LP1 Diagnosticul de Laborator: Al Infecțiilor Produse de Stafilococi

LP1
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
AL INFECȚIILOR PRODUSE DE
STAFILOCOCI
LP1 - DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECȚIILOR CU STAFILOCOCI 2
PATOLOGIE
Stafilococi coagulază-pozitivi: S. aureus
• Foarte frecvent comensal, dar după depășirea barierelor naturale poate determina infecții prin
multiplicare și invazivitate:
▸ Infecții purulente superficiale ale tegumentelor și mucoaselor: impetigo, foliculită, orgelet,
furuncul, mastită, infecții ale plăgilor
▸ Profunde: furuncul antracoid, abcese profunde, pneumonia stafilococică, endocardită acută,
osteomielită, artrită septică
• Prin toxinogeneză cu/fără multiplicare poate determina:
▸ Toxiinfecții alimentare
▸ Dermatită exfoliativă: sindromul pielii opărite stafilococice (boala Ritter)
▸ Sindromul de șoc toxic
• Purtători sănătoși
Stafilococi coagulază-negativi (SCN):
▸ S. epidermidis: patogen primar în infecții asociate cu protezele articulare, dispozitivele ortopedice,

la cei cu dializă peritoneală cronică ambulatorie, infecții de cateter, endocardită subacută
▸ S. saprophyticus: infecții de tract urinar la femeile tinere

PATOLOGIE
Impetigo
Foliculită Furuncul
PATOLOGIE
Sindromul pielii opărite stafilococice (Staphylococcal scalded skin syndrome - SSSS)

RECOLTAREA ȘI TRANSPORTUL PROBELOR PATOLOGICE

Reguli:
▸cât mai aproape de debutul bolii
▸ înainte ca pacientul să fi primit antibiotice
▸cât mai rapid și corect din punct de vedere al tehnicilor
utilizate
▸ respectând toate normele de asepsie și antisepsie
PRODUSE PATOLOGICE
▸secreții purulente (din foliculite, abcese, celulite, fistule, infecții ale
plăgilor și arsurilor)
▸ lichide (de puncție sinusală, otică, articulară, peritoneală, pleurală,
pericardică)
▸ sânge, LCR - endocardită, etc
▸ secreție vaginală
▸ prelevate de pe suprafața cateterelor și sondelor
▸Pentru depistarea portajului (în special de MRSA) se prelevează
de la persoane sănătoase tampon nazal, cutanat (umectate cu ser
fiziologic steril), faringian, rectal, vaginal
EXAMINAREA MICROSCOPICA
Se realizează 2 frotiuri:
1. Colorație albastru de metilen
2. Coloratia Gram
Se notează:
▸ Prezența celulelor epiteliale

▸ Prezența celulelor inflamatorii (leucocite,
piocite)
▸ Prezența cocilor gram pozitivi dispuși în

grămezi neregulate (lanțuri scurte,
perechi, izolați) extra- sau intra-leucocitari
▸ Prezenta florei de asociație (depinde de

locul recoltării) Abces - col. Gram
CULTIVAREA PE MEDII DE CULTURA

▸În prima zi, cât mai rapid după primirea probelor
▸Scop: obținerea de colonii izolate (cultura pură)
▸Medii de cultură:
▸ obișnuit (agar simplu) - bacterie nepretențioasă
▸ agar sânge: unele tulpini pot prezenta beta hemoliză
▸ mediul Chapman: Staphylococcus spp. tolerează concentrații crescute de NaCl 7-10%
▸Rezultat:
- Colonii de tip S, pot fi și M (rar)
- Diametru: 1-3 mm
- Pigmentate: auriu (S. aureus) - dar pot fi nepigmentate, alb (S. epidermidis), citrin (S.
saprophy0cus)
CULTURĂ S.AUREUS
▸Agar simplu
Geloză Agar chocolat

CULTURĂ S. EPIDERMIDIS
▸Agar simplu
Geloză Agar sânge

CULTURĂ S. SAPROPHYTICUS
Agar sânge
CHROMAGAR MRSA
▸Mediu cromogen pentru

identificarea MRSA
▸Poate fi utilizat direct cu

produs patologic
IDENTIFICARE - ZIUA 2
▸ Diagnosticul de gen: coci gram pozitivi, catalază pozitivi

▸ Diferențierea S. aureus de celelalte specii de stafilococi:
▸ Coagulază pozitiv
▸ Fermentează manita cu producere de acid
▸ Produce dezoxiribonuclează (degradare ADN)
▸ Diagnosticul de specie
▸ Există sisteme multitest care se pot procura comercial (API,
Micro Scan, Minitek etc).
CARACTERE MORFOLOGICE
▸ coci gram-pozitivi
▸ diametrul 0,5-1,5 microni
▸ dispuşi în lanţuri scurte, perechi, izolaţi sau în grămezi neregulate
Albastru de metilen Coloratia Gram

CARACTERE DE CULTURĂ
▸ Produc colonii de tip

S, pigmentate
▸ beta-hemoliză
(produsă de alfa-
hemolizină!)
▸ hemoliză de tip cald

rece (aspect în
cocardă)
Mediu geloză sânge cu beta-hemoliză

CARACTERE BIOCHIMICE
Scop: diferențiere Staphylococcus spp./Streptococcus spp.

▸ Mediul Chapman (Mannitol Salt
Agar)
▸Tip: Selec&v și diferențial
▸Scop:
▸ Selectează Staphylococcus spp.,
care cresc în medii bogate în
sare (7-10% NaCl);
▸ Diferențiază S. aureus de alte

specii de stafilococi: S. aureus ->
galben (fermentează manitolul)
CARCATERE BIOCHIMICE
▸DNase AGAR
▸ Mediu diferențial
▸ Contine acid dezoxiribonucleic
(ADN)
▸ S.aureus produce dezoxiribonuclează
- degradarea ADN-ului
▸ La adaugarea de HCl, apare o

zona clară acolo unde s-a produs
depolimerizarea ADN
Sensibilitatea la
novobiocină
S. aureus S. epidermidis S. saprophy0cus

API STAPH
▸ Identificarea biochimica a speciilor din genul
Staphylococcus cu ajutorul galeriilor API (analytical profile
index)
▸ Testele API- identifica aprox toate genurile bacteriene si

peste 550 de specii
CARACTERE ANTIGENICE
▸ teste comerciale (Rapid staph test)
▸ Aglutinare indirectă: particule latex care includ fibrinogen
şi IgG -> leagă coagulaza legată (clumping factor) şi
proteina A. Pot conține și anticorpi specifici unor antigene
ale S. aureus
CARACTERE DE PATOGENITATE
▸ Testul coagulazei: în tuburi (coagulaza liberă) sau pe lamă
(coagulaza legată)
▸ Cu plasmă de om/iepure diluată
▸ Testul în tuburi: filtrat de cultură, incubare peste noapte
SENSIBILITATEA LA BACTERIOFAGI-LIZOTIPIA
▸ principiu = o celulă bacteriană poate fi sensibilă la mai mulți
bacteriofagi (pentru că există receptori specifici pentru fiecare
bacteriofag pe suprafaţa celulei bacteriene + permisivitatea celulei
bacteriene față de toate etapele ciclului litic de multiplicare a
bacteriofagului)
▸ Susceptibilitatea diverselor tulpini la acţiunea litică a bacteriofagilor =

lizotipie bacteriofagică, care se poate utiliza în centre de referinţă - în
scop epidemiologic
▸ Receptorii pentru bacteriofagi existenți la microorganisme din aceeași

specie variază în funcție de tulpină; celulele bacteriene care posedă
aceiași receptori se încadrează în același grup fagic
LIZOTIPIA
ANTIBIOGRAMA
▸ OBLIGATORIE din cauza fenotipurilor de rezistență la antibiotice
▸ Reguli de interpretare conform EUCAST
▸ Fenotipul de rezistență la penicilină: S. aureus produce beta-lactamaze
(90% din tulpini). Sensibil la oxacilină, meticilină, dicloxacilină, nafcilină
ANTIBIOGRAMA
▸ Fenotipul MRSA = Methicillin resistant Staphylococcus aureus: produce PBP2A
(gena mecA)
▸ hospital acquired (HA-MRSA) - multirezistență la toți beta-lactamii (oxa/
meticilină, cefalosporine, etc) și altele (clindamicină, trimethoprim/
sulfametoxazol)
▸ community acquired (CA-MRSA) - rezistent la toți beta-lactamii dar sensibilă
la altele (clindamicină, TMP/SMX, rifampicină)
▸ MRSA dacă diametrul la cefoxitin (FOX) < 22 mm, sensibil dacă > 22 mm
▸ Se poate confirma cu:
▸ CMI la oxa
▸ Determinarea prezenței genei mecA (PCR)
▸ Determinarea prezenței proteinei PBP2a (imunodetecție)
▸ Sensibil la glicopeptidele (vancomicina, teicoplanina)
▸ De rezervă (dacă e rezistent la vancomicină): linezolid, daptomicină, tigeciclină
ANTIBIOGRAMA
MRSA
ANTIBIOGRAMA
▸ Fenotipul de MLSBi: fenotip inductibil, de rezistență la macrolide,
lincozamide (clindamicina), streptogramină B. Dat de gene erm
(erythromycin ribosome methylation)
▸ Testul D: discuri de eritromicină și clindamicină la 12-20 mm unul de
celălalt. Test pozitiv: zonă de inhibiție sub forma literei D se raportează
rezistent la clindamicină
LP2
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
AL INFECȚIILOR CU STREPTOCOCI
LP2
STREPTOCOCI
▸ coci gram pozitivi sferici
sau ovoidali
▸ dispuși în perechi sau
lanțuri
▸ nesporulați, imobili,
facultativ anaerobi, fără
catalază
▸ necesități nutriționale
mai complexe decât
stafilococii
LP2
STREPTOCOCI
Familia Streptococcaceae, genurile Streptococcus, Enterococcus, etc
După caracterul hemolizei (geloză-sânge):

α
• streptococii ß-hemolitici – zonă bine delimitată de hemoliză completă
(S. pyogenes - grup A, S. agalactiae - grup B)
• streptococii α` - hemolitici – zonă de hemoliză incompletă (aspect
voalat, bordată de o zonă îngustă de β-hemoliză)
• streptococii α - hemolitici - zonă de hemoliză parțială asociată cu
reducerea Hb (înverzire a mediului) - streptococii viridans și S.
pneumoniae - negrupabili α`
• streptococii nehemolitici (γ-hemolitici) – unii streptococi orali, unii
enterococi
După structura antigenică (Lancefield):
• Cu antigene de grup (polizaharidul C): A-W. Cele mai frecvente: A, C,
G, B, D, F. Grupul A cu peste 80 tipuri (proteinele M și T)
• Fără antigene de grup: negrupabili
LP2 - STREPTOCOCI
DIAGNOSTICUL DE GEN - TESTUL CATALAZEI
Streptococcus spp.
Staphylococcus spp.
LP2
S. PYOGENES - BETA HEMOLITIC, GRUP A

• Boli invazive
‣ Cu localizare respiratorie • Boli post-streptococice
- faringita
- angina streptococică ‣ Reumatism articular acut
- scarlatina (toxina eritrogenă) ‣ Cardită reumatismală
‣ Cu localizare cutanată
- erizipelul
- impetigo streptococic ‣ Glomerulonefrită acută
- celulita
‣ Cu diseminare
- pneumonia
- endocardita infecțioasă
- sepsisul streptococic
- fasceita necrozantă (toxina eritrogenă)
- sindromul de șoc toxic streptococic (toxina eritrogenă)
LP2 - S. PYOGENES
1. RECOLTAREA ŞI TRANSPORTUL PRODUSULUI PATOLOGIC

• PP: secreția purulentă de la nivelul faringelui
• Reguli:
‣ cât mai aproape de debutul bolii
‣ antibioticoterapia
‣ rapid şi corect
‣ norme de asepsie şi antisepsie
• Condiții:
‣ dimineaţa (înainte să mănânce, fără să se fi spălat pe
dinţi, fără să fi utilizat gargarisme cu diferite soluţii)
‣ Altfel : după minim 4 ore
• Transport:
‣ NU > 2-3 ore (preferabil 1-2 ore).
‣ >3ore - mediu de transport, ex. Mediul Stuart (24 de
ore)
LP2 - S. PYOGENES
2. EXAMINAREA MICROSCOPICĂ
• 2 frotiuri
‣ albastru de metilen (AM)
‣ Gram
‣ Examinarea la microscopul optic cu
imersie
- Celule de la nivel faringian
- celule inflamatorii (ex. leucocite,
piocite)
- coci gram-pozitivi aşezaţi separat/
în perechi/ în lanţuri
- alte tipuri de microorganisme.
LP2 - S. PYOGENES
3. CULTIVAREA PE MEDII DE CULTURĂ

