingerea unei valori fixate
a acesteia, intervalul de timp t va fi proporional cu x, deci i cu concentraia ionului
precipitat [c]0. Lucrndu-se pe soluii cunoscute, se construiete mai nti o curb etalon t =
f(c). Msurnd i n cazul probei necunoscute intervalul de timp t, pn la atingerea aceleiai
turbiditi (sau aceleiai absorbane, n cazul utilizrii unui spectrofotometru), n condiii
absolut identice, se poate evalua din curba de etalonare proba necunoscut.
O a doua variant foarte mult aplicat este titrarea turbidimetric. n aceast metod
se msoar turbiditatea, S, n timpul adugrii cu vitez constant a soluiei coninnd
reactivul de precipitare, ntr-un volum V. Se reprezint grafic curba S = f(V). Graficul are o
form apropiat de cele reprezentate n fig. 2. Din discontinuitatea observat se determin
volumul de echivalen, care permite calculul pe baza celor artate la metoda volumetric.
Graficul arat diferit pentru c uneori excesul de reactiv provoac dizolvarea precipitatului
format iniial iar alteori se micoreaz solubilitatea pe baza efectului ionului comun asupra
solubilitii [91].
[91] Ionul comun introdus n soluie, datorit constanei produsului de solubilitate, micoreaz n general
solubilitatea unui precipitat.
130
Nefelometria i turbidimetria
S S
Ve Ve V
V
ntrebri de verificare
1. Pe ce fenomen general se bazeaz att nefelometria ct i turbidimetria?
2. Ce mrime se determin n cazul nefelometriei i ce mrime n cazul turbidimetriei?
3. Care trebuie s fie relaia ntre diametrul particulelor i lungimea de und n cazul metodei
nefelometrice?
4. Cnd este recomandat examinarea la unghiuri apropiate de 180 ?
5. n ce const titrarea turbidimetric?
6. Ce parametru se msoar n cinetica turbidimetric?
7. Cu ce reactiv se poate determina sulfatul din ape, tubidimetric?
8. Ce este formazina i la ce se folosete?
9. Cu ce ecuaie se aseamn ecuaia utilizat n turbidimetrie pentru analiza cantitativ?/
[92] Unitile FNU sau, mai recent NTU, reprezint uniti standardizate, introduse de USEPA i recunoscute de
standardele europene ISO, mai concret ISO-70227
132
Refractometria i polarimetria
Toat fizica este fie imposibil fie trivial; este imposibil pn o nelegi, apoi, devine trivial
Ernest Rutherford (1871- 1937)
Refractometria i polarimetria
Refractometria
Indicele de refracie notat n la o temperatur dat i lucrnd cu lumin de lungime de
und, , fixat este o constant fizic important care caracterizeaz cu precizie o substan
chimic deoarece mici cantiti de impuriti modific valoarea acestui indice. Msurtorile
de indici de refracie se pot realiza rapid i cu cantiti mici de substan, aparatura fiind
relativ ieftin. Se tie din fizic ce este refracia i indicele de refracie. Pe figura alaturat
(vezi fig. 1) am reprezentat trecerea energiei radiante dintr-un mediu 1 ntr-un mediu 2.
Fenomenul de schimbare a direciei de propagare caracterizat prin unghiul i, respectiv r, se
numete refracie.
n1sin(i) = n2sin(r)
i
1(n1)
2(n2)
r
Fig. 1. Fenomenul refraciei i legea dup care se petrece
(n 2 1)
r= (3)
(n 2 + 2) d
numit tot refracie specific. Produsul dintre aceasta i masa molar a primit denumirea de
refracia molar - tot o constant de material - fiind utilizat astzi n caracterizarea fizico-
chimic a substanelor chimice (Lorenz-Lorenz):
(n 2 1) M
R= (4)
(n 2 + 2) d
Aceasta este o funcie liniar de compoziia materialului (exprimat prin fracii
molare) i, de exemplu, pentru o soluie coninnd n substane, se poate exprima: R = x1R1 +
x2R2 + + xnRn. Pentru molecule organice exist o importan deosebit, diferitele poriuni
structurale ale aceleiai molecule permind, pentru o anumit clas de substane, obinerea
prin calcul din refraciile atomice, a refraciei molare. De asemenea pentru materiale sau
soluii refracia molar poate fi suma produselor fraciilor molare cu refraciilor molare ale
componenilor materialelor (soluiilor).
Indicele de refracie se determin cu refractometre i interferometre. Interferometrele
sunt ns mult mai precise dect refractometrele. Astfel n timp ce refractometrele dau indicii
de refracie cu erori de 10-5 interferometrele msoar cu erori de 10-8.
Metoda se aplic la determinarea gradului de puritate, pentru stabilirea compoziiei
sistemelor binare i ternare (de exemplu 3 solveni organici) precum i la stabilirea unor
structuri. Civa indici de refracie ai unor lichide sunt prezentai n tabelul 1.
[93] Amestecuri formate doar din dou substane diferite, fiecare avnd un indice de refracie n specific.
134
Refractometria i polarimetria
de inciden de 90. Se observ c n = N sin . Cum + ' = 90 avem, innd cont de valoarea
din fig. 2:
Elipsometria
Se bazeaz pe proprietatea filmelor foarte subiri, metalice, de a schimba starea de
polarizare a luminii reflectate sub unghiuri mici (<90) dintr-o lumin polarizat n plan ntr-
una polarizat eliptic. Elipsometria determin polarizarea eliptic provocat de filmul subire.
Acest studiu se efectueaz n timp, pe parcursul desfurrii procesului de electroliz,
coroziune etc.
ntrebri de verificare
1. Indicele de refracie se msoar n lumin alb sau n lumin monocromatic?
2. La ce unghi de inciden se petrece reflexia total?
3. Care sunt cele mai cunoscute refractometre?
4. Cum se numete indicele de refracie ntre un mediu dat i vid? Prin ce se deosebete fa
de cel determinat n aer?
5. Ce este refracia molar i la ce servete aceasta? Ce proprietate are refracia molar la
soluii?
6. Ce relaie exist ntre indicele de refracie n i constanta dielectric a materialului ?
7. Cu ce aparate se poate determina indicele de refracie? Dar rotaia specific?
8. Ce msoar elipsometria?
9. Cum se calculeaz rotaia specific pentru o soluie, dup ce se msoar experimental
unghiul de rotaie ?
136
Spectrometria de fluorescen X (XRF)
Principiul metodei
Aceast metod este utilizat pe scar larg pentru determinarea calitativa i
cantitativ a compoziiei chimice elementare a unei probe, mai ales pentru substane
anorganice (minerale, ceramice, metale, soluri etc.) - n special n industrie. Tehnica se
deosebete fundamental de difracia cu raze X. Aceasta din urm se bazeaz pe faptul c
lungimea de unda a radiaiei X (sau raze Rntgen [94]) este de acelai ordin de mrime cu
distanele dintre nodurile reelelor cristaline (atomice, metalice, ionice sau moleculare) i, ca o
consecin a difraciei i interferenei, apar maxime ale intensitii razelor emergente, la
anumite unghiuri.
Raza X caracteristic
Raza X primar
Proba
n fluorescena de raze X (XRF [95]) lucrurile se petrec altfel. Anume, au loc succesiv
urmtoarele procese:
1. Electronii interiori ai atomilor probei sunt expulzai datorit ciocnirilor cu fotonii X ai
sursei de raze X primare (fig. 1 i 4).
2. Electronii din straturile exterioare ocup locurile rmase vacante de pe straturile inferioare
(K, L, M).
3. n urma tranziiilor care au loc, se elibereaz cuante de energie din domeniul razelor X
care prsesc proba n toate direciile.
Energia sursei de raze X este cuprins ntre 5 i 100keV. Razele X primare, cum se
numesc radiaiile care provin de la surs (adesea un tub de raze X), sunt dirijate spre proba
supus analizei. Radiaiile X caracteristice - specifice elementelor probei i reemise de ctre
aceasta - prsesc eantionul, coninnd informaii care permit stabilirea compoziiei chimice
[94] Denumirea de radiaie Rntgen se folosete mult n literatura internaional n onoarea fizicianului german
K. Rntgen - descoperitorul acestor raze.
[95] XRF este prescurtarea din l. engl. a denumirii internaionale: X-Ray Fluorimetry.
Chimie Analitic i Instrumental 137
13
Fig. 2. Schia de principiu a funcionrii Fig. 3. Spectrul tipic emis de un tub de raze
tubului de raze X (tub Rntgen) X cu anticatod din molibden
[96] Nu este neaprat necesar s fie fotoni X. Se pot obine spectre de fluorescen X i cu surse de electroni
(tunuri electronice), surse de radiaii sau chiar de radiaii . Toate au un principiu similar.
138
Spectrometria de fluorescen X (XRF)
superioare - mai bogai n energie. Diferena de energie este emis sub forma unei cuante
care, pentru majoritatea atomilor din sistemul periodic, se gsete n domeniul razelor X. Doar
elementele uoare Z = 1..5 nu au aceste tranziii n domeniul razelor X. n plus, spectrul de
fluorescen X, cum se mai numete ansamblul liniilor produse n maniera amintit, nu
depinde dect n foarte mic msur de natura combinaiei chimice n care se gsete atomul
n proba de analizat.
Fig. 4. Tranziiile care provoac principalele linii utilizate n analiza prin FRX
Razele X primare care prsesc tubul de raze X, sunt dirijate apoi asupra probei de
analizat. Aceasta, va emite aa-numita radiaie de fluorescen - caracteristic elementelor
probei, fiind nsoit i de o radiaie continu care are un spectru larg datorit interaciunii
electronilor cu cmpul electric al nucleului.
Dac din punct de vedere calitativ, spectrul de raze X al probei este simplu (are 2 sau
3 linii principale) i n acesta foarte rar se suprapun dou linii de la doi atomi diferii, analiza
cantitativ, care utilizeaz valoarea intensitii radiaiilor X caracteristice, ntmpin cteva
dificulti majore. n primul rnd, excitarea atomilor din prob are loc doar ntr-un strat
subire de la suprafaa probei, a crui grosime depinde de energia sursei (variind ntre cteva
sute de microni la 1cm). De aceea orice neuniformiti ale suprafeei pot influena rezultatul.
Apoi, unii atomi absorb doar anumite radiaii i acest lucru determin o influen a
compoziiei chimice a probei asupra rezultatelor valorii intensitii msurate. Efectele de
matrice - denumire dat totalitii efectelor provocate de ctre elementele nsoitoare asupra
rezultatului analitic, pentru un element dat - fac necesare, n cazul analizelor cantitative,
precauii deosebite n pregtirea probelor. Spectrometrele cu dispersie dup lungimea de und
lucreaz cel mai des n vid i mai rar n atmosfera format din amestecuri aer - metan, tocmai
pentru a elimina efectele atmosferei. Exist dou posibiliti de analiz a semnalelor
(msurate ca intensiti de radiaii X):
Chimie Analitic i Instrumental 139
13
Gaz P-90
140
Spectrometria de fluorescen X (XRF)
d
Fig. 7. Reflexia razelor X pe planele formate de ctre atomii dintr-un cristal
Spectrofotometrele de raze X cu dispersie dup lungime de und pot fi construite n
dou variante diferite:
Analizoarele secveniale la care ntreg sistemul cristal-detector se rotete sincron
[97] Este vorba de o difracie, n toate direciile i o interferen care poate fi constructiv, la unghiul care
respect ecuaia lui Bragg, sau distructiv la celelalte
Chimie Analitic i Instrumental 141
13
parcurgnd mpreun toate unghiurile posibile. Astfel, semnalul va fi o curb cu mai multe
picuri n coordonate: 2 - I. Aceste analizoare sunt preferate n cercetare pentru c pot
analiza numeroase elemente. Prezint uneori dezavantajul c durata analizelor de acest fel
este uneori prea mare.
Analizoarele multicanal sunt prevzute prin construcie cu mai muli detectori i msoar
simultan radiaia de fluorescen a probei, fiecare dintre perechile cristal analizor - detector
fiind situate la un anumit unghi, , dinainte reglat, caracteristic doar pentru un anumit
element. Ultima variant este preferat n analizoarele industriale unde probele au
compoziii apropiate, iar analizele trebuie s fie rapide. Dezavantajul const n faptul c n
cazul unor probe cu compoziie neateptat, mai ales dac conin alte elemente dect
probele curente, se obin rezultate complet eronate.
142
Spectrometria de fluorescen X (XRF)
surse, izotopi radioactivi. De asemenea, se mai poate utiliza radiaia unor sincrotroane.
Detectorii folosii cel mai frecvent sunt detectorii pe baz de semiconductori Si(Li
adic formai din siliciu dopat cu litiu. Acetia nregistreaz un semnal avnd nlimea
proporional cu energia fotonului incident, n urma unei descrcri n avalan la care
particip electronul i golul aprut (v. fig. 9).
La ptrunderea unui foton X n interiorul unui cristal, acesta provoac, n urma
coliziunilor cu atomii componeni ai reelei, eliberarea unor fotoelectroni cu energie ridicat
care i pierd, prin ciocniri, energia n urma unor interaciuni multiple. Aceste interaciuni
promoveaz electroni din banda de valen n banda de conducie, lsnd n urma acestor
promovri goluri n banda de valen. Perechile electron - gol sunt colectate de tensiunea
nalt (-1000V), ceea ce duce la apariia unui puls de curent cu totul analog celui din contorul
proporional. Colectarea sarcinilor este ns mai eficient dect ntr-un gaz.
Un detector de acest tip se realizeaz din siliciu de nalt puritate n care, prin
scufundare ntr-o sare de Li topit, sub un cmp electric, se introduc n reea atomi de Li, la
temperaturi de 350-450C. Rolul litiului - un dopant de tip n - este acela de a evita
descrcrile n avalan fr prezena fotonilor X, descrcri posibile datorit naltei tensiuni.
Aceti detectori opereaz la temperatur joas (77 K) folosindu-se un criostat cu N2 lichid.
Modificndu-se tensiunea de alimentare a detectorului, n trepte egale, se schimb i valoarea
energiei medii nregistrate. nlimile pulsurilor sunt separate electronic folosind un analizor
de pulsuri. Se obine astfel un grafic intensitate n funcie de energie cu totul similar celui din
metoda precedent. Un exemplu de rezultat analitic este prezentat n fig. 10.
Fig. 10. Spectrul de fluorescen X a unei probe etalon (NBS nr. 1571) folosind un analizor
cu geometria din fig. 7 i int secundar de Mo
Pentru scopuri speciale se mai utilizeaz i ali detectori cum ar fi cei pe baz de
semiconductori cu Ge(Li), CdZnTe sau HgI2. Dac pentru analizele cantitative se pot utiliza
probele, practic fr nici o prelucrare, n cazul analizelor cantitative problemele sunt aceleai
ca la metoda dispersiei dup lungimea de und, fiind necesare probe perfect plane, omogene
i etaloane din aceleai materiale ca i cele supuse analizei.
Avantajele metodei sunt: simplitatea instrumentaiei (de exemplu nu exist pri n
micare), iar analiza cantitativ dureaz circa 30 secunde. n locul tubului de raze X de
energie nalt, de dimensiuni mari, scump i mare consumator de energie se folosesc tuburi de
raze X de putere mic, radioizotopi sau raze ionice. Analiza calitativ este foarte sensibil
putnd merge, att pentru lichide ct i pentru solide, pn la ppm pentru toate elementele de
la B la Al.
XRF cu reflexie total are la baz exact acelai principiu ca i analiza XRF cu
dispersie dup energie convenional, dar utilizeaz un aranjament geometric specific pentru a
maximiza raportul semnal/zgomot. Astfel, cnd radiaia trece dintr-un mediu cu o densitate
mai mic ntr-unul cu densitate mai ridicat, radiaia sufer o reflexie total dac unghiul de
inciden este situat sub un anumit unghi critic (civa miliradiani n cazul razelor X). Razele
incidente, ptrund n suprafaa reflectant extrem de puin. Iluminnd proba cu o raz care
este reflectat total, absorbia acesteia de ctre suport este mult redus. Acest lucru reduce
zgomotul de fond. De asemenea, realiznd stratul de prob foarte subire se reduce i mai
mult zgomotul de fond. Astfel, o prob format dintr-o micro-pictur de soluie (ntre 10 i
100l) este plasat pe un suport din silicagel. Prin evaporarea solventului, rezult un strat
extrem de subire de substan - de civa nanometri. Apoi se face msurtoarea n maniera
144
Spectrometria de fluorescen X (XRF)
[98] 1 ppb = o parte per miliard (109 pri). Din l. engl. part per billion.
adugarea unei cantiti cunoscute din elementul de dozat, diluarea probei; analiza cantitativ
prin calcul.
n continuare, se vor prezenta procedee de calcul aplicate la analiza prin fluorescena
de raze X. Pentru determinarea concentraiilor unor elemente n probe de compoziie
necunoscut, este necesar trasarea curbelor de calibrare. Acestea sunt obinute dintr-un
numr de probe standard, pentru care, concentraia, C, a elementului cutat este cunoscut. Se
msoar intensitatea, I, a probei standard, apoi pe baza unui program se traseaz curba de
calibrare liniar sau ptratic pentru perechi de valori ale intensitii i concentraiei, folosind
metoda celor mai mici ptrate. Pentru un element oarecare, i, expresia de calcul este:
Ci = bi + miIi + mi,iIi2 (2)
unde: Ci este concentraia elementului i cunoscut n procente, Ii - intensitatea msurat, bi -
fondul spectral, mi - coeficient al termenului liniar, mi,i - coeficientul termenului ptratic care
este egal cu zero n aproximaia liniar.
Odat stabilite valorile lui bi, mi i mi,i ale curbei optime, pe baza etaloanelor, acestea
se stocheaz n memoria calculatorului. Apoi, calculatorul poate fi comandat s determine
concentraia elementului x din proba necunoscut pe baza valorii Ix - msurate dup
introducerea eantionului n analizor. Dac n probele supuse analizelor exist fluctuaii mari
ale concentraiilor elementelor nsoitoare, trebuie s se in cont de efectul de matrice. Acesta
nseamn s se ia n considerare efectul tuturor elementelor j (diferite de elementul i) care
trebuie i ele analizate. Efectul de matrice const n:
absorbia radiaiei caracteristice a elementului i de ctre elementul j;
excitaia secundar a radiaiei caracteristice a elementului i de ctre radiaiile caracteristice
ale elementului j;
creterea fondului radiaiei caracteristice, pentru un element i, datorit prezenei radiaiilor
altor elemente j, care sunt reflectate aproximativ sub acelai unghi. Primele dou efecte -
numite uzual, interaciuni - sunt luate n considerare prin valoarea coeficientului mi. Cel de
al treilea efect, numit efect de suprapunere, este luat n considerare prin valoarea
coeficientul de suprapunere, bij.
