Gen Campylobacter

Epidemiologie
Enterita= antropozoonoza,
Rezervor principal: diferite specii de animale
si pasari,
Alte surse de infectie:
* omul bolnav, convalescent, purtator:
- In faza acuta a bolii: eliminare masiva de
germeni prin materii fecale,
- In convalescenta, pacientii netratati cu
antibiotice: durata excretiei: 2-3 saptamani,
- Omul purtator sanatos,
- Contactii bolnavilor eliminatori.

Epidemiologie

Factori favorizanti:
* varsta: 0-4 ani,
* sezon cald (iulie- septembrie),
* profesia (boala profesionala/ personal
din crescatorii de pasari, animale),
Incidenta:
* tari dezvoltate: 4,3%- 13,9%,
* tari in curs de dezvoltate: 5%-35%,
* Romania: 5,1%

Semnificatie clinica
1. Campylobacter jenuni
2. Campylobacter coli
1970: agenti care determina infectii
gastrointestinale
C. jejuni/ coli- printre cei mai frecventi agenti
etiologici ai enteritelor bacteriene sporadice,
C. fetus: patogen oportunist (HIV+, alcoolism,
ciroza, DZ, neoplazii, leucemii etc),
Forme clinice usoare sau medii

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
RECOLTA, TRANSPORT
Specimene clinice: materii fecale, tampoane
rectale, sange,
Min 2-3 recolte consecutiv,
Mediu de conservare si transport Cary- Blair,
apa peptonata alcalina, tyoglicolat- cystine,
mediu Stuart modificat,
Prelevatele biologice stocate in m. Cary-Blair se
refrigereaza la 4C, daca nu se proceseaza
imediat

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
CARACTERE MACROSCOPICE:
- materii fecale de consistenta redusa, pana la apoase,
+/- mucus, sange,
- examen microscopic direct
* microscopie cu contrast de faza,
* examinare in camp intunecat:
**mobilitate specifica in tirbuson
* frotiu colorat Gram, Giemsa,
- numar mare de leucocite, hematii, cocobacili Gram
negativi spiralati, in aripi de pescarus

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
IZOLARE BACTERIANA:
1. Medii de imbogatire: bulion Oxoid, bulion
thyoglicolic cu antibiotic, +/- sange,
2. Medii de cultura selective:
- medii cu carbune, dezoxicolat, cefoperazona *CCDA,
Oxoid,
- medii cu sange, antibiotice (vancomicina, cefoperazona, colistin, cephalotin, septrin):
*Agar Columbia- sange berbec + Campy Supplement,
Campy CVA,
Mediu Skirrow,
Incubare: 42C, 24- 48 ore,
Atmosfera: microaerofilie: 85%N2, 10%CO2,
5%O2.

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
IDENTIFICARE BACTERIANA:
- caractere culturale:
*colonii gri-castaniu, plate, rotunde,
convexe, margini regulate sau umede,
cu tendinta de intindere a coloniei de-a
lungul striului de insamantare,
- caractere microscopice: col Gram
*cocobacili subtiri Gram negativi,
spiralati, in aripi de pescarus, izolati si
grupati in gramezi, intra- si extraleucocitari,

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
- caractere biochimice:
* catalaza (+),
* oxidaza (+),
* hidroliza hipuratului,
* producerea de H2S,
* sensibilitatea la antibiotice (ac. nalidixic,
cephalothin),
Sistem automat VITEK2C,

Identificare Campylobacter
spp- caractere biochimice

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
- caractere antigenice:
* ELISA: detectie de Ag Campy direct in
probe de materii fecale (proSpecT
Campylobacter),
- caractere genetice:
* metode de amplificare genica:
-PCR direct in probe de materii fecale

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
Diagnostic bacteriologic indirect: teste
serologice:
- IgA, IgM, IgG
- IgA: ser, materii fecale (primele saptamani
ale infectiei, dupa care scad rapid),
-reactii fals (+) pentru Legionella (crossreactivitate, in infectii cu Campylobacter)
- utile in investigatii epidemiologice,
- nu se recomanda pentru diagnostic de rutina

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
ANTIBIOGRAMA
- Campy. jejuni, Campy. coli:
* sensibilitate variabila la antibiotice
(macrolide, fluoroquinolone, aminoglicozide,
cloramfenicol, nitrofurantoin, tetracicline)
* majoritatea tulpinilor nu sunt sensibile la
cefalosporine si peniciline,
* recomandate: azitromicina,
eritromicina, ciprofloxacin,
Metode: E-test, CMI prin dilutii in agar,
*Mueller- Hinton Agar+ sange berbec

HELICOBACTER SPP
HABITAT:
- tract gastrointestinal si hepatobiliar la mamifere si
pasari,

- tulpinile de Helicobacter cu localizare n niele

gastrice invadeaz foarte rar sistemic, fa de
speciile de Helicobacter enterohepatice,
* Helicobacter pylori colonizeaz cardia, corpul
i antrum- ul gastric, respectiv poriunea distal a
stomacului uman,
- aceste bacterii se ntlnesc tranzitoriu n ariile de
metaplazie la nivelul zonei proximale a intestinului
subire (duoden), n saliv, lichid de vrstur,
materii fecale.