• Scop: colonii izolate/cultură pură
• Germeni pretențioși
‣ mediu agar-sânge (18-48 ore, 35-37°C)
‣ Colonii
- aspect de tip S
- diametrul de 0,5-1 mm
- b-hemoliză
• Speciile care produc material capsular, din
acid hialuronic, adeseori dau naştere unor
colonii mucoide (de tip M).
• Alte medii: medii selective: agar-sânge +
trimetoprim-sulfametoxazol
LP2 - S. PYOGENES
4. IDENTIFICAREA MICROORGANISMULUI
• Caractere morfotinctoriale:
‣ Coci gram-pozitivi, sferici sau
ovoidali
‣ Diametru: circa 1µ
‣ Diviziune într-un plan
perpendicular pe axa lor lungă
‣ Dispozitie: în lanţuri
‣ Lungimea lanțurilor: variabilă,
condiționată de factori de
mediu.
LP2 - S. PYOGENES
• b. Caractere de cultură
‣ colonii de 2p S /M
‣ Diametru: 0,5-1 mm,
‣ înconjurate de o zonă de b-hemoliză
LP2 - S. PYOGENES
• Caractere biochimice:
‣ testul PYR : sinteza pirolidonil-
amidazei. Enzima acționeaxză
asupra unui substrat -> culoare
roșie (test pozitiv)
‣ Streptococii piogeni sunt
rezistenți la trimetoprim-
sulfametoxazol
LP2 - S. PYOGENES
• Sensibilitatea la bacitracină
‣ Principiu: Bacitracina (Bacillus
licheniformis)→ inhiba multiplicarea
streptococilor de grup A
‣ Obs. < 1% Streptococcus
pyogenes = rezistente la
bacitracină.
‣ Streptococ beta-hemolitic:
- Grup A Streptococcus pyogenes
- Grup B Streptococcus agalactiae
‣ Test +: inhibitie a cresterii
bacteriene -> Streptococ grup A =
Streptococcus pyogenes
LP2 - S. PYOGENES
• Caractere antigenice:
‣ Teste comerciale
- pentru antigenul de grup A al streptococilor piogeni. Extracţie
chimică sau enzimatică (ex. cu pronază) - > aglutinarea indirectă
(latexaglutinare), coaglutinarea sau ELISA.
- pentru mai multe antigene de grup (Lancefield) sau de tip.
Reacții de aglutinare (latexaglutinare, coaglutinare) pe lamă, sau
precipitare
LP2 - S. PYOGENES
5. ANTIBIOGRAMA
• Sensibilitatea cunoscută la penicilină, deși există și tulpini

“tolerante”, care sunt inhibate, dar nu distruse de către
penicilină
• În general antibiograma se realizează în scop
epidemiologic
• În cazul alergiei la beta-lactamine
▸ eritromicina
▸ tulpini rezistente la eritromicina-> antibiograma
LP2 - S. PYOGENES
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR SEROLOGIC

• Diagnosticul serologic
‣ certificarea etiologiei bolilor poststreptococice (RAA, GNA),
‣ identificarea unei eventuale stări de hipersensibilitate,
‣ diagnosticul retrospectiv al unei infecții streptococice,
‣ evaluarea evoluţiei clinice şi eficacităţii tratamentului.
• Diagnosticul serologic se realizează prin:
‣ Reacția ASLO
- identifică titruri ale anticorpilor anti-streptolizină O
- în dinamică: 7 – 10 zile.
- titru normal România de 200 (maxim 250) unități ASLO.
‣ teste serologice pentru determinarea prezenţei şi titrului anticorpilor faţă
de alte structuri antigenice
- streptodornază (infecții tegumentare, glomerulonefrite acute,
hialuronidază, streptokinază, MAP (prin latex aglutinare).
LP2 - S. PYOGENES
REACȚIA ASLO
• Principiu: evidențierea anticorpilor anti-streptolizină O pe baza activității hemolitice a streptolizinei O
asupra hematiilor de iepure sau berbec. În cazul în care în serul de cercetat există Ac anti-SLO, acțiunea
hemolitică a SLO este neutralizată.
• Tehnica:
‣ Se inactivează complementul din serul de testat prin încălzire 30 min la 56˚C și se tratează cu Rivanol
0,4%, pentru îndepărtarea inhibitorilor nespecifici. Se realizează apoi diluții succesive de ser
‣ Se pune în contact serul cu o cantitate constantă de streptolizină O și se incubează 15min la 37˚C
‣ Se adaugă suspensia de hematii de iepure/berbec și se incubează 45 min la 37°C apoi peste noapte
la 4°C
• Rezultate:
‣ Controale: control de hematii (numai hematii -> absența hemolizei) și control de streptolizină (hematii
+ streptolizină -> prezența hemolizei). Titrul reacţiei ASLO este dat de cea mai mare diluție de ser la
care lipseşte complet hemoliza.
LP2
STREPTOCOCII DE GRUP B, BETA/ALFA - HEMOLITICI
▸ Principiu: Streptococii de grup

B→ factor CAMP (substanţă
extracelulară proteică)
▸ Staphylococcus aureus → b-
hemolizina (singură nu produce
hemoliza).
▸ Sinergie factor CAMP/ b-lizina
▸ Metoda: cultivare. în striuri
perpendiculare (fără să se
atingă)
(1) Enterococcus faecalis
▸ Test +: in zona de invecinare -
(2) Streptococcus salivarius
hemoliză lărgita în “vârf de
săgeată” (vârful spre tulpina de (3) S. agalac4ae
stafilococ) (4) E. durans.
LP2
STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE - NEGRUPABIL, ALFA-HEMOLITIC
1. Localizare: flora normala 50% / infecții CR

2. Forma: coci alungiţi, lanceolaţi, dispuşi în
general în diplo pe axul longitudinal,
3. Coloratia Gram: pozitiv
4. Metabolism: aerob/ facultativ anaerob
5. Mobilitate: imobili
6. Spori: nesporulati
7. Capsula prezentă
8. Proprietati biochimice:
Fermentarea inulinei
Testul bilolizei, Neufeld
Sensibili la optochin
9. Caractere patogenitate
LP 2 - S. PNEUMONIAE
PATOGENIE
• Poate face parte din flora microbiană normală (!contaminarea cu această
floră a sputei)
• Multiplicare şi invazivitate:
‣ Infecții de tract respirator superior şi inferior
- Pneumonia pneumococică: edem alveolar, exsudat fibrinos, urmat
de apariția de hematii și leucocite.
‣ Infecții de ureche medie, sinusuri
• Diseminare hematogenă
‣ meningită
‣ endocardită
• Dezvoltarea rezistenței la antibiotice: penicilină şi alte medicamente
antibacteriene.
• Diagnosticul de laborator: pneumonia pneumococică.
1. RECOLTAREA ŞI TRANSPORTUL PRODUSULUI PATOLOGIC
▸ PP: spută
▸ Reguli:
▸ cât mai aproape de debutul bolii
▸ antibioticoterapia
▸ rapid şi corect
▸ norme de asepsie şi antisepsie
2. EXAMINAREA MICROSCOPICĂ
• 2 frotiuri
‣ albastru de metilen- capsula-halou în jurul
pneumococilor.
‣ Gram
• Examinarea la microscopul optic cu imersie
‣ celule de la nivel alveolar (ex. macrofage
alveolare)
‣ celule inflamatorii (ex. leucocite)
‣ Coci gram-pozi2vi, alungiţi, lanceolaţi, dispuşi
în general în diplo, încapsulaţi (cu o capsulă
comună), nesporulaţi
‣ reacţia de umflare a capsulei- an>corpi an>-
capsulari,-iden>ficare rapidă
3. CULTIVAREA PE MEDII DE CULTURĂ
▸ Scop: colonii izolate/cultură pură

▸ Germene pretentios
▸ Mediu solid: geloză-sânge
▸ colonii de tip S sau de tip M,
▸ a-hemoliză (la fel ca streptococii viridans).
▸ Multiplicarea+:5% CO2, 35-37°C.
▸ Medii lichid- tulbură omogen mediul
a. Caractere
morfotinctoriale:
▸ coci gram-pozitivi, alungiţi,

lanceolaţi,
▸ dispuşi în general în diplo,
▸ încapsulaţi (cu o capsulă
comună),
▸ nesporulaţi.
▸b. Caractere de cultură:
▸ geloză-sânge: colonii de tip S sau M
▸ a-hemoliză
▸c. Caractere biochimice:

▸ Glucoza e principala sursă de energie
▸ Enzime zaharolitice, proteolitice şi
lipolitice
▸ Fermentarea inulinei
▸ diferenţierea pneumococilor de streptococii
viridans (deși există tulpini viridans care
fermentează inulina).
▸ Mediu: inulină + indicator de pH.

▸ Enzime autolitice-testul bilolizei, Neufeld
▸ Sensibili la optochin (e>l-hidrocupreină)
Testul sensibilităţii la optochin

• Optochin (etilhidrocuprein
hidroclorid) un detergent
• Streptococcus spp. cu hemoliză
alfa
‣ S. pneumoniae - pozitiv
‣ Streptococcus spp. din flora
normală - negativ
• Test +: zona de inhibitie
≥14mm
Testul bilolizei (Neufeld):

▸Principiu: bila/ săruri biliare →
activare enzime autolitice→
liza Streptococcus
pneumoniae capsulaţi
▸Scop: diferențierea
Streptococcus pneumoniae
de Streptococcus spp.
▸Sol: dezoxicolat de sodiu 10%
▸Test+ : suspensie clara în tubul
în care am adăugat
dezoxicolat
• Caractere antigenice:
‣ capsula polizaharidică (antigenul K) = cel mai important determinant antigenic şi
patogenic. Protejează pneumococul faţă de fagocitoză şi permite invazivitatea.
‣ Structura polizaharidului capsular este specifică fiecărui serotip în parte. Peste 85
de serotipuri capsulare diferite.
‣ seruri specifice anticapsulare polivalente şi monovalente
- reacţiei de umflare a capsulei
- reacţia de aglutinare
‣ prin urină se elimină cantităţi destul de importante de Ag K: reacţii de
latexaglutinare, imunoelectroforeză
5. ANTIBIOGRAMA
▸ obligatorie
▸ metode difuzimetrice pe medii
suplimentate cu sânge defibrinat
de oaie.
▸ verificarea sensibilităţii / rezistenţei
la penicilină: microcomprimate cu
oxacilină (1mg)
▸ infecţii grave: antibiograma trebuie
să fie însoţită de alte determinări
cantitative (CMI)
5. ANTIBIOGRAMA
▸ E-test-CMI
(azitromicina)
GENUL STREPTOCOCCUS
STREPTOCOCI BETA-HEMOLITICI
testul PYR
Pozitiv Negativ
sensibilitatea la bacitracina hidroliza hipuratului
Sensibil Rezistent Positiv Negativ
Streptococcus Enterococcus Streptococcus Streptococcus

pyogenes agalactiae grup C, F sau G
GENUL STREPTOCOCCUS
STREPTOCOCI ALFA-HEMOLITICI
Optochin
Sensibil Rezistent
Streptococcus dezv. pe 6.5% NaCl

pneumoniae testul PYR
Pozitiv Negativ
Enterococcus Streptococcus
viridans
GENUL STREPTOCOCCUS
ALGORITM PENTRU ALŢI STREPTOCOCI
Hidroliza
argininei
Pozitiv Negativ
Streptococcus Manitol /
sanguis group sorbitol
Negativ Pozitiv
hidroliza Streptococcus
esculinei mutans group
Negativ Positiv
Streptococcus Streptococcus
mitis group salivarius
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL
INFECȚIILOR CU NEISSERIA
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECȚIILOR CU NEISSERIA
CARACTERE GENERALE
• Familia Neisseriaceae - genuri cu importanță
medicală
▸ genul Neisseria - 35 de specii, dintre care
N. meningitidis și N. gonorrhoeae
patogeni exclusiv umani
▸ genul Eikenella - E. corrodens - abcese
cerebrale, pneumonii, meningite
▸ genul Kingella - K. kingae - artrita septica,
endocardita bacteriana la copii
• Alte specii de Neisserii sunt saprofite, pot

coloniza în mod normal mucoasele (oro- și
nazofaringiană, ano-genitală) și tegumentul: N.
lactamica, N.mucosa, N. flava
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECȚIILOR CU NEISSERIA
CARACTERE GENERALE
• Coci Gram-negativi, reniformi (boabe
de cafea), în diplo
• Aerobi, oxidază-pozitivi, catalază-

pozitivi
• Oxidează (nu fermentează)

carbohidrații: glucoză și maltoză - N.
meningitidis, glucoză - N. gonorrhoeae
• Cu capsulă polizaharidică (N.

meningitidis) sau fără (N.
gonorrhoeae)
• Imobili, nesporulați
• Se pot multiplica intracelular
NEISSERIA MENINGITIDIS
NEISSERIA MENINGITIDIS - PATOLOGIE