Efectul de matrice poate fi modelat matematic cu ajutorul ecuaiei lui Lucas-Tooth i
Paine (preferat pn la apariia calculatoarelor moderne):
Ci = ai + biIi(1+jiki,jIj) (3)
unde: Ci este concentraia cunoscut a elementului; i, bij sunt coeficieni explicai mai sus; iar
Ii i Ij sunt intensitile msurate pentru elementele i, respectiv j. n situaia n care coeficienii
sunt stabilii pe baza unor msurtori efectuate pe un numr de probe standard, cunoscute
precis prin analize chimice clasice sau prin cntrire, concentraiile Ci pot fi calculate, ntr-o a
146
Spectrometria de fluorescen X (XRF)
doua etap, cu ajutorul intensitilor brute, Ii, respectiv Ij, determinate pe probele necunoscute.
n ultimul timp prin ptrunderea calculatoarelor pe scar larg, ecuaia preferat n
analizoarele moderne a devenit ecuaia lui Sherman (vezi anexa 2) care ia n considerare att
absorbia ct si intensificarea fluorescenei. O form simplificat a ecuaiei lui Sherman este
cea a lui LaChance i Trail care folosete coeficienii alfa determinai experimental cu
ajutorul unui set de probe etalon cunoscute:
Ci = Ri(1+jii,jCj) (4)
unde Ri este intensitatea relativ (adic Ri=Ii/I0 cu Ii valoarea msurat pentru elementul i pe o
prob i I0 valoarea msurat pentru acelai element i, pur, Ci - concentraia elementului
pentru care se face etalonarea iar Cj - concentraia tuturor elementelor, astfel nct:
Cj = 1 (5)
Prezenta metod de analiz chimic este una din cele mai evoluate tehnici, folosit
astzi pe scar larg n industria metalurgic, industria cimentului, a silicailor, refractarelor
sau n cea minier (metalifer i nemetalifer). n cazul elementelor carbon i sulf se prefer
totui o analiz separat din cauza erorilor ce pot aprea cu frecven mai mare la cele dou
elemente dar i a concentraiei mici n care se gsesc acestea n aliajele metalice. Metoda
preferat pentru ultimele este combustia n oxigen urmat de detecia prin spectrofotometrie
n IR (la lungimi de und diferite) sau absorbia consecutiv celor dou elemente n soluii
apoase urmat de determinarea celor dou elemente prin titrri cu indicare instrumental de
exemplu prin metode coulometrice.
Aplicaii
Marele succes al acestei metode de analiz provine din faptul ca eantioanele nu se
distrug n urma analizei iar probele, n special cele metalice sau pulberile, nu necesit un
tratament chimic prealabil. Natura probelor analizate poate fi foarte diferit: metale, aliaje,
materiale ceramice sticl pulberi de orice tip. La nceput, metoda a fost preferat n industriile
de mare tonaj (minier, siderurgic, ciment, ceramic, sticl etc.) dar n ultimul timp, datorit
comoditii i ridicrii performanelor instrumentaiei, aplicaiile s-au extins i n alte domenii
(fotografie, semiconductori, industria petrolier, geologie, papetrie, toxicologie sau controlul
poluanilor mediului). n fine, cuplajul acestei tehnici cu microscopia electronic a condus la
microanaliza X (sau microsonda electronic) care permite pentru probe care, n mod ideal
sunt conductori, s se realizeze o adevrat cartografie a compoziiei chimice pe fiecare
element macro- sau micro-structural din materialul studiat. Cu progresele recente n domeniul
detectorilor, elementele analizate s-au extins astfel nct, cu anumite precauii, acestea pot fi
determinate de la numrul atomic Z = 5 (B) la Z = 92 (U). n oricare din aplicaii analiza pe
elemente se face indiferent de natura legturilor chimice ale atomilor elementului respectiv
deoarece fenomenul de fluorescen se datoreaz electronilor interiori pe cnd legturile
chimice, electronilor exteriori ai atomilor. Pentru a se analiza i tipurile de structuri dintr-un
material s-au introdus analizoarele de fluorescen X i, simultan, de difracie de raze X, care
dau att compoziia pe substane chimice (minerale, compui intermetalici) ct i pe elemente.
Probele
Probele destinate analizelor cantitative trebuie s aib suprafeele lefuite (netede) i
se fac de obicei n form de discuri de diametrul 40 sau 20mm i o grosime mai mare de 2mm
i de maximum 3cm. Aceste discuri pot fi din pulberi presate, de regul cu un liant, ales n aa
fel nct s nu elibereze produi gazoi n vid (H3BO3) sau discuri turnate n cazul topiturilor -
aliaje metalice sau obinute din probe dizolvate prin topire cu fondani (de ex. Li2B4O7) i
diveri aditivi n creuzete din platin i, n ultimul caz, turnate n forme din Pt cu 5%Au.
Pulberile se preseaz sub form de discuri utiliznd un liant anorganic (acid boric) sau organic
(carboximetilceluloz), dup o prealabil omogenizare cu liantul respectiv. Liantul nu va
depi 10% din compoziia discului (pastilei). Mediul suport mai poate fi constituit i din
hrtie de filtru, filtre cu pori micronici sau chiar membrane schimbtoare de ioni.
ntrebri de verificare
1. Ce particule interacioneaz cu proba de analizat n analiza chimic prin XRF?
2. Cum se numesc n XRF radiaiile care poart informaii de compoziie chimic a probei?
3. Ce particule sunt accelerate n cmp electric n tubul de raze X pentru generarea acestora?
4. Care sunt mrimile fizice care intervin n ecuaia lui Bragg?
5. Ce se nelege prin radiaia continu emis de tubul de raze X?
6. La ce servete cristalul analizor n dispersia dup lungime de und?
7. Ce fel de elemente chimice pot fi analizate prin XRF?
8. Dai cteva exemple de cristale analizoare!
9. Prin ce se deosebete instrumentaia metodelor cu dispersie dup lungimea de und fa de
cele bazate pe dispersia dup energie?
10. Ce provoac un foton X ntr-un contor proporional cu gaz?
11. Care este rolul litiului n semiconductorul dintr-un contor pe baz de Si(Li)?
12. Ce avantaje prezint microsonda cu raze X?
13. La ce fel de determinri se preteaz metoda de analiz XRF care utilizeaz filtre?
14. Ce se nelege prin termenul interaciuni n XRF?
15. Care metod de calcul ine cont de interaciunile element-matrice n analiza chimic
cantitativ prin XRF?
148
Metode cromatografice - privire de ansamblu
Oricare pic are, n cazul ideal, forma distribuiei normale Gauss. S considerm cea
mai simpl cromatogram posibil: cazul introducerii unui singur component, ntr-un gaz, C,
care conine urme de aer - aerul fiind un component inert. Aspectul acestei cromatograme este
cel prezentat n fig. 1. Pe axa absciselor s-a considerat timpul (sau volumul) de eluent scurs,
cu debit cunoscut, de la introducerea (injectarea) probei, iar pe cea a ordonatelor, semnalul
detectorului - n uniti arbitrare. Distingem urmtoarele elemente de baz:
Picurile cromatografice. n cazul prezentat n fig. 1, cele dou semnale sau vrfuri sunt
denumite picuri. Acestea sunt semnalele valorificabile n analiza calitativ i cantitativ n
toate metodele cromatografice. Primul pic, mai mic, corespunde unui component inert
(aerul de exemplu n CG) - care nu este reinut de loc - iar cel de-al doilea, notat cu C,
corespunde componentului (unic n cazul de fa) al probei considerate i este datorat
moleculelor care se distribuie pe parcursul migrrii prin coloan ntre faza mobil i cea
staionar i care, n consecin, ies mai trziu din coloan.
Timpul mort, tM - este timpul n care un component, complet nereinut de ctre faza
staionar, parcurge coloana i tuburile de legtur pn la detector. Acesta nu poate fi
zero. n cazul CG timpul mort, de exmplu, este egal cu timpul de retenie al aerului: tM = tR
(R = Retenie). Deci, cu alte cuvinte, reprezint timpul scurs de la injectarea (introducerea)
probei n coloan i apariia maximului de concentraie n detector, pentru componentul
nereinut.
Timpul de retenie, tR - o mrime caracteristic pentru fiecare component al amestecului
separat de coloan - reprezint timpul scurs de la injectarea probei i apariia maximului de
150
Metode cromatografice - privire de ansamblu
concentraie n detector [99]. De exemplu, n cazul prezentat anterior n fig. 1, acesta este
distana de la axa ordonatelor (nceputul cromatogramei) pn la verticala prin vrful
picului C. Acest timp, pentru un component i o coloan (plus condiii experimentale) date
este constant, indiferent dac componentul respectiv este singur sau n amestec.
Volumul de retenie, VR este volumul de eluent corespunztor timpului de retenie (legat de
timpul tR prin intermediul debitului eluentului, Fe):
VR = tRFe (1)
Timpul de retenie ajustat, tR'- introdus n cromatografie pentru a se putea compara timpii
msurai pe coloane diferite, n cazul aceluiai component - este dat de diferena:
t R' = t R - t M (2)
Corespunztor exist i un volum de retenie ajustat, VR' = VR - VM unde VM este volumul
mort; acest volum mort este legat de debitul eluentului coloanei, Fe, prin produsul: VM =
tMFe, i reprezint volumul golurilor din coloan plus volumul tuburilor de legtur de la
coloan la detector.
Factorul de retenie, RF reprezint raportul, subunitar, dintre vitezele de deplasare prin
coloan ale unui component i ale eluentului. Cum vitezele amintite se pot calcula din
raportul spaiului parcurs n unitatea de timp, lungimea coloanei fiind notat LCOL, avem
conform definiiei:
L col
o
= t R = t M = Vn (3)
Rf
L col t R V oR
tM
Coeficientul de distribuie, K (sau KD) este o mrime identic celei din extracie (repartiia
ntre faze) definit ntotdeauna prin raportul dintre concentraiile componentului n
chestiune din fazele staionar, CS, respectiv mobil, CM. n cazul cromatografiei de
adsorbie acesta a fost denumit coeficient de adsorbie, n cazul cromatografiei de schimb
ionic (denumit ulterior cromatografie ionic), coeficient de distribuie ionic iar n cadrul
cromatografiei de excluziune steric coeficient de difuziune. Conform definiiei (dup
Nernst):
CS
K= (4)
CM
Factorul de capacitate sau factorul de separare, k (notat n tratate mai vechi k') se
definete ca raportul dintre numrul de moli distribuii ntre fazele: staionar, , respectiv
[99] Simbolurile utilizate n continuare sunt cele recomandate de IUPAC - publicate n Pure&Appl. Chem. 65(4),
819, (1993)
mobil. Numrul de moli din faza staionar pot fi exprimai prin produsul CSVS iar din
cea mobil CMVM unde C sau notat concentraiile molare i cu VS respectiv VM s-au notat
volumele fazelor - staionar respectiv mobil - din coloan, volumul ultimei fiind egal
numeric cu volumul mort al coloanei. Cu ct factorul de capacitate este mai mare
coloana reine mai puternic un component iar timpul de retenie crete. Pe de alt parte
din ecuaia de mai jos se poate vedea c dac k = 0 atunci tR = tM. Ecuaia de definiie
pentru k este:
CS VS t t
k= = R M (5)
C M VM tM
152
Metode cromatografice - privire de ansamblu
de 4 ori valoarea dispersiei curbei gaussiene care modeleaz matematic picul, ceea ce permite
scrierea ecuaiei:
wb = 4 (11)
Valoarea numrului de talere teoretice N constituie de asemenea o msur a eficacittii
(totale) a coloanei cromatografice utilizate ntr-o separare sau analiz concret. Pentru un
component dat acest numr reprezint patratul raportului dintre timpul de retenie i
deviaia standard asociat picului corespunztor:
N = tR2/2 (12)
La o examinare mai atent acest raport reprezint patratul numrului de picuri ce ar
ncpea pe o cromatogram n intervalul corespunztor timpului tR, picurile fiind separate
toate doar parial (de exemplu cele cu rezoluia RS = 0.75, aa cum se prezint pe fig. 3a.
Rezoluia, simbolizat RS, este mrimea ce exprim gradul de separare a dou componente
date de pe o cromatogram. Pentru componentele oarecare A i B aceasta se exprim prin
raportul
t R t
RS = = R (18)
2( A + B) w b
unde tR este diferena dintre timpii de retenie ai componentelor B i A adic tR = tR,B - tR,A,
iar w1/2 reprezint limea medie a picurilor la baz, w1/2= (wA + wB)/2. Rezoluia mai poate
fi exprimat datorit nevoilor practice i n variantele:
t R,B - t R,A
RS = (19)
0.5 ( w B + w A )
Pentru dou picuri alturate RS = 1 iar pentru dou picuri complet separate RS = 1.5
(fig. 3). Rezoluia egal cu unitatea reprezint o separare de 98% ntre cele dou picuri.
O alt expresie a rezoluiei se poate obine pe baza notaiilor:
tR = tM(kB - kA); = B = tR,B/(N)1/2 = tM(1+kB)/(N)1/2; kB/kA =
care nlocuite n expresia (19) duc (vezi anexa) la ecuaia:
N -1 k B
R S = (20)
4 1+ k B
RS 1.5 RS 1 RS 0.75
Fig. 3. Picuri cromatografice separate ntre ele cu diverse rezoluii
Aceast exprimare este important pentru c reflect cei trei factori de care depinde
rezoluia prin cele trei paranteze (fig. 4), n ordine: prima - eficiena, a doua - selectivitatea, i
a treia - capacitatea de separare a coloanei. n ultima ecuaie N se refer la ambele picuri
considerate egale ca lime adic N = (NA + NB)/2.
1
1 1
2 2
3 3
Optim
3 2
2 3 1
Fig. 4. Compromisul (optimul de lucru) ntre: eficien - 1, vitez - 2 i volumul probei - 3
154
Metode cromatografice - privire de ansamblu
Formele posibile pentru picuri depind de forma funciei CS = f(CM) adic de izoterma
de adsorbie (desigur mecanismul nu este ntotdeauna acesta). Cnd izoterma este liniar (I)
avem picuri simetrice. Cnd aceasta este convex (II) sau concav (III) avem picuri asimetrice
(fig. 2). Acest asimetrie, ntlnit relativ frecvent, se evalueaz cu un factor de asimetrie (sau
de trenaj), Ft. Acest factor se calculeaz prin raportul distanelor, de la dreapta y = xmax la cele
dou ramuri, msurat la 10% din nlime, adic:
Ft = b/a
n cazul izotermelor convexe Ft > 1 iar n cazul celor concave (III pe fig. 2) Ft < 1,
ultimele fiind extrem de rare.
H2( v ) C
H2( v ) A B.v
v
H1( v ) 5
H0( v )
0 0
0 5 10
0 v 10
Fig. 5. Ecuaia lui Van Deemter
Se observ c nlimea talerului, H, are un optim pentru g vitez care se poate calcula.
Anume, prin derivarea ecuaiei lui Van Deemter i egalarea cu zero a rezultatului derivrii, se
obine:
C
v opt = (22)
B
Prin nlocuirea valorii v cu vopt n ecuaia iniial se obine optimul pentru H (adic
minimul):
H min = A + 2 BC (23)
156
Metode cromatografice - privire de ansamblu
1 + 6k + 11k 2
H min = r (24)
3(1 + k) 2
ntrebri de verificare
1. Care este semnalul exploatat att calitativ ct i cantitativ n cromatografie?
2. Care este prima metod cromatografic cunoscut (care are o vrst de circa 1 secol)?
3. Care din componenii amestecului din prob provoac punctul mort?
4. La ce servete timpul de retenie ajustat?
5. Ce se ntmpl cu timpul de retenie cnd factorul de capacitate, k, crete?
6. Care sunt principalele mecanisme de separare n cromatografie?
7. Care mrimi se utilizeaz practic pentru caracterizarea i compararea performanelor
coloanelor?
Chimie Analitic i Instrumental 157
14
158
Cromatografia de gaze (GC)
Aceast tehnic cromatografic este printre cele mai rspndite i totodat este prima
dintre metodele de analiz cromatografic aplicat pe scar larg n analizele chimice.
Compuii amestecului supus separrii nu trebuie s fie neaprat gaze, ci pot s fie i lichide
sau chiar solide volatile. Substanele de analizat se introduc n coloana de separare, la o
temperatur potrivit, prin intermediul unui dispozitiv de introducere a probei. Singura
restricie este temperatura de vaporizare care uneori poate fi mai mare dect temperatura de
descompunere a substanelor de analizat. n aceste cazuri se poate recurge la alte tehnici
cromatografice care au ca eluent un lichid sau fluid supracritic. De asemenea, se mai pot
realiza, nainte de introducerea probei n cromatograf, nite derivai (compui noi), volatili,
utiliznd anumite reacii chimice specifice, procedeu denumit derivatizare. Uurina cu care
se pune la punct o analiz nou, sensibilitatea sa, posibilitatea de automatizare precum i
largile posibiliti de aplicare sunt avantajele principale ale acestei metode. Printre domeniile
n care GC i-a cucerit un loc de prim rang sunt: petrochimia, industria farmaceutic, protecia
mediului, analiza aromelor, igiena i criminalistica.
Cromatograful de gaze
Instrumentul care realizeaz separrile i totodat analiza n GC poart numele de
cromatograf de gaze. Funcionarea acestuia se poate nelege urmrind schema din fig. 1.
Schia prezint concis doar componentele principale. Astfel gazul purttor (eluentul),
de exemplu hidrogenul sau heliul, prsete cilindrul sub presiune, 1, n care acesta se gsete
iniial i ptrunde n coloan, la o presiune de intrare, cu ceva peste cea atmosferic (1-3atm),
prin intermediul unui reductor 2. Apoi gazul se ramific (opional) prin dou conducte. O
parte intr n coloan, n mod continuu iar cealalt ramur, direct n detector. Coloana 4, se
afl ntr-o etuv - termostat, 3, izolat termic i prevzut n exterior cu un dispozitiv pentru
Chimie Analitic i Instrumental 159
15
introducerea probei (care de regul include i o microsering), notat S, etuv care mai este
dotat n interior cu un ventilator V i cu un dispozitiv electric de nclzire - termostatare, R.
n coloana cromatografic se produce separarea probei. Aceasta se introduce n coloan doar
dup ce instrumentul este n regim de funcionare continu i a fost adus la temperatura de
lucru. Dup ce prsete coloana 4, gazul purttor intr, antrennd pe rnd componentele
separate, n celula de msur din detector de unde iese n atmosfer sau se colecteaz separat.
