4 i 7 aprilie 2016

Haemophilus influenzae
 ncadrare taxonomic

Familia Pasteurellaceae
Genul Haemophilus
Specii de interes medical
H. influenzae H. haemolyticus
H. parainfluenzae H. parahaemolyticus
H. aphrophilus H. paraphrophilus
H. ducreyi H. paraphrohaemolyticus
H. segnis
 Habitat

Omul singura gazd natural

Tulpinile necapsulate colonizeaz frecvent

mucoasa oro- i nazo-faringian, rar mucoasa
intestinal, vaginal sau uretral

Portajul tulpinilor Hib este sczut (0,5-3%); redus

pn la dispariie sub efectul vaccinului conjugat
 Importana medical

Reprezint a doua specie, ca frecven, n infecii

comunitare ale tractulului respirator

Tulpinile capsulate tip b (Hib) determin

infecii sistemice severe la copii 5 ani,
n special meningite (1 din cei 3 ageni
etiologici majori !)
 Importana medical

Introducerea n unele ri a vaccinului conjugat

anti-Hib a redus incidena infeciilor invazive

Emergena rezistenei la aminopeniciline a

determinat modificarea protocoalelor terapeutice
de prim intenie
 Estimated Incidence* of Invasive
Hib Disease, 1987-2000
50
45
40
35
Incidence

30
25
20
15
10
5
0
1987 1991 1995 1999

*Rate per 100,000 children <5 years of age

 Caractere morfo-tinctoriale i mobilitate

Bacili scuri, uneori pleomorfi (cocobacili

forme filamentoase), Gram-negativi

Capsula, prezent la tulpini invazive (reacia de

umflare a capsulei sau IF)

Imobili
 Exigene de cretere

Dependent de prezena n mediul de cultur a doi

factori de cretere
- factorul X

- factorul V
 Exigene de cretere

Dependent de prezena n mediul de cultur a doi

factori de cretere
- factorul X (hemina), termostabil, prezent n
medii cu snge
- factorul V (NAD), termolabil
 Exigene de cretere

Dependent de prezena n mediul de cultur a doi

factori de cretere
- factorul X (hemina), termostabil, prezent n
medii cu snge
- factorul V (NAD), termolabil, eliberat din
hematii sub efectul temperaturii (geloz ocolat)
sau prin aciune enzimatic (extract Fildes),
inactivat de NAD-az
 Caractere de cultivare

Cultiv pe geloz ocolat, atmosfer umed, CO2

(5-10%), 35-370C;

Dup 18-24 ore dezvolt colonii de 1-2 mm , plate,

opace sau transparente, nepigmentate, la tulpinile
capsulate colonii mai mari, tip M

Cultiv pe geloz snge de berbec numai n

vecintatea coloniilor de S. aureus - factor V
(fenomen de satelitism)
 Caractere metabolice

Aerob facultativ anaerob

Catalaz i oxidaz pozitiv
Descompune fermentativ glucoza (dar nu sucroza
i manoza)
Trei caractere biochimice (producerea de indol,
ureaz i ornitin decarboxilaz) difereniaz
specia n 8 biotipuri (I-VIII)
 Aciunea agenilor externi

Defavorabil influenat de
- desicaie
- temperaturi sczute
Distrus de
- antiseptice i dezinfectante uzuale (alcool
700, hipoclorit de Na 1%)
- 550C timp de 30 min
 Factori de virulen (I)
Capsula
- natur polizaharidic
- difereniaz Ag specia n 6 serotipuri (a-f)
- serotipul b (poliribosil-ribitolfosfat)
- confer proprieti antifagocitare i
rezisten la efectul litic al C`
- stimuleaz un rspuns imun T-independent
- Ac anti-capsulari, cu specificitate de tip, au
efect protector
 Factori de virulen (II)

Fimbrii sau pili

- structuri fine filiforme pe suprafaa tulpinilor
necapsulate sau capsulate

- lipsesc la izolatele din snge sau L.C.R. (variaie

de faz)

- favorizeaz ataarea bacteriilor la receptori

celulari
 Factori de virulen (III)
Proteine din membrana extern

* Proteine majore (P1, P2, P5, P6)

- permit subtiparea tulpinilor n scop
epidemiologic
- funcioneaz ca adezine
- stimuleaz Ac cu efect protector (P1, P2)

* Proteine de legare a transferinei

- intervin n obinerea Fe
 Factori de virulen (IV)