Descrierea genului Helicobacter

Genul Helicobacter cuprinde aproximativ 20
specii validate prin reguli internaionale de
nomenclatur,
Genul include bacili spiralai sau ncurbai,
cu dimensiuni cuprinse ntre 0,3 1,0 m
n grosime i 1,5 10,0 m lungime,
Bacteriile din Genul Helicobacter sunt Gram
negative, nesporulate, mobile prin
multipli flageli dispui mono- sau bipolar

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
DIRECT

Transport. Stocare.
a) Speciile enterohepatice de Helicobacter
- traverseaz bariera intestinal i determin infecii sistemice,
- cnd se suspecteaz bacteriemia, se recolteaz snge venos periferic,
- hemoculturile se nsmneaz n condiii aerobe i de anaerobioz, n
perechi de flacoane speciale, cu incubare n sisteme automate.
b) Speciile de Helicobacter cu localizare gastric: H. pylori i H.
heilmannii
- sunt rareori izolate din coprocultur,
- materiile fecale proaspt recoltate n recipiente sterile, se transport i se
prelucreaz n laborator n maxim 4 ore de la recolt, deoarece speciile de
Helicobacter i pierd rapid viabilitatea.
- piesele de biopsie de mucoas gastric sunt utilizate pentru diagnostic
direct : testul rapid al ureazei sau teste histopatologice.

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
DIRECT
- piesele biopsice de mucoas gastric se pastreaz la
temperatura camerei i se prelucreaz n maxin 2 ore
de la recolt,
- Helicobacter pylori, fiind foarte sensibil n condiii de
deshidratare i n atmosfer ambiant, necesit
utilizarea mediilor de conservare si transport,
cum ar fi: brucella broth cu 20% glycerol, cysteineAlbimi broth cu 20% glycerol, mediu Stuart,
- dac transportul depete ca timp 4 zile, cel mai
bun mijloc de conservare este reprezentat de mediul
chocolat nsmnat cu prelevatul respectiv, incubat
n condiii de microaerofilie (pungi cu plicuri generatoare de microaerofilie: CampyPak, Campy Pouches.

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
DIRECT
Examinarea microscopic:
- frotiuri colorate Gram sau Giemsa (fragment de
mucoas gastric sau materii fecale),
- examinare n imersie,
- se vizualizeaz prezena bacililor cu morfologie
caracteristic: bacili scuri, Gram negativi, ncurbai,
sub form de virgul sau cu dispoziie caracteristic
in aripi de pescru, spiralai, n prezena unei
reacii inflamatorii evidente, reprezentat de leucocite
PMN.
* Sensibilitatea examenului microscopic depinde
de experiena i contiinciozitatea microbiologului,
fiind considerat superioar testului ureazei.

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
DIRECT
CULTIVARE, IZOLARE BACTERIANA:
a) Mediile de cultura neselective:

- numai pentru nsmnarea fragmentelor de biopsie gastric, n

vederea izolarii H. pylori,
- medii agarizate, tip Brain Heart Infusion/ BHI agar, brucella
agar, Columbia agar, Skirow agar, mbogite cu snge sau ser
de cal, snge de berbec.,
- sunt recomandate medii gata turnate, comercializate sub
denumirea de:
* brucella agar cu 5% sange cal,
* brain heart infusion/BHI agar suplimentat cu 7% snge
defibrinat de cal (indice de izolare 96%),
* Trypticase soy agar cu 5% snge berbec (indice de izolare
78%),
* Columbia snge agar cu cyclodextina (indice de izolare 32%).

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
DIRECT
b) Medii de cultura selective:
- se recomand pentru izolarea speciilor de Helicobacter cu
localizare enterohepatic, din prelevate cu flor bogat de
asociaie:
*materii fecale, alimente
- mediile selective i atmosfera n microaerofilie sunt eseniale
pentru cultivarea speciilor de Helicobacter din materii fecale i
tampoane rectale,
* Columbia agar baza cu 5% snge berbec, i ameste
antibiotic inhibitor (cefoperazon, vancomicin,
amphotericin B).
* incubate la 37- 42 C, n atmosfer umed de
microaerofilie, timp de 24, 48, 72 ore

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
DIRECT
Identificare:
- din cultura izolat se efectueaz cateva teste minimale, de
rutin, pentru o identificare preliminar:
* frotiu Gram,
* cytochrom oxidaza (+),
* catalaza (+),
* testul ureazei rapide (+),
* caracteristicile fenotipice,
* activitatea exoenzimatic

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
*CARACTERE BIOCHIMICE

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
*CARACTERE ANTIGENICE SI
GENETICE
* CARACTERE ANTIGENICE:
ELISA: detectie Ag H. pylori direct in prelevat
biologic, kituri comerciale,
Detectia de Ag utila in cazul in care reactia
ureazei din biopsia de mucoasa gastrica e dificil
de realizat (pediatrie),
Detectie de Ac- rezultate cu semnificatie redusa
(pacienti HIV+),
* CARACTERE GENETICE:
PCR, RT-PCR:
- gene tinta: 23SrDNA, glmM, vacA etc

