GENUL STAPHYLOCOCCUS

DIAGNOSTIC DE LABORATOR

GENUL STAPHYLOCOCCUS
Definitie. Incadrare in gen
* coci rotunzi, Gram (+), dispusi izolat, in perechi,
lanturi scurte, gramezi neregulate (dispozitie
caracteristica in ciorchine de strugure),
* cu dimensiuni de 0,5 1,5 m,
* imobili,
* nesporulati,
* bacterii catalaza (+),
* germeni aerobi, facultativ anaerobi,
* pot avea capsula (sau material capsular
glicopolizaharid cu rol de capsula: slime),

Gen Staphylococcus reprezentare

microscopica (ciorchine de strugure)

GENUL STAPHYLOCOCCUS
38 specii (18 izolate la om),
SPECII DE INTERES MEDICAL MAJOR:
* Grup Staphylococcus aureus:
- Specie: Staphylococcus aureus,
* Stafilococi coagulaza negativi SCN
(patogeni oportunisti):
* Grup Staphylococcus epidermidis:
- S. epidermidis sensu stricto,
- S. haemolyticus,
- S. lugdunensis,
* Grup Staphylococcus saprophyticus:
- S. saprophyticus,
* Grup Staphylococcus intermedius:
- S. schleiferi

Staphylococcus aureus implicatii in

patologia infectioasa

1. Infectii localizate:
foliculite superficiale,
furuncule antracoide,
acnee pustuloasa,
panaritiu,
microabcese,
orjelet,
hidrosadenite,
mastite,
Infectii ale plagilor,
Infectii ale mucoaselor:
- infectii urinare ascendente,
- infectii genitale,

Staphylococcus aureus - Infectii

localizate

Staphylococcus aureus implicatii in

patologia infectioasa
2. Infectii generalizate:
- bacteriemii,
- septicemii
* Mecanisme:
- diseminare din aproape in aproape,
- evacuari traumatice,
- generalizare pe cale:
- limfatica,
- sanguina

Staphylococcus aureus implicatii in

patologia infectioasa

3. Infectii secundare, metastazice:

abcese secundare in organe,
osteomielita,
infectii urinare descendente,
endocardite,
meningite,
infectii la nivelul seroaselor (pleurale, articulare
etc.),
- pneumonii

Alte manifestari clinice determinate de

Staphylococcus aureus si toxinele lui
4. Sindroame dermatologice exfoliative
(Sindrom de piele oparita),
5. Sindrom de soc toxic,
6. Toxiinfectii alimentare,
7. Enterite stafilococice post- antibiotico
terapie,
8. Sensibilizari la alergene stafilococice
(dermatite urticariene, stafilococii
cutanate recidivante etc.),

SCN in patologia umana

=

*
*

*
*
*
*
*

conditionat patogeni (patogeni oportunisti),

functie de statusul imunitar al gazdei:
Infectii nosocomiale,
Infectii legate de proceduri medicale invazive:
- sonde,
- catetere,
- dispozitive protetice (valve, sunturi,
proteze),
bacteriemie, septicemie
endocardita,
meningita,
peritonita,
infectie tract urinar,

Tipuri de prelevate patologice

Prelevate intens contaminate:

materii fecale,
alimente,
lichide de voma,
Prelevate moderat contaminate:
sputa,
secretii (exudate) plagi superficiale,
colectii inchise (puroi flegmon, abces),
Prelevate necontaminate (normal sterile):
sange,
LCR, alte lichide de punctie (pleural, peritoneal,
articular),
- cateter,
- urina,
- aspirat bronsic

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
DIRECT ETAPE:
1.
2.
3.
4.

6.

Recoltare. Transport,
Examen microscopic direct,
Insamantare pe medii de cultura,
Izolare, identificare:
caractere morfologice,
culturale,
enzimatice, biochimice,
detectia toxigenezei,
lizotipie,
sisteme rapide,
metode moleculare,
Antibiograma

1. Conditii de prelevare. Transport

- Recoltarea prelevatelor:
* recipiente sterile, unica utilizare,
* conditii de asepsie,
* inainte de administrarea
antibioticelor,
* inainte de aplicarea antisepticelor,
- Transport:
* max 1 ora,
* medii de transport (Stuart, Amies)

2. Examen microscopic direct:

Frotiu direct din prelevat (coloratia Gram):
- coci Gram pozitivi sau Gram variabili, izolati, in
perechi, lanturi scurte sau in gramezi, intra si
extraleucocitari.
- apreciere semicantitativa a tipurilor de celule
(PMN),
- aprecierea semicantitativa a microorganismelor,
- relatia bacteriilor cu celulele inflamatorii,
- variabilitate morfologica sau tinctoriala (conditii
de stress metabolic),
- Prelevate normal sterile:
* Centrifugare si frotiu din sediment

Aspect microscopic Frotiu Gram din

produs si din cultura

3. Insamantare pe medii de cultura

* Medii de cultura lichide (imbogatire):
- bulion thioglicolat,
- bulion BHI, Mueller Hinton,
- Chapmann lichid,
* Medii de cultura solide (izolare):
- Neinhibitorii, diferentiale:
(agar Columbia cu adaos 5-10% sange berbec),
- Medii diferentiale si selective:
(agar trehaloza- manitol, Chapman solid, Baird
Parker, agar Columbia cu colistin si acid
nalidixic)

4. Izolare. Identificare S. aureus

a) Izolare:
- termostatare: 37C, 24 ore, aerobioza,
(5%CO2),
b) Identificare:
- Frotiu Gram din colonie izolata,
- Caractere culturale
- colonii S, G, R,
- Prezenta si tipul hemolizei:
- hemoliza ,
- hemoliza (tip cald- rece),
- Prezenta si tipul pigmentului:
- carotenoid, portocaliu, galben citrin
- Aspectul coloniilor pe mediul solid hiperclorurat:
manito (+),

* Aspectul cultural al SCN

-

Colonii
aspect S, G, R,
Hemoliza:
S. haemolycus,
Pigment (portocaliu, citrin):
S. saprophyticus, S haemolyticus,
S. lugdunensis, S. simulans,
- Aspectul coloniilor pe mediul Chapman:
- coloniile pigmentate: manitol (+),
- coloniile nepigmentate: manitol (-),

Aspecte culturale S. aureus/ SCN

Identificare preliminara
Teste enzimatice
* diferentierea de familia Streptococacceae:
testul catalazei,
* diferentierea de genul Micrococcus:
testul producerii de acid din glucoza in
anaerobioza,
testul sensibilitatii la furazolidon,
* diferentierea S. aureus de SCN:
- coagulaza libera (testul in tub),
- coagulaza legata/ clumping factor (pe lama),
- termonucleaza (DNA - aza termo rezistenta),
* diferentierea in cadrul grupului SCN:
- testul sensibilitatii la novobiocina,
- acidifiere trehaloza - manitol (aerob)

Schema minimala de diferentiere a

principalelor specii de stafilococi
Caractere

S.
S.
aureus epidermidis

S.
saprophyticus

Coag.libera

fosfataza

rez la
novobiocina

zaharoza/aer

trehaloza/
aerob

Manitol/
aerob

Schema minimala de diferentiere a

principalelor specii de stafilococi
Caractere

S. aureus S. lugdunensis

S.
schleiferi

Coag. legata

Coag. libera

Manitol anaerob

Termonucleaza
DNA- aza t- rez

Teste accesorii de patogenitate pentru

Staphylococcus aureus

fibrinolizina,
fosfataza,
lipaza,
hidrolaza,

Detectia toxinogenezei la
Staphylococcus aureus

* Enterotoxine:
- latex aglutinare,
- ELISA,
* Leucocidina:
- ELISA

Tiparea pe baza sensibilitatii la

bacteriofagi Staphylococcus aureus
Centrul National de Referinta:
- identificarea clonala a S. aureus,
- identificare curenta in infectii de focar
(infectii nosocomiale, TIA),
- setul international de bacteriofagi
(grup litic: I, II, III, V)

Sisteme comerciale de diagnostic

Sisteme de aglutinare indirecta:
(fibrinogen, IgG, Ac specifici de grup),
API STAPH,
ID Rapid Staph,
VITEK 2 Compact,
Vidas,

Metode moleculare
1.

PCR , PCR multiplex, Real Time PCR, PFGE,

PCR- RFLP
- identificarea tulpinilor de stafilococi,
- detectarea rapida a stafilococilor din prelevat,
(focare Infectii nosocomiale, TIA),
- detectarea genelor care codifica factori de
patogenitate (enterotoxine, leucocidina),
- secventierea genei spa (codifica proteina A),
- identificarea genei mecA (MRSA, MRSCN), alte
gene de rezistenta,
- tipari in scop epidemiologic (markeri
epidemiologici),

ANTIBIOGRAMA
Metoda difuzimetrica,
CMI (E test, Vitek 2C)
Depistarea S. aureus si SCN meticilino
rezistenti (MRSA, MRSCN,
Metode moleculare (gene de rezistenta/
mec),
Asocierea fenotipurilor de rezistenta
dobandita