LOS
- structur asemntoare LPS
- permite diferenierea Ag ntre tulpini
- stimuleaz procesul inflamator
- efect ciliostatic i ciliolitic la nivelul mucoasei
cilor respiratorii
IgA1-proteaza
- interfer cu rspunsul imun local
- faciliteaz colonizarea
 Infecii determinate de H. influenzae (I)

infecii oportuniste
- de origine endogen
- evolueaz la nivelul TRS: otite medii, sinuzite,
sauTRI: bronite cronice
acutizate, pneumonii
- favorizate de viroze respiratorii sau BPCO
- determinate n special de tulpini necapsulate
- la imunodepresai, cu deficiene C` sau cu
asplenie - pneumonii grave + bacteriemie
 Infecii determinate de H. influenzae (II)

Alte infecii localizate

- conjunctivite
- infecii urinare (foarte rar)

Infecii invazive
- meningite purulente (cele mai frecvente), artrite
septice, epiglotite, celulite, pericardite
- determinate n special de Hib
- evolueaz la copii < 5 ani, n absena Ac
specifici
 Diagnostic bacteriologic (I)

Recoltarea i transportul produselor patologice

* Produse monobacteriene
- LCR, lichid articular, lichid pleural, snge,
puroi otic sau sinusal recoltat prin puncie
- riguroas asepsie i antisepsie n timpul
prelevrilor
- transport la laborator ct mai rapid
- evitarea refrigerrii p.p.
 Diagnostic bacteriologic (II)
* Produse cu flor microbian de asociaie
- sput, aspirat bronho-alveolar neprotejat,
aspirat hipofaringian, puroi conjunctival, puroi otic
prelevat prin conductul auditiv (otit supurat),
secreii nazo-faringiene
- exigene n recoltarea produsului patologic real
(produs reprezentativ)
- utilizarea mediului de transport (Amies, Stuart)
pentru prelevate pe tampon
 Diagnostic bacteriologic (III)
Metode rapide de diagnostic
* Examen microscopic direct
- frotiu din produsul patologic ca atare (sput,
puroi) sau dup centrifugare (LCR)
- permite recunoaterea H. influenzae dup
criterii morfo-tinctoriale (diagnostic prezumtiv)
- n cazul produselor contaminate cu flora oro-
sau nazo-faringian, asigur triajul prealabil al
probelor pe criterii citologice, cu evaluarea
bacterioscopic semicantitativ
 Diagnostic bacteriologic (IV)

* Decelarea Ag capsular n LCR

- cel mai frecvent prin reacie de latex-aglutinare
- util mai ales n meningite decapitate prin
tratamentul cu antibiotice
 Diagnostic bacteriologic (V)
Izolarea pe medii de cultur
- geloz ocolat, de preferat suplimentat cu
IsoVitalex sau Vitox 1%
- alternativ: geloz snge cu striu de stafilococ
- pentru hemoculturi: medii comercializate, de
preferat cu baz bulion tripticaz soia
- pentru produse contaminate (tampon nazo-
faringian) medii selective cu bacitracin (300g/mL)
 Diagnostic bacteriologic (VI)
Identificarea preliminar
- cultivare numai pe geloz ocolat (nu pe geloz
snge de berbec)
- aspectul macroscopic i microscopic al
coloniilor
 Diagnostic bacteriologic (VII)
Identificarea definitiv
- dependena de factorii de cretere X i V
- testul porfirinei (crete specificitatea
dependenei pentru factorul X)
- caracterul - sau nehemolitic al coloniilor pe
geloz snge de cal sau iepure
- kituri multitest identific specia i permit
biotiparea
 Diagnostic bacteriologic (VIII)
Tiparea serologic
- folosit numai pentru tulpinile capsulate
- reacie de aglutinare cu ser polivalent i ser
anti- Hib; dup caz, cu seruri monovalente a, c-f
 Diagnostic bacteriologic (IX)
Subtiparea n scop epidemiologic
- biochimic (indol, ureaz, ornitin -
decarboxilaz)
- pe baza proteinelor majore din membrana
extern
- molecular (endonucleaze de restricie, sonde
de acizi nucleici, PCR)
- valoare limitat (teste insuficient de
discriminatorii)
 Sensibilitatea in vitro la antibiotice (I)
Rezisten natural
- rezisten de nivel nalt: peniciline de biosintez,
cefalosporine din generaia 1, bacitracin, lincosamide,
streptogramine, glicopeptide