Meningita meningococică
• Omul: singura gazdă naturală a meningococului
• 5- 10% din populatie este purtătoare (în nazofaringe) de meningococ ➞
bacteriemie ➞ străbate bariera hemato- encefalică ➞ meningită cerebro-
spinală
• Febră, redoare de ceafă, comă, rush purpuric, peteșii, coagulare intravasculara
(CID)
• Meningită infecțioasă la adulți:
‣ Haemophilus influenzae
‣ Streptococcus pneumoniae
‣ Neisseria mengitidis
• Diagnosticul meningitei meningococice este URGENT. Riscuri: deces, sechele
neurologice
NEISSERIA MENINGITIDIS
PATOLOGIE
Meningococemie (Sdr. Waterhouse-Friderichsen)
• meningococemie fulminantă, endotoxina (LOS) responsabilă
tulburări hemodinamice, activarea procesului de coagulare
intravasculară
• Febră mare, rush hemoragic, șoc, insuficiența glandei suprarenale;
la copii - necroze extremități, deces sau sechele meningo-
encefalitice
Alte localizări:
• rinofaringite, otite, bronsite, pneumonii, bronhopneumonii
• conjunctivite,
• artrite
NEISSERIA MENINGITIDIS - DIAGNOSTIC DE LABORATOR
RECOLTAREA PROBELOR
• Reguli generale:
‣ În urgență, înainte de administrarea tratamentului cu antibiotice
‣ Respectarea regulilor de asepsie, antisepsie; recipiente sterile, unica utilizare
• LCR:
‣ Puncție lombară în tuburi sterile, 2-5 ml (copii), 5-10 ml (adulți)
‣ Unde și dacă este posibil, însămânțare la patul bolnavului, pe medii încălzite la
37ºC
• Hemocultură:
‣ Minim 2 hemoculturi. Volum: 10 ml (adulți), 1-3 ml (copii) ➞ însămânțare în
flacoane speciale pentru sisteme automate
• Transport:
‣ IMEDIAT (sânge, LCR), la temperaturi apropiate de 37˚C. Nu se pastrează la frigider
sau termostat
‣ Medii de conservare și transport: Stuart, Amies (pt. exudat nazal sau faringian),
‣ Meningococii f. sensibili la conditiile de mediu extern: UV, uscăciune, variații de
temperatură
EXAMENUL PRODUSULUI PATOLOGIC

• Macroscopic:
‣ Dacă LCR e tulbure, purulent ➞ frotiuri
direct din produsul patologic
‣ Dacă LCR e clar (infecție la debut, sau
meningită virală, cu b. Koch, micotică -
Cryptococcus neoformans) ➞
centrifugare LCR, apoi frotiuri
• Microscopic:
‣ Frotiu albastru de metilen / Giemsa:
prezența PMN, limfocite, macrofage și
procentele lor
‣ Gram: prezența cocilor gram-negativi,
dispuși în diplo, reniformi, imobili,
înconjuraţi de o structură capsulară
comună, situați intra sau extraleucocitar

• Identificare directă a meningococului în LCR:
‣ Latex aglutinare din supernatant:
identificarea prezenței antigenelor și
încadrarea în serogrupuri (A, B, C, Y,
W135)
‣ imunofluorescență cu anticorpi specifici
‣ PCR - util chiar și după administrarea de
antibiotice
CULTIVARE
• Produsele normal sterile (LCR) se însămânțează pe medii
neselective ca:
‣ Mueller Hinton +/- 5-10% sânge berbec,
‣ Geloză Columbia - chocolat
‣ BHI agar- 5-10 % sânge berbec
• Produsele pluribacteriene (exudat faringian, nazal, spută
etc) se însămânțează pe medii selective: Thayer Martin cu
vancomicină (inhibă Gram +), colistin (inhibă bacilii Gram -),
nistatin (inhibă fungii)
• 3-5% CO2
• 37°C, 18-48h
IDENTIFICARE - CARACTERE DE CULTURĂ

• Colonii “S”, “M”
• Colonii netede, rotunde, margini regulate, strălucitoare,
nepigmentate, translucide sau opace (gri), untoase, nehemolitice
Geloză - sânge Geloză chocolat

IDENTIFICARE - CARACTERE MORFOLOGICE

• Coci gram-negativi, reniformi, dispuși în diplo
• Înconjuraţi de o structură capsulară comună
IDENTIFICARE - CARACTERE BIOCHIMICE

• Metabolizează (oxidează) glucoza și maltoza, nu lactoza sau zaharoza
• Sisteme comerciale pentru identificare exoenzimatică a Neisseriilor:
API Quad Ferm+ pt. degradarea carbohidratilor, Minitek
• Catalază pozitivi

• Produc citocrom oxidază - testul oxidazei pozitiv
• Sub acțiunea oxidazei, reactivul Kovac pentru oxidază capătă o
culoare violet
IDENTIFICARE - CARACTERE ANTIGENICE

• 13 serogrupuri (capsula polizaharidică - cel mai important
determinant antigenic)
‣ grupe mai importante : A, B (Europa), C, Y , W-135.
‣ detectare directa în produsul patologic
‣ seruri polivalente anti -A, C, Y, W-135
‣ seruri monovalente anti-B
• 12 serotipuri (structura lipooligozaharidului)
• Prin latex aglutinare, coaglutinare, contraimunoelectroforeză
• OBS: reactivitate încrucișata între Ag grupului B/ Ag K1 E. coli.
ANTIBIOGRAMA
• Este recomandată
• Metode difuzimetrice
• Imagine: rezistență la ciprofloxacin, levofloxacin, acid nalidixic
PROFILAXIE
• Vaccin: A, C, Y, W-135
• Polizaharidul capsular de serogrup B se aseamănă prea
mult structural cu antigenele neuronale umane - dificil de
dezvoltat un vaccin
NEISSERIA GONORRHOEAE
NEISSERIA GONORRHOEAE - PATOLOGIE

• Patogen exclusiv uman
• Produce gonoreea: boală cu transmitere sexuală:
‣ Gonococul nu face parte din flora bacteriană normală
‣ Infecție purulenta a mucoasei uretrale la barbat (uretrită
gonococică) si a endocervixului la femei. Un anumit procent din
persoanele infectate sunt asimptomatice, dar transmit boala
‣ Se manifesta și sub forma de infectii rectale sau faringiene
‣ Evoluție:
- La bărbat: afectarea ascendenta a prostatei, veziculelor
seminale, epididim, fibroza, stricturi uretrale,
- La femei: salpingite, fibroze, sarcini extrauterine, infertilitate
etc.
NEISSERIA GONORRHOEAE
NEISSERIA GONORRHOEAE - PATOLOGIE

• Alte localizări:
‣ Infecții diseminate:
- artrite septice
- leziuni cutanate (papule, pustule hemoragice)
- tenosinovite
- rar: endocardite, meningite, osteomielite,
‣ Conjunctivita acută la nou nascut
NEISSERIA GONORRHOEAE - DIAGNOSTIC DE LABORATOR
RECOLTAREA PROBELOR
• Reguli generale:
‣ …
• Produse patologice:
‣ La bărbat: secreţia uretrală (eventual “picătura matinală”)
‣ La femeie: de la nivelul colului uterin și glandelor Bartholin
‣ Hemocultură, secreții conjunctivale, faringiene, urină
(centrifugată)
• Transport:
‣ IMEDIAT, la temperaturi apropiate de 37˚C. Nu se
pastrează la frigider sau termostat
‣ Medii de conservare și transport: Stuart, Amies,

• Microscopic:
‣ Frotiu albastru de metilen / Giemsa:
prezența celulelor inflamatorii
‣ Gram: prezenţa cocilor Gram-negativi,
dispuși în diplo, reniformi, imobili,
situați intra sau extraleucocitar
‣ Uretrita acută gonococică: prezența a
numerosi coci Gram-, frotiu cu aspect
de “celule burate” cu bacterii.
‣ Examenul direct are specificitate de
95% pentru uretrita gonococică (la
bărbați) - uneori stabilește
diagnosticul, fără confirmare prin
culturi, dar numai 50% pentru
cervicite -> e obligatorie confirmarea
prin culturi
CULTIVARE
• Secrețiile tract uro-genital se însămânțează pe medii
neselective ca geloză-sânge, geloză chocolat
• Probe patologice recoltate de la nivel rectal sau faringian
se însămânțează pe medii selective: Thayer Martin cu
vancomicină, colistin, nistatin
• 10% CO2
• 37°C, 18-48h

• Colonii “S”, “M”
• Colonii netede, rotunde, margini regulate, pigmentate/nepigmentate, transparente
sau opace
• 5 tipuri de creștere (T1 - T5)

• Coloniile T1 predomină la izolatele proaspete, T3 la pasajele ulterioare
T1 T3
IDENTIFICARE - CARACTERE MORFOLOGICE

• Coci gram-negativi, reniformi, dispuși în diplo

• Metabolizează (oxidează) glucoza, nu maltoza, lactoza sau zaharoza
• Sisteme comerciale pentru identificare exoenzimatică a Neisseriilor:
API Quad Ferm+, Minitek
• Catalază pozitivi
• Testul oxidazei pozitiv
NEISSERIA - DIAGNOSTIC DE LABORATOR
Negative
Organism Control Glucose Maltose Lactose Sucrose Butyrate
- + - - - -
red orange red red red white
N. gonorrhoeae or yellow
- + + - - -
red orange orange or red red white
N. meningitidis or yellow yellow
- + + + - -
red orange orange or orange or red white
N. lactamica or yellow yellow yellow
- + + - + -
red orange orange or red orange or white
N. sicca or yellow yellow yellow
- - - - - +
M. catarrhalis red red red red red blue

• Testul DFA (Direct Fluorescent
Antibody):
‣ anticorpi monoclonali care
recunosc proteina I de pe
membrana externa a gonococului,
‣ (se efectueaza un frotiu care se
acopera cu reactiv DFA, se
incubeaza 15 min, se examineaza la
microscopul cu fluorescenta)
• Reactii de co-aglutinare,
• Reactii imunoenzimatice (Ac
policlonali/ ELISA)
ANTIBIOGRAMA
• este recomandată
• metode difuzimetrice: mediul utilizat : GC suplimentat nutritiv, dar fără
pulbere de hemoglobină
• tulpini rezistente la penicilină
‣ plasmid care codifică o b-lactamază de tipul TEM
‣ mutaţii cromozomiale
• testarea producerii de b-lactamază
(de ex. folosind discuri cu nitrocefin).
• Determinarea CMI: testul E
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL
INFECȚIILOR CU ESCHERICHIA,
KLEBSIELLA ȘI PROTEUS
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECȚIILOR CU ENTEROBACTERIACEAE
CARACTERE GENERALE
Salmonella Shigella Yersinia Escherichia Klebsiella Proteus

Morfologie Bacili Gram negativi nesporulați
Mobilitate Da Nu Nu Majoritatea Nu Da
Capsulă Antigene Vi Nu Nu Unele tulpini Da Nu
O2 Aerob facultativ anaerob
Cultura Nepretentiosi; S, R (culturi “vechi”), M (specii capsulate)
Test catalază Pozitiv
Test oxidaza Negativ
Reducere nitrati Pozitiv
Fermentare Glucoză Pozitiv
carbohidrați Lactoză Negativ Negativ Negativ Pozitiv Pozitiv Negativ
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECȚIILOR CU ENTEROBACTERIACEAE
CARACTERE GENERALE - PATOGENITATE

FAMILIA ENTEROBACTERIACEAE
IMPLICAREA ÎN INFECȚIILE UMANE

• Patologia digestivă (25% din infecții):
Salmonella, Shigella, E. coli, Yersinia
• Patologia urinară (70 - 80% din infecții): E. coli,

Klebsiella spp., Enterobacter spp, Proteus spp.
• Infecții sistemice – septicemie (>65% din

infecții): Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae
• Patologia respiratorie:
▸ Pneumonia comunitară: Klebsiella
pneumoniae
▸ Pneumonia nosocomială / ATI: Serratia,
Klebsiella pneumoniae MDR
• Meningo-encefalite: E. coli, Klebsiella

• Patologie post-traumatică, musculo-scheletală:
Klebsiella pneumoniae, Serratia marcescens
CULTIVARE
Izolarea speciilor: medii selective, diferențiale, selectiv-diferențiale
• Selectivitate redusă (inhibă bacterii Gram+)
‣ Mediul MacConkey (săruri biliare în concentraţie mică +/- cristal

violet)
• Selectivitate medie (inhibă enterobacteriile lactozo-pozitive)
‣ Mediul ADCL (dezoxicolat, citrat și lactoză), mediu diferențial

‣ Mediul Shigella-Salmonella (săruri biliare și verde briliant)
‣ Mediul XLD (xiloză, lizină și dezoxicolat)
• Selectivitate înaltă (cresc numai Salmonella spp)
‣ mediul Wilson-Blair (Bismuth Sulfite Agar) (verde briliant în

concentrație crescută)
CULTIVARE - MEDIUL MAC CONKEY

• Compoziție: hidrolizat de gelatină,
hidrolizat de cazeină, lactoză, săruri
biliare, cristal violet, clorură de sodiu,
roşu neutru (indicator de pH)
• Mediu cu selectivitate redusă. Factorii
selectivi sunt sărurile biliare și cristalul
violet care inhibă bacteriile Gram+
• Mediu diferențial pentru fermentarea
lactozei -> scăderea pH virează
indicatorul din necolorat în roșu
• Rezultate: Cultivarea diferitelor specii bacteriene pe agar Mac
Conkey:
• Colonii lactozo-pozitive - culoare roșie 1. Enterobacter aerogenes
2. Escherichia coli
• Colonii lactozo-negative - necolorate 3. Staphylococcus epidermidis
4. Salmonella typhimurium
CULTIVARE - MEDIUL ADCL (AGAR DEOXICOLAT CITRAT LACTOZĂ)
• Mediu cu selectivitate medie pentru

enteropatogeni, în special Salmonella și
Shigella spp. Factorii selectivi sunt
deoxicolatul și citratul care inhibă bacteriile
Gram+ și coliforme.
• Mediu diferențial pentru fermentarea
lactozei: coloniile lactozo-pozitive sunt roz-
roșii prin virarea culorii indicatorului roșu-
neutru, cele lactozo-negative nu se colorează
CULTIVARE - MEDIUL XLD
• Selectivitate medie; mediu cu xiloză, lizină și

dezoxicolat
Mediul XLD: colonii negre de Salmonella și
• Mediu diferențial pentru fermentarea xilozei:
galbene de Escherichia coli
‣ Salmonella: fermenteaza Xyl (mediu galben)
și produce H2S (colonii cu centrul negru)
‣ Shigella: nu fermenteaza Xyl (culoare roz/
rosu a mediului)
‣ Enterobacterii: fermenteaza Xyl (mediu
galben)
Mediul XLD: colonii translucide de Shigella

CULTIVARE - MEDIU SALMONELLA SHIGELLA

• Selectivitate mare: Săruri biliare + verde briliant, lactoză, roșu neutru, săruri de fier
• E. coli : culoare roz (lactozo+, H2S-)
• Salmonella: colonii incolore cu centrul negru (lactozo-, H2S+)
• Shigella: incolore (lactozo-, H2S-).
DR. Mara MIHAI

CULTIVARE - MEDIUL WILSON-BLAIR
• Mediu înalt selectiv pentru

salmonele: factorii selectivi sunt
verdele briliant în concentrație
crescută și bismut
• Mediu diferențial pentru S. typhi și
typhimurium pe baza producerii de
H2S care reduce sulfitul la sulfură Colonii de Salmonella typhimurium, de culoare
metalică de culoare neagră cu luciu neagră, pe mediul Wilson-Blair
CARACTERE BIOCHIMICE - MEDIUL MULTITEST TSI

• Mediile multitest testează simultan mai multe caractere biochimice ale unui izolat în același
mediu (tub)
• Scop: Testul TSI (triple sugar iron) e utilizat pentru identificarea enterobacteriilor
• Principii:
‣ Mediul este agarizat, turnat în două zone: în coloană la bază și în pantă la suprafață ->
coloana nu vine în contact cu aerul și oferă condiții relative de anaerobioză, iar înclinată
(panta) asigură condiții de aerobioză
‣ Mediul conţine glucoză (în raport de 1/10 față de celelalte zaharuri), lactoză și zaharoză.
- Dacă o bacterie nu fermentează nici unul dintre zaharuri, coloana și panta rămân roșii
(ex. Pseudomonas, Alcaligenes)
- Dacă o bacterie fermentează glucoza dar nu lactoza/zaharoza, inițial întregul volum al
mediului virează în galben, iar ulterior aminoacizii eliberați de bacteriile care au
crescut vor fi decarboxilați oxidativ în zona înclinată -> pH-ul va fi modificat spre alcalin
și culoarea pantei redevine roșie. În final coloana e galbenă și panta roșie (Ex.
Salmonella, Shigella, Proteus, Citrobacter, Providencia, Serratia)
- Dacă o bacterie fermentează atât glucoza cât și lactoza / zaharoza (ultimele două în
concentrație mare), dezaminarea oxidativă nu mai poate compensa efectul fermentării
-> coloană și pantă galbene (Ex. Escherichia, Klebsiella, Enterobacter)
‣ Unele bacterii produc gaz în urma fermentării -> formarea de bule în mediu, ruperea sau
crăparea mediului, ridicarea mediului sau desprinderea acestuia de pereții tubului (Ex.
Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Salmonella, Proteus, Citrobacter) Mediu TSI
‣ Unele bacterii produc o enzimă (cisteindesulfhidraza) care descompune aminoacizii cu sulf neînsămânțat
producând hidrogen sulfurat -> reacționează cu sărurile de fier din mediu și dă naștere
unui precipitat de culoare neagră (Ex. Salmonella, Proteus, Citrobacter)
CARACTERE BIOCHIMICE - MEDIUL MULTITEST TSI

• Metoda: coloana se însămânțează prin înţepare, apoi retragem ansa și la suprafața pantei trasăm un striu
în “zig-zag”.
• Rezultate:
Panta Alcalină Alcalină Alcalină Alcalină Alcalină Acidă Acidă Acidă
Coloana Alcalină Alcalină Acidă Acidă Acidă Acidă Acidă Acidă
Gaz Nu Nu Nu Da Nu Nu Da Da
H2S Nu Nu Nu Nu Da Nu Nu Da
Inocul Neinoculat Pseudomonas Shigella Serratia Salmonella Enterobacter E. coli Proteus

CARACTERE BIOCHIMICE - MEDIUL MULTITEST MIU

• Scop: Evidențiază mobilitatea, producerea de indol din triptofan și de urează. Utilizat pentru diferențierea
enterobacteriilor
• Principii:
‣ Mediul este o geloză moale ce permite mobilitatea microorganismului; însămânțarea se realizează prin
înțeparea coloanei cu o ansă dreaptă
‣ Mediul conține uree, iar hidroliza acesteia va duce la alcalinizarea mediului (culoarea virează de la galben
la roșu). Urează pozitivi: Klebsiella spp., Proteus
‣ Mediul conține triptofan, iar producerea de indol din triptofan va fi indicată de înroșirea reactivului Ehrlich.
Indol pozitivi: E. coli
• Rezultate:
‣ Mobilitate: opacifierea dincolo de linia
de însămânțare sau a întregului mediu =
bacterie mobilă; opacifierea doar a
traseului de însămânțare = bacterie
imobilă
‣ Indol: înroșirea hârtiei de filtru sau a
reactivului Ehrlich lichid = bacteria
produce triptofanază
‣ Uree: coloana de mediu roșie = germen
urează +, galbenă = germen urează - Stânga izolat M+I+U- (E. coli), centru M-I-U+
(Shigella spp), dreapta M+I-U- (P. mirabilis)
CARACTERE BIOCHIMICE - MEDIUL MULTITEST MILF

• Scop: Evidențiază mobilitatea, producerea de indol din triptofan, decarbozilarea lizinei și dezaminarea fenil-alaninei, pentru
diferențierea enterobacteriilor
• Principii:
‣ Mediul este o geloză moale ce permite mobilitatea microorganismului; însămânțarea se realizează prin înțeparea coloanei cu o
ansă dreaptă
‣ Mediul conține triptofan, iar producerea de indol din triptofan va fi indicată de înroșirea reactivului Ehrlich aplicat pe o bandă de
hîrtie fixată de dop sau aplicat în formă lichidă peste coloana de mediu
‣ Mediul conține lizină și bacteriile care produc lizindecarboxilază (Klebsiella spp., S. typhi, V. cholerae) vor degrada lizina ->
alcalinizarea mediului
‣ Mediul conține fenil-alanină, bacteriile care produc fenilalanindeaminază (Proteus, Morganella și Providencia) vor descopune
substratul cu producere de acid fenilpiruvic. Ultimul este pus în evidență prin adăugarea după incubare de clorură ferică ->
înverzirea mediului
• Rezultate:
‣ Mobilitate: vezi mai sus, testul MIU
‣ Indol: vezi mai sus, testul MIU
‣ Lizină: baza mediului virează în violet =
germen lizindecarboxilază +, galbenă =
germen lizindecarboxilază - (indicator de
pH este bromcresol purpuriu)
‣ Fenil-alanină: apariția imediată a culorii
verzi după adăugarea reactivului = bacterie
fenilalanindeaminază +, absența colorării în Tulpină de E. coli: mobilitate +, indol
verde = bacterie fenilalanindeaminază - + (inel roșu la suprafața mediului dat
de r. Ehrlich), lizindecarboxilază +
CARACTERE BIOCHIMICE - TESTUL UTILIZĂRII CITRATULUI (SIMMONS)

• Scop: Evidențiază capacitatea unor bacterii
(Salmonella, Klebsiella, Enterobacter,
Serratia, Providencia) de a utiliza citratul ca
unică sursă de carbon. Utilizat pentru
diferențierea enterobacteriilor.
• Principiu: Mediul Simmons conține citrat ca
singură sursă de carbon. Bacteriile care produc
citrat-permează pot converti citratul în piruvat
care este apoi metabolizat. Reacția duce la
alcalinizarea mediului și indicatorul (albastru
de bromtimol) virează din verde în albastru
• Rezultate: absența creșterii și culoare verde = Rezultat negativ (stânga),
respectiv pozitiv (dreapta) al
rezultat negativ; creștere bacteriană și culoare testului utilizării citratului
albastră = rezultat pozitiv
ESCHERICHIA COLI
GENERALITĂȚI
• Germeni comensali, saprofiti: locuitori normali ai intestinului
uman, ileon terminal, colon
• Bacterii conditionat patogene: infectii extraintestinale (peritonite,
colecistite, infectii ale plagilor, endometrite, pneumonii),
• Bacterii patogene:
‣ Patotipuri enterice (BDA),
‣ Patotipuri urinare (ITU),
‣ Patotipuri extraintestinale (meningite, septicemii)
• Se gasesc ubiquitar (apa, alimente, sol, suprafete)
• Coliformi fecali: indice de poluare a apei (indice de igiena)
ESCHERICHIA COLI
E. COLI ÎN INFECȚII ALE TRACTULUI URINAR

• 70 - 80% ITU cu E. coli
• E. coli din flora bacteriana intestinala proprie, calea de
infectie: ascendenta
• Aderenta la celulele uroepiteliale: fimbrii, pilii “pap”: Agenţi etiologici ITU (ordinea frecvenței)
• Escherichia coli- grupuri uropatogene
“pyelonephritis associated pili” (O1, O2, O7 )
• Klebsiella pneumoniae
• Clasificare ITU • Klebsiella oxytoca
• Enterobacter cloacae
‣ ITU joase: cistita, uretrita, prostatita • Enterobacter aerogenes
• Pseudomonas aeruginosa
‣ ITU înalte: pielonefrita acută, necroza papilară • Proteus mirabilis
(complicaţie PNA, +/- infecţie), abcesul renal, • Proteus vulgaris
• Citrobacter freundii
pielonefrita cronică • Citrobacter diversus
• Enterococcus faecalis
• Factori favorizanți: obstrucția urmată de stază urinară • stafilococi coagulazo-negativi
(sarcină, tumori, stricturi etc), reflux vezico-uretral
• Etiologia ITU diferită în funcție de: grupe de vârstă,
sex, pacienţi spitalizați /în ambulatoriu
• Urocultura
ESCHERICHIA COLI
UROCULTURA
• Produsul patologic: urina
• Urina e considerată normal sterilă. În uretra distală există floră
microbiană variată ➞ cel mai adesea contaminează urina ➞
importante tehnica recoltării și transportul rapid
• Pentru diagnosticul ITU se folosește urocultura cantitativă:
‣ 104 UFC/ ml → <30% ITU (UFC = unități formatoare de

colonii)
‣ 105 UFC/ ml → >80% ITU → valoare utilizată în practica
medicală
• Interpretare in context clinic si paraclinic (sumar urina și ex.
imagistic)
ESCHERICHIA COLI
UROCULTURA
Recoltare și transport
• Înainte de administrarea substantelor antibiotice sau antiseptice
• prima urina de dimineata (dacă nu, se așteaptă 3-4 ore), din “jet
mijlociu”, 20 - 50 mL
• asigurarea conditiilor de asepsie, antisepsie (toaleta locala
riguroasa)
• personalul medical: explicatii; +/- să asiste la recoltare. NU la
domiciliu (erori + prelungirea timpului de transport)
• recoltor steril
• există și tehnici de recoltare invazive (ex. cateterizare, puncție
suprapubiană)
• Transport în max. 2h la laborator - însămânțare imediată
ESCHERICHIA COLI
UROCULTURA
Examen macroscopic
• culoare (sânge, medicație diversă,
antiseptice urinare)
• grade diferite ale aspectului tulbure,
pana la piurie
• miros
• prezenta sedimentului la fundul
recoltorului,
• grade diferite de hematurie
macroscopica
ESCHERICHIA COLI
UROCULTURA
Examen microscopic
• Centifugare (3-5 min la 2000- 2500 rpm). Din sediment, screening
microscopic:
‣ preparat proaspat intre lama si lamela:
- examinare cu obiectiv 40X:
- celule epiteliale (malpighiene, vezicale, uretrale etc), elemente
figurate sanguine (leucocite, hematii), cilindri urinari (hialini,
leucocitari, eritrocitari, epiteliali, granulari etc), cristale urinare, levuri
- orientativ: 1 bacterie/câmp, 5 câmpuri succesive → bacteriurie
=105 UFC / ml
- Piuria = >10 leucocite/µL
‣ Frotiuri:
- Albastru de metilen: PMN, neutrofile, bacterii, celule epiteliale
- Gram: Bacili Gram negativi cu capete rotunjite
ESCHERICHIA COLI
EXAMENUL SUMAR DE URINĂ