Faza mobil n aceast tehnic este un gaz: hidrogenul, heliul, azotul sau argonul.
Aceasta poate fi eliberat, prin intermediul unor ventile i regulatoare de presiune, din cilindri
de gaze presurizate, fie obinute din generatoare (cazul N2 sau H2) - direct n laborator. Gazul
nu trebuie s conin urme de ap, oxigen sau dioxid de carbon care pot prejudicia fazele
staionare. De aceea se mai intercaleaz filtre cu dublu rol: uscare, respectiv, reducerea
oxigenului, dispozitive situate imediat dup sursa de gaz. n cazuri excepionale se pot utiliza
i ali elueni cum ar fi CO2, Ne etc. Spre deosebire de cromatografia cu elueni lichizi, n GC
natura gazului are o importan minor asupra selectivitii separrii deoarece gazul,
practic, nu interacioneaz cu componentele probei sau cu suportul. Desigur c viteza optim
nu este aceeai pentru toate gazele i se stabilete pe baza ecuaiei Van Deemter.
Presiunea de la captul coloanei se regleaz cu ajutorul unui regulator de presiune i
ventil ac.
Introducerea probei se realizeaz cu aa-numitele seringi micrometrice (fig. 2), n
cazul probelor care au volumele n domeniul 0.1-10l. Cu acestea, dup umplerea cu volumul
de prob necesar, apsnd pistonul, se injecteaz coninutul prin cauciucul siliconic sau
garnitura inelar a unui septum din dispozitivul de introducere a probei. Pentru gaze se
folosesc fie seringi ceva mai mari, de 0.5ml, fie nite dispozitive speciale numite ventile
pentru introducerea probei.
160
Cromatografia de gaze (GC)
sus al dispozitivului din fig. 3, situat n afara cromatografului, conine un septum, adic o
pastil din cauciuc siliconic care permite ptrunderea acului ascuit al seringii. Cellalt capt
al dispozitivului este legat la coloana cromatografic prin intermediul unui racord filetat i a
unei garnituri. Astfel, imediat dup injectarea probei, aceasta ptrunde n capul coloanei.
Pentru coloane capilare, care au debitele mult mai mici iar volumele introduse n
coloane deosebit de mici, introducerea cu o sering a probelor, direct, ar compromite coloana
definitiv. De aceea se folosesc nite dispozitive speciale cu ajutorul crora doar o mic
fraciune din prob, cunoscut, intr n coloan iar restul este evacuat n atmosfer.
Dispozitivele se numesc split/splitless iar fraciunea de prob introdus efectiv n coloan
reprezint 1/20 pn la 1/500 din volumul injectat cu seringa.
Incinta termostatat n care se afl coloana, numit etuv-termostat, are temperatura
reglabil ntr-un domeniu larg (40-450C) fiind foarte precis stabilizat (0.1C) i totodat
ventilat, pentru o egalizare rapid a temperaturii. La anumite cromatografe, se pot executa i
programe de temperatur, adic nclziri controlate ale coloanei, n timp, pe parcursul
efecturii analizei. Are loc n acest fel o volatilizare treptat a compuilor - la nceput ies cei
volatili care migreaz rapid i la urm, cei mai puin volatili care migreaz foarte lent mrind
mult durata analizei. Programele se stabilesc prin ncercri experimentale.
reactivitate, efect asupra probei i altele, comune multor metode analitice. De asemenea, unii
detectori distrug proba iar alii o las nealterat, permind separarea fizic a acesteia. Despre
sensibilitate i limita de detecie am amintit n cursurile introductive cteva lucruri eseniale
valabile i aici. n orice gaz cromatograf trebuie s existe cel puin un detector universal care
s permit nregistrarea sigur a tuturor componenilor. n afar de acesta mai pot exista i ali
detectori specifici, care mresc sigurana analizei componenilor de interes practic, deoarece
rspund doar la anumite tipuri de molecule.
Zgomotul de fond (fig. 4) apare din cauz c urmrindu-se ca metoda s fie ct mai
sensibil, lucreaz la limita unde interfer zgomotul electronic cu cel dat de detector. Att
zgomotul de fond ct i driftul, de regul exprimat n variaia semnalului, timp de o or, sunt
prezentate schematic pe fig. 4. Se observ c zgomotul de fond const n perturbaii
minuscule ale liniei de baz avnd cauze multiple iar driftul este devierea liniei de baz ntr-
un timp dat (1 or) exprimat n unitile de msur uzuale ale semnalului nregistrat (mV, mA
etc).
162
Cromatografia de gaze (GC)
[101] NPD reprezint prescurtarea (l.engl.) a denumirii: nitrogen and phosphorus detector deoarece acesta este
specific pentru aceste elementeleN i P. Se mai numete i detector cu ionizare termoalcalin.
temperatura ambiant un gaz aflat ntre doi conductori este un izolator foarte bun, n
momentul cnd ntre cei doi electrozi apar particule ncrcate electric, n urma deplasrii
acestora n cmpul electric creat, apare un curent electric. Ionizarea moleculelor probei este
intensificat de prezena unei flcri de hidrogen, care arde n aer ntr-o incint, flacr ce
atinge temperaturi ridicate (2000-2200C).
Cele mai slabe semnale, care nu pot servi unei analize chimice, le dau substanele
alctuite din moleculele covalente simple: N2, O2, CO, CO2, H2O, CS2, NH3, CCl4, SiCl4,
oxizi de azot, He i alte gaze rare. De aceea gazul purttor n cromatografia de gaze este N2,
He sau Ar, condiii n care detectorul d un semnal de baz minim, foarte stabil. Schia
simplificat este prezentat n fig. 6.
164
Cromatografia de gaze (GC)
Ali detectori
Mai exist i ali detectori, de exemplu detectorul fotometric n IR (simplu sau bazat
pe transformata Fourier), detectorul cu flamfotometru destinat pentru detecia specific a
compuilor cu sulf i fosfor, detectorul bazat pe emisie atomic cu plasm cuplat inductiv
sau detectorul cu ionizare termoionic (termoalcalin) - NPD - bazat tot pe o flacr, dar la
care ntre flacr (cu hidrogen - aer) i arztor se introduce o pastil de sare alcalin, ceea ce
provoac o cretere a intensitii semnalului de 100 de ori. Ultimul este un detector specific
pentru azot i fosfor care este util, de exemplu, pentru analize de pesticide. Mai puin utilizai
sunt detectorii cu absorbie atomic sau cel cu chemiluminescen. Dar cea mai spectaculoas
intrare n domeniul detectorilor a realizat-o recent spectrograful de mas, care preia direct
efluentul coloanei i n urma unei ionizri, fragmentele intr n spectrograful de mas propriu
zis. Acest lucru a devenit posibil datorit calculatoarelor, care au permis prelucrarea
volumului uria de date care se obin pe aceast cale. Cuplajul denumit GC-MS este chiar mai
sensibil dect detectorul bazat pe fotoionizare n UV (vezi tabelul 1).
umplutur i (B) coloane capilare (fig. 9). Din anii 1990 a mai aprut un tip - coloanele
530m (whide bore) - care dei nu mai sunt coloane capilare, n adevratul sens al cuvntului,
pstreaz geometria i tipurile de umplutur ale coloanelor capilare. Subiectul este deosebit de
vast i este tratat n cri de specialitate i chiar detaliat pe Internet la adresa:
http://gc.discussing.info/gs/e_columns/stationary_phase.html#GasSolid
Coloanele cu umplutur -primele coloane cunoscute n GC - sunt confecionate din
tuburi (oel, sticl sau alte materiale), avnd diametre cuprinse ntre 2-8 mm - cel mai frecvent
de 1/8 oli (3.18mm) sau oli (6.35mm) - i conin adsorbeni, site moleculare sau un suport
inert pe care se gsete depus sau legat chimic un film subire dintr-o faz staionar. Raportul
diametrelor coloanei i umpluturii trebuie s fie cuprins ntre 25 i 20. n ultimul timp au
aprut i coloane cu umplutur de 1/16 oli.
Umplutura coloanei const dintr-o anumit faz staionar - activ care se depune pe
granulele umpluturii inerte i poroase, n afara coloanei (dup dizolvarea acesteia ntr-un
solvent potrivit ales) prin amestecare urmnd apoi evaporarea solventului ntr-o etuv [104].
Doar apoi umplutura se introduce n coloan i coloana se monteaz n cromatograf, prin
intermediul unor racorduri filetate. Debitul gazului purttor la aceste coloane este cel mai
mare, fiind cuprins ntre 10 i 40mLmin-1. Astfel de coloane sunt din ce n ce mai puin
utilizate.
[104] n zilele noastre sunt disponibile comercial majoritatea coloanelor necesare n analizele de rutin.
[105] mesh - unitate anglosaxon de granulaie fiind numrul de ochiuri per inch ptrat.
166
Cromatografia de gaze (GC)
Coloanele WCOT conin faza staionar sub form de film subire n interiorul
capilarei, grosimea acestuia variind ntre 0.05-5m. Faza staionar poate fi depus fizic sau
chiar legat chimic de grupele -OH ale silicei hidratate. Si aceste coloane sunt disponibile
deja comercial pentru majoritatea aplicaiilor curente. Eficacitatea unei astfel de coloane poate
atinge 150mii talere teoretice. nlimea echivalent a unui taler teoretic, H, n cazul acestor
tipuri de coloane, are o expresie deosebit de ecuaia lui Van Deemter i a fost descoperit de
Golay, anume:
B
H= + (CG + CL) v (1)
v
unde termenul A lipsete iar CG este coeficientul de difuzie al speciei moleculare separate n
faza gazoas, CL, fiind acelai coeficient pentru faza lichid. n acest caz Hopt se calculeaz cu
ecuaia dat n seciunea Metode cromatografice - privire de ansamblu.
Coloanele 530m sau wide bore sunt confecionate tot din silice (SiO2) avnd lungimi
cuprinse ntre 5-50m. Le-am putea denumi coloane semicapilare deoarece pstreaz
caracteristicile coloanelor capilare dar dimensiunile nu mai sunt apropiate de dimensiunea
[106] WCOT = wall coated open tubular (column) nseamn coloan deschis cu faza staionar depus pe
perete SCOT = support coated open tubular (column) nseamn coloan deschis acoperit cu support
(prescurtri n l. engl.).
Chimie Analitic i Instrumental 167
15
firelor de pr. Debitul prin aceste coloane atinge 15mLmin-1 (adic intr n domeniul celor cu
umplutur), dar au performane superioare acestora.
Fazele staionare sunt i ele de mai multe feluri: polare, de exemplu polietilenglicoli,
nepolare de exemplu cauciucuri siliconice, intermediare i n sfrit cele cu puni de hidrogen
sau cele specifice (de exemplu cele destinate separrii amestecurilor racemice). Fazele
staionare sunt lichide sau solide. Fazele staionare lichide sunt formate din lichide nevolatile
avnd o compoziie chimic foarte variat (peste 100 de tipuri). Pentru a se putea lega chimic
numrul acestora a fost restrns la cele care pot, prin sintez, s duc la un film grefat pe
partea intern a coloanei. La ora actual se pot distinge dou tipuri de compui preferai:
polisiloxanii i polietilenglicolii fiecare ntr-o varietate care s permit modificarea polaritii
acestora. Formulele acestora sunt ilustrate pe fig. 11.
R R: CH3 (metil)
O Si (CH2)3CN (cianopropil)
(CH2)2CF3 (trifluoropropil)
R HO CH2O H
n C6H5 (fenil) n
Fig. 11. Cele dou tipuri principale de faze staionare lichide folosite pe scar larg n GC:
siliconice -stnga i polietilenglicolice - dreapta
cuplajul cu spectrometria de mas a depit acest neajuns, devenind una dintre cele mai bune
tehnici de analiz calitativ.
n cazul LC eluentul, un lichid, este necompresibil i n consecin, debitul acestuia nu
se va modifica la nceputul coloanei fa de sfritul acesteia. n cazul CG, ns, presiunile
iniial, pi i cea final, pf, fiind diferite, este necesar introducerea unei corecii a volumului
de retenie msurat, cu ajutorul unui factor, j, numit factorul de corecie corespunztor cderii
de presiune. Acesta se poate calcula din ecuaia dat n cele ce urmeaz, fr deducie:
3 (p 2 -1)
j= . 3 (2)
2 (p -1)
n care cu p s-a simbolizat raportul presiunilor, iniial (pi) respectiv final (pf), adic p = pi/pf.
Cu ajutorul acestei mrimi semnale de retenie din diverse condiii experimentale se
pot face comparabile n analiza calitativ prin CG. Aceste volume sunt utilizate cu precdere
n analiza calitativ fiind mai sigure dect volumul de retenie simplu mai ales cnd nu se mai
recurge la alte tehnici [107].
Prin mrirea cantitii de faz lichid staionar, fie prin utilizarea unei cantiti
(grosimi) mai mari fie prin utilizarea unei coloane mai lungi, crete volumul de retenie.
Pentru a se lua n considerare i acest factor s-a definit volumul de retenie specific (exprimat
de regul n mL/g).
Volumul de retenie corectat, VR0 = jVR, unde j este factorul de corecie de mai sus iar VR
este volumul de retenie;
Volumul de retenie net, VN, este volumul de retenie ajustat dar corectat i pentru cderea
de presiune: VN = jVR';
Volumul de retenie specific, Vg = 273VN/(TcmL), unde Tc este temperatura absolut a
coloanei, VN - volumul de retenie net al componentului i mL - masa fazei staionare
lichide din coloan;
Dar pentru c toi aceti parametri depind, n mare msur, de o serie de condiii
experimentale ca temperatura, debitul gazului purttor, cantitatea de faz lichid etc, pentru
identificarea substanelor se recurge n ultimul timp la utilizarea indicilor de retenie Kovts.
Aceti indici, notai n continuare cu I, sunt practic independeni de factorii amintii. Astfel,
pentru orice substan de analizat calitativ se caut o pereche de n-alcani care dau picuri
situate ca timp de retenie unul nainte, altul dup substana amintit. Din cele trei valori tR'
msurate se calculeaz valorile I. Indicii de retenie Kovts exprim retenia relativ a unei
substane oarecare, fie cunoscut, fie necunoscut, raportat la cea a unor alcani normali,
[107] Amintim c se practic, pentru o mai mare siguran, cuplajul GC cu spectrometria de mas.
luai drept substane de referin (sau etalon). Formula de calcul, propus de autorul metodei,
pentru indicii amintii este:
log t 'R,X - log t 'R,n
I = 100 + 100n (3)
log t 'R,n +1 - log t 'R,n
unde tR,X', tR,n' i tR,n+1' sunt timpii de retenie ajustai pentru substana necunoscut X
respectiv alcanii cu n respectiv n+1 atomi de carbon. Valoarea n se alege astfel ca tR,n' < tR,X' <
tR,n+1' adic, n aa fel ca timpul de retenie al substanei necunoscute s fie cuprins ntre timpii
de retenie ai celor doi alcani. De exemplu, benzenul are timpul de retenie cuprins ntre cel al
n-hexanului i al n-heptanului (ca i cum ar avea cam 6,5 atomi de carbon). Schimbnd
condiiile experimentale se schimb tR', respectiv VR', dar niciodat valoarea indicilor de
retenie I. Metoda se bazeaz pe faptul c practic nu exist substan chimic separat prin GC
creia s nu i se poat asocia o pereche de n-alcani care au timpul de retenie, unul mai mare
i altul mai mic dect substana respectiv. Pentru seria omoloag a alcanilor este respectat
ecuaia:
log(tR') = an + b (4)
unde a i b sunt nite constante numerice gsite pe cale experimental, care sunt aceleai
pentru o coloan i condiii fizico-chimice date. Se observ c n formula valorii I, termenul b
se va reduce i factorul a se va simplific. Astfel, indicele Kovts, I, va depinde doar de
numrul aparent de atomi de carbon ai substanei respective - constant.
Experimental se procedeaz astfel: dup cteva ncercri preliminare se injecteaz
mpreun cei doi alcani, cu Cn respectiv Cn+1 mpreun cu substana de analizat, X iar dup
msurarea pe cromatogram a valorilor tR' pentru toate trei picurile componentelor
amestecului, prin nlocuirea acestora n formula precedent sau pe cale grafic, se obine
indicele Kovats, I (v. fig. 12).
Analiza cantitativ
n anumite condiii (pe poriuni liniare ale rspunsului detectorului, condiii
experimentale identice etc.), suprafaa dintre linia de baz i curba picului cromatografic -
semnalul analitic - este proporional cu cantitatea de component injectat. Deci, pe
170
Cromatografia de gaze (GC)
ntrebri de verificare
4. Ce pri ale cromatografului se gsesc n etuva termostat?
5. Cu ce dispozitive se poate introduce proba ntr-un cromatograf de gaze?
6. Ce este un septum i unde se gsete acesta n GC?
7. Denumii doi dintre cei mai utilizai detectori n GC.
8. Pe ce principiu funcioneaz catarometrul?
9. Ce componente nu pot fi analizate prin FID?
10. Care sunt mrimile preferate n analiza calitativ prin GC?
11. Ce carburant alimenteaz flacra din detectorul cu ionizare n flacr?
12. La ce componente este cel mai sensibil detectorul cu fotoionizare?
13. Pe ce principiu funcioneaz detectorul cu captur de electroni? Cine provoac n acest caz
ionizarea componentelor separate?
14. De cte tipuri sunt coloanele gaz cromatografice?
15. Care sunt cele mai importante faze staionare solide?
16. Care sunt cele mai importante clase de faze staionare lichide?
17. Ce este ecuaia lui Van Deemter i la ce servete?
172
Cromatografia de gaze (GC)
Introducere
Cromatografia de lichide de nalt performan (HPLC [108]) acoper azi, n proporie
aproximativ 80%, analiza substanelor moleculare: organice, organo-metalice i anorganice
inclusiv compuii foarte polari sau labili termic precum i compuii cu mas molecular
ridicat (naturali sau sintetici). De aceea, mpreun cu cromatografia de gaze constituie un
punct de sprijin important n analizele chimice moderne. Dei eficacitatea coloanelor nu o
egaleaz nc pe cea din GC, prin faptul c se poate modifica, pe lng faza staionar, i faza
mobil, cromatografia de lichide (LC) face posibile separri i analize uneori imposibil de
realizat prin alte tehnici. Cuplajul cu spectrometria de mas a transformat, n ultimul timp,
aceast metod n principalul mijloc de analiza a compuilor moleculari naturali sau
sintetici, constituind unul din pilonii pe care se sprijin chimia sintetic actual i pe care s-a
dezvoltat biochimia i biotehnologia modern.