- rezisten intermediar: macrolide (claritromicina i

azitromicina ar putea fi active)
 Sensibilitatea in vitro la antibiotice (II)
Sensibilitate natural
- antibiotice active: aminopeniciline, cefalosporine
din generaia 2-4, carbapeneme, fluorochinolone,
cloramfenicol, tetracicline, cotrimoxazol, rifampicin
 Msuri profilactice

Profilaxie specific cu vaccin conjugat anti-Hib

- se administreaz la copii ntre 2 luni - 5 ani
- a redus pn la 2% frecvena infeciilor invazive
- nu influeneaz infeciile determinate de alte
serotipuri capsulare sau cu tulpini netipabile
 Msuri profilactice

Chimioprofilaxie cu rifampicin
- realizat la contacii de cas sau din colectiviti
cu un caz de infecie invaziv, cnd exist copii
nevaccinai, vaccinai incomplet sau cu stri de
imunodepresie
Haemophilus ducreyi
 Habitat

strict patogen pentru specia uman

se dezvolt intra- i extracelular
 Boli produse

ancrul moale
 Caractere morfologice i de cultur

bacil G- scurt, dispus n perechi / lanuri

geloz chocolat plus vancomicin
Necesit factorul X
33-35C
10% CO2
 Diagnostic de laborator

bacteriologic
-Aud mereu tineri dar i adolesceni care,
povestind o ntmplare, concluzioneaz cu
sintagma "Ce vrei frate? Trim n
Romnia!".

De parc ara asta att de drag unora are

vreo vin c oamenii au ajuns lipsii de
moral, de onoare, au ajuns s nu i mai
iubeasc pmntul i neamul.-
Genul Brucella

Brucella melitensis (capre, oi; 3 serogrupuri),

Brucella abortus (vaci; 9 serogrupuri),
Brucella suis (porci; 5 serogrupuri),
Brucella canis (cini),
Brucella ovis (oi),
Brucella neotomae (obolan) i
Brucella maris (mamifere marine).
Sunt cocobacili Gram-negativi, imobili, eventual
prezentnd capsul, nesporulai.

Paraziteaz n special animalele, localizai

intracelular, relativ inactivi metabolic.

Primele trei sunt principalele specii implicate i n

patologia uman.
1887 - Bruce
piese recoltate anatomopatologic (splin de la
patru soldai decedai n insula Malta)
Micrococcus melitensis.

Denumirile istorice ale bolii:

febra ondulant,
febr de Malta,
febr mediteranean etc
Habitat
-organismul infectat (n sistemul reticuloendotelial, la
nivel genital),
-pot supravieui i n mediul nconjurtor.

Se poate ntlni i la alte animale.

Mecanisme care le asigur persistena

-forme L (persister).
Caractere morfotinctoriale
n culturi proaspete -cocobacili Gram-negativi,
imobili (se poate observa o capsul fin utiliznd
tehnici speciale de colorare),
nesporulai,
izolai sau mai rar prezeni n grmezi neregulate.

n produsul patologic - intracelular.

n culturi mai vechi - polimorfism.

Caractere de cultur
cerine nutritive complexe
necesitnd la prima izolare, medii mbogite cu
substane nutritive (aminoacizi, proteine serice,
glucoz, sruri, vitamine, factori de cretere etc).

pp contaminat medii selective (cu bacitracin,

cicloheximid, acid nalidixic, nistatin, polimixin B i
vancomicin).
aerobe, facultativ anaerobe.
Brucella abortus necesit la prima izolare 5-10% CO2.
Caractere de cultur (2)
cretere - lent, mai ales la prima cultivare,
coloniile (de tip S) - 2 sau mai multe zile.
plcile cultivate se vor menine la incubator un timp
suficient de lung (uneori cteva sptmni).

pentru hemoculturi - mediul bifazic Castaneda

(hemocultura supravegheat 3-4 sptmni).

multe accidente de laborator - precauie!

Caractere biochimice

Activitate metabolic este sczut.

Utilizeaz carbohidrai.
Produc catalaz.
Descompun n mod variabil ureea.

Se pot folosi o serie de aminoacizi (ex. L-alanina, L-

asparagina) i o serie de carbohidrai (ex. L-
arabinoza, D-galactoza) pentru evaluarea
metabolismului oxidativ al tulpinilor de Brucella spp.
Rezistena fa de factorii fizici i chimici

destul de rezistente n mediu, mai ales dac sunt

nconjurate de un strat protector (n esuturile fetale
infectate eliminate pot rezista sptmni de zile;
B. melitensis poate rezista 6 zile n urin,
5-6 sptmni n praf i
9-10 sptmni n ap sau sol).