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
INDIRECT
ELISA: Ig A, Ig G: persista luni sau ani,
- test screening primar pentru forme de boala
necomplicate,
- rezultatele echivoce sau negative pentru IgG,
se completeaza cu detectia IgA, in infectii cu
Helicobacter pylori,
Teste serologice tip ELISA pentru H. pylori, au
sensibilitate 92%, specificitate 83%

SENSIBILITATEA LA
ANTIBIOTICE
Tratamentul infectiilor cu H. pylori,
necesita o schema complexa:
* metronidazol,
* macrolid (claritromicina),
* ciprofloxacin, aminoglicozide, tetraciclina etc,
* medicatie antiacida: omeprazol, ranitidina,
* Antibiograma:
Dilutii in agar,
Mueller Hinton + sange berbec 5% , benzi
E-test,

DIAGNOSTICUL BACTERIOLOGIC IN
INFECTII PRODUSE DE
GENUL PSEUDOMONAS

Microorganismele genului Pseudomonas sunt

foarte raspandite in natura: apa, sol, unde
indeplinesc functii de mineralizare a materiei
organice vegetale si animale, de unde ajung
frecvent in tractul digestiv uman si animal.

Definitie

Gram (-) drepti sau incurbati, polimorfi,

mobili, cu cili polari (monotrichi sau lophotrichi),
strict aerobi,
catalaza (+),
oxidaza (+),
nesporulati,
necapsulati (exceptie fac variantele fenotip mucos,
virulente, izolate din supuratii cronice bronhopulmonare),

Pseudomonas spp - Definitie

unele specii produc pigmenti difuzibili, fluorescenti (pioverdina,
piocianina),
miros specific, aromat (flori de tei),
cresc pe medii simple,
majoritatea speciilor sunt nepatogene.
In Genul Pseudomonas sunt cuprinse specii fluorescente si
nefluorescente.
Pseudomonas aeruginosa este specia cel mai frecvent implicata in
imbolnaviri umane.
Ps. aeruginosa este principala bacterie condittionat patogena,
implicata in proportie de aproximativ 10- 15% in infectiile
intraspitalicesti

Diagnostic de laborator

Prelevate :
secretii plagi, puroi, urina, sange, LCR, sputa,
Recolta, Transport (rezistent, nepretentios),
Examinare macroscopica (puroi verde, albastrui)
Examinare microscopica a produsului patologic:
Frotiuri colorate Gram si albastru de metilen:
frecvente PMN, frecventi bacili Gram (-) drepti,
incurbati, polimorfi, nesporulati, necapsulati .

Caractere de cultivare
pe medii lichide
Cultivare:
* Medii lichide (bulion, apa peptonata):
creste cu tulburarea mediului si formarea unei
pelicule la suprafata acestuia; in cateva zile
pelicula se rupe, cade la fundul tubului, iar mediul
devine vascos, filant,
la suprafata se formeaza un inel pigmentat, colorat
verde- albastrui, cu miros de flori de tei,

Pseudomonas aeruginosaCaractere culturale

* Medii solide:
colonii tip S, M, R
- Istrate Meitert: colonii Lactozo (-),
mici, albastre, aderente de mediu,
- Geloza- sange: colonii gri,
lucioase, hemoliza tip , luciu metalic

Caractere culturale
MacConkey, ADCL etc: colonii
lactozo (-)
Medii care pun in evidenta
pigmentogeneza: King A, B,
Incubare 24- 48 ore la 37C (Ps.
aeruginosa se dezvolta la +4C si
42C (criterii orientative de
diagnostic),

Caractere biochimice
catalaza (+),
oxidaza (+),
glucoza, lactoza, zaharoza (-): bacterie inerta din punct de
vedere al metabolismului glucidic,
TSI, MIU, MILF: teste nemodificate,
creste pe mediu cu citrat ca unica sursa de carbon (virare
spre albastru a mediului citrat Simmons),
pigmenti piocianina, pioverdina, piorubrina, piomelanina,
creste la 42C,

Marcheri epidemiologici, in Infectii

intraspitalicesti

Bacteriocinotipia,
Lizotipia,
Antibiotipia/ Antibiograma:
este obligatorie,
pune in evidenta tulpinile multidrog
rezistente: rezistenta la cel putin 3 clase de
antibiotice, izolate din infectii intraspitalicesti.

Recomandari de tratament

In tratamentul infectiilor cu Ps. aeruginosa, se utilizeaza asociatii

de substante antimicrobiene, deoarece in monoterapie exista riscul
selectarii tulpinilor multirezistente.

Se recomanda asocierea unei peniciline (ticarcilina, mezlocilina,

piperacilina) cu un aminoglicozid (amikacina, tobramicina).

Dintre clasele noi de antibiotice cu efect antipseudomonazic se

recomanda: piperacilina/ tazobactam (tazocin), cefoperazona,
imipenem, meropenem, ceftazidim, noile quinolone, tigecyclina etc.

In scop terapeutic se mai poate utiliza vaccinul piocianic

monovalent.