[108] HPLC este prescurtarea denumirii internaionale: High Performance Liquid Chromatography (l. engl.)
rezervoarele coninnd unul sau mai muli solveni pompa (sau pompele), alimenteaz
coloana cu eluent (de regul un amestec de doi sau mai muli solveni). n imediata vecintate
a coloanei se introduce proba, automat, prin intermediul unui ventil cu by pass [109]. n
coloana aflat ntr-o etuv termostat, are loc separarea propriu-zis. Efluentul coloanei intr
ntr-un detector de unde componentul, dac este separat complet, poate fi colectat i izolat, cu
ajutorul unui colector de fraciuni. Semnalul este nregistrat fie cu un nregistrator, fie direct
n memoria unui calculator. n esen, un cromatograf analitic HPLC are structura din fig. 2
unde nu s-a mai prezentat colectorul de fraciuni, interesant doar din punct de vedere
preparativ. Se poate observa asemnarea cu GC singura deosebire major constituind-o sursa
de eluent - pompa. n cele ce urmeaz se vor prezenta cele mai importante aspecte deoarece
volumul de informaii publicate este deosebit de amplu, un mare numr de date existnd chiar
pe reeaua Internet [110].
Solvent Pomp Injector Coloan Detector nregistrator
Fig. 2. Schema bloc a unui cromatograf HPLC
176
Cromatografia de lichide de nalt performan (HPLC)
sering (cu deplasare pozitiv). La primele, cele mai utilizate, micarea du-te-vino a
pistoanelor i a supapelor cu bil permit o funcionare indefinit dar presupun existena unor
atenuatoare de pulsaii - dispozitive care s elimine micile variaii de debit. Acestea constau
dintr-o alternan de mai multe rezistene, de exemplu tuburi subiri i capaciti - care pot fi
incinte cu perei elastici, fie chiar manometre.
Pompele cu presiune constant, asemntoare cu o sering dar avnd o capacitate mai
mare, pompeaz continuu pe toat durata separrii, pistonul deplasndu-se cu o vitez liniar
constant dar dup fiecare curs este necesar oprirea debitului i reumplerea cu solvent a
corpului pompei.
Dei solvenii utilizai se degazeaz pentru a se reduce efectele corozive ale
oxigenului, datorit presiunilor ridicate la care se lucreaz, coroziunea este totui deosebit.
De aceea aceste pompe (corpul, cilindrii, garniturile i supapele) se execut din materiale
rezistente la coroziune: safir, agat, teflon sau aliaje speciale.
Proba Proba
(soluie) (soluie)
Coloana Coloana
Ieire Ieire
exterioar exterioar
Pompa Pompa
Bucla Bucla
Fig. 3. Ventilul pentru introducerea probei (cu 6 ci); lucreaz n dou etape:
A - alimentarea buclei cu proba; B - dup o rotire cu 60 n sensul acelor de ceasornic,
antrenarea probei din bucl n coloan
antrenat n coloan. Volumul probelor pentru coloane obinuite (25cmx4.6mm) este de 10-
50l.
Evident aceste ventile sunt confecionate din materiale rezistente la coroziune i la
solveni (oel inoxidabil, tantal, teflon etc).
Coloanele n LC
Locul n care se petrece separarea propriu-zis i - n funcie de calitatea acesteia - se
mrete sau micoreaz raportul semnal/zgomot, este coloana cromatografic. Dei muli
autori denumesc coloana piesa cea mai important dintr-un cromatograf, acesta din urm,
fiind format dintr-o serie de componente, rezult c fiecare compartiment n parte, contribuie
separat la obinerea rezultatului analitic. Pentru un practician din domeniul LC ns, locul
unde acesta intervine efectiv i unde se concepe logic separarea este ntr-adevr coloana.
Fig. 4. Aspectul coloanelor din LC: coloan analitic (stnga), semipreparativ (dreapta)
Din punctul de vedere al geometriei (fig. 4), aceste coloane sunt cilindrice, iar
dimensiunile depind, n primul rnd, de dimensiunea granulelor i porozitatea umpluturii.
Astfel diametrul coloanelor variaz ntre 0.3-5cm iar lungimea poate fi ntre 3-25cm. Pentru
scopuri preparative, n cazul unor componente necunoscute, se utilizeaz chiar diametre mai
mari.
Cu ct umplutura este mai fin, cu att coloana este mai scurt. Pentru a se reine
eventualele impuriti sau componeni care nu pot prsi coloana (fiind reinui practic
ireversibil) se folosesc adesea precoloane care, fiind de dimensiuni mai mici (acelai diametru
i lungimi de 0.4-1cm), pot fi nlocuite mai des, evitndu-se astfel scoaterea prematur din
funcie a coloanei principale. Pentru a nu fi antrenat faza staionar n afara coloanei, aceasta
este blocat la capete de dou discuri metalice, poroase, avnd diametrul porilor ntre 0.5-
10m. De asemenea pentru a nu se lrgi prea mult prin coloan zona cromatografic (cu
178
Cromatografia de lichide de nalt performan (HPLC)
diluarea ce are loc simultan), tot volumul mort ale acesteia (goluri n coloan, tubul de
aduciune de la injector, tubul de evacuare spre detector) trebuie redus la minim.
Se cunosc pn n prezent mai multe mecanisme de separare prin coloane, care depind
mult de fazele mobil i staionar. Mai exact, depind de natura fenomenului fizico-chimic pe
care se bazeaz retenia difereniat i separarea. Metodele LC (HPLC) se pot clasifica, dup
mecanismele principale amintite, astfel: de adsorbie, de repartiie, ionic, i de excluziune
steric.
Se disting dou moduri de realizare a cromatografiei de repartiie:
Cromatografie de repartiie direct (sau cu faze normale - clasic);
Cromatografia de repartiie cu faze inversate - metoda preferat n zilele noastre - pe care
se realizeaz cele mai numeroase separri.
n primul caz faza staionar este format dintr-un lichid polar iar faza mobil dintr-
un solvent organic nepolar iar n al doilea, situaia se inverseaz: lichidul imobil este nepolar
iar faza mobil este un amestec de solveni polari. De exemplu, una dintre cele mai rspndite
faze inversate este cea staionar - silicagel, iar cea mobil - un amestec ap, metanol,
acrilonitril (sau tetrahidrofuran). O separare reuit pe o astfel de faz este prezentat n fig. 5.
1. Izoproturon 14. Simazin
2. Profam 15. Bromacil
3. Propazin 16. Cianazin
4. Terbutilazin 17. Atrazin
5. Linuron 18. Carbaril
6. Propanil Coloan: Supelcosil (SiO2)
7. Prometrin LC-ABZ, 25x4,6cm;
8. Fenamifos Granulaia: 5m, t = 40C;
9. Fenitrotion Eluent: 10 pn la 90%
10. Cafein acetonitril n ap 0.5%/min;
11. Metamitron Detector: UV la 225nm;
12. Fenuron Debit: 1mLmin-1;
13. Metoxuron
Fig. 5. Separarea unor pesticide prin HPLC
Cromatografia ionic (IC) are mai multe variante. Cea mai frecvent ntlnit astzi
folosete n calitate de faz mobil solveni apoi diluai de electrolii iar ca faz staionar
schimbtori de ioni. Metoda va fi descris ntr-un capitol separat datorit implicaiilor actuale
n analizele de ape legate de protecia mediului. O alt variant denumit cromatografie prin
perechi de ioni folosete faze staionare capabile s fixeze anumii ioni care fixeaz ioni de
semn contrar (perechi de ioni). Acest mecanism se prefer n cazul substanelor ionice sau
ionizabile.
n fine, mai exist cromatografia de afinitate, o variant considerat uneori un
mecanism separat, se bazeaz pe afinitatea extrem de specific a unor molecule cu alte
molecule fixate pe suport. Dei este vorba de interaciuni coordinative sau alte afiniti de
natur biochimic dintre suport i componentele de separat mecanismul poate fi asemnat cu
adsorbia sau chiar cu schimbul ionic dar mult mai specific.
Suportul este materialul pe care ligandul este fixat (ideal este ca acesta s fie rigid,
stabil i s aib o suprafa mare). De exemplu agarul este cel mai cunoscut suport, de
asemenea se mai folosete celuloza, dextranul i poliacrilamida. Ligandul este fixat pe gelul
de agaroz fiind un polimer al D-galactozei i al 3,6-anhidro-L-galactozei i poate fi folosit la
o presiune de 1atm i ntr-un interval de pH de la 4 la 9.
Avndu-se n vedere complexitatea problemei i diversitatea acestor perechi de faze
mobile i staionare, vom limita n cele ce urmeaz discuia doar la cele mai utilizate dintre
acestea pentru domeniul analizei poluanilor mediului. n funcie de componentele de separat
i tipul de mecanism preferat, faza mobil se alege folosind schema din fig. 6.
Faza staionar
Silicagelul (SiO2) este considerat materialul cel mai important utilizat ca faz
staionar. Acesta a devenit, n ultimii 20 de ani, doar suportul adevratelor faze - fazele
chimic legate - ceea ce nu schimb importana sa. Silicagelul s-a obinut la nceput n form
granular, neregulat, apoi n form sferic (fig. 7).
Indiferent de form, granulaia trebuie s fie uniform (se elimin partea fin) pentru
c astfel caracteristicile curgerii eluentului sunt mult mbuntite.
Obinerea silicagelului sferic se face plecnd de la soluii coninnd silicat de sodiu
dar i ali compui hidrolizabili ai siliciului (tetraclorur de siliciu, silicat de etil etc.). De la
acetia, printr-o reacie cu apa urmat de o pulverizare i apoi de o sinterizare, procese vizibile
pe fig. 9, se obin granule cu aspect sferic.
180
Cromatografia de lichide de nalt performan (HPLC)
O - Si
O - Si
O - Si
O - Si
O - Si
O - Si
O - Si
Fig. 8. Aspectul schematic al unei
Fig. 7. Aspectul granulelor de silicagel folosite granule sferice cu faz staionar
frecvent la umplerea coloanelor din HPLC chimic legat pe suprafaa suportului
OH
2 3
HO Si OH
OH
SiO2 coloidal 4
1 (Sol)
Compui ai Si(IV):
Si(OEt)4],
SiCl4,
Na2SiO3.
3-10m
H H H
O O O
Si Si Si
I II III
Fig. 10. Aspectul la microscopul electronic al Fig. 11. Principalele tipuri de
coloanelor monolit grupri silanolice superficiale
Exist trei tipuri de grupe silanol superficiale I- legate, II- reactive i III- libere (v. fig.
11) cu tria relativ I < III < II. n funcie de tehnologia de obinere difer i porozitatea
intern, suprafaa specific, rezistena la compresiune i polaritatea. Silicagelul este
considerat, n general, un material puternic polar.
Grupele funcionale de pe suprafa au un caracter acid (pKa pentru grupele silanol
este similar fenolului). Pentru a se reduce cozile picurilor pe care le dau centrele de adsorbie
puternice, silicagelul se poate dezactiva, de exemplu prin adaos controlat de ap (3-8% ap).
Cteva mrci de silicagel comercial sunt prezentate n tabelul 2.
Tabelul 2. Cteva dintre cele mai cunoscute tipuri de silicagel pentru HPLC
Diametrul Suprafaa pH-ul n Tipul
Marca
porilor specific suspensie 10% particulelor
Zorbax 300 30 39 5.4 Sferice
Vydac TP 32 82 4.1 Sferice
Hypersil 12.5 149 8.2 Sferice
Spherisorb 8 190 7 Sferice
Polysil 6 245 6.5 Neregulate
LiChrosorb 10 297 6.7 Neregulate
Rosil 8 357 8.4 Sferice
Rsil 6 433 8.0 Neregulate
Se poate observa c suprafaa specific scade cu creterea diametrului porilor iar pH-
ul acestora se situeaz n domeniul 5.4-8.4.
Ali adsorbeni mult mai puin utilizai sunt alumina, oxidul de zirconiu, crbunele
macroporos, polimerii poroi (de ex. spuma poliuretanic).
Fazele staionare chimic legate au aprut n urma ncercrilor mai puin eficace de
utilizare a unor faze staionare lichide depuse pe un suport poros solid - permeabil pentru
eluent (a fost preferat kieselgur-ul sau pmntul diatomitic - n esen tot SiO2 dar cu pori
mari i o suprafa mult mai mic.
Deoarece n toate aceste ncercri faza staionar era splat de pe suport de ctre
eluentul n micare i n felul acesta deranja funcionarea detectorului, s-a recurs la soluia
crerii unor faze care s fie fixate prin legturi chimice - mult mai puternice dect cele fizice.
Aspectul unei faze staionare chimic legate poate fi imaginat ca n fig. 8, adic catenele legate
182
Cromatografia de lichide de nalt performan (HPLC)
alctuiesc o adevrat pdure de molecule care se comport fizic asemntor unui strat
subire, aderent la suport (imposibil de dizolvat) dar cu o valoare a factorului de capacitate k
mai favorabil.
Dac gruprile silanol Si-OH de pe suprafaa silicagelului sunt puse n situaia de a
reaciona cu anumii derivai organometalici, se poate realiza sinteza unor faze chimic legate.
Cele mai stabile legturi sunt cele care au la baz apariia structurilor legate prin intermediul
unei puni: Si-O-Si. Obinerea acestora se realizeaz prin reacii de condensare [111] la
care particip grupele silanol - superficiale, efectuate n prezena unor clorsilani. Un exemplu
este reacia:
SiOH + ClSi(CH3)2R -HCl Si-O-Si(CH3)2-R
unde cel mai frecvent R = C8H17 sau C18H37. Prin astfel de reacii (astzi se cunosc mai multe
variante) suprafaa silicagelului se acoper cu un strat monomolecular de dimetil-alchil-
siloxan nepolar. Pentru se mri i mai mult stabilitatea s-a recurs la soluia legrii radicalului
de hidrocarbur R prin intermediul mai multor legturi cu suprafaa silicagelului.
Stratul de hidrocarbur grefat de suport se comport ca un strat foarte subire, uniform,
de lichid nepolar dar mult mai stabil. Aceste faze stau la baza cromatografiei cu faze
inversate. Polaritatea acestor faze se poate regla prin legarea n cadrul unor catene laterale ale
radicalului de hidrocarbur R, de exemplu a unor funciuni aminopropil, cianopropil, benzil,
crendu-se astfel o mare diversitate de faze staionare.
Faza mobil
Faza mobil sau eluentul n LC nu reprezint un mediu inert ca gazul purttor din GC.
De aceea alegerea fazei mobile se face aici n perfect concordan cu faza staionar. Astfel
faza mobil difer destul de mult n funcie de tipul interaciunilor componentelor separate cu
faza staionar din coloan. Singurele caracteristici generale sunt urmtoarele: (1) faza
mobil trebuie s aib o viscozitate cobort, (2) aceasta trebuie s dizolve bine
componentele, (3) nu trebuie s afecteze funcionarea coloanei i (4) trebuie s permit
funcionarea detectorului.
Unii elueni provoac migrarea unui anumit component mai repede prin coloan. Se
spune c acetia au o trie relativ mai mare sau, altfel spus, au o putere de eluie mai
ridicat. Aceast denumire provine de la faptul c factorul de capacitate, k, este mai mare i
de aceea componentul migreaz mai repede. Dar totul depinde de trio-ul component - faz
mobil - faz staionar. Astfel, pe o faz staionar polar, folosind o faz mobil nepolar,
[111] Prin reacii de condensare se neleg procesele prin care se leag dou molecule mai mari, eliminndu-se o
molecul mic (HCl).
Chimie Analitic i Instrumental 183
16
se vorbete de cromatografie de repartiie normal (sau cu faze directe). Din contr, pe o faz
staionar nepolar utilizndu-se o faz mobil polar se vorbete de cromatografie de
repartiie cu faze inverse (sau inversate). n acest ultim caz au devenit uzuale fazele mobile
formate din amestecuri metanol - ap care n cromatografia de repartiie sunt considerate
printre fazele mobile mai puin tari.
Pe o faz staionar polar, amestecul metanol-ap face parte dintre cei mai tari elueni
cunoscui. n tabelul 3 se prezint civa dintre cei mai ntlnii solveni i ordinea n care
crete tria lor relativ, n cele dou tipuri de cromatografie de repartiie.
n cromatografia ionic (IC) se folosesc soluii diluate de electrolii ca: NaOH,
NaHCO3, HCl, iar n cea de excluziune steric solveni simpli - evident compatibili cu
polimerii, separai unii de alii dup dimensiuni.
O alt cale de mbuntire a separrilor existent n LC (cale inexistent n GC) este
folosirea gradienilor de eluie. De exemplu, n GC, prin modificarea eluentului gazos nu se
constat nici o mbuntire a calitii separrii, n sensul mririi selectivitii. n HPLC, din
contr, solventul are o contribuie important n procesul de separare, dar nu trebuie neglijat
importana decisiv a cuplului faz mobil - faz staionar. Dei unii compui sunt reinui
slab prin coloan, ieind destul de repede, cei reinui puternic ies din coloan dup un timp
cteodat nepractic de lung, lucru care determin diluarea n eluent a componentul n urma
parcurgerii coloanei, aceasta micorndu-se calitatea analizei. De aceea s-a recurs la
introducerea treptat peste primul solvent (eluent), a unui al doilea solvent mai tare sau a celui
de-al treilea, ceea ce n limbajul de specialitate se numete gradient de eluie (sau de
concentraie).
La ora actual soluia la care s-a recurs n practic const, n general, dintr-un sistem
de ventile electromagnetice care permite intrarea solvenilor n aceeai pomp, prin
intermediul unei camere de amestecare aflate la joas presiune.
184
Cromatografia de lichide de nalt performan (HPLC)
Este posibil i un alt montaj n care fiecare solvent are pompa proprie, comandat de
un dispozitiv de control al debitului. Aceti solveni intr n camera de amestec i de aici n
coloan.
