CITOLOGIE

Lucrarea prac)c 2 Preparatul microscopic permanent

Exclusiv pentru uz didac2c

Exclusiv pentru uz didac2c

Preg/rea preparatului pentru microscopie op/c

Cerine necesare pentru o examinare precis: - Celulele i celelalte elemente prezente n esut s e pstrate n condiii ct mai apropiate de condiiile lor naturale (FIXARE) - Preparatul s e transparent, subire, plat - Diferitele componente s e colorate diferit (COLORARE)
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Exclusiv pentru uz didac2c

Preg/rea preparatului pentru microscopie op/c Posibiliti de preparare - seciuni - in toto (structuri/organisme mici, suficient de subiri pt. a fi ntinse pe o lam) - zdrobire (pt. studiul coninutului celulei) - frotiuri (celule suspendate n fluid) - culturi celulare
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Exclusiv pentru uz didac2c

Preparatul microscopic permanent

Modalitatea de examinare a unor celule, fragmente de esut sau organ, crora li s-au suprimat procesele vitale prin fixare

Permite examinarea la microscopul optic a principalelor caracteristici ale celulelor i a modului lor de organizare

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Exclusiv pentru uz didac2c

Preparatul microscopic permanent

Un preparat microscopic este alctuit din: 1. obiect de examinat (subire i transparent) 2. mediu de montare (transparent) 3. suport de montare (lam i lamel)

hGp://www.agtcbioproducts.com/images/slide.jpg

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Exclusiv pentru uz didac2c

Preparatul microscopic permanent

Scopul realizrii de a conserva - structurile celulare i - raporturile dintre ele pe un timp nelimitat.
Este folosit n: -clinic -laboratorul de anatomie patologic -medicin legal -cercetare -scop didactic
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Exclusiv pentru uz didac2c

Etapele obinerii preparatului microscopic permanent

1. 2. 3. 3. 4. 5. 6. 7. Recoltare Fixare Deshidratare i clarificare Impregnare i includere Secionare Colorare Montare (ntre lam i lamel) Etichetare

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Exclusiv pentru uz didac2c

1. RECOLTAREA
= Operaia prin care fragmentul de esut/organ este prelevat de la om, animal viu sau de la cadavru

1. dimensiunea pieselor s nu depeasc 5 mm 2. instrumentele bine ascuite pentru a evita zdrenuirea i pierderea paralelismului dintre planuri 3. adecvat n funcie de tipul organului; se vor evita modificrile de volum, form i relief

RECOLTAREA BIOPSIC

Se recolteaz de la om sau animal viu i se practic n scop diagnostic. Se realizeaz prin : 1. raclare 2. puncie-biopsie 3. aspiraie cu ac fin 4. intervenie chirurgical

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Exclusiv pentru uz didac2c

1. RECOLTAREA

(ct mai aproape de momentul decesului) pentru a evita procesele de autoliz

RECOLTAREA NECROPSIC recoltarea de la cadavrele umane se practic n laboratoarele de anatomie patologic i medicin legal cu scopul de a confrunta datele de anatomie clinic i tanatogenetice dup sacrificarea animalului, n scop de cercetare sau didactic

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Exclusiv pentru uz didac2c

A. raclare

Recoltarea biopsic
A B

B. puncie biopsie
C

C. aspiraie cu ac fin D. intervenie chirurgical

D

- biopsie incizional - biopsie excizional

hGp://img.webmd.com/dtmcms/live/webmd/consumer_assets/site_images/ar)cles/health_tools/eczema_overview_slideshow/photolibrary_rm_photo_of_hand_with_eczema.jpg hGp://www.beliefnet.com/healthandhealing/images/si55551723.jpg hGp://www.glowm.com/resources/glowm/graphics/gures/v1/0270/016f.jpg

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Exclusiv pentru uz didac2c

2. FIXAREA
- sunt oprite rapid procesele vitale (celulare), - pstrndu-se, cu alterri minime:
- - - - volumul, hGp://www.leicabiosystems.com/typo3temp/pics/Sci_Lab_Histo_Lead0004_d0f91f3944.jpg forma, relieful i raporturile moleculare (n structuri/ultrastructuri) i spaiale (ntre structuri/ ultrastructuri)

etap critic pentru un bun preparat proces fizic sau chimic prin care:

Prin fixare urmrim: 1.Conservarea esuturilor 2.Prevenirea pierderii de constitueni celulari 3.Creterea diferenierii optice a structurilor celulare 4.Mrirea consistenei esuturilor n scopul de a facilita trecerea lor prin celelalte etape i mai ales pentru secionare
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Exclusiv pentru uz didac2c

