Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Definiie
Se estimeaz c exist peste 400 de virusuri distincte care infecteaz omul, iar
spectrul manifestrilor clinice, epidemiologice i patogenice care rezult n
urma infeciilor virale este foarte vast.
Virusurile sunt unice n cadrul agenilor infecioi. Caracteristicile majore care le
difereniaz de celelalte microorganisme sunt:
sunt total dependente de celula vie, fie eucariot, fie procariot, pentru
replicare i existen
dei unele virusuri posed enzime propri ca, de pild, ARN sau ADN
polimeraza, ele nu pot amplifica i reproduce informaia n propriul genom n
absena celulei gazd.
de
acid
nucleic,
fie
ADN
ultracentrifugarea datorit
dimensiunea virionilor.
Forma
corelaiei
ntre
rata
de
sedimentare
b) Capsida viral este un nveli format din numeroase uniti proteice numite
capsomere.
- tipul de infecie
- efectul final (deznodmntul) asupra gazdei.
A. Factorul viral - patogenitate, virulen
Termenul de patogenitate se refer la gradul de severitate al bolii
cauzate de un microorganism n comparaie cu cele cauzate de alte
microorganisme (de ex. patogenitatea virusului rabic este mai mare dect cea a
virusului rujeolic).
Termenul de virulen se refer la gradul de severitate al bolii cauzate de
o tulpin n comparaie cu alte tulpini ale aceluiai microorganism. Adesea
virulena sau absena acesteia la un microorganism pot fi dependente de porini
extrem de reduse ale genomului. Altfel spus, o atenuare a virulenei se poate
obine n unele cazuri printr-o mutaie punctiform. Aceste aspecte sunt de mare
importan pentru prepararea vaccinurilor specifice precum i din punct de
vedere epidemiologic i terapeutic.
Un alt factor viral important l constituie doza infectant care uneori joac
un rol important, n sensul c o concentraie ridicat de virus poate determina o
mbolnvire chiar atunci cnd virulena nu este ridicat.
Efectul citopatic
Multe virusuri distrug celula n care se replic genernd uneori aspecte
caracteristice att in vivo ct i in vitro, desemnate ca efect citopatic.
Liza celular. n unele cazuri, sub influena proteinelor virale precoce
(enzime) sinteza unor componente celulare poate fi afectat (oprit sau
modificat). De asemenea, n cursul replicrii active a unor virusuri, se pot
produce acumulri intracelulare de proteine capsidale care pot determina o
inhibiie a biosintezei proteice virale i celulare. n consecin se produce
moartea celular urmat de liz cu eliberarea unui numr mare de virioni.
Fuziunea celular. Proteinele de fuziune implicate n ptrunderea unor
virusuri n celul pot cauza i formarea de celule gigante multinucleate (sinciii).
n aceste cazuri, virionii trec de la o celul la alta fr a necesita liza celular.
Corpii de incluziune. Incluziunile pot fi localizate intranuclear i / sau
intracitoplasmatic. Natura lor este diferit n funcie de agentul infectant :
- agregate de virioni maturi
- modificri degenerative, etc.
Modificarea antigenelor suprafeei celulare. Inducerea sintezei unor
antigene celulare modificate este valabil mai ales n cazul virusurilor eliberate
prin nmugurire. La suprafaa celulei infectate apar astfel antigene codificate de
genomul viral care funcioneaz ca veritabili markeri i expun celulele
respective atacului sistemului imun al gazdei.
aprare a
Mecanism
Exemple
Aprare nespecific
Barier fizic
-tegument, mucoase ;
Bariere chimice
Factori umorali
- complement, lizozim,
interferoni, proteine de
faz acut
(proteina C reactiv, beta
2- microglobulina)
- flora asociat, celule
NK
Factori celulari
Aprare
specific Anticorpi
(Rspuns imun)
Citotoxicitate
celular,
macrofagelor
mediat
activarea
FOSCARNET(acidul
anorganic).
fosfonoacetic)
analog
al
pirofosfatului
(fosfat
Mecanism de aciune:
- inhibitor specific al ADN polimerazei herpes virusurilor, fr aciune pe
polimerazele celulare. Se ataeaz direct de situs-urile de legare ale
pirofosfatului la ADN si ARN polimerazele virale (inhib legarea ADNpolimerazelor i a reverstranscriptazei de substrat). Se administreaz
intravenos.
Indicaii:
-infecii herpetice din SIDA, rezistente la Acyclovir
-retinite determinate de virusul citomegalic n SIDA. Eficacitatea fa de HIV se
exprim prin scderea antigenemiei i creterea numrului limfocitelor T (CD4pozitive), dar fenomenele sunt tranzitorii.
Reacii adverse:
- perturbri ale funciilor renale
- perturbri ale echilibrului electroliilor (Ca, K, Mg)
-convulsii.
Se acumuleaz n organism i are efecte secundare toxice. Apariia mutantelor
virale rezistente este relativ frecvent.
Inhibitori ai reverstranscriptazei
ZIDOVUDINE (RETROVIR, AZIDOTIMIDINA = AZT- analog pirimidinic
sintetic care inhib retrovirusurile (inhib replicarea HIV in vitro i
amelioreaz simptomatologia bolnavilor n stadiile precoce ale bolii).