Detectori
Tehnica HPLC s-a dezvoltat o dat cu perfecionarea detectorilor. Am amintit c
detectorii n cromatografie sunt instrumente analitice specializate, situate la ieirea eluentului
dintr-o coloan i care pot nregistra continuu substanele separate de ctre aceasta. Deci
detectorii constituie acea parte a instrumentaiei care permite s se observe modul cum
decurge separarea prin coloan fr a se vedea componenii propriu zii ci doar semnalul lor.
ntruct coloanele de separare performante au capaciti de ncrcare mici, sistemul de
detecie trebuie s fie unul foarte sensibil. Totodat, pentru c n LC volumul de prob este de
ordinul microlitrilor (8-10l), volumul detectorilor trebuie s fie de volum apropiat pentru a
se putea sesiza n mod continuu picul cromatografic.
n calitate de instrumente se poate utiliza, n principiu, oricare dispozitiv de analiz
chimic cunoscut, pentru probe lichide, precum i orice combinaii de instrumente fizice. De
exemplu, n ultimul timp, combinaia dintre un detector refractometric i unul bazat pe difuzia
luminii este extrem de eficace n analiza polimerilor n amestec cu monomeri sau oligomeri
dintr-un material. Exist chiar posibilitatea creterii sensibilitii deteciei printr-o reacie
chimic n urma adugrii, cu un debit controlat, a unui reactiv potrivit. Tehnica se numete
derivatizare i se poate practica chiar nainte de introducerea probei n coloan, dar i dup
ieirea din coloan a componentelor separate. Metoda a fost utilizat pn n prezent n
special legat de metodele spectrofotometrice (colorimetrice) sau fluorimetrice i mai ales
pentru analiza unor amestecuri de compui numeroi avnd aceleai funciuni reactive (de
exemplu aminoacizi).
Caracteristicile detectorilor sunt asemntoare cu ale celorlalte instrumente analitice i
oarecum similare cu cele descrise la metoda GC.
AUFS (de la Absorbance Units Full Scale). Astfel n cadrul instrumentelor actuale
sensibilitatea este de 0,001 AUFS cu zgomotul de fond de 1%.
Motivul principal al popularitii acestor detectori este acela c numeroasele substane
organice, anume cele care conin legturi duble (electroni ), respectiv au grefate funciuni
organice cu electroni neparticipani, absorb lumina n UV-VIS. Este vorba de toate
hidrocarburile olefinice i aromatice precum i derivaii tuturor hidrocarburilor cu diferite
funciuni organice (=C=O, =C=S, -N-O, -N=N-, -NH2). ntre acestea se includ i numeroasele
combinaii de interes biologic ca enzime, acizi nucleici etc.
Un mare avantaj al acestor detectori este faptul c sunt insensibili la micile variaii de
debit i temperatur. Celula de detecie face parte dintr-un spectrofotometru i are un volum
extrem de mic, de 8-10l, respectiv un diametru interior de 1mm la o lungime a celulei de10
mm. Construcia acestora este ilustrat n fig. 13.
faz
mobil
Lumin
Se pot distinge i n cazul acestei clase de detectori mai multe tipuri de detectori.
Detectorii monocromatici au fost primii utilizai, fiind mai ieftini deoarece lucreaz
doar la o lungime de und. Modelul cel mai rspndit se compune dintr-o surs luminoas cu
deuteriu sau cu vapori de mercur, un monocromator care separ un domeniu ngust (de ex.
linia 254nm a mercurului) i un detector. Schema bloc a unui astfel de detector este prezentat
n fig. 14.
Detectorii policromatici mai frecvent utilizai n cromatografele HPLC moderne
permit i selectarea lungimii de und la care se lucreaz, dar chiar pot nregistra electronic
absorbana celulei la mai multe lungimi de und simultan. Acest mod de lucru d o mai mare
siguran analizei, n sensul c permite stabilirea puritii, adic dac picul constituie un
semnal dat de o singur substan sau de un amestec (ceea ce se cunoate sub numele de
stabilirea puritii picului). Aceti detectori conin celula amintit montat ntr-un
spectrofotometru cu reea de diode.
Surs MonocromatorCelulnregistrator
Fig. 14. Schema bloc a unui detector HPLC spectrofotometric
186
Cromatografia de lichide de nalt performan (HPLC)
Detectori refractometrici
Detectorii refractometrici, au la baz legile refraciei luminii. Principiul de
funcionare al acestor detectori are la baz legea lui Fresnel - de transmitere a luminii prin
medii transparente avnd un indicele de refracie dat. Astfel, un fascicul luminos (mono sau
policomponent) trece printr-o celul cu dou compartimente unul coninnd doar eluentul pur
iar cellalt faza mobil care prsete coloana (fig. 15).
Diferena dintre indicii de refracie pentru soluiile aflate n cele dou compartimente
vor fi practic nule, atta timp ct din coloan iese doar eluentul pur, dar diferit n momentul
n care n eluent mai apare un component separat - antrenat de ctre eluent din coloan. n
momentul ieirii unui component are loc o deplasare a poziiei fascicolului emergent din
detector - deplasare care este proporional cu concentraia i sesizat de ctre detectorul D.
Eluent
Oglind Amestec
Rezervor
Surs
Senzor
Fant Coloan
n cazul acestui tip de detector sunt posibile i picuri negative, ceea ce face necesar
aducerea liniei de baz la jumtatea scalei lucru care, pe lng sensibilitatea relativ cobort
(10-5molL-1), constituie un dezavantaj. Acest detector este universal, dar nu poate fi utilizat n
cromatografia cu gradieni deoarece, n acest caz, compoziia eluentului la intrarea n coloan
difer de cea de la ieire i se modific continuu, neexistnd o linie de baz. De asemenea
fenomenul este foarte sensibil la temperatur (0.0001C) fiind necesar termostatarea, att a
detectorului ct i a coloanei.
Ali detectori
Pe lng cei amintii, mai rspndii, n practica analitic se mai ntlnesc i ali
detectori prezentai schematic n tabelul 4. Dintre acetia o meniune special trebuie fcut
pentru cei bazai pe spectrometria de mas i FT-IR [112], care au permis determinri
calitative uneori imposibil de realizat prin alte variante de detecie n lipsa etaloanelor
cunoscute. Aceti detectori permit ca, pe baza unei baze de date format din spectre
cunoscute, s se obin compuii cei mai apropiai (3 dintre acetia), din toate substanele
chimice cunoscute, care ar putea fi prezeni n prob.
ntrebri de verificare
1. Care este locul HPLC n analizele instrumentale moderne?
2. Descriei prile componente ale unui cromatograf LC.
3. Cte tipuri de pompe se utilizeaz n HPLC?
4. Care este metoda cea mai folosit pentru introducerea probei n HPLC?
5. Care sunt principalele mecanisme de separare n LC?
6. Prin ce se deosebete faza mobil n LC fa de GC?
7. Ce avantaj aduce utilizarea gradienilor de eluie?
8. Care este rostul unei precoloane?
9. Care sunt cele mai importante mecanisme de separare i care dintre acestea este cel mai
utilizat n practica curent?
10. Ce fel de grupri funcionale de pe suprafaa silicagelului determin apariia unor cozi?
11. Cum se realizeaz fazele chimic legate pe silicagel?
12. Ce reprezint tria relativ a eluentului?
13. Cnd se folosete gradientul de eluie?
14. Ce ste un detector cromatografic?
15. Ce dezavantaje au detectorii refractometrici?
16. Pentru ce substane se preteaz detectorii conductometrici?
[113] Limita de detecie se calculeaz prin cantitatea de substan injectat care d un semnal de 5 ori mai mare
decr valoarea a zgomotului de fond pentru o substan cu masa molar de 200 gmol-1 injectat n 10l
pentru o coloan normal i n 1l pentru coloane capilare.
188
Cromatografia ionic (IC)
Detecia
La prsirea coloanei ionii nu pot fi detectai suficient de sensibil, conductometric, n
mod direct, deoarece au concentraii coborte i sunt coninui n eluentul format dintr-un
electrolit - cu o concentraie comparabil sau chiar mai mare. De aceea s-a recurs la
supresorul ionic. Acesta a fost realizat pentru prima dat de un grup de cercettori american,
n 1975 (H. Small i colab.) iar iniial a constat dintr-o coloan-supresor, plasat n
continuarea celei de separare, cu rolul de a transforma eluentul (un acid sau o baz tare) n
190
Cromatografia ionic (IC)
ap. De exemplu, pentru eluentul amintit anterior - acidul clorhidric - coloana supresor este
umplut cu o rin schimbtoare de anioni, avnd o capacitate de schimb mare (de tipul celei
din fig. 1-dreapta) cu o formul general: R-OH. Prsind coloana de separare eluentul,
coninnd acid clorhidric diluat, va ptrunde n coloana supresor unde se va petrece reacia:
R-OH + (H+ + Cl-) R-Cl + H2O
prin care acidul utilizat drept eluent se transform n ap - un neelectrolit.
ntre timp, srurile se transform n hidroxizii corespunztori:
R-OH + (Na+ + Cl-) R-Cl + (Na+ + OH-)
R-OH + (K+ + Cl-) R-Cl + (K+ + OH-)
Apa fiind practic neionizat va permite detecia sensibil a hidroxizilor - total ionizai
- ce au aprut din zonele formate iniial din cele dou sruri. Schema unui cromatograf ionic
este reprezentat n fig. 2a iar n fig. 2b este redat distribuia concentraiilor speciilor ionice
la ieirea din prima coloan, n punctul A (fig. 2a). Pe aceeai figur este prezentat
conductan i la ieirea din supresorul ionic, n punctul B.
(a) (b)
Fig. 2. Schema de principiu a cromatografiei ionice (IC) -(a) i a modului de aciune a
supresorului ionic -(b). Aici RH este coloana de separare iar ROH, coloana supresor
NaCl i NaBr. Supresorul utilizat n acest caz va fi format dintr-o rin de forma R-H n
exces pe care se va petrece reacia:
R-H + (Na+ + OH-) R-Na + H2O
n afar de detectorul conductometric se mai pot utiliza i alte tipuri de detectori cum
ar fi cei amperometrici sau voltametrici.
Supresorul electrochimic
Supresorul electrochimic (sau autosupresorul) din cromatografele ionice recente, a
nlocuit mica coloan cu schimbtori de ioni cu membrane schimbtoare (fig. 3) avnd
aceeai compoziie i, n plus, schimbul ionic este accelerat prin electrodializ. n acest fel s-a
mrit viteza procesului i s-a micorat volumul mort. Mai mult, a crescut durata de
funcionare a detectorului. De exemplu n fig. 3 se prezint shematic principiul de funcionare
a unui astfel de supresor electrolitic pentru cazul ieirii din coloan a oricror anioni, notai
pentru simplitate cu X.
Eluentul care a ieit din coloana de separare trece prin spaiul ngust dintre dou
membrane. Dup transformarea eluentului n ap n interiorul supresorului electrolitic, iar a
componenilor ionici separai n acizi, datorit membranei care, de ast dat este una cationic
(RH), soluia intr n detector iar ulterior alimenteaz spaiul dintre membrane i cei doi
electrozi: unul, pozitiv (+), respectiv cellalt, negativ (-). Fenomenul de electrodializ este
redat mai detaliat n fig. 4.
Membran semipermeabil
la canal Recirculare
Eluent Detectora
la canal Recirculare
+
Fig. 3. Amplasamentul supresorului electrochimic la ieirea din coloan
192
Cromatografia ionic (IC)
datorit efectului Donnan. Tot datorit acestui efect nu traverseaz membrana nici ionul OH-.
n detector intr, n cazul separrii unui amestec de anioni X-, respectiv Y-, doar acizii HX
respectiv HY total disociai n ap. n consecin n detectorul conductometric, din cauza
lipsei de conducie a apei pure, raportul semnal/zgomot este mult mbuntit.
Aplicaii
Una din cele mai importante aplicaii este analiza speciilor anorganice, cum ar fi
analiza cationilor i anionilor din ape, soluii sau fluide biologice dar i pentru analiza unor
poluani (cum ar fi ionul NH4+ din apele naturale). Alte aplicaii imediate sunt analiza bilor
de galvanizare sau a lichidelor de natur apoas coninnd sruri: sucuri de fructe, fluide
industriale, alimente etc. Metoda permite i analiza unor specii organice polare cum ar fi
acizii sau aminele.
ntrebri de verificare
1. Care component a instrumentaiei este sediul separrii cromatografice n cromatografia
ionic?
2. Ce semnificaii au simbolurile GC, LC respectiv IC?
3. Care sunt eluenii folosii n IC?
4. Ce faze staionare utilizeaz cromatografia ionic?
5. Ce rezult din reacia RH + Na+ + Cl- ? Dar din reacia ROH + Na+ + Cl-?
6. Ce efect are supresorul ionic asupra deteciei? Ce rezultat are acesta asupra semnalului?
7. Ce detector se utilizeaz cu precdere n cromatografia ionic?
8. Care este dezavantajul supresorului ionic cu schimbtori de ioni, care a fost nlturat prin
introducerea celui cu membran schimbtoare (electrochimic)?
9. Cu ce tehnic se pot analiza anionii Cl- i SO42- din ape?
Poziia final a
frontului la eluie
Probe Etalon
Linie de start
1 2 0
Fig. 1. Placa cromatografic i poziiile relative ale spoturilor
n aceast variant a cromatografiei de lichide, separarea nu mai are loc ntr-o coloan
nchis ci pe o faz staionar similar, granular (poroas) dispus ntr-un strat subire,
formnd un plan (fig. 1). Acest strat denumit subire, se realizeaz dintr-un adsorbent cu
grosimi cuprinse ntre 100-250m i poate fi simplu sau legat adeziv de un plan rigid, fiind pe
tot parcursul separrii n contact cu o faz gazoas - mai mult sau mai puin saturat cu vapori
de eluent. Primul caz a fost mult utilizat n trecut n cazul aa-numitei cromatografii pe hrtie
unde faza staionar consta dintr-o band de hrtie de filtru, confecionat din celuloz pur,
sau, extrem de rar, prin folosirea unor plci din materiale ceramice sinterizate poroase.
Cellalt caz mult mai utilizat (chiar n zilele noastre) face apel la straturi subiri realizate
dintr-un adsorbent pulverulent (silicagel, celuloz, alumin, poliamid sau derivate ale
acestora) dispuse n straturi subiri pe plci rigide din sticl sau, pe folii flexibile din aluminiu,
194
Cromatografia planar (TLC)
poliester sau alte materiale inerte fa de sistemul pe care are loc separarea. Se mai poate
recurge i la straturi formate pe baghete de sticl sau tuburi din sticl.
Obinerea straturilor subiri se realiza la nceput n laborator, pornindu-se de la o
suspensie apoas a adsorbentului pulverulent (10-40m) mpreun cu un liant anorganic (de
exemplu ghips, SiO2-coloidal) sau organic (amidon, carboximetilceluloz), iar pentru aplicare
se foloseau nite dispozitive mecanice simple. Straturile subiri mai pot include i indicatori
de fluorescen care n lumin UV fac posibil vizualizarea spoturilor substanelor care absorb
n acest domeniu prin stingerea fluorescenei, adic prin apariia unor spoturi ntunecate pe
fond luminos. Straturile subiri pot fi achiziionate gata preparate de la firme productoare
specializate (Camag, Cole-Parmer etc.).
Aplicarea probei
Pentru a se putea demara procesul de eluie, n prealabil pe placa cu strat subire se
aplic proba. Acest lucru se realizeaz cu seringi sau micro-pipete, dar i alte dispozitive
specializate (fig. 2), astfel nct s se obin aliniate, pe linia de start (fig. 1), mai multe
spoturi de probe, respectiv de amestecuri etalon - supuse simultan separrii. ntruct probele
se aplic din soluii diluate (1-2%), n anumii solveni, pentru a se evita interferena acestora
n procesul de eluie, plcile se usuc nainte de introducerea n amestecul de solveni. Astfel
se pot supune separrii probe care se concentreaz pe zone nguste (de lungime i lime
preselectate) asigurndu-se o eficien mrit separrii.
Migrarea eluentului
Are loc prin coloana deschis, care acioneaz cu totul analog celei nchise (vezi LC),
are loc sub aciunea forelor capilare i provoac migrarea difereniat a componentelor
amestecului de separat. Acest lucru se realizeaz n urma simplei scufundri (manuale) a
plcii cromatografice n eluentul potrivit. Din acest moment, eluentul irignd prin capilaritate
stratul poros migreaz ascendent prin stratul subire, provocnd separarea. Timpul de separare
variaz ntre 3 i 60 min.
Nu este totui exclus utilizarea unor dispozitive mai sofisticate de alimentare cu
solveni (minipompe) - fcndu-se uneori apel chiar la gradieni de concentraie (v. par. 16.5
n cazul LC). Se poate de asemenea practica migrarea eluentului pe orizontal sau descendent.
Se poate elua o plac chiar de mai multe ori sau se poate evapora solventul n timpul migrrii,
n acest fel mrindu-se eficiena pe seama timpului de separare.
Pentru realizarea separrii (eluiei) se utilizeaz camere de developare. Cteva dintre
cele mai utilizate dintre acestea se prezint n fig. 3. Formele preferate sunt cele
Eluia are loc dup introducerea plcii n camera cromatografic, pn cnd amestecul
de solveni atinge o nlime final, fixat de obicei ntre 5 i 18 cm, sau un anumit timp
stabilit, n prealabil, prin ncercri preliminare. Solvenii utilizai se aleg n funcie de
proprietile de eluie ale substanelor supuse separrii (analizei). Natura acestora depinde nu
numai de substanele implicate dar i de mecanismul de separare propus, respectiv de faza
staionar avut la dispoziie.
Dup eluie, placa se scoate, se usuc i dac spoturile nu se vd, se trece la
vizualizarea acestora (operaie numit uneori revelare). Pentru aceasta, placa fie se scufund
ntr-un reactiv, fie se pulverizeaz cu acesta sau se introduce ntr-o atmosfer coninnd gaze
reactive i chiar ntr-o etuv, la cald, cnd spoturile devin vizibile n urma unor reacii
chimice (avnd un aspect apropiat celor din fig. 4).
Doar apoi se poate trece la etapa analizei propriu-zise. Reactivii de culoare pot fi
generali, ca de exemplu acidul sulfuric la cald (120C), care determin carbonizarea
196
Cromatografia planar (TLC)
majoritii substanelor organice, sau specifici, cnd acetia reacioneaz doar anumite
substane sau funciuni organice.
O alt variant de a face spoturile vizibile, preferat tot mai mult n ultimul timp, este
folosirea unor straturi subiri fluorescente (spre exemplu materialul pulverulent conine ZnS -
fluorescent). Prin examinarea cromatogramelor eluate i uscate n lumin UV, se vor observa
spoturi nchise la culoare sau colorate, pe fond fluorescent - luminos. Atunci cnd chiar
substanele separate sunt fluorescente nu mai este nevoie de fondul fluorescent i este
suficient o plac obinuit, observat n lumin UV, spoturile devenind luminoase pe un
fond ntunecat (fig. 4).