SEDIMENT URINAR - EXMEN MICROSCOPIC:
• Leucocite: prezența leucocitelor în urină (> 28/µL) este un indicator pentru afecțiuni inflamatorii ale
tractului urinar: infecții bacteriene (cistita, uretrita, pielonefrita), infecții virale, glomerulopatii etc.
• Hematii: prezența eritrocitelor în urină > 17/µL necesită investigații suplimentare.
• Celule epiteliale: prezența urinară a unui număr crescut de celule epiteliale poate indica fie o
recoltare incorectă, fie o stare patologică.
• Cilindri (hialini, granuloși, celulari, ceroși, micști): reflectă statusul tubilor renali, numărul cilindrilor
din sedimentul urinar și tipul lor având valoarea diagnostică.
• Cristale (oxalat de calciu, acid uric, fosfat de calciu, fosfat amoniaco-magnezian, urați amorfi, fosfați
amorfi, urat de amoniu etc.): nu sunt prezente în mod normal în urina proaspătă, dar se pot forma în
timpul stocării la temperatura camerei sau în timpul refrigerării.
• Floră microbiană: prezența bacteriilor trebuie interpretată în contextul clinic, înainte de stabilirea
diagnosticului de infecție urinară. În cazul suspiciunii de infecție urinară se recomandă
efectuarea uroculturii.
• Levuri: cea mai frecventă este Candida albicans
ESCHERICHIA COLI

Examen sumar de urina (ex. biochimic):
• pH-ul: constantă fizică a urinii care permite evaluarea capacității rinichiului de intervenție în
menținerea homeostazei acido-bazice; în mod fiziologic pH-ul trebuie să se încadreze în
intervalul 4.8 – 7.4.
• Densitatea: variază în condiții fiziologice în limite largi, în funcție de starea de hidratare a
organismului, de regimul alimentar etc. ; intervalul de referință este 1016 – 1022.
• Proteine: dacă se identifică urme de proteine, este necesară determinarea cantitativă a
excreției urinare a acestora (urina/24 ore).
• Glucoză: Prezența glucozei în urină se numește glicozurie și poate fi cauzată de condiții
prerenale (glicemie crescută) și condiții renale (afectarea reabsorbției tubulare a glucozei).
• Corpi cetonici: sunt prezenți în urină când metabolismul carbohidraților se alterează.
• Nitriți: prezența nitriților sunt un test screening pentru identificarea infecților urinare, fiind
importantă în evidențierea pacienților cu bacteriurie (prezența bacteriilor în urină).
• Urobilinogen și pigmenți biliari: la indivizii sănătoși sunt excretate doar în cantități mici, care
nu sunt detectabile cu metode uzuale, de aceea orice cantitate evidențiată necesită analize
medicale de laborator suplimentare.
ESCHERICHIA COLI

Examen sumar de urina (ex. biochimic):
• Bilirubină
• Sânge
• Densitate
• Glucoză
• Corpi cetonici
• Leucocite
• Nitriți
• pH
• Proteine
• Urobilinogen
ESCHERICHIA COLI
UROCULTURA
Cultivare
• Metoda ansei calibrate:
‣ Anse calibrate, din plastic, sterile, de unica utilizare, de 0,01
(10µL) si 0,001 ml (volum de 1 microlitru urina)
‣ Însamantare pe medii de cultura: geloza sange, MacConkey pe
placa Petri de 90 mm diametru,
‣ Incubare: 18- 24 ore, 37ºC
‣ Pentru ansa de 1µL: nr. colonii x 1000 UFC / mL
Prelevare: atingerea suprafeţei p.p.

a. 1 striu pe centrul jumătăţii de placă
b. striuri paralele, perpendiculare pe striul 1
c. striuri paralele în unghi de 45°
(fără să sterilizăm ansa)
ESCHERICHIA COLI
UROCULTURA
Cultivare
• Metoda diluțiilor:
ESCHERICHIA COLI
UROCULTURA
Cultivare
• Metoda Uricult:
‣ geloza- sange,
‣ MacConkey
ESCHERICHIA COLI
UROCULTURA - INTERPRETARE
• 1 specie bacteriană: >105 CFU/ ml:
– Simptome prezente ➞ diagnostic ITU la bărbat sau la femeie
– Simptome absente ➞ urocultura 2 ➞ rezultat similar ➞ diagnostic ITU
• 2 specii diferite: >105 CFU/ml ➞ urocultura 2
– Rezultat similar ➞ ITU mixtă
– Rezultat diferit ➞ contaminare probă
• 3 specii diferite, >105 CFU/ml ➞ repetarea analizei;
– contaminare; p.p. recoltat cu mai mult timp în urmă, menţinut la temperatura camerei
• 1 specie >104 / ml de urină ➞ repetarea analizei. De luat în cosiderare și alte semne paraclinice de
inflamație (prezența neutrofilelor în sediment), contextul clinic
– Excepţii: levuri, stafilococii coagulazo-negativi ➞ diagnostic ITU
• Lipsa multiplicării bacteriene sau <103 UFC/ml de urină ➞ urocultură negativă (bacteriurie fiziologică)
• Salmonella typhi indiferent de concentraţia UFC / ml de urină ➞ diagnostic ITU
• Apoi: identificarea bacteriei / antibiograma difuzimetrică

ESCHERICHIA COLI
UROCULTURA
Criterii de interpretare
• sex,
• varsta (n.n., sugar, batrani),
• tratament antibiotic,
• situatii fiziologice (sarcina, ciclul menstrual, alăptare etc),
• situatii patologice:
‣ imunodepresie: HIV, TBC, hepatita B, C, hemopatii maligne,

cancer, chimioterapie imunosupresiva etc,
‣ ruptura perineu, sonda uretrala permanenta, constipatie
cronică
ESCHERICHIA COLI
Caractere de cultură - E. coli

• Geloza – sange:
‣ colonii alb- gri, lucioase,
bombate, tip”S”,
‣ hemolitice sau nehemolitice,
• MacConkey, CLED:
‣ colonii lactozo (+)/ lactozo
(-),
ESCHERICHIA COLI
Caractere biochimice
E. coli
Mediul TSI Glucoză Pozitiv
Lactoză/Zaharoză Pozitiv
Gaz Da / Nu
H2S Nu
Mediul MIU Mobilitate Da
Indol Pozitiv
Urează Negativ
Lizindecarboxilază Pozitiv / Negativ
Fenilalanindeaminază Negativ
Utilizare citrat (mediul Simmons) Negativ
ESCHERICHIA COLI
ANTIBIOGRAMA
• Metoda difuzimetrică
• Fenotipuri E. coli:
‣ un fenotip sensibil (sălbatic) la beta-lactamine (aprox. 2/3 din

tulpini)
‣ un fenotip producător de penicilinază, rezistent la amino şi
carboxipeniciline
‣ un fenotip producător de cefalosporinază, rezistent la asociaţia
amoxicilină/clavulanat și la cefalosporinele de gen. I si II
‣ fenotipul producător de β-lactamaze cu spectru extins (BLSE)
la tulpinile de spital, rezistent inclusiv la cefalosporinele III,
relativ sensibil la fluoroquinolone
ESCHERICHIA COLI
ANTIBIOGRAMA
• Pentru încadrarea tulpinilor în fenotipul secretor de beta-
lactamază cu spectru extins (ESBL) se efectuează, ulterior
interpretării rezultatelor antibiogramelor, testul de sinergie între
amoxicilină+acid clavulanic (AMC) și ceftazidim (CAZ), cefotaxim
(CTX), ceftriaxon (CTR) și cefipim (FEP)
Imaginea sinergiei “în dop de șampanie” între amoxicilină+acid clavulanic şi cefalosporinele de

generaţia a III-a. A: Tulpină BLSE, B: Tulpină non-BLSE.
GENUL KLEBSIELLA
IDENTIFICARE
• Caractere microscopice: bacili Gram (-) grosi, scurti, in
diplo pe axul lung, incapsulati,
• Caractere culturale: colonii lactozo (+) mucoase („în
picătură de miere”), care conflueaza pe medii neinhibitorii
GENUL KLEBSIELLA
Klebsiella
Lactoză/Zaharoză Pozitiv la 24h
Gaz Da
H2S Nu
Mediul MIU Mobilitate Nu
Indol Negativ
Urează Pozitiv
Lizindecarboxilază Pozitiv Fenomenul de „cameleonaj”:
(neg. K. rhinoscleromatis) Klebsiella fermentează lactoza
și la 24h pH-ul mediului este
Fenilalanindeaminază Negativ
acid. Datorită altor produși de
Utilizare citrat (mediul Simmons) Pozitiv metabolism (ai
lizindecarboxilazei, de ex.),
mediul se alcalinizează la 48h
și aparența este de absență a
fermentării lactozei.
GENUL KLEBSIELLA
• Tehnici de aglutinare, coaglutinare sau latex aglutinare

• Există peste 80 de tipuri de antigen K la Klebsiella
pneumoniae
GENUL PROTEUS
GENERALITĂȚI
• Bacteriile din genul Proteus fac parte din flora bacteriana
normala a intestinului uman
• Sunt raspandite pe sol, in ape reziduale, ape de suprafata,
alimente de origine umana sau animala
• Produc:
‣ infecțiile tractului urinar (ITU)
‣ alte infecţii (tegumentare, genitale, cu alte localizări în
cursul unei bacteriemii la pacienţi cu status imun
deficitar sau în spital)
GENUL PROTEUS
IDENTIFICARE
• Identificare preliminara:
‣ fenomenul de invazie,
‣ fenomenul de demarcatie Dienes,
‣ colonii lactozo-negative
GENUL PROTEUS
Proteus
Lactoză/Zaharoză Negativ
Gaz Da
H2S Da
Mediul MIU Mobilitate Da
Indol Pozitiv (P. vulgaris)
Negativ (P. mirabilis)
Urează Pozitiv
Lizindecarboxilază Negativ
Fenilalanindeaminază Pozitiv
Utilizare citrat (mediul Simmons) Pozitiv
GENUL ESCHERICHIA - DIAGNOSTIC DE LABORATOR
Bacteriologie si Imunologie , Curs universitar, Anda Baicus , Ed. Universitara „ Carol Davila”
Specia principala : E.coli
Specia Diagnostic de laborator

E.coli Produs patologic: urina, materii fecale, sânge, puroi, exsudate
Urina recoltată înaintea începerii tratamentului antibiotic, din porțiunea mijlocie a jetului după
toaleta organelor genitale externe.
Materiile fecale recoltate cu sonda Nelaton sau din scaunul emis spontan-(produsul
suspensionat în ser fiziologic steril sau în mediul Carry Blair)
Frotiu: examen microscopic din urina centrifugată, sedimentul examinat ca preparat
proaspăt lamă–lamelă (evidențiază mobilitatea, elementele celulare, sărurile, leucocitele)
sau frotiu fixat și colorat Gram
Examenul macroscopic: nu dă informații asupra cantitații de germeni, turbiditatea poate fi
urmarea precipitării unor substanțe din urină (fosfați, urați)
Cultivare pe medii de cultură la cel mult 1h de la recoltare și după o prealabilă agitare
(UROCULTURA)
UROCULTURA - cantitativă: determinarea nr. germeni/ml urină
a. Metoda diluțiilor seriate în placi; b. Metoda ansei calibrate; c. Test Uricult
a. diluții zecimale în ser fiziologic:1/10; 1/100; 1/1000; din fiecare diluție se pun 0,1 ml
pe suprafața a 2 plăci Petri cu geloza sânge și Mac Conkey-incubate 37°C, 18-20h. A
doua zi se numără coloniile izolate dezvoltate pe mediile de cultură
calcularea nr. germeni/ml urină=nr. colonii izolate x diluția x 1/ volumul de urina
depus pe placa, se face media pentru fiecare tip de mediu; rezultatul=media cea mai
mare obținută pe mediul fără inhibant (geloza-sânge)
b. 2 anse
– volumul încarcat de o ansă=0,01ml urină, ϕintern al ansei=5mm
– volumul încarcat de a 2 a ansă=0,001ml, ϕ intern al ansei =2,5mm
aceeași placa servește pentru cele două diluții- pe o jumătate se descărcă ansa încarcată cu
0,01ml iar în cealaltă jumătate ansa cu 0,001ml
nr. germeni/ml urina=nr. colonii izolate x100 pentru ansa de 5mm sau cu 1000 pentru
ansa de 2,5mm; se face media celor doua diluții
INTERPRETARE:
- 0-10 000 bacterii/ml-contaminare în timpul recoltării
- 10-100 000 bacterii/ml infecție probabilă
- >100 000 bacterii/ml (10 5 UFC/ml) infecție sigură
c. Uricult-lama de sticlă cu mediu de cultură uscat (geloza sau geloză lactozată) care se
umezește cu urina pe fiecare față.
Interpretarea se face in funcție de intensitatea culturilor în raport cu etalonul
Identificare
- caractere morfotinctoriale—bacili Gram-
- caractere de cultură - bulion: crestere de tip S cu tulburarea uniformă a mediului, geloza
simplâ: colonii S rotunde, bombate, opace; medii diferențiale: colonii lactozo+: AABTL-colonii
galbene; Mac Conkey-colonii roșii
- caractere biochimice: medii MIU, TSI, Simmons- fermentează: glucoza, lactoza,
zaharoza cu producere de gaz; indol+, H2S-, urează-, citrat-, oxidazo-, tulpinile responsabile
de infecțiile intestinale sunt mobile si cele responsabile de infecțiile extraintestinale sunt
imobile având capsulă polizaharidică
Identificare serologica - serogrup/serotip cu seruri anti O, H, K
Tratament in funcție de severitatea bolii in cazul infecțiilor urinare, ampicilina, biseptol; in
cazul infecțiilor intraspitalicesti, cefalosporine, fluorochinolone, aminoglicozide,
carbapeneme
EHEC Cultivare pe Mac Conkey ce conține sorbitol; tulpinile EHEC nu fermentează sorbitolul dar
există și O157 care fermentează;
Cultivare pe Mac Conkey urmată de identificarea toxinei
Nu se recomandă tratament antibiotic ci numai suportiv deoarece ar putea prelungi portajul
intestinal și predispune la complicații (SHU)
GENUL SALMONELLA - DIAGNOSTIC DE LABORATOR