3. DESHIDRATAREA i CLARIFICAREA
Serie de soluii alcoolice de concentraii crescnde (pn la 100%) pentru ndeprtarea apei i nlocuirea ei cu alcool ndeprtarea alcoolului cu ajutorul unor ageni n care i alcoolul i parana sunt miscibli (ex: toluen)

McGraw-Hill Companies / Junqueira Histology

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Exclusiv pentru uz didac2c

4. INCLUDEREA
- etapa care asigur condiii op)me pentru secionarea pieselor

Cea mai folosit mas de incluziune: parana

hGp://www.leicabiosystems.com/typo3temp/pics/Embedding_028_sized_31fe12192c.jpg hGp://www.leicabiosystems.com/typo3temp/pics/Sci_Lab_Histo_Lead0008_03_a9cda89157.jpg

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Exclusiv pentru uz didac2c

5. SECIONAREA

cu microtomul ( vor rezulta seciuni cu o grosime de aprox. 5m)

McGraw-Hill Companies / Junqueira Histology

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Exclusiv pentru uz didac2c

6. COLORAREA

- etapa prin care se urmrete creterea contrastului dintre elementele celulare/)sulare, prin capacitatea substraturilor morfologice (care conin proteine, acizi nucleici sau alte macromolecule) de a lega diferit coloranii

Prin metode compa)bile cu metoda de xare Pot metode universale (HE) sau specice esutului studiat (Nissl)

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Exclusiv pentru uz didac2c

7. MONTAREA - permite conservarea specimenelor pentru ct mai mult )mp

ntre lam i lamel, n diferite medii de montare, iniial fluide Protejarea seciunilor fragile de eventualele deteriorri Conservarea coloraiei i asigurarea unui mediu optic omogen i transparent necesar examinrii microscopice

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Exclusiv pentru uz didac2c

8. ETICHETAREA
Pe fiecare lam se noteaz:

tipul celular/tisular sursa de recoltare fixatorul metoda de colorare data realizrii preparatului
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

PAUZ

Exclusiv pentru uz didac2c

COLORANTUL HISTOLOGIC
Substan colorat, de obicei de natur organic, ce poate intra n celul atandu-se la nivelul componentelor celulare i permind astfel diferenierea lor optic. Nu toate substanele colorate sunt colorani! Coloranii prezint, d.p.d.v. chimic: - Grupri cromofore (purttoare de culoare) - Grupri auxocrome (cu capacitatea de a colora)
- Ionizate (principale) formeaz leg. electrochimice cu substratul - Neionizate (secundare) formeaz leg. de hidrogen cu substratul Clasicare:
- dup provenien: naturali (vegetali/animali) sau sinte)ci - dup caracterul chimic: - acizi: gr.auxocr. sarcin - se ataeaz pe substrat (+) - bazici: gr.auxocr. sarcin + se ataeaz pe substrat (-) - neutri (amestecuri de col. acizi i bazici)
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Exclusiv pentru uz didac2c

METODE DE COLORARE
Criterii de clasificare: 1. Momentul colorrii (vitale / permanente) 2. Nr. de colorani utilizai (simple / combinate) 3. Mecanismul colorrii (directe / indirecte cu intermediar) 4. Metoda de obinere a coloraiei optime (progresive / regresive cu decolorant) 5. Raportul dintre rezultatul colorrii i (ortocromatic / metacromatic) culoarea colorantului

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Exclusiv pentru uz didac2c

METACROMAZIA
Capacitatea unui substrat de a se colora ntr-o alt culoare dect cea a colorantului. PRINCIPIU: - existena unor grupri funcionale aflate la o distan foarte mic una de alta. - colorantul se dispune ordonat i foarte aproape molecul de molecul permind reaezri ale electronilor la alte nivele energetice i absorbia de alte lungimi de und din spectrul vizibil
Mastocite Ob. 100x cu imersie Col.: Albastru de toluidin -- granulaii rou - violet

2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti

Exclusiv pentru uz didac2c

COLORAII UZUALE
Hematoxilin-eozin (HE) Giemsa Mallory Coloraii tricrome: Masson, Azan, Van Gieson Impregnarea argen)c Metode speciale (Cajal /Da Fano, Hematoxilin feric Regaud) Sudan (III, IV, B, BB)
1. Compoziie 2. Rezultate (text + imagini + surs) 3. Par/culariti
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti