SCHEMA

DIAGNOSTICULUI DE
LABORATOR N
INFECIILE
STAFILOCOCICE

Scurt caracterizare:

coci Gram pozitivi

aezai n grmezi sau ciorchine
imobili, nesporulai
catalazo pozitivi
aerobi-facultativ anaerobi

Clasificare

Exist peste 30 de specii de

stafilococi,3 fiind asociate mai
frecvent cu infeciile umane:
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus saprophyticus.

Clasificare
n funcie de prezena coagulazei:
Stafilococi coagulazo-pozitivi (SCP), n
cadrul crora intr:
Staphylococcus aureus, cu 4 biotipuri, i
Staphylococcus intermedius, cu 2 biotipuri.

Stafilococi coagulazo-negativi (SCN), n care

se ncadreaz:
Staphylococcus epidermidis, cu mai multe subspecii, cu
localizare diferit pe tegument sau n cavitile naturale,
ca de exemplu:
Staphylococcus strictosenso (propriu-zis);
Staphylococcus hominis,
Staphylococcus capitis,
Staphylococcus haemolyticus,
Staphylococcus scizuri, etc. Toate aceste subspecii au fost
izolate de pe tegumente umane, din zone diferite ale
corpului.

Alte specii de stafilococi SCN:

Staphylococcus saprophyticus i
Staphylococcus simulans
n ultimii ani, alte specii de stafilococi au fost implicai n
infeciile umane, mai ales S. lugdunensis, S. schleiferi si
S. caprae.

din punct de vedere al secventelor rRNA

:

S. aureus grup
S. auricularis grup
S. carnosus grup
S. epidermidis grup S. capitis, S. caprae, S.
epidermidis, S. saccharolyticus
S. haemolyticus grup S. devriesei, S. haemolyticus, S.
hominis
S. hyicus-intermedius grup S. chromogenes, S. felis,
S. delphini, S. hyicus, S. intermedius, S. lutrae, S.
microti, S. muscae, S. pseudintermedius, S. rostri, S.
schleiferi
S. lugdunensis grup
S. saprophyticus grup
S. sciuri grup
S. simulans grup
S. warneri grup

Infecii produse:
S. aureus:
Infecii ale pielii: foliculite, furuncule, carbuncule,
panariiu, infecii ale plgilor chirurgicale, etc.
Hidrosadenit
Infecii ale tractului respirator: faringite, sinuzite,
pneumonii, bronhopneumonii, etc.
Otit medie
Meningit
Artrit septic
Osteomielit
Endocardit
Bacteriemie i septicemie
Infecii ale tractului urinar
Toxiinfecii alimentare
Sindromul pielii oprite
Sindromul ocului toxic TSST 1

S. epidermidis: poate cauza

infecii ale cateterelor
intravenoase
S. saprophyticus: poate cauza
infecii ale tractului urinar

Diagnostic de laborator

1. Recoltarea produselor biologice

. Puroi, exudat nazal, secreie
nazo-faringian, sput, secreie
otic, materii fecale,
snge,urin, lichid de vrstur,
prob de aliment etc.

2. Examen microscopic
direct
coci Gram pozitivi
aezai n ciorchine sau
grmezi, imobili,
nesporulai
alte elemente din
produsul patologic

3. Izolare
Geloz-snge, mediul
Chapman, medii simple
18-24 ore, 37C

4. Identificare (dup obinerea culturii pure)

a. Proprieti morfo-tinctoriale
Coci Gram-pozitivi, aezai n grmezi/ciorchine, imobili,
nesporulai

b.

Proprieti de cultur

Pe medii lichide: tulbur uniform mediul

Pe medii solide: colonii de 1-3 mm diametru,
netede, opace, cremoase, cu margini bine
delimitate. Coloniile sunt pigmentate:
galben-aurii (staph. aureus)
albe (staph.epidermidis)
galben-citrine (staph. saprophyticus)
Staph. aureus produce de obicei hemoliz pe
geloz snge, Staph. epidermidis produce
hemoliza foarte rar
hemoliza este complet, cu un diametru mic
comparativ cu al coloniei, diferit de cea
produs de streptococii hemolitici).

c. Proprieti biochimice
Stafilococii sunt catalazo-pozitivi

Alte proprieti biochimice:

Descompunerea zaharurilor
(manitol, maltoz, sucroz)
Testul fosfatazei, care este pozitiv
la Staph. aureus i negativ la
Staph. epidermidis
Lichefierea gelatinei, etc.