Specii principale : Salmonella enterica (serotipuri typhi,. paratyphi A, B, C) și Salmonella bongori
Specia Diagnostic de laborator

Produs patologic, materii fecale:
-la bolnavi- din scaunul emis spontan (nu se administrează purgativ-crește riscul
perforației intestinale)
-la purtători- după administrare de purgativ salin (MgSO4) - din al doilea scaun
dacă însamanțarea nu se face în max 2 h se folosește mediul de transport Cary-
Blair
Îmbogațirea obligatorie- concomitent 2 medii: cu selenit acid de sodiu și tetrathionat
Însamantarea pe medii selective- înalt: Wilson- Blair; moderat: ADCL, SS,IM, slab:
Mac Conkey, EMB ( eosin methylene blue agar), Hektoen enteric agar*, mediul
cromogen SM2**
Identificarea: repicarea coloniilor lactozo- de pe mediile selective pe mediile multitest
TSI, MIU, Simmons
- caractere morfologice: bacili Gram-, cu cili peritrihi, necapsulați, nesporulați
- caractere de cultură: se dezvoltă bine pe medii simple- în 6h în mediile lichide și 24h
pe medii solide, creștere de tip S
- medii de îmbogațire – selenit acid de sodiu: Muller- Kauffmann
- geloză-sânge- nu produc hemoliza
- medii selective lactozate ADCL, AABTL: colonii S lactozo-, în culoarea mediului
Salmonella -Istrati–Meitert IM, la 48 h colonii cu margini semitransparente, bombate și centrul negru
-geloza Wilson – Blair, la 48h colonii negre opace cu suprafața rugoasă, margini
neregulate cu halou și luciu metalic
- caractere biochimice: fermentează glucoza+gaz; H2S+; indol-; lactoza-; zaharoza-;
oxidaza-
- identificare serologică: aglutinare pe lama-seruri de grup și tip (anti O, H, Vi)
Tratament
-în cazul afectării sistemice: fluorochinolone (ciprofloxacin); aminoglicozide; tetraciclina;
cloramfenicol; biseptol
-în cazul gastroenteritelor, nu se administrează antibiotic deoarece crește perioada
portajului intestinal
Lizotipia
*Mediul Hektoen enteric agar – selectivo diferențial conține săruri biliare și inhibitori pentru creșterea bacteriilor Gram pozitive:
coloniile produse de bacterii care fermenteaza lactoza, zaharoza, salicinul, apar galben roz; coloniile produse de bacterii care
nu fermenteaza zaharurile apar verzi transparente, cele care produc H2S ( Salmonella) formeaza precipitate negre pe colonie
** Mediul cromogen SM2 detecteaza activitatea enzimatica a esterazei, coloniile de Salmonella apar roz pal pana la mov,
mediul conține inhibitori pentru bacterii Gram pozitive și fungi și asigură diferențierea altor bac
FEBRA TIFOIDA - DIAGNOSTIC DE LABORATOR
Tip Febră tifoidă/ Săptamâna de boală
determinare
S. Typhi
S1 S2 S3 S4 Convalescenți Purtători
cronici
hemocultura +++ ++ + +/- - -
coprocultura + ++ +++ + +/- +/-
urocultura - +/- + + +/- +/-
bilicultura nu se nu se nu se nu se +/- +/-
recomandă recomandă recomandă recomandă
medulocultura + + + +/- nu se recomandă nu se
recomandă
Dg. -la bolnavi/ convalescenți/ purtători cronici- evidențierea Ac anti O/H/Vi și stabilirea titrului
serologic -reacții de aglutinare în tub (titrul anticorpilor se urmărește în dinamică) - grunji de aglutinare
mici și stabili (aglutinare O/Vi); mari și instabili (aglutinare H)
Ac anti O apar primii în cursul bolii- titrul semnificativ>1/160
Ac anti H apar în cursul bolii- titrul semnificativ >1/160
Ac anti O și H se determină prin analiza serică calitativa (ASC)
Ac anti Vi apar târziu la sfârșitul bolii persistând luni/ani- titrul semnificativ>1/40 folosit la
diagnosticul retrospectiv al stării de purtător
ASC +/- ++ +++ +++ +++ nu se
recomandă
Vi nu se nu se nu se nu se +++ +
recomandă recomandă recomandă recomandă
GENUL SHIGELLA - DIAGNOSTIC DE LABORATOR

4 specii importante enteroinvazive si care se multiplică in enterocit: S. dysenteriae (10 serotipuri,
serotipul 1, bacilul Shiga), S. flexneri (6 serotipuri + subtipuri), S. boydii (15 serotipuri), S. sonnei
Specii Diagnostic de laborator

Shigella Recoltare: înaintea începerii tratamentului antibiotic
-din scaunul emis spontan (dizenteria acută)
-sonda Nelaton nr. 16-18 din colonul sigmoid pe o distanță de 15-20 cm la adult și 10-
15cm la copil/ rectosigmoidoscopie (dizenteria atipică/bolnavi/purtători cronici)
Coprocitograma-evidențierea >75%PMN pe frotiu - diagnostic infecție cu
enterobacterii invazive
Cultivare medii selectivo diferențiale: IM, SS, ADCL, Mac Conkey, AABTL, CLED
Identificare
- frotiu din cultură: bacili Gram-
-caractere de cultură: creștere S, colonii Ф 1-2mm lactozo-
-caractere biochimice: glucoza+ fără gaz; lactoza-; zaharoză-; H2S-; urează-; citrat-;
indol variabil; oxidază-; imobil
-identificare serologică de grup si tip: aglutinare seruri polivalente/monovalente (A,
B, C, D)
Tratament: ciprofloxacin, azitromicin, trimetoprim, sulfametoxazol
GENULYERSINIA - DIAGNOSTIC DE LABORATOR
Specii principale:Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica și Yersinia pseudotuberculosis

Y. Produs patologic: puroi din bubon, sânge, spută, fragmente de organ
pestis Morfologie: bacil Gram-, capsulați, cu capete rotunjite, colorați bipolar (frotiu din
produs patologic colorat Wright-Giemsa, Wayson), nesporulat, imobili la 37°C
Cultivare: se dezvoltă pe medii uzuale: bulion, geloză nutritivă, medii triptozate cu
sânge (Y. pestis), medii lactozate (ADCL, Mac Conkey)
Identificare:
frotiu; bacil Gram-, imobil, scurt, gros, colorație bipolară
-pe medii solide – colonii mici translucide cu margini regulate, prin incubare prelungită
crește diametrul coloniei și devin opace
Y pestis–colonii M cu consistență mucoasă datorită materialului de înveliș.
-geloză-sange - colonii nehemolitice
-ADCL, Mac Conkey colonii S, lactozo -
-medii lichide- tulbură uniform mediul cu depozit la fundul eprubetei
-caractere biochimice: TSI, MIU, Simmons: glucoza+, fără gaz; lactozo -, zaharoza+,
urează -, imobil, oxidaza -
Identificare serologică: aglutinare cu ser specific anticapsular
- coagulaza +
Tratament: streptomicina, doxiciclină
Diagnostic de urgență: se incepe tratamentul inaintea confirmarii bacteriologice,
masuri de protectie specială
Y.enterocolitica - mobile la 22 -30°C datorită cililor polari și peritrihi, imobile la 37°C
- se multiplica la temperaturi de refrigerare
- mediu cefsulodin-irgasin-novobiocin (CIN) – colonii cu centru roșu și margini
transparente, incubare 48 h, 25°C
Y. pseudotuberculosis Produs patologic: materii fecale, sange

-mobile la 22 -30°C datorită cililor polari și peritrihi, imobile la 37°C
- urează +, oxidază –
Tratament: cefalosporine, aminoglicozide, cloramfenicol, tetracicline
GENUL KLEBSIELLA - DIAGNOSTIC DE LABORATOR

Specii principale: K. pneumoniae, K. oxytoca, K. ozenae, K. rhinoscleromatis

Klebsiella Produs patologic: sputa, exsudat nazal, urina, secreție de la nivelul leziunii
granulomatoase
Cultivare medii lactozate, ADCL, AABTL, Mac Conkey
Identificare
- cocobacili Gram –
- colonii mucoide M
-biochimică: TSI, MIU, Simmons: glucoza+, lactoza+, imobili, oxidaza -, citrat+, indol -,
exceptie K. oxytoca: indol +
-serologică: reacția de umflare a capsule (80 serotipuri)
-inoculare la șoarece- septicemie (amprenta ficat/splina, colorate albastru de metilen,
bacili înconjurați de halou luminos care evidențiază prezența capsulei)
Tratament: multe specii sunt producatoare de β lactamaze cu spectru extins (ESBL)
- se utilizeaza carbapeneme si fluoroquinolone
GENUL PROTEUS - DIAGNOSTIC DE LABORATOR
Speciile principale: P. mirabilis, P. vulgaris, P. penneri

Produs patologic : urina, puroi, exsudate purulente, materii fecale, lichid de vărsătură,
aliment suspectat
Cultivare: ADCL, Mc Conkey, bulion, geloza 2%, IM
Proteus Caractere de cultura
-dezvoltare rapidă pe medii peptonate lichide cu degajare de miros caracteristic de
putrefacție, tulbură uniform bulionul
- pe mediile gelozate 2% fără inhibitori – apare fenomenul de invazie sau cațărare (de la
locul însamanțării cultura se extinde pe toată suprafața plăcii/ tubului sub forma de valuri
succesive); dacă pe placa se însamânțează în locuri diferite 2 tulpini de Proteus care
migrează, la locul de întâlnire apare o linie de demarcație, fenomenul Dienes
- pe mediile slab și moderat selective (ADCL, Mac Conkey) - colonii izolate lactozo-, S
- pe IM , ADCL coloniile pot avea uneori centrul negru - aspect de ochi de pisica
-caractere biochimice: MIU/TSI/ Simmons: fermentează glucoza+ gaz; lactoza-; H2S+;
ureaza+, indol- (P. mirabilis), indol + (P. vulgaris); oxidaza - (caracterele biochimice
subdivizează genul în 4)
Tratament - se folosesc asocieri cotrimoxazol, gentamicina, kanamicina
GENURILE ENTEROBACTER, CITROBACTER, SERRATIA,

