Diagnostic de

laborator
in neuroviroze
2 aspecte clinice
Meningite virale

Encefalite virale
Definitie de caz meningita virala
Febra 38.5 C asociata cu minim un simptom dintre:
Cefalee severa i persistenta;
Redoare de ceafa
Durere de ceafa asociata cu minim 2 din urmatoarele:
Fotofobie
Greata
Varsaturi
Faringita exudativa
Dureri abdominale

La sugari si copiii mici semnele principale sunt febra
38.5 C asociata cu iritabilitate si pulsarea fontanelei
1. SUSPICIUNEA CLINICA
ETIOLOGIE POSIBILA

SINDROM ETIOLOGIE
POSIBILA




MENINGITA
ASEPTICA
80%-90%
Enterovirusuri
Polio
Cocsackie A si B
E.C.H.O.

10 - 20%
alte virusuri:
VZV
V. URLIAN
HSV
CMV
V. PARAGRIPALE
V. Poliomielitice
Paralizie flasca
Distala
Asimetrica
Sensibilitate pastrata


Subgenul Serotip Boala asociata
Polio 1-3 Paralizii
Coxsackie A 1-24 Meningite, faringite,
exantem, herpangina
Coxsackie B 1-6 Miocardita,
pancreatite,
pericardite,boala
Bornholm
ECHO 1-33 Exanteme,
IACRS,
conjuctivite
Heparnavirus 72 Hepatita virala
VHA

Algoritm de diagnostic virusologic
ETIOLOGIE
POSIBILA
Produs
Patolog
IZOLARE Dg. DIRECT
=detectie
directa
Dg. INDIRECT
=serologie
80%-90%
Enterovirusuri
Polio
Cocsackie A si B
E.C.H.O.


MF
SNF
LCR
De electie
Culturi celulare
Animal de
laborator
NU DA
Produse patologice
Materiile fecale(MF)
Recoltare. Materiile fecale pot fi recoltate ca atare in cantitate de
4-8 grame sau corespunzator volumului extremitatii falangei
distale a indexului de adult. De asemenea, se pot recolta intr-o
solutie 1 M de Mg SO4 in suspensie 20% (stabilizeaza
infectivitatea enterovirusurilor)
Precizari. Este important de notat ca enterovirusurile se excreta
saptamani la rand , dar sansele de izolare scad. Se recomanda
recoltarea a 2 - 3 probe de la pacient la interval de 24-48 ore.
Stocare si transport. Produsele patologice sunt transportate si
stocate la 2-4 C.
Prelucrare. In vederea izolarii de virus suspensia de materii fecale
se prepara amestecand proba recoltata cu 15 ml de solutie Hanks
si bile de sticla sterile intr-un tub de centrifuga inchis. Se agita
puternic, se centrifugheaza , si se recolteaza supernatantul.
Acesta se clarifica dupa centrifugare la 1500g cu adaos de
gentamicina 100 ug/ml.
Produse patologice
Lichid cefalorahidian (LCR)
Recoltare. Se realizeaza prin punctie la nivelul L4-L5, cat mai
rapid posibil de la debutul simptomatologiei, inainte de inceperea
tratamentului antibiotic, respectind strict masurile de asepsie.
1 ml de LCR este suficient pentru investigatii virusologice.
Cantitatea recoltata nu trebuie sa depaseasca 5-6 ml in 3 tuburi
sterile. Se determina numarul de celule, proteine totale, glicorahia
si presiunea LCR. Sansa de izolare din acest produs creste cnd
participarea meningiana este evidenta. Acest lucru se traduce prin
pleiocitoza (cresterea numarului de celule limfo-monocitare in
LCR).
Stocarea. Se pastreaza la 2-4 C, fara adaos de mediu de transport
viral.
Transportul. Se realizeaza cat mai rapid posibil. Daca se
depaseste 1 ora de la recoltare transportul se face obligatoriu pe
gheata sau la -70 C.
Prelucrare. Obisnuit se utilizeaza ca atare.
Produse patologice
Exsudat faringian/SNF
Recoltare. Se obtine cu ajutorul unui tampon
introdus in cavitatea bucala pentru recoltare de
secretii de pe peretele posterior al faringelui si din
orice arie adiacenta cu inflamatie, exudat sau
ulceratie. Se evita atingerea tamponului de limba,
obraji sau buze pentru evitarea contaminarii.
IZOLAREA ENTEROVIRUSURILOR IN CULTURI
DE CELULE
ECP PICNOTIC LITIC
ECP picnotic litic
INFECII CU VIRUSURI COXSACKIE