Mecanism de aciune:
- este substrat pentru timidinkinaz pe care o convertete n compui inhibitori
ai reverstranscriptazei i ntrerupe elongaia AND viral n cursul replicrii. Se
administreaz oral.
Indicaii:
- n infecii cu HIV
- la bolnavii cu SIDA determin o cretere a limfocitelor T (CD4-pozitive),
scderea antigenemiei i creterea ratei de supravieuire.
Reacii adverse:
- febr, rash, granulocitopenie, anemie, tulburri nervoase.
Exist riscul apariiei mutantelor virale, mai ales n cazul utilizrii dozelor mici
de medicament.
DIDANOZINA - analog al deoxiadenozinei.
Mecanism de aciune:
- inhib, prin competiie, reverstranscriptaza. Se administreaza oral.
Indicaii:
- infectia HIV.
Reacii adverse:
- nevralgii periferice, diaree.
Contraindicat la bolnavii cu risc de pancreatit.
-Tulpini celulare diploide - obinute prin cultivarea unui singur tip celular, apte
de a suporta un numr finit de pasaje (transferuri) pn la constatarea unor
modificri semnificative.
-Linii celulare - obinute prin cultivarea de celule tumorale sau de celule
imortalizate sub aciunea virusurilor sau a unor substane chimice, apte de a
suporta un numr infinit de pasaje fr a suferi modificri.
Exemple :
- Cultura primar de celule renale de maimu - cultivarea de othomyxovirusuri,
paramyxovirusuri, unele enterovirusuri, unele adenovirusuri.
- Cultura de celule diploide fetale - cultivare de herpesvirusuri, picornavirusuri,
adenovirusuri.
b. Detectarea. Detectarea i identificarea virusurilor n culturi celulare se
face iniial prin observarea tipului de efectului citopatogen :
- moartea celular : rotunjire - degenerare - agregare - desprinderea de
substratul (suportul) de cultur
- modificri histologice : incluziuni nucleare sau citoplasmatice, sinciializarea
(celule gigante multinucleate formate prin fuziune celular)
- modificri celulare de suprafa : exprimare de antigene virale, hemadsorbie.
Pe baza tipului de cultur celular, a efectului citopatogen i a timpului
de cretere viral se realizeaz indentificarea iniial n cazul multor virusuri.
Exist ns virusuri care nu pot fi detectate i identificate n acest mod
deoarece ele fie nu produc efect citopatogen direct, fie cresc extrem de lent, fie
nu cresc de loc n culturi de celule.
n cazul absenei efectului citopatogen direct, identificarea iniial n
culturi de celule a unor virusuri se poate realiza pe baza unor efecte indirecte :
- Interferena heterolog - proces prin care replicarea unui virus interfereaz
(inhib) replicarea unui alt virus ; n cultura celular, identificarea se va face pe
baza absenei efectului ciotopatogen al virusului interferat.
- Hemadsorbia - celulele infectate cu anumite virusuri exprim antigene virale
(hemaglutinine) care leag eritrocitele anumitor specii animale.
- Hemaglutinarea - prezena virusului determin aglutinarea eritrocitelor.
c. Interpretarea rezultatelor. De obicei, detectarea i identificarea unui
virus ntr-o prob constituie un diagnostic de certitudine. Totui, rezultatele
obinute prin aceast metod nu trebuie absolutizate i ele trebuie corelate cu
contextul clinic i epidemiologic al cazului.
De asemenea, un rezultat negativ nu exclude neaprat infecia viral
suspicionat (motive legate de recoltare, transport neadecvat al produselor
patologice, prezena anticorpilor neutralizani n cazul recoltrii tardive a
produsului patologic, etc) .
E. Metode serologice .
Sunt utile n cazul virusurilor ce nu pot fi cultivate n culturi celulare i n
cazul infeciilor virale cu evoluie lent (de exemplu, virusurile hepatitice, HIV,
arbovirusuri). De asemenea, serologia este util pentru stabilirea rspunsului
imun n infecii virale.
Principalele tipuri de teste serologice folosite n diagnosticul infeciilor
virale sunt :
1. Reacia de fixare a complementului
2. Reacia de hemaglutinoinhibare
3. Reacia de neutralizare
4. Imunofluorescena direct i indirect
5. Latex-aglutinarea ; Hemaglutinarea pasiv
6. Reaciile imunoenzimatice (ELISA - "enzyme-linked immunosorbent assay") ;
Testele Western blot
7. Teste radioimune (RIA)
1. Reacia de fixare a complementului.
Serul este pus n contact cu antigen viral i complement n cantitate cunoscut.
n cazul prezenei anticorpilor specifici n serul de cercetat, formarea
complexelor antigen-anticorp va determina activarea i fixarea complementului.
Prin adugarea de eritrocite marcate cu anticorpi anti-eritrocitari se determin
prezena de complement liber (nefixat).
Rezultat negativ - prezena de complement liber (nefixat) tradus prin
hemoliz
Rezultat pozitiv - absena complementului liber, datorit fixrii sale n
complexele antigen viral-anticorp specific-complement, tradus prin absena
hemolizei
2. Reacia de hemaglutino-inhibare i 3. Recia de neutralizare
sub form de teste competitive. n cazul testelor de tip competitiv, anticorpii din
serul de cercetat sunt detectai (i pot fi cuantificai) pe baza competiiei lor cu
anticorpi de sintez.