MORGANELLA- DIAGNOSTIC DE LABORATOR

Enterobacter Produs patologic: puroi, sputa, urina
E. aerogenes Identificare
- biochimică: glucoza+, lactoza+, H2S-, mobil, citrat +
E. cloacae
C. aerogenes – decarboxileaza lizina nu arginina
E. cloacae - decarboxileaza arginina nu lizina
Tratament : carbapeneme
Speciile sunt rezistente la cefalosporinele de prima generatie si dezvolta rapid rezistenta
la a doua si a treia generatie .
Citrobacter Produs patologic: sputa, urina
Cultivare medii lactozate, ADCL, AABTL, Mac Conkey
Identificare
-biochimica: glucoza+, lactoza- dar poate fermenta tardiv lactoza, mobil, citrat pozitiv,
hidrolizeaza lent ureea
C. freundii: H2S+, poate fi confundat cu Salmonella datorita reactivitatii
incrucisate cu antigenul O
Tratament: carbapeneme, quinolone, aminoglicozide
C. freundii este producatoare de β lactamaze mediate cromozomial AmpC
Serratia Identificare
-biochimica: colonii pigmentate roz/rosu, lactozo-, mobile, H2S-,citrat +
marcescens
Tratament: carbapeneme, amikacin, piperacilin-tazobactam
Rezistenta la colistin
Morganella identificare
-biochimica: indol +, mobila, hidrolizeaza ureea
morganii
Tratament: carbapeneme
Fig.11.1a Frotiu din cultură pură colorat Gram, bacili Gram negativi, cultură pură Klebsiella
pneumoniae, colonii de tip M pe: 1b geloză simplă; colonii lactozo pozitive pe: 1c AABTL, 1d
MacConkey, 2a cultură pură de E. coli, colonii lactozo pozitive pe MacConkey, 2b. colonii lactozo
pozitive si lactozo negative pe MacConkey
1a 1b
1c 1d
2a 2b
Fig.11.3a Proteus, fenomenul de invazivitate pe geloză sange, 3b Proteus, fenomenul de demarcație,
Dienes, pe geloză sange, 3c cultură pură, colonii lactozo negative pe AABTL, 3d cultură pură, colonii
lactozo pozitive pe AABTL, 4 Salmonella, cultură pură colonii tip S, lactozo negative cu precipitate
negre datorita producerii de H2S, pe AABTL 5 colonii de Salmonella si colonii galbene lactozo pozitive
pe mediul Hektoen enteric agar
3a 3b
3c 3d
4 5
Fig. 11. 6. Salmonella pe mediul cromogen SM2** , 7.Colonii de Salmonella pe geloza sange, 8
Shigella, cultură pură pe CLED, 9 Shigella, cultură pură pe geloza sange, 10 Yersinia, cultură pură,
colonii lactozo negative pe AABTL, 11. Yersinia, colonii lactozo negative pe MacConkey
6 7
8 9
10 11
Fig. 11.12. Yersinia pe mediul cromogen YER, 13. Serratia marcescens pe geloza sange, 14. Serratia
marcescens pe AABTL dupa 24h de incubare la 370C, 15. Serratia marcescens pe AABTL dupa 48h
de incubare la 370C, 16. antibiograma difuzimetrica , Serratia marcescens, 17. antibiograma
difuzimetrica, tulpina producatoare de ESBL
12 13
14 15
16 17
Fig.11.8. Teste biochimice: a) TSI; 1a) glucoza +, lactoza -, H2S+, 2a) glucoza +, lactoza +, H2S -, b)
mediul Simmons (testează utilizarea citratului ca unica sursă de carbon), 1b) negativ, 2b) pozitiv, c)
mobilitate, indol, ornitindecarboxilaza, 1c) imobil, indol -, ornitindecarboxilaza -, 2c) mobil, indol +,
ornitindecarboxilaza+, d) MIU; 1d) imobil, indol +, ureaza +, e) API test
1a 2a 1b 2b 1c 2c 1d
Interpretare teste:
TSI (triple sugars iron): glucoză, lactoză, roșu fenol, citrat feric)
- glucoza+, lactoza+: culoarea roșie virează spre galben; H2S+: culoare neagră în porțiunea dreaptă
a tubului; producere de gaz: mediul este deplasat în sus sau apar fragmentări ale mediului
Producere de hidrogen sulfurat: evidentiaza descompunerea aminoacizilor cu sulf sub actiunea
cistein desulfhidrazei
Mediul Simmons - testează utilizarea citratului ca unica sursă de carbon
MIU (mobilitate, indol, urează)
- imobil, creșterea sub forma unui con cu varful în jos pe traiectul de însamanțare
- mobil, creștere în toată masa mediului, aspect difuz
- indol+, hârtia de filtru umezită cu reactiv Kovac devine roșie
- ornitindecarboxilaza +, culoarea mediului devine mov
- ureaza+ , culoarea mediului se intensifica
Testul idol: triptofanaza prezenta la unele bacterii (E.coli) scindeaza triptofanul in indol, acid piruvic si
amoniac
Testul ureazei: ureaza scindeaza ureea din mediu in amoniac si CO2
Evidentierea L si D fenilalanindezaminazei: enzime care scindeaza L si D alanina in acid fenil piruvic
care in prezenta clorurii ferice da o culoare verde
Identificare enterobacterii – Sistem API 20E/NE
*Sistemul API 20E / NE de identificarea rapidă, combină unele teste convenționale și permite
identificarea unui număr limitat de bacterii Gram-negative, enterobacteriaceae sau non-
enterobacteriaceae. Sistemul de testare contine 20 de tuburi mici de reacție, care includ substraturi
deshidratate pentru detectare: ONPG: beta-galactozidaza, ADH: Arginin DiHidrolaza, LDC: LizineDeCarboxilaza,
ODC: Ornitine DeCarboxilaza, CIT: utilizare Citrat, H2S: producere de Hidrogen sulfurat,URE: Ureaza, TDA:
Triptofan DeAminaza IND: producere Indol, VP: producere acetoina (Voges Proskauer), GEL: Gelatinaza, GLU:
fermentare / oxidare (Glucoza), MAN: fermentare / oxidare (Manitol), INO: fermentare / oxidare (Inozitol), SOR:
fermentare / oxidare (Sorbitol), RHA: fermentare / oxidare (Ramnoza), SAC: fermentare / oxidare
(Saccharose/Zaharoza) MEL: fermentare / oxidare (Melibiose), AMY: fermentare / oxidare (Amygdalin), ARA:
fermentare / oxidare (Arabinoza).
Interpretare : ONPG: pozitiv galben , negativ clar; LDC: pozitiv galben, negativ rosu; CIT: pozitiv
albastru; URE: pozitiv rosu, GEL: lichefierea gelatinei (pozitiv negru), fermentarea glucozei (GLU),
manitol (MAN), inozitol (INO), sorbitol (SOR) și ramnozei (RHA) (pozitiv galben, negativ albastru).
FAMILIA ENTEROBACTERIACEAE. DIFERENTIEREA BIOCHIMICĂ A SPECIILOR DE INTERES
MEDICAL
Enterobacter
Edwardsiella
Providencia
Escherichia
Morganella
Salmonella
Citrobacter
Klebsiella
Ewingella
Yersinia
Shigella
Serratia
Proteus
Testul/ substratul
Glucoza-gaz TSI + - + + + + + d + D d - -
Zaharoza d D - - d + + + D d - D -
Lactoza + D - D d D d D - - - +
Citrat (Simmons) - - - + + D + + d + - - +
H2S/TSI - - + + D - - - + - - - -
Indol + d + - D D - - D + + D -
Lizin decarboxilaza d - + + - D D + - - - -
Ornitin
d D + + D - D + D - + D -
decarboxilaza
Fenilalanina
- - - - - - - - + + + - -
deaminaza
Ureaza - - - - D D D - + D + D -
Mobilitate -
d - + + + - + + + + + +
37OC
+ reacție pozitivă, - reacție negativă,d: reacții pozitive variind intr-o proporție de 10-90% la speciile din
genul respectiv, D : reacții diferite date de speciile din cadrul genurilor
GENUL PSEUDOMONAS - DIAGNOSTIC DE LABORATOR
Specii principale: P. aeruginosa, P. maltophilia redenumita Stenotrophomonas maltophilia

P. Produse patologice: sânge, lichide din seroase, LCR, urină, bilă,spută
aeruginosa Izolare-, bulion /apă peptonată 1%, geloză înclinată 2%, geloză sânge, IM,
MacConkey
Identificare:
Caractere de cultură
-crește ușor pe medii simple în aerobioză, bulion, apă peptonată1%, geloză, pH 7,2
- geloză simplă: colonii rotunde, convexe fluorescente, deseori cu reflexe metalice
(gălben verzui), miros aromatic (acetaminofenonă)
-uneori disociază-colonii mucoase, gelatinoase nepigmentate, izolate din infecțiile
cronice ale tractului respirator, colonii R/colonii pitice apar în aceeași cultură, dand
falsa impresie că sunt specii diferite
- multe tulpini prezintă luciu metalic argintiu și pete iridescente (bacterii autolizate),
dedesubtul cărora se văd cristale în mediu (săruri de acizi grași, eliberați prin
autoliză)
-bulion/apa peptonată: tulburare cu formare de peliculă la suprafața mediului, care
după câteva zile se fragmentează, cade la fundul tubului, mediul devine filant și
vâscos, concomitent mediul se pigmentează în albastru verde și apare mirosul
aromatic de flori de tei
-mediul Istrati-Meitert: colonii mici albastre, aderente de mediu
-geloză-sânge: colonii gri, lucioase (luciu metalic), hemoliza β, intensificată la
temperatura camerei (tulpinile izolate din mediu extern sunt nehemolitice/slab
hemolitice)
-mediu Loeffler: după 48h la 37°C, suprafața mediului devine anfractuoasă datorită
prezenței enzimelor proteolitice, pigmentându-se rapid în verde-albastrui
-caractere biochimice: oxidaza+, catalaza+, oxidează glucoza, nu maltoza,
zaharoza, lactoza, ureaza-, H2S-, se dezvoltă la 42°C și nu la 4°C, formează nitriții
din nitrați, indol -, roșu metil -
Tratament: imipenem, ticarcilina
Imunoprofilaxia: vaccin piocianic polivalent (preparat din 11 serotipuri diferite, cel
mai frecvent izolate)
Fig.14.1. a) Frotiu din cultură pură P. aeruginosa, bacili Gram negativi, b) cultură pură P. aeruginosa în
bulion (peliculă cu pigment verde albăstrui) și pe geloza simplă înclinată, c) cultură pură de P. aeruginosa
pe geloză sânge, luciu metalic, d) cultură pură de P. aeruginosa pe CLED, luciu metalic, e) cultură pură
pe geloză simplă: pigment albăstrui, piocianina, f) cultură pură pe geloză simplă: pigment verde,
pioverdina, g) cultură pură pe geloză simplă: pigment galben, colonii mucoase, h) antibiograma
difuzimetrica ,
a) b)
c) d)
e) f)
g) h)
GENUL ACINETOBACTER - DIAGNOSTIC DE LABORATOR
Cocobacili gram negativi, oportuniști, strict aerobi, ubicuitari, prezenți în natură și în mediu spitalicesc, în
zone umede, pot contamina echipamentele de ventilație. La un număr redus de persoane aceste bacterii
fac parte din flora orofaringiana normală. Există 2 tipuri importante de bacterii din acest gen, cele care
oxidează glucoza; A. baumannii și cele care nu o oxidează: A. lwoffii și A. haemolyticus. Pacienții cu risc
sunt cei cu tratament antibiotic de lungă durată și cei asistați ventilator. Tratamentul este dificil deoarece A.
baumannii cel care produce cele mai frecvente infecții si este rezistent la carbapeneme.
Fig.14. 2. Cultură pură Acinetobacter pe mediul a) Mac Conkey, b) AABTL, c) geloza sange , d) geloza
chocolat, e) E test Acinetobacter – CO: colistin
a) b)
c) d)
e)
GENUL VIBRIO - DIAGNOSTIC DE LABORATOR
Specii principale : V. cholerae, V. parahaemolyticus, V. vulnificus.

V. cholerae este agentul etiologic al holerei, V. parahaemolyticus produce diaree asociată cu consumul
de fructe de mare insuficient preparate sau nepreparate termic, V. vulnificus produce celulită sau
sepsis, atunci cand pătrunde în organism printr-o leziune tegumentară.

Vibrio Recoltare – materii fecale – mediu de transport Cary-Blair
Însamanțarea
cholerae
- îmbogațire primară: apa peptonată alcalină 1% cu 0,5 % NaCl, pH 9,2
- direct pe medii selectivo diferentiale slab inhibante-BSA (sarururi biliare, agar),
TGA (thaurocholat, gelatina agar), TGBS (tiosulfat, citrat, saruri biliare,
zaharoza), TTGA (thaurocholat, telurit de K, gelatina, agar)
- îmbogațire secundară, in cazul inoculului presupus sărac; se insamanțeaza din
vălul de la suprafața primului tub în alt tub cu apă peptonată
Identificare:
-mediile lichide- creșterea bacteriana cu tulburarea uniformă a mediului, cu
intensitate redusă, după 6-8h de incubare la 37° C și intensă, după 18-24h
- geloză- la10-12h, colonii rotunde cu suprafața ușor ridicată, apoi convexe și
suprafața fin granulară cu margini regulate
-în lumina oblică:
- colonii translucide și lipsite de iridescență (după 6-8h)
- colonii opace (după 18-24h)
- lichefiază gelatina, după 48h, apar șanțuri în jurul coloniilor
- lichefiază tardiv mediul cu ser de bou (7 zile - 37°C)
Identificare: dublă citire, (BSA, TGA) după 12h, colonii transparente; dupa
18h, colonii cu halou opac
-BSA – testul oxidazei+ (benzi impregnate cu sol 1% clorhidrat de tetrametil
parafenilen diamina)
- aglutinare pe lamă cu ser bivalent antiholeric de grup O1
-caractere biochimice: fermentează glucoza fără gaz (m. Leifson),
fermentează/nu zaharoza, nu fermentează lactoza, nu produce H2S
Tratament: reechilibrare hidroelectrolitică, cloramfenicol, doxiciclina, biseptol,
pentru sterilizarea mai rapidă a intestinului (0,8 zile în medie ) față de 1,8 zile în
cazul neadministrării antibioticului
V. TGBS (tiosulfat, citrat, saruri biliare, zaharoza): colonii de culoare verde
Identificare biochimică: lizină-, indol +, crește la 42 0C
parahaemolyticus
Tratament: reechilibrare hidroelectrolitică, doxiciclină, cefalosporine de
generația a treia
Prevenție- pastrarea standardului de igienă alimentară
V. vulnificus TGBS : colonii de culoare verde 85%, galbenă 15%
Identificare biochimică: lactoză-, lizină-, bacterie halofilă, nu creste la 420C
Tratament: doxiciclina, ceftazidim
GENUL AEROMONAS - DIAGNOSTIC DE LABORATOR
Specii principale :A. hydrophila, A. caviae, A. veronii biovar sobria.