Staph. aureus este manitolpozitiv

API 20 Staph reading table

All-positive
tests
All-negative
tests

d. Proprieti antigenice:
tipizarea cu ajutorul bacteriofagilor
specifici(lizotipie) se bazeaz pe
sensibilitatea sau rezistena unui gen sau a
unor specii fa de un set de bacteriofagi,
ncadrnd tipuri fagice, lizotipuri.
tehnica utilizat se bazeaz pe folosirea
spotului de bacteriofagie, n care, pe o
cultur de stafilococ (tehnica se aplic i
pentru alte bacterii), nsmnat n pnz
pe suprafaa unei plci Petri cu mediu de
cultur solid, se pune o pictur din
suspensia de bacteriofag (n fiecare ptrel
alt fag). Dac bacteria este sensibil, n
ptrelul cu fagul respectiv nu se dezvolt
cultura.

e. Caractere de patogenitate
Patogenitatea stafilococului poate fi evideniat prin
teste in vivo i in vitro
In vitro pot fi evideniate: coagulaza, fibrinolizina i
dezoxiribonucleaza.
Coagulaza este considerat proprietatea cea mai
util i mai constant de apreciere a patogenitii
unei tulpini de stafilococ.
coagulaz liber care se evideniaz adugnd 0,3
ml de plasm la 0,2 ml din cultur de stafilococ n
bulion, iar dup 4 ore la 370C (examinare din 30 n 30
de minute) se formeaz (la culturile cu coagulaz
pozitiv) un coagul de fibrin
coagulaza legat care se determin fcnd cu ansa o
suspensie din cultura de pe mediul solid ntr-o
pictur de plasm uman, pe o lam de sticl (se
evideniaz precipitate de fibrin n plasm, n timp
de aproximativ 15 secunde).
Interpretare : Staphylococcus aureus este coagulazo-

 identificarea rapid a S. aureus poate fi

facut cu ajutorul reactivilor comerciali de
aglutinare indirect. Reactivii conin
particule de latex nvelite cu fibrinogen i
IgG incluznd anticorpi specifici mpotriva
capsulei polizaharidice a S. aureus).
cnd reactivul este mixat pe un card cu
colonii de S. aureus reactivii cupleaz
coagulaza legat, respectiv proteina A din
peretele S. aureus, ceea ce are ca
expresie macroscopic aglutinarea
amestecului dintre reactiv i cultura de S.
aureus.
aglutinarea se poate produce i cu alte
specii care conin clumping factor sau

In vivo, testele de patogenitate in de proprietatea

stafilococului patogen de a produce exotoxine.

activitatea dermonecrotic, const n apariia necrozei

uscate, cu escar detaabil, dup 48-72 de ore de la
inocularea intradermic a filtratului de cultur la iepure;
exfolierea tegumentar produs de exotoxina exfoliativ
dintr-un filtrat de cultur inoculat subcutanat la oarecele
nou-nscut;
efectele enterotoxinei este evideniat prin testul Dolman,
inoculnd filtratul culturii, fiert 20 de minute,
intraperitoneal, la pisoi tineri. Dup 10-60 de minute,
animalul devine agitat, prezint sialoree, contracturi
musculare abdominale, vrsturi n jet i diaree. Dup
aproximativ o or, animalul revine la stare normal.
Enterotoxina poate fi evideniat i prin reacia de dubl
precipitare n gel de agar.

Metode rapide de diagnostic:

PCR

5. Antibiograma
obligatorie n infeciile stafilococice, testarea
se realizeaz la Penicilin, Oxacilin,
Gentamicin, Clindamicin, Eritromicin,
Trimethoprim-Sulfametoxazol, Vancomicin,
Ciprofloxacin, etc.

 Stafilococul auriu meticilino-rezistent (MRSA) este o bacterie

responsabil de infecii umane dificil de tratat. Mai este
numit Stafilococ auriu cu rezisten multipl la antibiotice i
Stafilococ auriu Oxacilino-rezistent.
MRSA este orice tulpin de S aureus care a dezvoltat printrun proces natural de selecie, rezistena la antibioticele betalactamice , care includ peniciline(Meticilina, Dicloxacilina,
Nafcilina, Oxacilina) i cefalosporine.
unele tulpini de de MRSA sunt sensibile la
cotrimoxazol/trimethoprimsulfamethoxazole),tetracycline(doxycyclinasiminocyclina)
siclyndamicina, dar antibioticul de elecie este considerat a
fi Vancomicina.
alte antibiotice mai noi utilizate sunt Linezolidul,
Teicoplanina, Daptomicina, dar iCeftaroline i Ceftabiparole
(cefalosporine de generaia a 5-a).
Unele tulpini de MRSA au dezvoltat rezisten chiar i fa de
Vancomicina i Teicoplanina (VISA - Vancomycin
intermediate-resistantStaphylococcus aureus
Linezolid,Quinupristin/Dalfopristin,Daptomycina,Ceftarolina