O variant i mai modern, foarte eficace de vizualizare, folosind tot lumin UV,
const n utilizarea unor plci cu straturi subiri coninnd amestecuri de luminofori. n acest
caz plcile au o culoare compus (de regul lumina emannd din trei substane luminescente
avnd culori diferite). Cum fiecare luminofor emite la o alt lungime de und, iar substanele
separate absorb diferit lumina, fiecare component de pe plac va avea, n consecin, o alt
culoare. n acest caz detecia este mai sigur pentru c nu difer doar poziia relativ a
spotului respectiv pe plac ci i culoarea.
i dioxan (VI), toluen (VII) i cloroform (VIII). Hexanul este un solvent considerat complet
nepolar i este recomandat a fi introdus n amestecuri pentru aducerea spoturilor n domeniul
considerat optim, de Rf = 0.2-0.8 dac mai este necesar.
scanarea. Densitometria se poate realiza n lumin vizibil sau UV, n ultimul caz fiind
posibil i msurarea radiaiei de fluorescen.
Aplicare Eluia 1
Rotire
Solvent 1
Eluia 2 Aspect final
Solvent 2
Fig. 5. Modul de executare a cromatografiei n strat subire bidimensionale
H H 2H
S/N = =
h n /2 h n
hn
Fig. 6. Ilustrarea mrimilor care afecteaz raportul semnal/zgomot
O variant mai simpl dar mai laborioas de analiz cantitativ const n splarea
zonei corespunztoare analitului de pe suport ntr-un pahar, folosind un solvent adecvat i
apoi determinarea, cu o alt metod instrumental, a concentraiei soluiei rezultate.
I W
F
O
D
P MC Hg
200
Cromatografia planar (TLC)
mare dect o concentraie limit, C? De foarte multe ori rspunsul la aceast ntrebare este
suficient n practica curent.
500
y = 9.2941x
Cantitate Se, g
400 2
R = 0.9928
Intensitatea fluorescenei
300
200
100
0
0 10 20 30 40 50
nlime, m
Fig. 8. Aspectul unei densitograme a compusului fluorescent al seleniului 1,2-
diaminonaftalin, densitograme din msurtorile de fluorescen n cantiti cresctoare
(1fg=10-12g) i aspectul curbei de etalonare
Dar pentru monitorizarea automat a coninutului de poluani din ape sau sol, pentru
expertize sau pentru controlul alimentelor, doar metoda PC nu este suficient.
ntrebri de verificare
1. Cu ce dispozitive se aplic probele pe placa cu strat subire n PC?
2. Care adsorbeni se utilizeaz cu frecven maxim n PC?
3. Ce metode de separare cromatografice sunt aplicabile n PC?
4. Pe ce baz se realizeaz migrarea fazei mobile prin stratul subire de adsorbent, n varianta
clasic?
5. Ce sunt camerele de developare i de cte tipuri sunt acestea?
6. Unde se pot aplica probele pe plcile cromatografice n variantele unidimensional i
bidimensional?
7. De ce s-au introdus straturile subiri fluorescente?
8. Cum se pot observa componentele incolore pe placa cromatografic dup eluare?
9. Ce este valoarea Rf?
10. Cum se realizeaz analiza calitativ n PC?
11. Care este cea mai exact variant de analiz cantitativ n PC?
12. Ce este o densitogram i la ce servete n analiza chimic?
A vedea lumea pentru un moment ca ceva bogat i ciudat este propria recompens, o descoperire
Edward M. Purcell, din lectura de decernare a premiului Nobel (11 Dec. 1952) pentru descoperirea RMN
[116] Cerichelli Giorgio, Mancini Giovanna, Role of Counterions in the Solubilization of Benzene by
Cetyltrimethylammonium Aggregates. A Multinuclear NMR Investigation, Langmuir, p. 182-187, Volume
16, Issue 1, January 11, 2000.
[117] Luchetti Luciana, Mancini Giovanna, NMR Investigation on the Various Aggregates Formed by a Gemini
Chiral Surfactant, Langmuir, p. 161-165, Volume 16, Issue 1, January 11, 2000.
202
Analiz spectral nuclear
Momentul magnetic se exprim adesea prin factorul nuclear gI (tabelul 5.1), corelat cu
raportul giromagnetic i magnetonul nuclear N prin relaia:
h
gI = , N = 5.05110-27 JT-1 (6)
N 2
cnd relaia (5) devine:
z = gImIN (7)
Valorile pozitive din tabelul 1 indic un moment magnetic paralel cu spinul iar
valorile negative indic c momentul magnetic i spinul sunt antiparaleli.
ntr-un cmp magnetic B exterior cele 2I+1 orientri ale nucleului au energii diferite,
date de:
EI = - zB = - gImINB (8)
Adesea se folosete n notaii frecvena Larmor L:
B
L = (9)
2
cnd ecuaia (8) devine:
EI = -mIhL (10)
Considernd un nucleu cu spin I = diferena de energie E care apare ntre cele
dou stri mI = n prezena cmpului magnetic B este:
E = E- - E = 2hL = hL (11)
n absena cmpului B (B = 0) frecvena Larmor L se anuleaz (relaia 9) i diferena
de energie E este nul (relaia 11).
Magnet
Semnal RF
Receptor RF
Detector
Amplificator RF
nregistrator
Radiaie RF
Traductor
Fig. 1. Schema bloc a unui spectrometru RMN
Deplasarea chimic
Electronii atomilor prezint un spin electronic. Acesta interacioneaz la rndul lui cu
cmpul B aplicat pentru a da momentul unghiular electronic, notat B. Acest cmp
suplimentar, manifestat local pe fiecare nucleu se exprim prin:
204
Analiz spectral nuclear
B = - B (13)
unde se numete constant de ecranare pentru nucleul studiat. De obicei este pozitiv, dar
poate fi i negativ. Ceea ce se manifest asupra nucleului Bloc este diferena dintre cmpul
aplicat i cmpul magnetic suplimentar:
Bloc = B + B = (1-)B (14)
n prezena cmpului Bloc frecvena Larmor corespunztoare este:
B
L = (1-) (15)
2
ceea ce face ca frecvena Larmor L s fie diferit pentru acelai tip de nuclee situate n
nconjurri diferite (dup cum se tie distribuia sarcinii electronice a atomului considerat
depinde puternic de electronegativitile elementelor i gruprilor direct nvecinate. Aceste
frecvene de rezonan diferite se exprim uzual prin mrimea numit deplasare chimic. Se
definete deplasarea chimic ca diferena dintre frecvena de rezonan a nucleului studiat i
un standard de referin. Standardul de referin pentru protoni 1H este rezonana protonilor
din tetrametilsilan, Si(CH3)4, notat TMS. Motivul acestei alegeri este c TMS se dizolv fr
reacie n multe lichide [118-120].
13
Pentru alte nuclee se folosesc alte standarde de referin [121-124]. Pentru C se
folosete ca standard frecvena de rezonan a 13C din TMS [125], iar pentru 31P frecvena de
rezonan a 31P din H3PO4 85% soluie apoas [126].
Diferena ntre frecvena de rezonan a standardului i frecvena de rezonana a unui
anumit nucleu crete cu intensitatea B a cmpului magnetic aplicat.
[118] Gerritz Samuel W., Andrea M. Sefler, 2,5-Dimethylfuran (DMFu): An Internal Standard for the
"Traceless" Quantitation of Unknown Samples via 1H NMR, Journal of Combinatorial Chemistry, p. 39-
41, Volume 2, Issue 1, January 11, 2000.
[119] Shapiro Yury E., 1H NMR Self-Diffusion Study of Morphology and Structure of Polyvinyl Alcohol
Cryogels; American Society, JCIS, p. 453-465, Volume 212, Issue 2.
[120] Wild J. M.; Artifacts Introduced by Zero Order Phase Correction in Proton NMR Spectroscopy and a
Method of Elimination by Phase Filtering, American Society, JMRE, p. 430-436, Volume 137, Issue 2.
[121] Shao Chaoying, Miyazaki Yoshinobu, Matsuoka Shiro, Yoshimura Kazuhisa, Sakashita Hirofumi,
Complexation of Borate with Cross-Linked Polysaccharide Anion Exchanger: 11B NMR and Adsorption
Properties Studies, Macromolecules, p. 19-25., Volume 33, Issue 1, January 11, 2000.
[122] Sham Simon, Wu Gang, Solid-State 25Mg NMR Study of Inner-Sphere Mg2+ Binding Complexes, Inorganic
Chemistry, p. 4-5, Volume 39, Issue 1, January 10, 2000.
[123] Drew Mark, Orton Edward, Krolikowski Paul, Salvino Joseph M., Kumar N. Vasant, A Method for
Quantitation of Solid-Phase Synthesis Using 19F NMR Spectroscopy; Journal of Combinatorial Chemistry,
p. 8-9, Volume 2, Issue 1, January 11, 2000.
[124] Gaare Kristin, Effects of La Exchange on NaY and NaX Zeolites As Characterized by 29Si NMR, The
Journal of Physical Chemistry B, p. 48-54, Volume 101, Issue 1, January 2, 1997.
[125] Orendt Anita M., Facelli Julio C., Bai Shi, Rai Amarjit, Gossett Michele, Scott Lawrence T., Boerio-
Goates Juliana, Pugmire Ronald J., Grant David M., Carbon-13 Shift Tensors in Polycyclic Aromatic
Compounds. 8. A Low-Temperature NMR Study of Coronene and Corannulene, The Journal of Physical
Chemistry A, p. 149-155, Volume 104, Issue 1, January 13, 2000.
[126] Osegovic John P., Drago Russell S., Measurement of the Global Acidity of Solid Acids by 31P MAS NMR of
Chemisorbed Triethylphosphine Oxide, The Journal of Physical Chemistry B, p. 147-154, Volume 104,
Issue 1, January 13, 2000.
Chimie Analitic i Instrumental 205
19
>C=CX-
C-X n Ar-X
R-COOH RCH
R-CHO R-CN
R2C=O R3C
R=C=R -C=C-
+
R3C >C=C<
300 250 200 150 100 50 0
13
Fig. 3. Domeniul de deplasri chimice ale C n diferite grupri funcionale
Un exemplu de spectru este redat n fig. 4, pentru etanol. Existena deplasrii chimice
justific apariia semnalelor n spectru. Atomii de hidrogen, avnd diferite ecranri electronice
pentru diferite poziii n molecul, furnizeaz semnale diferite. Nici protonii aceleiai grupri
nu sunt scutii de discriminare, dup cum se vede din spectru. n acest caz fiecare atom d cel
puin o linie n spectru, unii atomi producnd chiar dou linii.
206
Analiz spectral nuclear
CH3CH2OH CH3CH2OH
CH3CH2OH
4 3 2 1
1
Fig. 4. Spectrul H-RMN al etanolului cu atomii care furnizeaz semnalul n spectru ngroai
Structura fin
Scindarea rezonanelor n linii individuale (fig. 4) se numete structura fin.
Fiecare nucleu magnetic contribuie la cmpul local al altor nuclee i modific astfel
frecvena lor de rezonan. Intensitatea interaciunii produs de un nucleu asupra altui nucleu
este proporional cu produsul celor doi spini i este exprimat prin constanta de cuplaj scalar
J i se msoar n hertzi. Constanta de cuplaj este independent de intensitatea cmpului
aplicat i este o aciune reciproc a celor dou nuclee, adic dac nucleul A scindeaz linia de
rezonan a nucleului B cu constanta de cuplaj JAB atunci i nucleul B scindeaz linia de
rezonan a nucleului A cu aceeai valoare absolut JAB.
Pentru a exprima constante de cuplaj ntre nuclee cu deplasri chimice semnificativ
diferite se folosesc litere deprtate n alfabet (de exemplu A i X) iar pentru constante de
cuplaj ntre nuclee cu deplasri chimice apropiate se folosesc litere apropiate n alfabet (de
exemplu A i B).
Fie un sistem AX pentru care spinul are aceeai valoare I(A) = I(X) = . Datorit
interaciunii spin-spin cele dou stri (+ i - ) vor da linii diferite n spectru pentru fiecare
[127] Pfrommer Bernd G., Mauri Francesco, and Louie Steven G., NMR Chemical Shifts of Ice and Liquid
Water: The Effects of Condensation, Journal of the American Chemical Society, p. 123-129, Volume 122,
Issue 1, January 12, 2000.
Chimie Analitic i Instrumental 207
19
nucleu (A i X). Aceste perechi de linii sunt centrate pe deplasarea chimic a fiecrui nucleu
(fig. 5).
J AX 2
JAX JAX
I2X
I 'A
IX IA
A X X A
Fig. 5. Efectul cuplajului spin-spin asupra unui spectru AX i intensitatea diferit a
cuplajelor spin-spin n spectrele AX i AX2
Pentru un sistem AXn (AX2, AX3, ...) la care nucleele au acelai spin I(A) = I(X) =
scindarea este tot un dublet, deoarece grupul de nuclee echivalente nX rezoneaz ca un singur
nucleu. Diferena cu cazul ilustrat n fig. 5 este redat n fig. 6, i anume intensitatea
semnalului este de n ori mai mare dect n specia AX. n spectrul AX2 specia A va scinda n 3
semnale cu raportul IA:I'A:IA = 1:2:1. De fapt semnalul I'A este rezultatul suprapunerii a dou
semnale IA aa cum se poate observa din fig. 5. Schema distribuiei intensitii semnalului n
scindrile de cuplaj spin-spin respect distribuia dat de triunghiul lui Pascal. Astfel, n
nuclee echivalente cu spinul rezoneaz cu un nucleu sau grup de nuclee echivalente dup o
schem de scindare i suprapunere a intensitilor ca cea reprezentat n fig. 6a i analog
pentru nucleele cu I = 1 (fig. 6b) [128].
I= A din AmXn I=1
n=0
n=1
n=2
n=3
n=4
1 4 6 4 1 1 4 10 16 19 16 10 4 1
Fig. 6. Cuplaje spin-spin scindri i suprapuneri pentru semnalul lui A din AmXn
Formulele de calcul pentru seriile din fig. 6 pot fi obinute cu ajutorul MathCad cu
formulele: N0,0 = 1; n := 1,2..5; k := 0,1..4; Nn,k+1 = Nn-1,k + Nn-1,k+1 pentru I = i respectiv:
M0,0 = 1; n := 1,2..5; k := 0,1..8; Mn,k+2 = Mn-1,k + Mn-1,k+1 +Mn-1,k+2 pentru I = 1 cnd se obin
matricele:
[128] Ylihautala Mika, Vaara Juha, Ingman Petri, Jokisaari Jukka, Diehl Peter, 14N and2H NMR Study of the
Mesophases of Cetyltrimethylammonium Bromide in Formamide, The Journal of Physical Chemistry B, p.
32-38, 101(1), 1997.
208
Analiz spectral nuclear
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
01 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0
10 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0
M=2 0 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0
N=
30 0 1 2 3 2 1 0 0 0 0 0 1 2 1 0 0
40 0 1 3 6 7 6 3 1 0 0 0 1 3 3 1 0
50 0 1 4 10 16 19 16 10 4 1 i 0 1 4 6 4 1
n mod analog se rezolv i scindarea i deplasarea semnalului ce provine de la X din
AmXn, cu deosebirea c schema Pascal se aplic de aceast dat pentru m.
Nuclee echivalente
Un grup de nuclee sunt echivalente chimic dac i numai dac: sunt legate printr-o
operaie de simetrie a moleculei; au aceleai deplasri chimice.
Nucleele sunt echivalente magnetic dac i numai dac: sunt echivalente chimic; au
interaciuni spin-spin identice cu oricare alte nuclee magnetice din molecul.
Diferena ntre echivalena chimic i echivalena magnetic este ilustrat de
moleculele CH2F2 i H2C=CF2. n ambele molecule protonii sunt echivaleni chimic. Totui,
n CH2F2 protonii sunt echivaleni magnetic. n H2C=CF2 protonii nu sunt echivaleni
magnetic (fig. 7).
H F H
F
F C
C C
H F H
Fig. 7. Geometria moleculelor de CH2F2 i H2C=CF2
19
Nucleele de F sunt magnetice i au spin I = . Datorit prezenei legturii duble,
orientarea spinilor este cea prezentat n fig. 8 i simetria magnetic este anulat. Astfel,
nucleul de H se va afla cis fa de nucleul de F i nucleul de H va fi cis fa de nucleul
de F ceea ce va face ca scindarea semnalului nucleului de H s fie diferit de scindarea
semnalului nucleului de H.
Alt situaie este relativ la protonii din R-CH3 (fig. 8).
H
R C
H H
Fig. 8. Geometria gruprii R-CH3
Dei cele trei nuclee sunt diferite din punct de vedere magnetic, practic nu se va
nregistra nici o scindare n spectrul RMN datorit rotaiei rapide a grupei CH3 n jurul
legturii R-C, ceea ce va media diferenele.
4 3 2 1
Fig. 9. Interpretarea unui spectru 1H-RMN
210
Analiz spectral nuclear
[129] Schwartz J., A graduate description of pulse RMN (time domain), J. Chem. Edu., 65, 752, 1988.
[130] Schwartz J., A graduate description of pulse RMN (time domain), J. Chem. Edu., 65, 959, 1988.
[131] Wink J., Spin-net relaxation times in 1H-RMN spectroscopy, J. Chem. Edu., 66, 810, 1989.
[132] Sanders J. K. M., Hunter B. K., Modern NMR spectroscopy, Oxford University Press, 1987.
[133] King R. W., Williams K. R., Fourier transform in chemistry. Part 4. RMN: Bidimensional methods, J.
Chem. Edu., 67, A125, 1990.
[134] Haworth O., Special edition of RMN spectroscopy, Chemistry in Britain, 29, 589, 1993.
[135] Fyfe Colin A., Lewis Andrew R., Investigation of the Viability of Solid-State NMR Distance
Determinations in Multiple Spin Systems of Unknown Structure, The Journal of Physical Chemistry B, p.
48-55, Volume 104, Issue 1, January 13, 2000.
[136] Fuchs B., Scheler U., Branching and Cross-Linking in Radiation-Modified Poly(tetrafluoroethylene): A
Solid-State NMR Investigation, Macromolecules, p. 120-124, 33(1), 2000.
Chimie Analitic i Instrumental 211
19
[137] Ebsworth A. V., Rankin D. W. H., Cradock S., Structural methods of inorganic chemistry, Blackwell
Scientific, Oxford, 1992.
[138] Li Y., Wolters A. M., Malawey P. V., Sweedler J. V., and Webb A. G., Multiple Solenoidal Microcoil
Probes for High-Sensitivity, High-Throughput Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy, Analytical
Chemistry, p. 4815-4820, Volume 71, Issue 21, November 1, 1999.
[139] Subramanian S., Murugesan R., Devasahayam N., Cook J. A., Afeworki M., Pohida T., Tschudin R. G.,
Mitchell J. B., Krishna M. C., High-Speed Data Acquisition System and Receiver Configurations for
Time-Domain Radiofrequency Electron Paramagnetic Resonance Spectroscopy and Imaging, American
Society, JMRE, p. 379-388, Volume 137, Issue 2.
