Dozarea proteinelor totale

Plasma conine cteva sute de proteine diferite, avnd roluri variate: meninerea
presiunii coloid-osmotice, transportul substanelor liposolubile, rspunsul imun, coagulare i
fibrinoliz, unele proteine au activitate enzimatic, unele sunt hormoni.
Proteinele plasmatice pot fi mprite n cinci categorii, separabile prin electroforez:
albumina, 1-, 2-, - i -globuline. Sinteza proteinelor plasmatice are loc n ficat, pentru
majoritatea dintre ele. Unele proteine sunt sintetizate n alte esuturi: imunoglobulinele sunt
produse de limfocitele B, hormonii proteici sunt produi de glandele endocrine, etc.
ntre proteinele plasmatice i cele din ficat i esuturile extrahepatice exist o stare de
echilibru. Astfel, albumina produs de ctre ficat poate fi utilizat, prin aminoacizii
constitueni, la sinteza local de proteine specifice n diverse alte esuturi. Proteinele
plasmatice cu greutate molecular mic pot trece n spaiile interstiiale extravasculare, de
unde sunt apoi drenate pe cale limfatic ajungnd din nou n circulaia sanguin.
Viteza de remaniere (turn-over) a diverselor proteine plasmatice este variabil: timpul
de njumtire variaz de la cteva ore (pentru proteinele de faz acut) la 3 sptmni (de
exemplu pentru albumin i IgG).
Catabolismul proteinelor plasmatice are loc n majoritatea celulelor organismului,
ns principalele esuturi implicate n acest proces sunt: ficatul, rinichiul i celulele endoteliale
ale capilarelor sanguine. La nivel renal, proteinele cu greutate molecular mic sunt filtrate
glomerular, dup care majoritatea sunt captate n celulele tubulare i degradate intracelular; o
cantitate redus de proteine se elimin prin urina definitiv (< 150 mg/24 h).
Principiul dozrii - metoda biuretului
Proteinele i peptidele reacioneaz, la nivelul legturilor peptidice, cu ionii de Cu2+ n
mediu alcalin, formnd complexe colorate n violet care au maximum de absorbie la 540 nm.
Absorbana complexelor colorate este direct proporional cu concentraia proteinelor.
Se numete metoda biuretului deoarece cel mai simplu compus care d aceast
reacie este biuretul (H2N-CO-NH-CO-NH2), obinut prin nclzirea ureei. Complexele
colorate care apar sunt chelai formai de ctre ionii de Cu2+ cu oxigenul carbonilic i cu azotul
amidic din legturile peptidice. Reacia biuretului este dat de compuii care conin cel puin
dou legturi peptidice.
Dozarea se poate efectua att n ser ct i n plasm, de obicei folosindu-se serul.
Modul de lucru
Reactivi (l)
Reactiv de lucru
Ser
Soluie etalon
Ap distilat

Prob
1000
10
-

Etalon

1000
10
-

Martor
1000
10

Reactivul de lucru conine: sulfat de cupru, hidroxid de sodiu (creeaz mediul alcalin),
tartrat dublu de sodiu i potasiu (menine solubilitatea ionilor de Cu2+ n soluie alcalin).
Se agit eprubetele pentru omogenizare i se incubeaz 10 minute la 37C, dup care
se msoar absorbanele probei i etalonului fa de martor la 540 nm.
Calculul rezultatelor: concentraia proteinelor (g/dl) = (AP/AE) x CE

 Valori de referin: 6,3-8,3 g/dl

Semnificaia valorilor patologice
1. Hipoproteinemiile se datoreaz n special scderii albuminei i pot aprea prin
urmtoarele mecanisme:
Deficit cronic al aportului de proteine alimentare - malnutriie, inaniie, sindroame
de malabsorbie.
Sintez redus la nivel hepatic. n bolile hepatice care evolueaz cu diverse grade de
insuficien hepatic (hepatite acute cu necroz masiv a parenchimului hepatic, ciroze
hepatice n stadiul final) are loc afectarea capacitii de sintez a ficatului, ducnd la scderea
concentraiei proteinelor plasmatice. ntruct parenchimul hepatic are o capacitate mare de
cretere compensatorie a sintezei proteice, scderea nivelului plasmatic al proteinelor apare
doar n condiiile unei reduceri extensive (cu pn la 90%) a funciei hepatice.
Catabolism proteic accentuat - apare dup intervenii chirurgicale sau traumatisme
majore, care intereseaz teritorii tisulare ntinse, n infeciile cronice sau n fazele finale ale
bolilor maligne.
Pierderi anormale de proteine plasmatice. Proteinele plasmatice se pot pierde pe
diverse ci, principala fiind cea renal. n mod normal, proteinele din plasm (cu excepia
celor cu greutate molecular < 60 kDa) nu sunt supuse procesului de filtrare glomerular. n
sindromul nefrotic are loc o cretere a permeabilitii membranei filtrante a glomerulilor
renali (provocat de leziuni la acest nivel), ceea ce duce la pierderea proteinelor plasmatice n
urin (proteinurie) i scderea consecutiv a nivelului lor n plasm.
Proteinele plasmatice se mai pot pierde pe cale gastro-intestinal, n cursul bolilor
tractului digestiv (enteropatia exsudativ - cauzat de o cretere a permeabilitii tractului
digestiv pentru proteine). Mai pot avea loc pierderi pe cale cutanat (n arsuri), n lichidul de
ascit, n exsudatul pleural i prin hemoragii externe.
Hiperhidratarea. O scdere relativ a concentraiei proteinelor plasmatice apare n
caz de cretere a volumului lichidului intravascular (hemodiluie), care poate fi datorat
administrrii unor cantiti excesive de lichide prin perfuzie intravenoas.
2. Hiperproteinemiile se ntlnesc mai rar i apar n urmtoarele circumstane:
Hipergamaglobulinemii monoclonale (mielomul multiplu, macroglobulinemia
Waldenstrm) - sunt boli caracterizate prin proliferarea tumoral a plasmocitelor sau
limfocitelor B, cu producere excesiv de imunoglobuline anormale. Se produce un singur tip
de imunoglobulin sau fragment imunoglobulinic (lanuri uoare sau lanuri grele) de ctre o
singur clon de limfocite B.
Boli inflamatorii cronice i boli autoimune - hiperproteinemia se datoreaz unei
creteri a -globulinelor ca urmare a stimulrii limfocitelor B (sunt hipergamaglobulinemii
policlonale).
n cazul hemoconcentrrii (scderea volumului lichidului intravascular) provocat de
deshidratare, apare o hiperproteinemie relativ. Cauzele deshidratrii pot fi un aport hidric
insuficient sau pierderile lichidiene din cursul vrsturilor, diareilor sau transpiraiilor
abundente, poliuriei. Cetoacidoza diabetic este un exemplu de situaie ntlnit n practica
medical, caracterizat prin deshidratare accentuat.