Pasteurizarea laptelui le distruge.

Sensibile la majoritatea substanelor dezinfectante,

respectnd protocolul de lucru (concentraie, timp
de expunere etc. stabilit).
Structur antigenic

doi determinani antigenici diferii, A i M

(polizaharide de suprafa).

prezeni n proporii diferite la speciile studiate.

Antigenul abortus (A) - determinant major de
suprafa la Brucella abortus i Brucella suis i
determinant minor (a) la Brucella melitensis.
Antigenul M predomin la Brucella melitensis
i este determinant minor (m) la celelalte dou specii.
Structur antigenic (2)

antigen de suprafa L asemntor cu antigenul Vi

de la Salmonella.
tulpinile capsulate - antigen de tip K.

La nivel parietal exist lipopolizaharidul (Ag O,

endotoxina)
difer de Ag O al altor germeni Gram-negativi
prin compoziia n acizi grai i
este strns legat de proteine, formnd
mpreun un complex,
are o activitate biologic distinct.
Rspuns imun

rspuns imun U i rspuns imun C

apar semne i simptome - - - se pot detecta Ac

reinfecia este relativ frecvent

rezistena fa de o nou mbolnvire - RIC.

Caractere de patogenitate

multiplicare i invazivitate

cronicizarea depinde de capacitatea de multiplicare

n celule fagocitare

cele mai patogene: B. melitensis, urmat de B. suis

i B. abortus.
Caractere de patogenitate (2)
prezint rezisten la distrugerea de ctre PMM
nu are loc stimularea metabolismului oxidativ
este inhibat degranularea neutrofilelor
dein Cu-Zn superoxid-dismutaz i proteine de
oc termic (de tip Gro EL, HtrA etc).

exist i un factor de patogenitate neprecizat,

produs numai in vivo

endotoxina (antigenul O, LPZ) este implicat n

patogenitate.
Principalele afeciuni produse

incubaie - 2-3 sptmni (... cteva luni)

debutul insidios, manifestat prin astenie,

indispoziie, cefalee, artralgii, febr moderat,
transpiraii abundente etc.

n perioada de stare polimorfism

febra ondulant - valoare istoric
circa 200 de semne clinice ...
Principalele afeciuni produse (2)

durata bolii ... 3-4 sptmni ... 3 luni

n formele cronice ... ani.

Formele cele mai grave apar

Brucella melitensis,
Brucella suis,
Brucella abortus,
Brucella canis.
Diagnostic de laborator

aspecte clinice i
epidemiologice,

diagnosticul de laborator este esenial,

bacteriologic (direct) i/sau

imunologic.
Brbat de 53 ani, veterinar.
Se simte excelent pn cu 8 sptmni n urm, cnd
ncepe s prezinte un sindrom pseudo-gripal
febr,
tuse,
grea,
anorexie,
vrsturi.

Ce credei c a fcut ?
Bordetella pertussis
 ncadrare taxonomic

Genul Bordetella cuprinde cocobacili G-

Bordetella pertussis
Bordetella parapertussis
Bordetella bronchiseptica
 Habitat

strict patogen pentru specia uman

la nivelul cililor epiteliului respirator
nu au capacitatea de a invada.
 Caractere morfologice i de cultur

ccb G- (pili, capsul)

medii de cultur mbogite
necesar folosirea mediilor complexe
Colonii dup 3-6 zile

se descrie fenomenul de variaie genetic

 Structur antigenic

foarte complex
hemaglutinin fimbrial (FHA),
aglutinogene de suprafa (K),
lipopolizaharidul (endotoxina),
substane active cu rol important n patogenie:
toxina pertussis (TP)
adenilatciclaza
toxina letal (dermonecrotic)
citotoxina traheal.
Rspuns imun
 Caractere de patogenitate; patogenie

foarte complex
hemaglutinin fimbrial (FHA),
aglutinogene de suprafa (K),
lipopolizaharidul (endotoxina),
substane active cu rol important n patogenie:
toxina pertussis (TP)
adenilatciclaza
toxina letal (dermonecrotic)
citotoxina traheal.
 Diagnostic de laborator

Bacteriologic
Serologic
 Prevenire

Vaccinul DTP ... DTPa ... DT ... dT ... Dt ...