212
Analiz spectral nuclear
Cavitate prob
Clistron Detector
Detector
de faz
ms = +
E
ms = Electromagnei Modulator
Fig. 10. Nivelele de spin electronic n cmp magnetic i schema bloc spectrometru RES
[140] Diudea Mircea, Gutman Ivan, Jntschi Lorentz, Molecular Topology, Nova Science, Huntington, New
York, 332 p., 2001, ISBN 1-56072-957-0, http://www.nexusworld.com/nova/1271.htm.
Chimie Analitic i Instrumental 213
20
Scri de msur
Operaia de msurare presupune executarea a dou operaii: observarea i nregistrarea
rezultatelor observaiei (vezi i [1]). Msurarea depinde astfel n mod esenial de natura
obiectului (material), fenomenului (imaterial) observat, i de modalitatea de msurare i
nregistrare a rezultatelor observaiei. Uneori msurarea presupune eantionare [2] dar
ntotdeauna presupune mijloace de determinare a msurii, i anume o procedur obiectiv i
totodat repetabil [3]. Msurtoarea nu se poate disocia de scopul pentru care este efectuat
i anume evaluarea unei caracteristici sau a unei proprieti a obiectului sau fenomenului
observat. n acest sens, observarea trebuie s aib un caracter sistematic i msurtoarea s fie
susinut de criterii stabilite de standard i performan i are ca scop obinerea i
cuantificarea informaiei [4], avnd astfel ca rezultat asocierea unui numr la un obiect,
fenomen sau eveniment [5].
Operaia de msurare se poate efectua doar cu ajutorul unei scri de msur. Din
acest ultim unghi de vedere a problematicii msurtorii rezult c msurtoarea este direct
asociat cu tipul scrii de msur.
Aa cum rezult din ce expuse mai sus, ct de exact este o msurtoare este la fel de
important ca valoarea msurtorii nsei. Din acest motiv atunci cnd se exprim valoarea
unei msurtori aceasta este nsoit de precizie, n diferite forme de exprimare ale acesteia.
Msura refer o mrime supus observaiei. Din acest punct de vedere, mrimile se
clasific n mrimi calitative i mrimi cantitative.
O mrime este calitativ dac pentru aceasta nu poate fi (sau cel puin nu exist)
definit o scar de valori cel puin ordonat. Dac scara de valori a unei mrimi admite o
relaie de ordine (strict) ntre elementele acesteia atunci mrimea este cantitativ.
Un exemplu. S considerm o mulime cu 2 elemente n care ordinea elementelor nu
este relevant: C = {a,b}. Mulimea submulimilor acestei mulimi este SC =
{{},{a},{b},{a,b}}. O relaie de ordine n mulimea SC este definit prin numrul de
elemente (cardinalitatea) al submulimii. nc de la nceput s remarcm c relaia de ordine
cardinalitate nu este o relaie de ordine strict, existnd dou submulimi cu acelai numr de
elemente: |{a}| = |{b}| = 1. Relaie de ordine strict exist ntre 0 = |{}| < |{a}| = 1 = |{b}| <
|{a,b}| = 2.
214
Prelucrarea datelor rezultate din msurtori
[141] http://www.emory.edu/CHEMISTRY/faculty/menger.html
Chimie Analitic i Instrumental 215
20
O serie finit de valori poate s constituie o scal ordinal dac elementele acesteia se
afl ntr-o relaie de ordine. Astfel, de exemplu valorile {Prezent, Absent} enumerate ntre
exemplele de scal binomial pot deveni scal ordinal dac ntre valorile "Prezent" i
"Absent" se definete o relaie de ordine ("Absent" < "Prezent"). Alte astfel de exemple sunt
"Fals" < "Adevrat", 0 < 1, "Negativ" < "Nenegativ", "Nepozitiv" < "Pozitiv". Dintre
exemplele de scale de msur cu 3 valori unul este imediat: "Negativ" < "Zero" < "Pozitiv".
Ceea ce deosebete suplimentar o scal ordinal de o scal nominal este faptul c nu
este necesar ca scala ordinal s fie format dintr-un numr finit (sau cunoscut) de elemente.
Este necesar ns ca intre ele s existe o relaie de ordine definit cel puin printr-o funcie
"Succesor" al unei valori i complementul acesteia "Predecesor".
n scala interval distana ntre atribute are o semnificaie. De exemplu la msurarea
temperaturii, distana ntre 30 i 40 este aceeai cu distana ntre 70 i 80. Intervalul ntre
valori este interpretabil (are o semnificaie fizic). Acesta este motivul pentru care are sens s
calculm media unei variabile de tip interval, ceea ce nu se aplic la scalele ordinale. Aa cum
80 nu reprezint de dou ori mai cald dect 40, pe scalele interval nu are sens raportul a
dou valori.
n final, pe scala raport exist totdeauna valoarea 0 care are semnificaie. n mod
evident construcia unei scale raport presupune c cea mai mic valoare care se poate observa
este 0. Aceasta nseamn c ntotdeauna se poate evalua raportul a dou msuri pe o scal
raport, aceasta fiind de asemenea o scal raport.
Este important de notat c calitatea unei scale de msur nu d i acurateea de msur,
sau densitatea valorilor posibile ale unei variabile n jurul valorii msurate. Astfel, chiar dac
frecvent folosim ipoteza c o variabil este continu (ntre oricare dou valori msurate
teoretic exist cel puin nc o valoare) n practic se ntmpl deseori ca valoarea
intermediar a crei existen este presupus (sau demonstrat teoretic sau practic) s nu poat
fi observat (msurat) datorit preciziei de care dispunem n msur.
Este de notat deci c tipul scalei de msur nu d i caracterul variabilei msurate. Se
pot la fel de bine msura variabile discrete pe scale de msur raport cum se pot msura i
variabilele continue.
Astfel, din punct de vedere al tipului scalei de msur, o variabil care numr
moleculele dintr-un set de date este "la fel de" variabil raport ca o variabil care msoar
temperatura la care aceste molecule se afl n mediul ambiant sau trec de la starea de agregare
solid la cea lichid.
n Figura 1 este reprezentat entropia scalelor de msur n termeni de organizare a
informaiei. Figura 1 exprim o serie de proprieti ale scalelor de msur. Astfel, mulimea
216
Prelucrarea datelor rezultate din msurtori
scalelor de msur binomiale este cea mai larg, cuprinznd scalele nominale. Demonstraia
acestui fapt este uor de fcut. Admind c avem la dispoziie o scal nominal cu 3
categorii, atunci se pot defini pe baza acesteia 3 scale binomiale, fiecare verificnd
apartenena msurabilei la una din cele 3 categorii. Mulimea scalelor ordinale este inclus n
mulimea scalelor nominale. Admind c avem la dispoziie o scal ordinal, renunnd la
relaia de ordine deja am construit scala de msur nominal asociat. n mod identic, avnd
la dispoziie o scal interval, o putem segmenta pe aceasta ntr-un numr arbitrar de
subintervale i cu ajutorul acestor subintervale construim una din scalele ordinale asociate
scalei interval.
Binare
Nominale
Ordinale
Interval
Raport
O variabil este discret dac valorile pe care aceasta le ia sunt n numr finit sau cel
mult se poate construi o funcie bijectiv ntre valorile acesteia i mulimea numerelor
naturale (fiind un numr infinit de valori n acest caz, notat cu simbolul iudaic alef: 0).
Astfel rezultatul oricrei funcii de numrare (cum ar fi numrul de molecule incluse ntr-un
experiment) este o variabil discret.
Opus situaiei variabilelor discrete, sunt variabilele continue, ale cror domeniu de
valori depete capacitatea de numrare a numerelor naturale. Un exemplu tipic n acest sens
este mulimea funciilor definite pe mulimea numerelor naturale cu valori n mulimea {0,1}.
Cardinalitatea acestei mulimi este egal cu cardinalitatea codomeniului (|{0,1}|=2) la puterea
cardinalitatea domeniului (|{0,1,...}|=0), i anume 20. Matematic se poate demonstra
(folosind modalitatea de reprezentare binar a numerelor) c orice mulime care depete
capacitatea de numrare a numerelor naturale are tot attea elemente cte are mulimea
funciilor definite pe mulimea numerelor naturale cu valori n mulimea {0,1}, acestea fiind
numite mulimi de puterea continuului.
Ultima remarc i anume c orice mulime care depete capacitatea de numrare a
numerelor naturale are tot attea elemente cte are mulimea funciilor definite pe mulimea
numerelor naturale cu valori n mulimea {0,1} face ca cele dou mulimi ale variabilelor
discrete i variabilelor continue s fie complementare i mpreun s defineasc ntreg spaiul
de posibiliti.
n statistic, eantionul este o submulime a populaiei. Deoarece observaiile deseori
nu se pot face folosind ntreaga populaie (care fiind definit de o funcie de numrare
rezultatul se poate asocia unei variabile discrete) din motive observaionale lesne de neles
(timpul pentru a observa o populaie infinit este infinit; chiar dac populaia nu este infinit
i chiar dac timpul de observare nu ar constitui o problem, uneori observaia tuturor
membrilor populaiei luate n studiu poate fi inaccesibil), soluia este ca observaiile s se
realizeze asupra eantioanelor din populaie, urmnd ca rezultatele msurtorilor d fie
colectate i folosind instrumentele statisticii s se fac inferene i/sau extrapolri de la
eantion la ntreaga populaie luat n studiu. Procesul colectrii informaiei dintr-un eantion
de populaie refer conceptul de eantionare. Cea mai bun cale pentru a evita eantioanele
supuse erorilor sistematice i eantioanele care nu sunt reprezentative pentru ntreaga
populaie este construirea unui eantion aleatoriu. Condiia de includere n eantionul
aleatoriu este ca probabilitatea de selecie a unui membru al populaiei n eantion este egal
cu probabilitatea oricrui alt membru al populaiei.
218
Prelucrarea datelor rezultate din msurtori
Medii
Dac se repet de n ori o msurtoare, fcut asupra aceleiai probe, obinndu-se
rezultatele Xi, se observ c valorile individuale sunt diferite. Conform conveniilor
matematicii, rezultatele msurtorii respective constituie o variabil aleatoare [142]. Pentru a
exprima rezultatul unei variabile de acest tip, practica cea mai acceptat este aceea de a se
prezenta, n locul tabelului valorilor individuale obinute experimental, una din valoarile
medii.
Fie X o mulime de n valori x1, x2, , xn pozitive. O valoare medie se poate obine
folosind unul din membrii familiei de medii putere (Hlder sau Minkowski):
1/ p
1 n p
PM (X, p) = x i (1)
n i =1
Cnd p - PM(X,-) = min(X), cnd p PM(X,) = max(X), aadar o medie
este o valoare cuprins ntre min(X) i max(X).
Media cuadratic (MQ) se obine cnd p = -2, media armonic (MH) cnd p = -1,
media geometric (MG) cnd p 0, media artimetic (MA) cnd p = 1 i media Euler (ME)
cnd p = 2. n general, M(X) semnific oricare dintre valoarile medii menionate.
Annd dou valori p i q, exist totdeauna relaia:
PM(X,p) PM(X,q) cnd p q. (2)
Mediana, m(X), este numrul:
X n + X n 2, pentru n par
( ) ( +1)
m(X) = 2 2 (3)
X n +1 , pentru n inpar
( 2 )
aici nsemnnd c X este ir ordonat ale valorilor xi adic valorile sunt aranjate prealabil
ntr-o ordine cresctoare ( permutare a irului de numere 1..n).
Moda X reprezint valoarea din ir care respect condiia ca frecvena sa de apariie fi
sa fie maxim:
X = {X i |f i = sup{f j ,1 j n}} (4)
i cei doi termeni din definirea recursiv a AGM(X) converg unul spre cellalt i spre
valoarea limit AGM(X) cnd k, valoarea sa fiind situat ntre AM i GM:
GM(X) AGM(X) AM(X) (6)
Legat de termenul central AGM(X), n 30 mai 1799 Gauss a descoperit c:
2 1 dt 2 (1/ 4)
0 1 t 4 (2)3/ 2
AGM(1,2) = = (7)
unde funcia este extensia funciei (n) = (n-1)! la numere reale (numit forma integral
Euler), i anume acea funcie care respect relaia (x) = (x-1)(x-1):
(x) = t x 1e t dt (8)
0
Eroarea
Presupunnd c msurtorile se fac asupra unei probe cunoscute, cu valoarea
adevrat A, se poate exprima pentru fiecare determinare individual o eroare absolut
(individual) notat i definit prin relaia:
i = Xi - A (9)
Aceasta poate fi negativ (cnd A>Xi), zero sau pozitiv. i n cazul n care variabila
este o valoare medie, se exprim eroarea absolut a acesteia (), analog:
= X -A (10)
i poart numele de eroare medie.
Erorile se pot clasifica n funcie de proveniena lor n erori ntmpltoare (provocate
de numeroase cauze minore si imposibil de controlat), erori sistematice care se evalueaz n
raport cu o valoare adevrat (acceptat pe baza unui etalon de referin) i erori grosolane
provocate de greeli mari (scparea probei pe jos, erori de calcul etc.).
Pentru a se putea observa mai bine semnificaia dimensiunii erorii n raport cu
valoarea msurat se mai utilizeaz o alt mrime - eroarea relativ, notat adeseori .
Aceasta se calculeaz independent de semn i se exprim prin relaia:
XA
= (11)
A
unde cu X s-a o valoare msurat notat fie xi fie X . De exemplu, cnd X = 2A se poate vedea
c = 1. Pentru a se putea exprima raportul care exist ntre valoarea erorii relative () i cea
adevrat (A) n pri din 100 se recurge i la o exprimare procentual prin eroarea relativ
procentual notat (%), care este legat de prima prin: (%) = 100.
220
Prelucrarea datelor rezultate din msurtori
= 1.410.00191. Dar cum 52.32 = 2735.29, eroarea relativ calculat corespunde de fapt
unei erori absolute de
2735.250.00271 = 7.4 = 10 uniti
Aadar, limita preciziei acestei determinri este 10 iar rezultatul se va prezenta 2.74103.
Dar cum n practic acest mod de a proceda este incomod se poate renuna la aceast cale.
Dar se va ine cont c rezultatul trebuie s aib cel mult acelai numr de cifre
semnificative cu cele dou cifre supuse nmulirii. Sau i mai bine se poate urma regula de
rotunjire a rezultatului la acelai numr de cifre semnificative cu cea mai imprecis dintre
cantitile implicate n calcule.
Referitor la rotunjiri, dac dup ultima cifr semnificativ mai apare un numr mai
mare ca 5, aceasta se va rotunji prin adaus, dac aceasta este o cifr mai mic dect 5,
rotunjirea se face prin scdere. Cnd ultima cifra este exact 5 se execut rotunjirea n funcie
de cifra precedent acesteia. Dac precedenta este impar se rotunjete prin adaus iar dac
cifra precedent este par, prin scdere, pentru a se media efectele rotunjirilor.
Elemente de statistic
Prelucrarea datelor rezultate din msurtori prin analize instrumentale este foarte
strns legat de statistica matematic prin caracterul aleator [143] al acestora. Exist dou
ramuri ale statisticii aplicate, statistica descriptiv i statistica inductiv.
Statistica descriptiv este utilizat pentru descrierea naturii datelor experimentale.
Statistica inductiv este util n practic pentru ca datele nregistrate conform
statisticii descriptive s poat cpta un sens practic, anume o afirmaie, o prezicere sau o
decizie referitoare la a cestea. Deci, rezultatele se comunic n conformitate cu regulile
statisticii descriptive iar utiliznd statistica inductiv se interpreteaz n final rezultatele.
Prin natura msurtorilor instrumentale acestea implic apariia unor erori. Acestea se
deosebesc i prin implicaiile statistice ale acestora:
Erorile sistematice:
Indic faptul c metoda nu se poate aplica fr o prealabil corecie;
Sunt caracterizate prin aceea c erorile msurtorii au aceeai mrime i acelai sens.
Erorile ntmpltoare:
i au originea n limitele metode (performanele tehnice) care duc la o lips de precizie
a acestora;
Pot fi tratate i prelucrate statistic;
Erorile grosolane:
[143] Caracter aleator se atribuie unui fenomen ntmpltor sau supus legilor hazardului.
222
Prelucrarea datelor rezultate din msurtori
6
Frecventa de aparitie
5
6, %: 1, %:
100 100
/6 /6 4
5, %: 1-6: 2, %: 3
100 100
/6 100% /6
2
4, %: 3, %:
100
/6 100
/6 1
1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6
Fig. 1. Probabilitile de
Valoare medie (eveniment)
apariie a unuia dintre
numerele de pe feele Fig. 2. Frecvena de apariie a mediei numerelor
unui zar cu 6 fee (1/6) de pe feele a dou zaruri
(x ) )
2
1
P ( x,, ) = exp(
2 2 2 (11)
unde x ia valori pe domeniul [-, +] iar valorile i sunt constante pozitive.
[144] Se poate asocia msurtoarea instrumental care duce la un rezultat cu un eveniment aleator.
Chimie Analitic i Instrumental 223
20
0.1
0.08
0.06
N( x , 0 , 5 ) N(x,0,)
0.04
0.02
0
15 10 5 0 5 10 15
x
Fig. 3. Aspectul unei distribuii normale Gauss N(x,0,5) - adic = 0 i = 5, graficul din
stnga i N(x,0,) cu -12 x 12 i 1 9 - adic = 0, graficul din dreapta)
x (x )
2
i i
= i =1
; = 2 ; 2 = i =1
(12)
n n
unde xi este o determinare individual iar n reprezint numrul total de determinri.
Cazul numrului mare de msurtori
Dac considerm o msurtoare instrumental, n presupunerea c se face un numr
foarte mare de msurtori (n>100), se obine adesea o distribuie a rezultatelor n jurul mediei
apropiat de distribuia normal. O reprezentare idealizat pentru o rezultatul unei analize
instrumentale cu media 12 g i abaterea standard de = 4 g este redat n fig. 4.
Se constat c valorile delimiteaz nite suprafee ale ariei de sub curb (v. fig. 4):
1 conin ~68% (0.682689...) din toate datele;
2 conin ~95.5% (0.954499...) din toate datele;
3 conin ~99.7% (0.997300...) din toate datele.