Aeromonas spp. Cresc usor pe medii simple si selectivo diferențiale
-hemoliză variabilă pe geloză sange, multe specii cu hemoliză β
-oxidazo+
-rezistent la agentul vibriostatic O/129
-nu cresc in prezenta concentrației de 6,5% NaCl
Tratament: reechilibrarea hidroelectrolitică la pacienții cu diaree acută și asociată
cu tratament antibiotic la cei cu boala cronică.
Multe specii de Aeromonas produc β lactamaze inductibile cromozomial, din
clase diferite: C (cefalosporinaze), D (penicilinaze), B (metalo-beta-lactamaze -
MBL). Cele mai multe specii sunt rezistente la penicilină, ampicilină, carbenicilină,
ticarcilină, multe sunt sensibile la trimetoprim sulfametoxazol, aminoglicozide,
carbapeneme, cloramfenicol, tetracicline.
Fig. 12.1 a) Frotiu din cultură pură, V. cholerae, b) cultură pură V. cholerae pe geloză, c) cultură pură
V. cholerae pe BSA, d) Aeromonas pe geloză-sânge
a) b)
c) d)
GENUL BORDETELLA
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
Speciile principale: Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis, Bordetella bronchiseptica, Bordetella
holmesii

B. Produs patologic: exsudat nazofaringian (se folosesc tampoane cu fibră din
pertussis alginat de Ca+2 sau Dacron, cele uzuale conțin acizi grași toxici pentru bacterie);
sputa ( recoltare prin metoda placilor tusite)
Izolare: agar Regan-Lowe (suplimentat cu glicerol, peptone, sânge de cal,
cefalexin: iniha flora normala din faringe), incubare la 350C in camera umedă, 7-
12 zile
-mediul Bordet-Gengou (infuzie glicerinata de cartof cu adaus de 30% sange)
Identificare:
Caractere de cultură
• B. pertussis supravietuieste in exsudatele tractului respirator 1-2 ore la
temperatura camerei.
• pe mediul Bordet-Gengou, colonii de tip S, mici, lucioase cu aspect
perlat ce apar in 2-5 zile
• pe mediul Regan-Lowe, colonii cu aspect de picatura de mercur,
inconjurate de hemoliza alfa
Caractere biochimice:
Alcalinizare lapte turnesolat in 12 zile la B. pertussis, produce ureaza, nu
utilizeaza citratul ca sursa de C
Teste suplimentare
PCR, Imunofluorescenta directa, reactie de aglutinare
Dg. serologic, ELISA-determinare IgA, IgM, IgG anti toxina pertussis,
hemaglutinine filamentoase, fimbrii, pertactinei
Tratament suportiv, macrolidele reduc perioada de infectivitate, azytromicina 3-5
zile sau claritromicina/eritromicina 7 zile
Profilaxie – există 2 tipuri de vaccinuri unul pentru copii si altul pentru adulți care
conțin toxina pertussis inactivată, hemaglutinine filamentoase, pertactina,
anatoxină tetanică și anatoxină difterică. Administrarea la copii în vârsta de
2,4,6,12 luni și rapel între 4-6 ani.
Pentru adulți recomandarea vizează rapel la 11 sau 12 ani și apoi între 19 și 65
ani.
Vaccinul acelular pertussis (Pa) este administrat in timpul imunizarii primare ca
DTPa/IPV/Hib la varsta de 2, 4, 6, 12 luni si rapel DTPa la 4 ani
GENUL BRUCELLA
Speciile principale: Brucella abortus, Brucella melitensis, Brucella suis, Brucella canis
Specii Diagnostic de laborator si tratament
Produs patologic: sânge, biopsie măduvă, țesuturi infectate
Transportul in condiții de maximă siguranță
Microscopie – cocobacili Gram negativi dificil de evidențiat în produs
patologic
Izolare: hemocultura pe mediul difazic, mediu gelozat glucozat 1% si
mediu lichid glucozat 1% si citrat 2%, tehnica Castaneda (2 săptămâni),
geloza sânge, mediul MacConkey, incubare 3 sau mai multe zile in
prezența 5% CO2 (Brucella abortus)
Brucella Identificare
abortus -pe mediul difazic gelozat, colonii S, 3-4 mm, apar dupa 4-5 zile dar
cresterea poate necesita mai multe zile (pana la 45)
-producere de H2S: B. melitensis produce H2S in primele 24 h, B. abortus
produce H2S timp de 48h, B. suis produce H2S continuu timp de 96 h
-actiunea bacteriostatica a unor coloranti: fuxina si tiamina asupra cresterii
bacteriene; B. melitensis creste pe medii suplimentate cu tionina sau cu
fuxina, B. abortus creste pe medii cu fuxina, B. suis creste pe medii cu
Brucella tionina
melitensis -oxidaza +, urează +, catalaza+
- moleculara: secvențiere 16S ARNr
Diagnostic serologic
Serologie:
- reacție de aglutinare in tub, dilutii binare de ser de cercetat puse in
contact cu o concentratie determinata de antigen Wright (suspense de
Brucella Brucelle in solutie cloruro sodica izotona); titru ≥ 1:160 semnificativ pentru
suis infectie
-reacție de aglutinare pe lama, Huddelson: antigen standard de B. abortus
(Huddelson; suspensie de Brucella in solutie salina 12%, fenolata 5%,
colorata cu verde briliant si cristal violet) sunt puse in contact in contact cu
ser de testat
Tratament cu doxiciclină și rifampicina pentru adulți și cu trimetoprim
sulfometoxazol pentru gravide și copii < 8 ani
Brucella canis Vaccinarea animalelor cu vaccin viu atenuat B. abortus și B. melitensis; nu
există vaccin împotriva B. suis sau B. canis
Vaccinul nu poate fi folosit la om deoarece reproduce boala
Fig. 14.4.Frotiu colorat Gram din cultură pură de Brucella

GENUL CAMPYLOBACTER
Speciile principale C. jejuni, C. fetus, C. coli.
Specia Diagnostic bacteriologic

Campylobacter Examinare preparate proaspete - microscopia cu contrast de faza sau în
câmp întunecat, cocobacili subtiri, Gram negativi, spiralati, (aspect de aripi
de pescarus), izolati si grupati in gramezi, intra- si extra-leucocitari
Cultivarea materiilor fecale pe geloză sânge cu antibiotice (mediu Skirrow
conține vancomicina, trimetopirim, polimixina, amfotericina B), geloza
chocolat, medii de imbogatire: bulion Oxoid, bulion thyoglicolic cu antibiotic.
Incubarea la 42 0C în atmosfera conținând 5%O2 și 10 %CO2.
Identificarea :
-geloza chocolat: colonii gri-castaniu, plate, rotunde, convexe, margini
regulate sau umede, cu tendinta de intindere a coloniei de-a lungul striului de
insamantare, coloniile imbatranite au culoarea somonului si miros
caracteristic
-geloza sange: culoare rosu intens a coloniilor, datorita producerii de
citocromoxidaza
- în funcție de caracteristicile fenotipice ale speciilor se diferentiaza speciile:
Caracteristici C. jejuni C.coli C. fetus

Catalaza + + +
Oxidaza + + +
Ureaza - - -
Reducerea nitraților + + +
Hidrolizat de hipurat + - -
Multiplicare la 370 C ; 42 0C 370 C; 420C 25 0 C;370C
Sensibil la acțiunea sensibil sensibil variabil
acidului nalidixic
Tratament
Reechilibrare hidro electrolitică asociată cu tratament antibiotic în special la
pacienții cu infecții severe. Eritromicina asociată cu tetraciclinele sau
fluorochinolonele sunt antibioticele de electie în tratamentul enteritelor.
Infecțiile sistemice sunt tratate cu aminoglicozide sau imipenem.
Crestere bacteriana pe geloza chocolat: coloniile imbatranite au culoarea somonului si miros

caracteristic
GENUL HELICOBACTER
SpeciI principale: H. pylori, H.cinaedi, H. fennelliae
Specii Diagnostic bacteriologic

Helicobacter Teste invazive Examinare histologica a produsului de biopsie gastrică, colorație
hematoxilin-eozină, Gram, impregnare argentică.
O portiune din biopsia gastrica poate fi introdusa rapid in bulion cu uree; ureaza
produsa de bacterie hidrolizeaza rapid ureea
Teste neinvazive
Testul ureazei după consumul de soluție de uree marcata cu izotopi neradioactivi 13C
cu producere de 13CO2 si NH3, determinarea 13CO2 in aerul expirat
Serologia: ELISA determinare titru IgG in seruri de faza acuta si convalescenta (3 – 6
luni)
Determinarea antigenelor de H. pylori in scaun prin ELISA
Prezenta H. pylory in cavitatea bucala, in saliva si placa dentara, evidentiata prin
PCR si serologie
Cultivarea se face in atmosferă microaerofilă. pe mediu imbogatit cu sânge, hemină si
necesită colectarea invazivă multiplă a specimenelor (biopsia mucoasei gastrice)
Identificarea se face in funcție de caracteristicile fenotipice ale speciilor:
Caracteristici H. pylori H.cinaedi H. fennelliae
Catalaza + + +
Oxidaza + + +
Ureaza + - -
Reducerea nitratilor - + -
Hidrolizat de hipurat - - -
Multiplicare la 370 C + + +
Sensibil la acțiunea
- acidului nalidixic rezistent sensibil sensibil
- cefalotin sensibil intermediar sensibil

LP1 Diagnosticul de Laborator: Al Infecțiilor Produse de Stafilococi

Încărcat de

Informații document

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

LP1 Diagnosticul de Laborator: Al Infecțiilor Produse de Stafilococi

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

LP1

▸ S. epidermidis: patogen primar în infecții asociate cu protezele articulare, dispozitivele ortopedice,

▸ S. saprophyticus: infecții de tract urinar la femeile tinere

Sindromul pielii opărite stafilococice (Staphylococcal scalded skin syndrome - SSSS)

RECOLTAREA ȘI TRANSPORTUL PROBELOR PATOLOGICE

▸ Prezența celulelor epiteliale

▸ Prezența cocilor gram pozitivi dispuși în

▸ Prezenta florei de asociație (depinde de

CULTIVAREA PE MEDII DE CULTURA

Geloză Agar chocolat

Geloză Agar sânge

▸Mediu cromogen pentru

▸Poate fi utilizat direct cu

▸ Diagnosticul de gen: coci gram pozitivi, catalază pozitivi

▸ diametrul 0,5-1,5 microni

▸ dispuşi în lanţuri scurte, perechi, izolaţi sau în grămezi neregulate

Albastru de metilen Coloratia Gram

▸ Produc colonii de tip

▸ hemoliză de tip cald

Mediu geloză sânge cu beta-hemoliză

Scop: diferențiere Staphylococcus spp./Streptococcus spp.

▸ Diferențiază S. aureus de alte

▸ La adaugarea de HCl, apare o

S. aureus S. epidermidis S. saprophy0cus

▸ Testele API- identifica aprox toate genurile bacteriene si

▸ Susceptibilitatea diverselor tulpini la acţiunea litică a bacteriofagilor =

▸ Receptorii pentru bacteriofagi existenți la microorganisme din aceeași

După caracterul hemolizei (geloză-sânge):

DIAGNOSTICUL DE GEN - TESTUL CATALAZEI

S. PYOGENES - BETA HEMOLITIC, GRUP A

1. RECOLTAREA ŞI TRANSPORTUL PRODUSULUI PATOLOGIC

3. CULTIVAREA PE MEDII DE CULTURĂ

• Sensibilitatea cunoscută la penicilină, deși există și tulpini

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR SEROLOGIC

STREPTOCOCII DE GRUP B, BETA/ALFA - HEMOLITICI

▸ Principiu: Streptococii de grup

STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE - NEGRUPABIL, ALFA-HEMOLITIC

1. Localizare: flora normala 50% / infecții CR

1. RECOLTAREA ŞI TRANSPORTUL PRODUSULUI PATOLOGIC

3. CULTIVAREA PE MEDII DE CULTURĂ

▸ Scop: colonii izolate/cultură pură

▸ coci gram-pozitivi, alungiţi,

▸c. Caractere biochimice:

▸ Mediu: inulină + indicator de pH.

Testul sensibilităţii la optochin

Testul bilolizei (Neufeld):

sensibilitatea la bacitracina hidroliza hipuratului

Sensibil Rezistent Positiv Negativ

Streptococcus Enterococcus Streptococcus Streptococcus

Streptococcus dezv. pe 6.5% NaCl

• Alte specii de Neisserii sunt saprofite, pot

• Aerobi, oxidază-pozitivi, catalază-

• Oxidează (nu fermentează)

• Cu capsulă polizaharidică (N.

NEISSERIA MENINGITIDIS - PATOLOGIE

EXAMENUL PRODUSULUI PATOLOGIC

EXAMENUL PRODUSULUI PATOLOGIC

IDENTIFICARE - CARACTERE DE CULTURĂ

Geloză - sânge Geloză chocolat

IDENTIFICARE - CARACTERE MORFOLOGICE

IDENTIFICARE - CARACTERE BIOCHIMICE

IDENTIFICARE - CARACTERE BIOCHIMICE

IDENTIFICARE - CARACTERE ANTIGENICE