1. Izolarea virusului pe culturi celulare (exceptnd
unele virusuri Coxsackie grup A) se face n culturi
primare de rinichi de maimu sau n culturi
diploide umane.
2. Izolarea pe animale prin inoculare pe diverse ci
(intraperitoneal, intracerebral) la oarece nou-
nscut
pentru virusurile Coxsackie grup A (paralizie flasca
generalizata) i
unele virusuri Coxsackie grup B (paralizie localizata
cu tonus pastrat).
Identificarea
enterovirusurilor
RSN
RSN:
IDENTIFICAREA VIRUSURILOR=VIRUS NEUTRALIZARE
TITRAREA ANTICORPILOR= REACTIA DE SERONEUTRALIZARE
VIRUSNEUTRALIZARE
VIRUS NECUNOSCUT
ANTICORPI CUNOSCUTI=SER IMUN DE REFERINTA


SERONEUTRALIZARE
TITRU DE ANTICORPI NECUNOSCUT
VIRUS CUNOSCUT = TULPINA DE REFERINTA

ETAPE RSN
1. TITRAREA INFECTIVITATII
VIRALE

2. BLOCAREA INFECTIVITATII
VIRALE

3. DEMONSTRAREA
NEUTRALIZARII INFECTIVITATII
VIRALE

1. TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE
metoda plajelor

Dilutii seriale
ale virusului
Insamantare pe celule
susceptibile
dupa adsorbtie, 1h la 37,
se acopera cu agar

Restrictia raspandirii
virusului determina liza
focalizata a monostratului
celular vizibila sub forma
plajelor, PFU
Metoda plajelor

PR8-salbatic
MDCK
PR8-delNS1
Vero
Dilutie: 104 105 106
Caractere ale plajelor la titrarea virusurilor PR8 (H1N1) cu gena NS1 integra sau defectiva
pe substraturi celulare cu sistem interferon tip I activ (MDCK) sau ineficient (Vero)
2. BLOCAREA INFECTIVITATII VIRALE

3. DEMONSTRAREA NEUTRALIZARII
INFECTIVITATII VIRALE

= Repetarea etapei 1 cu amestecurile
antigen-anticorp
Identificarea enterovirusurilor dupa metoda Tabla de sah
Lim - Benyesh Melnick
Dilutie: 105 106 107
Dilutie: 106 107 108
SC35M-
salbatic

MDCK
SC35M-
delNS1

Vero
Dilutie: 104 105 106
Dilutie: 104 105 106
SC35M-
delNS1

MDCK
SC35M-
1-126

MDCK
Caractere ale plajelor la titrarea virusurilor SC35M (H7N7) cu gena NS1 integra sau defectiva
pe substraturi celulare cu sistem interferon tip I activ (MDCK) sau ineficient (Vero)
ENCEFALITE Algoritm de diagnostic virusologic
SINDROM ETIOLOGIE
POSIBILA
Prod.
Patologic
IZOLARE Dg.
DIRECT
=detect.
directa
Dg.
INDIRECT
=serologie




ENCEFALITA
ACUTA
MENINGO-
ENCEFALITA
ENCEFALO-
MIELITA
HERPES
VIRUSURI:
HSV1
HSV2
VZV,EBV,CMV
Lichid vezicular
LCR
Biopsie cerebrala
Culturi
celulare
Animal de
laborator
PCR
IF
NU
V. RABIC


ARBOVIRUSURI
TOGAVIRUSURI
FLAVIVIRUSURI
BUNYAVIRUSURI

Saliva,
Amprente dermice,
corneene,
Biopsie cerebrala

LCR
SANGE
Culturi
celulare
Animal de
laborator

PCR
IF



De electie pt.
ARBO
VIRUSURI
POSTINFECTIOASE
V. RUJEOLOS
V. URLIAN
V. GRIPALE
VVZ
SALIVA,
BIOPSIE
CEREBRALA
LCR


Culturi
celulare

PCR
IF
NU