224
Prelucrarea datelor rezultate din msurtori
0.12
0.12
0.1
0.08
P ( x) 0.06
0.04
0.02
0 0
0 4 8 12 16 20 24g
0
-3 -2 -1 x 2 24
3
Fig. 4. Aspectul distribuiei unui rezultat analitic x, cu media = 12g i abaterea standard
de = 4g; valoarea funciei pentru x= - punctele de inflexiune ale graficului acesteia
(x )
n 2
n i x
x = x i /n , s 2 = i =1
, s = s2, s2 = 2n/(n-1) (13)
i =1 n 1
Cuvntul selecie scoate n eviden faptul ca din infinitatea posibil (teoretic) de
msurtori s-au ales doar o parte - care poart numele de selecie (eantionare). Deosebirea
fa de cazul numrului mare de msurtori este adesea minor i de multe ori se renun la
cuvntul selecie pentru mai mult simplitate. Acest caz este cel mai frecvent ntlnit n
practic.
n cazurile msurtorilor analitice instrumentale apar, n mod firesc, urmtoarele
ntrebri:
Proba de analizat este reprezentativ pentru ntreaga populaie? Cu alte cuvinte valorile se
distribuie n jurul mediei pur ntmpltor sau aceast distribuie este deviat - termen
utilizat de statistic pentru a indica un factor cu influen semnificativ (vezi Anexa V).
Dac am realizat o selecie nentmpltoare sau deviat din mulimea tuturor analizelor
posibile, diferenele observate afecteaz rezultatul semnificativ sau nu.
Pentru a se putea verifica statistic apariia unor valori sau rezultate deviate, n afara
mediei de selecie i a deviaiei standard de selecie menionate anterior, se mai utilizeaz:
numrul de grade de libertate df (in locul valorii n), abaterea standard a mediei de selecie
s x , coeficientul de variaie CV, abaterea standard relativ RSD:
sx s 100 s x
df = n-1*, s x = , CV = x , RSD = (14)
n x x
*: Trebuie s acordm o atenie mare numrului de grade de libertate (df) a crui importan
este major n cazul seleciilor mici. Astfel, ng = n - (numrul de parametrii calculat din datele
seleciei). De exemplu, dac se fac 10 msurtori la calculul s2 se folosete un singur
parametru calculat din datele seleciei - media. Deci avem 10-1 = 9 grade de libertate, adic df
= 9. n cazul unei regresii bazat pe ecuaia y = ax + b unde a i b se calculeaz din datele
seleciei vom aplica acelai principiu, adic df = 10 - 2 = 8.
226
Prelucrarea datelor rezultate din msurtori
[145] Vezi un manual didactic de statistic, de exemplu: Potra G. T., Probabiliti i Statistic Matematic.
Procese Stochastice, Transilvania Press, Cluj-Napoca, 2003, p.111.
Chimie Analitic i Instrumental 227
20
pe care le considerm selecii din dispersii diferite - necunoscute. Testul t recurge la calculul
urmtoarei valori t care delimiteaz domeniul critic (pe baza datelor experimentale):
m1 m 2
t exp = (18)
s12 s 22
n m
Dac texp < t,/2, unde reprezint numrul gradelor de libertate iar coeficientul de risc
(quantila) atunci se admite ipoteza H0. n caz contrar se accept ipoteza alternativ, H1
Definiii
Quartila (sau cuartila) este una din cele 3 valori care mpart un set de date ordonat
strict n 4 pri egale, astfel nct fiecare parte s reprezinte o ptrime din populaie. Valorile
quatilelor aparin setului de date.
Astfel, prima quartil (notat Q1), quartila inferioar, taie superior cele mai mici 25%
dintre valorile irului de date, i se mai numete percentila 25; a doua quartil (notat Q2),
mediana, taie datele n dou, i se mai numete percentila 50; a treia quartil (notat Q3),
quartila superioar, taie inferior cele mai mari 25% dintre valorile irului de date (i taie
superior cele mai mici 75% dintre valorile irului de date), i se mai numete percentila 75.
Diferena dintre quartila superioar i quartila inferioar se numete domeniu interquartilic.
Quantila a k-a din m este acea valoare a lui X=x1...xn (xk) care corespunde frecvenei
cumulative k/m. Dac m = 4 atunci quantila se numete quartil iar dac m = 100 se numete
percentil.
228
Prelucrarea datelor rezultate din msurtori
0.12
0.12 Date ndoielnice
0.1
0.08
P ( x) 0.06
0.04
0.02
0 0
0 4 8 12 16 20 24g
0 -2 -1
-3 x 2 24
3
Fig. 5. Situaia probabilitii datelor ndoielnice
punctul se elimin cu o siguran de 90% dac valoarea Qexp este mai mare dect valoarea
corespunztoare din tabelul cu valori critice (tabelul 2).
230
Prelucrarea datelor rezultate din msurtori
[147] H. Nacu, L. Jntschi, T. Hodian, C. Cimpoiu and G. Cmpan, Some Applications of Statistics in
Analytical Chemistry, Rev. Anal. Chem., 18(6), 409-456 (1999).
Chimie Analitic i Instrumental 231
20
erorile datorate regresiei provin exclusiv din erorile ntmpltoare care afecteaz semnalul
analitic msurat (y);
erorile ntmpltoare ale variabilei y sunt cam de acelai ordin de mrime i au o distribuie
normal;
erorile mrimii msurate sunt independente de valorile x (Atenie! Valorile erorilor nu
valorile y);
erorile valorilor probelor etalon (xi) sunt distribuite normal fiind neglijabile n raport cu
semnalul msurat yi.
Conform algebrei liniare, valoarea minim a membrului stng din ecuaia (25) se afl
prin rezolvarea sistemului de ecuaii cu dou necunoscute (b0 i b1):
n 2
i = 0 , k = 0,1
b k i =1
(26)
Propagarea erorilor
Pe parcursul unui proces de monitorizare sau de execuie al unei analize chimice de
laborator rezultatele msurtorilor instrumentale, semnalele analitice sunt supuse unor calcule
matematice care au drept rezultat rezultatul final al analizei, de exemplu concentraia de
poluant sau, mai general, a speciei chimice evaluate. Erorile rezultatelor provocate de ntregul
proces analitic (ncepnd cu luarea probei si terminnd cu ultima msurtoare efectuat) se
propaga prin aceste calcule afectnd rezultatul final printr-o modificare a erorii. nelegerea i
deprinderea legilor propagrii erorilor prin calcule reprezint de fapt obiectivul prezentului
232
Prelucrarea datelor rezultate din msurtori
n acest caz se poate observa gsirea erorii rezultatului are la baz calculul derivatelor
pariale ale funciei y, din ec. (31), n raport cu toate variabilele acesteia i pe nmulirea
rezultatului derivatei cu valoarea erorii variabilei i corespunztoare. Suma acestor produse va
da chiar valoarea rezultatului.
S considerm n cele ce urmeaz cteva exemplificri prin cazuri mai des ntlnite n
practic.
Eroarea la adunare sau scdere
S considerm cazul sumei valorilor A i B, rezultatul fiind y. n acest caz pentru orice
calcul de forma y = A + B eroarea rezultatului va fi:
y = A+ B (34)
De ce? Pentru c se ia n considerare ntotdeauna cazul cel mai nefavorabil. n cazul
adunrii sau scderii, dei erorile ar putea s se anuleze reciproc (n cazul cel mai fericit) este
totui posibil s aib acelai sens si sa se cumuleze. De aceea se ia n considerare cazul
nefavorabil. Evident c de aici, n cazul adunrii amintite, eroarea relativ va fi:
y = y/y = (A + B)/(A+B) (35)
s y = s a2 + s 2b + s c2 (38)
sunt obinute prin diferene ale unor cifre mari. n cazurile monitorizrii poluanilor mediului
aflai, prin natura lor, n concentraii joase ne putem de aceea atepta la valori extrem de mari
ale erorilor.
Eroarea unui produs
S considerm cazul erorii aprute prin calculul unui produs: y = x1x2. Aici, eroarea
rezultatului se va calcula, n urma aplicrii ecuaiei (37):
y = 1x1 + 2x2 (40)
iar eroarea relativ:
y 1 2
y = = + (41)
y x1 x 2
Se poate observa c eroarea relativ n cazul unui produs va fi dat de suma erorilor
relative ale variabilelor.
Eroarea unui ct
i n cazul unei mpriri regula de mai sus rmne valabil. S considerm calculul
unei concentraii, C = m/V, unde m este masa si V volumul.
Considernd derivatele funciei C = C(m,V) = m/V:
m 1 m m
= ; = 2 (42)
m V V V V V
i ntorcndu-ne la ecuaia (33) lund semnul + tot din considerarea cazului cel mai
nefavorabil [149]:
1 m
C = m + V 2 (43)
V V
Eroarea relativ va fi:
C m V
C = = + (44)
C m V
Pentru cazul n care intervin att nmulirea ct i mprirea, anume y=a*b/c cu erorile
respective sa, sb, sc eroarea se va calcula:
2 2 2
s s s
sy = a + b + c (45)
a b c
[149] n urma derivrii n raport cu variabila V, termenul al doilea ar avea semnul -. Considerand cazul cel mai
nefavorabil (erorile actioneaz n acelai sens) am scris semnul + n loc de -.
Chimie Analitic i Instrumental 235
20
b b b
y = a a + b a b = a a b ln(a) + b a b = a b (a ln(a) + b ) (46)
b a a a
Trecnd la dispersii:
b b
s y = a b (sa ln(a) + s b ) = y(sa ln(a) + s b ) (47)
a a
Eroarea relativ:
sy b
y = = s a ln(a) + s b (48)
y a
236
Anexe
Anexe
2 2
1 3
D B d
d
C
Ulterior Sherman a dezvoltat ntr-o alt lucrare [153] teoria a sa pentru a exprima
intensitatea radiaiei X emise dintr-o prob cu mai multe elemente, supuse unei iradieri cu o
surs de radiaie policromatic. Ulterioar Sharaiwa i Fujino [154] au elaborat o expresie mai
general, cunoscut n literatura de specialitate tot sub denumirea de ecuaia lui Sherman fiind
folosit pentru etalonarea majoritatii spectrometrelor de raze X moderne.
[150] von Hamos, L., Arkiv. Math. Astron. Fys. 31a, 25, 1945.
[151] Gillam, E., Heal, H.T., British Journal of Applied Physics, 3, p. 353-358, 1952.
[152] Sherman, J., ASTM Special Tech. Publ. No. 157, 1954.
[153] Sherman, J., Spectrochim. Acta. 7, 283, 1955.
[154] Shiraiwa, T., Fujino, N., Japanese Journal of Applied Physics, 5(10), p. 886-899, 1966.
238
Anexe
N kB 1
RS = (7)
4 1+ kB
adic ceea ce era de demonstrat. Primul factor depinde de eficiena coloanei, al doilea de
capacitatea coloanei iar ultimul de selectivitatea coloanei. Cu ct acetia vor fi mai mari
fiecare cu att rezoluia unei separri va fi mai bun.
Se poate remarca faptul c influena factorului de capacitate pare redus. Acest lucru
este adevrat n cazul coloanelor gaz-cromatografice cu umplutur obinuit cnd k are valori
cuprinse ntre 5 i 100. n aceste condiii raportul k/(1+k) este foarte apropiat de 1 i ntr-
adevr contribuia factorului de capacitate a coloanei asupra rezoluiei este neglijabil. Dar, la
coloanele capilare unde k ia valori cuprinse ntre 0.1 i 5 datorit micorrii accentuate a
volumului fazei staionare, efectul factorului de capacitate devine important. Acest efect este
mai clar observat de pe graficul din figura 4.
k/(1+k)
1
k
5 10
Fig. 4. Dependena raportului k/(1+k) din ecuaia rezoluiei RS n funcie de valoarea
factorului de capacitate (k)
Cu alte cuvinte, la coloanele capilare, valorile factorului de capacitate (k) coborte vor
determina diferene mult mai mari n rezoluii, fa de cazul valorilor k ridicate. Aadar, la
valori k mici (retenii reduse) separrile vor fi superioare datorit unor diferene mai
pronunate ntre rezoluii, lucru datorat i factorului de capacitate.
n rezumat rezoluia trebuie ntotdeauna privit ca o ecuaie de tipul:
Rezoluia ~ [Eficien][Capacitate][Selectivitate]
240
Anexe
X, E
S S
TIMP TIMP
Fig. 5. Dou probe pentru analiza prin metoda adausului standard a substanei X; proba I
(stnga) este obinut pe o prob necunoscute (X, N) iar proba II (dreapta) este obinut
folosind o prob etalon - cunoscut (X, E); n ambele cazuri este prezent standardul intern,
cunoscut, n aceeai cantitate
ntreg ansamblul
Frecven
femei brbai
Frecven
Selecia deviat
nlime
Selecia nedeviat
Fig. 6. Distribuia unei populaii statistice i aspectul Fig. 7. Un exemplu de deviaie este cel
unei selecii nedeviate i a uneia deviate; se observ introdus pur i simplu prin evaluarea
c media unei selecii nedeviate este practic identic separat a nlimii femeilor i brbailor
cu a ntregii populaii din care s-a fcut selecia fa de ansamblul populaiei
Un exemplu edificator n acest sens este nlimea oamenilor (v. fig. 7). Se tie c
nlimea populaiei umane are o valoare medie ntlnit cu o frecven maxim.
n practic apar selecii deviate datorit unui factor de influen. De exemplu n
analizele instrumentale apar deviaii n jurul limitei de detecie sau a valorilor ndoielnice n
jurul valorii medii.
Apariia deviaiilor nu este ntotdeauna un lucru nedorit. Acestea pot apare datorit
unei reale influene a unui factor (o dat prezent i alteori absent) asupra a dou submulimi
ale populaiei per ansamblu lucru care trebuie constatat experimental. Dar alteori deviaiile
pot aprea datorit unor luri incorect a probei (care devine nereprezentativ). i acest ultim
caz este bine s fie pus n eviden pentru o mai mare siguran.
242
Anexe
K(X, Y, B) = ( y y ) = ( b 0 + b1x y )
2 2
(8)
unde X,Y,B sunt vectorii coloan ai variabilei independente, variabilei dependente respectiv a
coeficienilor.
Au fost dezvoltate i alte metode de estimare a parametrilor, bazate pe alte funcii de
pierdere (sume de reziduuri) dup cum urmeaz:
1. R. Fisher, 1912, metoda verosimilitii maxime:
F(X, Y, B) = (1 exp((y y) 2 2) ) = (1 exp((b0 + b1x y) 2 2) ) (9)
i k i
p N N
b j j xj yj
x x = k
k = 0, p (15)
i =0 j=1 j=1
dat de ecuaia:
B = CZ-1 (16)
[155] H. Nacu, L. Jntschi, T. Hodian, C. Cimpoiu and G. Cmpan, Some Applications of Statistics in
Analytical Chemistry, Rev. Anal. Chem., 18(6), 409-456 (1999).
Chimie Analitic i Instrumental 243
21
unde:
N N
Z = (z ik ) 0i p = ( x kj x ij ) 0i p i CT = (c k )0 k p = ( x kj y j )0 k p (17)
0 k p j=1 0 k p j=1
Mai concret, dac n urma unei determinri prin analiza spectral [156] dac avem p
probe, fiecare avnd cte r constitueni i determinm semnalele pe q canale (de exemplu
lungimi de und diferite), semnalele depinznd liniar de concentraii, vor duce la ecuaia:
R = CST+E (18)
unde:
R - matricea semnalelor (rspunsurilor) pe canalele considerate n numr de q pentru fiecare
din cele p probe (dimensiune pq);
C - matricea concentraiilor celor r componeni n probe (dimensiune pr);
S - matricea sensibilitilor (dimensiune qr);
E - matricea erorilor - cu aceleai dimensiuni cu R (pq).
Deoarece n ultimul timp achiziia datelor se face n laboratoarele de analize aproape
exclusiv cu ajutorul calculatoarelor, pentru analiza chimic cantitativ metodele bazate pe
algebra liniar multidimensional i statistica multiliniar au devenit aplicaii curente.
Odat stabilii, coeficienii i erorile ce afecteaz rezultatele semnalelor pe baza
ecuaiilor de regresie, n analiza chimic se parcurge drumul invers, ecuaiile de regresie
devenind ecuaii de calibrare (corespondentul multidimensional al curbei de calibrare n dou
dimensiuni).
Tot ecuaii de regresie se obin i prin implementarea modelelor de decizie multiliniare
din domeniul inteligenei artificiale. Ecuaiile i modelele de regresie au cptat o utilizare
tot mai frecvent odat cu dezvoltarea instrumentaiei analitice computerizate. n acest
domeniu sunt nelipsite curbele de calibrare.
O noutate n analiza de regresie multiliniar (multifactorial) este analiza
componentelor principale. Dei aceasta se apropie mai mult de analiza factorial, se nrudete
foarte mult cu regresia multiliniar. Ca principiu al metodei, este o regresie liniar repetat de
un numr de ori egal cu numrul de componente principale considerat. La fiecare iteraie se
determin coeficienii componentei considerate avnd ca date de intrare XK: caracteristica
principal K, YK: reziduul provenit din iteraia pentru componenta principal (K-1) i ca date
de ieire YK+1 , reziduul provenit de la regresia YK dup XK i vectorul de coeficieni BK al
componentei principale K.
[156] D. Lorber; K. Faber and R. Kowalski, Anal. Chem., 1983, 55, 643
244
Anexe
acceleraia gravitaional
g 9.80665 ms-2
standard
246
Anexe
>1m
radio
rotaie
molecular 1m
microunde
1mm
10-3m
infrarou ndeprtat
10-5m
vibraie
molecular
infrarou apropiat 10-6m = 1m
700nm
700-620nm
rou 560-510nm
verde vizibil 450-400
Violet 10-7m
excitare
electronic
ultraviolet
10-8m
Ultraviolet de vid
10-9m = 1nm
excitarea
miezului 10-10m = 1
electronic raze X
10-11m
10-12m = 1pm
excitare
nuclear Raze 10-12-10-13m
[159] ***, Oxford Paperback Encyclopedia, Oxford University Press, http://www.xrefer.com, /entry/214768
[160] ***, Wikipedia, The Free Enciclopedia, http://www.wikipedia.org, /wiki/Electronegativity
[161] http://www.phs.princeton.k12.oh.us/departments/science/ldusch/electronegativity.htm
[162] http://stjohns-chs.org/science/genchem/tables/electronegativities.html
[163] http://www.webelements.com/webelements/properties/text/image-flash/electroneg-allen.html
[164] http://www.ticalc.org/archives/files/fileinfo/190/19049.html
248
Bibliografie
Bibliografie
[1] http://www.socialresearchmethods.net/kb/measure.php
[2] http://www.nuclearglossary.com/cfr/nuclearglossary_CFR74.html
[3] http://www.ucc.ie/hfrg/baseline/glossary.html
[4] http://www.maine.gov/education/highered/Glossary/Glossary.htm
[5] http://www.ojp.usdoj.gov/BJA/evaluation/glossary/glossary_m.htm
250